專利名稱：一種造血因子及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)及其應(yīng)用，特別是涉及一種具有促進造血機能的蛋白質(zhì)及其應(yīng)用。
骨髓移植是各種血液腫瘤、部分實體瘤、再生不良性貧血癥、重度地中海型貧血癥以及一些先天性免疫缺乏癥或代謝性疾病的根本治療方法。近年來世界上接受骨髓移植的病患逐年增加，顯示骨髓移植已經(jīng)成為目前治療的趨勢。1993年以來外周血造血干細胞移植迅速崛起和發(fā)展。采集外周血和臍帶血造血干細胞簡單、安全，避免了全身麻醉采集骨髓的痛苦，容易為病人所接受；移植后重建造血功能早而迅速；感染、出血癥狀輕，對癥治療少；住院時間短，節(jié)省住院開支，尤其重要的是臍帶血中含有更加原始的造血干細胞，不僅具有更強的增殖和分化的潛力還具有更低的配型要求，所以目前臍帶血造血干細胞移植大有取代骨髓移植的趨勢。
放化療后白細胞-中性粒細胞、紅細胞和血小板數(shù)量都會大大降低。白細胞-中性粒細胞水平降低可能會導致病人感染，臨床治療藥物主要是rhG-CSF和rhGM-CSF，它們的作用主要是通過短時間內(nèi)增加白細胞數(shù)量來提高機體抗感染的能力；放化療后短期的血小板減少癥是造成病人死亡的一個重要原因，IL-11是臨床常用的促血小板生成的因子；EPO用于增加紅細胞的數(shù)量。為了達到綜合的造血效果，特別是在骨髓和外周血造血干細胞移植中，臨床上往往要同時使用幾種因子，不僅大大提高了治療成本也增加了治療程序和風險。另外，許多腫瘤細胞都有G-CSF和GM-CSF的受體，所以注射這些因子反而有導致放化療后殘存的癌細胞的增殖，而使腫瘤復發(fā)率升高的潛在危險。
本發(fā)明所提供的造血因子，它的氨基酸殘基序列為N-MYGFGG-C。
上述由六個氨基酸殘基組成的造血因子可以用常規(guī)的化學合成方法獲得，也可以用常規(guī)的生物學方法進行合成。合成的造血因子可以用HPLC-C18進行純化，純度可以達到95％以上。
本發(fā)明的另一個目的是提供氨基酸殘基序列為N-MYGFGG-C的造血因子在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
以本發(fā)明的造血因子為活性成分，可以制成促進造血機能恢復、治療貧血、促進骨形成、造血干細胞移植體外動員劑、促進干細胞增殖和分化、抗疲勞，特別是用于運動員體力恢復的藥物。
為了應(yīng)用方便，本發(fā)明的藥物中還可以加有醫(yī)學上可接受的載體和輔劑。本發(fā)明藥物的劑型是多種多樣的，可以根據(jù)不同的需要，制成注射劑、口服劑、外用制劑等多種劑型。
本發(fā)明藥物的一般用量為每天0.1-100微克/公斤體重，一般3-7天為一療程。
本發(fā)明的造血因子在體外、體內(nèi)均可促進造血干細胞的增殖和分化。目前包括臨床實驗和公開的文獻報道，還沒有一種因子能夠象本發(fā)明的造血因子一樣具有促進各系血細胞平衡增加的造血效果。這種效果在提高了白細胞—粒細胞水平，使機體抗感染能力增強的同時還降低了血小板減少癥帶來的危險。
本發(fā)明造血因子的特點使得它具有以下的治療效果和應(yīng)用前景1)在癌瘤化療、放療引起的骨髓抑制以及放射線引起的意外損傷中，本發(fā)明的造血因子能促進放化療后癌癥病人造血機能的全面恢復。
2)骨髓移植本發(fā)明的造血因子可以在短時間內(nèi)刺激骨髓移植物的生長，這樣就能夠減少骨髓移植恢復的時間，并縮短骨髓移植之前放化療后血小板減少癥的時間，從而減少患者被感染的機會、減少住院時間以及降低死亡率；另外，它還是骨髓移植、外周血移植以及臍帶血造血干細胞移植最理想的干細胞動員劑和體外擴增劑。
3)用于治療腎性貧血、慢性癌性貧血、再生障礙性貧血和其它各種貧血病。
4)提高運動員體能水平和促進體能恢復本發(fā)明的造血因子能促進各種血液細胞的平衡增加，其中包括紅細胞，因此對于提高運動員體能水平和促進體能恢復有幫助，并且用量很少。
5)治療骨質(zhì)疏松和促進骨折愈合本發(fā)明的造血因子具有促進骨形成和增加骨密度的作用，因此也可以用于骨質(zhì)疏松的治療。由于本發(fā)明的造血因子直接作用于成骨細胞，因此不會產(chǎn)生其它激素類藥物帶來的副作用。由于本發(fā)明的造血因子對成骨和骨髓修復的促進作用，在促進骨折愈合、減輕骨痛等方面是一個很好的候選藥物。
6)在愛滋病中的應(yīng)用能糾正骨髓抑制藥物所致的白細胞減少及貧血。
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施例做進一步說明。
圖2顯示本發(fā)明造血因子刺激爆炸式紅細胞系集落形成圖3顯示本發(fā)明造血因子刺激粒細胞巨噬細胞系集落形成圖4顯示本發(fā)明造血因子刺激巨核細胞系集落形成圖5顯示本發(fā)明造血因子刺激CD34+類群細胞的擴增表1本發(fā)明的造血因子促進化療后小鼠外周血中各種血細胞數(shù)量平衡增加

