專利名稱：一種治療肝炎的藥物－青葉丹及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝炎的藥物，具體地說是以龍膽科獐牙菜屬植物大籽獐牙菜(Swertia macrosperma C.B.Clarke)為原料制備的中成藥——青葉丹，本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法。
病毒性肝炎是嚴(yán)重危及人類健康甚至生命的惡性傳染病，在法定傳染病中其發(fā)病率居于第三，僅次于感冒和腹瀉。我國(guó)是肝炎的重災(zāi)區(qū)，甲、乙、丙、丁、戊五型肝炎在國(guó)內(nèi)均有發(fā)生和流行，特別是乙型肝炎，約有6-7億人曾感染過乙肝病毒，而2800萬慢性乙肝患者幾乎占全世界總數(shù)的一半。目前，對(duì)慢性乙型肝炎及多重交叉感染的復(fù)合型肝炎而言尚無特效藥。
龍膽科獐牙菜屬植物大都可用于肝膽疾病的治療，在藏族、蒙古族、彝族、白族、納西族等民間用藥中占重要地位。該屬植物大都分布在西南山岳地區(qū)，多數(shù)種類分布范圍狹窄，生長(zhǎng)量小，資源十分有限，只為當(dāng)?shù)鼐用袷褂谩４笞砚啦藦V布于云南的昭通、臨滄地區(qū)，資源豐富。該植物為民間傳統(tǒng)藥用品種，俗名為青葉丹、青葉膽、大苦草等，未見歷代本草、各省、區(qū)藥品標(biāo)準(zhǔn)、衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)、中華人民共和國(guó)藥典收載。
本發(fā)明的目的在于提供一種因病毒、藥物、化學(xué)品所導(dǎo)致的肝炎治療劑，其可以降低轉(zhuǎn)氨酶、抵御肝損傷、促進(jìn)肝細(xì)胞再生、恢復(fù)肝組織正常結(jié)構(gòu)、促進(jìn)機(jī)體免疫重建。
本發(fā)明的另一目的是提供肝炎治療劑的制備方法。
本發(fā)明的解決方案是基于現(xiàn)代藥理學(xué)研究數(shù)據(jù)，參考民間用藥經(jīng)驗(yàn)和祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)肝炎的認(rèn)識(shí)及治療原則，經(jīng)過現(xiàn)代科學(xué)方法加以提取、濃縮、精制而成的天然植物藥，該藥安全范圍大、毒副作用小，具有明顯的保肝、降酶、解毒、增強(qiáng)免疫力作用，且其服藥劑量小，只為目前市售同類中成藥的三分之一至六分之一。
植物藥實(shí)際上是多種化學(xué)成分協(xié)同作用的藥物組合物。但植物化學(xué)成分的變化相當(dāng)大，受藥材產(chǎn)地、采收季節(jié)、加工工藝等多種因素的影響。因此，保證植物藥治療作用的穩(wěn)定性必須首先確保藥材、原料藥化學(xué)成分的穩(wěn)定性。本藥物發(fā)明權(quán)利要求1、2、3所述的特征就是以此為出發(fā)點(diǎn)。大籽獐牙菜化學(xué)成分異常豐富和復(fù)雜，不可能把所有的組分都在標(biāo)準(zhǔn)、特征中加以考察，但對(duì)其主要幾種有效成分進(jìn)行了限定性考察，就可以保證其化學(xué)成分的基本穩(wěn)定，也就確保了藥物療效的可靠性。本發(fā)明藥物中富含環(huán)烯醚萜類成分，文獻(xiàn)報(bào)道證明該類成分是獐牙菜屬藥用植物的主要有效成分之一，但該類成分對(duì)熱、長(zhǎng)期光照、長(zhǎng)期溶液狀態(tài)不穩(wěn)定，因此保證該類有效成分在制備過程中的最大保留及組分比例的相對(duì)穩(wěn)定是確保藥物療效的關(guān)鍵。本發(fā)明借鑒中藥注射劑考察化學(xué)成分穩(wěn)定性的技術(shù)要求，采用主要有效化學(xué)組分相對(duì)含量特征描述的方法，保證藥劑有效化學(xué)成分組成及比例的穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明中原料藥青葉丹浸膏、青葉丹精粉、青葉丹水溶性精粉在本分析條件中都具有相同的化學(xué)組合特征，由它們制成的中成藥制劑統(tǒng)稱為青葉丹，但其服藥劑量、給藥途徑有所區(qū)別。
