專利名稱：含有牛油果樹提取物的組合物及其作為藥物或食品增補劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于全身或局部給藥的食品增補劑或藥物組合物，它包含可選地與用于全身或局部給藥的可藥用載體一起配制的牛油果樹提取物或濃縮物。更具體地說，本發(fā)明涉及包含牛油果樹提取物或濃縮物的食品增補劑或藥物組合物，其中所述提取物或濃縮物含有三萜烯醇丁酰鯨蠟醇、羽扇醇、parkeol、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、α-脂檀素和β-脂檀素并可選地含有甾醇豆甾醇、燕麥甾醇(avanasterol)、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A(kariresterol A)、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，以及這類組合物在制備用于抑制過敏和/或炎癥反應(yīng)的藥物或食品增補劑中的用途。
背景技術(shù)：
過敏被定義為一種改變的反應(yīng)性狀態(tài)，其中身體對物質(zhì)(抗原)出現(xiàn)過度的免疫應(yīng)答。過敏可能由外源或內(nèi)源性的抗原引起。
過敏反應(yīng)是大量疾病的基礎(chǔ)。其中最重要的是變應(yīng)性和自身免疫疾病。在教科書《臨床醫(yī)學(xué)》(Kumar，P．和Clark，M.“臨床醫(yī)學(xué)”，第3版，147-150頁，1994年，Bailliere Tindall，London)中給出了過敏性疾病的分類。
I型過敏反應(yīng)(IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng))是由變應(yīng)原(特異性外源性抗原)引起的，例如花粉、室內(nèi)粉塵、動物皮屑、霉菌等。其中I型反應(yīng)起重要作用的變應(yīng)性疾病包括哮喘、濕疹(特應(yīng)性皮炎)、蕁麻疹、變應(yīng)性鼻炎和過敏癥。
II型過敏反應(yīng)是由細胞表面或組織結(jié)合抗體(IgG和IgM)引起的，并在重癥肌無力、古德帕斯徹氏綜合征和阿狄森氏貧血等的發(fā)病機理中起重要作用。
III型過敏反應(yīng)(免疫復(fù)合型)是由自身抗原或外源性抗原引起的，諸如某些細菌、真菌和寄生物。其中III型過敏反應(yīng)起主要作用的疾病包括紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和腎小球性腎炎。
IV型過敏反應(yīng)(遲發(fā)型)是由細胞或組織結(jié)合抗原引起的。這種類型的過敏反應(yīng)在許多病患中起著重要作用，例如移植物對宿主疾病、麻風(fēng)、接觸性皮炎和因昆蟲咬傷引起的反應(yīng)。
有許多類藥物可用于治療過敏反應(yīng)。其中皮質(zhì)類固醇是使用得最廣泛的一類藥物。皮質(zhì)類固醇主要通過非選擇性地抑制各種不同種類的免疫細胞的功能和增殖而導(dǎo)致對過敏反應(yīng)的抑制，由此發(fā)揮它們的藥理學(xué)作用。不幸的是，皮質(zhì)類固醇有許多嚴重的副作用，例如免疫抑制、骨質(zhì)疏松和皮膚萎縮。
非洲樹木牛油果(Butyrospermum pakii)，通常稱之為燭果樹(karite tree)，野生生長于赤道中部非洲的干燥地區(qū)。這種樹的果實包含一種堅果，通常稱之為牛油樹堅果(shea nut)。該堅果長3-4cm，油含量約為50％。油的主要成分是甘油三酯，但該油還含有幾個百分比的由聚異戊二烯烴(西非牛油樹烴)、三萜烯醇和甾醇組成的不皂化成分。該油一般稱之為牛油樹脂。牛油果樹的特征三萜烯醇(在本發(fā)明中稱為牛油果-三萜烯)是羽扇醇、parkeol、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、丁酰鯨蠟醇、α-脂檀素和β-脂檀素，及其酯，尤其是內(nèi)桂酸、乙酸或脂肪酸酯。
通常牛油樹脂含有1-5％(w/w)的牛油果-三萜烯，牛油樹脂在現(xiàn)有局部美容或藥物產(chǎn)品中的劑量為1-20％(w/w)，牛油果-三萜烯在這類產(chǎn)品中的含量最大將是1％(w/w)。
FR 2770400(WO 99/22706)公開了含有牛油果樹花提取物的美容或皮科藥物組合物。該專利沒有詳細說明花的化學(xué)成分，但據(jù)發(fā)明人所知，花不含任何實質(zhì)量的牛油果-三萜烯。
牛油樹脂在美容產(chǎn)品中廣泛用作潤膚劑，在較小程度上用作局部用藥物產(chǎn)品如軟膏劑和膏霜劑的脂肪相。
GB 932662公開了包含丁酰鯨蠟醇的藥物組合物。根據(jù)該專利，丁酰鯨蠟醇可以從牛油果樹獲得。
據(jù)發(fā)明人所知，在下文中進一步詳細描述的按照本發(fā)明的含有牛油果樹提取物或濃縮物的藥物組合物以前從未在文獻中公開過。
發(fā)明概述本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，包含牛油果樹提取物或濃縮物的組合物當(dāng)全身給藥時顯著抑制了過敏反應(yīng)，其中所述提取物或濃縮物包含至少5％的牛油果-三萜烯成分，所述三萜烯選自下列成員丁酰鯨蠟醇、羽扇醇、派克醇(parkeol)、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、α-脂檀素和β-脂檀素，以及可選的至少一種選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，其中所述牛油果-三萜烯和甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯?？蛇x地，所述提取物或濃縮物包含用于全身給藥的可藥用載體。
另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，包含至少5％牛油果-三萜烯和可選的可藥用載體的藥物組合物當(dāng)局部應(yīng)用時，顯著抑制了皮膚或粘膜的炎癥或過敏反應(yīng)。這是令人驚訝的，因為這些效果用迄今為止已通過將牛油樹脂用作潤膚劑而用于局部藥物或美容產(chǎn)品中的低濃度的牛油果-三萜烯是無法獲得的。
另外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，含有至少5％牛油果-三萜烯和金盞花提取物的結(jié)合物的藥物組合物具有特別有益的藥理學(xué)性能。
與現(xiàn)有的治療劑諸如皮質(zhì)類固醇或非類固醇性抗炎藥相比，本發(fā)明的藥物組合物和食品增補劑具有不太可能產(chǎn)生任何嚴重副作用的優(yōu)點，因為它們的所有成分在藥理學(xué)相關(guān)劑量下都是無毒且能被有機體良好耐受的。
由于上面所提到的藥理學(xué)作用，本發(fā)明的藥物組合物和食品增補劑可以用于下列治療應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)。
治療或預(yù)防過敏性疾病。
治療或預(yù)防皮膚炎癥或過敏。
治療或預(yù)防粘膜炎癥或過敏。
治療或預(yù)防IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)和病況。
治療或預(yù)防自身免疫疾病。
減輕疼痛。
因此，本發(fā)明提供了一種食品增補劑或藥物組合物，它包含1、牛油果樹提取物或濃縮物，所述提取物或濃縮物包含至少5％的牛油果-三萜烯成分，所述三萜烯選自下列成員丁酰鯨蠟醇、羽扇醇、派克醇、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、α-脂檀素和β-脂檀素；可選的2、至少一種選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，其中所述三萜烯和甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和可選的3、可藥用載體，所述載體或者適于全身給藥或者適于局部給藥。
所述藥物組合物可以適用于全身給藥，或者適用于對皮膚或粘膜局部給藥。
