專利名稱：神經(jīng)營養(yǎng)性藤霉素類似物的制作方法
發(fā)明
背景技術(shù)：
領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種具有高水平神經(jīng)營養(yǎng)活性和低水平免疫抑制活性的藤霉素衍生物。
背景討論某些大環(huán)內(nèi)酯類化合物，例如藤霉素及其相關(guān)的化合物，已知被用來幫助預(yù)防或治療腦局部缺血(WO94/14443)。與FKBP-型免疫親和蛋白具有親和力的特定的哌啶酸衍生物，例如藤霉素，已知被用來刺激受損的外周神經(jīng)生長或促進(jìn)神經(jīng)元的再生(WO96/40140)。某些非免疫抑制化合物，也就是格爾德霉素和它的類似物，顯示有破裂類固醇受體復(fù)合物和促進(jìn)神經(jīng)生長的作用(WO99/21552)。
發(fā)明概述本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)特定的藤霉素類似物，也就是下面提及的化合物(I)，具有極好的神經(jīng)營養(yǎng)活性，但是與藤霉素不同的是它沒有或只有很低的免疫抑制活性。如下所示，與藤霉素相比較化合物(I)具有更強(qiáng)的神經(jīng)營養(yǎng)活性，例如，這一點通過衡量它們增加神經(jīng)突長度的能力即可知。相似的，化合物(I)的給藥顯示有誘導(dǎo)軸突再生和加速神經(jīng)擠壓或脊髓損傷的恢復(fù)。而且，與藤霉素相比，化合物(I)在發(fā)揮這些有利的神經(jīng)營養(yǎng)作用時沒有或只有很低的免疫抑制活性。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了化合物(I)作為一種極好的神經(jīng)營養(yǎng)劑，同時也是一種沒有或只有很低的免疫抑制作用的神經(jīng)營養(yǎng)劑的新用途。
進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種含有化合物(I)的神經(jīng)營養(yǎng)劑或組合物。
更進(jìn)一步地，本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙的方法，該方法包括向哺乳動物施用化合物(I)。
發(fā)明詳述出乎意料的，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)化合物(I)可以用來改善，預(yù)防或治療由神經(jīng)系統(tǒng)損害或損傷、退化或疾病引起的神經(jīng)學(xué)上的損傷或功能障礙，然而，有利的是其沒有或只有很低的免疫抑制作用。
化合物(I)用于治療由于物理損傷、營養(yǎng)紊亂、局部缺血、變性疾病、惡性病、感染性疾病引起的和由藥物相互作用、毒素或毒物引起的損害，退化或功能障礙。例如，化合物(I)用來治療由神經(jīng)外科、外周神經(jīng)損傷、燒傷、腦脊髓炎、HIV、皰疹、癌癥、放射治療、藥物相互作用、葉酸或維生素B-12缺乏和通過暴露在神經(jīng)毒素或化學(xué)物質(zhì)如鉛所引起的神經(jīng)學(xué)上的損害或功能障礙。
相應(yīng)地，化合物(I)用于預(yù)防或治療神經(jīng)元損傷和功能障礙，例如多發(fā)性肌炎，急性感染性多神經(jīng)炎，梅尼埃爾氏病，多神經(jīng)炎，單神經(jīng)炎，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，亨廷頓氏舞蹈病，神經(jīng)根病，神經(jīng)病(例如糖尿病性神經(jīng)變，化療導(dǎo)致的神經(jīng)病等等)，脊髓損傷，老年性癡呆，血管性癡呆，多發(fā)性硬化，身體癱瘓等等。
化合物(I)，即本發(fā)明中使用的藤霉素類似物，具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)式 這一化合物可以按照美國專利5376663，實施例29描述的方法來制備。關(guān)于本發(fā)明中使用的化合物(I)，應(yīng)該理解其也會有構(gòu)象異構(gòu)體和一種或多種立體異構(gòu)體，例如由于不對稱的碳原子或雙鍵導(dǎo)致的光學(xué)的或幾何學(xué)的異構(gòu)體，這些構(gòu)象異構(gòu)體和立體異構(gòu)體也包括在本發(fā)明要求保護(hù)的化合物的范圍內(nèi)。
化合物(I)也可以以藥學(xué)上可接受的鹽、衍生物、溶劑化物或前藥的形式存在，所有這些都包括在本發(fā)明要求保護(hù)的范圍內(nèi)。溶劑化物優(yōu)選的包括一種水合物和一種乙醇鹽。
