專利名稱：氮雜環(huán)烷酮絲氨酸蛋白酶抑制劑的制作方法
背景技術(shù)：
絲氨酸蛋白酶包括，例如，彈性蛋白酶(人白細胞)、組織蛋白酶G、纖溶酶、C-1酯酶、C-3轉(zhuǎn)化酶、尿激酶、纖溶酶活化劑、頂體蛋白、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、Xa因子和激肽釋放酶。
人白細胞彈性蛋白酶是在炎癥部位由多形核白細胞釋放，因而是大量疾病病癥的病因。組織蛋白酶G是另一種人嗜中性絲氨酸蛋白酶。對這些酶活性具有抑制能力的化合物被認為具有抗炎效果，能用于治療痛風、類風濕性關(guān)節(jié)炎和其它炎性疾病以及肺氣腫。胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶是消化酶。這些酶的抑制劑可用于治療胰腺炎。尿激酶和纖溶酶原活化劑的抑制劑可以用于治療諸如良性前列腺肥大、前列腺癌和牛皮癬的細胞過度生長性疾病。
絲氨酸蛋白酶凝血酶在止血和血栓形成中占據(jù)核心地位，并且，作為一種對因子蛋白質(zhì)，對血小板、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、白細胞、心臟和神經(jīng)元誘發(fā)大量的作用。通過內(nèi)源性途徑的凝血級聯(lián)激活(接觸激活)或通過外源性途徑的凝血級聯(lián)激活(通過血漿暴露于非內(nèi)皮表面、管壁破損或組織因子釋放而激活)導致一系列集中于凝血酶的生化演變。凝血酶裂解纖維蛋白原，最終導致形成止血栓(血塊形成)，通過細胞表面凝血酶受體的獨特蛋白水解裂解作用有效地激活血小板(Coughlin，Seminarsin Hematology 31(4)270-277(1994))，并通過反饋機制自我擴增其本身的產(chǎn)生。因此，凝血酶功能抑制劑對心血管和非心血管疾病宿主具有治療效果。
Xa因子是凝血途徑中的另一種絲氨酸蛋白酶。Xa因子與磷脂膜上的Va因子和鈣締合形成凝血酶原酶復合物。該凝血酶原酶復合物隨后將凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶(Claeson，Blood Coagulation andFibrinolysis 5411-436(1994)；Harker，BloodCoagulation and Fibrinolysis 5(Suppl 1)S47-S58(1994))。由于直接的凝血酶抑制劑仍允許大量的新凝血酶生成，因此，Xa因子抑制劑被認為比直接抑制凝血酶的試劑更具優(yōu)點(Lefkovits and Topol，Circulation 90(3)1522-1536(1994)；Harker，BloodCoagulation and Fibrinolysis 5(Suppl 1)S47-S58(1994))。
各種結(jié)構(gòu)類型的直接凝血酶抑制劑最近已被識別(Tapparellietal.，Trends inPharmacological Sciences 14366376(1993)；Claeson，Blood Coagulation and Fibrinolysis 5411-436(1994)；Lefkovits and Topol，Circulation 90(3)1522-1536(1994))。通過抑制凝血酶活性位點起作用的具有代表性的化合物包括α-氯代酮D-苯丙氨酰-L-脯氨酰-L-胍基戊氨酰氯甲基酮(PPACK)、胍基戊氨酸硼DUP7 14、胍基戊氨酰(arginal)肽GYK114766、環(huán)肽cyclotheonamides A和B、苯甲脒NAPAP和芳基磺酰基胍基戊氨酸argatroban。凝血酶抑制肽水蛭素和hirulogs還跨越凝血酶的活性和外部區(qū)塊。肽hirugen和單鏈DNA aptamers通過外部占據(jù)來抑制凝血酶。這類抗凝劑仍有一個或多個下述問題(1)由于這類試劑的肽特性或寡核苷酸特性、或由于這類試劑的高分子量或帶電性質(zhì)，導致不良的口服生物利用率、(2)大量出血并發(fā)癥、(3)較之其它絲氨酸蛋白酶，其對凝血酶的選擇性低(在動物模型中，這可能會導致嚴重的有時甚至是致命的低血壓和呼吸抑制)、(4)肝臟毒性、或(5)成本效果。
另外一種抑制凝血酶功能的途徑是抑制Xa因子。Xa因子與磷脂膜上的Va因子和鈣締合形成凝血酶原酶復合物。該凝血酶原酶復合物隨后將凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶(Claeson.Blood CoagulationandFibrinolysis 5411-436(1994)；Harker，Blood Coagulationand Fibrinolysis 5(Suppl 1)S47-S58(1994))。由于直接的凝血酶抑制劑仍允許大量的新凝血酶生成，因此，Xa因子抑制劑被認為比直接抑制凝血酶的試劑更具優(yōu)點(Lefkovits and Topol，Circulation90(3)1522-1536(1994)；Harker，Blood Coagulation andFibrinolysis 5(Suppl 1)S47-S58(1994))。實際上，已發(fā)現(xiàn)，在對心肌梗塞進行溶栓治療過程中和在對心肌梗塞進行溶栓治療之后，產(chǎn)生凝血酶的信號增加，因此，我們認為，新凝血酶的連續(xù)產(chǎn)生，而不是預(yù)先形成的凝固血塊的凝血酶的再暴露，是引起再閉塞現(xiàn)象的部分原因。因此，現(xiàn)在認為，與溶栓有關(guān)的增強的凝血酶活性應(yīng)至少部分歸因于新凝血酶的產(chǎn)生。
當作為血栓溶解添加劑時，特定的蛋白Xa因子抑制劑，例如，由水蛭得到的119-氨基酸蛋白質(zhì)antistasin和由軟壁虱得到的蛋白質(zhì)TAP(壁虱抗凝血肽)有利于血塊溶解并防止再閉塞(Mellott et al.，Circulation Research 701152-1160(1992)；Sitko etal.。Circulation 85805-815(1992))。1995年1月31日公開的US5,385,885公開了TAP和antistasin對平滑肌細胞的增殖抑制活性。另外，以表明，TAP和antistasin可降低試驗再狹窄。上述結(jié)果表明，通過作用于血栓形成或通過其促有絲分裂的潛能，Xa因子可以在再狹窄過程中起作用(Ragosta et al.，Circulation 891262-1271(1994))。肽ecotin是另一種選擇性的、可逆的、緊密結(jié)合的Xa因子抑制劑，具有有效的抗凝血活性(Seymour etal.，Biochemistry 333949-3959(1994)；WO94/20535，1994年9月14日公開)。硬蜱科、軟蜱科和鉤蟲屬是其它具有代表性的從以血液為食物的動物中分離出來的肽Xa因子抑制劑(Markwardt，Thrombosisand Hemostasis 72477-479(1994))。
非肽二脒基衍生物，例如，五水合(+)-(2S)-2-[4-[[(3S)-1-亞氨代乙酰基-3-吡咯烷基]氧基]苯基]-3-[7-脒基-2-萘基]丙酸鹽酸鹽(DX-9065a)，具有抗凝血活性(Tidwell etal.，Thrombosis Research19339-349(1980)；Yamazaki et al.，Thrombosis andHemostasis 72393-395(1994)；Hara et al.，ThrombosisandHemostasis 71314-319(1994)；Nagahara etal.，Journal of Medicinal Chemistry 371200-1207(1994))。合成的苯丙氨酸和環(huán)庚酮脒基衍生物也具有有效的Xa因子抑制作用(Sturzebecher et al.，Thrombosis Research 54245-252(1989))。
仍然需要作為有效的、選擇性蛋白酶抑制劑的非肽類化合物，該化合物較現(xiàn)有的蛋白酶抑制劑具有更高的生物利用率和更少的副作用。因此，以有效的抑制能力和低哺乳動物毒性為特征的一類新型有效的蛋白酶抑制劑是潛在的有價值的多種病癥的治療劑，包括治療許多哺乳動物蛋白水解性疾病。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及下式I的新化合物(如下所示)。
本發(fā)明還提供了制備下式I化合物的方法。