另外，本發(fā)明提供了包含如上所述的牛油果樹提取物或濃縮物和可選的用于全身給藥的可藥用載體的用于全身給藥的組合物在制備用于哺乳動物的免疫調(diào)節(jié)、用于抑制哺乳動物的過敏反應(yīng)諸如IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)和哺乳動物的自身免疫反應(yīng)、以及用于減輕哺乳動物的疼痛的藥物中的用途。
因此，按照本發(fā)明，用于全身給藥的包含如上所述的牛油果樹提取物或濃縮物和可選的用于全身給藥的可藥用載體的組合物可以在用于治療或預(yù)防哺乳動物的過敏性疾病的方法中使用，所述方法包括對所述哺乳動物給藥所述組合物；且本發(fā)明包括所述組合物在制備用于治療或預(yù)防哺乳動物過敏性疾病的藥物中的用途。
并且，按照本發(fā)明，用于全身給藥的包含如上所述的牛油果樹提取物或濃縮物和可選的用于全身給藥的可藥用載體的組合物可以在用于治療或預(yù)防哺乳動物的自身免疫疾病的方法中使用，所述方法包括對所述哺乳動物給藥所述組合物；且本發(fā)明包括所述組合物在制備用于治療或預(yù)防哺乳動物自身免疫疾病的藥物中的用途。
另外，按照本發(fā)明，用于全身給藥的包含如上所述的牛油果樹提取物或濃縮物和可選的用于全身給藥的可藥用載體的組合物可以在用于治療或預(yù)防哺乳動物的IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)或病患的方法中使用，所述方法包括對所述哺乳動物給藥所述組合物；且本發(fā)明包括所述組合物在制備用于治療或預(yù)防哺乳動物的IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)和病患的藥物中的用途。
而且，按照本發(fā)明，用于全身給藥的包含如上所述的牛油果樹提取物或濃縮物和可選的用于全身給藥的可藥用載體的組合物可以在用于減輕哺乳動物疼痛的方法中使用，所述方法包括對所述哺乳動物給藥所述組合物；且本發(fā)明包括所述組合物在制備用于減輕哺乳動物的疼痛的藥物中的用途。
另外，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，它包含i)至少5％(w/w)牛油果-三萜烯；ii)金盞花提取物；和可選的iii)可藥用載體。優(yōu)選用于對皮膚或粘膜局部給藥。
因此，本發(fā)明提供了含有至少5％牛油果-三萜烯的藥物組合物，其中該藥物組合物配制成液體、軟膏、凝膠、搽劑、乳劑(例如膏霜或蜜露)或噴霧劑(例如氣溶膠)。
按照本發(fā)明，包含至少5％牛油果-三萜烯和可選的可藥用載體的藥物組合物可以在用于治療或預(yù)防哺乳動物的皮膚或粘膜炎癥或過敏癥的方法中使用，所述方法包括對所述哺乳動物局部給藥所述組合物；且本發(fā)明包括所述組合物在制備用于治療或預(yù)防哺乳動物的皮膚或粘膜炎癥或過敏癥的藥物中的用途。
并且，按照本發(fā)明，包含至少5％牛油果-三萜烯和可選的可藥用載體的藥物組合物可以在用于治療或預(yù)防哺乳動物的特應(yīng)性皮炎、牛皮癬或接觸性皮炎的方法中使用，所述方法包括對所述哺乳動物給藥所述組合物；且本發(fā)明包括所述組合物在制備用于治療或預(yù)防哺乳動物的特應(yīng)性皮炎、牛皮癬或接觸性皮炎的藥物中的用途。
發(fā)明詳述本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了一種食品增補劑或藥物組合物能顯著抑制炎癥或過敏反應(yīng)，其中所述食品增補劑或藥物組合物包含1、牛油果樹提取物或濃縮物，所述提取物或濃縮物包含至少5％的牛油果-三萜烯成分，所述三萜烯選自下列成員丁酰鯨蠟醇、羽扇醇、派克醇、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、α-脂檀素和β-脂檀素；可選的2、至少一種選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，其中所述三萜烯和甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和可選的3、可藥用載體，所述載體或者適于全身給藥或者適于局部給藥。
所述藥物組合物可以適用于全身給藥，或者適用于對皮膚或粘膜局部給藥。
在實施例1中，以確定的小鼠過敏癥(關(guān)節(jié)炎)模型檢測本發(fā)明組合物的抗炎作用。在該實驗中，本發(fā)明組合物產(chǎn)生了可比得上環(huán)磷酰胺(以10mg/kg)的顯著作用(以50mg/kg)。在一個獨立的實驗中(參見實施例4)，相同的本發(fā)明組合物對大鼠的LD50顯示大于2000mg/kg，而環(huán)磷酰胺對大鼠的LD50為94mg/kg(《默克索引》第13版，1989年，Merck & Co Inc.)。因此，本發(fā)明組合物的治療指數(shù)遠遠優(yōu)于環(huán)磷酰胺的治療指數(shù)。
當(dāng)局部應(yīng)用時，該藥物組合物抑制了皮膚或粘膜的炎癥或過敏癥。
在實施例2中，將本發(fā)明的不同組合物的局部抗炎作用與含有相當(dāng)于2％牛油果-三萜烯的牛油樹脂的一般組合物(對照)的作用進行比較。含有10-30％牛油果-三萜烯的本發(fā)明組合物劑量依賴性地抑制了小鼠的皮膚炎癥，而對照沒有抗炎作用。這是令人驚訝的，因為這些效果用迄今為止已通過將牛油樹脂用作潤膚劑而用于局部藥物或美容產(chǎn)品中的低濃度的牛油果-三萜烯是無法獲得的。
用于局部或全身給藥的本發(fā)明組合物提供了出人意料的良好的抗過敏和抗炎作用以及令人驚奇的良好的安全性能。因此，本發(fā)明組合物是實際無毒的，但卻是治療上非常有效的。本發(fā)明人提出了這樣的假設(shè)本發(fā)明組合物可與單一化學(xué)抗過敏藥物相比的非常有益的治療指數(shù)應(yīng)歸于本發(fā)明組合物的更復(fù)雜的特性，由于組合物各成分間的協(xié)同作用而降低了任何單一化合物加載在身體上的毒性，同時又產(chǎn)生了令人吃驚的良好的治療效果。
更具體地說，上述本發(fā)明組合物對活生物體給藥后提供了下列藥理學(xué)作用免疫調(diào)制。
抑制過敏反應(yīng)。
抑制皮膚炎癥或過敏。該作用可以見于任何皮膚疾病或任何引起這種皮膚癥狀的疾病，諸如特應(yīng)性皮炎、牛皮癬、接觸性皮炎或傳染病。
抑制粘膜炎癥或過敏。該作用可以見于任何與粘膜有關(guān)的疾病或任何引起這種粘膜癥狀的疾病包括傳染病。
抑制IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)。
抑制自身免疫反應(yīng)。
減少疼痛。
因此，本發(fā)明提供了一種藥物組合物或食品增補劑，它包含1)含有至少5％(w/w)牛油果-三萜烯成分的牛油果樹提取物或濃縮物，所述牛油果-三萜烯成分包含-至少2％(w/w)羽扇醇；-至少2％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；-至少2％(w/w)丁酰鯨蠟醇；和-可選的至少1％日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇，其中所述三萜烯可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和2)可選的可藥用載體。
