專利名稱：亞甲藍(lán)診斷劑及上皮癌檢測(cè)的診斷方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的檢測(cè)癌癥和癌前期上皮組織的診斷劑。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明關(guān)于一種新的檢測(cè)和/或描繪(delineating)癌癥和/或癌前期上皮組織的方法。
本發(fā)明在另一方面涉及這樣的診斷程序及其所用試劑，它們尤其可用于體內(nèi)篩選可能的口腔癌患者，作為牙醫(yī)師或內(nèi)科醫(yī)師的例行檢查或程序的一部分，例如定期的牙科或內(nèi)科檢查、牙齒清洗等。
本發(fā)明的另一方面還涉及這樣的方法和其中有用的組合物，其中采用的染料與現(xiàn)有技術(shù)方法的染料相比，能更容易得到和/或更便宜且更簡單地合成和/或純化。
另一方面，本發(fā)明還涉及體內(nèi)方法和使用染料的組合物，盡管現(xiàn)有技術(shù)給出了別的教導(dǎo)，但該染料完全無毒，可以用于漂洗整個(gè)口腔和/或漱口。
發(fā)生發(fā)育異常、增生、腫瘤性和其它活性表面損害等的反常組織能選擇性地保留染料組合物，使用該染料組合物以檢測(cè)癌變前上皮損害，如口腔損害和口腔癌，的體內(nèi)診斷方法在本領(lǐng)域中已有記載。例如，采用熒光素或熒光素衍生物的方法被Chenz在中國口腔學(xué)雜志(2744-47，(1992))及Filurin在stomatologiia(Russian，7244-47，1993)上公開了。這些方法包括染料的應(yīng)用，然后在紫外燈下通過目測(cè)檢測(cè)具有選擇性熒光的癌組織和癌前期組織。
另外的現(xiàn)有技術(shù)方法包括體內(nèi)應(yīng)用甲苯胺藍(lán)O沖洗，接著通過常規(guī)目測(cè)檢測(cè)任何被選擇性染色的組織，例如，在Tucci等人的美國專利5,372,801和Mashberg的美國專利4,321,251中已經(jīng)公開了這種方法。甲苯胺藍(lán)作為一種組織病理學(xué)染色劑在體外應(yīng)用已有數(shù)十年。通過這種使用，人們逐漸發(fā)現(xiàn)它能作為一種使富含DNA和RNA的胞核呈現(xiàn)紫色到粉紅色范圍的染色劑。當(dāng)甲苯胺藍(lán)O結(jié)合核酸或其它酸性細(xì)胞高分子時(shí)，該染料固有的深藍(lán)色可以變成紫色或粉紅色。當(dāng)然，這種染色依賴于染料接近內(nèi)部的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)如胞核。只要通過含有甲醛或其它能破壞細(xì)胞膜但不破壞細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)的試劑“固定”組織樣本就能很容易地接近亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
與包括體外應(yīng)用機(jī)制相比，口腔組織的甲苯胺藍(lán)O染色是由于它滲透細(xì)胞壁及附著于線粒體的能力，后者保留染料的時(shí)間比細(xì)胞外基質(zhì)的組分長。
Mashberg的方法包括通過漱口，用甲苯胺藍(lán)O溶液沖洗整個(gè)口腔，接著用水和醋酸清洗掉癌和癌前期組織不會(huì)保留的染料。用Mashberg的方法進(jìn)行的初步診斷可以通過將甲苯胺藍(lán)O組合物施用在可疑部位10-14天后進(jìn)一步得到證實(shí)。Tucci等人的801專利中公開了一種依照Mashber教導(dǎo)的常規(guī)方法改進(jìn)的甲苯胺藍(lán)O組合物。
在Papazian的腸胃病學(xué)診所生物學(xué)雜志(Gastroenterologic Cliniqueet Biologique 916-22，1985)上提出了用一種包括使用Lugol溶液(碘酒)和甲苯胺藍(lán)O的體內(nèi)方法檢測(cè)伴有上消化道癌的上皮癌。
更最近，Pomerantz在美國專利5,882,627中公開了一類結(jié)構(gòu)性定義的惡嗪和噻嗪染料，這些染料可以用于常規(guī)的Mashberg診斷方法中。然而，Pomerantz在其’627專利中特意將亞甲藍(lán)從定義的類中排除了，并且認(rèn)為亞甲藍(lán)用于口腔沖洗和/或漱口步驟時(shí)毒性太大。