本發(fā)明的新化合物是蛋白酶，特別是諸如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、纖維蛋白溶酶和因子Xa的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的有效抑制劑。某些化合物通過選擇性抑制Xa因子顯示間接的抗血栓形成活性，或是用于形成具有抗血栓形成活性化合物的中間體。本發(fā)明還提供了抑制或治療哺乳動物異常蛋白水解的方法以及通過用有效量的式I化合物給藥來治療哺乳動物的血栓形成、局部缺血、中風、再狹窄或炎癥的方法。
本發(fā)明包括用于治療血栓形成、局部缺血、中風、再狹窄或炎癥的組合物，該組合物在可藥用載體中含有本發(fā)明化合物。這些組合物可任選含有抗凝劑、抗血小板劑和溶栓劑?？蓪⒃摻M合物加入到血液、血液制品或哺乳動物器官中產(chǎn)生以所需的抑制作用。
優(yōu)選實施方案的詳述本發(fā)明的第一個方面是下式I的新化合物或其可藥用鹽 其中Q是C6-14芳基、C6-14芳基(C1-4)烷基、C6-14芳基(C2-4)鏈烯基、吡啶基、噻吩基、吲哚基、喹啉基(quinolinyl)、苯并噻吩基或咪唑基；上述任何一個基團可含有一個或多個任選的取代基，所述任選的取代基獨立地選自鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷氧基、C1-3烷基、亞甲二氧基、羧基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基、C6-10芳氧基羰基氨基、C7-11芳烷氧基羰基氨基、氨基羰基、單或二(C1-4)烷基氨基羰基、乙酰氨基、脒基、吡啶基、萘基、嘧啶基、鏈烯基、單或二(C1-4)烷基氨基，或其結(jié)合；X是亞甲基、羰基或磺?；籖1是氫或C1-3烷基；n＝1、2或3；
m＝1-4，優(yōu)選為1或2；R2是氫或C1-3烷基；R3是氫或C1-3烷基；和R4、R5和R6獨立地是氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2RW，其中，在各種情況下，RW優(yōu)選為C1-4烷基、C4-7環(huán)烷基或芐基中的一個基團，或RW是下述基團之一 其中，Rd、Re和Rg各自是氫，Rf是甲基，和Rh是芐基或叔丁基。
優(yōu)選的基團Q包括諸如苯基、聯(lián)苯基或萘基的芳基或諸如芐基、苯乙基或萘基甲基的芳烷基或噻吩基。這些基團中的任一基團可如上所述被任選取代。
合適的基團包括萘-1-基、萘-2-基、5-二甲基氨基萘-1-基、6-氯萘-2-基、6-溴萘-2-基、芐基、2-硝基芐基、苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-(正丙基)苯基、4-(叔丁基)苯基、4-(叔戊基)苯基、4-甲氧基苯基、4-碘苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、3，4-二氯苯基、4-硝基苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-乙烯基苯基、3，4-二甲氧基苯基和2-苯基乙烯基。
其它合適的基團包括4-(2-甲基苯基)苯基、4-(2-甲氧基苯基)苯基、4-(3-氯苯基)苯基、4-(3-氟苯基)苯基、4-(3-甲氧基苯基)苯基、4-(4-氟苯基)苯基、4-(4-甲基苯基)苯基、4-(4-甲氧基苯基)苯基、4-(2，4-二氟苯基)苯基、4-(3，4-二氯苯基)苯基、4-3，4-二甲氧基苯基)苯基、4-萘-2-基苯基、4-吡啶-4-基苯基、4-吡啶-2-基苯基、聯(lián)苯基{(4-苯基)苯基}、4-(4-氯苯基)苯基、4-嘧啶-5-基苯基和5-(吡啶-5-基)噻吩-2-基。
優(yōu)選n為1和2。
優(yōu)選X是SO2或C(O)，最優(yōu)選為SO2。
優(yōu)選的m值包括1或2，最優(yōu)選為1。
合適的R1、R2和R3包括氫、甲基、乙基、正丙基和異丙基。最優(yōu)選每個R1、R2和R3是氫。
合適的R4、R5和R6包括氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、羥基、甲氧基、乙氧基、氰基、-CO2CH3、-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3。在最優(yōu)選的實施方案中，R4、R5和R6是氫。
優(yōu)選的一類本發(fā)明化合物是式I的化合物，其中Q是苯基、聯(lián)苯基、萘基芐基、苯乙基、萘基甲基或噻吩基，更優(yōu)選為苯基或聯(lián)苯基，任一上述基團任選被1-3個獨立地選自下述基團的任選取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷氧基、C1-3烷基、亞甲二氧基、羧基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基、C6-10芳氧基羰基氨基、C7-11芳烷氧基羰基氨基、氨基羰基、單或二(C1-4)烷基氨基羰基、乙酰氨基、脒基、吡啶基、萘基、嘧啶基、鏈烯基、單或二(C1-4)烷基氨基；X是羰基或磺酰基，更優(yōu)選為磺酰基；n＝1或2；m＝1或2，更優(yōu)選為1；R1、R2和R3是氫；和R4、R5和R6獨立地是氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2RW，其中，在各種情況下，RW優(yōu)選為C1-4烷基、C4-7環(huán)烷基或芐基中的一個基團，或RW是下述基團之一 其中，Rd、Re和Rg各自是氫，Rf是甲基，和Rh是芐基或叔丁基。
本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物將在實施例中詳細描述。
還應(yīng)當理解的是，本發(fā)明包括由于在選定的本發(fā)明系列化合物中存在結(jié)構(gòu)上的不對稱而產(chǎn)生的立體異構(gòu)體和光學異構(gòu)體，例如，對映體混合物以及單一的對映體和非對映體。
式I化合物也可以被溶劑化，特別是可以被水合。水合作用可以發(fā)生在所述化合物或含有所述化合物的組合物的生產(chǎn)過程中，或者，隨時間的推移，由于化合物的吸濕性而發(fā)生水合作用。
式I的某些化合物是被稱為前藥的衍生物。術(shù)語“前藥”是指已知的直接作用性藥物的衍生物，與藥物相比，該衍生物具有改善的轉(zhuǎn)送特性和治療價值，并通過酶催或化學過程轉(zhuǎn)變成活性藥物，有用的前藥是哪些其中R4、R5和/或R6是-CO2RW的化合物，其中RW的定義同上。
當在任何組分或式I化合物中的任何基團的變化不止一次時，其在各種情況下的定義與其在各種其它情況下的定義無關(guān)。此外，取代基和/或可變基團的組合僅在該組合可產(chǎn)生穩(wěn)定化合物時才被允許。
本發(fā)明術(shù)語“烷基”本身或作為其它基團的一部分，除非限制其鏈長，是指至多具有10個碳原子的直鏈和支鏈基團，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、異己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基或癸基。
除非限制鏈長，本發(fā)明術(shù)語“鏈烯基”是指具有2-10個碳原子的直鏈或支鏈基團，其包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。優(yōu)選鏈長為2-8個碳原子的鏈烯基，最優(yōu)選鏈長為2-4個碳原子的鏈烯基。
除非限制鏈長，本發(fā)明術(shù)語“炔基”是指具有2-10個碳原子的直鏈或支鏈基團，其中，在鏈的兩個碳原子之間有至少一個三鍵，其包括但不限于乙炔基、1-丙炔基和2-丙炔基等。優(yōu)選鏈長為2-8個碳原子的炔基，最優(yōu)選鏈長為2-4個碳原子的炔基。
在本發(fā)明所有鏈烯基或鏈炔基作為取代基的情況下，不飽和鍵，即，烯鍵或炔鍵優(yōu)選不直接與氮、氧或硫相連。
術(shù)語“烷氧基”是指與氧原子連接的任何上述烷基。
本發(fā)明術(shù)語“芳基”本身或作為其它基團的一部分，是指在環(huán)部分含有6-12個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族基團，優(yōu)選在環(huán)部分有6-10個碳原子，例如，苯基、聯(lián)苯基、萘基或四氫萘基。
本發(fā)明術(shù)語“芳烷基”“芳基烷基”，其本身或作為其它基團的一部分，是指具有芳基取代基的上述C1-6烷基，例如芐基、苯乙基或2-萘基甲基。