因此，本發(fā)明提供了一種藥物組合物或食品增補劑，其中牛油果-三萜烯成分在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)一般為至少5％，例如至少6％，至少7％，至少8％，諸如至少9％，如至少10％，諸如至少15％，如至少20％，諸如至少25％，或至少30％，如至少35％，例如至少40％，至少45％，或至少50％，諸如至少55％，例如至少60％，如至少65％，例如至少70％，至少75％，諸如至少80％，如至少85％，諸如至少90％，如至少95％，或至少96％，諸如至少97％，如至少98％，諸如至少99％，例如至少100％；另外，牛油果-三萜烯成分在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)一般為至多100％，例如99％，至多98％，如至多97％，例如至多96％，如至多95％，如至多90％，如至多85％，如至多80％，如至多75％，如至多70％，至多65％，例如至多60％，如至多55％，如至多50％，如至多45％，至多40％，如至多35％，如至多30％，如至多25％，如至多20％，如至多15％，例如至多10％，例如至多9％，如至多8％，如至多7％，如至多6％，如至多5％；牛油果-三萜烯成分在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)一般可以在5-100％范圍內(nèi)，諸如在6-98％范圍內(nèi)，諸如在7-96％范圍內(nèi)，例如在8-94％范圍內(nèi)，諸如在9-92％范圍內(nèi)，諸如在10-90％范圍內(nèi)，如在12-88％范圍內(nèi)，例如在14-86％范圍內(nèi)，諸如在16-84％范圍內(nèi)，諸如在18-82％范圍內(nèi)，例如在20-80％范圍內(nèi)，其中牛油果-三萜烯成分由以下物質(zhì)組成-至少2％(w/w)的羽扇醇，例如至少3％，諸如至少4％，例如至少5％，例如至少6％，至少7％，至少8％，諸如至少9％，如至少10％，諸如至少15％，例如至少20％，諸如至少25％，或至少30％，例如至少35％，例如至少40％，至少45％，或至少50％，諸如至少55％，例如至少60％，諸如至少65％，例如至少70％，至少75％，諸如至少80％，如至少85％，諸如至少90％，如至少95％，或至少96％，諸如至少97％，如至少98％，諸如至少99％，如至少100％；
-至少2％(w/w)的α-脂檀素和/或β-脂檀素，例如至少3％，諸如至少4％，例如至少5％，如至少6％，至少7％，至少8％，諸如至少9％，例如至少10％，諸如至少15％，例如至少20％，諸如至少25％，或至少30％，例如至少35％，如至少40％，至少45％，或至少50％，諸如至少55％，例如至少60％，諸如至少65％，例如至少70％，至少75％，諸如至少80％，如至少85％，諸如至少90％，如至少95％，或至少9696，諸如至少97％，例如至少98％，諸如至少99％，例如至少100％；-至少2％(w/w)的丁酰鯨蠟醇，例如至少3％，諸如至少4％，例如至少5％，如至少6％，至少7％，至少8％，諸如至少9％，例如至少10％，諸如至少15％，例如至少20％，諸如至少25％，或至少30％，例如至少35％，如至少40％，至少45％，或至少50％，諸如至少55％，例如至少60％，諸如至少65％，例如至少70％，至少75％，諸如至少80％，如至少85％，諸如至少90％，如至少95％，或至少96％，諸如至少97％，例如至少9896，諸如至少99％，例如至少100％；-和可選的至少1％(w/w)的日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇，例如至少2％，例如至少3％，諸如至少4％，例如至少5％，如至少6％，至少7％，至少8％，諸如至少9％，例如至少10％，諸如至少15％，例如至少20％，諸如至少25％，或至少30％，例如至少35％，如至少40％，至少45％，或至少50％，諸如至少55％，例如至少60％，諸如至少65％，例如至少70％，至少7596，諸如至少8096，如至少85％，諸如至少90％，如至少95％，或至少96％，諸如至少97％，例如至少98％，諸如至少99％，例如至少100％。
另外，本發(fā)明提供了一種藥物組合物或食品增補劑，它包含一種包含下列組分的藥物組合物或食品增補劑1)含有至少5％(w/w)牛油果一三萜烯成分的牛油果樹提取物或濃縮物，所述牛油果-三萜烯成分包含-10-40％(w/w)羽扇醇；-10-40％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；-10-40％(w/w)丁酰鯨蠟醇；和
-可選的1-30％日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇，其中所述三萜烯可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和牛油果-三萜烯因此，本發(fā)明提供了一種藥物組合物或食品增補劑，其中牛油果-三萜烯羽扇醇在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)一般可以在2-95％范圍內(nèi)，諸如在3-95％范圍內(nèi)，諸如在4-90％范圍內(nèi)，例如在5-90％范圍內(nèi)，諸如在5-80％范圍內(nèi)，諸如在5-75％范圍內(nèi)，例如在5-70％范圍內(nèi)，如在5-65％范圍內(nèi)，諸如在5-60％范圍內(nèi)，諸如在5-55％范圍內(nèi)，例如在5-50％范圍內(nèi)，諸如在6-45％范圍內(nèi)，諸如在7-40％范圍內(nèi)，諸如在8-40％范圍內(nèi)，諸如在9-40％范圍內(nèi)，諸如在10-40％范圍內(nèi)；牛油果0三萜烯α-脂檀素和/或β-脂檀素在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通?？梢栽?-95％范圍內(nèi)，諸如在3-95％范圍內(nèi)，諸如在4-90％范圍內(nèi)，例如在5-90％范圍內(nèi)，諸如在5-80％范圍內(nèi)，諸如在5-75％范圍內(nèi)，例如在5-70％范圍內(nèi)，如在5-65％范圍內(nèi)，諸如在5-60％范圍內(nèi)，諸如在5-55％范圍內(nèi)，例如在5-50％范圍內(nèi)，諸如在6-45％范圍內(nèi)，諸如在7-40％范圍內(nèi)，諸如在8-40％范圍內(nèi)，諸如在9-40％范圍內(nèi)，諸如在10-40％范圍內(nèi)；牛油果-三萜烯丁酰鯨蠟醇在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通常可以在2-95％范圍內(nèi)，諸如在3-95％范圍內(nèi)，諸如在4-90％范圍內(nèi)，例如在5-90％范圍內(nèi)，諸如在5-80％范圍內(nèi)，諸如在5-75％范圍內(nèi)，例如在5-70％范圍內(nèi)，如在5-65％范圍內(nèi)，諸如在5-60％范圍內(nèi)，諸如在5-55％范圍內(nèi)，例如在5-50％范圍內(nèi)，諸如在6-45％范圍內(nèi)，諸如在7-40％范圍內(nèi)，諸如在8-40％范圍內(nèi)，諸如在9-40％范圍內(nèi)，諸如在10-40％范圍內(nèi)；且可選地，牛油果-三萜烯日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通?？梢栽?-95％范圍內(nèi)，諸如在1-90％范圍內(nèi)，諸如在1-80％范圍內(nèi)，例如在1-70％范圍內(nèi)，諸如在1-60％范圍內(nèi)，諸如在2-50％范圍內(nèi)，例如在2-40％范圍內(nèi)，如在2-35％范圍內(nèi)，諸如在2-30％范圍內(nèi)。
另外，本發(fā)明提供了尤其適于局部給藥的藥物組合物，它包含i)至少5％(w/w)的牛油果-三萜烯成分；ii)可選的甾醇成分；和可選的iii)用于局部給藥的可藥用載體，其中牛油果-三萜烯成分可選地與甾醇成分一起在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通常為至少1％，例如至少5％，至少10％，至少15％，諸如至少20％，如至少25％，例如至少30％，例如至少35％，諸如至少40％，或至少45％，例如至少50％，例如至少55％，至少60％，或至少65％，諸如至少70％，如至少75％，例如至少80％，例如至少85％，至少90％，諸如至少91％，如至少92％，例如至少93％，如至少94％，至少95％，或至少96％，例如至少97％，例如至少98％，諸如至少99％，例如至少100％；另外，牛油果-三萜烯成分可選地與甾醇成分一起在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通常為至多100％，例如99％，至多98％，如至多97％，例如至多96％，如至多95％，如至多90％，如至多85％，如至多80％，如至多75％，如至多70％，至多65％，例如至多60％，如至多55％，如至多50％，如至多45％，至多40％，如至多35％，如至多30％，如至多25％，如至多20％，如至多15％，例如至多10％，例如至多9％，如至多8％，如至多7％，如至多6％，如至多5％；例如至多4％；例如至多3％；例如至多2％；例如至多1％；牛油果-三萜烯成分可選地與甾醇成分一起在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)一般可以在1-100％范圍內(nèi)，諸如在2-100％范圍內(nèi)，諸如在3-95％范圍內(nèi)，例如在4-90％范圍內(nèi)，諸如在5-80％范圍內(nèi)，諸如在6-75％范圍內(nèi)，如在7-70％范圍內(nèi)，例如在8-65％范圍內(nèi)，諸如在9-60％范圍內(nèi)，諸如在10-55％范圍內(nèi)，例如在10-50％范圍內(nèi)，諸如在10-45％范圍內(nèi)，諸如在10-40％范圍內(nèi)。
