專利名稱：柳珊瑚酸的制藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及柳珊瑚酸在制備用于改善臨床學(xué)習(xí)記憶障礙以及拮抗有機(jī)磷毒性的藥物中的應(yīng)用。
珊瑚是海洋腔腸動(dòng)物之一，種類繁多。珊瑚作為藥用在祖國醫(yī)藥文獻(xiàn)《唐本草》，《醫(yī)林篡要》，《古方選注》，《本草拾遺》和《本草綱目》中都有記載。二十世紀(jì)六十年代以來，對(duì)珊瑚化學(xué)成分的研究形成一股熱潮。從珊瑚中發(fā)現(xiàn)了一大批結(jié)構(gòu)獨(dú)特的化合物，有萜類，甾醇，以及含氮化合物等，其中很多具各種生理活性，如抗菌，抗腫瘤，心血管，鎮(zhèn)痛，細(xì)胞毒性和神經(jīng)活性等。1968年，從柳珊瑚中分離得到了前列腺素，這就是一個(gè)具有重大意義的發(fā)現(xiàn)。1982年，發(fā)明人從南海側(cè)扁軟柳珊瑚(Subergorgiasp.)的提取物中分離得到一個(gè)結(jié)構(gòu)新穎的化合物柳珊瑚酸(Subergorgia acid，以下簡稱為SA)，其具有三環(huán)十一烷倍半萜骨架(結(jié)構(gòu)如下式所示)。經(jīng)初步藥理實(shí)驗(yàn)證明SA為可逆性膽堿脂酶抑制劑。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還表明，SA具抗心率失常，對(duì)心肌缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用。 本發(fā)明的目的在于提供SA作為新的改善臨床學(xué)習(xí)記憶障礙藥物及拮抗有機(jī)磷毒劑藥物的用途。
本發(fā)明所說的柳珊瑚酸(SA)可通過以下方法制備a．將曬干柳珊瑚切碎，用乙酸乙酯萃取，濃縮乙酸乙酯萃取液；b．濃縮物先經(jīng)硅膠吸附層析，不同比例的石油醚-乙酸乙酯洗脫，得到SA粗品，然后再經(jīng)Al2O3吸附層析，進(jìn)一步純化，得到無色透明的SA的結(jié)晶。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明1．SA對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用。分別用東莨菪堿(Scop)和缺氧引起小鼠學(xué)習(xí)、記憶障礙，分別給予實(shí)驗(yàn)組腹腔注射及口服不同劑量的SA，然后利用小鼠跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在給藥前后的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。用卡方分析處理結(jié)果。觀察表明SA對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用，該作用并有量效關(guān)系。
2．SA有明顯拮抗丙氟磷毒性作用。小鼠實(shí)驗(yàn)表明，用22,19,16mg/kg體重的SA劑量可減輕丙氟磷毒性癥狀及降低死亡率，應(yīng)用22及16mg/kg體重SA可使丙氟磷(8mg/kg體重)死亡率由40％降為零。用16mg/kg體重劑量可使丙氟磷(13.17mg/kg體重)死亡率由100％降低至20％。而用19mg/kg體重SA則可使丙氟磷死亡率由100％降低至10％。如果先用丙氟磷染毒，再用SA19mg/kg體重，亦可使死亡率降低。SA拮抗丙氟磷毒性效果明顯，并與丙氟磷染毒量大小及SA用量大小有關(guān)。在丙氟磷染毒劑量較小時(shí)，效果更佳。在致死丙氟磷染毒劑量時(shí)，SA用量較大，效果較好。如若已有丙氟磷中毒，立即用SA亦有一定效果?？裳舆t死亡時(shí)間，降低死亡率，可為臨床上采用搶救措施爭取時(shí)間。
3．急性毒性實(shí)驗(yàn)(小鼠)a．SA腹腔注射，LD5032.66mg/kg；b．SA口服，LD5050.23mg/kg。
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，無論口服或腹腔注射SA均能改善因缺氧或注射東莨菪堿引起小鼠的學(xué)習(xí)、記憶障礙，并且SA有明顯的拮抗丙氟磷毒性作用。提示該化合物具有這方面的藥用用途。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1SA的制備a．六月份采自海南三亞市西島海域的側(cè)扁軟柳珊瑚(Subergorgia sp.)，曬干，切碎，用乙酸乙酯萃取3次，濃縮乙酸乙酯萃取液；b．濃縮物先經(jīng)硅膠吸附層析，以石油醚∶乙酸乙酯=5％-100％為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得SA粗品，然后再經(jīng)Al2O3吸附層析，進(jìn)一步純化，得到無色透明的SA結(jié)晶，m.p.178～180℃。約占柳珊瑚干重的1.1‰。
SA的試驗(yàn)數(shù)據(jù)熔點(diǎn)測定采用北京X4型顯微熔點(diǎn)儀，m.p.178～180℃。
旋光測定采用WXG-4型旋光儀，[α]D-23°(c.0.7，CHCl3)。
元素分析采用PERKIN-ELMER 240C:C72.45％,H8.16％。
UV采用SHIMAZU UV-240，最大吸收峰λmax220nm。
IR(NICOLET 5DX-FTIR,KBr,cm-1):3300-2500,1735,1690,1650。
