專利名稱：制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法及由此制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法及由此制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，特別涉及一種包括將乳酸菌株接種在含有蘑菇成分的培養(yǎng)基上及在適當?shù)臈l件下使所述培養(yǎng)基發(fā)酵的步驟來制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法及由此制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。由此制得的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液具有極佳的味道、風味及口味，并且對于抑制過氧化脂質(zhì)的形成及使血糖水平下降是有效的。
背景技術(shù)：
一般而言，與任何其它植物相比，蘑菇含有較低的脂肪，但是含有較高的蛋白和糖類含量。糖類也包括海藻糖、甘露醇、樹膠醛糖等及多聚糖，多聚糖難于吸收進入人的腸胃，其主要成分是不消化的膳食纖維。因此，與按食物分析計算的食物原料相比，蘑菇是具有較低熱量的食物原料。此外，每個個體中通常包括100～800mg量的麥角固醇和鈣，當干燥時它們可轉(zhuǎn)化成維生素D2。除了所述的成分之外，蘑菇還含有維生素B1、維生素B2及煙酸，不含維生素A和C。此外，關(guān)于礦物質(zhì)，其中K比Na占更高的份數(shù)，P、Ca和Fe次之。蘑菇的調(diào)味成分主要是核酸及谷氨酸、琥珀酸、蘋果酸、尿醇等的組合物。因此，蘑菇不僅是具有較低熱量并能發(fā)揮生理功能的食物原料，而且具有極佳的風味、味道和口味。
然而，蘑菇含有大量的水和氮化合物，因此其會腐爛，并且由于其軟組織的原因微生物易于繁殖。由此，收獲蘑菇后其保存期較短。蘑菇可分為活產(chǎn)品和干燥產(chǎn)品的形式。由于蘑菇被用作配菜或調(diào)味品，所以其可在提供基本營養(yǎng)方面起作用。
近來，蘑菇已被公認為是抑制癌癥和變異性、降低血清中脂質(zhì)的形成、增強對疾病的免疫力、抑制衰老及預(yù)防成人病的有效原料。到目前為止，已將蘑菇的用途擴展到了醫(yī)藥領(lǐng)域。已預(yù)期的藥用蘑菇，如靈芝(Ganderma lucidum)、香菇(Lentinus edodes)、平茹(Pleurotus osteratus)、Elfvingia applanata、蘑菇(agaricus)、黑木耳(Auricularia auricula)及石耳(Umbilicaria esculenta)。特別地，據(jù)報道包括在靈芝提取物內(nèi)的多聚糖蛋白配合物表現(xiàn)出對癌細胞增殖的抑制、對原發(fā)性高血壓的治療、對過氧化脂質(zhì)形成的抑制等。此外，眾所周知香菇具有抗癌性質(zhì)，使膽固醇、肌張力、多尿下降的性質(zhì)，及可治療高血壓、腎炎、哮喘、胃潰瘍等，據(jù)報道其提取物有降低血清和肝中脂質(zhì)及抑制肝損害的作用。此外，據(jù)報道來源于平菇的多聚糖提取物具有降低血清中膽固醇的作用及對由四氯化碳引起的肝損害具有抑制作用。此外，據(jù)報道從平菇的果肉和菌絲體得到的提取物具有抗氧化作用。
乳酸菌是使用諸如葡萄糖、乳糖的碳水化合物可產(chǎn)生乳酸的細菌，并從公元3,000前就用于發(fā)酵牛奶和干酪。由于由乳酸菌發(fā)酵的牛奶可抑制消化器官內(nèi)有害菌的生長并預(yù)防人衰老，所以乳酸菌發(fā)酵的牛奶已在世界范圍內(nèi)作為貨物出售至現(xiàn)在。已研究了乳酸菌對人健康的許多有益作用。
乳酸菌的此類作用包括腸道調(diào)節(jié)(即預(yù)防痢疾和便秘)、對腸癌增殖的抑制、及通過抑制有害菌的生長抑制衰老、促進維生素形成的生長、通過控制膽固醇預(yù)防成人病及增強免疫力等。
乳酸菌典型的例子包括鏈球菌、小球菌、乳酸鏈球菌、乳酸桿菌、vipidus等。在自然界中例如人和動物的消化道和幾乎所有的蔬菜內(nèi)發(fā)現(xiàn)有乳酸菌。保加利亞細菌、酸奶酪細菌及嗜溫細菌已被用于生產(chǎn)酸奶酪。酸奶酪細菌、乳酪菌(casei bacteria)及嗜酸菌被用于生產(chǎn)含有乳酸菌的飲料。乳酪菌和牛奶鏈球菌已被用于生產(chǎn)干酪。牛奶鏈球菌已被用于生產(chǎn)發(fā)酵的黃油。每種特定的乳酸菌已被用于不同種食物的制造過程。
乳酸菌可抑制腸上皮細胞及其新陳代謝。乳酸菌通過乳酸菌的發(fā)酵可分泌乳酸、(低級)脂肪酸、細菌素、H2O2等，以致于可抑制有害菌的生長并通過HMG(羥基甲基戊二酸)、乳清酸、尿酸等降低膽固醇的形成。特別地，嗜酸乳酸桿菌可直接分解膽固醇。乳酸菌可活化在免疫系統(tǒng)中的小噬細胞偵測桿菌，從而可偵測細菌和病毒的出現(xiàn)，抑制由于淋巴細胞分裂引起的癌細胞增殖，并提高血液中的抗體IgA的生產(chǎn)，促進γ-干擾素的生產(chǎn)。這樣一系列的功能提高了免疫力，增加了食物的營養(yǎng)價值，抑制了內(nèi)生傳染，抑制了腸內(nèi)致癌物質(zhì)的形成，并導(dǎo)致有害菌的死亡。