本發(fā)明術(shù)語″雜芳基″是指具有5-14個環(huán)原子，在環(huán)排列中共享6、10或14個π電子并含有碳原子和1、2或3個氧、氮或硫雜原子的基團(其中，雜芳基的實例是噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并惡唑基、苯并吡喃基、占噸基、吩惡硫雜環(huán)己二烯基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，噠嗪基、中氮茚基、異氮雜茚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、2，3-二氮雜萘基、1，5-二氮雜萘基、喹唑啉基、肉啉基、喋啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌間二氮苯基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異惡唑基、呋咱基和吩惡嗪基)。
本發(fā)明術(shù)語“環(huán)烷基”本身或作為其它基團的一部分，是指具有3-9個碳原子的環(huán)烷基。其具有代表性的實例是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基和環(huán)壬基。
本發(fā)明術(shù)語“鹵素”或“鹵”本身或作為其它基團的一部分，是指氯、溴、氟或碘，優(yōu)選氯。
本發(fā)明術(shù)語“單烷基胺”本身或作為其它基團的一部分，是指被一個具有1-6個碳原子的烷基取代的氨基。
本發(fā)明術(shù)語“二烷基胺”本身或作為其它基團的一部分，是指被兩個分別具有1-6個碳原子的烷基取代的氨基。
本發(fā)明術(shù)語“羥基烷基”本身或作為其它基團的一部分，是指被一個或多個羥基取代的任何上述烷基。
本發(fā)明術(shù)語“羧基烷基”是指被一個或多個羧基取代的任何上述烷基。
本發(fā)明術(shù)語“雜原子”是指氧原子(“O”)、硫原子(“S”)或氮原子(“N”)。應(yīng)當理解的是，當雜原子是氮時，可以形成NRaRb基團，其中Ra和Rb相互獨立地是氫或C1-C8烷基，或與同它們相連的氮原子一起形成飽和或不飽和5-、6-或7-元環(huán)。
本發(fā)明縮寫“t-Am”是指結(jié)構(gòu)為CH3CH2(CH3)2C-的活潑戊基。
式I化合物的可藥用鹽(水或油溶性產(chǎn)物或水或油溶可分散性產(chǎn)物)包括例如由無機或有機酸或堿形成的常規(guī)無毒鹽或季銨鹽。上述酸加成鹽的實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。堿鹽包括銨鹽、諸如鈉鹽和鉀鹽的堿金屬鹽、諸如鈣鹽和鎂鹽的堿土金屬鹽，諸如二環(huán)己基胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺鹽的有機堿鹽和與諸如精胺酸、賴氨酸等氨基酸形成的鹽。此外，含氮的堿性基團可以被諸如下述試劑季銨化低級烷基鹵化物，例如，甲基、乙基、丙基和丁基的氯、溴和碘化物；硫酸二烷基酯，例如，硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；長鏈鹵化物，例如，癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酸基的氯、溴和碘化物；芳烷基鹵化物，例如，芐基和苯乙基溴等。用于形成酸加成鹽的酸優(yōu)選包括HCl、乙酸、三氟乙酸和富馬酸。
本發(fā)明的第二個方面涉及一種治療血栓形成、局部缺血、中風、再狹窄或炎癥的方法，該方法包括對需要所述治療的哺乳動物施用治療或預(yù)防有效量的式I化合物。
本發(fā)明化合物是一類新的有效的金屬、酸、硫醇和絲氨酸蛋白酶抑制劑。被本發(fā)明化合物抑制的絲氨酸蛋白酶的實例包括嗜中性白細胞彈性蛋白酶(一種涉及肺氣腫發(fā)病機制的蛋白水解酶)；胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶(消化酶)；胰彈性蛋白酶和組織蛋白酶G(一種也與白細胞有關(guān)的胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶)；凝血酶和Xa因子(血凝途徑中的蛋白水解酶)。本發(fā)明化合物還可以用于抑制嗜熱菌蛋白酶(一種金屬蛋白酶)和胃蛋白酶(一種酸性蛋白酶)。本發(fā)明化合物優(yōu)選用于抑制胰蛋白酶樣蛋白酶。
本發(fā)明化合物的特征在于與凝血酶和/或纖維蛋白溶酶相比，其具有優(yōu)先抑制Xa因子的能力。作為Xa因子抑制劑，本發(fā)明化合物抑制凝血酶的產(chǎn)生。因此，這些化合物可以用于治療或預(yù)防以牽涉到凝血酶的產(chǎn)生或作用的異常靜脈或動脈血栓形成為特征的病癥。這些病癥包括但不限于深靜脈血栓形成；在膿毒性休克、病毒感染和癌癥過程中發(fā)生的彌漫性血管內(nèi)凝血；心肌梗塞；中風；冠狀動脈搭橋術(shù)；髖關(guān)節(jié)復位；以及由于溶栓治療或經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀血管成形術(shù)(PCTA)引起的血栓形成。本發(fā)明化合物也可以用作體外血液循環(huán)中的抗凝血劑。鑒于Xa因子和凝血酶對諸如平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞和噬中性白細胞的宿主細胞的作用，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物還可以用于治療或預(yù)防成人呼吸窘迫綜合癥；諸如水腫的炎性反應(yīng)；再灌注損傷；動脈粥樣硬化；以及在諸如囊血管形成術(shù)、動脈粥樣硬化斑切除術(shù)和動脈斯藤枝植入術(shù)的損傷之后的再狹窄。
本發(fā)明化合物可以用于治療瘤形成和瘤轉(zhuǎn)移以及諸如老年性癡呆癥和帕金森氏病癥的神經(jīng)變性疾病。
本發(fā)明化合物可以與諸如組織纖溶酶原活化劑、鏈激酶和尿激酶的溶栓劑聯(lián)用。另外，本發(fā)明化合物還可以與諸如(但不限于)纖維蛋白原拮抗劑和血栓烷受體拮抗劑的其它抗血栓形成或抗凝血藥物聯(lián)用。
以抑制凝血酶的能力為特征的本發(fā)明化合物可以用于多種治療目的。作為凝血酶抑制劑，本發(fā)明化合物抑制凝血酶的產(chǎn)生。因此，這些化合物可以用于治療或預(yù)防牽涉到凝血酶的產(chǎn)生或作用的異常靜脈或動脈血栓形成為特征的病癥。這些病癥包括但不限于深靜脈血栓形成；在膿毒性休克、病毒感染和癌癥過程中發(fā)生的彌漫性血管內(nèi)凝血；心肌梗塞；中風；冠狀動脈搭橋術(shù)；眼內(nèi)纖維蛋白形成；髖關(guān)節(jié)復位；以及由溶栓治療或經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀血管成形術(shù)(PCTA)引起的血栓形成。本發(fā)明化合物的其它用途包括所述凝血酶抑制劑用作抗凝劑，它被包埋在用于生產(chǎn)血液采集、血液循環(huán)和血液儲藏裝置的材料中，所述裝置為，例如，導管、血液透析機、采血注射器和管以及血液導管，或者，以物理方式將它連接于所述材料上。本發(fā)明化合物還可以在體外血液循環(huán)中用作抗凝劑。
鑒于凝血酶對諸如平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞和噬中性白細胞的宿主細胞的作用，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物還可以用于治療或預(yù)防成人呼吸窘迫綜合癥；炎性反應(yīng)；傷口愈合；再灌注損傷；動脈粥樣硬化；以及在諸如囊血管形成術(shù)、動脈粥樣硬化斑切除術(shù)和動脈斯藤特固定模植入術(shù)的損傷之后的再狹窄。
本發(fā)明化合物可以用于治療瘤形成和瘤轉(zhuǎn)移，以及諸如老年性癡呆癥和帕金森氏癥的神經(jīng)變性疾病。
當用作Xa因子抑制劑時，本發(fā)明化合物的有效給藥劑量是約0.1-500mg/kg體重，優(yōu)選為0.1-10mg/kg體重，每天給藥一次或分成2-4次給藥。
本發(fā)明的藥物組合物可以對能實現(xiàn)本發(fā)明化合物有益效果的任何動物給藥。其中，最主要的是人，但本發(fā)明不僅限于此。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過能達到其目的的任何方式進行給藥。例如，可以通過胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)皮、頰內(nèi)或經(jīng)眼給藥?；蛘?，或同時，通過口服給藥。給藥劑量取決于患者的年齡、健康狀況和體重、并行治療的種類(如果有的話)、治療頻率以及所需效果的性質(zhì)。