MS(采用VGZAB儀)m/e:248(M),230,202,178,133,119,91。
1HNMR(INOVA-500MHz,CDCl3,TMS,ppm):8.5,6.43(d),2.95(q),1.22(s),1.18(d),1.12(d)。
13CNMR(INOVA-500MHz,CDCl3,TMS,ppm):217.83(s),169.77(s),152.23(d),136.77(s),68.63(s),62.77(d),61.81(s),51.78(d),49.88(t),38.34(t),33.48(d),28.39(t),23.41(q),19.91(q),17.72(q)。
實(shí)施例2SA對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用實(shí)驗(yàn)材料a．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中山醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物科提供NIH純種小白鼠，體重20±2g，雌雄兼用；b．東莨菪堿廣州僑光制藥廠生產(chǎn)，針劑；c．SA白色粉末，用生理鹽水配置成各種所需的濃度。
實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果(一)東茛菪堿模型把小鼠分為5組，每組10只，分為正常組模型組給藥1組給藥2組和給藥3組。正常組注射同等體積的NS，模型組腹腔注射東莨菪堿，劑量為1mg/kg，在訓(xùn)練前20分鐘注射。給藥組1、2、3組除給予模型組同劑量的東莨菪堿腹腔注射外，還分別給予不同劑量的SA口服，劑量分別為0.82mg/kg、1.64mg/kg和3.29mg/kg，然后利用小鼠跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在給藥前后的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。用卡方分析處理結(jié)果(如表1所示)。
把小鼠分為5組，每組10只，分為正常組模型組給藥1組給藥2組和給藥3組。正常組注射同等體積的NS，模型組腹腔注射東莨菪堿，劑量為1mg/kg，在訓(xùn)練前20分鐘注射。給藥組1、2、3組除給予模型組同劑量的東莨菪堿腹腔注射外，還分別給予不同劑量的SA腹腔注射，劑量分別是0.55mg/kg、1.09mg/kg和2.19mg/kg，然后利用小鼠跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在給藥前后的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。用卡方分析處理結(jié)果(如表2所示)。
結(jié)果顯示，口服或腹腔注射SA可以改善注射東莨菪堿引起的小鼠記憶功能障礙，該作用有量效關(guān)系。表1東莨菪堿(Scop)抑制小白鼠被動(dòng)回避反應(yīng)及SA(po)對(duì)抗作用
低劑量0.82mg/kg(1/40LD50)中劑量1.64mg/kg(1/20LD50)高劑量3.29mg/kg(1/10LD50)表2東莨菪堿(Scop)抑制小白鼠被動(dòng)回避反應(yīng)及SA(ip)對(duì)抗作用
(二)小鼠缺氧模型把小鼠分為5組，每組10只，分為正常組模型組給藥1組給藥2組和給藥3組。利用小鼠跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在缺氧和給藥處理前的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。然后將模型組和各給藥組小鼠置于密閉的罐子里，通以96.2％N2和3.8％O2的混合氣體，至小鼠倒地意識(shí)喪失時(shí)立即取出小鼠，模型組口服同等體積的NS，給藥組1、2、3組分別給予不同劑量的SA口服，劑量分別是0.82mg/kg、1.64mg/kg和3.29mg/kg。缺氧與給藥處理每日一次，連續(xù)5天。正常組僅口服同等體積的NS，不經(jīng)缺氧處理。然后利用小鼠的跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在缺氧和給藥處理后的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。用卡方分析處理結(jié)果(如表3所示)。
把小鼠分為5組，每組10只，分為正常組模型組給藥1組給藥2組和給藥3組。利用小鼠跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在缺氧和給藥處理前的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。然后將模型組和各給藥組小鼠置于密閉的罐子里，通以96.2％N2和3.8％O2的混合氣體，至小鼠倒地意識(shí)喪失時(shí)立即取出小鼠，模型組注射同等體積的NS，給藥組1、2、3組分別給予不同劑量的SA腹腔注射，劑量分別是0.55mg/kg、1.09mg/kg和2.19mg/kg。缺氧與給藥處理每日一次，連續(xù)5天。正常組僅腹腔注射同等體積的NS，不經(jīng)缺氧處理。然后利用小鼠的跳臺(tái)模型和小鼠避暗模型測定各組小鼠在缺氧和給藥處理后的潛伏期和錯(cuò)誤數(shù)。用卡方分析處理結(jié)果(如表4所示)。
