專利名稱：具有抗心肌纖維化作用的黃芪皂甙甲的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥技術領域。具體涉及一種具有抗心肌纖維化作用的黃芪皂甙甲。
盡管黃芪對心血管的作用是肯定的，但就目前的研究而言，黃芪對心血管效應方面的藥效物質(zhì)是不清楚的。因此，有必要在現(xiàn)有的研究基礎上進行深入的研究，闡明黃芪在心血管疾病治療方面的藥效物質(zhì)基礎和作用機制。
本發(fā)明提供了一種具有抗心肌纖維化作用的黃芪皂甙甲。
具有下列結構式 黃芪皂甙甲(Astragaloside IV)MW＝802本發(fā)明的黃芪皂甙甲的HPLC圖譜見

圖11。
本發(fā)明的黃芪皂甙甲的抗心肌纖維化作用的研究結果如下實驗對象為Sprague-Dawley種大鼠，應用0.6mm直徑的銀夾狹窄腹主動脈，造成負荷過載的心肌肥厚模型。造模后1個半月后，開始給藥，時間1個半月，實驗周期3個月。實驗分為對照組(假手術組)、模型組、西藥(雷米普利，Ramipril)對照組(口服雷米普利，1mg/Kg，0.33mg/ml)、黃芪皂甙甲(Astragaloside IV，AS-IV)組(口服和腹腔注射0.3mg/Kg，0.1mg/ml)。實驗指標為血液動力學、左室重量指數(shù)、心肌形態(tài)學(電鏡和光鏡)和循環(huán)內(nèi)分泌(內(nèi)皮素、血管緊張素II、cAMP)。結果見表1-表6。
表1.AS-IV對心肌肥厚大鼠心肌重量指數(shù)的影響(x±s)組別 n 心肌重量指數(shù)(mg/100g)假手術組122.01±0.08**模型組 262.79±0.12AS-IV口服組 202.43±0.15*AS-IV腹腔注射組 152.34±0.09**雷米普利組 122.14±0.09**與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01
表2.AS-IV對心肌肥厚大鼠外周動脈血壓的影響(x±s)動脈血壓(mmHg)組別n收縮壓舒張壓假手術組 12145±11.8 97±12.9模型組26171±18.9 121±17.9AS-IV口服組 20146±14.8*87±18.5**AS-IV腹腔注射組 15161±26.8 107±22.3雷米普利組12129±17.4**85±15.0**與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01表3.AS-IV對心肌肥厚大鼠心臟血流動力學的影響(x±s)心室內(nèi)壓 左室舒張末壓心室內(nèi)壓微分心率組別 n (mmHg) (mmHg) (mmHg/s) (BPM)LVSP LVDEP+dp/dtmax-dp/dtminHR假手術組 12173±16.6 2.8±1.03 6780±15114180±873 380±31.7模型組 26175±19.0 1.5±0.63 6250±16453970±789 427±23.9AS-IV口服組20172±20.7 3.2±1.26*6810±16023692±664 406±28.6AS-IV腹腔注射組15185±27.8 2.5±1.38 8107±1283*4290±1117407±34.2雷米普利組 12158±20.2 2.8±0.85*6750±21743274±612 373±14.9與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01表4.AS-IV對心肌肥厚大鼠形態(tài)學的影響(x±s)光鏡觀察組別 n 電鏡觀察(纖維化記分*)無線粒體腫脹，無缺血帶，無心肌假手術組 8 0.25(2/8)纖維化線粒體腫脹，有明顯缺血帶，心肌模型組8 1.63(13/8)纖維化較明顯線粒體輕度腫脹，局部有缺血帶，AS-IV口服組 6 1.00(6/6)心肌有纖維化存在線粒體輕度腫脹，局部有缺血帶，AS-IV腹腔注射組 6 0.33(2/6)心肌纖維化有改善線粒體輕度腫脹，缺血帶明顯改善，雷米普利組8 0.00(0/8)心肌較少有纖維化存在*纖維化記分方法纖維化占高倍視野的1/3以下記1分；纖維化占高倍視野的1/3以上記2分(2/3以下)；纖維化占高倍視野的2/3以上記3分；高倍視野下基本無纖維化記0分表5.AS-IV對心肌肥厚大鼠ET、cAMP的影響(x±s)心肌組織cAMP組別n 血漿ET(pg/L)(pmol/mg)假手術組5 155±22.2507±82.8模型組 6 243±49.7354±77.9AS-IV口服組 5 232±43.2363±77.8AS-IV腹腔注射組 5 229±42.5380±59.4雷米普利組 5 239±77.2355±48.9ELISA法測定，每個樣品重復2次表6.AS-IV對心肌肥厚大鼠血管緊張素(AngII)的影響(x±s)Ang II組別n血漿(pmol/L)心肌組織(pmol/mg)假手術組532±6.2**122±28.0**模型組 669±16.6 349±66.6AS-IV口服組 559±7.1 292±22.6AS-IV腹腔注射組 549±6.2*245±28.4*雷米普利組口服組531±9.4**130±20.1**與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01ELISA法測定，每個樣品測1次這些結果表明，黃芪皂甙甲能明顯降低左室重量指數(shù)，減輕心肌肥厚；降低外周動脈血壓和左室舒張末壓，改善心臟舒張功能；改善心衰時的心肌線粒體腫脹、減輕心肌纖維化；降低血漿和心肌組織中血管緊張素II的含量。本研究關鍵要解決的問題有4個方面。1.黃芪活性物質(zhì)I是否能減輕心衰大鼠左室重量指數(shù)(改善心肌重構)。2.是否能夠降低血壓；3.是否能夠降低體內(nèi)血管緊張素II的含量。4.對左室功能的改善。從目前的研究表明黃芪皂甙甲具有改善心衰大鼠以上各項指標的作用。進一步工作旨在說明黃芪皂甙甲是否抑制或拮抗體內(nèi)血管緊張素II受體、以及對心肌細胞和成纖維細胞的纖維化作用。
