專利名稱：有藥學(xué)活性的異吲哚啉衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能夠降低腫瘤壞死因子α(TNFα)的水平的非多肽異吲哚啉(isoindoline)衍生物及其引起的疾病的治療。阻礙血管生成的化合物在癌癥、炎癥、自體免疫疾病等的治療方面很有用。例如，選擇性抑制TNFα的化合物在炎癥的治療以及氣管平滑肌的放松方面很有用，并且具有最小的副作用，如心血管效應(yīng)或抗血小板效應(yīng)。本發(fā)明也涉及使用該化合物的藥物組合物和治療方法。
背景技術(shù)：
腫瘤壞死因子α(TNFα)最初是單核巨噬細(xì)胞在免疫刺激原的作用下產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子。把它施用到動(dòng)物或人體時(shí)，會(huì)導(dǎo)致發(fā)炎、發(fā)熱、心血管效應(yīng)、出血、凝結(jié)以及與急性感染和休克狀態(tài)相似的急性反應(yīng)。在一些病理?xiàng)l件下會(huì)過量或無節(jié)制地表達(dá)TNFα，這包括內(nèi)部血毒癥和/或中毒性休克癥狀{Tracey et al.，Nature 330，662-664(1987)，and Hinshaw et al.，Circ.Shock 30，279-292(1990)}，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克勞氏病(Crohn’s disease)、IBD、惡質(zhì)病{Dezube et al.，Lancet，335(8690)，662(1990)}，從病人肺部測(cè)得TNFα濃度超過12000pg/mL的成人呼吸困難綜合癥ARDS{Millar et al.，Lancet 2(8665)，712-714(1989))。全身灌輸重組TNFα也會(huì)導(dǎo)致ARDS的典型變化{Ferral-Ballviera et al.，Arch.Surg.124(12)，1400-1405(1989)}。
TNFα看起來與骨質(zhì)吸收疾病相關(guān)，包括關(guān)節(jié)炎。白細(xì)胞在激活以后會(huì)產(chǎn)生骨質(zhì)吸收，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明TNFα在其中起作用{Bertoliniet al.，Nature 319，516-518(1986)，and Johnson et al.，Endocrinology124(3)，1424-1427(1989)}。還發(fā)現(xiàn)TNFα刺激骨質(zhì)吸收，并在體外和體內(nèi)通過刺激造骨細(xì)胞的形成和活化并結(jié)合造骨功能來抑制骨骼形成。雖然TNFα可能與骨質(zhì)吸收疾病相關(guān)，包括關(guān)節(jié)炎，一個(gè)最引人注目的聯(lián)系是腫瘤或宿主組織產(chǎn)生的TNFα與惡性血鈣過多之間的聯(lián)系{Calci.Tissue Int.(US)46(Suppl.)，S3-10(1990)}。在移植與宿主反應(yīng)中，提高的血清TNFα水平已經(jīng)與急性同種骨髓移植并發(fā)癥聯(lián)系起來{Holler et al.，Blood，75(4)，101l-1016(1990)}。
腦型瘧疾是一種與高血水平TNFα相聯(lián)系的致命過急神經(jīng)綜合癥，也是瘧疾病人最常發(fā)生的嚴(yán)重并發(fā)癥。血清TNFα水平直接與疾病的嚴(yán)重程度和急性瘧疾發(fā)作病人的預(yù)后相關(guān){Grau et al.，N.Engl.J.Med.320(24)，1586-1591(1989)}。
無節(jié)制的血管生成是病態(tài)的，并且維持多種新型和非新型疾病的發(fā)展，比如固態(tài)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移、關(guān)節(jié)炎、一些眼科疾病、牛皮癬等。參見Moses et al.，1991，Biotech.9630-634；Folkman et al.，1995，N.Engl.J.Med.，3331757-1763；Auer-bach et al.，1985，J.Microvasc.Res.29401-411；Folkman，1985，Advances in Cancer Research，eds.Kleinand Weirnhouse，Academic Press，New York，pp.175-203；Patz，1982，Am.J.Opthalmol.94715-743；Folkman et al，1983，Science 221719-725；and Folkman and Klagsbrun，1987，Science 235442-447。而且，維持角膜、晶狀體、有隔片的網(wǎng)絡(luò)(trabecular meshwork)的無血狀態(tài)對(duì)于視力以及眼科生理學(xué)都是至關(guān)重要的，參見Waltman etal.，1978，Am.J.Ophthal.85704-710 and Gartner et al.，1978，Surv.Ophthal.22291-312.