除了藥理學活性化合物外，新藥物制劑可以含有合適的可藥用載體，所述可藥用載體包括有助于將活性化合物加工成可藥用制劑的賦形劑和輔劑。
本發(fā)明的藥物制劑用本身已知的方法生產(chǎn)，例如，采用常規(guī)混合、造粒、制造糖衣丸、溶解和凍干法生產(chǎn)。因此，通過將活性化合物與固體賦形劑混合，如果需要，在加入適當輔劑后，任選研磨所得的混合物并加工顆?；旌衔铮玫狡瑒┗蛱且峦栊?，從而得到用于口服的藥物制劑。
具體地講，合適的賦形劑是諸如糖類的填料，例如，乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨醇，纖維素制品和/或磷酸鈣類，例如，磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑，例如，使用諸如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、土豆淀粉的淀粉糊、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解劑，例如，加入上述淀粉以及羧基甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或諸如藻酸鈉的藻酸鹽。輔劑優(yōu)選是流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，如硅石、滑石、硬脂酸或諸如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣的硬脂酸鹽和/或聚乙二醇。糖衣丸芯帶有合適包衣，如果需要，其能抗胃液。為此，可以使用濃縮糖溶液，所述糖溶液可以任選含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、清漆溶液以及合適的有機溶劑或溶劑混合物。為了制備抗胃液包衣，使用諸如鄰苯二甲酸乙?；w維素或鄰苯二甲酸羥丙甲基纖維素的合適纖維素制品的溶液。例如，為了識別或為了表明活性化合物劑量的組合，可向片劑或糖衣丸包衣中加入染料或色素。
能用于口服的其它藥物制劑包括由明膠制得的推合膠囊以及由明膠和諸如甘油或山梨醇的增塑劑制得的密封軟膠囊。推合膠囊可以含有顆粒形狀的活性化合物，所述顆?？梢耘c諸如乳糖的填料、諸如淀粉的粘合劑和/或諸如滑石或硬脂酸鎂的潤滑劑以及任選的穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，優(yōu)選將活性化合物溶解或懸浮于諸如脂肪油或液體石蠟的適當液體中。此外，還可以加入穩(wěn)定劑。
用于腸胃外給藥的合適制劑包括水溶性形式(如水溶性鹽、堿性溶液和環(huán)糊精包絡(luò)物)的活性化合物的水溶液。特別優(yōu)選的堿性鹽是用例如Tris、膽堿氫氧化物、Bis-Tris丙烷、N-甲基葡糖胺或精氨酸制得的銨鹽。可以用一種或多種已修飾的或未修飾的環(huán)糊精來穩(wěn)定和增加本發(fā)明化合物水溶性。U.S.4,727,064、4,764,604和5,024,998公開了可以用于上述目的的有用的環(huán)糊精。
另外，合適的油性注射懸浮液形式的活性化合物的懸浮液也可以用于給藥。合適的親脂性溶劑或賦形劑包括脂肪油，例如，蓖麻油，或合成脂肪酸酯，例如，油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(該化合物可溶解于PEG-400)。含水注射懸浮液可以含有能增加懸浮液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。該懸浮液還任選含有穩(wěn)定劑。
本發(fā)明還涉及制備式I化合物的方法，該方法包括將式II化合物或其鹽與式III化合物偶合或縮合， 式II中，R4、R5和R6的定義同本發(fā)明或任選被保護，m定義同本發(fā)明，式III中，R51是H或Q-X-，其中，Q、X、R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義同本發(fā)明。一般而言，R4、R5和R6可以是氫或氨基保護基。
本發(fā)明化合物可以根據(jù)下述反應(yīng)圖解合成。
在下述方法中使用的試劑和原料可以從化學藥品供應(yīng)商購得，化學藥品供應(yīng)商包括Aldrich、Advanced Chem Tech、Bachem、Sigma和Fluka等。在合成這些化合物的過程中，使用保護基團保護官能團，防止發(fā)生交叉反應(yīng)。在Greene，T.W.and Wuts，P.G.M.，Protective Groups in Organic Synthesis，second edition，John Wiley & Sons，New York，NY(1991)中描述了合適的保護基團的實例和其用途。
反應(yīng)圖解1詳細說明了制備式II的氨基烷氧基胍原料的合成步驟。反應(yīng)圖解中的參數(shù)“m”為1-8，優(yōu)選1或2。1999年6月3日出版WO99/26926的實施例1和2中進一步詳細說明和例證了該反應(yīng)圖解中的合成步驟。
圖解1 Freidinger等人已在J.Org Chem.47104-109(1982)中描述了在1-位具有羧甲基和在3-位具有帶合適保護基pb的氨基的γ-和δ-內(nèi)酰胺原料III的制備方法。類似的7-元環(huán)內(nèi)酰胺的制備也已被公開(Semple，J.E.et al.，J.Med.Chem.394531-4536(1996))。另外，通過用諸如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的酰胺偶聯(lián)劑環(huán)化在α-氨基上具有合適保護基的鳥氨酸，可以合成δ-內(nèi)酰胺。然后，在諸如四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺的溶劑中，使用諸如雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰的堿，用α-溴乙酸酯進行烷基化，隨后用氫氧化物的甲醇含水溶液進行皂化，可以接上羧甲基。通過在α-氨基和α-羧基上具有合適保護基的谷氨酸的γ-羧基上的改進的庫爾提斯重排，也可以合成類似的γ-內(nèi)酰胺。(與Scholtz andBartlett，Synthesis542-544(1989)中的描述相似)。然后，通過除去γ-氨基保護基并將其轉(zhuǎn)化成游離堿(如果需要)進行自發(fā)環(huán)化。然后，按上述方法引入羧甲基側(cè)鏈。
圖解2 反應(yīng)圖解2說明了由式II和III原料的偶合反應(yīng)開始，偶合合成本發(fā)明化合物。使用諸如N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺的標準偶聯(lián)劑和在ThePepitidesAnalysis，Synthesis，Biology，Gras，E.et al.，eds.，Academic Press，New York，NY(1979-1987)，Volumes 1-8中公開的其它已知試劑，可以將原料偶合。然后，使用在Greene，T.W.and Wuts，P.G.M.，Protective Groups in OrganicSynthesis，second edition，John Wiley & Sons，New York，NY(1991)中公開的條件，可以除去保護基pb。然后，在諸如二氯甲烷的惰性溶劑中，優(yōu)選在諸如吡啶、三乙基胺等的有機堿存在下，用磺酰氯將所得的胺?；?。使用在Greene，T.W.and Wuts，P.G.M.，Protective Groups in OrganicSynthesis，second edition，JohnWiley & Sons，New York，NY(1991)中公開的方法，除去保護基R5和R6，得到最終產(chǎn)物。
下述實施例用于說明而不是限制本發(fā)明的方法和組合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員經(jīng)常會對各種條件和參數(shù)進行其它合適的修飾和改變且這種修飾和改變是顯而易見的，它們均落在本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。