近來飲食的改變可導(dǎo)致較高可能性的腦血管系統(tǒng)疾病和循環(huán)系統(tǒng)疾病，如心臟病、高血壓、高脂血癥、動脈硬化及惡性瘤。此類慢性退行性疾病與活體內(nèi)的脂質(zhì)新陳代謝紊亂相關(guān)。近來，對可改善人健康的生理活性原料進行了有力的調(diào)查和研究，其結(jié)果是發(fā)現(xiàn)并報道了對脂質(zhì)和氧化作用有效的天然成分。其中，可食用和藥用的蘑菇作為抗氧化原料已引起了注意。
由于活體內(nèi)的氧化壓力，自由基的形成可使生物膜脂質(zhì)過氧化，并且增加的過氧化脂質(zhì)可損害組織和器官，導(dǎo)致新陳代謝紊亂。因此由于在活體內(nèi)自由基形成的原因，能夠抑制氧化損害的生理活性材料被期望有助于降低循環(huán)系統(tǒng)疾病和慢性疾病，例如癌。
此外，近來飲食的改進和生活方式的變化導(dǎo)致由于攝取高熱量食物并缺少適度鍛煉引起的肥胖。工業(yè)的發(fā)展和社會復(fù)雜關(guān)系是引起壓力的原因，而醫(yī)藥的發(fā)展延長了生命。這些因素是各種疾病的原因，特別地，糖尿病是引起慢性血管疾病的原因，并且提高了死亡率。
糖尿病是一種特征在于胰腺內(nèi)胰島素分泌不足或在每個組織中胰島素受體紊亂及高血糖水平的疾病。糖尿病分成胰島素相關(guān)糖尿病(1型糖尿病)和非胰島素相關(guān)糖尿病(2型糖尿病)。當由于免疫系統(tǒng)的紊亂分泌胰島素的胰腺β-細胞被破壞時，出現(xiàn)胰島素相關(guān)糖尿病，當由于遺傳或肥胖的原因，胰島素受體如肌肉細胞紊亂時出現(xiàn)非胰島素相關(guān)糖尿病。
近來對探求各種對于降低血糖水平的生理活性原料如茶對葉、薏苡和桑樹葉進行了持續(xù)的研究。但是這些研究主要集中在對1型糖尿病的治療。
根據(jù)這些統(tǒng)計資料，在韓國這兩種類型中1型糖尿病患者呈逐年增長的趨勢，95％患有糖尿病的患者是2型糖尿病?？山档脱撬降乃巹┛诜o藥至2型糖尿病患者并配合飲食治療。最后，在飯后將阿卡波糖(acarbose)和伏格列波糖(voglibose)給藥至患者以降低血糖水平，但它們價格較高。
為克服這些缺點，已對可降低血糖水平的商業(yè)上可得到的及可食用的食物或各種天然來源的生理活性原料進行了研究。韓國專利第165,939號公開了一種用于降低血糖水平并含有枸杞提取物的組合物及其制備方法。韓國專利第195,886號公開了一種用于治療糖尿病并含有Crdycepsspp.、牛黃、枸杞、野葛根等的藥物組合物。然而，在所述專利中公開的用于治療糖尿病的制劑其味道、風味、口味不適合，并且其制備過程非常復(fù)雜。
因此，本領(lǐng)域需要可有效治療2型糖尿病的食物組合物及具有適合的味道、風味、口味的制劑。
如上所述，蘑菇和乳酸菌被用作保健食品的原料，但是其協(xié)同作用仍不清楚。
發(fā)明揭露由此，本發(fā)明人已對蘑菇和乳酸菌發(fā)酵溶液的藥理作用進行了廣泛的調(diào)查研究。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)蘑菇乳酸發(fā)酵溶液表現(xiàn)出有效的協(xié)同作用，然后實現(xiàn)了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種制備具有極佳味道、風味及口味的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液并可縮短發(fā)酵期的方法，及由此制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
本發(fā)明的另一目的是提供一種制備能夠抑制過氧化脂質(zhì)形成的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法，及由此制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
本發(fā)明的再一目的是提供一種制備能夠有效降低血糖水平的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法，及由此制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
附圖簡要說明

圖1是制備本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的示意性過程。
圖2是表明在本發(fā)明的實施例37中得到的平菇乳酸發(fā)酵溶液的形成速率圖。
圖3是表明在本發(fā)明的實施例38中得到的靈芝乳酸發(fā)酵溶液的形成速率圖。
圖4a～4c是表明在本發(fā)明的實施例37中得到的平菇乳酸發(fā)酵溶液的流變學圖。
圖5a～5c是表明在本發(fā)明的實施例38中得到的靈芝乳酸發(fā)酵溶液的流變學圖。
圖6a～6e分別表明隨著在對比實施例1、實施例40、實施例41、對比實施例2和實施例42中得到的靈芝乳酸發(fā)酵溶液的飲用時間的變化血糖水平的變化圖。
圖7是表明隨著在實施例42中得到的靈芝乳酸發(fā)酵溶液的飲用時間的變化和靈芝提取物的飲用時間的變化血糖水平的變化圖。
實施本發(fā)明的最佳方式根據(jù)本發(fā)明制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法包括如下步驟a)制備含有蘑菇成分的培養(yǎng)基；b)將乳酸菌株接種在該培養(yǎng)基上；c)培養(yǎng)該接種了菌株的培養(yǎng)基；及d)老化該經(jīng)培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