這樣，血管生成就會(huì)出現(xiàn)在不同的疾病狀態(tài)、腫瘤轉(zhuǎn)移、內(nèi)皮細(xì)胞的異常生長。無節(jié)制的血管生成病態(tài)已經(jīng)劃分為與血管生成依賴型或血管生成關(guān)聯(lián)型疾病。血管生成過程的控制可以導(dǎo)致這些條件的緩解。
研究表明，與血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、入侵相關(guān)的血管生成組分部分地受多肽生長因子的調(diào)節(jié)。暴露于含有合適的生長因子的培養(yǎng)基中的內(nèi)皮細(xì)胞可以誘導(dǎo)引起一些或者所有的血管生成反應(yīng)。多肽以及體外內(nèi)皮生長促進(jìn)活性核酸的(nclude acidic)和基本的纖維原細(xì)胞生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子α和β，血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，粒細(xì)胞集落刺激因子，IL-8，肝細(xì)胞生長因子，多育曲菌素(proliferin)，血管內(nèi)皮生長因子和胎盤生長因子。Folkman et al.，1995，N.Engl.J.Med.，3331757-1763。
抑制影響了自然發(fā)生的血管生成內(nèi)生刺激因子和抑制劑之間的平衡的主導(dǎo)地位。Rastinejad et al，1989，Cell 56345-355。在這些例子中，在通常的生理?xiàng)l件下發(fā)生了新血管化，比如在傷口愈合、器官再生、胚胎發(fā)展和婦女生產(chǎn)過程中，血管生成受到嚴(yán)格的調(diào)節(jié)和時(shí)間、空間上的界定。在病態(tài)血管生成條件下，比如固體腫瘤生長，這些控制失效了。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的血管生成是由TNFα介導(dǎo)。Leibo-vichet al.{Nature，329，630-632(1987)}的研究表明，很低劑量的TNFα在體內(nèi)誘導(dǎo)鼠角膜毛細(xì)血管的生成和雞尿囊絨膜的生成，TNFα也可能誘導(dǎo)炎癥、傷口愈合、腫瘤生長過程中的血管生成。
TNFα產(chǎn)生也獨(dú)立地與癌癥條件相關(guān)聯(lián)，尤其是誘導(dǎo)細(xì)胞{Chinget al.，BRIT.J.Cancer，(1955)72，339-343，and Koch，Progress inMedicinal Chemistry，22，166-242(1985)}。無論是否與TNFα產(chǎn)生相關(guān)，血管生成在固體腫瘤形成和轉(zhuǎn)移中占顯著地位，并且發(fā)現(xiàn)血管生成因子與一些固體腫瘤相關(guān)，比如橫紋肌肉瘤、眼癌、母羊惡質(zhì)瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、骨肉瘤。血管生成在其中起重要作用的腫瘤包括固體腫瘤和良性腫瘤，比如聽覺神經(jīng)瘤、纖維神經(jīng)瘤、沙眼、化膿肉芽瘤。不依賴于它與TNFα產(chǎn)生的作用，阻止血管生成可以抑制這些腫瘤的生長和這些腫瘤存在所導(dǎo)致的動(dòng)物損傷。血管生成已經(jīng)與血生腫瘤相聯(lián)系，比如白血病和一些急性或慢性新骨髓疾病。在這些情況下，發(fā)生無節(jié)制的白血細(xì)胞的擴(kuò)增，通常伴隨著貧血、削弱的血液凝結(jié)、以及淋巴結(jié)、肝、脾的增大。
血管生成也與腫瘤遷移有關(guān)。這樣在腫瘤血管化過程中發(fā)生血管刺激，允許腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液并循環(huán)到全身各處。當(dāng)腫瘤細(xì)胞離開初始位置并定位于第二遷移位點(diǎn)以后，必須在新腫瘤能夠生長和擴(kuò)增以前進(jìn)行血管生成。
人體內(nèi)所有類型的細(xì)胞都可以轉(zhuǎn)化成良性或惡性腫瘤細(xì)胞。最經(jīng)常發(fā)生腫瘤的位置是肺，然后是結(jié)腸直腸、乳腺、前列腺、膀胱、胰腺和卵巢。其他主要的癌癥類型包括白血病，中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、包括腦癌，黑素瘤，紅白血病，子宮癌，和頭、頸癌。
TNFα在慢性肺炎病中也起一定的作用。硅塵的積累導(dǎo)致硅肺病，它是一種因纖維化反應(yīng)導(dǎo)致的呼吸功能衰竭病。在鼠實(shí)驗(yàn)中，TNFα的抗體可以完全阻止硅肺病。{Pignet，et al.，Nature，344245-247(1990)}。在硅和石棉導(dǎo)致的纖維化動(dòng)物模型中，已經(jīng)表明高水平的TNFα表達(dá)(在血清和分離的巨噬細(xì)胞中){Bis-sonnette et al.，Inflammation 13(3)，329-339[(1989)]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與來自普通供給者相比，肺肉瘤病人的肺泡巨噬細(xì)胞可以自發(fā)產(chǎn)生大量的TNFα{Baughman et al.，J.Lab.Clin.Med.[115(1)，]36-42(1990)}。
TNFα在再灌注(稱作再灌注損傷)引起的炎癥反應(yīng)中也有所表現(xiàn)，也是導(dǎo)致失血后的組織損傷的主要原因{Vedder et al.，PNAS}87，2643-2646(1990)}。TNFα也轉(zhuǎn)變內(nèi)皮細(xì)胞的屬性并具有不同的前凝血?jiǎng)┗钚?，比如提高組織因子前凝血?jiǎng)┗钚?、抑制抗凝血?jiǎng)┑鞍證途徑以及減少血栓調(diào)節(jié)素的表達(dá){Sherry et al.，J.Cell Biol.107，1269-1277(1988)}。TNFα在產(chǎn)生早期就有前炎癥活性(在炎癥反應(yīng)的初始階段)，這使它成為一些重要的紊亂中的組織損傷的中介者，包括但是不限于心肌梗塞、中風(fēng)、周期性休克。TNFα介導(dǎo)的分子吸附可能具有某種重要性，比如細(xì)胞間的分子吸附(ICAM)或者內(nèi)皮白細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞上的分子吸附(ELAM){Munro et al.，Am.J Path.135(I)，121-132(1989)}。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TNFα的單克隆抗體對(duì)TNFα的阻遏對(duì)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎{Elliot et al.，Int.J.Pharmac.1995 17(2)，141-145}和克勞氏病{VonDullemen et al.，GASTROENTEROLOGY，1995 109(I)，129-135}的益處。
而且，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TNFα是逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制的潛在啟動(dòng)子，包括HIV-1的啟動(dòng){Duh et al.，Proc.Nat.Acad.SCI.86，5974-5978(1989)；}；Poll et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.87，782-785(1990)；Monto etal.，Blood 79，2670(1990)；Clouse et al.，J.IMMUNOL.142，431-438(1989)；Poll et al.，AIDS Res.Hum.Retrovirus，191-197(1992)}。T淋巴細(xì)胞受到人免疫缺陷病毒(HIV)的感染以后導(dǎo)致AIDS，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了至少3種HIV，即HIV-1、HIV-2和HIV-3。HIV感染的結(jié)果是，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫受到破壞和感染，人顯示出嚴(yán)重的隨機(jī)感染和/或不尋常的腫瘤。HIV進(jìn)入T淋巴細(xì)胞需要T淋巴細(xì)胞的作用。其他病毒，比如HIV-1、HIV-2在T淋巴細(xì)胞作用以后感染T淋巴細(xì)胞，并且這些病毒蛋白的表達(dá)和/或復(fù)制是由這些T淋巴細(xì)胞活性來介導(dǎo)或控制的。一旦一個(gè)活化的T淋巴細(xì)胞受到HIV的感染，該T淋巴細(xì)胞必須繼續(xù)保持活性狀態(tài)以允許HIV基因的表達(dá)和/或HIV復(fù)制。研究表明，在活化的T細(xì)胞介導(dǎo)的HIV蛋白表達(dá)和/或病毒復(fù)制中有細(xì)胞因子，尤其是TNFα，通過維持T淋巴細(xì)胞的活性來起作用。所以，對(duì)細(xì)胞因子活性的影響，比如防止或抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生，尤其是TNFα，對(duì)HIV感染的病人有助于限制HIV感染引起的T淋巴細(xì)胞的維持。