實施例12-{(3S)-3-[(2-萘磺?；?氨基]-2-氧代哌啶基}-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺 1. N-((3S)-2-氧代(3-哌啶基))(苯基甲氧基)甲酰胺 將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(7.2g，37.6mmol)一次加入到Nα-芐氧基羰基-L-鳥氨酸(10g，37.6mmol)、4-甲基嗎啉(4.1mL，37.6mmol)和1-羥基苯并三唑(5.1g，37.6mmol)的乙腈(200mL)溶液中。攪拌過夜后，濾出不溶白色固體并棄去。真空濃縮濾液，將殘余物溶解在二氯甲烷中，并隨后用稀鹽酸水溶液和稀NaHCO3水溶液洗滌。將分離出的有機層干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，得到白色固體(7.0g，75％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.34(m，5H)，6.20(bs，1H)，5.76(bs，1H)，5.11(s，2H)，4.10(m，1H)，3.32(m，1H)，2.50(m，1H)，1.92(m，2H)，1.61(m，1H)。2. 2-{(3S)-2-氧代-3-[(苯基甲氧基)羰基氨基]哌啶基}乙酸 將雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(20.8mL，1.0M，于四氫呋喃中)加入到用冰冷卻的上述實驗產(chǎn)物(4.7g，18.9mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液中。加入完成后，向混合物中加入溴代乙酸乙酯(15.8g，94.5mmol)。攪拌30分鐘后，加入乙二胺(10mL)并再繼續(xù)攪拌30分鐘。真空濃縮混合物，將殘余物溶解在二氯甲烷中，用稀鹽酸水溶液洗滌。干燥已分離的有機層(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。將粗產(chǎn)物溶解在甲醇(25mL)中，隨后加入1.0M NaOH(50mL)。攪拌30分鐘后，真空蒸發(fā)甲醇，用二氯甲烷(3×100mL)萃取所得的堿性水溶液。用1.0N HCl酸化水層至pH為1，并用二氯甲烷萃取。干燥有機萃取液(Na2SO4)，過濾并真空濃縮，得到標題化合物(5.7g，98％)。無需進一步提純。3. 3-{[2-(2-{(3S)-2-氧代-3-[(苯基甲氧基)羰基氨基]哌啶基}乙酰氨基)乙氧基]-氨基}-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯 將六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)轔(5.25g，12mmol)一次加入到上述實驗產(chǎn)物(3.0，9.9mmol)、3-[(2-氨基乙氧基)氨基]-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯(3.5g，9.9mmol)和N，N-二異丙基乙胺(3.45mL，19.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液中。攪拌過夜后，用二氯甲烷稀釋混合物，并隨后用稀HCl水溶液和稀NaHCO3水溶液洗滌。干燥已分離的有機層(Na2SO4)，過濾并真空濃縮，得到在下一步用作不純粗品原料的標題化合物(7.0g)。4. 3-({2-[2-((3S)-3-氨基-2-氧代哌啶基)乙酰氨基]乙氧基}氨基)-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯 在氫氣壓力為1atm的條件下，攪拌上述實驗粗產(chǎn)物(7.0g)和10％鈀碳(800mg)的甲醇(100mL)溶液2小時。將混合物用硅藻土過濾，真空濃縮濾液。殘余物在二氯甲烷和稀HCl水溶液之間進行分配。水相用二氯甲烷再萃取兩次并棄去萃取液。用1M NaOH堿化水層并用二氯甲烷萃取。干燥已分離的有機萃取液(Na2SO4)，過濾并真空濃縮，得到無需進一步提純的標題化合物(2.0g，步驟3和4收率為40％)。5. 2-{(3S)-3-[(2-萘磺?；?氨基]-2-氧代哌啶基}-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺 將2-萘磺酰氯(48mg，0.21mmol)一次加入到上述實驗產(chǎn)物(100mg，0.21mmol)和負載于聚苯乙烯上的二甲基氨基吡啶(250mg，約為2mmol二甲基氨基吡啶/g樹脂)的二氯甲烷(3mL)溶液中。攪拌過夜后，將混合物用乙腈(3mL)稀釋，隨后加入氨基甲基樹脂(250mg，約1.1mmol/g樹脂)。攪拌30分鐘后，過濾除去樹脂，真空濃縮濾液。用二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)溶解殘余物，攪拌30分鐘。然后，真空濃縮混合物，并使用10％甲醇/用氨飽和的二氯甲烷，在10g二氧化硅SPE柱上進行色譜分離。濃縮所需組份后，在含有1當量富馬酸的甲醇中攪拌產(chǎn)物并真空濃縮，得到白色固體標題化合物(32mg，26％)。MSm/z＝463(M+1)。
3-[(2-氨基乙氧基)氨基]-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯的制備如下a. N-(2-羥基乙基)(苯基甲氧基)甲酰胺 將氯甲酸芐酯(63mL，443mmol)滴加到乙醇胺(60g，984mmol)的四氫呋喃(300mL)溶液中。攪拌過夜后，真空濃縮混合物，并將混合物在二氯甲烷和稀HCl水溶液之間進行分配。用稀NaHCO3水溶液洗滌分離的有機層，干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮，得到無需提純用于下一步的標題化合物(36g)。b. N-[2-(1，3-二氧代異二氫吲哚-2-基氧基)乙基](苯基甲氧基)甲酰胺 將偶氮二甲酸二乙酯(5.2g，30mmol)加入到上述實驗產(chǎn)物(5.9g，30mmol)、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺(4.9g，30mmol)和三苯基膦(7.9g，30mmol)的四氫呋喃(100mL)溶液中。攪拌過夜后，用乙酸乙酯(200mL)稀釋混合物，并飽和NaHCO3(2×100mL)水溶液和鹽水(100mL)洗滌。干燥分離的有機層(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。將殘余物進行色譜分離(SiO2)，使用含有0-4％乙酸乙酯的二氯甲烷進行梯度洗脫，得到白色固體標題化合物(9.3g，91％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.84(m，2H)，7.78(m，2H)，7.37(m，5H)，5.97(bs，1H)，5.14(s，2H)，4.27(t，J＝4.9Hz，2H)，3.51(q，J＝5.2Hz，2H).c. N-[2-(氨基氧基)乙基](苯基甲氧基)甲酰胺 將甲基胺(40重量％水溶液，2mL，25mmol)加入到上述實驗產(chǎn)物(1.36g，4.0mmol)的乙醇(20mL)和四氫呋喃(20mL)的溶液中。攪拌1小時后，真空濃縮混合物，將殘余物進行色譜分離(SiO2)，使用含有75-100％乙酸乙酯的己烷進行梯度洗脫，得到白色固體標題化合物(800mg，95％)。1H-NMR(300MHz，CDCL3)δ7.36(m，5H)，5.47(bs，2H)，5.21(bs，1H)，5.10(s，2H)，3.72(t，J＝5.0Hz，2H)，3.44(q，J＝5.0Hz，2H)。d. 2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-({2-[(苯基甲氧基)羰基氨基]乙氧基}氨基)丙-2-烯酸叔丁酯 將上述實驗產(chǎn)物(780mg，3.7mmol)和[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]米基吡唑(1.25g，4.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液攪拌過夜。高真空濃縮混合物，將所得殘余物進行色譜分離(SiO2)，使用含有0-5％乙酸乙酯的二氯甲烷進行梯度洗脫，得到無色油狀標題化合物(1.55g，93％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.08(s，1H)，7.67(s，1H)，7.33(m，5H)，6.21(bs，1H)，5.21(bs，1H)，5.11(s，2H)，4.12(t，J＝4.8Hz，2H)，3.54(q，J＝4.9Hz，2H)，1.49(s，9H)，1.46(s，9H)。e. 3-[(2-氨基乙氧基)氨基]-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯 在氫氣壓力為1atm的條件下，將上述實驗產(chǎn)物(730mg，1.5mmol)和10％鈀碳(70mg)在乙醇(20mL)和四氫呋喃(20mL)中的溶液攪拌30分鐘。將混合物用硅藻土過濾，真空濃縮濾液。使用5％甲醇/用氨飽和的二氯甲烷，將殘余物在10g二氧化硅SPE柱上進行色譜分離，得到無色油狀題化合物(290mg，61％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.08(bs，1H)，4.08(t，J＝5.2Hz，2H)，2.99(q，J＝5.1Hz，2H)，1.50(s，9H)，1.48(s，9H)。