此外，所述的步驟(a)包括如下步驟i)通過研磨或提取，從蘑菇的果肉或菌絲體得到蘑菇成分；ii)將重量為0.1-10％的得到的蘑菇成分、重量為1-50％，優(yōu)選為1-20％的脫脂乳、重量為0.1-20％的白糖和平衡重量的純化水加到該含有蘑菇成分的培養(yǎng)基中，并使此混合物均勻化以制備乳酸菌培養(yǎng)基；iii)在75-110℃的溫度范圍熱處理該含有蘑菇成分的培養(yǎng)基15-40分鐘；及iv)將該熱處理的培養(yǎng)基冷卻至35-40℃的溫度范圍。
可用在所述的i)中的蘑菇例子包括所有的食用和藥用蘑菇，例如姬松茸(Agarics blazei)、靈芝、灰樹花(Grifola frondosa)、Elfvingia applanata、平菇、洋菇(Agaricus bisporus)、金針菇(Flammulina velutipes)、香茹及Crdyceps spp.，但不限于這些。可用的蘑菇部分是其果肉和菌絲體。如果是姬松茸、靈芝、灰樹花、Elfvingia applanata可以使用從它們的果肉或菌絲體得到的蘑菇成分。如果是平菇、洋菇、金針菇、香茹及Crdyceps spp.，蘑菇成分是從它們的果肉得到的。此外，蘑菇成分優(yōu)選是蘑菇粉末和提取物的混合物。特別地，用于降低血糖水平的蘑菇成分優(yōu)選是靈芝的提取物。
在步驟b)中，將基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，重量為1-10％的冷藏乳酸菌或熱處理的乳酸菌接種于在步驟a)的iv)中被冷卻的培養(yǎng)基上?？紤]到發(fā)酵期，接種的乳酸菌株優(yōu)選是熱處理的乳酸菌。熱處理是通過將冷藏的菌株放進培養(yǎng)箱，并將該菌株培養(yǎng)至25-40℃的溫度范圍而實現(xiàn)的。
在步驟c)中，當保持培養(yǎng)箱的溫度在35-40℃的范圍內(nèi)的同時，培養(yǎng)3-20小時。如果接種的是熱處理的乳酸菌株，那么培養(yǎng)時間優(yōu)選在3-6小時的范圍內(nèi)。
在步驟d)中，在3-5℃的溫度下老化預(yù)定的時間。
本發(fā)明也提供由所述的制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法制備的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
研究了由此得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的性質(zhì)、對過氧化脂質(zhì)形成的抑制作用及降低血糖水平的作用。
姬松茸、靈芝、平菇、洋菇、金針菇、灰樹花、香茹、Elfvingia applanata及Crdyceps spp.可用于本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，但是本發(fā)明的范圍不限于這些。所有的食用和藥用蘑菇都能用于制備本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
首先，參照圖1，示意性地說明了制備本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法。
a)制備含有蘑菇成分培養(yǎng)基的步驟i)得到蘑菇成分選取姬松茸、靈芝、灰樹花、Elfvingia applanata的蘑菇果肉或菌絲體及平菇、洋菇、金針菇、香茹及Crdyceps spp.的果肉中的一種或多種，洗滌，在60℃的熱空氣干燥器中干燥，并研磨，得到蘑菇干燥粉末。
選取姬松茸、靈芝、灰樹花、Elfvingia applanata的蘑菇果肉或菌絲體及平菇、洋菇、金針菇、香茹及Crdyceps spp.的果肉中的一種或多種，洗滌，以常規(guī)的方式使用適當?shù)娜軇┰诟邏簹⒕髦刑崛?，得到蘑菇提取物?br> ii)制備乳酸菌培養(yǎng)基通過將重量為0.1-10％的得到的蘑菇成分、重量為1-50％，優(yōu)選為1-20％的脫脂乳、重量為0.1-20％的白糖和平衡重量的純化水加到在所述的i)中得到的含有蘑菇成分的培養(yǎng)基中，并使此混合物均勻化以制備乳酸菌培養(yǎng)基。在該乳酸菌培養(yǎng)基中還可包括其它有效的成分，如低聚糖、糊精、維生素和礦物質(zhì)。
iii)～iv)熱處理及冷卻在75-110℃的溫度范圍熱處理該含有蘑菇成分的培養(yǎng)基15-40分鐘后，將該熱處理的培養(yǎng)基冷卻至35-40℃的溫度范圍。
b)將乳酸菌株接種在該培養(yǎng)基上的步驟將在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至25-40℃溫度范圍的冷藏乳酸菌或熱處理的乳酸菌接種于在步驟a)的iv)中被冷卻的培養(yǎng)基上。此時，基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，接種的乳酸菌株的量可被選擇在重量為1-10％的范圍內(nèi)。
c)培養(yǎng)該接種了菌株的培養(yǎng)基的步驟當保持培養(yǎng)箱的溫度在35-40℃內(nèi)的同時，將接種了菌株的乳酸菌培養(yǎng)基培養(yǎng)3-20小時。如果接種的是熱處理的乳酸菌株，那么培養(yǎng)時間優(yōu)選在3-6小時的范圍內(nèi)。
d)老化該培養(yǎng)的培養(yǎng)基的步驟在3-5℃的溫度范圍內(nèi)將所述步驟c)中培養(yǎng)的菌株老化10-20小時。