牛油果-三萜烯和甾醇之間的比值(牛油果-三萜烯∶甾醇)在1∶100-500∶1范圍內(nèi)，例如1∶75-400∶1，諸如1∶50-300∶1，諸如1∶25-200∶1，優(yōu)選1∶20-100∶1，例如1∶10-75∶1，諸如1∶5-50∶1，更優(yōu)選在1∶4-25∶1范圍內(nèi)，例如1∶3-20∶1，諸如1∶2-19∶1，例如1∶1-18∶1，例如2∶1-17∶1，諸如3∶1-16∶1，首選4∶1-15∶1，諸如5∶1-14∶1，例如10∶1-13∶1；和三萜烯醇和甾醇在該組合物中的總重量百分數(shù)(w/w)一般為至少0.005％，例如至少0.01％，至少0.025％，至少0.05％，或至少0.075％，例如至少0.1％，例如至少0.25％，至少0.5％，或至少1.0％，例如至少2.0％，例如至少5.0％，至少10.0％，至少20.0％，至少30.0％或至少50.0％。
在本發(fā)明中，“牛油果-三萜烯成分”定義為包含至少一種選自下列成員的三萜烯的成分羽扇醇、派克醇、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、丁酰鯨蠟醇、α-脂檀素和β-脂檀素，及其酯，尤其是肉桂酸或乙酸酯。本發(fā)明組合物可以含有上述三萜烯中的一種或多種，諸如含有2、3、4、5、6、7種或所有上列牛油果-三萜烯，和/或1、2、3、4、5、6、7或8種其酯，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯，以及包含三萜烯及酯的混合物。
“甾醇成分”定義為包含至少一種選自下列成員的甾醇的成分豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇。組合物可以含有上述甾醇中的一種或多種，諸如含有2、3、4、5、6、7種或所有上列甾醇，其中所述甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯。
牛油果樹提取物或濃縮物可以從該植物的任何部位、諸如果實(堅果)、葉子、莖、樹皮或根得到。優(yōu)選本發(fā)明的提取物或濃縮物得自果實。另外，本發(fā)明的提取物或濃縮物可以從得自牛油果樹果實的油或脂肪(牛油樹脂)、例如包括不皂化部分、通過任何提取或分餾方法得到。優(yōu)選地，本發(fā)明的三萜烯醇和甾醇從得自牛油果樹的油或脂肪的不皂化部分得到。
本發(fā)明的提取物或濃縮物可以例如通過提取或蒸餾(例如水、蒸氣或真空蒸餾)新鮮或干燥的牛油果樹或其某部分、優(yōu)選堅果部分而得到。提取可以用許多不同的有機溶劑進行。提取可以采用任何提取技術(shù)、例如浸漬、滲漉或超臨界萃取(例如用二氧化碳)等在熱或冷的條件下進行。
優(yōu)選的提取溶劑是丙酮、甲乙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、含有1-4個碳原子的低級鏈烷醇、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。考慮到提取效率，優(yōu)選的提取溫度在所用溶劑的沸點附近，但也可以采用較低的溫度，此時需要更長的提取時間。
通過改變所用溶劑的組成，可以更具選擇性地提取牛油果樹的某些組分，由此增加或減少其在最終提取物或濃縮物中的含量。
經(jīng)過初步提取過程后，可以進行第二步加工，諸如液液萃取、柱層析或任何類型的蒸餾，以除去或濃縮提取物的任何組分。由此可以使牛油果樹的任何組分避免出現(xiàn)在最終的提取物中或使其濃縮。于是可以令任何組分的含量標(biāo)準(zhǔn)化而得到本發(fā)明的組合物，且在本發(fā)明的藥物組合物中不同牛油果-三萜烯之間的比例可以顯著不同，在特定情況下，可以從本發(fā)明的特定組合物中排除任何一種牛油果-三萜烯和任何數(shù)量的牛油果-三萜烯。于是，很可能單一或任何其他數(shù)量的牛油果-三萜烯構(gòu)成本發(fā)明組合物的牛油果-三萜烯成分。
“食品增補劑”按照美國食品和藥物管理局在1994年的“食品增補劑衛(wèi)生與教育條例”(DSHEA)定義。
DSHEA給出了以下“食品增補劑”的正式定義“食品增補劑·是打算用于補充飲食的帶有或含有一種或多種以下食物成分的產(chǎn)品(除了煙草)維生素、礦物質(zhì)、草藥或其他植物性藥材、氨基酸、用于人以通過增加總的日攝取量來補充飲食的食用物質(zhì)，或者是這些物質(zhì)的濃縮物、代謝物、構(gòu)成物、提取物或結(jié)合物。
·計劃用于以丸劑、膠囊、片劑或液體形式攝食。”在世界上的其他地方、例如在歐洲有類似的定義。世界各地對“食品增補劑”有許多不同的叫法，諸如“食品增補劑”、“無作用藥物(nentracentical)”、“功能食品”或就簡單地稱為“食品”。在本文中，術(shù)語“食品增補劑”包括任何一種這樣的名稱或定義。
“全身給藥”定義為通過胃腸外途徑給藥，諸如通過靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、心室內(nèi)、囊內(nèi)、脊柱內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、口腔、頰、舌下、鼻、直腸、陰道或經(jīng)皮途徑。
上面所提到的藥理學(xué)作用為包含如上所述的牛油果樹提取物或濃縮物和可選的用于全身給藥的可藥用載體的組合物的下列治療應(yīng)用提供了部分原理·以給藥上述組合物為特征的治療或預(yù)防過敏性疾病或炎癥的方法。該治療作用可能與所有已知的與過敏反應(yīng)或炎癥有關(guān)的疾病相關(guān)。自身免疫疾病和IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)在下面作了更詳細的描述。除了這些特定治療范圍以外，上述組合物的作用與所有已知的與過敏反應(yīng)有關(guān)的病患和疾病相關(guān)，以下是關(guān)于此的非限制性實例感染(病毒、細菌、真菌、寄生物等)、感冒和流感、接觸性皮炎、昆蟲叮咬、變應(yīng)性結(jié)節(jié)性脈管炎、手術(shù)后反應(yīng)、移植排斥(移植物對宿主疾病)等。
·以給藥上述組合物為特征的治療或預(yù)防自身免疫疾病的方法。申請人提出了這樣的假設(shè)該治療作用應(yīng)歸功于上述組合物對過敏反應(yīng)的免疫調(diào)制和抑制作用。該治療作用可以涉及所有已知的自身免疫疾病，以下是關(guān)于此的非限制性實例自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、原發(fā)性硬化性膽管炎、自體免疫性溶血性貧血、突眼性甲狀腺腫、重癥肌無力、1型糖尿病、炎性肌病、多發(fā)性硬化、橋本氏甲狀腺炎、自身免疫性腎上腺炎、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腎小球性腎炎、進行性全身性硬化(硬皮病)、斯耶格倫病、紅斑狼瘡、原發(fā)性結(jié)節(jié)性脈管炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、少年關(guān)節(jié)炎、混合結(jié)締組織疾病、牛皮癬、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎等。