化合物(I)的一種優(yōu)選形式如下 本發(fā)明中的化合物(I)可以以純的化合物的形式或以與另一化合物或其它成分(優(yōu)選的是一種藥學(xué)介質(zhì)或載體)形成的混合物的形式給藥。當(dāng)化合物(I)以一種藥物制劑或組合物的形式使用時，它可以與一種適于外部的(局部的)、口服的、腸的、皮下的、靜脈內(nèi)的、肌肉的或腸胃外應(yīng)用的有機(jī)或無機(jī)載體、介質(zhì)或附形劑混合。例如，它可以以固體、半固體或液體組合物的形式存在，這些組合物包括作為活性成分的化合物(I)和一種或多種載體、介質(zhì)或賦形劑。典型的載體、介質(zhì)或賦形劑包括，但不限于常規(guī)藥物載體，醫(yī)學(xué)的或制藥學(xué)上的試劑，緩沖劑，分散劑，乳化劑和佐劑。
化合物(I)也可以和常見的無毒的用于片劑、丸劑、膠囊、滴眼液、栓劑、溶液(例如鹽水)、乳劑、混懸劑(例如橄欖油)、軟膏、氣溶膠、噴霧劑、乳膏、皮膚膏藥、貼片和其它適于使用的這些藥學(xué)上可接受的載體混合。
合適的載體包括水，鹽水，右旋糖溶液和油。油包括動物油，植物油，合成油和石油產(chǎn)品。其它有用的載體包括葡萄糖，乳糖，阿拉伯樹膠，明膠，甘露醇，淀粉糊，三硅酸鎂，滑石粉，玉米淀粉，角蛋白，硅膠，馬鈴薯淀粉，尿素和其它適用于生產(chǎn)固體、半固體或液體形式的制劑的載體。另外，輔料，穩(wěn)定劑，乳化劑，增稠劑，著色劑，調(diào)味劑也可以使用。
化合物(I)以有效量包含在藥物組合物中，此劑量對特定的疾病過程或狀況能產(chǎn)生想要的效果。優(yōu)選的，化合物以足夠提供一種神經(jīng)營養(yǎng)作用或刺激神經(jīng)細(xì)胞增長的量包含在藥物組合物中。
可以利用本發(fā)明的方法來治療的哺乳動物包括畜牧哺乳動物例如母牛，馬，豬等；家養(yǎng)動物例如狗，貓，大鼠，小鼠，兔，倉鼠等，靈長類動物和人類。
包含化合物1的產(chǎn)品或組合物向人類給藥時優(yōu)選的給藥或應(yīng)用方式包括注射或口服給藥。
盡管化合物(I)的治療有效量或劑量會在各人病人之間不同，并且治療有效量和劑量也依賴于每個被治療的個體病人的年齡和狀況，通常用來給予治療疾病的活性成分日劑量范圍為約0.0001-1000mg，優(yōu)選為0.001-500mg，更優(yōu)選為0.01-100mg，通常給藥的平均單劑量是約0.001-0.01mg，0.2-0.5mg，1mg，5mg，10mg，50mg，100mg，250mg和500mg。人類長期用藥的日劑量為約0.1-30mg/kg/日?；衔?I)也可以同時地、獨立地或序貫地和其它具有神經(jīng)營養(yǎng)的或神經(jīng)細(xì)胞生長刺激活性的試劑一起使用。
本發(fā)明中的藥物組合物可以周期性地給予需要這種治療的哺乳動物的受試者(例如，人類患者)，來促進(jìn)神經(jīng)元再生、功能恢復(fù)和刺激神經(jīng)突長出，因此，來治療各種的神經(jīng)病理學(xué)的狀態(tài)，這些神經(jīng)病理學(xué)狀態(tài)包括外周神經(jīng)損傷和由于物理損傷(例如脊髓損傷和創(chuàng)傷，坐骨神經(jīng)或面神經(jīng)病變或損傷，截斷后的肢移植)所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷；疾病(例如糖尿病性神經(jīng)變)；癌癥化療(例如丙烯酰胺，紫杉醇，長春堿和阿霉素引起的神經(jīng)病)；與腦梗塞、出血梗塞等相關(guān)的后遺癥如語無倫次(例如發(fā)音異常)，意識模糊，運(yùn)動功能障礙等；和神經(jīng)障礙，包括但不限于，各種的外周神經(jīng)病性的和神經(jīng)學(xué)上的障礙，包括但不限于三叉神經(jīng)痛，舌咽神經(jīng)痛，貝耳氏麻痹，重癥肌無力，肌肉萎縮，肌萎縮性側(cè)索硬化，進(jìn)行性肌萎縮，進(jìn)行性延髓性遺傳的肌萎縮，疝氣，破裂的或下垂的椎間盤綜合癥，頸椎強(qiáng)直，神經(jīng)叢疾病，胸廓出口破壞綜合癥，外周神經(jīng)病例如那些由鉛，丙烯酰胺，γ-二酮(glue-sniffer’s神經(jīng)病)，二硫化碳，氨苯砜，蜱引起的外周神經(jīng)病，卟啉癥，急性感染性多神經(jīng)炎，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病和亨廷頓氏舞蹈病。
外周神經(jīng)或脊髓損傷的橫斷可以通過給予哺乳動物一種神經(jīng)生長刺激量的試劑和給外周神經(jīng)或脊髓移植一種神經(jīng)移植物例如一種同種異體移植物(Osawa等，J.Neurocytol.19833-849，1990；Buttemeyer等，Ann.Plastic Surgery 35396-401，1995)或一種人工神經(jīng)移植物(Madison and Archibald，Exp.Neurol.128266-275，1994；Wells等，Exp.Neurol.146395-402，1997)而進(jìn)行治療。外周神經(jīng)或脊髓的橫斷末端之間的空間優(yōu)選用一種非細(xì)胞的間隙填充材料，如膠原、甲基纖維素等來填充，或用促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長的細(xì)胞如施旺氏細(xì)胞(Xu等.，J.Neurocytol.261-16，1997)，嗅覺細(xì)胞和外鞘(sheathing)細(xì)胞的混懸液來填充。神經(jīng)生長促進(jìn)劑可以和這些細(xì)胞或非細(xì)胞間隙填充物質(zhì)包含在一起，或在神經(jīng)移植過程之前、之中或之后全身給藥。
