專利名稱：氧化氮用于氣道狹窄治療的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄的藥物領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明可方便用于增強(qiáng)氧化氮治療的效果或在非響應(yīng)者身上產(chǎn)生氧化氮的效果。
背景技術(shù)：
氧化氮松弛氣道平滑肌(Belvisi MG，Stretton CD，Barnes PJ.氧化氮是人體氣道支氣管擴(kuò)張神經(jīng)的內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)，Eur.J.Pharmacol.1992；210221-222)，并且外源性氧化氮的吸入減弱了實驗室動物和人體支氣管狹窄對各種試劑的響應(yīng)(Depuy PM，Shore SA，DrazenJM，F(xiàn)rostell C，Hill WA，Zapol WM.，吸入的氧化氮在豚鼠中的支氣管擴(kuò)張作用，J.Clin.Invest.1992；90421-428；Hogman M，F(xiàn)rostellC，Arnberg H，Hedenstierna G.氧化氮的吸入調(diào)節(jié)乙酰甲基膽堿-誘導(dǎo)的兔子支氣管狹窄，Eur.Respir.J.1993；6177-180；Hgman M，F(xiàn)rostell CG，Hedenstrm H，Hedenstierna G.，氧化氮的吸入調(diào)節(jié)成人支氣管緊張性，Am.Rev.Respir.Dis.1993；1481474-1476)。已經(jīng)嘗試通過氧化氮吸入以松弛哮喘的狹窄氣道。EP 560 928，US5,485,827和5,873,359公開了使用氧化氮治療支氣管狹窄和肺血管收縮。然而已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，治療效果顯示很大的個體間和個體內(nèi)變化性，并且一些哮喘患者是非響應(yīng)者，使用氧化氮根本沒有改進(jìn)(Hogman M，F(xiàn)rostell CG，Hedenstrom H，HedenstiernaG.，Am.Rev.Respir.Dis.1993；1481474-1478)。
患有哮喘的患者具有不同程度的氣道壁水腫(Jeffery，P.K.(1998).哮喘中的氣道病理學(xué)，In Asthma.基本機(jī)理和臨床處理，Barnes，P.J.Rodger，I.W.和Thompson，N.C.編著，47-64頁.San Diego，CA.美國科學(xué)出版社)。其提出水腫可能是對于哮喘患者中氧化氮效果不同的解釋。在對兔子的研究中，通過噴霧高滲生理鹽水而增加表面液體的容積滲克分子濃度，從而消除了氧化氮對乙酰甲基膽堿-誘導(dǎo)的支氣管狹窄的作用(Hgman M，Hjoberg J，Hedenstierna G.，增加的氣道容積滲克分子濃度抑制氧化氮在兔子中的作用，Eur.Respir.J.1998；121313-1317)。同樣，在豚鼠氣管中，通過加入NaCl以升高灌注進(jìn)入氣管腔的緩沖劑的容積滲克分子濃度從而減弱氧化氮供體的體外效果(Hjoberg J，Hgman M，Hedenstierna G.容積滲克分子濃度過高降低了氧化氮供體在豚鼠氣管中的松弛效力，Br.J.Pharmacol.1999；127391-396)。
因此，本發(fā)明要解決的主要問題是確定為什么當(dāng)氣道表面暴露于過高容積滲克分子濃度下時，氧化氮對氣道的擴(kuò)張效果通常會降低。根據(jù)本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)找到了對該問題的解決方案，即，具有抵消氧化氮所述降低效果能力的化合物組。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供用于松弛氣道的合適化合物。
更具體地，該化合物的目的是達(dá)到氣道的松弛。
本發(fā)明的另一個目的是提供合適的化合物，用于抵消單獨使用氧化氮時的降低的松弛效果，優(yōu)選用于對單獨使用氧化氮的非響應(yīng)者。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是達(dá)到純的可吸入藥物的使用。
在閱讀了以下的描述之后，本發(fā)明的其它目的對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯然的。
