專利名稱：可包覆高含量疏水性物質(zhì)的脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是有關(guān)一種脂質(zhì)體(Liposome)，特別是一種有關(guān)可穩(wěn)定包覆高含量疏水性物質(zhì)的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)(drug delivery system)。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體已廣泛用作藥物包埋載體，因為脂質(zhì)體組成是人體細(xì)胞膜成分，結(jié)構(gòu)也相近，已被認(rèn)為生物體相容性優(yōu)良且最能夠降低靜脈注射的全身毒性(systemic toxicity)，并同時達(dá)到與原劑型相同的療效的一種方式。
疏水性藥物，紫杉醇(paclitaxel)于1992年上市，初期為乳腺癌與子宮癌的二線治療，于1998年開始與順氯氨鉑(cisplatin)合用作為非小細(xì)胞型肺癌與子宮癌的一線治療。唯市售產(chǎn)品的劑型是使用酒精與Cremophore EL的系統(tǒng)，其毒性高，易造成病人治療癌癥時對身體產(chǎn)生副作用。包括抑制骨髓作用、降低嗜中性白血球的數(shù)目、心跳減緩、血塊降低、末梢神經(jīng)毒性、貧血等癥狀。因為脂質(zhì)體系統(tǒng)具有上述優(yōu)良的生物體相容性、最能夠降低靜脈注射的系統(tǒng)毒性以及達(dá)到與原劑型相同療效的優(yōu)點，研究包覆毒性藥物，例如紫杉醇，并能適用于臨床治療的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)已成為一種熱門的課題。
紫杉醇-脂質(zhì)體(paclitaxel-liposome)的劑型，無論使用帶電的磷脂，如磷脂酰甘油(phosphatidyl glycerol，PG)與磷脂酰膽堿(phosphatidyl choline，PC)的組合(US Pat.US5415869)，或單獨使用不飽和磷脂酰膽堿(unsaturated PC)或部分不飽和磷脂酰膽堿(partially unsaturated PC)所組成的脂質(zhì)體，在這些典型的配方中紫杉醇約占磷脂(phospholipid)的3摩爾％左右，只有在這低比例下，紫杉醇-脂質(zhì)體才較穩(wěn)定。一旦將比例升高到4摩爾％，紫杉醇-脂質(zhì)體只能穩(wěn)定兩天，而比例上升至8摩爾％時，在制備過程中就會有針狀紫杉醇結(jié)晶析出。即使添加親水高分子修飾的磷脂甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(methoxy polyethylene glycol-phosphatidyl ethanolamine)，來增加脂質(zhì)體在體內(nèi)的半衰期(half-life)，雖然對于改善藥物在生物體內(nèi)代謝有正面作用，但儲存的穩(wěn)定性也差，在包覆3摩爾％時穩(wěn)定性小于一星期。
熟悉本技藝的都知道，低包覆率的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)具有相當(dāng)?shù)牟贿m用性。尤其，當(dāng)需要大量給藥時，服藥者相對地會服下大量的脂質(zhì)體，大量的脂質(zhì)體在人體內(nèi)會造成不可預(yù)測的可能毒性；并且，使用大量的脂質(zhì)體使制造成本提高。此二個明顯的不便與缺點，使得提高脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)的疏水性藥物包覆率成為當(dāng)務(wù)之急。
另外，在美國專利US5424073中揭露一種紫杉醇-脂質(zhì)體配方，在主成分磷脂酰膽堿(PC)外，添加一種特別的磷脂，心脂(cardiolipid)，這種磷脂較為特殊，其分子結(jié)構(gòu)具有一個較大的親水基與四個脂肪碳鏈所組成，可使包埋的紫杉醇與總磷脂比例提升至9摩爾％，但在4℃下的儲存，其穩(wěn)定性僅有一個月左右。
總之，當(dāng)紫杉醇包埋于脂質(zhì)體雙層膜內(nèi)時，會有自行聚集析出的趨勢。過去文獻(xiàn)報導(dǎo)的脂質(zhì)體配方能達(dá)到的最高包埋效率為3-4摩爾％(藥物/脂之比)，而較穩(wěn)定的配方比例則在3摩爾％左右，若繼續(xù)增加紫杉醇的比例，在制備脂質(zhì)體過程中即有結(jié)晶析出現(xiàn)象。