尤其，化合物(I)用來治療或預(yù)防神經(jīng)元的損傷/功能障礙，多發(fā)性肌炎，急性感染性多神經(jīng)炎，梅尼埃爾氏病，多神經(jīng)炎，單神經(jīng)炎，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，亨廷頓氏舞蹈病，神經(jīng)根病，糖尿病性神經(jīng)病變，化療導(dǎo)致的神經(jīng)病，老年性癡呆，血管性癡呆，多發(fā)性硬化，身體癱瘓或脊髓損傷。
接下來的實施例更詳細(xì)地說明了本發(fā)明。應(yīng)該認(rèn)為這些實施例描述了本發(fā)明的某些方面或具體情況，但是無意于限制本發(fā)明的范圍。
實施例1利用化合物(I)的處理顯著地增加了海馬神經(jīng)元的神經(jīng)突長度細(xì)胞培養(yǎng)物的制備按照Banker and Cowan(Brain Research，1977，126397-425)，胚胎的海馬神經(jīng)元得自在胚胎第18.5天(＂E18.5＂)的幼鼠。簡單而言，取出海馬區(qū)域，切碎，并在37℃在100I.U.木瓜蛋白酶中孵育45分鐘，細(xì)胞被混懸在完全神經(jīng)元培養(yǎng)基中不含L-谷氨酰胺的基本必需培養(yǎng)基(GIBCO，Grand Island，NY)，高葡萄糖基本必需培養(yǎng)基的1.5ml/100ml培養(yǎng)基(GIBCO)，血清增容劑(extender)的0.1ml/100ml培養(yǎng)基(Hito+Tm；Collaborative Research Inc，Lexington，MA)，谷氨酰胺(GIBCO)，5％胎牛血清(GIBCO)。
細(xì)胞被接種在聚L-賴氨酸包被的蓋玻片上(500細(xì)胞/蓋玻片)。蓋玻片被倒置在預(yù)先包被了單層皮質(zhì)的星形細(xì)胞的器皿上。
海馬神經(jīng)元的軸突長度的分析對海馬神經(jīng)元(通過它們特定的極性和樹突來鑒定)每天進(jìn)行檢查和在72小時內(nèi)隨機(jī)照相(9-12幀/蓋玻片)，軸突(定義為最長的突起)長度通過照相的印跡來測量，這一照相的印跡是利用與具有一個合適的軟件(Bioquant IV，R & M Biometrics，Nashville，TN)的一臺IBM XT計算機(jī)相連的Houston Instrument HI-PAD數(shù)字化圖像輸入板得到的。只測量到了細(xì)胞體長度的三倍以上。從同等處理過的蓋玻片(每組三或四個)獲得的數(shù)據(jù)之間沒有差異，因此將它們結(jié)合起來。計算平均值并利用單向(化合物(Ia)或藤霉素處理組對一未處理對照組)方差分析來比較，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗(WINKS4.62專業(yè)版)。
結(jié)果在72小時時，未處理對照組和10nM藤霉素處理組之間沒有顯著性差異。然而，10nM濃度的化合物(Ia)治療組在神經(jīng)突長度方面表現(xiàn)出了一個統(tǒng)計學(xué)上的顯著的增長。見下面表I中的結(jié)果表172小時時化合物(Ia)和藤霉素對大鼠原代海馬細(xì)胞培養(yǎng)物平均神經(jīng)突長度的影響

*與未處理組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)實施例2利用化合物(I)的處理增加了SH-SYSY人成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的平均神經(jīng)突長度SH-SYSY成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞培養(yǎng)物的制備
SH-SYSY人成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞在37℃，7％CO2條件下維持在添加有10％胎牛血清(SIGMA)，50I.U./ml青霉素和50μg/ml鏈霉素(GIBCO)的DMEM培養(yǎng)基(GIBCO)中。將細(xì)胞以15000細(xì)胞/孔鋪于六孔平板中并用0.4μM阿非笛霉素(SIGMA)處理。第五天，沖洗細(xì)胞并用存在或不存在藤霉素(10nM)或化合物(Ia)(1nM)的10ng/ml神經(jīng)生長因子(NGF)處理(來誘導(dǎo)突起長出)。培養(yǎng)基在96小時后更換，用新的培養(yǎng)基來替代再放置72小時(總時間，168小時)。在所有的試驗中使用雙份的孔，數(shù)據(jù)是每一處理組的平均數(shù)據(jù)。