發(fā)明概述通過在所附權(quán)利要求中限定的用途、方法和藥物制劑可以完成本發(fā)明的上述目的以及其它目的，這些目的可由本領(lǐng)域技術(shù)人員在已經(jīng)研究了以下的描述之后進(jìn)行匯總。
更具體地，根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，提供了與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的并以氣態(tài)氧化氮或氧化氮供體形式存在的可吸入氧化氮(NO)用于治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄藥物制造的用途，所述結(jié)合以治療有效量進(jìn)行以達(dá)到該氣道狹窄的松弛。
因此，根據(jù)本發(fā)明，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在經(jīng)受腔內(nèi)容積滲克分子濃度過高的氣管中發(fā)現(xiàn)的外源氧化氮的降低的松弛效果至少部分是由于超氧化物陰離子引起的。
超氧化物陰離子可以由分離的豚鼠氣管的一些細(xì)胞產(chǎn)生(Sadeghi-Hashjin G，Henricks PA，F(xiàn)olkerts G，Muis T，Garssen J，Nijkamp FP，上皮層在由豚鼠分離氣管產(chǎn)生超氧化物陰離子中的作用，介質(zhì)，Inflamm.1998；735-40)，并且它們快速地與氧化氮反應(yīng)，以形成過氧亞硝酸鹽(Huie RE，Padmaja S.，NO與超氧化物的反應(yīng)，F(xiàn)reeRadic.Res.Commun.1993；18195-199；Saran M，Michel C，Bors W.，NO與O2-的反應(yīng)，對內(nèi)皮衍生的松弛固子(EDRF)作用的推斷，F(xiàn)reeRadic.Res.Commun.1990；10221-226)。已知過氧亞硝酸鹽引起組織損傷(Kooy NW，Royall JA，Ye YZ，Kelly DR，Beckman JS.，體內(nèi)過氧亞硝酸鹽的產(chǎn)生對人體急性肺損傷的證據(jù)，Am.J.Respir.Crit.CareMed.1995；1511250-1254；Beckman JS，Beckman TW，Chen J，MarshallPA，F(xiàn)reeman BA.，通過過氧亞硝酸鹽的表觀羥基產(chǎn)生來自氧化氮和超氧化物的內(nèi)皮損傷的推斷，Proc.Natl.Acad.Sci.美國1990；87；1620-1624.)和誘導(dǎo)氣道高響應(yīng)性(Sadeghi-Hashjin G，F(xiàn)olkerts G，HenricksPA，Verheyen AK，van der Linde HJ，van Ark I，Coene A，Nijkamp FP.，過氧亞硝酸鹽在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)豚鼠的氣道高響應(yīng)性，Am.J.Respir.Crit.Care Med.1996；1531697-1701)。
更具體地，發(fā)現(xiàn)當(dāng)形式為超氧化物陰離子清除劑的超氧化物陰離子清除劑與氧化氮供體結(jié)合使用時，可以增強(qiáng)氧化氮的松弛效果，或可使單獨使用氧化氮的降低效果得到逆轉(zhuǎn)。換言之，氣道狹窄的氧化氮治療的較差響應(yīng)或非響應(yīng)的問題似乎是由于氧化氮分子的失活。
關(guān)于在此方面的現(xiàn)有技術(shù)，例如可以參考如下文獻(xiàn)。
WO96/39409公開了氧化和/或還原超氧化物的化合物。該化合物可以與氧化物或氧化氮加合物一起給予。該化合物可用于治療哺乳動物、特別是人類的炎癥性紊亂。哮喘作為許多所列炎癥性紊亂中的一種被提及。然而，沒有關(guān)于氣道改進(jìn)擴(kuò)張效果的信息，即沒有提到支氣管哮喘。
超氧化物離子清除劑用于醫(yī)療目的的用途還公開于WO99/37616中。然而，公開的治療涉及與氧化應(yīng)激或內(nèi)皮功能障礙有關(guān)的疾病。此外，提到的效果是細(xì)胞內(nèi)的。換言之，分別在兩種用途之間存在種類的差異。因此，在WO99/37616中所列與哮喘有關(guān)的病情涉及與氧化應(yīng)激或內(nèi)皮功能障礙有關(guān)的病情，它們分別是氣道炎癥和血管功能障礙紊亂中的情況，而不涉及本發(fā)明中的氣道狹窄。本發(fā)明不依賴于任何內(nèi)皮功能障礙。效果似乎確實是上皮效果。此外，它通常是細(xì)胞外的。