本發(fā)明藥物的主要有效化學(xué)成分及成分配比主要有效成分有齊墩果酸、獐牙菜甙、獐牙菜苦甙、龍膽苦甙、2’-間羥基苯甲?；啦诉啊⒋笞砚啦怂?、芒果甙、1，3，5，8-四羥基酮(1，3，5，8-tetrahydroxyxanthone)、1，3，5，8-四羥基酮1-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(1，3，5，8-tetrahydroxy-xanthone 1-O-β-D-glucopyranoside)、5，7，4’-三羥基黃酮6-C-β-D-吡喃葡萄糖甙(5，7，4’-trihydroxyflavone 6-C-β-D-glucopyranoside)、luteolin-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(6-1)吡喃葡萄糖甙(luteolin-7-O-β-D-glucopyransyl-(6-1)glucopyranoside)等。
借鑒中藥注射劑指紋圖譜的部分技術(shù)要求，根據(jù)青葉丹浸膏、青葉丹精粉和水溶性精粉的高效液相色譜(HPLC)圖，其主要有效化學(xué)組分比例描述見表-1。
主要有效組分優(yōu)選組別根據(jù)藥材不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間，本發(fā)明藥物化學(xué)組分比例范圍有如下優(yōu)選組別，見表-2。
表-1 青葉丹主要有效化學(xué)成分比例范圍
表-1和表-2備注1.I∽VI分別為1，3，5，8-四羥基酮1-O-β-D-吡喃葡萄糖甙、2’-間羥基苯甲?；啦诉?、大籽獐牙菜素、芒果甙、獐牙菜甙、獐牙菜苦甙。
2.含量比例以該測(cè)定條件下1，3，5，8-四羥基 酮1-O-β-D-吡喃葡萄糖甙色譜峰積分面積為1計(jì)，其它化合物的積分面積與其的比值作為其含量比例計(jì)。
3.保留時(shí)間為實(shí)際記錄時(shí)間，會(huì)有一定的波動(dòng)，其可作為化合物峰位的確認(rèn)的參考。
4.+號(hào)表示必須檢出，但不作含量限度要求。其他化合物因在本HPLC測(cè)定條件下分離度不好或難以檢出，故不作組分確認(rèn)和組分比例要求。
5.HPLC分析的色譜條件儀器島津LC-10AT 紫外檢測(cè)器SPD-10AVP 層析柱SHIMADZU 4.6×150mm流速1ml/min 流動(dòng)相甲醇-水-甲酸(30∶70∶0.3)檢測(cè)波長(zhǎng)237nm 柱溫30℃色譜記錄時(shí)間30min 色譜峰積分區(qū)間3.80min-30.00min表-2 青葉丹主要有效化學(xué)成分比例優(yōu)選范圍組別
大籽獐牙菜素的分離制備、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性本發(fā)明藥物的一個(gè)重要特征是其中含有新的、高效抗肝炎活性物質(zhì)——大籽獐牙菜素(其化學(xué)結(jié)構(gòu)見附