用與實施例1相同的方法，合成下表1中的化合物。所有合成的化合物均是該化合物的延胡索酸鹽。
表1 實施例282-[(3S)-3-({[4-(4-氯苯基)苯基]磺?；鶀氨基)-2-氧代哌啶基]-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺1. 3-({2-[2-((3S)-3-{[(4-碘苯基)磺酰基]氨基}-2-氧代哌啶基)乙酰基氨基]乙氧基}氨基)-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯
將4-碘苯磺酰氯(1.77g，5.8mmol)加入到實施例1.4產(chǎn)物(2.50g，5.3mmol)和三乙胺(0.89mL，6.4mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中。攪拌過夜后，用乙腈(20mL)稀釋混合物，隨后加入氨基甲基樹脂(1g，約為1mmol/g樹脂)。濾除樹脂，真空濃縮濾液，得到不用提純用于下一步的標題化合物(2.48g，87％)。2. 2-[(3S)-3-({[4-(4-氯苯基)苯基]磺?；鶀氨基)-2-氧代哌啶基]-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺 將上述實驗產(chǎn)物(100mg，0.14mmol)溶解在甲苯(1mL)中，將其加入到含有4-氯苯基硼酸(31mg，0.2mmol)和二氯雙(三苯基膦)合鈀(II)(10mg)的管形瓶中。然后將該混合物用乙醇(0.25mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(0.25mL)稀釋，蓋上瓶蓋，并在80℃的沙浴中加熱，直至顏色變黑(約30分鐘)。將該混合物直接加到10g二氧化硅SPE柱上，用乙酸乙酯作為洗脫液進行色譜分離。真空濃縮所需組份，并將殘余物溶解在三氟乙酸/二氯甲烷(1∶1；4mL)中。攪拌30分鐘后，真空濃縮混合物，在10g二氧化硅SPE柱上，用10％甲醇/氨飽和的二氯甲烷對殘余物進行色譜分離。濃縮所需組份，并將其溶解在含有1當量富馬酸的甲醇中，以延胡索酸鹽的形式得到標題化合物(15mg，17％)。MSm/z＝523(M+1)。
實施例292-((3S)-2-氧代-3-{[(4-嘧啶-5-基苯基)磺?；鵠氨基}哌啶基)-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺 將實施例29.1的產(chǎn)物(100mg，0.14mmol)、氯化鋰(25mg，0.60mmol)、碘化亞銅(3mg)、二氯雙(三苯基膦)合鈀(II)(7mg)和5-三丁基甲錫烷基嘧啶在管形瓶中混合，并將其溶解/懸浮在甲苯(1mL)中，蓋上瓶蓋，在80℃沙浴中加熱，直至顏色變黑(約30分鐘)。將該混合物直接加到10g二氧化硅SPE柱上，用乙酸乙酯作為洗脫液進行色譜分離。真空濃縮所需組份，并將殘余物溶解在三氟乙酸/二氯甲烷(1∶1；4mL)中。攪拌30分鐘后，真空濃縮混合物，在10g二氧化硅SPE柱上，用10％甲醇/氨飽和的二氯甲烷對殘余物進行色譜分離。濃縮所需組份，并將其溶解在含有1當量富馬酸的甲醇中，以延胡索酸鹽的形式得到標題化合物(13mg，15％)。MSm/z＝491(M+1)。
除了實施例44的化合物是按實施例29的方法合成外，按與實施例28相同的方法合成表2中的化合物。所有合成的化合物是該化合物的延胡索酸鹽。表2 實施例452-((3S)-3-{[(6-溴(2-萘基))磺?；鵠氨基}-2-氧代吡咯烷基)-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺1. N-((3S)-2-氧代吡咯烷-3-基)(苯基甲氧基)甲酰胺
將二苯基磷?；B氮(11.1mL，51.3mmol)加入到N-芐氧基羰基-L-谷氨酸α-甲酯(13.8g，46.7mmol)和三乙胺(7.2mL，51.3mmol)的叔丁醇溶液中。在95℃攪拌過夜后，將混合物真空濃縮，溶解在二氯甲烷中，并隨后用稀HCl水溶液和稀NaHCO3水溶液洗滌。干燥已分離的有機層(MgSO4)，過濾并真空濃縮。加入乙醚形成沉淀，過濾，得到白色固體(6S)-6-(甲氧基羰基)-2-氧代-1，3-二氮雜全氫甲酸(diazaperhydroinecarboxylate)苯基甲酯(4.0g，29％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.37(m，6H)，5.18(s，2H)，4.83(t，J＝5.2Hz，1H)，3.65(s，3H)，3.10(m，1H)，2.95(m，1H)，2.16(m，1H)，2.03(m，1H).真空濃縮濾液，將殘余物溶解在二氯甲烷(50ml)中，然后加入三氟乙酸(50ml)。攪拌30分鐘后，將混合物真空濃縮，將殘余物在二氯甲烷和稀氫氧化鈉水溶液之間進行分配。干燥已分離的有機層(MgSO4)，過濾并真空濃縮。加入乙醚形成沉淀，過濾，得到白色固體標題化合物(3.0g，28％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.78(bs，1H)，7.51(d，J＝8.8Hz，1H)，7.36(m，5H)，5.03(s，2H)，4.09(m，1H)，3.14(m，2H)，2.26(m，1H)，1.85(m，1H).2. 2-{(3S)-2-氧代-3-[(苯基甲氧基)羰基氨基]吡咯烷基}乙酸 將雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(13ml，1.0M四氫呋喃溶液)加入到用冰冷卻的上述實驗產(chǎn)物(2.77g，11.8mmol)的四氫呋喃(60mL)溶液中。一旦完成加入，向混合物中加入溴代乙酸乙酯(2.6mL，23.7mmol)。攪拌30分鐘后，加入乙二胺(1.2mL)并繼續(xù)再攪拌30分鐘。將該混合物真空濃縮。將殘余物溶解在二氯甲烷中，隨后用稀HCl水溶液和稀NaHCO3水溶液洗滌。干燥已分離的有機層(MgSO4)，過濾并真空濃縮。將粗產(chǎn)物(3.5g)溶解在甲醇(60ml)中，隨后加入1.0MNaOH(40ml)。攪拌過夜后，真空蒸發(fā)甲醇，用二氯甲烷萃取所得的堿性水溶液兩次(棄去)。用1.0N HCl酸化所得的水層至pH為1-2，并用二氯甲烷萃取。然后用氯化鈉(固體)飽和水層，再用乙酸乙酯萃取。干燥合并后的有機萃取液(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。加入乙醚形成沉淀，過濾，得到白色固體標題化合物(3.0g，86％)。無需進一步提純。3. 3-{[2-(2-{(3S)-2-氧代-3-[(苯基甲氧基)羰基氨基]吡咯烷基}乙?；被?乙氧基]氨基}-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯 將六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(4.8g，10.8mmol)一次加入到上述實驗產(chǎn)物(2.9g，9.8mmol)、3-[(2-氨基乙氧基)氨基]-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯(3.4g，10.8mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.9mL，10.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(80mL)溶液中。攪拌過夜后，將混合物真空濃縮，并用二氯甲烷稀釋，隨后用稀HCl水溶液和稀NaHCO3水溶液洗滌。干燥已分離的有機層(MgSO4)，過濾并真空濃縮，得到不用進一步提純用于下一步反應(yīng)的標題化合物粗產(chǎn)物(7.5g)。4. 3-({2-[2-((3S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷基)乙酰氨基]乙氧基}氨基)-2-氮雜-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯
在1atm氫氣壓力下，將上述實驗產(chǎn)物(7.5g粗產(chǎn)物)和10％鈀碳(750mg)在乙醇(100mL)和氯仿(7mL)中的溶液攪拌過夜。將混合物用硅藻土過濾，真空濃縮濾液。將殘余物在二氯甲烷和0.1N HCl之間進行分配。用二氯甲烷再萃取水層一次，棄去萃取液。水層用1.0MNaOH堿化至pH為10-11，用二氯甲烷萃取。干燥已分離的有機層(Na2SO4)，過濾并真空濃縮，得到無色油狀標題化合物(1.0g，步驟3和4收率為22％)。無需進一步提純。5. 2-((3S)-3-{[(6-溴(2-萘基))磺?；鵠氨基}-2-氧代吡咯烷基)-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺 將6-溴-2-萘磺酰氯(73mg，0.24mmol)一次加入到上述實驗產(chǎn)物(100mg，0.21mmol)和負載于聚苯乙烯上的二甲基氨基吡啶(220mg，約為2mmol二甲基氨基吡啶/g樹脂)的二氯甲烷(3mL)溶液中。攪拌過夜后，混合物用乙腈(3mL)稀釋，隨后加入氨基甲基樹脂(250mg，約1.1mmol/g樹脂)。攪拌30分鐘后，濾除樹脂，真空濃縮濾液。用二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)溶解殘余物，并攪拌30分鐘。然后，真空濃縮混合物，并使用10％甲醇/氨飽和的二氯甲烷，在10g二氧化硅SPE柱上進行色譜分離。濃縮所需組份后，在含有1當量富馬酸的甲醇中攪拌產(chǎn)物并真空濃縮，得到白色固體標題化合物(64mg，42％)。MSm/z＝527/529(M+1)。
除了用實施例45.4得到的化合物作為原料外，用與實施例28相同的方法合成表3中的化合物。所有合成的化合物是該化合物的延胡索酸鹽。表3 實施例51片劑制備如下所述，制備分別含有25.0、50.0和100.0mg下述活性化合物的片劑a. 2-{(3S)-3-[(2-萘基磺?；?氨基]-2-氧代哌啶基}-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺；和b. 2-((3S)-3-{[(6-溴(2-萘基))磺?；鵠氨基}-2-氧代吡咯烷基)-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺。
含有25-100mg活性化合物的片劑含量-mg活性化合物 25.050.0 100.00微晶纖維素 37.25 100.0200.0改性食品玉米淀粉37.25 4.25 8.5硬脂酸鎂0.500.75 1.5將所有活性化合物、纖維素和部分玉米淀粉混合，造粒成10％玉米淀粉糊。形成的顆粒過篩，干燥，再與剩余的玉米淀粉和硬脂酸鎂混合。將形成的顆粒壓制成片，每片分別含有25.0、50.0和100.0mg活性組份。
實施例52靜脈內(nèi)溶液制制劑上述活性化合物的靜脈劑型制備如下活性化合物 0.5-10.0mg檸檬酸鈉5-50mg檸檬酸 1-15mg氯化鈉 1-8mg注射用水(USP) 適量-1ml采用上述用量，在室溫下，將活性化合物2-{(3S)-3-[(2-萘基磺?；?氨基]-2-氧代哌啶基}-N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]乙酰胺溶解在預(yù)先制得的氯化鈉、檸檬酸和檸檬酸鈉的注射用水(USP，參見1995年的United States Pharmacopeia/National Formulary第1636頁，由United States Pharmacopeial Convention，Inc.，Rockville，Maryland(1994)出版)溶液中。
實施例53純化酶的體外抑制試劑所有緩沖鹽是從Sigma Chemical Company(St.Louis，MO)以最高純度購得。酶底物，N-苯甲?；?Phe-Val-Arg-對硝基苯胺(Sigma B7632)、N-苯甲?；?Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基苯胺鹽酸鹽(Sigma B2291)、N-對甲苯磺?；?Gly-Pro-Lys-對硝基苯胺(SigmaT6140)、N-琥珀?；?Ala-Ala-Pro-Phe-對硝基苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-對硝基苯胺(Sigma C7271)從Sigma購得。N-琥珀?；?Ala-Ala-Pro-Arg-對硝基苯胺(BACHEM L-1720)和N-琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Val-對硝基苯胺(BACHEM L-1770)從BACHEM(Kingof Prussia，PA)購得。
人α-凝血酶和人Xa因子從Enzyme Research Laboratories(South Bend，Indiana)獲得。牛α-胰凝乳蛋白酶(SigmaC4129)，牛胰蛋白酶(Sigma T8642)和人腎細胞尿激酶(SigmaU5004從Sigma購得。人白細胞彈性蛋白酶得自Elastin Products(Pacific，MO)。
Ki測定所有測試都基于試驗化合物抑制肽對-硝基苯胺底物的酶催化水解的能力。在典型的Ki測定中，在DMSO中制備底物，并將其稀釋到由50mM HEPES和200mM NaCl組成的pH為7.5的試驗緩沖液中。每種底物的最終濃度在下文列出。一般而言，底物濃度低于試驗測定的Km值。將試驗化合物制備成1.0mg/ml的DMSO溶液。在DMSO中制備稀釋液，得到包括200倍濃度范圍的8種最終濃度。按下文列出的濃度在試驗緩沖液中制備酶溶液。
在典型的Ki測定中，將280mL底物溶液和10mL試驗化合物溶液吸移到96孔板的每一個孔中，在37℃下，將孔板在MolecularDevices平板讀數(shù)器上熱平衡15分鐘以上。通過加入10mL酶的等分試樣引發(fā)反應(yīng)，記錄405nm處的吸收增加值15分鐘。低于10％總底物水解的相應(yīng)數(shù)據(jù)用于計算。不含試驗化合物的樣品的速度比率(吸收值隨時間的變化率)除以含有試驗化合物的樣品的速度，并作為試驗化合物濃度的函數(shù)繪圖。將數(shù)據(jù)進行線性回歸擬合，計算直線斜率。該斜率的倒數(shù)是試驗測得的Ki值。
凝血酶凝血酶活性以其水解底物N-琥珀?；?Ala-Ala-Pro-Arg-對硝基苯胺的能力來評定。在試驗緩沖液中制備濃度為32mM(32mM＜＜Km＝180mM)的底物溶液。最終DMSO濃度為4.3％。將純化的人α-凝血酶在試驗緩沖液中稀釋至濃度為15nM。最終的試劑濃度為[凝血酶]＝0.5nM，[底物N-琥珀?；?Ala-Ala-Pro-Arg-對硝基苯胺]＝32mMX因子[FXa]FXa活性以其水解底物N-苯甲酰基-Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基苯胺鹽酸鹽的能力來評定。在試驗緩沖液中制備濃度為51mM(51＜＜Km＝1.3mM)的底物溶液。最終DMSO濃度為4.3％。將純化的活化人X因子在試驗緩沖液中稀釋至濃度為300nM。最終的試劑濃度為[FXa]＝10nM，[N-苯甲?；?Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基苯胺鹽酸鹽]＝51mM。
一般而言，本發(fā)明化合物在統(tǒng)計學上具有顯著的抗凝血酶和/或Xa因子活性。列舉的每種化合物對一種或上述所有酶所測定的Ki值小于10uM。例如，發(fā)現(xiàn)實施例2的化合物抗凝血酶的Ki＝0.70uM，且在濃度為10uM時無抗Xa因子活性。發(fā)現(xiàn)實施例11的化合物抗凝血酶的Ki＝1.2uM和抗Xa因子的Ki＝2.1uM。發(fā)現(xiàn)實施例42的化合物抗凝血酶的Ki＝6.4uM和抗Xa因子的Ki＝0.36uM。
現(xiàn)已充分描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解的是，在各種等同條件、配方和其它參數(shù)范圍內(nèi)，同樣可以進行本發(fā)明，而不影響的范圍或其任一實施方案。本發(fā)明所引用的所有專利和出版物都全文引入本發(fā)明作為參考。