超氧化物陰離子清除劑的內(nèi)皮依賴性活也在Medline、編號No.1999104010中提及。此外，該活性的公開僅與肺移植相關(guān)并且限于肺血管效果。
US5,747,026涉及向細(xì)胞和組織輸送抗氧化劑的方法。要輸送的化合物是pH-敏感性脂質(zhì)體。其中，據(jù)稱向組織輸送抗氧化劑的此方法可以防止血管痙攣和各種氧化劑的肺毒性并保持氧化氮的作用。提供的實驗數(shù)據(jù)僅顯示，在某些動物實驗中抗氧化劑自身產(chǎn)生血管松弛效果。沒有給出抗氧化劑會加強(qiáng)吸入的氧化氮對氣道的松弛效果的數(shù)據(jù)。
在Pediatr.Res.1999；45293A中，公開了在小羊模型中，rhSOD和吸入的氣態(tài)NO對肺高血壓效果的研究。然而，沒有提到對于氣道的任何效果。
發(fā)明詳述本發(fā)明的氧化氮和超氧化物陰離子清除劑的結(jié)合物可用于治療氣道中所有類型狹窄攻擊的藥物的制備。這樣的狹窄攻擊可以是氣道高反應(yīng)性、哮喘和引起氣道狹窄的其它病情的結(jié)果。
本發(fā)明的優(yōu)選實施方案在于治療與支氣管哮喘、特別是支氣管哮喘急性病情有關(guān)的氣道狹窄的藥物的制備中。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案表現(xiàn)為對于哺乳動物的治療，所述哺乳動物僅顯示對于氧氣氮(氣態(tài)或以供體的形式)吸入為非響應(yīng)性的。由于在采用吸入氧化氮治療的不同患者群中通常有大量非響應(yīng)者，此實施方案具有顯著的臨床重要性。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，以氣態(tài)、可吸入形式使用氧化氮。在治療中氣態(tài)氧化氮的吸入具有極大的優(yōu)勢，例如與非氣態(tài)氧化氮供體相比，這是由于氣體不含有要分散和輸送到呼吸道的粒子或液滴。氣體具有較長的自由擴(kuò)散通道，容易繞過梗阻(如狹窄的氣道)，并直接溶于組織中，而不引起嵌塞支氣管痙攣。在吸入之后，立即觀察到NO氣體對支氣管平滑肌緊張性的有益效果，使NO成為抗支氣管痙攣的有用第一防御劑，如需要，在它之后可以吸入更長效的制劑。
然而，如上所限定的，根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，以氧化氮供體、即通過釋放氧化氮而發(fā)揮作用的化合物的形式給予氧化氮。用于本發(fā)明的已知的氧化氮釋放化合物是亞硝基或亞硝?；衔铮鏢-亞硝基-N-乙酰青霉胺、S-亞硝基-L-半胱氨酸和亞硝基胍，其特征在于在生理條件如在肺中獲得的條件下自發(fā)地釋放的或從化合物轉(zhuǎn)移的-NO部分。其它化合物是其中NO是過渡金屬絡(luò)合物上的配體，并且在生理條件下本身容易釋放或從化合物轉(zhuǎn)移NO的化合物，如硝基氫氰酸鹽、NO-鐵氧化還原蛋白或NO-血紅素絡(luò)合物。另外的合適含氮化合物是由呼吸和/或血管系統(tǒng)的內(nèi)源酶代謝以產(chǎn)生NO自由基的化合物，如精氨酸、三硝酸甘油酯、亞硝酸異戊酯、無機(jī)亞硝酸鹽、疊氮化物和羥胺。這樣類型的氧化氮釋放化合物及其合成方法在本領(lǐng)域是公知的。優(yōu)選這樣的氧化氮供體化合物，該化合物以一定的方式釋放氧化氮，其僅影響氣道和肺導(dǎo)管。
用于本發(fā)明的氧化氮供體可以粉末(即精細(xì)分割的固體，或以純物質(zhì)提供或以與生物相容性載體粉末的混合物提供，或以與一種或多種其它的治療化合物的混合物提供)或以液體(即溶于或懸浮于生物相容性液體載體中，任選地與一種或多種其它的治療化合物混合)給予，并且通常可以噴霧的形式(優(yōu)選包括直徑小于10μm的粒子或液滴)吸入。適于吸入的載體液體和粉末通常用于傳統(tǒng)的哮喘吸入治療藥，并因此在本領(lǐng)域是公知的。最優(yōu)的劑量范圍可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)程序確定。
用于本發(fā)明的超氧化物陰離子清除劑可以是被確認(rèn)適于哺乳動物、特別是人類使用的任何化合物，它們可以按常規(guī)方式給予。所述超氧化物陰離子清除劑可以是具有去除超氧化物陰離子能力的酶。超氧化物岐化酶是公知的、廣泛分布的酶，它是用于本發(fā)明的優(yōu)選化合物。然而，超氧化物陰離子清除劑也可以是具有清除超氧化物陰離子能力的其它化合物。這樣的化合物的例子是抗氧化劑，如維生素E、維生素C、膽紅素、尿酸鹽、丁基化羥基甲苯、丁基化羥基苯甲醚、棓酸丙酯、乙氧基喹和痕量元素硒。