·以給藥上述組合物為特征的治療或預(yù)防IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)或病患的方法。申請人提出了這樣的假設(shè)該治療作用歸功于上述組合物對過敏反應(yīng)的抑制作用。該治療作用可涉及所有已知的IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)和病患，以下是關(guān)于此的非限制性實例哮喘、濕疹(例如特應(yīng)性皮炎)、蕁麻疹、變應(yīng)性鼻炎、過敏癥等。
·以給藥上述組合物為特征的治療或預(yù)防任何與疼痛有關(guān)的病患的方法。申請人提出了這樣的假設(shè)該治療作用涉及免疫調(diào)節(jié)作用，很可能是對過敏反應(yīng)的抑制作用。
因此，本發(fā)明組合物適于治療或預(yù)防由各種組織炎癥引起的疾病，例如前列腺的炎癥，特別是前列腺炎。
“前列腺炎”定義為影響前列腺的炎性病況，包括特定細菌的急性和慢性感染，更常見的情況是其中存在前列腺炎癥的跡象和癥狀，但不能檢測出特定的生物體。因此，本發(fā)明組合物還可以用于處理良性前列腺肥大，這是與前列腺腫大有關(guān)的一種疾病。
令人驚奇地，本發(fā)明人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)尤其是用于局部使用的本發(fā)明組合物的治療功效可以通過加入金盞花提取物得到增強。這在實施例3中得到證明，其中含有0.1％金盞花提取物和20％牛油果-三萜烯的藥物組合物的局部抗炎作用被發(fā)現(xiàn)優(yōu)于含有20％牛油果-三萜烯的局部用藥物組合物的作用。因此，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，它包含i)至少5％(w/w)的牛油果-三萜烯；ii)金盞花提取物；和可選的ii)可藥用載體，其中金盞花提取物在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通常為至少0.01％，例如至少0.025％，至少0.05％，至少0.1％，至少0.2％，至少0.3％，或至少0.4％，例如至少0.5％，至少0.75％，至少1.0％，至少2.5％，至少5.0％，或至少7.5％，至少10.0％，例如至少12.5％，至少15.0％，或至少17.5％，至少20.0％，例如至少25.0％，至少30.0％，至少35.0％，或至少40.0％，至少50.0％，例如至少75.0％；另外，金盞花提取物在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)通常為至多75.0％，例如50.0％，至多40.0％，例如至多35.0％，如至多30.0％，例如至多25.0％，例如至多20.0％，如至多10.0％，例如至多7.5％，如至多5.0％，例如至多2.5％，至多1.0％，例如至多0.75％，例如至多0.5％，例如至多0.4％，例如至多0.3％，至多0.2％，例如至多0.1％；金盞花提取物在該組合物中的重量百分數(shù)(w/w)可以在0.001-75.0％范圍內(nèi)，諸如在0.025-50.0％范圍內(nèi)，諸如在0.05-40.0％范圍內(nèi)，例如在0.06-30％范圍內(nèi)，諸如在0.07-20％范圍內(nèi)，諸如在0.08-15％范圍內(nèi)，例如在0.09-12％范圍內(nèi)，例如在0.01-10％范圍內(nèi)，諸如在0.015-8％范圍內(nèi)，諸如在0.02-6％范圍內(nèi)，例如在0.025-5％范圍內(nèi)，諸如在0.03-4％范圍內(nèi)，諸如在0.04-3％范圍內(nèi)，例如在0.05-2％范圍內(nèi)，例如在0.1-1％范圍內(nèi)。優(yōu)選地，該藥物組合物用于對皮膚或粘膜局部給藥。
本發(fā)明的金盞花提取物的主要活性成分是款冬二醇。與上述用于得到牛油果-三萜烯的方法類似，該提取物可以通過任何提取方法得到，且該提取物可以從金盞花植物的任何部分提取，優(yōu)選葉子或花。
上面所提及的藥理學(xué)作用為如上所述的本發(fā)明的用于局部使用的藥物組合物的下列治療應(yīng)用提供了部分原理治療或預(yù)防哺乳動物的皮膚或粘膜炎癥或過敏的方法，特征在于對所述哺乳動物給藥本發(fā)明的藥物組合物。該治療作用可涉及所有已知的與過敏反應(yīng)或炎癥有關(guān)的疾病，包括自身免疫疾病和IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)。本發(fā)明的上述藥物組合物的作用與所有已知的與過敏反應(yīng)有關(guān)的病患和疾病相關(guān)，以下是關(guān)于此的非限制性實例感染(病毒、細菌、真菌、寄生物等)、感冒和流感、接觸性皮炎、昆蟲叮咬、變應(yīng)性結(jié)節(jié)性脈管炎、手術(shù)后反應(yīng)、移植排斥(移植物對宿主疾病)、哮喘、濕疹(例如特應(yīng)性皮炎)、蕁麻疹、變應(yīng)性鼻炎、過敏癥、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、原發(fā)性硬化性膽管炎、自體免疫性溶血性貧血、突眼性甲狀腺腫、重癥肌無力、1型糖尿病、炎性肌病、多發(fā)性硬化、橋本氏甲狀腺炎、自身免疫性腎上腺炎、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腎小球性腎炎、進行性全身性硬化(硬皮病)、斯耶格倫病、紅斑狼瘡、原發(fā)性結(jié)節(jié)性脈管炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、少年關(guān)節(jié)炎、混合結(jié)締組織疾病、牛皮癬、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎等。
按照本發(fā)明，上述組合物可以與任何其他活性成分結(jié)合以增強治療作用。
用于全身或局部給藥的可藥用載體可以是水或除水以外的賦形劑，所述其他賦形劑可以用于組合物中并可包括固體或液體諸如溶劑、增稠劑和粉末?？梢詥为毣蛘咦鳛橐环N或多種賦形劑的組合物使用的這些類型的賦形劑的各自實例如下潤膚劑，諸如硬脂醇、一蓖麻油酸甘油酯、一硬脂酸甘油酯、丙烷-1，2-二醇、丁烷-1，3-二醇、鯨蠟醇、異硬脂酸異丙酯、硬脂酸、棕櫚酸異丁酯、硬脂酸異鯨蠟酯、油醇、月桂酸異丙酯、月桂酸己酯、油酸癸酯、十八烷-2-醇、異鯨蠟醇、棕櫚酸鯨蠟酯、二甲基聚硅氧烷、癸二酸二正丁酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸異丙酯、硬脂酸丁酯、聚乙二醇、三甘醇、羊毛脂、蓖麻油、乙?；蛎?、石油、礦物油、肉豆蔻酸丁酯、異硬脂酸、棕櫚酸、亞油酸異丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯；溶劑，諸如水、二氯甲烷、異丙醇、蓖麻油、乙二醇一乙醚、二甘醇一丁醚、二甘醇一乙醚、二甲亞砜、四氫呋喃、植物和動物油、甘油、乙醇、丙醇、丙二醇、以及其他二醇或醇、不揮發(fā)油；濕潤劑或保濕劑，諸如甘油、山梨糖醇、2-吡咯烷酮-5-羧酸鈉、可溶性膠原、鄰苯二甲酸二丁酯、明膠；粉末，諸如白堊、滑石、白陶土、淀粉及其衍生物、樹膠、膠體二氧化硅、聚丙烯酸鈉、化學(xué)改性的硅酸鋁鎂、水合硅酸鋁、羧乙烯基聚合物、羧甲基纖維素鈉、乙二醇一硬脂酸酯；膠凝劑或膨松劑，諸如果膠、明膠及其衍生物、纖維素衍生物諸如甲基纖維素、羧甲基纖維素或氧化纖維素、羧甲基纖維素、瓜爾豆膠、阿拉伯樹膠、梧桐膠、黃蓍膠、皂粘土、瓊脂、藻酸鹽、卡泊姆、明膠、墨角藻、長角豆、葡聚糖及其衍生物、印度膠、鋰蒙脫石、卵葉車前子皮、黃原膠；聚合物，諸如聚乳酸或聚乙醇酸聚合物或其共聚物、石蠟、聚乙烯、聚氧乙烯、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯吡咯烷酮；表面活性劑，諸如非離子型表面活性劑，例如乙二醇和甘油酯、大粒凝膠醚和酯、糖醚和酯、諸如脫水山梨糖醇酯，離子型表面活性劑，諸如胺皂、金屬皂、硫酸化脂族醇、烷基醚硫酸脂、磺化油，以及兩性表面活性劑和卵磷脂(lecitins)；緩沖劑，諸如鈉、鉀、鋁、鎂或鈣鹽(諸如鹽酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳酸鹽、乙酸鹽、gluceptate或酒石酸鹽)。