圖1)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定為1，3，5，8-tetrahydroxy-5，6，7，8-tetrahydroxanthone 8-O-β-D-glucopyran-oside。通常人們認(rèn)為獐牙菜屬植物中治療肝炎的有效成分為三萜、環(huán)烯醚萜、酮等物質(zhì)。而大籽獐牙菜素為四氫酮甙，目前文獻(xiàn)報(bào)道該類物質(zhì)自然界中只有少數(shù)植物中含有，且含量為千分之一以下。大籽獐牙菜素在大籽獐牙菜中含量可達(dá)1.6％，其活性比齊墩果酸、龍膽苦甙、獐牙菜苦甙、獐牙菜甙都高。
大籽獐牙菜素的制備方法方法一青葉丹水溶性精粉100g，溶于100ml甲醇，與200-300目硅膠300目拌樣，干燥除去甲醇。稱取200-300目硅膠2kg按常法填裝為層析柱，以甲醇-氯仿-水(3∶1∶0.2)為流動(dòng)相對(duì)拌樣進(jìn)行色譜層析，收集含大籽獐牙菜素餾分段，回收溶劑，得大籽獐牙菜素粗品。該粗品按常法經(jīng)Sephadex LH-20層析柱以50％乙醇或50％甲為流動(dòng)相進(jìn)行純化或以RP-18(ODS)柱以30％甲醇或30％乙醇為流動(dòng)相進(jìn)行純化，即得白色或微黃色粉末狀大籽獐牙菜素8.56g。
方法二 取青葉丹水溶性精粉20g，溶于100ml水中，按常法用RP-18(ODS)柱以30％甲醇或30％乙醇為流動(dòng)相進(jìn)行多次色譜層析，收集單一大籽獐牙菜素餾分段，回收溶劑，得白色或微黃色粉末狀大籽獐牙菜素1.86g。
大籽獐牙菜素的結(jié)構(gòu)鑒定1.13C核磁共振譜(CD3OD)(見附圖2)數(shù)據(jù)歸屬163.2(C-1)，100.1(C-2)，166.1(C-3)，95.1(C-4)，159.1(C-4a)，168.2(C-4b)，67.5(C-5)，27.4(C-6)，27.8(C-7)，71.4(C-8)，117.7(C-9b)，182.9(C-9)，105.2(C-9a)；Glc105.2(C-1’)，75.7(C-2’)，77.9(C-3’)，71.5(C-4’)，78.1(C-5’)，62.7(C-6’)。2.1H核磁共振譜(CD3OD)(見附圖3)數(shù)據(jù)歸屬6.32(1H，s，H-4)，6.15(1H，d，J＝1.7Hz，H-2)，4.92(1H，s，H-8)，4.68(1H，J＝7.8Hz，H-1’)，4.57(1H，dd，J＝7.0，9.6Hz，H-5)，3.90(1H，q，J＝2.2，11.9Hz，H-6’)，3.71(1H，q，J＝5.3，11.9Hz，H-6’)，3.42(1H，t，J＝8.8Hz，H-3’)，3.30-3.35(2H，m，H-4’，5’)，3.18(1H，dd，J＝7.8，9.2Hz，H-2’)，2.29(1H，dd，J＝3.2，12.6Hz，H-7)，2.08-2.10(2H，m，H-6)，1.78(1H，t，J＝12.9Hz，H-7)。
備注1H、13C NMR各數(shù)據(jù)根據(jù)HMQC、HMBC二維相關(guān)譜歸屬。3.FAB(負(fù))-MS(質(zhì)譜)數(shù)據(jù)歸屬425為準(zhǔn)分子離子峰。4.[α]D比旋光數(shù)據(jù)歸屬([α]D20.0)+3.8°(MeOH，c＝0.1)5.IR(紅外光譜)數(shù)據(jù)歸屬(cm-1)3402，1659，1623，1585，1509，1451，1369，1289，1169，1070，918，817。6.大籽獐牙菜素的5/8位順式相對(duì)構(gòu)型根據(jù)1H NMR各數(shù)據(jù)的偶合常數(shù)、NOESY確認(rèn)。