下文將說明本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但是優(yōu)選實施方案僅是說明性的，本發(fā)明不限于此。
實施例原料在實驗室培養(yǎng)姬松茸、靈芝、灰樹花、Elfvingia applanata、平菇、洋菇、金針菇、香茹及Crdyceps spp.的菌絲體，從市場得到姬松茸、靈芝、灰樹花、Elfvingia appalnata的果肉。
實施例1-4姬松茸乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例1研磨姬松茸的果肉和菌絲體，得到干燥粉末。將重量為5％的得到的粉末、重量為10％的脫脂乳、重量為2％的白糖和平衡重量的純化水的混合物加到培養(yǎng)基中并均勻化。在100℃的溫度熱處理該含有蘑菇成分的培養(yǎng)基20分鐘，然后冷卻至37℃。
將基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，重量為3％的冷藏保加利亞乳酸桿菌(Lactobacillus bulgaricus)接種于該培養(yǎng)基上。制備6個接種了菌株的含有蘑菇成分的培養(yǎng)基試樣。當保持培養(yǎng)箱的溫度在37℃的同時，將試樣分別培養(yǎng)1、2、3、4、5、6小時，并測定它們的pH和酸度。
隨后，在4℃的溫度下將該培養(yǎng)的試樣老化12小時。在均化器中均勻化該老化的試樣以制備姬松茸的乳酸發(fā)酵溶液。
實施例2除了用姬松茸提取物替代干燥粉末外，按與實施例1相同的過程制備姬松茸乳酸發(fā)酵溶液。
實施例3研磨姬松茸的果肉和菌絲體，得到干燥粉末。將重量為5％的得到的粉末、重量為10％的脫脂乳、重量為2％的白糖和平衡重量的純化水的混合物加到培養(yǎng)基中并均勻化。在100℃的溫度熱處理該含有蘑菇成分的培養(yǎng)基20分鐘，然后冷卻至37℃。
將冷藏的保加利亞乳酸桿菌在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時。
將基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，重量為3％的經(jīng)培養(yǎng)的保加利亞乳酸桿菌接種于該培養(yǎng)基上。制備6個接種了菌株的含有蘑菇成分的培養(yǎng)基試樣。當保持培養(yǎng)箱的溫度在37℃的同時，將試樣分別培養(yǎng)1、2、3、4、5、6小時，并測定它們的pH和酸度。
隨后，在4℃的溫度下將培養(yǎng)的試樣老化12小時。在均化器中均勻化老化的試樣以制備姬松茸的乳酸發(fā)酵溶液。
實施例4除了用姬松茸提取物替代干燥粉末外，按與實施例3相同的過程制備姬松茸乳酸發(fā)酵溶液。
實施例5-8靈芝乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例5除了用靈芝替代姬松茸外，按與實施例1相同的過程制備靈芝乳酸發(fā)酵溶液。
實施例6除了用靈芝替代姬松茸外，按與實施例2相同的過程制備靈芝乳酸發(fā)酵溶液。
實施例7除了用靈芝替代姬松茸外，按與實施例3相同的過程制備靈芝乳酸發(fā)酵溶液。
實施例8除了用靈芝替代姬松茸外，按與實施例4相同的過程制備靈芝乳酸發(fā)酵溶液。
實施例9-12平菇乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例9除了用平菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例1相同的過程制備平菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例10除了用平菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例2相同的過程制備平菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例11除了用平菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例3相同的過程制備平菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例12除了用平菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例4相同的過程制備平菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例13-16洋菇乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例13除了用洋菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例1相同的過程制備洋菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例14除了用洋菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例2相同的過程制備洋菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例15除了用洋菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