SH-SYSY成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞神經(jīng)突長度分析為了分析突起的長度，在168小時時隨機(jī)給細(xì)胞(20個視野/孔)照相。神經(jīng)突長度通過一個照相的印跡來衡量，這一照相的印跡是利用與具有一個合適的軟件(Bioquant IV，R & M Biometrics，Nashville，TN)的一臺IBM XT計算機(jī)相連的Houston InstrumentHI-PAD數(shù)字化圖像輸入板得到的。只測量到了那些細(xì)胞體長度兩倍以上的突起。從同等處理過的孔中得到的數(shù)據(jù)之間沒有差異，因此將它們結(jié)合起來。計算平均值并利用單向的(化合物(Ia)或藤霉素處理的樣品對只用NGF處理過的樣品)方差分析來比較平均值，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗(WINKS4.62專業(yè)版)。
結(jié)果神經(jīng)突突起長度的測量值顯示，與單獨用NGF(10ng/ml)相比在168小時時化合物(Ia)(1nM)和藤霉素(10nM)都顯著地增加了軸突突起的長度。然而，與NGF聯(lián)合的1nM化合物(Ia)的作用高于與NGF聯(lián)合的10nM藤霉素的作用。
表2在168小時時化合物(Ia)和藤霉素對SH-SYSY人成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞平均神經(jīng)突長度的影響

*與NGF組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)實施例3利用化合物(I)的處理促進(jìn)了大鼠坐骨神經(jīng)擠壓模型的功能恢復(fù)動物和手術(shù)程序用2％的鹵烷麻醉9只6周齡的雄性Sprague-Dawley大鼠，暴露右側(cè)的坐骨神經(jīng)，在臀部水平的位置將神經(jīng)擠壓兩次(總共60s利用一個7號Dumont jeweler′s鉗)。擠壓部位通過將一根無菌的9-O縫合線穿過神經(jīng)外膜的鞘來標(biāo)記。
化合物(Ia)的制備和給藥將化合物(Ia)溶解在包含30％二甲亞砜(DMSO)70％鹽水的介質(zhì)中。給三只接受過軸突顯微外科術(shù)的大鼠每天皮下注射化合物(Ia)(1或5mg/kg)或相等量的介質(zhì)(包含30％DMSO的鹽水)(5ml/kg)。
行為的評定每天檢驗動物直到灌注日(第18天)。下面的半定量等級通常用來評價動物的功能恢復(fù)。
0當(dāng)走路時癱瘓并有腳翻轉(zhuǎn)和腳趾彎曲；1正確控制腳并移動腳趾的能力；2能夠持續(xù)地用腳走路；3在走路時證明腳趾能伸展；4抬起腳后跟走路并顯示接近正常的腳趾伸展。
證明中間能力的動物給予部分分?jǐn)?shù)+，0.25；++，0.5；+++，0.75。
組織固定和制備神經(jīng)擠壓18天后，用4％的鹵烷深度麻醉大鼠，肝素化并用在0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)中的4％的多聚甲醛灌注10s，接下來用在0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)中的5％的戊二醛(1L)灌注，然后在4℃固定24小時。在坐骨神經(jīng)上距粉碎位置已知距離(5mm)處取組織樣品。在目前的研究中，只報導(dǎo)了從供給比目魚肌的后脛神經(jīng)分枝中得到的數(shù)據(jù)。組織被放置在0.1M磷酸鈉緩沖液(PH7.4)中，用1％四氧化鋨(在0.1M磷酸緩沖液中)后固定2.5小時，用乙醇脫水并包埋在塑料中。半薄切片用乙酸鈾酯和檸檬酸鉛染色，安裝在薄膜支持的75目格，并用JEOL 100 CX電子顯微鏡檢查。
形態(tài)分析軸突管徑的分析在比目魚肌神經(jīng)上進(jìn)行。再生的有髓鞘的軸突的數(shù)目用電子顯微鏡來計算。計算介質(zhì)處理組，化合物(Ia)(1mg/kg)處理組和化合物(Ia)(5mg/kg)處理組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。
統(tǒng)計學(xué)分析對于行為的分析，用單向的方差分析來比較功能恢復(fù)的平均值，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗來比較各個值。至于形態(tài)分析，用單向的方差分析來比較軸突數(shù)目的平均值，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組檢驗來比較各個值。