大籽獐牙菜中單體成分的的抗肝炎活性比較1.原理 大劑量D-氨基半乳糖胺(D-GalN)可引起嚴(yán)重的肝細(xì)胞損傷，小劑量反復(fù)注射可引起肝硬變。該藥理模型的肝組織病理學(xué)特征與人類病毒性肝炎極為相似，因此是目前肝炎藥物研究中常用的藥理模型。酶學(xué)實(shí)驗(yàn)在肝實(shí)質(zhì)損害診斷中占重要地位，血清中酶活力升高常與肝組織損傷程度和范圍呈平行關(guān)系，因此血清轉(zhuǎn)氨酶活性是肝細(xì)胞損害的敏感指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)測(cè)試大籽獐牙菜中的單體成分大籽獐牙菜素、獐牙菜甙、獐牙菜苦甙、龍膽苦甙、芒果甙、1，3，5，8-四羥基酮1-O-β-D-吡喃葡萄糖甙對(duì)D-GalN/LPS(脂多糖)所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。
2.方法 急性肝損傷小鼠(20-25g)腹腔注射D-GalN(700mg/kg)/LPS(10μg/kg)。
正常對(duì)照組(10只)分別于實(shí)驗(yàn)前18小時(shí)和2小時(shí)皮下注射聚乙二醇，實(shí)驗(yàn)時(shí)腹腔注射生理鹽水。
中毒組(10只)分別于實(shí)驗(yàn)前18小時(shí)和2小時(shí)皮下注射聚乙二醇，實(shí)驗(yàn)時(shí)腹腔注射D-GalN(700mg/kg)/LPS(10μg/kg)。
小劑量給藥組(10只，25mg/kg)分別于實(shí)驗(yàn)前18小時(shí)和2小時(shí)皮下注射聚乙二醇溶解的藥物樣品，實(shí)驗(yàn)時(shí)腹腔注射D-GalN(700mg/kg)/LPS(10μg/kg)。
大劑量給藥組(10只，50mg/kg)分別于實(shí)驗(yàn)前18小時(shí)和2小時(shí)皮下注射聚乙二醇溶解的藥物樣品，實(shí)驗(yàn)時(shí)腹腔注射D-GalN(700mg/kg)/LPS(10μg/kg)。
ALT的測(cè)定腹腔注射D-GalN(700mg/kg)/LPS(10μg/kg)后8小時(shí)測(cè)定小鼠ALT水平。
3.結(jié)果(見下表)
注統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的p＜0.05。
4.結(jié)論大籽獐牙菜素對(duì)D-GalN/LPS所致小鼠肝損傷有明顯的保護(hù)作用，且藥物與防治效果呈線性正相關(guān)。大籽獐牙菜中的其他成分在本實(shí)驗(yàn)中沒有大籽獐牙菜素效果明顯，獐牙菜甙等環(huán)烯醚萜成分表現(xiàn)了中等強(qiáng)度的防治效果，而芒果甙等 酮成分基本無防治作用。因此，大籽獐牙菜素是一個(gè)新的、天然高效抗肝炎的活性物質(zhì)。
本發(fā)明藥物中含有龍膽苦甙、獐牙菜苦甙等環(huán)烯醚萜類成分，該類成分除化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定外，其味極苦，因此采用現(xiàn)代藥劑學(xué)的制劑技術(shù)制成各種服藥方便、用藥準(zhǔn)確、又能保證藥物化學(xué)成分穩(wěn)定的現(xiàn)代藥物劑型。根據(jù)本發(fā)明藥物化學(xué)成分的特點(diǎn)，本發(fā)明藥物的優(yōu)選劑型為片劑、膠囊劑和粉針劑。
本藥物——青葉丹的生產(chǎn)制備方法是(工藝流程圖見附圖4)1.藥材精選，除去雜草、泥沙等雜質(zhì)，粉碎成60目細(xì)粉。
2.加入乙醇冷浸提取2次，第一次冷浸48小時(shí)，第二次冷浸24小時(shí)。合并2次提取液，過濾，90℃以下減壓濃縮回收乙醇，得青葉丹浸膏。