例3相同的過程制備洋菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例16除了用洋菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例4相同的過程制備洋菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例17-20金針菇乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例17除了用金針菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例1相同的過程制備金針菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例18除了用金針菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例2相同的過程制備金針菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例19除了用金針菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例3相同的過程制備金針菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例20除了用金針菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例4相同的過程制備金針菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例21-24灰樹花乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例21除了用灰樹花替代姬松茸外，按與實施例1相同的過程制備灰樹花乳酸發(fā)酵溶液。
實施例22除了用灰樹花替代姬松茸外，按與實施例2相同的過程制備灰樹花乳酸發(fā)酵溶液。
實施例23除了用灰樹花替代姬松茸外，按與實施例3相同的過程制備灰樹花乳酸發(fā)酵溶液。
實施例24除了用灰樹花替代姬松茸外，按與實施例4相同的過程制備灰樹花乳酸發(fā)酵溶液。
實施例25-28香菇乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例25除了用香菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例1相同的過程制備香菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例26除了用香菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例2相同的過程制備香菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例27除了用香菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例3相同的過程制備香菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例28除了用香菇的果肉替代姬松茸的果肉和菌絲體外，按與實施例4相同的過程制備香菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例29-32Elfvingia applanata乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例29除了用Elfvingia applanata替代姬松茸外，按與實施例1相同的過程制備Elfvingia applanata乳酸發(fā)酵溶液。
實施例30除了用Elfvingia applanata替代姬松茸外，按與實施例2相同的過程制備Elfvingia applanata乳酸發(fā)酵溶液。
實施例31除了用Elfvingia applanata替代姬松茸外，按與實施例3相同的過程制備Elfvingia applanata乳酸發(fā)酵溶液。
實施例32除了用Elfvingia applanata替代姬松茸外，按與實施例4相同的過程制備Elfvingia applanata乳酸發(fā)酵溶液。
實施例33-36Crdvceps spp.乳酸發(fā)酵溶液的制備實施例33除了用香菇的果肉替代Crdyceps spp.的果肉和菌絲體外，按與實施例1相同的過程制備Crdyceps spp.乳酸發(fā)酵溶液。
實施例34除了用香菇的果肉替代Crdyceps spp.的果肉和菌絲體外，按與實施例2相同的過程制備Crdyceps spp.乳酸發(fā)酵溶液。
實施例35除了用香菇的果肉替代Crdyceps spp.的果肉和菌絲體外，按與實施例3相同的過程制備Crdyceps spp.乳酸發(fā)酵溶液。
實施例36除了用香菇的果肉替代Crdyceps spp.的果肉和菌絲體外，按與實施例4相同的過程制備Crdyceps spp.乳酸發(fā)酵溶液。
