專利名稱：復(fù)方丹參滴丸在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在抗氧化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
冠心病、心絞痛是我國的常見病。氧化壓力和高血壓是引起冠狀動脈損害，從而導(dǎo)致冠心病、心絞痛甚至心肌梗塞的重要原因。冠心病、心絞痛的臨床表現(xiàn)屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”、“真心痛”等范疇，中醫(yī)認為其發(fā)病機制有數(shù)種，有為“心虛邪干而痛者”；有為“陽氣郁伏而痛者”；有為“血因邪泣在絡(luò)不行而痛者”；有為“血虛而痛者，有為痰濕阻抑而痛者”；總之，都屬于“血行不暢”所致。根據(jù)這一特點，前人研制了由丹參、三七、冰片等三味中藥組成的復(fù)方丹參片。
丹參屬于活血化淤類中藥。其主要成分為丹參酮I、IIA、IIB(Tanshinone I、IIA、IIB)、異丹參酮I、II(Isotanshinone I、II)、丹參酸甲酯(Methyl tanshinanate)羥基丹參酮IIA(Hydroxytanshinone IIA)丹參新酮(Miltrirone)、隱丹參酮(Cryptotanshinone)、異隱丹參酮(Isocryptotanshinone)、左旋二氫丹參酮I、丹參酚(Salviol)以及維生素E(Vitamine E)等?，F(xiàn)代藥理研究證明丹參具有擴張冠狀動脈、抗心肌缺血、抗凝、抗血栓形成、鎮(zhèn)靜止痛以及降血脂和抗動脈粥樣硬化等作用。
三七屬于止血類中藥。中醫(yī)學(xué)認為其具有散淤止血，消腫定痛的功能，既止血又活血。其有效成分主要為皂甙類，包括人參皂甙Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、F2，絲石竹甙IX、XVII，三七人參皂甙Fa、Fe、F1、F4，人參皂甙Re、Rg2、Rh1，三七人參皂甙R1、R2、R3、R4、R6、F8，竹節(jié)人參皂甙V、IV和阿托伯脫呋喃糖竹節(jié)人參皂甙IV等。倍半萜類化合物主要有2，8-二甲基-5-乙酸基-雙環(huán)〔5、3、0〕癸二烯，1，8-δ-愈創(chuàng)烯和δ杜松烯。還含有三七素(化學(xué)名為β-N-乙二酸?；?L-α-β-二氨基丙酸)、黃酮甙類、三七多糖A、β-谷甾醇、β-谷甾醇-D-葡萄糖甙等?，F(xiàn)代藥理研究證明三七既有止血作用又有抗凝血作用。止血作用包括縮短出凝血時間、增加血小板數(shù)量并使其出現(xiàn)伸展偽足、聚集、脫顆粒等現(xiàn)象，還能降低毛細血管通透性。顯示抗凝血作用的是三七中的部分成分三七根總皂甙、三七人參二醇型皂甙和三醇型皂甙，它們均能抑制人和兔血小板的聚集。三七總皂甙可促進血管內(nèi)皮細胞分泌組織型纖溶酶原(t-PA)，阻止血栓的形成。
冰片為龍腦香科植物龍腦香樹脂的加工結(jié)晶品。菊科艾納香屬植物大風艾的葉經(jīng)水蒸汽蒸餾提取加工而得的結(jié)晶稱為艾片。由樟腦、松節(jié)油等用化學(xué)方法合成的加工制成品稱為機制冰片。冰片辛散苦泄，芳香走串，能通諸竅，散郁火，有類似麝香的開竅醒神之功。
龍腦冰片主要含右旋龍腦；艾片主要含左旋龍腦?，F(xiàn)代藥理研究證明冰片具有抗心肌缺血的作用，能使冠脈流量明顯增加；此外，冰片還能增加血腦屏障的通透性，加強藥物跨屏障能力。
由上述三味中藥組成的復(fù)方丹參片具有活血化淤、理氣止痛的功能；其臨床適應(yīng)癥為冠心病、心絞痛。復(fù)方丹參滴丸是在此基礎(chǔ)上研制而成的滴丸劑，療效優(yōu)于復(fù)方丹參片。其特點為起效迅速(舌下含服)，尤其適用于心絞痛的急性發(fā)作，此外口服也同樣有效。復(fù)方丹參滴丸批準文號為(95)衛(wèi)藥準字Z-01號，其獲準的“功能與主治”為活血化淤、理氣止痛，用于胸中憋悶、心絞痛。因其療效顯著，目前在臨床上得到廣泛應(yīng)用。