另外，很顯然，在按照本發(fā)明的用于制備藥物或食品增補劑的用途中，上述組合物可以與添加劑諸如表面活性劑、溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、抗氧劑、調(diào)味劑等混合，以得到所需的適于全身或局部給藥的成品制劑。類似地，本發(fā)明的藥物或食品增補劑可進一步含有這類添加劑。對于制劑的給藥途徑或劑型沒有限制，以下是關(guān)于此的非限制性實例片劑、膠囊劑、錠劑、口香糖、液體、顆粒、噴霧劑(例如氣溶膠)、吸入劑、軟膏、凝膠、搽劑、乳劑(例如膏霜或洗劑)等?？蛇x地，組合物還可含有表面活性劑諸如膽汁鹽、聚氧化乙烯-脫水山梨糖醇-脂肪酸酯或多元醇混合的長鏈脂肪酸酯，它們可用于改善組合物在消化液中的分散能力，從而可提高生物利用度，或者用于得到組合物的最終劑型。
除了前面所描述的制劑外，本發(fā)明組合物還可配制成貯存制劑。這種長效制劑可以通過植入給藥(例如皮下或肌內(nèi)植入)或者通過肌內(nèi)注射給藥。因此，例如，該組合物可以與合適的聚合或疏水物質(zhì)配制在一起(例如配制成在可接受的油中的乳劑)或者與離子交換樹脂配制在一起，或者配制成微溶的衍生物，例如配制成微溶的鹽。
另一方面，可以使用其他藥物釋放系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳劑是眾所周知的可以用于釋放本發(fā)明組合物的釋放載體的實例。另外，該組合物可以使用持續(xù)釋放系統(tǒng)釋放，諸如含有治療劑的固體聚合物的半透性基質(zhì)?，F(xiàn)已確定了多種持續(xù)釋放物質(zhì)，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。根據(jù)它們的化學(xué)性質(zhì)，持續(xù)釋放膠囊可以在數(shù)周到最多100天以上的時間內(nèi)不斷釋放組合物。
另外，本發(fā)明涉及如上所述的用于全身給藥的藥物活性組合物的制備方法，特征在于獲得牛油果樹的提取物或濃縮物，所述提取物或濃縮物包含至少一種選自下列成員的三萜烯醇丁酰鯨蠟醇，羽扇醇、派克醇、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、α-脂檀素和β-脂檀素，以及至少一種選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，其中所述三萜烯和甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和可選地將所述提取物或濃縮物與用于全身給藥的可藥用載體混合。
實施例實施例1研究概述用利用膠原單克隆抗體(mAb)和脂多糖誘導(dǎo)的BALB/c小鼠關(guān)節(jié)炎模型評估按照本發(fā)明的牛油果樹濃縮物BPC的可能的抗炎活性。測試物質(zhì)口服給藥，每天一次，連續(xù)給藥3天。在第7、10、14和17天時在50mg/kg x 3劑量下觀察到后足水腫情況相對于用賦形劑處理的對照組有顯著的減少(57％、58％、67％和78％)。以10mg/kg x3劑量并行測試的環(huán)磷酰胺在第10、14和17天時觀察到后足水腫情況相對于用賦形劑處理的對照組減少了79％、91％和90％。
測試物盾如下制備本發(fā)明組合物將牛油樹脂分餾，隨后將得到的牛油果樹濃縮物稀釋在玉米油中。所用的牛油果樹濃縮物(下文中稱作BPC)含有26％的選自下列成員的牛油果-三萜烯成分(主要為肉桂酸酯的形式)丁酰鯨蠟醇、羽扇醇、派克醇、日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇、α-脂檀素和β-脂檀素，包含以下具體量的牛油果-三萜烯-23％羽扇醇；-39％α-脂檀素和β-脂檀素；和-26％的丁酰鯨蠟醇另外該濃縮物含有2.2％的選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇。
給藥模式將BPC溶于100％玉米油。測試物質(zhì)以50mg/kg口服給藥，每天一次，連續(xù)3天，10mg/kg環(huán)磷酰胺作為陽性對照，亦如此給藥。給藥體積為5ml/kg。
動物在該研究中，使用重20±1克的雄性BALB/c小鼠。分配給5只小鼠的空間是45×23×15cm。將動物關(guān)在APEC(AllentownGaging，Allentown，NJ 08501，U.S.A.)籠中，維持環(huán)境清潔，控制溫度(22℃-24℃)和濕度(60％-80％)并加以12小時光亮/黑暗循環(huán)達使用前至少一周。動物們可以自由獲取標(biāo)準(zhǔn)實驗室小鼠食物和自來水。這項工作的各個方面包括飼養(yǎng)、實驗和動物的處理總的來說都按照“涉及動物的生物醫(yī)學(xué)研究的國際指導(dǎo)原則”(CIOMSPublication No.ISBN 92 90360194，1985)進行。
化學(xué)制劑本研究中所用的化學(xué)制劑是玉米油(Sigma，U.S.A.)，環(huán)磷酰胺(Sigma，U.S.A.)，脂多糖(Sigma，U.S.A.)和Arthrogen-CIATM單克隆抗體D8、F10、DI-2G和A2(Chondrex，U.S.A.)。
設(shè)備所用的設(shè)備是器官充滿度測量器(Ugo Basile，U.S.A.)。
方法該研究按照Terato等的方法(《自身免疫》22137-147，1995)進行。
將6-8周齡的每組5只BALB/c小鼠用于利用單克隆抗體(mAbs)和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎。動物在第0天時以4mg/只的總量靜脈給藥4種不同mAbs(D8、F10、DI-2G和A2)的結(jié)合物。接著在72小時后(第3天)靜脈注射25μg LPS。從第3天開始，口服給藥測試物質(zhì)，每天一次，連續(xù)3天。第5天時，1只或2只爪子(特別是后足)開始發(fā)紅和腫脹，從第7天開始，未經(jīng)處理的小鼠的兩只后足的關(guān)節(jié)炎癥狀變得嚴重發(fā)紅和腫大。在第7、10、14和17天時用帶有水池(直徑12mm)的器官充滿度測量器(Ugo Basile Cat#7150)測量兩只后足體積的增加。增加的足體積的抑制百分數(shù)如下進行計算抑制(％)[1-(Tn-To)/(Cn-Co)]×100其中Co(Cn)賦形劑對照組小鼠第0天(第n天)時的體積(兩只后足的和)To(Tn)測試物質(zhì)處理組小鼠第0天(第n天)時的體積(兩只后足的和)統(tǒng)計學(xué)處理使用對配對差的Wilcoxon秩和(rank sum)檢驗來比較測試化合物處理組的腫脹情況和對照組的腫脹情況。
結(jié)果在第7、10、14和17天時在50mg/kg×3劑量下觀察到后足水腫相對于用賦形劑處理的對照組有減少(57％、58％、67％和78％)。在第10、14和17天時的抑制作用是統(tǒng)計學(xué)上顯著的(p＜0.05，Wilcoxon)。以10mg/kg×3劑量并行測試的環(huán)磷酰胺在第10、14和17天時觀察到后足水腫情況相對于用賦形劑處理的對照組有統(tǒng)計學(xué)上顯著的減少(p＜0.05，Wilcoxon)，分別為79％、91％和90％。
實施例2背景將含有5-20％牛油果-三萜烯的四種本發(fā)明的局部用藥物組合物與含有相當(dāng)于1％牛油果樹三萜烯的牛油樹脂的普通美容霜進行比較。
該研究的目的是用已確定的測試局部抗炎活性的佛波酯誘導(dǎo)的小鼠炎癥模型來對比本發(fā)明組合物的藥理學(xué)作用與含有牛油樹脂的已知組合物的作用。