實施例37平菇乳酸發(fā)酵溶液的制備除了用從平菇的果肉和菌絲體得到的重量為1％的干燥粉末和重量為1％的提取物的混合物替代從姬松茸的果肉和菌絲體得到的干燥粉末外，按與實施例1相同的過程制備平菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例38靈芝乳酸發(fā)酵溶液的制備除了用從靈芝的果肉和菌絲體得到的重量為0.1％的干燥粉末和重量為5.0％的提取物的混合物替代從姬松茸的果肉和菌絲體得到的干燥粉末外，按與實施例1相同的過程制備靈芝乳酸發(fā)酵溶液。
實施例39混合蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的制備將從香菇、平菇和靈芝(重量比＝4∶4∶2)得到的重量為1％的干燥粉末和重量為1％的提取物的混合物、重量為13％的脫脂乳、重量為10％的低聚糖、重量為1％的糊精和重量為74％的純化水均勻化以制得含有蘑菇成分的培養(yǎng)基。通過在80℃的溫度下加熱該含有蘑菇成分的培養(yǎng)基30分鐘來殺菌，然后冷卻至37℃。
將基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，重量為3％的保加利亞乳酸桿菌接種于由此得到的乳酸菌培養(yǎng)基上。將該培養(yǎng)基在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時，然后在4℃的溫度下老化12小時。在均化器中均勻化該老化的試樣以制備混合蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
實施例40-42，對比實施例1和2靈芝乳酸發(fā)酵溶液的制備將1000ml的蒸餾水(總重量的10％)加到100g的靈芝中，并使用高壓殺菌器在低于100℃的溫度下提取1小時。過濾得到的提取物，加入100ml的蒸餾水，再次在高于121℃的溫度下提取1小時以得到靈芝提取物。
將基于每一個培養(yǎng)基總重量計，分別將重量為0.01％(對比實施例1)、重量為0.1％(實施例40)、重量為0.5％(實施例41)、重量為5％(實施例42)及重量為10％(對比實施例2)的得到的靈芝提取物的加到含有重量為8％的脫脂乳、重量為10％的低聚糖、重量為1％的糊精和平衡重量的純化水的每一個培養(yǎng)基中，并均勻化。
將基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，重量為3％的保加利亞乳酸桿菌接種于每一個培養(yǎng)基上。當保持培養(yǎng)箱的溫度在37℃的同時，將每一培養(yǎng)基培養(yǎng)12小時，并在4℃的溫度下老化12小時以制備靈芝乳酸發(fā)酵溶液。
實驗實施例實驗實施例pH、酸度及流變學為測量從實施例1-36得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的pH、酸度及流變學(硬度、斷裂能及彈性分子)隨培養(yǎng)時間的變化，將從每一個實施例得到的乳酸發(fā)酵溶液在1000rpm的均化器中均勻化30秒。
用pH計測定pH，通過將每種蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的一部分(10ml)用三級蒸餾水以1∶1的比例稀釋，再加入0.1％的酚酞溶液，并用0.1N NaOH滴定來測定酸度。
實驗結(jié)果如表1和表2所示，從實施例1-36得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液具有較低的pH和較高的酸度。此外，如圖2-5所示，可確保乳酸有效的形成速率，并且硬度、斷裂能及彈性分子的流變學表現(xiàn)出軟組織和極佳的性質(zhì)(例如粘性)。
特別地，如表2所示，當熱處理的乳酸菌接種在含有蘑菇成分的培養(yǎng)基上時，發(fā)酵時間縮短約33％。
表1蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的pH和酸度

表2蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的pH和酸度


實驗實施例2對過氧化脂質(zhì)形成的抑制作用為研究本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液對過氧化脂質(zhì)的影響，將乳酸菌發(fā)酵的牛奶、香菇，平菇及靈芝的混合粉末、在實施例39中得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液分別加到含有膽固醇的飲食中。
從加入起的4周內(nèi)，研究對雌性大鼠體內(nèi)過氧化脂質(zhì)的影響。
①原料從Jinju Mushroom Agricultural Association得到香菇、靈芝及平菇的干燥產(chǎn)品。將干燥產(chǎn)品切成塊，研磨并粉碎以得到可通過20篩目篩子的細顆粒形式的粉末。
②實驗動物、條件及飲食組成在22±2℃的溫度、50±5％的相對濕度及每12小時光暗交替的條件下培育作為實驗動物體重約為180g的雌性大白鼠(Sprague Dawley)。以固體飲食的形式喂養(yǎng)1周，然后用正常飲食喂養(yǎng)4天。將大鼠分成5組，每組6只大鼠。實驗飲食組由正常飲食組(ND)、膽固醇飲食組(CD)(通過將0.5％(w/w)的膽固醇和0.125％(w/w)的膽酸鈉加到正常的飲食組得到)、添加有乳酸菌發(fā)酵牛奶組(CDFM)(通過將乳酸菌發(fā)酵牛奶加到膽固醇飲食中得到)、添加有蘑菇粉末組(CDMP)(通過將蘑菇粉末加到膽固醇飲食中得到)及添加有蘑菇乳酸發(fā)酵溶液組(CDFMMP)(通過將蘑菇乳酸發(fā)酵溶液加到膽固醇飲食中得到)。此時，CDMP組的蘑菇粉末是香菇、平菇和靈芝的混合物，并將4％量的混合物加到該組中。在CDFM組中，乳酸菌發(fā)酵牛奶是通過在30℃的溫度下用保加利亞乳酸桿菌培養(yǎng)12小時并將其凍干而得到的，將其以13.5％的量加到飲食中。在CDFMMP組中，乳酸菌發(fā)酵牛奶是通過將香菇、平菇和靈芝4∶4∶2的混合物以4％的量加到保加利亞乳酸桿菌培養(yǎng)的溶液中、并在30℃的溫度下培養(yǎng)12小時且凍干而得到的，將其以1 7.5％的量加到飲食中。表3表明這些實驗飲食組的實驗飲食組成。在4周內(nèi)自由供給實驗飲食及飲水。每天在固定時間監(jiān)測飲食供給量，每周測定它們的體重。