3.青葉丹浸膏中加入8倍水，混勻，靜置8小時(shí)，過濾，濾液以同等體積的正丁醇萃取第一次，以濾液1/2體積正丁醇萃取第二、三次，合并正丁醇層萃取液，在90℃以下減壓濃縮回收溶劑，烘干，粉碎，得水溶性精粉；水不溶部分(濾渣)中加入其35％重量的活性炭，再加入4倍乙醇，回流1小時(shí)，過濾，濾液中再加入相同量的活性炭，回流1小時(shí)，過濾，濾液回收溶劑，烘干，粉碎，得脂溶性精粉(主要成分為齊墩果酸)。合并水溶性和脂溶性精粉得青葉丹精粉。
4.步驟3中青葉丹水溶性精粉還可用吸附樹脂以層析法進(jìn)行制備青葉丹浸膏中加入8倍水，混勻，靜置8小時(shí)，過濾，濾液經(jīng)大孔樹脂層析，先以水為流動(dòng)相除去單糖、寡糖等雜質(zhì)，再以乙醇為流動(dòng)相，收集乙醇洗脫的餾分段并在90℃以下減壓濃縮回收溶劑得膏狀物，烘干，粉碎，得青葉丹水溶性精粉。
該法能比較徹底的除去單糖等雜質(zhì)，最大限度地富集有效成分，與溶劑萃取法相比，克服了溶劑萃取法中溶劑互溶現(xiàn)象導(dǎo)致有效成分萃取不完全、雜質(zhì)分離不徹底等問題。
5.以青葉丹精粉或青葉丹浸膏或青葉丹水溶性精粉制成中成藥制劑。
本發(fā)明藥物中環(huán)烯醚萜類化合物是重要的一類有效成分，包括獐牙菜甙、獐牙菜苦甙、龍膽苦甙、2’-間羥基苯甲酰基獐牙菜甙等，其對(duì)熱、光及長(zhǎng)期溶液狀態(tài)不穩(wěn)定，因此，在制備過程中采用冷浸提取、減壓回收溶劑且溫度不得高于90℃，溶劑回收的最佳溫度范圍優(yōu)選為50-80℃。
本發(fā)明藥物的一個(gè)重要特點(diǎn)是集中了目前獐牙菜屬植物中幾乎所有主要的活性成分(如齊墩果酸、獐牙菜苦甙、獐牙菜甙、龍膽苦甙、芒果甙等)，且沒有哪一種或兩種成分占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，這些活性成分具明顯的協(xié)同作用。
根據(jù)藥理學(xué)數(shù)據(jù)、民間用藥經(jīng)驗(yàn)及不同的給藥途徑，本藥物用藥劑量范圍為60mg/天至2500mg/天。其優(yōu)選用藥劑量青葉丹水溶性精粉為140±100mg/大、青葉丹精粉360±120mg/天、青葉丹浸膏600±240mg/天。
本發(fā)明藥物藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，有如下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明選用民間單味天然植物藥為原料，毒副作用非常小，可以長(zhǎng)期安全服用。
2.本發(fā)明用藥量小，服藥方便，對(duì)本已物質(zhì)代謝失調(diào)的肝炎患者而言尤為重要。
3.本發(fā)明藥物含多種抗肝炎活性物質(zhì)，各活性組分綜合協(xié)同作用，多靶點(diǎn)、多受體、多層次作用于患者機(jī)體，降低轉(zhuǎn)氨酶、修復(fù)受損肝組織、促進(jìn)肝細(xì)胞再生、改善肝區(qū)血液循環(huán)、增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力、促進(jìn)機(jī)體的免疫重建。
為表明本發(fā)明藥物的治療效果，其藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下1.毒性實(shí)驗(yàn)急性毒性小鼠(20-25g)3組，每組10只，青葉丹精粉和青葉丹浸膏分別10g/kg灌胃給藥，青葉丹水溶性精粉10g/kg腹腔注射給藥，七日內(nèi)無死亡發(fā)生，小鼠活動(dòng)正常，無明顯中毒癥狀，因此青葉丹LD50＞10g/kg。