結(jié)果功能恢復(fù)在15-17天觀察到了功能恢復(fù)，并且1mg/kg處理組大鼠和5mg/kg處理組大鼠的功能恢復(fù)都比介質(zhì)處理組大鼠的功能恢復(fù)出現(xiàn)的早。見下面的表3。
表3化合物(Ia)在大鼠坐骨神經(jīng)損傷功能恢復(fù)中的作用

*與介質(zhì)組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)電子顯微鏡檢查動物的形態(tài)學(xué)檢查在軸突顯微外科術(shù)后第18天進(jìn)行。
每神經(jīng)面積(5,000μm2)中再生的有髓鞘的軸突的數(shù)目產(chǎn)生顯著增長，從介質(zhì)處理組大鼠的5.5±2.7(平均值±SEM)到1和5mg/kg處理組大鼠的19±2.4和20±2.9，各自(P＜0.05)。見下面表4。
表4化合物(Ia)在大鼠坐骨神經(jīng)粉碎后18天時對比目魚肌神經(jīng)每神經(jīng)面積(5,000μm2)的再生的有髓鞘軸突數(shù)目的影響

*與介質(zhì)組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)實施例4用化合物(I)的處理促進(jìn)了大鼠脊髓損傷模型中的功能恢復(fù)(1)方法動物和外科程序用2％的鹵烷麻醉28只六星期大的雄性Sprague-Dawley大鼠，在T10/T11進(jìn)行椎板切除術(shù)并在脊髓T10/T11水平進(jìn)行脊髓半切損害。
化合物(Ia)的制備和給藥將化合物(Ia)溶解在包含30％二甲亞砜(DMSO)70％鹽水的介質(zhì)中。在手術(shù)后7個星期內(nèi)脊髓損傷的大鼠每天接受皮下注射化合物(Ia)(2mg/kg)或相等體積的介質(zhì)(含30％DMSO的鹽水)(5ml/kg)。
功能恢復(fù)的評價利用一個改進(jìn)的Tarlov/Klinger等級、狹窄橫梁試驗和腳印試驗在損害后2周來評價功能恢復(fù)。
A.改進(jìn)的Tarlov/Klinge等級讓大鼠在一片開放的場地中自由活動1分鐘并用下面提供的等級0-6來評定。
0受損的后肢沒有運(yùn)動；1受損的后肢幾乎沒有可察覺的運(yùn)動；2受損的后肢關(guān)節(jié)(臀，膝或踝)有活躍的運(yùn)動但是不協(xié)調(diào)，不能支撐重量；
3受損的后肢有交替的行走并有推進(jìn)的運(yùn)動，不能支撐重量；4受損的后肢可支撐重量；5只有微小的不足的行走；6正常行走B.狹窄橫梁試驗大鼠在寬度遞減的木制橫梁(1.5m長)上測試，寬度分別為7.7cm，4.7cm，2.7cm和1.7cm。讓大鼠在木條上行走，記錄它們可以不滑倒地以至少兩個軌道行走的最窄木條。
0不能在任何一個橫梁上行走；1可以在7.7cm寬的橫梁上行走；2可以在4.7cm寬的橫梁上行走；3可以在2.7cm寬的橫梁上行走；4可以在1.7cm寬的橫梁上行走；C.腳印試驗將大鼠的后肢沾上墨水并將腳印印在一張覆蓋在60cm長和7.5cm寬的狹窄跑道上的紙上。一系列至少6個連續(xù)等級通常被用來確定5-點腳印分值。
0持續(xù)的背側(cè)的走步或后肢拖動，例如，不可見腳印1有可見的至少3個腳印中至少3個腳趾的腳趾印2與它自己的基線值相比顯示多于兩倍值的腳的外或內(nèi)旋轉(zhuǎn)3除了腳旋轉(zhuǎn)外沒有腳趾拖動的印記4未顯示內(nèi)或外旋轉(zhuǎn)印記(小于兩倍的基線值角)，但可見多于一個的腳后跟印5未見腳后跟印統(tǒng)計分析對于行為的分析，用單向的方差分析來比較每一功能試驗分值的平均值，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗來比較各個值。
結(jié)果功能恢復(fù)利用改進(jìn)的Tarlov/Klinger等級(表5)，橫梁行走試驗(表6)和腳印試驗(表7)來進(jìn)行所有三項功能恢復(fù)測量。在改進(jìn)的Tarlov/Klinger等級(表5)，橫梁行走試驗(表6)和腳印試驗(表7)中化合物(Ia)改善了運(yùn)動功能損傷。
表5化合物(Ia)對大鼠脊髓損傷的改進(jìn)的Tarlov/Klinger分?jǐn)?shù)的影響

*與介質(zhì)組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)表6化合物(Ia)對大鼠脊髓損傷的橫梁行走分?jǐn)?shù)的影響

*與介質(zhì)組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)表7化合物(Ia)對大鼠脊髓損傷的腳印分?jǐn)?shù)的影響

*與介質(zhì)組相比P＜0.05(單向的方差分析，然后進(jìn)行Newman-Kuels多組比較檢驗)實施例5化合物(Ia)與FKBP12結(jié)合，但是與藤霉素不同的是它不發(fā)揮或只發(fā)揮很少的免疫抑制作用(1)與FKBP12的結(jié)合試驗結(jié)合試驗按照Tamura，K.等(Biochemical arid BiophysicalResearch Communications，Vol.202，No.1，437-499，1994)的相似方式進(jìn)行。結(jié)果在表8中列出。