發(fā)明目的及概述因此，本發(fā)明的目的在于提出一種可包覆的高含量疏水性物質(zhì)，特別是疏水性藥物的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，該投藥系統(tǒng)使被包覆藥物具有高穩(wěn)定性，并且應(yīng)用于毒性藥物時，更有助于防止服藥者產(chǎn)生副作用。
根據(jù)本發(fā)明的目的，提出一種可包覆性高含量疏水性藥物的脂質(zhì)體，至少包括第一磷脂與第二磷脂，疏水性藥物以及親水高分子修飾的磷脂(例如MPEG-DSPE)、膽固醇、膽固醇衍生物、抗氧化劑等。第一磷脂的相轉(zhuǎn)移溫度為Tg1，第二磷脂的相轉(zhuǎn)移溫度為Tg2。Tg1與Tg2差別很大，使得在一特定投藥溫度T1及儲存溫度T2下，其中Tg1＞T1＞T2＞Tg2，即無論在投藥或儲存時，脂質(zhì)體的雙層膜上都會形成多個不連續(xù)不互溶的兩相共存。
其中，相轉(zhuǎn)移溫度高的磷脂優(yōu)選的是氫化天然磷脂或長碳鏈飽和的磷脂，例如磷脂酰膽堿(phosphatidyl choline；PC)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol；PC)、磷脂酰絲氨酸(phosphatidyl serine；PS)、或磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine；PE)。磷脂酰膽堿(phosphatidyl choline；PC)的實例包含但不限于，氫化卵磷脂?；憠A(hydrogenated egg phosphatidyl choline；HEPC)，氫化大豆磷脂酰膽堿(hydrogenated soy phosphatidyl choline；HSPC)；長碳鏈飽和的磷脂酰膽堿，如二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(dipalmitoylphosphatidyl choline；DPPC)及二硬脂?；字憠A(distearyloylphosphatidyl choline；DSPC)，或者其中任兩種或兩種以上的組合。
相轉(zhuǎn)移溫度低的磷脂優(yōu)選的是不飽和磷脂，或短碳鏈飽和的磷脂，如磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰乙醇胺。
不飽和磷脂酰膽堿的實例包含但不限于，卵磷脂酰膽堿(egg phosphatidylcholine；EPC)，大豆磷脂酰膽堿(soy phosphatidyl choline；SPC)，其他人工合成的不飽和PC以及天然不飽和PC，及短碳鏈飽和的磷脂酰膽堿，如二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(dimyristoyl phosphatidyl choline；DMPC)，以及二月桂酰基磷脂酰膽堿(dilauroyl phosphatidyl choline；DLPC)，或者其中任兩種或兩種以上的組合。
為使本發(fā)明的上述目的、特征、和優(yōu)點能更明顯易懂，下文特舉一優(yōu)選實施方案，并配合附圖，作詳細(xì)說明如下附圖的簡述

圖1顯示以相轉(zhuǎn)移溫度差別很大的兩種磷脂組成的脂質(zhì)體，在其雙層膜上兩相共存的現(xiàn)象。
圖2繪示依照本發(fā)明一優(yōu)選實施方案所得的結(jié)果，其表示膽固醇含量對包覆紫杉醇的脂質(zhì)體的包覆率及平均粒徑的影響。
表1顯示依照本發(fā)明一優(yōu)選實施方案，不同磷脂組成及比例與脂質(zhì)體包覆率與粒徑大小的關(guān)系。
表2顯示依照本發(fā)明一優(yōu)選實施方案，藥物/磷脂比例對包覆率的關(guān)系。
表3顯示依照本發(fā)明一優(yōu)選實施方案，單一成分磷脂的脂質(zhì)體，其藥物/脂質(zhì)比例與包覆率的關(guān)系。
表4顯示依照本發(fā)明一優(yōu)選實施方案的脂質(zhì)體成分與儲存穩(wěn)定性的關(guān)系。
表5顯示依照本發(fā)明一優(yōu)選實施方案的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)的動物試驗結(jié)果。
優(yōu)選實施方案Korlach J等人，在Pro Natl Acad Sci USA 1999；968461-8466中證實相轉(zhuǎn)移溫度(phase transition temp.)不同的兩種磷脂組成，如不飽和磷脂(unsaturated phospholipids)與飽和磷脂(saturated phospholipids)在特定比例及特定溫度范圍下，會使脂質(zhì)體的雙層膜(bilayer)上分成兩相---凝膠相(gelphase)及液晶相(liquid-crystal phase)，如圖1所示。這二不互溶的兩相共存在脂質(zhì)體上形成多個不連續(xù)的區(qū)域。