亞急性毒性小鼠5組，每組10只，青葉丹精粉和青葉丹浸膏分別5g/kg/天灌胃，連續(xù)15天，小鼠無死亡發(fā)生，活動(dòng)正常，也無明顯中毒癥狀，體重變化與對(duì)照組(灌生理鹽水)無差異。青葉丹水溶性精粉5g/kg腹腔注射，連續(xù)15天，小鼠無死亡發(fā)生，活動(dòng)正常，也無明顯中毒癥狀，體重變化與對(duì)照組(注射生理鹽水)無差異。
長(zhǎng)期毒性大鼠(120-150g)5組，每組8只，青葉丹精粉和青葉丹浸膏分別5g/kg/天灌胃，連續(xù)120天，大鼠無死亡發(fā)生，活動(dòng)正常，也無明顯中毒癥狀，大鼠心、肺、肝等內(nèi)臟及體重變化與對(duì)照組無差異。
結(jié)論青葉丹(精粉、浸膏等)用藥安全范圍大，毒副作用低。2.青葉丹保肝降酶作用a.對(duì)小鼠和大鼠CCl4所致肝損傷的影響CCl4所致肝損傷的小鼠和大鼠給與青葉丹精粉60mg/kg/天、青葉丹浸膏120mg/kg/天給藥，灌胃，連續(xù)7天；青葉丹水溶性精粉30mg/kg/天腹腔注射給藥，連續(xù)7天。觀察到CCl4所致肝損傷區(qū)明顯修復(fù)肝細(xì)胞漿疏松、氣球樣變減少，肝糖原積蓄明顯增多；給藥組比對(duì)照組SGPT值明顯降低。
b.對(duì)小鼠和大鼠D-GalN(D-氨基半乳糖)所致肝損傷的影響D-GalN所致肝損傷的小鼠和大鼠給與青葉丹精粉60mg/kg/天、青葉丹浸膏120mg/kg/天給藥，灌胃，連續(xù)7天；青葉丹水溶性精粉30mg/kg/天腹腔注射給藥，連續(xù)7天。觀察到D-GalN所致肝損傷區(qū)明顯修復(fù)；給藥組比對(duì)照組SGPT值明顯降低。
結(jié)論以上實(shí)驗(yàn)說明青葉丹對(duì)化學(xué)性肝損傷有明顯的保護(hù)、修復(fù)作用，對(duì)化學(xué)性肝損傷造成的SGPT升高也有顯著的下降作用。3.青葉丹對(duì)肝臟解毒功能的影響對(duì)洋地黃毒甙中毒小鼠的保護(hù)作用小鼠5組，每組10只。給小鼠青葉丹精粉60mg/kg/天、青葉丹浸膏120mg/kg/天，灌胃，連續(xù)3天，第四天給與洋地黃甙20mg/kg，然后連續(xù)3天給與青葉丹精粉60mg/kg/天、青葉丹浸膏120mg/kg/天，灌胃，結(jié)果對(duì)照組(灌生理鹽水)小鼠20有8只死亡，而青葉丹精粉給藥組只有4只死亡；青葉丹浸膏給藥組5只死亡。小鼠青葉丹水溶性精粉30mg/kg/天腹腔注射，連續(xù)3天，第四天給與洋地黃甙20mg/kg，然后連續(xù)3天給與青葉丹水溶性精粉30mg/kg/天，腹腔注射，結(jié)果對(duì)照組(腹腔注射生理鹽水)小鼠死亡9只，給藥組死亡5只。
結(jié)論青葉丹能加強(qiáng)小鼠肝臟解毒功能。4.青葉丹對(duì)小鼠血中膠體炭粒廓清速度及肝巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響給小鼠青葉丹精粉60mg/kg和青葉丹浸膏120mg/kg，灌胃，連續(xù)4天；給小鼠青葉丹水溶性精粉40mg/kg腹腔注射，連續(xù)4天。末次給藥1小時(shí)后給與20％印度墨汁(i.v.)，2和10分鐘后分別取血測(cè)定，給藥組血中膠體炭粒廓清速度較對(duì)照組明顯加速，肝巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)K及吞噬系數(shù)α值明顯增加。