表3飲食組成

其中ND正常飲食組CD膽固醇飲食組CDFM乳酸菌發(fā)酵牛奶添加到膽固醇飲食組CDME蘑菇提取物添加到膽固醇飲食組CDFMME蘑菇乳酸發(fā)酵溶液添加到膽固醇飲食組③試樣在實驗的最后一天，實驗動物禁食12小時，用乙醚輕度麻醉，然后從下腔靜脈取血樣。將血樣在室溫3,000rpm下離心15，得到血清。用冷的0.9％的生理鹽水洗滌切開的組織，干燥，稱重，得到用于分析過氧化脂質(zhì)濃度的試樣。
④血清、肝脂質(zhì)及血糖水平的分析使用膽固醇C-測試wako藥盒(Wako Junyaku，Osaka，Japan)測定血清中的總膽固醇，使用HDL-膽固醇E-測試wako藥盒(Wako Junyaku，Osaka，Japan)測定血清中的HDL-膽固醇，使用甘油三酸酯E-測試wako藥盒(Wako Junyaku，Osaka，Japan)測定血清中的中性脂質(zhì)，使用磷脂C-測試wako藥盒(Wako Junyaku，Osaka，Japan)測定血清中的磷質(zhì)，根據(jù)葡萄糖氧化酶方法使用商業(yè)上可得到的藥盒(Wako Junyaku，Osaka，Japan)測定血清中葡萄糖濃度，根據(jù)Folch’s法提取肝組織中的脂質(zhì)并用與測定血清中脂質(zhì)同樣的方法測定其濃度。
⑤每一組織中的勻漿、微粒體及線粒體部分將1.15％KCl-10mM的磷酸鹽緩沖液(pH7.4)加到每一個切開的組織中，然后用均化器均勻化。取出溶液的一部分作為勻漿部分，從剩余的溶液中分別分離出微粒體部和線粒體部分。
⑥組織部分中過氧化脂質(zhì)濃度的測量通過如下的方法測量每一個組織中過氧化脂質(zhì)濃度。首先，將2ml硫代巴比妥酸(TBA)試劑分別加到1ml的勻漿、微粒體及線料體部分溶液中，然后徹底混合。在水浴中加熱此混合物15分鐘，冷卻，在3,000rpm下離心15分鐘。取出上層清液，測量535nm處的吸光率。組織中過氧化脂質(zhì)的濃度表達為nmol/g丙二醛。
⑦統(tǒng)計學使用血液化學分析儀(Vitalab，Spectra II，Merck)測量血清中的ALT和AST值?；趖-試驗檢測每組測試結(jié)果的統(tǒng)計顯著性，并且當其P值小于5％時認為結(jié)果具有統(tǒng)計顯著性。
通過單因子變異數(shù)分析法(one-way ANOVA)將實驗結(jié)果表達為平均值和標準偏差，基于鄧肯多元區(qū)間測試(Duncan’s multiple range test)檢測每組實驗結(jié)果的統(tǒng)計顯著性，并且當其P值小于5％時認為結(jié)果具有統(tǒng)計顯著性。
⑧結(jié)果(1)血清脂質(zhì)濃度的變化表4表明血清脂質(zhì)濃度的變化。
表4在實驗動物的血漿中脂質(zhì)和葡萄糖濃度


其中對于每組的6只大鼠而言值指的是平均值±SE，致動脈硬化指數(shù)(AI)指的是總膽固醇-HDL膽固醇/HDL膽固醇，及具有不同符號的值具有p＜0.05的統(tǒng)計顯著性。
從表4可以得知，與正常飲食組(ND)相比，在膽固醇飲食組(CD)中血清總膽固醇的濃度增加4.6倍，表明較高的膽固醇高血糖。然而，與膽固醇飲食組(CD)相比，在添加有乳酸發(fā)酵牛奶組中(CDFM)中總膽固醇濃度下降44.6％，在添加有蘑菇提取物組(CDMP)中下降57.4％，在添加有蘑菇乳酸發(fā)酵溶液組(CDFMMP)中下降72.0％。
在CDMP和CDFMMP組中血清HDL-膽固醇濃度增加，但是在CDFM中沒有變化。此外，在CDFMMP組中相對于CDMP組有顯著的增長。從此結(jié)果可看出，乳酸菌含有可增加HDL-膽固醇濃度的生量活性成分。
根據(jù)Framinghan心臟病研究，當動脈硬化指數(shù)不超過3.5時，冠狀動脈病的存在是安全的。此外，此研究建議該指數(shù)應(yīng)被保持在不超過4.5。在表3中，比較實驗組間的動脈硬化指數(shù)，在膽固醇飲食組(CD)中的動脈硬化指數(shù)與正常飲食組(ND)相比明顯增加。與添加有乳酸發(fā)酵牛奶組(CDFM)相比，膽固醇飲食組(CD)中的動脈硬化指數(shù)輕微下降。然而，在添加有蘑菇提取物組(CDMP)和添加有蘑菇乳酸發(fā)酵溶液組(CDFMMP)中，它們的動脈硬化指數(shù)分別下降68.4％和83.3％。
(2)在生物膜中的過氧化脂質(zhì)的形成由于組織細胞中過氧化壓力的原因?qū)е伦杂苫纬傻脑黾雍突铙w內(nèi)抗氧化防御力的下降而引起生物膜中脂質(zhì)的過氧化作用。表明動物內(nèi)生物膜過氧化脂質(zhì)形成度的TBARS水平列在表5中。
表5雌性大鼠組織中的TBARS水平(nmol/g組織)

其中對于每組的6只大鼠而言所述的值指的是平均值±SE，及具有不同符號的值具有p＜0.05的統(tǒng)計顯著性。