由于上述特性，大量疏水性物質(zhì)可以包埋于脂質(zhì)體雙層膜間，通過不同相之間的邊界障礙(boundary barrier)，可以避免疏水性物質(zhì)自行聚集(self-aggregation)析出和破壞脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定，因此可以提高疏水性物質(zhì)在脂質(zhì)體內(nèi)的包埋容量，也使這種脂質(zhì)體在包含高含量疏水性物質(zhì)時較其他配方型式更為穩(wěn)定。
因此，本發(fā)明設(shè)計一種脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，包括兩種磷脂，這兩種磷脂的相轉(zhuǎn)移溫度Tg1、Tg2不同。相轉(zhuǎn)移溫度(Tg1)高的磷脂可以是飽和磷脂，相轉(zhuǎn)移溫度(Tg2)低的磷脂可以是不飽和磷脂。這兩種磷脂在特定比例及特定的溫度T下，其中Tg1＞T＞Tg2，會使脂質(zhì)體雙層膜形成多個不連續(xù)不互溶的兩相共存，例如凝膠相及液晶相。其中，特定的溫度T可以是脂質(zhì)體在投藥或儲存時的溫度，依脂質(zhì)體系統(tǒng)不同，特定的溫度T有所選擇或更改，甚至是包含投藥及儲存溫度的一個溫度范圍，例如投藥溫度為37℃，而儲存溫度為4℃，則較佳的選擇可以為Tg1＞℃40℃，Tg2＜0℃。
其中，相轉(zhuǎn)移溫度高的磷脂優(yōu)選的是氫化天然磷脂或長碳鏈飽和的磷脂，例如磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)或磷脂酰乙醇胺(PE)。磷脂酰膽堿(PC)的實例包含但不限于，氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)，氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)；長碳鏈飽和的磷脂酰膽堿，如二棕櫚?；字Ｄ憠A(DPPC)及二硬脂?；字Ｄ憠A(DSPC)，或者其中任兩種或兩種以上的組合。
相轉(zhuǎn)移溫度低的磷脂優(yōu)選的是不飽和磷脂，或短碳鏈飽和的磷脂，如磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)或磷脂酰乙醇胺(PE)。
不飽和磷脂酰膽堿的實例包含但不限于，卵磷脂酰膽堿(EPC)，大豆磷脂酰膽堿(SPC)，其他人工合成的不飽和PC以及天然不飽和PC，及短碳鏈飽和的磷脂酰膽堿，如二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(DMPC)，以及二月桂酰基磷脂酰膽堿(DLPC)，或者其中任兩種或兩種以上的組合。
在此，以含有飽和磷脂酰膽堿與不飽和磷脂酰膽堿的脂質(zhì)體包覆疏水性藥物為例，說明根據(jù)本發(fā)明一優(yōu)選實施方案的脂質(zhì)體，但本發(fā)明不限于此，脂質(zhì)體包含的磷脂范圍如上所述，包覆物質(zhì)應(yīng)包含所有疏水性物質(zhì)。實施例1本實施例是一種制備包覆紫杉醇的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)的方法。
為制備紫杉醇/脂質(zhì)摩爾比為1/14的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，先添加1.23mg的紫杉醇于包含下列組成的醇類混合物中12.2mg/ml卵磷脂酰膽堿(EPC)，2.28mg/ml氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)，2.28mg/ml膽固醇，5.4mg/ml甲氧基聚乙二醇-二硬脂?；字；掖及?MPEG-DSPE)。當(dāng)然，醇類混合物中也可以包括其他抗氧化劑，或以其他膽固醇衍生物替代膽固醇，所以本發(fā)明雖以上述配方為例，但不應(yīng)限定于此。將上述添加有紫杉醇的醇類混合物再于真空中進(jìn)行蒸發(fā)，以除去溶劑并于圓底燒瓶的瓶壁形成脂質(zhì)膜。蒸發(fā)結(jié)束后，再加入1ml 10％(w/v)蔗糖(Sucrose)于圓底燒瓶以進(jìn)行水合(Hydration)。大粒徑多層(multilamellar)脂質(zhì)體懸浮后，經(jīng)超音波(sonication)震蕩10分鐘后，就會形成小粒徑的單層(unilamellar)脂質(zhì)體。含有紫杉醇的脂質(zhì)體接著以0.2μm醋酸纖維素膜過濾以滅菌。再以激光粒徑分析儀(Laser particle sizeanalyzer；Coulter N4 plus)以分析其粒徑大小，得知平均粒徑約為120nm。接著，將過濾后的在微脂粒中的紫杉醇濃度以HPLC測出，約為1mg/ml，因此，包埋率(incorporation efficiency)至少為80％。實施例2本實施例也是制備包覆紫杉醇的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)的方法。方法類似于實施例1，再加上擠壓成形的制程。