(2)混合的淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)MLR試驗按照美國專利US4929611的相似方式進(jìn)行。
結(jié)果在表8中列出。
表8化合物(Ia)和藤霉素體外實驗的藥理學(xué)特性

上面的結(jié)論顯示化合物(Ia)沒有免疫抑制活性，但是它可以和FKBP12結(jié)合。
上面顯示的結(jié)果說明化合物(I)在體外和體內(nèi)模型中都有有效的神經(jīng)營養(yǎng)作用。在兩個細(xì)胞培養(yǎng)模型中，化合物(I)甚至在低濃度也增加了神經(jīng)突的生長。而且，在低劑量將化合物(I)全身給藥通過增加坐骨神經(jīng)的神經(jīng)突再生速率和促進(jìn)脊髓損傷的功能恢復(fù)加速了神經(jīng)擠壓損害后的功能恢復(fù)。
此外，如上所示，化合物(I)提供了一種有效的神經(jīng)營養(yǎng)的或刺激神經(jīng)細(xì)胞生長的活性，但是，它沒有免疫抑制活性。相應(yīng)的，本發(fā)明提供一種有用的神經(jīng)營養(yǎng)劑用來刺激或促進(jìn)神經(jīng)元生長或再生，特別是當(dāng)一種免疫抑制作用是不利的或不需要的時候。
本發(fā)明的其它方面包括一件制品，包括包裝材料和包含在所述包裝材料中的上面確定的化合物(I)，其中所述的化合物(I)是預(yù)防或治療神經(jīng)元功能障礙的治療有效量的，并且其中的包裝材料包括一個標(biāo)簽或書面材料，此材料指出化合物(I)能或應(yīng)當(dāng)用來預(yù)防或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙。
一種商業(yè)藥包，包含含有上面確定的化合物(I)的藥物組合物和一個所附帶的書面材料，其中書面材料表明化合物(I)可以或應(yīng)該用來預(yù)防或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙。
一種組合物，例如包含用化合物(I)處理過的細(xì)胞的一種細(xì)胞混懸液，組織或移植物。這些組合物用來修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)損傷。這些組合物也可以包括其他對神經(jīng)細(xì)胞生長刺激劑，例如促進(jìn)或輔助神經(jīng)細(xì)胞生長的其它類型的細(xì)胞混懸液，例如產(chǎn)生髓磷脂的細(xì)胞如施旺氏細(xì)胞或少突細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和鞘細(xì)胞；細(xì)胞外的基質(zhì)物質(zhì)，如膠原；或其它特異性的神經(jīng)調(diào)節(jié)劑如細(xì)胞因子，促有絲分裂因子，免疫親和蛋白和神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)如NGF-1，BDNF，CNTF，NT-3，NT-4和NT-5。
移植物例如自體移植物，同種異體移植物或異種移植物也可以用化合物(I)來處理以促進(jìn)神經(jīng)元生長，用作移植物和用作其它應(yīng)用。
引入的參考此處公開所引用或提及的每篇文獻(xiàn)，專利申請或?qū)＠_的內(nèi)容都是將它們的全文引入作為參考。此申請要求優(yōu)先權(quán)的任何專利文獻(xiàn)的內(nèi)容也是將它們的全文引入作為參考。特別的，美國臨時申請No.60/258,500的內(nèi)容引入作為參考。
修改和其它實施方案顯然，根據(jù)上述的教導(dǎo)本發(fā)明的大量的修改和變化都是可能的。因此應(yīng)該理解在所附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)，除了此處明確描述過的其它的內(nèi)容本發(fā)明也可以實施。所述的組合物和方法及本發(fā)明的概念的各種的修改和變化在不偏離本發(fā)明的范圍和精神的條件下對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。雖然上面已經(jīng)用特別優(yōu)選的實施方案描述了發(fā)明，應(yīng)該理解所要求保護(hù)的發(fā)明不是有意限于這些特定的實施方案。用來實施本發(fā)明的所述模式的各種修改對于醫(yī)學(xué)，生物學(xué)，化學(xué)或藥理學(xué)科或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的，也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.下式化合物在制備神經(jīng)營養(yǎng)劑中的應(yīng)用