復(fù)方丹參片和復(fù)方丹參滴丸之所以療效顯著，是因為其配方中的三味中藥配伍合理。該方雖然是由三味藥組合而成，但其作用卻不能簡單地用其組成藥物的作用解釋清楚，其作用大小也不光是幾種藥物之和。該方是在中醫(yī)活血祛瘀理論與經(jīng)驗基礎(chǔ)上，按組方原則配方，充分發(fā)揮藥物配合組方之長處，既能使其中的單味藥失去某種生物活性，減輕毒副作用，又能加強原有藥物的療效，或衍化產(chǎn)生新的功用。正如清代徐靈胎《醫(yī)學(xué)源流論·方藥離合論》所云“此方之既成，能使藥各全其性，亦能使藥各失其性。操縱之法，有大權(quán)焉，此方之妙也?！苯?jīng)過近年來的臨床與實驗研究，復(fù)方丹參滴丸的應(yīng)用范圍得到了進一步的拓展，目前已證實其具有抗心絞痛、改善心肌缺血、降低血黏度、降低血小板聚集等作用。近年來的研究工作又發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參滴丸還具有抗動脈粥樣硬化、降血脂、及抗慢性肝病纖維化等作用，但至今未見有關(guān)復(fù)方丹參滴丸抗氧化作用的確切報導(dǎo)。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供復(fù)方丹參滴丸在制備抗氧化藥物中的新用途。
大量實驗研究已證明氧化壓力能導(dǎo)致心血管系統(tǒng)的損傷。對心臟而言，主要表現(xiàn)為損害冠狀動脈內(nèi)皮細胞，導(dǎo)致其功能障礙，并促進冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生，使冠狀動脈管腔狹窄，引起心絞痛甚至心肌梗塞；氧化壓力還可直接引起心肌細胞損傷，其主要機制是通過加強心肌細胞膜兩側(cè)的Na+/Ca2+交換，引起胞內(nèi)Ca2+超載和心肌細胞過度攣縮。
體內(nèi)氧化壓力主要來源于超氧陰離子的生成。在生理情況下，血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞以及單核細胞均可產(chǎn)生一定量的超氧陰離子以及羥基(OH·)、過氧化氫等自由基。在高血壓及內(nèi)皮細胞功能障礙時，體內(nèi)自由基生成增多，與其他致病因素共同作用于冠狀動脈及心肌，引起冠心病。
本發(fā)明經(jīng)體外抗氧化活性實驗，證實復(fù)方丹參滴丸在冠心病、心絞痛的治療中不但能“治標”，如增加冠脈流量、緩解心肌缺血等，而且能“治本”，即通過抗氧化作用減輕自由基對血管內(nèi)皮細胞和心肌細胞的損傷等。
為了更好地理解本發(fā)明，下面用復(fù)方丹參滴丸抗氧化活性測定的試驗結(jié)果，說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
一、鄰苯三酚紅(pyrogallol red，PR)試驗1.實驗材料藥物及試劑復(fù)方丹參滴丸，天津天士力制藥集團有限公司生產(chǎn)，批號20000306；鄰苯三酚紅Sigma公司；次氯酸鈉Sigma公司2)實驗儀器紫外分光光度計，Beckman DU6408型。
2、實驗方法精確稱取4mg PR溶于100mM PH7.4的磷酸緩沖液(K2HPO4-KH2PO4)中即成1mM PR溶液，再用上述磷酸緩沖液按1∶10的比例稀釋1mM的PR溶液，即得100μM PR溶液。在試管中按下列方案分別加入各種試劑及待測藥物空白管1ml磷酸緩沖液PR溶液管1ml 100μM PR溶液樣品對照管100μl 1mM PR溶液+900μl磷酸緩沖液樣品管100μl 1mM PR溶液+800μl磷酸緩沖液+100μl待測藥物溶液(樣品管備同樣的2管，分別加入待測藥物)在室溫下放置10分鐘后，在樣品對照管c和樣品管d中分別加入125μM次氯酸鈉混勻(a、b管中分別加入等體積的磷酸緩沖液)，然后從所有試管(a，b，c，d)中各取250μl溶液分別加入750μl磷酸緩沖液，混勻后測定在542nm波長處的紫外吸收值(Abs542)。
待測藥物為濃度為2mg/ml或10mg/ml的復(fù)方丹參滴丸水溶液。
3.計算PR試驗值＝(樣品管Abs542－樣品對照管Abs 542)/(PR溶液管Abs542－樣品對照管Abs542)×100％(PR試驗值代表抗氧化活性強弱，其確切含義為某待測藥物在某濃度時可使PR分子免于被氧化的百分比。例如某藥物的PR值為30％，則表示該藥物在某濃度時具有使30％的PR分子免于被氧化的抗氧化活性。)4.實驗結(jié)果復(fù)方丹參滴丸在濃度為0.2mg/ml及1mg/ml時其PR值分別為38％和64％，呈現(xiàn)較強的抗氧化活性。
表1為復(fù)方丹參滴丸PR試驗數(shù)據(jù)

二、ABTS試驗1.實驗材料藥物及試劑復(fù)方丹參滴丸天津天士力制藥集團有限公司生產(chǎn)，批號20000306；ABTS(2，2’-azinobis[3-ethylbenzothiazoline6-sulphonate])、Trolox、K2SO7Sigma公司實驗儀器紫外分光光度計，Beckman DU6408型。