實施例2、本發(fā)明造血因子促進人臍帶血造血干細胞的非定向分化和增殖CD34+細胞從臍帶血中用淋巴細胞分離液分離，加入陽性對照和不同濃度的本發(fā)明造血因子，培養(yǎng)約一周后，發(fā)現(xiàn)紅系、粒系和巨噬細胞細胞系祖細胞集落均達到或超過陽性對照，結(jié)果如

圖1-4所示，其中，圖1中1-8組用本發(fā)明造血因子作為細胞培養(yǎng)的刺激因子，濃度依次為10-12-10-5M，9組為陽性對照(用EPO處理)；圖2中1-8組用本發(fā)明造血因子作為細胞培養(yǎng)的刺激因子，濃度依次為10-12-10-5M，9組為陽性對照(用EPO處理)；圖3中1-8組用本發(fā)明造血因子作為細胞培養(yǎng)的刺激因子，濃度依次為10-12-10-5M，9組為陽性對照(用G-CSF處理)；圖4中1-8組用本發(fā)明造血因子作為細胞培養(yǎng)的刺激因子，濃度依次為10-12-10-5M，9組為陽性對照(用IL-11處理)從圖中可以看出，臍帶血造血干細胞在體外培養(yǎng)過程中加入不同濃度的本發(fā)明造血因子，可以刺激CD34+細胞的增殖。另外一部分樣品用流氏細胞儀檢測CD34+細胞的百分率，單克隆抗體采用鼠抗人CD34+PE抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)臍帶血造血干細胞中CD34+細胞的數(shù)目在加入本發(fā)明造血因子組5天后擴增了13.4倍，而IL3+IL11+IL6+SCF+EPO聯(lián)合使用組擴增效率為15.6倍，兩者幾乎相同，遠遠高于IL3組的5.5倍和G-CSF組的8.6倍(如圖5所示，其中混合組的細胞因子包括IL-3、IL-6、IL-11、SCF、EPO；加入本發(fā)明造血因子的實驗組不同劑量分別為10-11M、10-8M、10-5M。)，而且10天后這幾個因子聯(lián)合使用組的CD34+細胞已經(jīng)檢測不到，CD34+細胞的數(shù)目為原始數(shù)目0.34倍，說明經(jīng)這幾個因子擴增后的造血干細胞和早期的祖細胞幾乎全部分化，而加入本發(fā)明造血因子組依然可以檢測到1.5倍水平的CD34+細胞，說明單獨使用本發(fā)明造血因子就可以達到幾個因子合用的效果，甚至更好，這個結(jié)果顯示了本發(fā)明造血因子在骨髓移植、臍帶血移植、骨髓抑制癥等的治療中潛在的應(yīng)用價值。
實施例3、游泳耐力及缺氧條件下的存活時間小鼠隨機分組，對照組注射生理鹽水，給藥組注射本發(fā)明造血因子，連續(xù)5天，末次給予受試物3天后，置小鼠在游泳箱中游泳，水深不少于30cm，水溫25±0.5，鼠尾根部負荷5％體重的鉛皮。記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間，作為小鼠游泳時間(min)。另外，于末次給藥后第3天分別放入裝有堿石灰10g的250ML密閉廣口瓶內(nèi)，記錄小鼠的存活時間作為缺氧能力實驗，結(jié)果如表2所示，從表中可以看出，給藥組能明顯提高小鼠常壓下的抗缺氧能力，并且能顯著延長小鼠的負重游泳時間，具有抗疲勞作用(P＜0.01)。
表2本發(fā)明造血因子對小鼠耐缺氧及抗疲勞能力的影響(n＝10)

與對照組比較1P＜0.01，2P＜0.0權(quán)利要求
1.一種造血因子，它的氨基酸殘基序列為N-MYGFGG-C。
2.以權(quán)利要求1所述的造血因子為活性成分的促進造血機能恢復的藥物。
3.以權(quán)利要求1所述的造血因子為活性成分的治療貧血的藥物。
4.以權(quán)利要求1所述的造血因子為活性成分的促進骨形成的藥物。
5.以權(quán)利要求1所述的造血因子為活性成分的用做造血干細胞移植體外動員劑的藥物。
6.以權(quán)利要求1所述的造血因子為活性成分的用于抗疲勞的藥物。
7.權(quán)利要求1的造血因子在制造促進造血機能恢復的藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1的造血因子在制造治療貧血的藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1的造血因子在制造用做造血干細胞移植體外動員劑中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1的造血因子在制造抗疲勞藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明的名稱為一種造血因子及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的是提供一種效果顯著的造血因子。本發(fā)明所提供的造血因子，它的氨基酸殘基序列為N－MYGFGG－C。以本發(fā)明的造血因子為活性成分，可以制成促進造血機能恢復、治療貧血、促進骨形成、造血干細胞移植體外動員劑、促進干細胞增殖和分化、抗疲勞的藥物，具有重要意義和廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號A61P7/06GK1427011SQ0114480
公開日2003年7月2日 申請日期2001年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月20日
發(fā)明者朱蕾 申請人:朱蕾