HIV感染引起的淋巴細(xì)胞的維持還暗示有單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞，比如柯弗氏(kupffer)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞。這些細(xì)胞，比如T細(xì)胞，是病毒復(fù)制的靶細(xì)胞，病毒復(fù)制的水平依賴于這些細(xì)胞的活性狀態(tài){ROSENBERG et al.，THE Immunopathogenesis of HIVInfection，Advances in Immunology，57(1989)}。研究表明，細(xì)胞因子，比如TNFα，能夠活化HIV在單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞中的復(fù)制{Poliet al.，PROC.NATL.ACAD.SCI.，87，782-784(1990)；所以，防止或抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生或活性，有助于限制HIV在T細(xì)胞的發(fā)展。其他研究表明，TNFα作為HIV體外活性的一個(gè)普通因素，已經(jīng)通過在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的核控蛋白(nuclear regulatory protein)提供了一個(gè)清楚的作用機(jī)理{Osbom，et al，PNAS 86 2336-2340}。這個(gè)事實(shí)表明，減少TNFα的合成可能對(duì)HIV感染具有抗病毒效果，通過減少轉(zhuǎn)錄從而控制病毒。
AIDS病人體內(nèi)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞系的潛伏HIV病毒的復(fù)制可以通過TNFα來減少{Folks et al.，PNAS 86，2365-2368(1989)}。通過TNFα活化細(xì)胞質(zhì)中基因調(diào)節(jié)蛋白(NFκB)的能力發(fā)現(xiàn)了一個(gè)病毒減少活性的分子模型，它能通過結(jié)合到病毒調(diào)節(jié)基因序列(LTR)來促進(jìn)HIV的復(fù)制{OSBORN et al.，PNAS 86，2336-2340(1989)}。通過病人外周血單核細(xì)胞中提高的血清TNFα和高水平的自然產(chǎn)生的TNFα，可以發(fā)現(xiàn)在AIDS相聯(lián)的惡病質(zhì)中的TNFα{Wright et al.，J.Immunol.141(1)，99-104(1988)}。TNFα在其他病毒的感染中起不同的作用，比如上述相似原因的巨細(xì)胞病毒(cytomegalia virus，CMV)、流感病毒、腺病毒、皰疹病毒家族。
核因子κB(NFκB)是多向轉(zhuǎn)錄活化子{Lenardo，et al.，CELL1989，58，227-29}。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，NFκB是一些疾病和炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄活化子，并調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平，包括但不限于TNFα，也是HIV轉(zhuǎn)錄的活化子{Dbaibo，et al.，J BIOL.Chem.1993，17762-66；Duh et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.1989，86，5974-78；Bachelerie et al.，Nature 1991，350，709-12；Boswas et al.，J Acquired Immune Deficiency Syndrome1993，6，778-786；Suzuki et al.，Biochem.And Biophys.Res.Comm.1993，193，277-83；Suzuki et al.，Biochem.And Biophys.Res.Comm.1992，189，1709-15；Suzuki et al.，Biochem.Mol.Bio.Int.1993，31(4)，693-700；Shakhov et al.，PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 1990，171，35-47；and Staal et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1990，87，9943-47}。這樣，抑制NFκB結(jié)合能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄，并且通過這種調(diào)控和其他機(jī)理對(duì)于抑制多種疾病狀態(tài)都是有用的。這里描述的化合物可以抑制核區(qū)NFκB的活性，從而有益于治療不同的疾病，包括但不限于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、其他關(guān)節(jié)炎、癌癥、膿毒性休克、膿毒病、內(nèi)毒性休克、移植宿主疾病、消瘦、克勞氏病、腸炎病、潰瘍性結(jié)腸炎、多硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、麻風(fēng)病ENL、HIV、AIDS和AIDS隨機(jī)感染。TNFα和NFκB的水平受反饋抑制。如上所述，本發(fā)明的化合物影響TNFα和NFκB的水平。
這樣減少TNFα水平可以形成許多炎癥、感染、免疫的或惡性病的有效治療方案。這包括但不限于膿毒性休克、膿毒病、內(nèi)毒性休克、血液動(dòng)力學(xué)休克、膿毒病綜合癥、后缺血再灌注損傷、瘧疾、分枝桿菌感染、腦膜炎、牛皮蘚、充血性心衰竭、纖維化病、惡病質(zhì)、移植排斥、癌癥、自動(dòng)免疫疾病、AIDS隨機(jī)感染、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、其他關(guān)節(jié)炎、克勞氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、多硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、麻風(fēng)病ENL、放射損傷、富氧肺泡損傷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及式I化合物其中標(biāo)“*”的碳原子是手性中心 在式I中，X是-C(O)-或-CH2-；R1是1～8個(gè)碳原子的烷基或-NHR3；R2是氫原子，1～8個(gè)碳原子的烷基或鹵素；R3是氫原子，1～8個(gè)碳原子的烷基，3～18個(gè)碳原子的環(huán)烷基，未被鹵代基(halo)、氨基、或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯基或已經(jīng)被鹵代基、氨基或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯基，未被鹵代基、氨基、或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯甲基或已經(jīng)被鹵代基、氨基或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯甲基，或-COR4，其中R4是氫原子，未被鹵代基、氨基、或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的或已經(jīng)被他們?nèi)〈?～8個(gè)碳原子的烷基，3～18個(gè)碳原子的環(huán)烷基，未被鹵代基、氨基、或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯基或已經(jīng)被鹵代基、氨基或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯基，未被鹵代基、氨基、或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯甲基或已經(jīng)被鹵代基、氨基或1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代的苯甲基。