由超音波震蕩或水合過程形成的脂質(zhì)體，再經(jīng)擠壓成形。擠壓成形過程是采用一系列的薄膜，而不是如實施例1的消毒過濾法。這薄膜是具有1.0到0.2μm均勻孔徑大小的聚碳酸酯薄膜。氮氣槽(nitrogen tank)釋出的氣壓作為成形的驅(qū)動力。根據(jù)Lipex Co.的設(shè)備操作手冊，氮氣槽可供的壓力最高達(dá)750psi。藉此可以獲得粒徑大小的窄分布(narrow distribution)的脂質(zhì)體。平均粒徑大小為150nm，多分散指數(shù)為0.3。此過程中造成的包覆紫杉醇損失率約為10％。實施例3本實施例探討不同磷脂組成及比例對脂質(zhì)體包覆率與粒徑大小的影響。
本實施例的包覆紫杉醇的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，是修改實施例1的方法所制成。其中，脂質(zhì)體組成包括氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)或氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)。并且，本實施例以不同比例的HSPC/脂質(zhì)之比或HEPC/脂質(zhì)之比做試驗。
結(jié)果如表1所示，當(dāng)HSPC的含量增加，紫杉醇的包埋率會降低。當(dāng)HSPC/脂質(zhì)比高于60摩爾％，會有針狀沉淀出現(xiàn)。
表1的結(jié)果又顯示，相較于包含HSPC的脂質(zhì)體，包含HEPC的脂質(zhì)體粒徑較小且有較高的載藥量。實驗證明，從特定品種純化得到的HPC可以包覆高含量的親脂性藥物(即疏水性藥物)。但是，為達(dá)到最高包覆率的最佳的HPC/脂質(zhì)比決定于各種磷脂的組合。
表1脂質(zhì)體成分(莫耳比)包覆率(％)#平均粒徑(nm)紫衫醇/EPC/HSPC/膽固醇/MPEG$(0.3/8/2/1/0.5) 82.2 149.5紫衫醇/EPC/HSPC/膽固醇/MPEG(0.3/6/4/1/0.5)62.2 167.8紫衫醇/EPC/HSPC/膽固醇/MPEG(0.3/4/6/1/0.5)針狀沉淀*紫衫醇/EPC/HSPC/膽固醇/MPEG(0.3/8/2/1/0.5)69.2 113.3紫衫醇/EPC/HEPC/膽固醇/MPEG(0.3/6/4/1/0.5)63.8 120.8紫衫醇/EPC/HEPC/膽固醇/MPEG(0.3/4/6/1/0.5)73.6 128.4#包覆率＝包覆于脂質(zhì)體中的紫衫醇量/添加的紫衫醇量*制備過程中即出現(xiàn)針狀沉淀。$MPEG全名為甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺實施例4本實施例探討膽固醇含量對包覆紫衫醇的脂質(zhì)體的包覆率及平均粒徑的影響。
膽固醇含量影響脂質(zhì)體的藥物包覆率及粒徑大小。另一方面，添加膽固醇增強脂質(zhì)體的強度(rigidity)。一般認(rèn)為，脂質(zhì)體強度的增加有助于靜脈注射藥物時，延長循環(huán)時間(Circulation time)。
如圖2所示，增加膽固醇含量有降低紫杉醇的包覆率的趨勢，并且使得脂質(zhì)體平均粒徑減小。假定嵌有膽固醇的磷脂雙層膜間可容納親脂性藥物，所以添加膽固醇的影響會因脂質(zhì)與親脂性藥物的不同組合而有所改變。本實施例是依照一般的脂質(zhì)與親脂性藥物組成配方所得的結(jié)果。為了要取得最理想化的脂質(zhì)體包覆率與粒徑大小，需先決定膽固醇含量的最佳范圍。如圖2的實驗結(jié)果所示，此最佳范圍為0.2-0.3膽固醇/脂質(zhì)摩爾比。實施例5本實施例探討增加藥物/磷脂比例對包覆率的影響。
于醇類混合物中，加入不同量的10mg/ml紫杉醇試樣，以改變脂質(zhì)體中的藥物/脂質(zhì)摩爾比例。脂質(zhì)體的制備方法類似于實施例1所述。根據(jù)HPLC定出的濃度，可以計算出紫杉醇的包覆率。從表2可得知，當(dāng)藥物/脂質(zhì)摩爾比升至20摩爾％時，紫杉醇包覆率可維持于80％以上。然而，當(dāng)藥物/脂質(zhì)摩爾比升至25摩爾％時，紫杉醇包覆率降至60％。