由于雷米普利類藥物在逆轉(zhuǎn)心肌肥厚(抗心肌纖維化)同時，會抑制粒細胞的生成、收縮腎血管以及長期使用造成心臟功能下降，限制了它的廣泛使用。而AS-IV都不會產(chǎn)生上述副作用。AS-IV除了具有抗心肌纖維化的作用外，同樣可能抑制肝纖維化、腎纖維化、肺纖維化等，所以AS-IV具有很大市場開發(fā)前景。
指標 單位數(shù)值體重(HW) 克(g)384左心重(LVW) 克(g)1.04左心重量指數(shù)(LVWI) 毫克/克(mg/g)2.11股動脈收縮壓(SBP 毫米汞柱(mmHg) 139股動脈舒張壓(DBP)毫米汞柱(mmHg) 78左室收縮壓(LVSP) 毫米汞柱(mmHg) 160左室舒張壓(LVDEP)毫米汞柱(mmHg) 2左室壓力微分最大值(+dp/dtmax) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 6720左室壓力微分最小值(-dp/dtmin) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 3890心率(BP) 次/分(BPM) 3842.心肌形態(tài)學變化2.1左室心肌病理切片(HE染色)見圖5無明顯異常變化，基本正常形態(tài)2.2左室心肌超微結構(電鏡)見圖6細胞輕度水腫，形態(tài)結構基本正常，間質(zhì)未見膠原原纖維增生。3.循環(huán)內(nèi)分泌指標指標 單位數(shù)值心肌環(huán)腺苷(cAMP) pmol/mg 388血漿內(nèi)皮素(ET) pg/L204心肌血管緊張素II(AngII)pmol/mg 134血漿血管緊張素II(AngII)pmol/L 32藥物組(AM-1口服組)大鼠1.心肌重量指數(shù)及血流動力學指標 單位 數(shù)值體重(HW) 克(g) 412左心重(LVW)克(g) 0.99左心重量指數(shù)(LVWI) 毫克/克(mg/g) 2.40股動脈收縮壓(SBP 毫米汞柱(mmHg)141股動脈舒張壓(DBP) 毫米汞柱(mmHg)79左室收縮壓(LVSP) 毫米汞柱(mmHg)158左室舒張壓(LVDEP) 毫米汞柱(mmHg)1.00左室壓力微分最大值(+dp/dtmax) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 6920左室壓力微分最小值(-dp/dtmin) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 2930心率(BP) 次/分(BPM)3812.心肌形態(tài)學變化2.1左室心肌病理切片(HE染色)見圖7局部少量纖維化灶。2.2左室心肌超微結構(電鏡)見圖8線粒體輕度腫脹，間質(zhì)膠原原纖維略多。3.循環(huán)內(nèi)分泌指標指標 單位數(shù)值心肌環(huán)腺苷(cAMP) pmol/mg 346血漿內(nèi)皮素(ET) pg/L231心肌血管緊張素II(AngII) pmol/mg 299血漿血管緊張素II(AngII) pmol/L 57藥物組-2(AM-1腹腔注射組)大鼠1.心肌重量指數(shù)及血流動力學指標 單位 數(shù)值體重(HW) 克(g) 382左心重(LVW) 克(g) 0.89左心重量指數(shù)(LVWI) 毫克/克(mg/g) 2.33股動脈收縮壓(SBP 毫米汞柱(mmHg) 151股動脈舒張壓(DBP)毫米汞柱(mmHg) 94左室收縮壓(LVSP) 毫米汞柱(mmHg) 180左室舒張壓(LVDEP)毫米汞柱(mmHg) 0.50左室壓力微分最大值(+dp/dtmax) 毫米汞柱/秒(mmHg/s)8100左室壓力微分最小值(-dp/dtmin) 毫米汞柱/秒(mmHg/s)4560心率(BP) 次/分(BPM) 4142.心肌形態(tài)學變化2.1左室心肌病理切片(HE染色)見圖9心肌細胞較纖細，余無明顯改變。2.2左室心肌超微結構(電鏡)見圖10形態(tài)結構大體正常，間質(zhì)未見膠原原纖維增生。3.循環(huán)內(nèi)分泌指標指標單位 數(shù)值心肌環(huán)腺苷(cAMP) pmol/mg366血漿內(nèi)皮素(ET)pg/L 225心肌血管緊張素II(AngII) pmol/mg254血漿血管緊張素II(AngII) pmol/L 48
權利要求
1.一種具有抗心肌纖維化作用的黃芪皂甙甲，其特征在于具有下列結構式 黃芪皂甙甲MW＝802
2.一種如權利要求1所述的黃芪皂甙甲在制備抗心肌纖維化作用的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明是具有抗心肌纖維化作用的黃芪皂甙甲，涉及中藥技術領域。本發(fā)明提供了中藥黃芪中的有效成分黃芪皂甙甲。該有效成分具有很好的抗心肌纖維化作用。
文檔編號A61P9/00GK1403470SQ01126609
公開日2003年3月19日 申請日期2001年8月31日 優(yōu)先權日2001年8月31日
發(fā)明者吳大正, 胡之壁, 周吉燕, 樊懿 申請人:上海中醫(yī)藥大學