本發(fā)明還涉及這些異吲哚啉的酸性鹽，它們能夠質(zhì)子化。這些鹽包括有機(jī)鹽和無機(jī)鹽，比如但不限于，鹽酸鹽、溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、甲硫酸鹽、乙酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、山梨酸鹽、烏頭酸鹽、水楊酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、embonic酸鹽、庚酸鹽等。
該化合物可以通過不同的方法制得。比如，式II所示的適當(dāng)保護(hù)的3，5-二代哌啶-2，6-二酮可以與式III所示的4-代1，3-二氫異苯基呋喃-1，3-二酮反應(yīng)，生成式IA所示的保護(hù)化合物。
在前述反應(yīng)中，R1的定義如上所述，X是-CH2-，R2是氫原子或烷基，Z和Y是保護(hù)基團(tuán)，比如芐氧羰基和鏈烷氧基。
當(dāng)X是-CH2-時(shí)，式II的哌啶-2，6-二酮與式IIIA的二代烷基安息香酸鹽反應(yīng) 式II和式IIIA所示的化合物已知。在式II的化合物中，R2‘是氫原子，它的制備方法可以是，通過使用甲醇中的氨處理氨基保護(hù)的式IIA的2-氨基-4-羥基戊二酸內(nèi)酯，生成相應(yīng)的式IIB的保護(hù)的2-氨基-4-羥基-4-羰基丁胺，它然后在乙酸中發(fā)生環(huán)化作用 當(dāng)R2‘是烷基時(shí)，可以通過使用一種二價(jià)強(qiáng)堿，比如n-丁基鋰，處理式IIA的內(nèi)酯來引入，以形成二價(jià)陰離子，然后烷基化，比如使用甲基碘?？蛇x擇地，沒有保護(hù)的內(nèi)酯IIC轉(zhuǎn)化成t-丁基酯，它然后用苯甲醛處理以得到脒IID。用堿和鹵代烷處理脒使化合物IIE的α碳原子烷化，后繼的酸處理分開了t-丁基酯和脒，該脒產(chǎn)生中間體IIF，它可以作為芐氧羰基衍生物再保護(hù)。
當(dāng)R2是鹵代基時(shí)，比如氟代基，可以通過使用二(三甲基硅烷基化)胺鈉和N-氟苯磺酰胺處理式IA或式IB化合物來引入。
去除保護(hù)基團(tuán)Y可以通過適當(dāng)?shù)乃夥磻?yīng)來達(dá)到，比如，用p-甲苯磺酸來分開alkanoyloxy基團(tuán)。

從前面所述可以看出，使用保護(hù)基團(tuán)是有好處的，包括但不限于可以轉(zhuǎn)換為目的基團(tuán)的功能基團(tuán)。這里使用的保護(hù)基團(tuán)通常不會(huì)出現(xiàn)在最終的藥用化合物中，但是在某些合成階段被特意引入以保護(hù)那些在化學(xué)處理過程中不予保護(hù)則會(huì)發(fā)生改變的基團(tuán)。這些保護(hù)基團(tuán)在隨后的合成步驟中被去除或者轉(zhuǎn)變成目的基團(tuán)，這樣帶有這些保護(hù)基團(tuán)的化合物基本上就與化學(xué)中間體具有相同的重要性(雖然一些衍生物也顯示出了生物活性)。相應(yīng)的，保護(hù)基團(tuán)的精確結(jié)構(gòu)并不關(guān)鍵。生成和去除這些保護(hù)基團(tuán)的一些反應(yīng)在許多標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)中都有所描述，包括，例如，″Protective Groups in Organic Chemistry″，Plenum Press，London and New York，1973；Greene，Th.W″Protec-tive Groups inOrganic Synthesis″，Wiley，New York，1981；″The Peptides″，Vol.I，Schrder and Lubke，Academic Press，London and New York，1965；″Methoden der organischen Chemie″，Houben-Weyl，4th Edition，Vol.15/1，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974。這些文獻(xiàn)所披露的信息在這里引用。
這樣，氨基可以通過使用能夠在溫和條件下去除的?；鶃肀Ｗo(hù)成胺基，特別是甲酸基，在羰基的1-或α-位分出的低位酰基(alkanoylgroup)，尤其是三?；热缧挛祯；?，或在其α-位被替換為羰基的低位酰基比如三氟乙?；?。
如果羰基需要保護(hù)，可以把它轉(zhuǎn)變成能夠在充分溫和的條件下選擇性去除的內(nèi)酯，而不打斷分子的目標(biāo)結(jié)構(gòu)，特別是1-12個(gè)碳原子的低烷酯，比如甲基或乙基，特別是在1-或α-位有分支，比如t-丁基；這些低烷酯在1-或2-位取代為(i)低烷氧基，比如甲氧甲基、1-甲氧乙基、乙氧甲基，(ii)低烷硫，比如甲硫甲基、1-乙硫乙基，(iii)鹵素，比如2，2，2-三氯乙基、2-溴乙基、2-碘乙氧羰基，(iv)一或兩個(gè)苯基，它們每一個(gè)都可以未發(fā)生替換，也可以進(jìn)行單-、二-、三-替換，比如，低烷如t-丁基，烷氧基如甲氧基或羥基，環(huán)如環(huán)氯或環(huán)氮，以及苯甲基、4-硝基苯甲基、二苯甲基、二-(4-甲氧基苯甲基)甲基，(v)芳酰基，如苯甲酰甲基。羰基也可以以有機(jī)甲硅烷基的形式得到保護(hù)，比如三甲基甲硅烷基乙基或三烷甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基氧羰基。
當(dāng)R1是氨基時(shí)，這里描述的反應(yīng)可以通過中間體來實(shí)現(xiàn)，其中R1是硝基，該硝基然后被催化還原(氫化)為胺。相似地，當(dāng)R1是氨基衍生物時(shí)，比如N-酰氨基或N-烷氨基，可以通過相應(yīng)的未取代氨基化合物形成。
這些化合物含有兩個(gè)手性中心(在式I中以“*”表示)，就可以形成對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體。這些化合物可以以充分手性純的(S，S)-、(S，R)-、(R，R)-、(R，S)-異構(gòu)體或者它們中的兩種或多種的混合物來施用，這都在本發(fā)明的范圍內(nèi)?；旌衔锟梢赃@樣使用，也可以使用手性吸附層析的物理方法分離成它們各自的異構(gòu)體。同時(shí)，各自的異構(gòu)體也可以制備成手性形式，或使用手性酸性鹽的化學(xué)方法從混合物分離，或含有各自的對(duì)映異構(gòu)體10-二莰酮磺酸(10-camphorsulfonicacid)、二莰酮酸(camphoric acid)、溴二莰酮酸(bromocamphoric acid)、甲氧乙酸、酒石酸、二乙酰-2，3-二羥基丁二酸(diacetyltartaric acid)、蘋果酸、吡咯烷酮-5-羧酸等，然后釋放一種或兩種溶解堿，可選的重復(fù)步驟，以獲得一種或兩種的充分純度，即其光學(xué)純度＞95％。
式I化合物中優(yōu)選的R2是氫原子、甲基、氟，較佳是氫原子。
式I化合物中優(yōu)選的R1是氨基。
式I化合物中優(yōu)選的R1是甲基。
式I化合物中優(yōu)選的X是-C(O)-。
式I化合物中優(yōu)選的X是-CH2-。
式I化合物中優(yōu)選的R2是氫原子、甲基、氟，較佳是氫原子，R1是甲基、氨基、烷氨、酰氨，X是-C(O)-或-CH2-。
可以使用本領(lǐng)域公知的方法方便地分析這些化合物對(duì)TNFα和NFκB的抑制，比如酶聯(lián)免疫分析、放射免疫分析、免疫電泳、親和標(biāo)記等，其中以下面的方法比較典型。
代表性的化合物包括2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-乙酰氨異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-乙酰氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮。
使用Ficoll-Hypaque密度離心方法從普通原料得到PBMC。用RPMI補(bǔ)充培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，補(bǔ)充成分為10％AB+血清，2mM L-谷氨酸，100U/ml青霉素，100mg/ml鏈霉素。
實(shí)驗(yàn)化合物溶解到二甲基亞砜(Sigma產(chǎn))中，然后在RPMI補(bǔ)充培養(yǎng)基中進(jìn)行稀釋。在PBMC溶液中有或沒有藥物時(shí)，二甲基亞砜的最終濃度都是0.25wt％。實(shí)驗(yàn)化合物以半對(duì)數(shù)稀釋進(jìn)行分析，起始濃度是50mg/ml。在加入LPS以前1小時(shí)，把實(shí)驗(yàn)化合物加入到96孔平板的PBMC(106細(xì)胞/ml)中。