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于神經(jīng)營養(yǎng)劑用來預(yù)防或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于神經(jīng)營養(yǎng)劑用來刺激或促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長或再生。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于神經(jīng)營養(yǎng)劑用來促進(jìn)神經(jīng)損傷的功能恢復(fù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于神經(jīng)元損傷/功能障礙是多發(fā)性肌炎，急性感染性多神經(jīng)炎，梅尼埃爾氏病，多神經(jīng)炎，單神經(jīng)炎，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，亨廷頓氏舞蹈病，神經(jīng)根病，糖尿病性神經(jīng)病變，化療導(dǎo)致的神經(jīng)病，老年性癡呆，血管性癡呆，多發(fā)性硬化，身體癱瘓或脊髓損傷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于神經(jīng)元損傷/功能障礙是阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化，糖尿病性神經(jīng)病變，化療導(dǎo)致的神經(jīng)病或脊髓損傷。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于化合物(I)以它的藥學(xué)可接受的鹽，衍生物，前藥或溶劑化物的形式存在。
8.一種組合物，包括具有下面結(jié)構(gòu)式的化合物(I)
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于化合物(I)以它的藥學(xué)可接受的鹽，衍生物，前藥或溶劑化物的形式存在。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于化合物(I)以化合物(Ia)的形式存在。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于其進(jìn)一步包含至少一種其它的神經(jīng)營養(yǎng)劑。
12.一種制品或試劑盒，包括包裝材料和包含在所述包裝材料中的化合物(I)，其中所述的包裝材料包括一個標(biāo)簽或一個書面材料，它指出所述化合物(I)可以或應(yīng)當(dāng)用來預(yù)防，改善或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙。
13.一個商業(yè)藥包或試劑盒，包括含有化合物(I)的藥物組合物和所附帶的書面材料，其中該書面材料指出化合物(I)可以或應(yīng)當(dāng)用來預(yù)防，改善或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙。
14.一種制備或制造神經(jīng)營養(yǎng)劑的方法，包括將化合物(I)與一種藥學(xué)上可接受的載體、介質(zhì)或賦形劑混合。
15.一種預(yù)防，改善或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙的方法，包括給需要的受試者施用有效量的化合物(I)。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于所述的受試者為哺乳動物。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于所述的受試者為人。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于所述的神經(jīng)元損傷/功能障礙是多發(fā)性肌炎，急性感染性多神經(jīng)炎，梅尼埃爾氏病，多神經(jīng)炎，單神經(jīng)炎，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，亨廷頓氏舞蹈病，神經(jīng)根病，糖尿病性神經(jīng)病變，化療導(dǎo)致的神經(jīng)病，老年性癡呆，血管性癡呆，多發(fā)性硬化，身體癱瘓或脊髓損傷。
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于神經(jīng)元損傷/功能障礙是阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，糖尿病性神經(jīng)病變，化療導(dǎo)致的神經(jīng)病或脊髓損傷。