表2配方 [脂質(zhì)] 藥物/脂質(zhì) [紫衫醇] 包覆率平均粒徑(mM) (mole％) (mg/ml)(％) ±SD(nm)A*4031.03 80.4 120.0±45.5B#2071.04 84.5 114.3±43.6C#4072.02 82.4 115.8±41.0D#2010 1.34 78.8 116.2±44.1E#2013 1.60 75.0 119.0±44.2F#2015 2.07 81.0 125.4±46.8G#2020 2.90 85.1 134.9±44.6H#2025 2.32 54.6 146.3±50.4*脂質(zhì)體成分EPC/HEPC/膽固醇/MPEG(32/8/12/2)#脂質(zhì)體成分EPC/HEPC/膽固醇/MPEG(16/3/6/2)實施例6本實施例探討單一成分磷脂的脂質(zhì)體，其藥物/脂質(zhì)比例與包覆率的關(guān)系。
首先，依照類似實施例1的方法制備僅包含不飽和PC或僅包含飽和PC的脂質(zhì)體。結(jié)果如表3所示。單以卵磷脂酰膽堿(egg PC；EPC)制成的脂質(zhì)體，只有當(dāng)紫杉醇/脂質(zhì)摩爾比在3摩爾％時，其包覆率高于90％；然而，當(dāng)紫杉醇/脂質(zhì)摩爾比升至7摩爾％時，紫衫醇包覆率降至40％。
相反地，單以HEPC制成的脂質(zhì)體無法包覆多于3摩爾％的紫衫醇。當(dāng)藥物/脂質(zhì)比為3摩爾％時，其紫衫醇包覆率為40-60％之間。
表3脂質(zhì)體組成 [脂質(zhì)] 藥物/脂質(zhì)[紫衫醇]包覆率 平均粒徑(mM)(mole％) (mg/ml) (％)±SD(nm)EPC/膽固醇/MPEG-PE203 0.45 88.4 142.9±55.4(20/8/1) 207 0.52 42.1 174.1±71.3HEPC/膽固醇/MPEG- 203 0.35 68.1 93.2±36.1PE(10/1/1)HEPC/DPPG/膽固醇 603 1.20 34.0 118.9±45.2(7/3/1)實施例7本實施例是脂質(zhì)體成分與儲存穩(wěn)定度關(guān)系的探討。
在制備完成后，包覆紫衫醇的脂質(zhì)體隨即儲存于4℃。紫衫醇結(jié)晶與大粒徑脂質(zhì)體是以0.2μm的CA-膜過濾除去。紫衫醇濃度以HPLC測得。結(jié)果列于表4。在高紫衫醇/脂質(zhì)比例時，依照本發(fā)明較佳實施例的包含EPC及HEPC的脂質(zhì)體較以單一EPC或HEPC制成的微脂質(zhì)體為穩(wěn)定。如表4所示，在儲存一個月之內(nèi)，包覆率變化小于15％。
表4微脂粒組成 藥物/脂質(zhì) [脂質(zhì)] [紫衫醇]#包覆率(％)*(mole％)(mM)(mg/ml)14天30天60天EPC/膽固醇/MPEG3 20 0.49 89.377.9(20/8/1) 7 20 0.45 67.835.4HEPC/膽固醇3 20 0.32 76.763.6/MPEG(10/1/1)EPC/HEPC/膽固醇3 40 0.77 108.4- 73.9/MPEG(32/8/12/2)EPC/HEPC/膽固醇7 20 0.92 105.3 97.9104.6/MPEG(16/3/6/2)7 40 2.02 104.4 97.3105.01020 1.34 - 90.099.51320 1.60 - 93.798.51520 2.07 83.786.983.11520 2.07 94.209.786.01520 1.99 95.597.960.32020 2.90 88.791.785.52520 2.32 - 99.673.3#第零天時，紫衫醇的濃度。*包覆率＝第N天的[紫衫醇]/第零天的[紫衫醇]。實施例8本實施例探討其他的長期儲存方法。
在制備完成后，包覆紫衫醇的脂質(zhì)體隨即冷凍儲存于-20℃或-75℃。脂質(zhì)體粒徑大小與紫衫醇濃度皆定期測量。結(jié)果顯示，在-75℃下，包覆紫衫醇的脂質(zhì)體可以維持穩(wěn)定達(dá)3個月。此外，脂質(zhì)體可以先經(jīng)冷凍干燥(lyophilization)后，于4℃下以粉狀儲存數(shù)個月。實施例9根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)除了可以包覆高含量的紫衫醇，也可用以高含量包覆其他的疏水性藥物。