在有或者沒有實(shí)驗(yàn)化合物的條件下，用來自Salmonella MinnesotaR595(List Biological Labs，Campbell，CA)的1mg/ml濃度的LPS刺激PBMC(106細(xì)胞/ml)。隨后細(xì)胞在37℃培養(yǎng)18-20小時(shí)。收集上清液后馬上分析其TNFα水平，或者在-70℃低溫保存(不超過4天)以備分析。
TNFα在上清液中的濃度通過人TNFα ELISA測(cè)試包(ENDOGEN，Boston，MA)測(cè)定，具體操作參照使用說明書。
在合格的專業(yè)人員的監(jiān)督下，該化合物可以用于抑制TNFα和NFκB的不良反應(yīng)。該化合物的給藥方式可以是口服、直腸、注射，可以單獨(dú)或者與其他治療試劑相結(jié)合以有效劑量使用，包括抗生素、類固醇等?？诜绞桨ㄆ瑒?、膠囊、糖衣丸和其他形狀、藥學(xué)的壓縮劑型。含有20-100mg/ml量的等滲鹽溶液可以用于注射，它包括肌肉、內(nèi)腔、靜脈、動(dòng)脈等途徑。直腸方式可以使用合適載體(如可可油)制成的栓劑。
劑量必須精確到病人的特定癥狀、年齡、體重、生理?xiàng)l件和要引起的反應(yīng)，但是劑量一般在l～1000mg/day，視需要施藥一天或幾天。一般地，使用本發(fā)明的化合物的最初治療量，可以完全參考已知的通過干擾TNFα活性來治療TNFα介導(dǎo)的疾病。治療的病人要檢查其T細(xì)胞數(shù)和T4/T8比和/或病毒血癥測(cè)量如反轉(zhuǎn)錄酶或病毒蛋白，和/或細(xì)胞因子介導(dǎo)的疾病相關(guān)問題的發(fā)展情況，比如惡病質(zhì)或肌肉惡化。如果在通常劑量的情況下沒有觀察到效果，則增加施用的細(xì)胞因子干擾劑的用量，如每周50％。
本發(fā)明的化合物還可以用于TNFα過量表達(dá)所引起的或加劇的典型疾病的治療或預(yù)防，比如病毒感染，皰疹病毒引起的疾病，或病毒性結(jié)膜炎、牛皮癬、其他皮膚紊亂和疾病等。
本發(fā)明的化合物液可以用于人類以外的其他動(dòng)物的獸藥，以預(yù)防或抑制TNFα的產(chǎn)生。治療性的或預(yù)防性的TNFα介導(dǎo)的動(dòng)物疾病包括上面所提到的，尤其是病毒感染。例子包括貓免疫缺陷病毒、馬感染貧血癥病毒、羊關(guān)節(jié)炎病毒、綿羊脫髓鞘性腦白質(zhì)炎(visna)病毒、麥地(Maedi)病毒和其他慢病毒(lentivirus)。
本發(fā)明包括不同的治療方法，包括減少或抑制不需要的TNFα水平的方法，減少或抑制不需要的細(xì)胞間金屬蛋白酶水平的方法，治療不需要的血管生成的方法，治療癌癥的方法，治療炎癥疾病的方法，治療自動(dòng)免疫疾病的方法，治療關(guān)節(jié)炎的方法，治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，治療腸炎的方法，治療克勞氏疾病的方法，治療復(fù)發(fā)性口瘡(aphthous ulcer)的方法，治療惡病質(zhì)的方法，治療移植宿主疾病的方法，治療哮喘的方法，治療成人呼吸衰竭綜合癥的方法，治療AIDS的方法，它們通過給哺乳動(dòng)物施用有效劑量的式I化合物的充分純的手性(R)-或(S)-異構(gòu)體或者這些異構(gòu)體的混合物來實(shí)現(xiàn)。當(dāng)這些方法有重疊時(shí)，它們會(huì)在施用方法、劑量、給藥量(比如一次或多次給藥)以及同時(shí)施用的其他治療劑等方面有所區(qū)別。
本發(fā)明還包括藥物組合物，其中，(i)取決于一次或者多次給藥的量的式I化合物的充分純的手性(R)-或(S)-異構(gòu)體或者這些異構(gòu)體的混合物是有藥效的成分，它與(ii)藥學(xué)可接受的載體結(jié)合使用。
藥物組合物以口腔給藥方式為代表，包括每個(gè)劑量單位含有1～100mg藥的片劑、膠囊、糖衣劑、相似的形狀、壓縮劑型。含有20～100mg/ml量的混合物可以配制成注射液，給藥方式包括肌肉、內(nèi)腔、靜脈、動(dòng)脈等途徑。直腸給藥方式可以使用合適載體制成的栓劑，比如可可油。
藥物組合物含有本發(fā)明的一種或多種化合物，以及至少一種藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在制備這樣的組合物時(shí)，活性成分通常用賦形劑進(jìn)行混合或稀釋，或者包在膠囊或小袋等形式的載體中。當(dāng)賦形劑作為稀釋劑使用時(shí)，它可以是固態(tài)、半固態(tài)或者液態(tài)，它們作為活性成分的運(yùn)輸物、載體、介質(zhì)。這樣，組合物可以制成片劑、藥丸、粉末、藥酒、懸浮液、乳化液、溶液、糖漿、軟或硬凝膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌包粉末。合適的載體例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素，配方中還可以包括潤滑劑如滑石、硬脂酸鎂和礦物油、潤濕劑、乳化和懸浮劑，防腐劑如甲基-和丙基羥基安息香酸鹽，甜味劑或芳香劑。
混合物優(yōu)選的制成單位劑量形式，即每一個(gè)物理單位作為一個(gè)單位劑量，或者一個(gè)預(yù)先確定的單位劑量可以通過一次或多次給藥來達(dá)到，每個(gè)單位含有預(yù)先確定量的活性成分和合適的藥學(xué)載體以達(dá)到理想的治療效果。該混合物可以使用本領(lǐng)域已知的方法速釋、控釋、緩釋活性成分。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例將進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但是不能限制本發(fā)明的范圍，發(fā)明范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。
實(shí)施例1 2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮；A.3-(4-甲基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶2，6-二氧-3-芐氧基羰基氨-5-乙酸基哌啶(9g，28.2mmol)(U.Teubert et al，Arch.Pharm.Med.Chem.(1998)7-12)和Pd/C(10％，0.9g)在乙酸(90ml)中的混合物氫環(huán)境(50-60psi)振動(dòng)3小時(shí)。懸浮液通過Celite墊過濾并用乙酸沖洗。向?yàn)V液中加入3-甲基鄰苯二甲酸酐(3-Methylphthalic anhydride)(4.56g，28.2mmol)，將混合物回流加熱18小時(shí)。真空除去溶劑得到3-(4-甲基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮；3-(4-甲基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶(1g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)在甲醇(10ml)中的溶液回流加熱5小時(shí)。真空除去溶劑得到2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例2 4-氨基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1，3-二酮A.5-(1，3-二氧-4-硝基-1，3-二氫-異吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸鹽室溫下，向2-(2，6-二氧-哌啶-3-烷)-4-硝基-異吲哚-1，3-二酮(10.0g，33mmol)和乙酸(200ml)的混合物中加入溴(3ml，59mmol)?；旌衔锘亓骷訜?天。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾得到的黃色固體。固體在丙酮/正己烷(1∶1500ml)溶液中攪拌30min。過濾懸浮液得到灰白色固體(6.8g，產(chǎn)率54％)狀的2-(5-溴-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-4-硝基-異吲哚-1，3-二酮。2-(5-溴-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-4-硝基-異吲哚-1，3-二酮(6.0g，16mmol)和醋酸鈉(2.1g，26mmol)在DMF(60ml)中的混合物在室溫下攪拌2天。真空除去溶劑得到固體。該固體在pH6的緩沖液(60ml)和重亞硫酸鈉(1.5g)中成漿6小時(shí)，過濾后用水(100ml)沖洗，然后在丙酮/正己烷(1∶1100ml)成漿。懸浮液過濾后用正己烷(50ml)沖洗得到灰白色固體(3.7g，產(chǎn)率65％)狀的5-(1，3-二氧-4-硝基-1，3-二氫-異吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸鹽。