結(jié)果顯示，口服或腹腔注射SA可以改善缺氧引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙，該作用有量效關(guān)系。表3小鼠缺氧引起記憶障礙及SA(po)的對(duì)抗作用
表4小鼠缺氧引起記憶障礙及SA(ip)的對(duì)抗作用
實(shí)施例3 SA的丙氟磷毒性拮抗實(shí)驗(yàn)(一)實(shí)驗(yàn)材料及方法實(shí)驗(yàn)材料a．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中山醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物科提供的昆明種小白鼠，體重19-23及22-26克。隨機(jī)分組，每組10只；b．丙氟磷無色透明溶液，溶于精制花生油，配置成每ml0.8及1.317mg丙氟磷油溶液；c．SA白色粉末，用生理鹽水配置成1.618mg/ml,1.90mg/ml,2.20mg/ml溶液。
實(shí)驗(yàn)方法先按每10克小白鼠腹腔注射0.1ml已配置成不同濃度的SA溶液，5分鐘時(shí)，再腹腔注射丙氟磷(0.1ml/10g體重，已配置各濃度)，觀察注射后動(dòng)物的體征及48小時(shí)死亡率。
(二)結(jié)果a．丙氟磷毒性實(shí)驗(yàn)10只雄性小白鼠腹腔注射8mg/kg丙氟磷后，即出現(xiàn)活動(dòng)減少，10分鐘出現(xiàn)抽搐，流涎，管狀尾，突眼，側(cè)臥，呼吸困難。48小時(shí)死亡數(shù)4只，死亡率40％。
另用丙氟磷13.17ng/kg體重，腹腔注射，除出現(xiàn)上述體征外，在注射后1小時(shí)內(nèi)死亡6只，48小時(shí)全部死亡，死亡率100％。
b．SA拮抗丙氟磷毒性實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行5組實(shí)驗(yàn)。每組10只小鼠，在腹腔注入SA22mg/kg體重后，立即出現(xiàn)活動(dòng)減少，分泌物增多，痙攣等癥狀。5分鐘時(shí)腹腔注入丙氟磷8mg/kg體重，癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，48小時(shí)內(nèi)無死亡。若腹腔注入SA為16mg/kg體重時(shí)，癥狀不明顯，在5分鐘時(shí)有細(xì)小震顫。注入丙氟磷8mg/kg體重后，震顫消失，48小時(shí)無死亡。腹腔注入SA19mg/kg體重，然后再腹腔注入丙氟磷13.17mg/kg，死亡率為10％；若先注入13.17mg/kg體重的丙氟磷，立即注入SA19mg/kg體重，則死亡率40％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表5。
表5SA拮抗丙氟磷毒性
Δ先注入丙氟磷，立即注入SA。*P＜0.01。**P＜0.005。
從以上毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，用22,19,16mg/kg體重的SA劑量可減輕丙氟磷毒性癥狀及降低死亡率，應(yīng)用22及16mg/kg體重SA可使丙氟磷(8mg/kg體重)死亡率由40％降為零。用16mg/kg體重劑量可使丙氟磷(13.17mg/kg體重)死亡率由100％降低至20％。而用19mg/kg體重SA則可使丙氟磷死亡率由100％降低至10％。如果先用丙氟磷染毒，再用SA19mg/kg體重，亦可使死亡率降低。由此可見，SA拮抗丙氟磷毒性效果明顯，并與丙氟磷染毒量大小及SA用量大小有關(guān)。在丙氟磷染毒劑量較小時(shí)，效果更佳。在致死丙氟磷染毒劑量時(shí)，SA用量較大，效果較好。如若已有丙氟磷中毒，立即用SA亦有一定效果?？裳舆t死亡時(shí)間，降低死亡率，可為臨床上采用搶救措施爭取時(shí)間。
實(shí)施例4急性毒性實(shí)驗(yàn)急性毒性實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物為純種小白鼠，雌雄兼用，腹腔注射或口服。小鼠中毒癥狀為劇烈抽搐、振顫、腹部蠕動(dòng)、流口水、吐泡沫、平衡失調(diào)、嚴(yán)重的萎靡、癱瘓而死亡。
a．SA腹腔注射LD5032.66mg/kg；b．SA口服LD5050.23mg/kg。
權(quán)利要求
1．柳珊瑚酸在制備用于改善臨床學(xué)習(xí)記憶障礙的藥物中的應(yīng)用。
2．柳珊瑚酸在制備用于拮抗有機(jī)磷毒性的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及柳珊瑚酸在制備用于改善學(xué)習(xí)記憶障礙及拮抗有機(jī)磷毒性的藥物中的應(yīng)用。經(jīng)實(shí)驗(yàn)顯示,口服或注射柳珊瑚酸能改善小鼠因東莨菪堿或缺氧引起的學(xué)習(xí)記憶障礙,該作用并有量效關(guān)系。柳珊瑚酸有明顯拮抗有機(jī)磷毒劑丙氟磷毒性作用,先注入柳珊瑚酸或先用丙氟磷染毒,均能降低小鼠死亡率或延遲死亡時(shí)間,拮抗效果與丙氟磷染毒量及柳珊瑚酸用量有關(guān)。
文檔編號(hào)A61P39/00GK1319392SQ01107458
公開日2001年10月31日 申請(qǐng)日期2001年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月16日
發(fā)明者巫中德, 林永成, 陳汝筑, 李厚金 申請(qǐng)人:中山大學(xué)