為制成藥物/脂質(zhì)摩爾比為1/3的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，先添加2mg的全反式視黃酸(all-trans retionic acid)(ATRA)于包含下列組成的醇類混合物中12.2mg/ml EPC，2.28mg/ml HSPC，2.28mg/ml膽固醇，5.4mg/ml MPEG-DSPE。當(dāng)然，醇類混合物中還可以包括其他抗氧化劑，或以其他膽固醇衍生物替代膽固醇，所以本發(fā)明雖以上述配方為例，但不應(yīng)限定于此。上述添加ATRA的醇類混合物再于真空中進(jìn)行蒸發(fā)，以除去溶劑并于圓底燒瓶的瓶壁形成脂質(zhì)膜。蒸發(fā)結(jié)束后，再加入1ml 10％(w/v)庶糖(sucrose)于圓底燒瓶進(jìn)行水合(hydration)。大粒徑多層(multilamellar)脂質(zhì)體懸浮后，經(jīng)超音波(sonication)震蕩10分鐘后，就會形成小粒徑的單層(unilamellar)脂質(zhì)體。含有ATRA的脂質(zhì)體接著以0.2μm CA-膜過濾以滅菌。再以激光顆粒徑分析儀以分析其粒徑大小。經(jīng)計算得知，其平均粒徑約為160nm。接著，過濾后ATRA在脂質(zhì)體中的濃度以HPLC測出，約為1.9mg/ml，因此，包埋率(incorporation efficiency)高于90％，且ATRA/脂質(zhì)比例可達(dá)33摩爾％。
因此，可以得知利用本發(fā)明的優(yōu)選實施例的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，可以高含量包覆ATRA。由此結(jié)果，熟習(xí)本技藝者可以知道利用本發(fā)明的優(yōu)先實施例的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)應(yīng)同樣可高含量包覆所有的視黃酸及其衍生物，并且，其藥物/磷脂的比例可以提高到約1摩爾％至40摩爾％。實施例10本實施例探討以依照本發(fā)明優(yōu)選實施方案的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)以包覆高含量的喜樹堿(camptothecin)的制程。
為制成藥物/脂質(zhì)摩爾比為3/10的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，先添加2mg的喜樹堿于包含下列組成的醇類混合物中12.2mg/ml EPC，2.28mg/ml HSPC，2.28mg/ml膽固醇，5.4mg/ml MPEG-DSPE。當(dāng)然，醇類混合物中也可以包括其他抗氧化劑，或以其他膽固醇衍生物替代膽固醇，所以本發(fā)明雖以上述配方為例，但不應(yīng)限定于此。上述添加喜樹堿的醇類混合物再于真空中進(jìn)行蒸發(fā)，以除去溶劑并于圓底燒瓶的瓶壁形成脂質(zhì)膜。蒸發(fā)結(jié)束之后，再加入1ml10％(w/v)蔗糖于圓底燒瓶進(jìn)行水合。大粒徑多層脂質(zhì)體懸浮后，經(jīng)超音波震蕩10分鐘后，就會形成小粒徑的單層脂質(zhì)體。再以激光顆粒尺寸分析儀以分析其粒徑大小。經(jīng)計算得知，其平均粒徑約為148nm。制備過程中并無肉眼可見的沉淀出現(xiàn)，其喜樹堿/脂質(zhì)比例可達(dá)30摩爾％。
因此，可以得知利用本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，可以高含量包覆喜樹堿。藉此結(jié)果，熟習(xí)本技藝者可以知道利用本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)應(yīng)同樣可高含量包覆喜樹堿的衍生物，并且，其藥物/磷脂的比例可以提高到約40摩爾％。
由實施例1，2，9，10，可以得知，依照本發(fā)明的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)可以分別高含量包覆紫衫醇及其衍生物，視黃酸及其衍生物，以及喜樹堿及其衍生物。但本發(fā)明不應(yīng)限定于此，依照本發(fā)明的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)應(yīng)可高含量包覆紫衫醇及其衍生物，視黃酸及其衍生物，以及喜樹堿及其衍生物中任何兩種以上藥物的組合。實施例11本實施例探討動物實驗的結(jié)果。
四組五至六周大的公I(xiàn)CR老鼠接受靜脈注射，注射液是傳統(tǒng)的紫衫醇(cremophore EL/ethanol＝1/1)或劑量的包覆20mg/kg及40mg/kg紫衫醇的脂質(zhì)體。持續(xù)記錄各組中存活的老鼠的反應(yīng)超過14天。結(jié)果示于表5，相較于根據(jù)本發(fā)明的包覆高含量紫衫醇的脂質(zhì)體投藥系統(tǒng)，傳統(tǒng)紫衫醇投藥系統(tǒng)具有顯著的毒性。