結(jié)論青葉丹有提高機(jī)體免疫功能的作用。5.藥理實(shí)驗(yàn)總結(jié)青葉丹用藥安全范圍大，毒副作用性低。由其制成的藥物可以明顯降低轉(zhuǎn)氨酶、抵御肝損傷、改善肝微循環(huán)障礙、促進(jìn)肝細(xì)胞再生、恢復(fù)肝組織正常結(jié)構(gòu)、加強(qiáng)機(jī)體免疫重建。因此提示青葉丹對(duì)病毒、藥物、化學(xué)品所導(dǎo)致的肝炎都有治療作用。臨床上可用于各型急、慢性病毒性肝炎、早期肝硬化、無癥狀病毒攜帶者、藥物和化學(xué)品導(dǎo)致的藥源性肝炎等。
生產(chǎn)方法實(shí)施例一100kg青葉丹藥材經(jīng)精選，除去雜草、泥沙等雜質(zhì)，粉碎成60目細(xì)粉。加入乙醇300kg，冷浸提取48小時(shí)，用相同量乙醇再冷浸提取第二次，冷浸24小時(shí)。合并2次提取液，過濾，78℃減壓濃縮回收乙醇，得所含水分小于10％青葉丹浸膏22.16kg(其色譜圖見附圖5)。青葉丹浸膏中加入8倍水(180kg)，混勻，靜置8小時(shí)，過濾，濾液以浸膏量的4倍正丁醇(約90kg)萃取第一次，第二、三次再以2倍正丁醇(約45kg)萃取。合并正丁醇層萃取液，在80℃以下減壓濃縮回收溶劑，烘干，粉碎，得水溶性精粉(12.96kg)；水不溶部分(濾渣，5.6kg)中加入三分之一倍活性炭(1.8kg)，再加入4倍乙醇(22.5kg)，回流1小時(shí)，放置冷卻至室溫，過濾，濾液中再加入相同量的活性炭(1.8kg)，回流1小時(shí)，放置冷卻至室溫，過濾，濾液回收溶劑，烘干，粉碎，得脂溶性精粉(2.4kg)。合并水溶性和脂溶性精粉得青葉丹精粉(15.36kg)(其色譜圖見附圖6)。
以青葉丹精粉1500g，加入淀粉3000g，制粒，壓制成0.45g片劑，包衣，得合格青葉丹片9720粒。該片劑每日服用三次，每次一片。
以青葉丹精粉1250g，加入淀粉3000g，制粒，裝填成0.25g膠囊劑，得青葉丹交囊17500粒。該膠囊每日服用三次，每次二粒。
實(shí)施例二取生產(chǎn)方法實(shí)施例一中制得的青葉丹浸膏(1000g)，加入淀粉3000g，制粒，壓制成0.4g片劑，包薄膜衣，得合格青葉丹片9800粒。該片劑每日服用三次，每次二片。
以青葉丹浸膏1000g，加入淀粉3000g，制粒，裝填成0.2g膠囊劑，得青葉丹膠囊17650粒。該膠囊每日服用三次，每次四粒。
取生產(chǎn)方法實(shí)施例一中制得的取青葉丹浸膏(5kg)中加入8倍水(40kg)，混勻，靜置8小時(shí)，過濾，濾液經(jīng)DM-130大孔樹脂層析，先以水(100升)為流動(dòng)相除去單糖、寡糖等雜質(zhì)，再以乙醇(120kg)為流動(dòng)相，收集乙醇洗脫的餾分段并在80℃以下減壓濃縮回收溶劑得漿狀物，烘干，粉碎，得青葉丹水溶性精粉(2.1kg)(其色譜圖見附圖7)。無菌環(huán)境中把青葉丹水溶性精粉1000g溶于10升注射用水中，超濾膜過濾，濾液灌入2ml安瓿瓶中，每只安瓿瓶中灌入1ml藥液，冷凍干燥，封口，制成青葉丹凍干粉針劑9610支。該針劑肌注或靜脈注射，每日二次，每次一支。
權(quán)利要求
1.一種治療肝炎的藥物——青葉丹，其特征是以大籽獐牙菜(Swertia macrosperma C.B.Clarke)為原料提取的環(huán)烯醚萜類、酮類、三萜類等特征有效化學(xué)組分制成的藥劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎藥物，其特征在于其主要有效化學(xué)成分組成比例相對(duì)穩(wěn)定，且具有特定比例范圍。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療肝炎藥物，其特征在于其主要有效化學(xué)成分比例范圍有八個(gè)優(yōu)選組別。