權(quán)利要求
1.下式I的化合物或其可藥用鹽 其中Q是C6-14芳基、C6-14芳基(C1-4)烷基、C6-14芳基(C2-4)鏈烯基、吡啶基、噻吩基、吲哚基、喹啉基、苯并噻吩基或咪唑基；上述任何一個基團可含有一個或多個任選取代基，所述任選取代基獨立地選自鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷氧基、C1-3烷基、亞甲二氧基、羧基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基、C6-10芳氧基羰基氨基、C7-11芳烷氧基羰基氨基、氨基羰基、單或二(C1-4)烷基氨基羰基、乙酰氨基、脒基、吡啶基、萘基、嘧啶基、鏈烯基、單或二(C1-4)烷基氨基，或其結(jié)合；X是亞甲基、羰基或磺?；?；R1是氫或C1-3烷基；n＝1、2或3；m＝1-4，優(yōu)選為1或2；R2是氫或C1-3烷基；R3是氫或C1-3烷基；和R4、R5和R6獨立地是氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2RW，其中，在各種情況下，RW優(yōu)選為C1-4烷基、C4-7環(huán)烷基或芐基中的一個基團，或RW是下述基團之一 其中，Rd、Re和Rg各自是氫，Rf是甲基，和Rh是芐基或叔丁基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中Q是芳基、芳烷基或噻吩基，任一上述基團可含有一個或多個任選取代基，所述任選取代基獨立地選自鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷氧基、C1-3烷基、亞甲二氧基、羧基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基、C6-10芳氧基羰基氨基、C7-11芳烷氧基羰基氨基、氨基羰基、單或二(C1-4)烷基氨基羰基、乙酰氨基、脒基、吡啶基、萘基、嘧啶基、鏈烯基、單或二(C1-4)烷基氨基，或其結(jié)合。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中Q是苯基或聯(lián)苯基，任一上述基團可含有一個或多個任選取代基，所述任選取代基獨立地選自鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷氧基、C1-3烷基、亞甲二氧基、羧基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基、C6-10芳氧基羰基氨基、C7-11芳烷氧基羰基氨基、氨基羰基、單或二(C1-4)烷基氨基羰基、乙酰氨基、脒基、吡啶基、萘基、嘧啶基、鏈烯基、單或二(C1-4)烷基氨基，或其結(jié)合。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中Q是萘-1-基、萘-2-基、5-二甲基氨基萘-1-基、6-氯萘-2-基、6溴萘-2-基、芐基、2-硝基芐基、苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-(正丙基)苯基、4-(叔丁基)苯基、4-(叔戊基)苯基、4-甲氧基苯基、4-碘苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、3，4-二氯苯基、4-硝基苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-乙烯基苯基、3，4-二甲氧基苯基或2-苯基乙烯基。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中Q是4-(2-甲基苯基)苯基、4-(2-甲氧基苯基)苯基、4-(3-氯苯基)苯基、4-(3-氟苯基)苯基、4-(3-甲氧基苯基)苯基、4-(4-氟苯基)苯基、4-(4-甲基苯基)苯基、4-(4-甲氧基苯基)苯基、4-(2，4-二氟苯基)苯基、4-(3，4-二氯苯基)苯基、4-3，4-二甲氧基苯基)苯基、4-萘-2-基苯基、4-吡啶-4-基苯基、4-吡啶-2-基苯基、聯(lián)苯基、4-(4-氯苯基)苯基、4-嘧啶-5-基苯基和5-(吡啶-5-基)噻吩-2-基。
6.權(quán)利要求4的化合物，其中n＝1或2。
7.權(quán)利要求5的化合物，其中X是SO2。
8.權(quán)利要求4的化合物，其中m＝1或2。
9.權(quán)利要求4的化合物，其中m＝1。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R3獨立地選自氫、甲基、乙基、正丙基和異丙基。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R3是氫。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中R4、R5和R6獨立地選自氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、羥基、甲氧基、乙氧基、氰基、-CO2CH3、-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中R4、R5和R6是氫。
14.權(quán)利要求1的化合物，其中Q是苯基、聯(lián)苯基、萘基芐基、苯乙基、萘基甲基或噻吩基，更優(yōu)選為苯基或聯(lián)苯基，任一上述基團任選被1-3個任選取代基取代，所述任選取代基獨立地選自鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷氧基、C1-3烷基、亞甲二氧基、羧基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基、C6-10芳氧基羰基氨基、C7-11芳烷氧基羰基氨基、氨基羰基、單或二(C1-4)烷基氨基羰基、乙酰氨基、脒基、吡啶基、萘基、嘧啶基、鏈烯基、單或二(C1-4)烷基氨基；X是羰基或磺酰基，更優(yōu)選為磺?；籲＝1或2；m＝1或2，更優(yōu)選為1；R1、R2和R3是氫；和R4、R5和R6獨立地是氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2RW，其中，在各種情況下，RW優(yōu)選為C1-4烷基、C4-7環(huán)烷基或芐基中的一個基團，或RW是下述基團之一 其中，Rd、Re和Rg各自是氫，Rf是甲基，和Rh是芐基或叔丁基。
15.一種含有權(quán)利要求1的化合物以及可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
16.一種抑制Xa因子的方法，其包括將Xa因子與權(quán)利要求1的化合物接觸。
17.一種治療哺乳動物Xa因子介導的病癥的方法，其包括對需要上述治療的哺乳動物施用治療或預(yù)防有效量的權(quán)利要求1的化合物。
18.一種治療血栓形成、局部缺血、中風、再狹窄或炎癥的方法，其包括對需要上述治療哺乳動物施用治療或預(yù)防有效量的權(quán)利要求1的化合物。
19.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，其包括將式II化合物或其鹽與式III化合物偶合或縮合， 式II中，R4、R5和R6的定義同本發(fā)明或任選被保護，m的定義同本發(fā)明，式III中，R51是H或Q-X-，其中Q、X、R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義同權(quán)利要求1。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療動脈和靜脈血栓形成閉塞癥、炎癥、癌癥和神經(jīng)變性疾病的非肽因子Xa抑制劑。因子Xa抑制劑是式(I)化合物或其可藥用鹽,其中,Q是苯基、芐基、吡啶基、噻吩基、吲哚基、喹啉基、苯并噻吩基、聯(lián)苯基或咪唑基,所述任一基團可以含有一個或多個任選取代基,所述任選取代基獨立地選自:鹵素、三氟甲基、羥基、氨基、硝基、氰基、C
文檔編號A61K31/4015GK1373755SQ00812827
公開日2002年10月9日 申請日期2000年9月13日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月13日
發(fā)明者S·C·米勒, J·J·馬魯根圣切茲, K·D·哈斯羅, J·P·霍爾 申請人:三維藥物公司