方法在以下膏霜基質(zhì)的基礎(chǔ)上制備四種本發(fā)明組合物、含有牛油樹脂的對照組合物和陰性對照組合物氫化菜子油，Cremeol PS-6，Aarhus Olie，Denmark 10.0％硬脂酰乳酸鈉，Danisco Ingredients，Denmark 5.0％一硬脂酸脫水山梨糖醇酯，Danisco Ingredients，Denmark 3.0％一硬脂酸甘油酯，Danisco Ingredients，Denmark 2.0％羥苯甲酯，Unichem，Denmark 0.3％純凈水 加至100％陰性對照組合物不加入任何其他添加劑而制得。四種本發(fā)明的藥物組合物通過加入牛油果樹濃縮物(通過分餾牛油樹脂的油得到)加以制備，分別相當(dāng)于牛油果-三萜烯的含量為5％、10％、15％和20％。對照的牛油樹脂組合物通過加入相當(dāng)于1％牛油果-三萜烯的牛油樹脂而制得。
測定按照Chang等的方法(《歐洲藥理學(xué)雜志》(1987)142197)進行。耳部炎癥通過局部施用佛波酯來誘導(dǎo)。每組5只BALB/c小鼠在施用佛波酯之前30分鐘進行預(yù)處理并在15分鐘后進行處理(后處理)。
施用佛波酯后4小時記錄腫脹度。每只小鼠以自身為對照，一只耳朵進行處理，另一只耳朵不經(jīng)處理。
結(jié)果表1中顯示了耳腫大的百分抑制均值。本發(fā)明的局部用藥物組合物劑量依賴性地抑制了耳腫大，而陰性對照和牛油樹脂對照制劑沒有作用。
表1
解釋該研究清楚地表明含有至少5％牛油果-三萜烯的本發(fā)明的局部用藥物組合物具有顯著的抗炎作用，而普通牛油樹脂制劑沒有抗炎作用。
因此該研究清楚地證明本發(fā)明的藥物組合物在藥理學(xué)上遠遠優(yōu)于普通牛油樹脂制劑。
實施例3背景用已確定的測試局部抗炎活性的佛波酯誘導(dǎo)的小鼠炎癥模型來對比兩種本發(fā)明的局部用藥物組合物的作用，一種含有20％的牛油果-三萜烯，另一種含有20％的牛油果-三萜烯和0.1％的金盞花提取物。
方法在以下膏霜基質(zhì)的基礎(chǔ)上制備兩種本發(fā)明組合物和陰性對照組合物氫化菜子油，Cremeol PS-6，Aarhus Olie，Denmark10.0％硬脂酰乳酸鈉，Danisco Ingredients，Denmark 5.0％一硬脂酸脫水山梨糖醇酯，Danisco Ingredients，Denmark 3.0％一硬脂酸甘油酯，Danisco Ingredients，Denmark 2.0％羥苯甲酯，Unichem，Denmark 0.3％純凈水 加至100％陰性對照組合物不加入任何其他添加劑而制得。兩種本發(fā)明的藥物組合物通過加入相當(dāng)于牛油果-三萜烯的含量為20％的牛油果樹濃縮物(通過分餾牛油樹脂的油得到)加以制備，其中一種還另外加入0.1％的金盞花提取物(通過超臨界二氧化碳萃取制備)。
測定按照Chang等的方法(《歐洲藥理學(xué)雜志》(1987)142197)進行。耳部炎癥通過局部施用佛波酯來誘導(dǎo)。每組5只BALB/c小鼠在施用佛波酯之前30分鐘進行預(yù)處理并在15分鐘后進行處理(后處理)
施用佛波酯后4小時記錄腫脹度。每只小鼠以自身為對照，一只耳朵進行處理，另一只耳朵不經(jīng)處理。
結(jié)果表2中顯示了耳腫大的百分抑制均值。本發(fā)明的兩種局部用藥物組合物清楚地抑制了耳腫大，而陰性對照制劑沒有作用。
表2
解釋該研究清楚地表明含有牛油果-三萜烯和金盞花提取物的結(jié)合物的局部用藥物組合物優(yōu)于僅含有牛油果-三萜烯的組合物。
實施例4概述用大鼠評估本發(fā)明的牛油果樹濃縮物BPC的急性口服毒性。在2000mg/kg劑量下，未見BPC產(chǎn)生毒性或死亡率。因此得出結(jié)論LD50在2000mg/kg體重以上。
測試物質(zhì)如下制備本發(fā)明組合物將牛油樹脂分餾，隨后將得到的牛油果樹濃縮物稀釋在玉米油中。所用的牛油果樹濃縮物(下文中稱作BPC)含有33％的包含下列組分的牛油果-三萜烯成分-26％(w/w)羽扇醇；-44％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；和-30％(w/w)丁酰鯨蠟醇；另外該濃縮物含有2.7％的包含下列組分的甾醇成分-43％α-菠菜甾醇；-37％豆甾醇；和-11％燕麥甾醇。
研究說明大鼠急性口服毒性按照OECD指南No 420，“急性口服毒性-固定劑量法”1992年7月，和發(fā)表于“歐洲共同體官方雜志”NoL383A，第35卷，1992年12月29日，B1部分“急性毒性(口服)-固定劑量法”中的EEC指令進行測定。
該研究以目測研究開始，其中對1只雌性大鼠給藥2000mgBPC/kg體重。未觀察到該大鼠出現(xiàn)臨床毒性癥狀。
在目測研究結(jié)果的基礎(chǔ)上用由5只雌性大鼠組成的一組大鼠進行主體研究，每只大鼠給藥2000mg BPC/kg體重。
主體研究中的所有動物都存活下來并顯示沒有明顯毒性癥狀。
大鼠在研究期間有正常的體重增加。
在該報告中所述的實驗條件下，我們發(fā)現(xiàn)所測試的劑量水平(2000mg BPC/kg體重)，最高的必需劑量水平，沒有導(dǎo)致死亡。最小致死劑量在2000mg BPC/kg體重以上。
實施例5概述用患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病人進行隨機、雙盲和安慰劑對照的II期臨床研究，以測試本發(fā)明的牛油果樹濃縮物的安全性和效能。
測試物質(zhì)如下制備本發(fā)明組合物將牛油樹脂分餾，隨后將得到的牛油果樹濃縮物配制成各自含有750mg濃縮物的軟明膠膠囊劑。所用的牛油果樹濃縮物(下文中稱作BPC)含有33％的包含下列組分的牛油果-三萜烯成分-26％(w/w)羽扇醇；-44％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；和-30％(w/w)丁酰鯨蠟醇；另外該濃縮物含有2.7％的包含下列組分的甾醇成分-43％α-菠菜甾醇；-37％豆甾醇；和
-11％燕麥甾醇。
制備具有完全相同的外觀和重量的安慰劑膠囊。
研究目的目的是測試對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人每日給藥1500mg BPC，給藥18周時的效能和安全性，與安慰劑作比較。
研究設(shè)計以兩個平行組進行隨機、雙盲和安慰劑對照的研究。
研究人群40名確診為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的男/女性患者。允許這些病人繼續(xù)他們目前存在的藥物治療。
研究計劃在第1次訪問中，將滿足選入標(biāo)準(zhǔn)并通過排除標(biāo)準(zhǔn)的病人隨機分到以下組中-BPC 750mg×2/天-安慰劑×2/天在第1、2(6周)、3(12周)和4(18周)次訪問時使用公認的斯坦福健康評估調(diào)查表(HAQ)評估病人的狀態(tài)。
實施例6概述用15名患有牛皮癬的病人進行隨機、雙盲和安慰劑對照的II期臨床研究，以測試本發(fā)明的牛油果樹濃縮物的安全性和效能。
使用相同的本發(fā)明的藥物組合物對120名患有特應(yīng)性皮炎的病人進行的類似研究正在準(zhǔn)備過程中。
測試物質(zhì)如下制備本發(fā)明組合物將牛油樹脂分餾，隨后將得到的牛油果樹濃縮物配制到含有40％濃縮物的標(biāo)準(zhǔn)膏霜基質(zhì)中。膏霜基質(zhì)的組分是水、PEG-6硬脂酸酯、乙二醇硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、淀粉、乙酸鯨蠟酯og甲基/丙基-對羥基苯甲酸酯。
所用的牛油果樹濃縮物(下文中稱作BPC)含有33％的包含下列組分的牛油果-三萜烯成分-26％(w/w)羽扇醇；-44％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；和-30％(w/w)丁酰鯨蠟醇；另外該濃縮物含有2.7％的包含下列組分的甾醇成分-43％α-菠菜甾醇；-37％豆甾醇；和-11％燕麥甾醇。
制備具有相同外觀的安慰劑膏霜(相同基質(zhì))。
研究目的目的是測試對牛皮癬病人一日兩次施用40％BPC膏霜持續(xù)12周時的效能和安全性，與安慰劑作比較。