B.順式5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羥基-異吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸鹽醋酸5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羥基-異吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷內(nèi)酯(3.4g，9.4mmol)和Pd/C(340mg，10％)甲醇(340ml)的混合物在Parr振動(dòng)器中的氫環(huán)境下振動(dòng)21小時(shí)。懸浮液用CELITE過濾，并用甲醇(100ml)和丙酮(250ml)沖洗。合并的濾液真空蒸發(fā)得到固體。該固體在甲醇(30ml)中成漿2小時(shí)，過濾，甲醇沖洗固體得到順式5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羥基-異吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸鹽的黃色固體(2.0g，產(chǎn)率64％)mp，220-223℃。
C.4-氨基-2-(5-羥基-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-異吲哚-1，3-二酮醋酸5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羥基-異吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷內(nèi)酯(1.5g，4.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.46g，2.4mmol)甲醇(50ml)的混合物回流加熱22小時(shí)。懸浮液過濾后，用甲醇(2×30ml)沖洗得到4-氨基-2-(5-羥基-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-異吲哚-1，3-二酮的黃色固體(1.0g，產(chǎn)率79％)mp，285-287℃。
實(shí)施例3 4-硝基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1-酮A.3-(4-硝基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶2，6-二氧-3-芐氧基羰基氨-5-乙酸哌啶(9g，28.2mmol)和Pd/C(10％，0.9g)的乙酸(90ml)溶液在氫環(huán)境(50-60psi)振動(dòng)3小時(shí)。懸浮液經(jīng)過Celite墊過濾，乙酸沖洗，真空去除溶劑。將殘留物三乙基氨(2.9g，28mmol)和甲基2-溴甲基-3-硝基安息香酸鹽(7.7g，28.2mmol)在二甲基甲酰氨(100ml)中80℃加熱18小時(shí)。真空去除溶劑得到3-(4-硝基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.4-硝基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1-酮3-(4-硝基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶(0.96g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加熱5小時(shí)。真空去除溶劑得到4-硝基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1-酮，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例4 4-氨基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1-酮A.3-(4-氨基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶3-(4-硝基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(0.9g，3.1mmol)和Pd/C(10％，0.1g)的甲醇(100ml)溶液在氫環(huán)境(50-60psi)振動(dòng)3小時(shí)。懸浮液經(jīng)過Celite墊過濾，甲醇沖洗，得到3-(4-氨基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.4-氨基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1-酮3-(4-氨基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶(0.96g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加熱5小時(shí)。真空去除溶劑得到4-氨基-2-(5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1-酮，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例5 3-[1，3-二氧4-苯酰氨異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶A.3-[1，3-二氧-4-苯酰氨異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶3-(4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，3.5mmol)和苯甲酰氯(0.5g，3.5mmol)的四羥基呋喃(15ml)溶液回流加熱1小時(shí)。真空去除溶劑，得到3-(1，3-二氧-4-苯酰氨異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.3-(1，3-二氧-4-苯酰氨異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-羥基哌啶3-(1，3-二氧4-苯酰氨異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.36g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(20ml)溶液回流加熱5小時(shí)。真空去除溶劑得到3-(1，3-二氧-4-苯酰氨異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-羥基哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例6 3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶A.3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶3-(4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，3.5mmol)和2-呋喃氯(0.46g，3.5mmol)的四羥基呋喃(20ml)溶液回流加熱1小時(shí)。真空去除溶劑，得到3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.33g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(20ml)溶液回流加熱5小時(shí)。真空去除溶劑得到3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例7 3-[4-甲氧基乙?；?1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶A.3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶3-[4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，3.5mmol)和甲氧基乙酰氯(0.38g，3.5mmol)的四羥基呋喃(20ml)溶液回流加熱1小時(shí)。真空去除溶劑，得到3-[4-(2-甲氧基乙酰氨)-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.26g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(20ml)溶液回流加熱5小時(shí)。真空去除溶劑得到3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羥基哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例8 3-(4-呋喃-2-甲基氨-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-5-羥基哌啶-2，6-二酮