可以通過市售的吸入器裝置給予根據(jù)本發(fā)明使用的組分?？梢詮墓?yīng)商獲得壓縮NO氣體，典型地以200-2000ppm NO在純N2氣體中的混合物。該NO-N2氣體混合物可以1-100000nmol/min的量輸送到吸入氣體中，或可以與空氣、氧氣或另外的合適載氣或氣體混合物混合，一般達(dá)到該混合物1ppm-180ppm的濃度。對于在較長時間內(nèi)的吸入，一般采用1-40ppm的范圍，當(dāng)需要即刻的強(qiáng)的效果時，對于較短的時間的吸入，可以采用1-80ppm或1-180ppm。在最后所述情況下特別優(yōu)選的范圍分別是40-80ppm或40-180ppm。關(guān)于涉及NO吸入的進(jìn)一步詳細(xì)情況，可以參考現(xiàn)有技術(shù)，如EP 560 928 B1，在這一點上，它的公開內(nèi)容在此引入作為參考。
氧化氮和超氧化物陰離子清除劑可以任何次序順序給予，或它們可以同時給予，在后一種的情況下，來自分別來源的兩種組分同時或一起給予，或以包括所述氧化氮和所述超氧化物陰離子清除劑的組合物形式給予。
可以采用和NO相同的方式、即通過吸入給予超氧化物陰離子清除劑，但也可以通過用于藥物的其它常規(guī)給藥途徑給予。在這樣的途徑之中，可以是舌下、口服和直腸給藥、涂敷到上皮表面上和注射，其可以是皮下注射、肌內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。然而，優(yōu)選通過吸入給予超氧化物陰離子清除劑。因此，它可以粉末(即，精細(xì)分割的固體，或以純物質(zhì)提供或以與生物相容性載體粉末的混合物提供，或以與一種或多種其它的治療化合物的混合物提供)或以液體(即溶于或懸浮于生物相容性液體載體中，任選地與一種或多種其它的治療化合物混合)給予，并且通?？梢試婌F的形式(優(yōu)選包括直徑小于10μm的粒子或液滴)吸入。適于吸入的載體液體和粉末通常用于傳統(tǒng)的哮喘吸入治療藥，因此在本領(lǐng)域是公知的。
根據(jù)其中使用的化合物的類型和給藥途徑，以治療有效量、如容易由熟練技術(shù)人員確定的量使用超氧化物陰離子清除劑。正如應(yīng)當(dāng)對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的那樣，在此方面以及通常在說明書和中的術(shù)語“治療”包括預(yù)防性治療以及確定病情的治療。此外，盡管一般在此具體情況下，只要超氧化物陰離子清除劑逆轉(zhuǎn)了當(dāng)僅使用氧化氮時獲得的負(fù)面效果或增強(qiáng)單獨使用氧化氮的效果，它就是治療有效的，“治療有效的”是在此技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)通常的意義上被采用的，如在以上提到的EP 560 928 B1中定義的那樣。然而，作為指導(dǎo)，對于超氧化物岐化酶，有效劑量范圍例如可以是1 000-50 000單位/kg體重(U/kg)，5000-15 000U/kg是優(yōu)選的范圍，并且8 000-12 000U/kg是特別優(yōu)選的。對于其它超氧化物陰離子清除劑，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過實驗方式容易地確定相似的清除效果。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了一種治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄的方法。該方法包括通過吸入，向需要這樣治療的哺乳動物給予與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的氧化氮(NO)，所述結(jié)合以治療有效量進(jìn)行以達(dá)到該氣道狹窄的松弛。
至于該方法的具體和優(yōu)選實施方案，可以參見與本發(fā)明用途有關(guān)的已經(jīng)描述過的那些具體和優(yōu)選實施方案。
最后，根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供了一種用于治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄的藥物制劑，該制劑包括與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的氧化氮(NO)，該氧化氮和該超氧化物陰離子清除劑以治療有效量存在，以達(dá)到該氣道狹窄的松弛。