2、實驗方法稱取5mg Trolox溶于10ml三蒸水中得2mM Trolox標準溶液(或取0.0176g維生素C(Vit C)溶于100ml三蒸水中得1mM VitC標準溶液)；取0.03841g ABTS溶于10ml三蒸水中得7mM ABTS溶液；取0.03311g K2SO7溶于5ml水中得2.45mM K2SO7。取0.2ml 2.45mM K2SO7加入9.8ml 7mM ABTS中，混勻后避光置室溫中12小時，取上述混合液1ml加入79ml PH7.4的磷酸緩沖液中，即為ABTS+溶液。按以下方案在733nm波長處測定紫外吸收值(Abs733)空白管2ml磷酸緩沖液基礎(chǔ)吸收管在1960μl或1980μl或1990μl ABTS+溶液中分別加入40μl或20μl或10μl磷酸緩沖液標準管在1960μl或1980μl或1990μl ABTS+溶液中分別加入40μl或20μl或10μl 1mM Trolox(或1mM VitC)樣品管在1960μl或1980μl或1990μl ABTS+溶液中分別加入40μl或20μl或10μl 1mg/ml的復(fù)方丹參滴丸溶液各管均在管內(nèi)溶液總量達2ml后的3分鐘時測定Abs733。樣品管備同樣的二管，分別測定Abs733。
待測藥物的清除自由基能力以“與Trolox相當?shù)目寡趸钚?Trolox equivalent antioxidant capacity，TEAC)”表示。
3.計算I＝1－[(樣品管Abs733－空白管Abs733)/基礎(chǔ)吸收管Abs733]II＝1－[(標準管Abs733－空白管Abs733)/基礎(chǔ)吸收管Abs733]TEAC＝(I/II)×藥物的稀釋系數(shù)，本實驗的藥物稀釋系數(shù)為5。
4.實驗結(jié)果在上述實驗條件下，當復(fù)方丹參滴丸的終濃度為0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.2mg/ml時，其抗氧化活性分別是已知抗氧化劑VitC的4.10倍、6.97倍和12.08倍，是Trolox的2.94倍、5倍和8.66倍，呈一定的量效關(guān)系。
表2為復(fù)方丹參滴丸ABTS試驗結(jié)果表2

上述體外抗氧化活性實驗結(jié)果證實，復(fù)方丹參滴丸在一定的濃度條件下，具有較強的抗氧化活性，而且其抗氧化活性分別是已知抗氧化劑VitC的4至12.倍，是Trolox的3至9倍。本發(fā)明復(fù)方丹參滴丸抗氧化新用途可用于冠心病、心絞痛的治療，其不但能“治標”如增加冠脈流量、緩解心肌缺血等，而且能“治本”即通過抗氧化作用減輕自由基對血管內(nèi)皮細胞和心肌細胞的損傷等。


圖1為復(fù)方丹參滴丸PR試驗結(jié)果柱形圖。
圖2為復(fù)方丹參滴丸與VitC相比的抗氧化活性。
權(quán)利要求
1.復(fù)方丹參滴丸在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用
2.復(fù)方丹參滴丸在制備減輕自由基對血管內(nèi)皮細胞損傷藥物中的應(yīng)用。
3.復(fù)方丹參滴丸在制備減輕自由基對心肌細胞損傷藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域,具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制藥領(lǐng)域中的新用途。本發(fā)明經(jīng)體外抗氧化活性實驗,結(jié)果證實復(fù)方丹參滴丸在一定的濃度條件下,具有較強的抗氧化活性,而且其抗氧化活性分別是已知抗氧化劑VitC的4至12.倍,是Trolox的3至9倍。本發(fā)明復(fù)方丹參滴丸抗氧化新用途可用于冠心病、心絞痛的治療,其不但能“治標”如增加冠脈流量、緩解心肌缺血等,而且能“治本”即通過抗氧化作用減輕自由基對血管內(nèi)皮細胞和心肌細胞的損傷等。
文檔編號A61P39/06GK1337257SQ01126820
公開日2002年2月27日 申請日期2001年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月20日
發(fā)明者朱依純, 朱依諄, 姚泰 申請人:復(fù)旦大學(xué)