3-(4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-5-羥基哌啶-2，6-二酮(0.82g，3.0mmol)和2-糠醛(0.34g，3.5mmol)的乙酸(10ml)溶液回流加熱4小時(shí)。室溫下向混合物中加入硼氫化鈉(130mg，3.5mmol)維持18小時(shí)。生成的3-(4-呋喃-2-甲基氨-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-5-羥基哌啶-2，6-二酮可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例9 3-(4-呋喃-2-甲基氨-1-氧異吲哚啉-2-烷)-5-羥基哌啶-2，6-二酮3-(4-氨基-1-氧異吲哚啉-2-烷)-5-羥基哌啶-2，6-二酮(0.82g，3.0mmol)和2-糠醛(0.34g，3.5mmol)的乙酸(10ml)溶液回流加熱4小時(shí)。室溫下向混合物中加入硼氫化鈉(130mg，3.5mmol)維持18小時(shí)。生成的3-(4-呋喃-2-甲基氨-1-氧異吲哚啉-2-烷)-5-羥基哌啶-2，6-二酮可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例10 4-硝基-2-(3-氟-5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-1，3-二酮A.1-三-丁醇羰基-3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶室溫下向3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(2.5g，7.75mmol)和二-四-丁基碳酸氫鈉(1.86g，8.52mmol)的1，4-二惡烷(30ml)溶液中加入DMAP(100mg)。溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。真空去除溶劑，得到1-三-丁醇羰基-3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析或重結(jié)晶進(jìn)一步純化。
A.3-氟-3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶在-78℃溫度下，向1-三-丁醇羰基-3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(2.0g，4.3mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液加入二(三甲基甲硅烷基)氨鈉(4.3ml，4.3mmol，1.0M)的四氫呋喃溶液。10-30分鐘后，向混合物中加入N-氟苯磺酸氨(1.1g，4.3mmol)。將混合物加熱到室溫，真空去除溶劑。殘留物與乙基醋酸鹽(10ml)和鹽酸(10ml，1N)混合攪拌1小時(shí)，分離有機(jī)層，真空去除溶劑，得到3-氟-3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.4-硝基-2-(3-氟-5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，2.9mmol)和p-甲苯磺酸(0.28g，1.5mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加熱5小時(shí)，真空去除溶劑，得到4-硝基-2-(3-氟-5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1，3-二酮，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例11 4-氨基-2-(3-氟-5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1，3-二酮A.3-(4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶3-氟-3-(4-硝基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.0g，2.6mmol)和Pd/C(10％，0.1g)的甲醇(100ml)溶液在氫環(huán)境(50-60psi)振動(dòng)3小時(shí)。懸浮液通過Celite墊過濾并用甲醇沖洗，得到3-(4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
B.4-氨基-2-(3-氟-5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1，3-二酮3-(4-氨基-1，3-二氧異吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，2.9mmol)和p-甲苯磺酸(0.28g，1.5mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加熱5小時(shí)。真空去除溶劑，得到4-氨基-2-(3-氟-5-羥基-2，6-二氧哌啶-3-烷)異吲哚啉-1，3-二酮，它可以通過柱層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例12每一片含有50mg 2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1，3-二酮的片劑，可以通過下述的方法制備成分(1000片)2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1，3-二酮50.0g乳糖 50.7g小麥淀粉 7.5g聚乙烯乙二醇6000 5.0g滑石粉 5.0g硬脂酸鎂 1.8g純化水 適量固體成分先過0.6mm網(wǎng)孔的篩子，然后混合活性成分乳糖、滑石、硬脂酸鎂和一半淀粉。剩余的一半淀粉懸浮于40ml水中，將該懸浮液加入沸騰的100ml聚乙烯乙二醇的水溶液。得到的糊狀物加入到粉狀物中，混合物成粒，如果必要的化可以再加水。藥粒在35℃過夜干燥后，過1.2mm網(wǎng)孔的篩子，壓制成兩側(cè)凹陷的直徑約6mm的片劑。
實(shí)施例13每一片含有100mg 2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1-酮的片劑，可以通過下述的方法制備成分(1000片)2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基氨異吲哚啉-1-酮100.0g乳糖 100.0g小麥淀粉 47g硬脂酸鎂 3g固體成分先過0.6mm網(wǎng)孔的篩子，然后混合活性成分、乳糖、硬脂酸鎂和一半淀粉。剩余的一半淀粉懸浮于40ml水中，將該懸浮液加入100ml沸水中。得到的糊狀物加入到粉狀物中，混合物成粒，如果必要的化可以再加水。藥粒在35℃過夜干燥后，過1.2mm網(wǎng)孔的篩子，壓制成兩側(cè)凹陷的直徑約6mm的片劑。
實(shí)施例14每一片含有75mg 2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮的咀嚼片，可以通過下述的方法制備成分(1000片)2-(2，6-二氧-3-羥基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉75.0g-1，3-二酮甘露醇230.0g乳糖 150.0g滑石粉 21.0g糖膠 12.5g硬脂酸 10.0g糖精1.5g5％凝膠溶液 適量固體成分先過0.25mm網(wǎng)孔的篩子，然后混合甘露醇和乳糖，加入凝膠溶液后成粒，過2mm網(wǎng)孔的篩子，在50℃干燥，過1.7mm網(wǎng)孔的篩子。小心的混合3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-N-羥基-3-苯二酰亞氨基丙酸氨、糖膠、糖精，加入甘露醇、乳糖粒、硬脂酸和滑石粉，將它們徹底混合后壓制成兩側(cè)凹陷的直徑約10mm的片劑，并在上側(cè)有一條掰開切痕。