關(guān)于該制劑的具體和優(yōu)選實施方案，也參見本發(fā)明用途中所述的具體和優(yōu)選實施方案。
附圖簡述

圖1在將腔內(nèi)容積滲克分子濃度增加到450mOsm之后，采用氧化氮供體硝基氫氰酸鈉(SNP)的卡巴可(carbachol)-收縮的(CCh)氣管的松弛。在實驗之前和期間采用過高容積滲克分子濃度處理對照組，以及在腔外側(cè)采用100u/ml超氧化物岐化酶(SOD)預(yù)處理的組。數(shù)值是CCh收縮氣管的松弛百分比，以平均值±s.e.平均值計。*顯著不同于CCh。
通過以下非限制性實施例說明本發(fā)明。
實施例1
通過采用氯化鈉使上皮側(cè)容積滲克分子濃度升高之后，利用氧化氮供體硝基氫氰酸鈉(SNP)，采用體外豚鼠氣管灌注方法研究超氧化物岐化酶(SOD)、超氧化物陰離子清除劑對氣道松弛的效果。
材料和方法灌注的氣管制劑試驗方案由關(guān)于動物試驗的地區(qū)倫理委員會批準(zhǔn)。給予雄性DunkinHartley豚鼠(500-800g)過量戊巴比妥(腹膜內(nèi)0.1mg kg-1體重)。將氣管快速解剖剝離結(jié)締組織，并除去脂肪和血管，安裝在不銹鋼灌注臺座上。使用的灌注體系是改進(jìn)版的Fedan & Frazer’s體系(Fedan JS，F(xiàn)razerDG.，上皮組織對豚鼠分離的、灌注的氣管對于支氣管活性藥物反應(yīng)性的影響.J.Pharmacol.Exp.Ther.1992；262741-750)，早些時候由Munakata描述(Munakata M，Mitzner W，Menkes HA.滲透刺激誘導(dǎo)豚鼠氣管上皮依賴性松弛.J.Appl.Physiol.1988；64466-471)。在從每一端將中心固定側(cè)孔導(dǎo)管插入氣管腔之后，將氣管拉伸到它的原位長度，并且垂直放置在包含Krebs-Henseleit緩沖劑的25ml腔外器官浴中。將在氣管入口端即近端的導(dǎo)管連接到示差壓力轉(zhuǎn)換器(differentialpressure transducer)(P300D，Validyne Engineering Cooperation，CA，USA)的一側(cè)，并將在氣管遠(yuǎn)端的出口導(dǎo)管連接到轉(zhuǎn)換器的另一側(cè)。從25ml管腔內(nèi)浴，以26ml min-1的速率，在再循環(huán)的回路中，將Krebs-Henseleit緩沖劑灌注到氣管的內(nèi)部。將在管腔外和管腔內(nèi)浴中的Krebs-Henseleit緩沖劑都保持在37℃，并采用95％O2和5％CO2的氣體混合物發(fā)泡。將透壁壓調(diào)節(jié)到相應(yīng)于基線處的零。使用適應(yīng)于該系統(tǒng)的特別設(shè)計程序(由瑞典Lund，Astra Draco友情捐贈)，通過計算機(jī)(LabView 3.0軟件，NationalInstruments Austin，TX，USA)記錄氣管的響應(yīng)。
響應(yīng)用近端和遠(yuǎn)端記錄部位之間的壓差(ΔP，cmH2O)來表示。
溶液和試劑改進(jìn)的等滲Krebs-Henseleit緩沖劑的容積滲克分子濃度為290mOsm，并且由如下物質(zhì)組成(單位為mM)NaCl，117；NaHCO3，25；K2HPO4，1.2；MgSO4，1.2；KCl，4.7；CaCl2，2.5和葡萄糖，1.03(pH7.4，37℃)。通過將NaCl濃度增加到203mM而形成高滲緩沖劑，它將容積滲克分子濃度增加到450mOsm。將卡巴可(Sigma Chemical Co，MO，USA)溶于鹽水。將氧化氮供體硝基氫氰酸鈉(SNP，Sigma)和超氧化物岐化酶(SOD，來自牛肝，Sigma)溶于Krebs-Henseleit緩沖劑中。使SNP避光直到使用。
實驗方案當(dāng)管腔內(nèi)和管腔外溶液都替換為新鮮緩沖劑時，所有的方案以60-75min的平衡時間、每15min一次洗滌開始。因此對氣管采用如下方案之一1)對照(n＝6)。管腔內(nèi)和管腔外緩沖劑是等滲的并在管腔外施加1μM卡巴可(CCh)使氣管收縮，相應(yīng)于50％最大收縮(如在較早的試驗中確定的那樣，數(shù)據(jù)未顯示)。通過將氧化氮供體SNP 3mM加入到管腔內(nèi)浴中，松弛CCh-收縮的氣管。在60min沖洗時間之后，其中每15min采用新鮮緩沖劑替換管腔內(nèi)和管腔外緩沖劑，重復(fù)程序。