表5劑量(mg/kg)存活老鼠傳統(tǒng)紫衫醇劑型 20 4/540 0/5脂質(zhì)體紫衫醇劑型 40 8/8發(fā)明效果依照本發(fā)明實施例的脂質(zhì)體系統(tǒng)可以包埋疏水性物質(zhì)，例如紫衫醇，高達(dá)20摩爾(藥物/脂質(zhì)之比)，在4℃下儲存超過一個月，包覆效率(encapsulationefficiency)及粒徑變化(particle size variation)不超過15％，若使用7摩爾％的配方，與前相同儲存條件下則至少穩(wěn)定兩個月以上。
因此，相對于過去已發(fā)表的紫杉醇-脂質(zhì)體配方，本發(fā)明明顯地超越過去配方中紫杉醇對磷脂比例的最大限制，提高單位磷脂所能攜帶紫杉醇的量達(dá)到20摩爾％。
主要原因是本配方使用兩種不同物理性質(zhì)(相轉(zhuǎn)移溫度)的磷脂的組合，在脂質(zhì)體膜上形成不互溶不連續(xù)的分相，防止或減緩紫杉醇自行聚集而結(jié)晶析出的趨勢，即使高含藥量的脂質(zhì)體也能維持一定的穩(wěn)定性，根據(jù)這原理及配方，也可用于其他在脂質(zhì)體劑型中易于結(jié)晶析出的疏水性藥物，如A酸(全反式視黃酸)，在脂質(zhì)體中可包埋約33摩爾％的高比例，而過去的配方最高多為20摩爾％左右。
綜上所述，雖然本發(fā)明已以優(yōu)選實施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟習(xí)本技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍，當(dāng)可作各種的更動與修飾，因此本發(fā)明的保護范圍當(dāng)視所附的權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種可包覆高含量疏水性物質(zhì)的脂質(zhì)體，至少包括第一磷脂；第二磷脂；疏水性物質(zhì)；以及形成脂質(zhì)體所需的成分；其中該第一磷脂與第二磷脂在脂質(zhì)體中分成兩相。
2.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其中，該第一磷脂的相轉(zhuǎn)移溫度大于其特定的投藥或儲存的最高溫度；該第二磷脂的相轉(zhuǎn)移溫度小于其特定的投藥或儲存的最低溫度。
3.如權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體，其中，該第一磷脂是一種氫化天然磷脂或長碳鏈飽和的磷脂。
4.如權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體，其中，該第一磷脂選自磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)及磷脂酰乙醇胺(PE)。
5.如權(quán)利要求4所述的脂質(zhì)體，其中該磷脂酰膽堿選自氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)，氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，二棕櫚?；字Ｄ憠A(DPPC)及二硬脂?；字Ｄ憠A(DSPC)。
6.如權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體，其中，該第二磷脂是一種不飽和磷脂，或短碳鏈飽和的磷脂。
7.如權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體，其中，第二磷脂選自磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)及磷脂酰乙醇胺(PE)。
8.如權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)體，其中該磷脂酰膽堿選自卵磷脂酰膽堿(EPC)，大豆磷脂酰膽堿(SPC)，人工合成不飽和磷脂酰膽堿，天然不飽和磷脂酰膽堿，二肉豆蔻酰基磷脂酰膽堿(DMPC)，以及二月桂酰基磷脂酰膽堿(DLPC)。
9.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性物質(zhì)是一疏水性藥物。
10.如權(quán)利要求9所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是紫杉醇和/或其衍生物。
11.如權(quán)利要求10所述的脂質(zhì)體，其中，紫杉醇及/或其衍生物與磷脂之比(藥物/磷脂)約為0.5摩爾％至25摩爾％。
12.如權(quán)利要求9所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是視黃酸及/或其衍生物。
13.如權(quán)利要求12所述的脂質(zhì)體，其中，視黃酸及/或其衍生物與磷脂之比(藥物/磷脂)約為0.5摩爾％至40摩爾％。