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的治療肝炎藥物，其特征在于其含有新的天然抗肝炎活性物質(zhì)—大籽獐牙菜素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎藥物，其特征在于所說的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療肝炎藥物，其特征在于所說的藥劑是片劑或膠囊劑或粉針劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎藥物，其特征在于其有效用藥劑量范圍為60mg/天至2500mg/天。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療肝炎藥物，其特征在于其用藥優(yōu)選劑量青葉丹水溶性精粉為140±100mg/天、青葉丹精粉為360±120mg/天、青葉丹浸膏為600±240mg/天。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎藥物，其特征還在于其獨(dú)有的提取、制備工藝將藥材粉碎，加入乙醇冷浸提取2次，合并提取液，過濾，濾液在90℃以下減壓濃縮，得青葉丹浸膏。青葉丹浸膏中加入8倍水，混勻，靜置8小時(shí)，過濾，濾液以同等體積的正丁醇萃取第一次，以1/2濾液體積的正丁醇萃取第二、三次，合并正丁醇層萃取液，在90℃以下減壓濃縮回收溶劑，烘干，粉碎，得水溶性精粉；水不溶部分(濾渣)中加入其質(zhì)量的35％的活性炭，再加入4倍乙醇，回流1小時(shí)，冷至室溫，過濾，濾液中再加入相同量的活性炭，回流1小時(shí)，冷至室溫，過濾，濾液回收溶劑，烘干，粉碎得脂溶性精粉。水溶性精粉與脂溶性精粉合并，混勻，得青葉丹精粉。以青葉丹浸膏或青葉丹精粉或水溶性精粉混合適量藥用輔料制成中成藥制劑。青葉丹水溶性精粉還可用以下方法制備青葉丹浸膏中加入8倍水，混勻，靜置，過濾，濾液經(jīng)大孔樹脂層析，先以水為流動(dòng)相除去單糖、寡糖等雜質(zhì)，再以乙醇為流動(dòng)相，收集乙醇洗脫的餾分段并在90℃以下減壓濃縮回收溶劑得膏狀物，烘干，粉碎，得青葉丹水溶性精粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療肝炎藥物青葉丹制備方法，其特征還在于其制備工藝中溶劑回收的溫度范圍優(yōu)選為50-80℃。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種運(yùn)用現(xiàn)代科技對(duì)民間傳統(tǒng)草藥加工精制而成的中成藥——青葉丹。本發(fā)明適用于清熱、利濕、解毒、消炎。對(duì)肝損傷具有明顯保護(hù)作用和降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用，可促進(jìn)肝細(xì)胞再生、恢復(fù)肝組織正常結(jié)構(gòu)；可改善肝微循環(huán)，增加肝血流量；增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，促進(jìn)免疫重建。用于各型急、慢性病毒性肝炎、早期肝硬化、無癥狀病毒攜帶者、藥物和化學(xué)品導(dǎo)致的藥源性肝炎等。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1391928SQ0112940
公開日2003年1月22日 申請(qǐng)日期2001年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月15日
發(fā)明者周志宏, 林艷和 申請(qǐng)人:深圳市生物谷科技有限公司