2)高滲緩沖劑(n＝6)。通過管腔外施加1μM卡巴可，將氣管收到最大收縮的50％。通過將氧化氮供體SNP 3mM加入到管腔內(nèi)浴中，松弛氣管。在60min沖洗時間之后，在第二次卡巴可收縮之前10min采用高滲緩沖劑替換管腔內(nèi)緩沖劑，然后在高滲透條件期間，將SNP施加到氣管上。
3)超氧化物岐化酶SOD(n＝5)。如對照組那樣處理氣管，該方案有一個附加部分，在采用CCh和SNP的第二次激發(fā)之前10min，將SOD(100單位/ml)施加到氣管的管腔外側(cè)。
4)高滲緩沖劑和SOD。使用酶過氧化物岐化酶(SOD)，研究超氧化物陰離子對SNP松弛效果的影響。在第一次使用3mM SNP松弛CCh-收縮的氣管對照攻擊之后，隨后進(jìn)行60min的沖洗，在將管腔內(nèi)緩沖劑改變成高滲緩沖劑之前10min，將100u/ml的SOD施加到氣管的管腔外側(cè)(n＝8)。其后，用1μM CCh收縮氣管并研究3mM SNP的效果。
統(tǒng)計采用統(tǒng)計軟件(5.0版，StatSoft.Inc.Tulsa，OK，美國)進(jìn)行統(tǒng)計分析。合適時，采用Wilcoxon非參數(shù)配對檢驗和Mann-Whitney U-檢驗分析結(jié)果。對于組間分析，使用Kruskal-Wallis ANOVA(變量分析)。結(jié)果表示為平均值±s.e.平均值。認(rèn)為P＜0.05的結(jié)果是顯著的。
結(jié)果在所研究的不同組中，初始CCh誘導(dǎo)的氣管收縮具有相同的等級(ns)，并且所有的組在隨后的SNP(p＜0.05)松弛達(dá)到相同的水平(ns)。這個對照是用來表明所有的氣管是有活力的并且具有相同的初始先決條件。
1)對照。CCh產(chǎn)生1.49±0.30cmH2O的氣管收縮，隨后暴露于SNP下，氣道松弛為53.1±6％，即達(dá)到0.68±0.11cmH2O(見圖1)。
2)高滲緩沖劑。在將管腔內(nèi)緩沖劑容積滲克分子濃度增加到450mOSM之后，CCh收縮比正常條件下小(0.83±0.17cmH2O，p＜0.05)。當(dāng)氣管進(jìn)行管腔內(nèi)過高容積滲克分子濃度處理時，SNP對CCH-收縮的氣管松弛為31±7％(見圖1)。與等滲對照條件下相比(參見對照組，p＜0.05)，其百分比降低顯著更小(見圖1)。
3)SOD。SOD對基線緊張性沒有影響，并且在CCh收縮方面(SOD處理的1.36±0.15cmH2O；未處理的見以上1)對照)或SNP松弛(SOD處理的57±12％；未處理的見以上1)對照)方面，SOD處理的氣管和未處理的氣管之間沒有差異(見圖1)。
4)高滲緩沖劑和SOD。在將管腔內(nèi)側(cè)進(jìn)行過高容積滲克分子濃度處理之前，在采用SOD預(yù)處理的氣管中，SNP將氣管松弛46±5％，從1.67±0.29到0.92±0.19cmH2O。此松弛與在等滲條件下SOD預(yù)處理的氣管的松弛沒有什么差異，并且與采用高滲緩沖劑處理、但沒有采用SOD預(yù)處理的氣管相比，其具有顯著更大的松弛(p＜0.05)(見圖1)。
實施例2也已經(jīng)在體內(nèi)試驗中重現(xiàn)器官灌注浴中的結(jié)果。因此，通過氟阿尼酮和芬太尼檸檬酸鹽(fentanyl citrate)的肌內(nèi)注射和安定的靜脈內(nèi)注射將兔子麻醉，并采用泮庫溴銨將兔子麻痹。將它們插入管子并采用伺服通風(fēng)機(jī)(servo-ventilator)(Siemens900)通風(fēng)。吸入的氧氣分值(fraction)是0.5。將動物分成四組1/乙酰甲基膽堿(MCh)組，暴露于1mg MCh/ml的氣道誘發(fā)下；2/NO-MCh組，其中在MCh激發(fā)之前開始吸入80ppm NO并在試驗的剩余部分保持此狀態(tài)；3/高滲生理鹽水(HS)-NO-MCh組，其中將高滲生理鹽水(3.6％)噴霧到氣道中，隨后吸入NO并進(jìn)行MCh攻擊；和4/SOD-HS-NO-MCh組，其中在HS噴霧和NO吸入之前，噴霧8000U/kg的SOD，隨后進(jìn)行MCh攻擊。
計算每一組在基線處及在MCh攻擊之后從氣道壓力和氣體流量記錄值計算得到的呼吸阻力測量值。