20.一種刺激或促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長或再生的方法，包括將神經(jīng)細(xì)胞與化合物(I)相接觸。
21.一種增加軸突生長或再生速度或神經(jīng)細(xì)胞長度的方法，包括將神經(jīng)細(xì)胞與化合物(I)相接觸。
22.一種在需要其的組織中增加神經(jīng)細(xì)胞生長的方法，包括將化合物(I)施用于所述組織。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于所述組織選自腦組織，脊髓組織或外周神經(jīng)組織。
24.一種促進(jìn)神經(jīng)損傷功能恢復(fù)的方法，包括給需要的對象施用有效量的化合物(I)。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于神經(jīng)損傷選自燒傷，創(chuàng)傷，機(jī)械損傷，手術(shù)損傷，生理學(xué)損傷，病理學(xué)損傷和免疫學(xué)損傷。
26.一種修補(bǔ)橫切的外周神經(jīng)或脊髓的方法，包括將所述外周神經(jīng)或脊髓的橫切的末端與有效量的化合物(I)相接觸。
27.一種修復(fù)受試者中橫切的外周神經(jīng)或脊髓的方法，包括給所述受試者施用神經(jīng)生長刺激量的化合物(I)和移植給外周神經(jīng)或脊髓。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于所述移植物為一種同種異體移植物。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于所述移植物為一種人工神經(jīng)移植物。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于進(jìn)一步包含用一種非細(xì)胞的間隙填充材料來填充外周神經(jīng)或脊髓的橫切的末端間的空間。
31.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于進(jìn)一步包含用一種細(xì)胞混懸液來填充外周神經(jīng)或脊髓的橫切的末端間的空間。
32.一種組合物，包含用化合物(I)處理的一種神經(jīng)細(xì)胞。
33.一種組織，包含用化合物(I)處理的一種神經(jīng)細(xì)胞。
34.一種移植物，包含用化合物(I)處理的一種神經(jīng)細(xì)胞。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的移植物，其特征在于所述的移植物是一種自體移植物，同種異體移植物或異種移植物。
36.一種促進(jìn)神經(jīng)損傷功能恢復(fù)的方法，包括向需要的受試者施用有效量的包含用化合物(I)處理過的細(xì)胞的一種組合物。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其特征在于神經(jīng)損傷選自燒傷，外傷，機(jī)械損傷，外科手術(shù)損傷，生理學(xué)損傷，病理學(xué)損傷和免疫學(xué)損傷。
38.一種修補(bǔ)橫切的外科神經(jīng)或脊髓的方法，包括將所述外周神經(jīng)或脊髓的橫切的末端與有效量的包含用化合物(I)處理過的細(xì)胞的一種組合物相接觸。
39.一種組合物，包含一種用化合物(I)處理過的細(xì)胞、組織或移植物和至少一種神經(jīng)細(xì)胞生長促進(jìn)劑。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其特征在于所述的神經(jīng)生長促進(jìn)劑選自一種促進(jìn)神經(jīng)的生長的細(xì)胞混懸液、一種非細(xì)胞的間隙填充材料或一種神經(jīng)生長因子。
41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其特征在于其包含作為神經(jīng)生長促進(jìn)劑的膠原或甲基纖維素。
42.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其特征在于其包含作為神經(jīng)生長促進(jìn)劑的一種細(xì)胞混懸液。
全文摘要
具有高水平的神經(jīng)營養(yǎng)活性和低水平的免疫抑制活性的藤霉素衍生物。這些化合物用作神經(jīng)營養(yǎng)劑，特別是用來預(yù)防或治療神經(jīng)元損傷/功能障礙。
文檔編號A61P21/00GK1538843SQ01822886
公開日2004年10月20日 申請日期2001年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月29日
發(fā)明者松岡信也, 山路隆之, 布魯斯·戈爾德, 戈爾德, 之 申請人:藤澤藥品工業(yè)株式會社