與Pomerantz在其’627專利中所述的相反，亞甲藍(lán)和它的離子衍生物，在用于體內(nèi)組織著色濃度和數(shù)量下，作為局部應(yīng)用選擇性的染料，被安全地用于檢測(cè)和/或描繪上皮癌和癌前期組織。
應(yīng)用于上皮組織染料的合適的亞甲藍(lán)組合物可以通過與適宜于藥用的溶劑混合制備。優(yōu)選用一種適合的藥學(xué)上可接受的緩沖液體系來調(diào)節(jié)亞甲藍(lán)溶液的pH值，以便最終的溶液是基本上等滲的，其pH值大約為2.5-7.0，優(yōu)選4.0-5.0。這可以用醋酸-醋酸鈉緩沖液體系，其他適合的緩沖液體系包括檸檬酸-檸檬酸鈉，或混合的酸鹽系統(tǒng)，例如檸檬酸-磷酸鈉等。
用于提供本發(fā)明的液態(tài)亞甲藍(lán)染料組合物的溶劑是一種水溶劑。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的方案，溶劑包括那些適宜于藥用的，如無毒性、無反應(yīng)性乙醇，如乙烷基乙醇。這些溶劑絲毫不會(huì)干擾染色機(jī)制，并且其本身不至于使染料的有色形態(tài)降低至無色形態(tài)。
如果作為口腔“洗液”使用，可以加入對(duì)染料組合物其他組分穩(wěn)定的矯味劑，以提高組合物的可口性。
液體組合物中亞甲藍(lán)染料的量雖然可以采用高濃度，而且低濃度也至少部分有效，但優(yōu)選調(diào)節(jié)至濃度為最終組合物重量的約1％。在本發(fā)明中，優(yōu)選染料組合物包含約0.5％到約3.5％重量的亞甲藍(lán)組分。
本發(fā)明也要求了與本發(fā)明方法相一致的使用的組合物，其中存在于組合物中的任何無色形態(tài)的染料被一種適宜于藥用的氧化劑內(nèi)含物氧化成有色形態(tài)，這種方式與Tucci在其’801專利中公開的方式相類似。
先用TBO對(duì)照組合物篩選口腔病變患者。鑒別潛在的癌或癌前期病變后，用水和實(shí)施例2醋酸洗液反復(fù)清洗懷疑部位，除去所有TBO痕跡。
接著將那些呈現(xiàn)口腔病變的患者作為實(shí)施例1中亞甲藍(lán)診斷組合物的試驗(yàn)群體。取2-3cc的亞甲藍(lán)組合物涂在病理學(xué)黏膜表面，接著用漂洗混合物和水漂洗，除去過量的亞甲藍(lán)組合物。
對(duì)實(shí)施例1亞甲藍(lán)診斷組合物染色部位組織的組織學(xué)檢查確認(rèn)，亞甲藍(lán)組合物至少在鑒別和描繪癌與癌前期上皮組織上同甲苯胺藍(lán)O等效。
我的發(fā)明已經(jīng)公開到使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解和實(shí)施的程度，并且已經(jīng)公開了目前優(yōu)選的實(shí)施方式。
權(quán)利要求
1.一種惡化前上皮損傷和癌的體內(nèi)檢測(cè)方法，包括下列連續(xù)步驟用被癌性與癌前期組織選擇性保留的染色組合物漂洗上皮，其中染色組合物主要包括甲苯胺藍(lán)O，和用一種漂洗組合物漂洗上皮，以除去未被保留的染料組合物，該方法的改進(jìn)在于其中該染料組合物包含亞甲藍(lán)。
2.一種惡化前上皮損傷和癌的體內(nèi)檢測(cè)方法，包括以下的步驟順序地用被癌性與癌前期組織選擇性保留的染色組合物漂洗上皮，其中染色組合物主要包括甲苯胺藍(lán)O，和用一種漂洗組合物漂洗上皮，以除去未被保留的染料組合物，該方法的改進(jìn)在于其中該染料組合物包含亞甲藍(lán)。
3.一種體內(nèi)檢測(cè)癌和癌前期組織的生物學(xué)染料組合物，包括(a)亞甲藍(lán)，(b)一種適宜于藥用的水溶劑，和(c)一種適宜于藥用的無色亞甲藍(lán)的氧化劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及亞甲藍(lán)組合物及檢測(cè)和/或描繪癌和癌前期上皮組織的方法。
文檔編號(hào)A61K49/00GK1372637SQ00812317
公開日2002年10月2日 申請(qǐng)日期2000年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月30日
發(fā)明者道格拉斯·D·伯克特 申請(qǐng)人:日拉公司