結(jié)果 討論因此，可以看到兔子對MCh攻擊的強(qiáng)的氣道狹窄產(chǎn)生反應(yīng)，阻力增加三倍(組1)。NO吸入防止這樣的增加(組2)(看到輕微，不顯著的增加)。同樣，向氣道中噴霧HS完全消除了NO吸入的效果(組3)。因此，阻力的增加與在第一組僅暴露于MCh的具有相同的等級。最后，在通過噴霧接收SOD的組中，盡管在給予高滲生理鹽水之后給予NO，但阻力的增加是遲鈍的(組4)。因此，阻力的增加僅是在暴露于高滲生理鹽水但沒有SOD的組的數(shù)值的一半。
較早已經(jīng)研究了對于吸入氧化氮的非響應(yīng)者現(xiàn)象問題。其顯示在氣道上皮側(cè)的過高容積滲克分子濃度減弱了吸入氧化氮的效果(Hogman M，Hjoberg J，Hedenstierna G.，增加的氣道容積滲克分子濃度抑制氧化氮在兔子中的作用.Eur.Respir.J.1998；121313-1317)，并且這種情況可能是由于氧化氮分子的失活(Hjoberg J，Hogman M，Hedenstierna G.，過高容積滲克分子濃度降低了氧化氮供體在豚鼠氣管中的松弛效力，Br.J.Pharmacol.1999；127391-396)。根據(jù)本發(fā)明實施例發(fā)現(xiàn)，防止來自接受增加的容積滲克分子濃度處理的豚鼠氣管的超氧化物在上皮側(cè)的產(chǎn)生，將通過氧化氮供體硝基氫氰酸鈉增加預(yù)收縮氣管的松弛。
權(quán)利要求
1.與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的形式為氣態(tài)氧化氮或氧化氮供體的可吸入氧化氮(NO)用于制備治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄藥物的用途，所述結(jié)合以治療有效量進(jìn)行以達(dá)到所述氣道狹窄的松弛。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物是可吸入藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任意一項的用途，其中所述氣道狹窄是氣道反應(yīng)過度或哮喘的結(jié)果。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中所述氣道狹窄與支氣管哮喘有關(guān)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述氣道狹窄與支氣管哮喘的急性病情有關(guān)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述氣道狹窄與哮喘連續(xù)狀態(tài)有關(guān)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項的用途，其中所述哺乳動物僅是氧化氮或氧化氮供體吸入的非響應(yīng)者。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項的用途，其中所述制備涉及用于所述氧化氮和所述超氧化物陰離子清除劑以任何次序順序給藥的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項的用途，其中所述藥物是組合物的形式存在，所述組合物包括用于它們同時給藥的所述氧化氮和所述超氧化物陰離子清除劑。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項的用途，其中所述超氧化物陰離子清除劑選自具有除去超氧化物陰離子能力的酶和抗氧化劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中超氧化物陰離子清除劑是超氧化物岐化酶。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中超氧化物岐化酶的劑量為1 000-50000U/kg，優(yōu)選5 000-15 000U/kg并且最優(yōu)選8 000-12 000U/kg。
13.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中超氧化物陰離子清除劑選自維生素E、維生素C、膽紅素、尿酸鹽、丁基化羥基甲苯、丁基化苯甲醚、棓酸丙酯、乙氧基喹和硒。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項的用途，其中NO在所述藥物中的存在量為1-100 000nmol/min。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項的用途，其中要吸入的NO濃度為1-180ppm，優(yōu)選1-80ppm，特別是1-40ppm，所述NO存在于載氣或氣體混合物中。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項的用途，其中所述氧化氮供體選自S-亞硝基-N-乙酰青霉胺、S-亞硝基半胱氨酸、硝基氫氰酸鹽、亞硝基胍、三硝酸甘酸酯、亞硝酸異戊酯、無機(jī)亞硝酸鹽、疊氮化物和羥胺。