研究設(shè)計隨機、雙盲、安慰劑對照的左/右研究(病人以自身作對照)。
研究人群15名確診為牛皮癬的男/女性患者。允許這些病人繼續(xù)他們目前存在的藥物治療。
研究計劃在第1次訪問中，將滿足選入標(biāo)準(zhǔn)并通過排除標(biāo)準(zhǔn)的病人隨機分到以下治療組中(左/右)-BPC 40％膏霜×2/天-安慰劑膏霜×2/天在第1、2(4周)、3(8周)和4(12周)次訪問時使用公認的PASI計分表評估病人的狀態(tài)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物或食品增補劑，它包含i)含有至少5％(w/w)牛油果-三萜烯成分的牛油果樹提取物或濃縮物，所述牛油果-三萜烯成分包含-至少2％(w/w)羽扇醇；-至少2％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；-至少2％(w/w)丁酰鯨蠟醇；和-可選的至少1％日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇，其中所述三萜烯可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和ii)可選的可藥用載體。
2.一種藥物組合物或食品增補劑，它包含i)含有至少5％(w/w)牛油果-三萜烯成分的牛油果樹提取物或濃縮物，所述牛油果-三萜烯成分包含-10-40％(w/w)羽扇醇；-10-40％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；-10-40％(w/w)丁酰鯨蠟醇；和-可選的2-30％日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇，其中所述三萜烯可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和ii)可選的可藥用載體。
3.按照權(quán)利要求1或2的藥物組合物或食品增補劑，其中牛油果樹提取物或濃縮物進一步包含甾醇成分，所述甾醇成分含有至少一種選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，其中所述甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯。
4.按照上述權(quán)利要求任一項所述的藥物組合物或食品增補劑，其中牛油果-三萜烯成分可選地與甾醇成分一起占到牛油果樹提取物或濃縮物的最多100％(w/w)。
5.按照權(quán)利要求3或4任一項所述的藥物組合物或食品增補劑，其中牛油果-三萜烯成分與甾醇成分之間的比例在1∶100到500∶1(w/w)范圍內(nèi)。
6.按照上述權(quán)利要求任一項所述的藥物組合物或食品增補劑，它進一步包含金盞花提取物。
7.按照上述權(quán)利要求任一項所述的藥物組合物，它用于全身給藥。
8.按照權(quán)利要求1-6任一項所述的藥物組合物，它用于局部給藥，其中該藥物組合物含有至少5％(w/w)的牛油果-三萜烯成分。
9.按照權(quán)利要求8的藥物組合物，其中該藥物組合物配制成液體、軟膏、凝膠、搽劑、乳劑(例如膏霜或蜜露)或噴霧劑(例如氣溶膠)。
10.按照權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物在制備用于哺乳動物的免疫調(diào)制的藥物或食品增補劑中的用途。
11.按照權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物在制備用于抑制哺乳動物的過敏和/或炎癥反應(yīng)的藥物或食品增補劑中的用途。
12.按照權(quán)利要求11的組合物的用途，用于制備用于治療或預(yù)防哺乳動物的皮膚或粘膜的炎癥或過敏的藥物。
13.按照權(quán)利要求11或12的用途，用于制備用于治療或預(yù)防哺乳動物的自身免疫疾病和/或慢性炎性疾病的藥物或食品增補劑。
14.按照權(quán)利要求13的用途，用于制備用于治療或預(yù)防哺乳動物的牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的藥物或食品增補劑。
15.按照權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物在制備用于減輕哺乳動物的疼痛的藥物或食品增補劑中的用途。
16.按照權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物在制備用于治療或預(yù)防前列腺炎和/或良性前列腺肥大的藥物或食品增補劑中的用途。
17.治療或預(yù)防哺乳動物的過敏或炎癥的方法，其特征在于對所述哺乳動物給藥按照權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物。
18.治療或預(yù)防哺乳動物的皮膚或粘膜的炎癥或過敏的方法，其特征在于對所述哺乳動物給藥按照權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物。
19.治療或預(yù)防哺乳動物的自身免疫疾病和/或慢性炎性疾病的方法，其特征在于對所述哺乳動物給藥按照權(quán)利要求1-9任一項所述的混合物。
20.治療或預(yù)防哺乳動物的牛皮癬、特應(yīng)性濕疹、接觸性皮炎、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和/或骨關(guān)節(jié)炎的方法，其特征在于對所述哺乳動物給藥按照權(quán)利要求1-9任一項所述的混合物。
21.治療或預(yù)防哺乳動物的疼痛的方法，其特征在于對所述哺乳動物給藥按照權(quán)利要求1-9任一項所述的混合物。
22.治療或預(yù)防哺乳動物的前列腺炎或良性前列腺肥大的方法，其特征在于對所述哺乳動物給藥按照權(quán)利要求l-9任一項所述的混合物。
23.權(quán)利要求1-9任一項所述的組合物的制備方法，其特征在于獲得牛油果樹的提取物或濃縮物，所述提取物或濃縮物含有至少5％(w/w)牛油果-三萜烯成分，所述牛油果-三萜烯成分包含-至少2％(w/w)羽扇醇；-至少2％(w/w)α-脂檀素和/或β-脂檀素；-至少2％(w/w)丁酰鯨蠟醇；和-可選的至少1％日耳曼醇、 瑪二烯醇、24-亞甲基- 瑪烯醇和/或派克醇，其中所述三萜烯可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯；和
24.按照權(quán)利要求22的方法，其中牛油果樹提取物或濃縮物進一步包含甾醇成分，所述甾醇成分含有至少一種選自下列成員的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24-甲基-膽甾-7-烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α-菠菜甾醇，其中所述甾醇可以是游離醇或其酯的形式，尤其是肉桂酸、乙酸或脂肪酸酯。
25.按照權(quán)利要求22或23的方法，其中所述牛油果樹提取物或濃縮物進一步與可藥用載體混合。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作食品增補劑或藥物組合物的包含牛油果樹提取物或濃縮物的組合物,還涉及這類組合物在制備用于抑制過敏和/或炎癥反應(yīng)的藥物或食品增補劑中的用途。組合物可以可選地與用于全身或局部給藥的可藥用載體配制在一起。更具體地說,本發(fā)明涉及包含牛油果樹提取物或濃縮物的食品增補劑或藥物組合物,其中所述提取物或濃縮物含有牛油果－三萜烯類以及可選的甾醇豆甾醇、燕麥甾醇、24－甲基－膽甾－7－烯醇、燭果甾醇A、燭果甾醇B和α－菠菜甾醇。
文檔編號A61K31/575GK1367699SQ00811168
公開日2002年9月4日 申請日期2000年7月10日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月9日
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