14.如權(quán)利要求9所述的脂質(zhì)體，其中該疏水性藥物是喜樹堿及/或其衍生物。
15.如權(quán)利要求14所述的脂質(zhì)體，其中，喜樹堿及/或其衍生物與磷脂之比(藥物/磷脂)約為0.5摩爾％至30摩爾％。
16.如權(quán)利要求9所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是選自紫衫醇及其衍生物，視黃酸及其衍生物，以及喜樹堿及其衍生物。
17.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其中，該形成脂質(zhì)體所需的成分選自親水高分子修飾的磷脂如甲氧基聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?MPEG-DSPE)，膽固醇，膽固醇衍生物以及抗氧化劑。
18.一種可包覆高含量疏水性物質(zhì)的脂質(zhì)體，至少包括第一磷脂酰膽堿；第二磷脂酰膽堿；疏水性物質(zhì)；以及形成脂質(zhì)體所需的成分；其中該第一磷脂酰膽堿與該第二磷脂酰膽堿在脂質(zhì)體中分成兩相。
19.如權(quán)利要求18所述的脂質(zhì)體，其中，該第一磷脂酰膽堿的相轉(zhuǎn)移溫度大于其特定的投藥或儲存的最高溫度；該第二磷脂酰膽堿的相轉(zhuǎn)移溫度小于其特定的投藥或儲存的最低溫度。
20.如權(quán)利要求19所述的脂質(zhì)體，其中，該第一磷脂酰膽堿是一種氫化天然磷脂酰膽堿或長碳鏈飽和的磷脂酰膽堿。
21.如權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)體，其中，該磷脂酰膽堿選自氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)、氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，二棕櫚?；字Ｄ憠A(DPPC)及二硬脂酰基磷脂酰膽堿(DSPC)。
22.如權(quán)利要求19所述的脂質(zhì)體，其中，該第二磷脂酰膽堿是一種不飽和磷脂酰膽堿，或短碳鏈飽和的磷脂酰膽堿。
23.如權(quán)利要求22所述的脂質(zhì)體，其中，該磷脂酰膽堿選自卵磷脂酰膽堿(EPC)，大豆磷脂酰膽堿(SPC)，人工合成不飽和磷脂酰膽堿，天然不飽和磷脂酰膽堿，二肉豆蔻酰基磷脂酰膽堿(DMPC)，以及二月桂?；字Ｄ憠A(DLPC)。
24.如權(quán)利要求18所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性物質(zhì)是一疏水性藥物。
25.如權(quán)利要求24所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是紫杉醇及/或其衍生物。
26.如權(quán)利要求25所述的脂質(zhì)體，其中，紫杉醇及/或其衍生物與磷脂之比(藥物/磷脂)約為0.5摩爾％至25摩爾％。
27.如權(quán)利要求24所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是視黃酸及/或其衍生物。
28.如權(quán)利要求27所述的脂質(zhì)體，其中，視黃酸及/或其衍生物與磷脂之比(藥物/磷脂)約為0.5摩爾％至40摩爾％。
29.如權(quán)利要求24所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是喜樹堿及/或其衍生物。
30.如權(quán)利要求29所述的脂質(zhì)體，其中，喜樹堿及/或其衍生物與磷脂之比(藥物/磷脂)約為0.5摩爾％至30摩爾％。
31.如權(quán)利要求24所述的脂質(zhì)體，其中，該疏水性藥物是選自紫衫醇及其衍生物，視黃酸及其衍生物，以及喜樹堿及其衍生物。
32.如權(quán)利要求18所述的脂質(zhì)體，其中該形成脂質(zhì)體所需的成分選自親水高分子修飾的磷脂，如甲氧基聚乙二醇-二硬脂?；字；掖及?MPEG-DSPE)，膽固醇，膽固醇衍生物以及抗氧化劑。
全文摘要
一種可包覆高含量疏水性物質(zhì)的脂質(zhì)體。此脂質(zhì)體包括兩種相轉(zhuǎn)移溫度不同的磷脂，例如飽和磷脂酰膽堿與不飽和磷脂酰膽堿，疏水性物質(zhì)，膽固醇和/或其衍生物，及親水高分子修飾的磷脂，如MPEG－DSPE。
文檔編號A61K9/127GK1413575SQ0113593
公開日2003年4月30日 申請日期2001年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月25日
發(fā)明者甘霈, 王藹君, 陳宛珂, 曹智菀 申請人:財團法人工業(yè)技術(shù)研究院