實(shí)施例15每一片含有10mg 2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮的片劑，可以通過下述的方法制備成分(1000片)2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮 10.0g乳糖 328.5g玉米淀粉 17.5g聚乙烯乙二醇60005.0g滑石粉 25.0g硬脂酸鎂4.0g純化水 適量固體成分先過0.6mm網(wǎng)孔的篩子，然后混合活性成分、乳糖、滑石粉和一半淀粉。剩余的一半淀粉懸浮于65ml水中，將該懸浮液加入260ml沸騰的聚乙烯乙二醇的水溶液。得到的糊狀物加入到粉狀物中，混合物攪拌成粒，如果必要的化可以再加水。藥粒在35℃過夜干燥后，過1.2mm網(wǎng)孔的篩子，壓制成兩側(cè)凹陷的直徑約10mm的片劑，并在上側(cè)有一條掰開切痕。
實(shí)施例16每一粒含有100mg 2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮的凝膠膠囊，可以通過下述的方法制備成分(1000粒)2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮 100.0g
微晶纖維素 30.0g十二烷基硫酸鈉 2.0g硬脂酸鎂8.0g十二烷基硫酸鈉過0.2mm網(wǎng)孔的篩子篩到2-(2，6-二氧-3-羥基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮中，然后混合兩種組分10分鐘。微晶纖維素過0.9mm網(wǎng)孔的篩子后加入，然后將所以組分混合10分鐘。最后，硬脂酸鎂過0.8mm網(wǎng)孔的篩子后加入，進(jìn)一步混合3分鐘后，混合物分成每份140mg裝入拉長的“0”形凝膠膠囊中。
實(shí)施例170.2％的注射液或輸液可以按照下述的方法制備2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚 5.0g氯化鈉 22.5g磷酸鹽緩沖液pH7.4 300.0g純化水 加到2500.0ml2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮鹽酸溶于1000ml水中，微濾。加入緩沖液后，用水補(bǔ)加到2500ml。如果要制成劑量單位形式，則分成1.0或2.5ml的量裝入玻璃安瓿(每一個(gè)分別裝有2.0或5.0mg的藥效成分)。
權(quán)利要求
1.一種化合物，選自由(a)下述通式的異吲哚啉衍生物 其中，標(biāo)有“*”的碳原子是手性中心；X是-C(O)-或-CH2-；R1是1～8個(gè)碳原子的烷基或-NHR3；R2是氫原子，1～8個(gè)碳原子的烷基或鹵素；R3是氫原子，1～8個(gè)碳原子的烷基，它未被或已被1～8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵代基、氨基、1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代，3～18個(gè)碳原子的環(huán)烷基，苯基，它未被或已被1～8個(gè)碳原子的烷基、1～8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵代基、氨基、1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代，苯甲基，它未被或已被1～8個(gè)碳原子的烷基、1～8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵代基、氨基、1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代，2-呋喃甲基，2-噻吩基甲基；或-COR4，其中R4是氫原子，1～8個(gè)碳原子的烷基，它未被或已被1～8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵代基、氨基、1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代，3～18個(gè)碳原子的環(huán)烷基，苯基，它未被或已被1～8個(gè)碳原子的烷基、1～8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵代基、氨基、1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代，苯甲基，它未被或已被1～8個(gè)碳原子的烷基、1～8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵代基、氨基、1～4個(gè)碳原子的烷氨基取代，呋喃基，噻吩基，吡咯基，和(b)易于質(zhì)子化的異吲哚啉的酸性鹽組成的集合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的R2是氫原子、甲基或氟。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的R2是氫原子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的R1是氨基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的X是-C(O)-。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的X是-CH2-。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的R1是甲基。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的X是-C(O)-。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，所述異吲哚啉衍生物中的X是-CH2-。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1，3-二酮。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-氨基異吲哚啉-1-酮。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1，3-二酮。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羥基哌啶-5-烷)-4-甲基異吲哚啉-1-酮。
14.一種減少或抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)TNFα的非正常水平的方法，它包括施用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
15.一種治療以下哺乳動(dòng)物疾病的方法，它包括施用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物炎癥、自動(dòng)免疫疾病、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腸炎、克勞氏病、復(fù)發(fā)性口瘡、惡病質(zhì)、移植宿主疾病、哮喘、成人呼吸衰竭綜合癥、AIDS。
16.一種治療哺乳動(dòng)物癌癥的方法，它包括施用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
17.一種治療哺乳動(dòng)物血管生成疾病的方法，它包括施用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
18.一種藥物組合物，它含有(i)作為藥效成分的一定量的權(quán)利要求1所述的化合物，其量取決于一次或者多次給藥，和(ii)藥學(xué)可接受的載體。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述的化合物和治療劑結(jié)合施用。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述的治療劑是類固醇、抗生素或抗腫瘤藥物。
全文摘要
在2－位取代為2，6－二氧－3－羥基哌啶－5－烷基團(tuán)的異吲哚啉－1－酮和異吲哚啉－1，3－二酮，可以進(jìn)一步在5－位取代為烷基或鹵代基，4－位取代為烷基或含氮基團(tuán)，它們都是抑制劑，因而可以用于治療TNFα介導(dǎo)的疾病。一個(gè)典型的實(shí)例是2－(2，6－二氧－3－羥基－5－氟哌啶－5－烷)－4－氨基異吲哚啉－1－酮。
文檔編號(hào)A61P31/18GK1575174SQ01818791
公開日2005年2月2日 申請(qǐng)日期2001年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月14日
發(fā)明者喬治·W·穆勒, 大衛(wèi)·I·斯特林, 漢華·曼 申請(qǐng)人:細(xì)胞基因公司