17.治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄的方法，所述方法包括通過吸入，給予需要這樣治療的哺乳動物與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的、形式為氣體氧化氮或氧化氮供體的氧化氮(NO)，所述治療有效量進(jìn)行以達(dá)到所述氣道狹窄的松弛。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中也通過吸入給予所述超氧化物陰離子清除劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求17和18任意中任一項的方法，其中所述氣道狹窄是氣道反應(yīng)過度或哮喘的結(jié)果。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述氣道狹窄與支氣管哮喘、特別是哮喘連續(xù)狀態(tài)或支氣管哮喘的急性病情有關(guān)。
21.根據(jù)權(quán)利要求17-20任意一項的方法，其中所述哺乳動物僅是氧化氮或氧化氮吸入的非響應(yīng)者。
22.根據(jù)權(quán)利要求17-21任意一項的方法，其中以任何次序順序給予所述氧化氮和所述超氧化物陰離子清除劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求17-21任意一項的方法，其中同時給予所述氧化氮和所述超氧化物陰離子清除劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求17-23任意一項的方法，其中所述超氧化物陰離子清除劑選自具有除去超氧化物陰離子能力的酶和抗氧化劑，特別是維生素E、維生素C、膽紅素、尿酸鹽、丁基化羥基甲苯、丁基化苯甲醚、棓酸丙酯、乙氧基喹和硒。
25.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中超氧化物陰離子清除劑是超氧化物岐化酶。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中超氧化物岐化酶的劑量為1000-50000U/kg，優(yōu)選5 000-15 000U/kg并且最優(yōu)選8 000-12 000U/kg。
27.根據(jù)權(quán)利要求17-26任意一項的方法，其中所述吸入的NO治療量是1-100 000nmol/min或1-180ppm，優(yōu)選1-80ppm，特別是1-40ppm，所述NO存在于載氣或氣體混合物中。
28.根據(jù)權(quán)利要求17-27任意一項的方法，其中所述氧化氮供體選自S-亞硝基-N-乙酰青霉胺、S-亞硝基半胱氨酸、硝基氫氰酸鹽、亞硝基胍、三硝酸甘酸酯、亞硝酸異戊酯、無機(jī)亞硝酸鹽、疊氮化物和羥胺。
29.用于治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄的藥物制劑，所述制劑包括與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的、形式為氣態(tài)氧化氮或氧化氮供體的氧化氮(NO)，所述氧化氮和所述超氧化物陰離子清除劑以治療有效量存在，以達(dá)到所述氣道狹窄的松弛。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的藥物制劑用于權(quán)利要求2-16任意一項中定義的用途。
全文摘要
與超氧化物陰離子清除劑結(jié)合的可吸入氧化氮(NO)用于制備治療哺乳動物、特別是人類氣道狹窄藥物的用途,所述結(jié)合治療以有效量進(jìn)行以達(dá)到該氣道狹窄的松弛。用于治療氣道狹窄的方法和藥物制劑,同時采用上述提及的結(jié)合。
文檔編號A61K31/4015GK1387441SQ0081528
公開日2002年12月25日 申請日期2000年11月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月3日
發(fā)明者J·約伯格, G·赫登斯蒂爾納, M·霍格曼 申請人:Aga公司