表5揭示出在正常飲食組和膽固醇飲食組中每個組織中的過氧化脂質(zhì)的相對含量為肝、腎、心臟、脾的順序。然而，在用膽固醇自由喂養(yǎng)4周的雄性大鼠中，每個組織中的TBARS相對含量為大腦、腎、心臟、肝、脾的順序。此外，在用正常飲食喂養(yǎng)的雄性大鼠(6個月大)中，每個組織中的TBARS相對含量為心臟、肝、大腦、腎的順序。這些結(jié)果表明，組織中過氧化脂質(zhì)的形成取決于種類、年齡和飲食組成的不同。
實驗實施例3血清葡萄糖水平的下降作用①方法為檢測蘑菇乳酸發(fā)酵溶液對降低血清葡萄糖水平的影響，在患有糖尿病的患者中進行下面的方法。
首先，從正常飲食組中選定10個患有高血糖癥(平均315mg/dL)的男性(年齡25-67，平均年齡45)，用正常飲食供應(yīng)3周。在飯前7點鐘測量血清葡萄糖水平。結(jié)果列在下面的表6中。
表6作為對照組的患有糖尿病的患者血清葡萄糖水平(mg/dL)的變化

將每天200g的普通酸奶酪產(chǎn)品和正常飲食供應(yīng)給低血清葡萄糖水平的患者達3周。每天清晨飯前測量血清葡萄糖水平。結(jié)果列在下面的表7中。供應(yīng)一周后血清葡萄糖水平增加到262mg/dL(n＝9)，供應(yīng)兩周后血清葡萄糖水平增加到315mg/dL(n＝7)，供應(yīng)三周后血清葡萄糖水平增加到355mg/dL(n＝6)。綜上所述，可以確定在酸奶酪飲食組中沒有血清葡萄糖水平下降作用。
表7供應(yīng)酸奶酪飲食的糖尿病患者血清葡萄糖水平(mg/dL)的變化

將每天200g的在實施例42中得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液和正常飲食供應(yīng)給作為對照組并表現(xiàn)出相同血清葡萄糖水平(321mg/dL)的患有糖尿病的10個男性達3周。每天飯前七點鐘測量血清葡萄糖水平。結(jié)果列在下面的表8中。供應(yīng)一周后血清葡萄糖水平降低到207mg/dL(n＝10)，供應(yīng)兩周后血清葡萄糖水平降低到166mg/dL(n＝7)，供應(yīng)三周后血清葡萄糖水平降低到150mg/dL(n＝10)。此外，10個中第8位糖尿病患者的平均血清葡萄糖水平下降到121mg/dL(n＝8)，特別地，供應(yīng)5天后下降到123mg/dL。
綜上所述，結(jié)果表明本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液對于血清葡萄糖水平的下降有明顯作用。
表8供應(yīng)蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的糖尿病患者血清葡萄糖水平(mg/dL)的變化

實驗實施例4對于降低血清葡萄糖水平有效的蘑菇提取物的含量為測定蘑菇提取物的適合量，用實施例40-43和對比實施例1-2中得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液對每組中的3個人進行實驗。
如下面的表9和圖6a-6e所示，在0.01％到0.5％的濃度范圍內(nèi)，血清葡萄糖水平的下降作用不明顯，但是在小于0.1％的濃度時，血清葡萄糖水平不再增加。此外，在5％水平時的藥理作用最佳，但是在不小于10％水平時會導(dǎo)致嚴重的低血糖癥。由此，可以斷定加入的蘑菇提取物的最佳量相應(yīng)于0.1％到7％的范圍為約200g。然而，其可隨著性別、年齡、體重和糖尿病的嚴重程度而變化。
表9糖尿病患者中血清葡萄糖水平(mg/dL)隨蘑菇乳酸發(fā)酵溶液含量的變化

穩(wěn)定攝取本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液有助于使大多數(shù)患有2型糖尿病的患者保持正常的血清葡萄糖水平。
實驗實施例5蘑菇提取物和乳酸菌的協(xié)同作用為驗明是否在實驗實施例中表現(xiàn)出的血清葡萄糖水平下降是由蘑菇提取物和乳酸菌的協(xié)同作用引起的，連續(xù)將蘑菇提取物和本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液供應(yīng)給患有糖尿病的患者。在測量血清葡萄糖水平后但是在早飯和晚飯前攝取本發(fā)明的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液和蘑菇提取物。每兩天的七點鐘測量血清葡萄糖水平。首先，將在實施例42中得到的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液供應(yīng)給患者達36天，然后切斷供應(yīng)達6天。隨后，當血清葡萄糖水平增加時，將與蘑菇乳酸發(fā)酵溶液相同量的蘑菇提取物供應(yīng)給患者。以預(yù)定的間隔時間(2天)監(jiān)測血清葡萄糖水平的變化。
如下面的表10和附圖7所示，在10天內(nèi)血清葡萄糖水平急劇下降，然后穩(wěn)定在100(mg/dL)約20天(參見圖7中的“A”)。然而，由于切斷了供應(yīng)，血清葡萄糖水平增加到276(mg/dL)(參見圖7中的“B”)。隨后，當將與蘑菇乳酸發(fā)酵溶液相同量的蘑菇提取物供應(yīng)給患者時，血清葡萄糖水平緩慢降低。此后，血清葡萄糖水平?jīng)]有明顯的變化(參見圖7中的“C”)。
表10糖尿病患者中血清葡萄糖水平(mg/dL)隨蘑菇乳酸發(fā)酵溶液和蘑菇提取物的攝取量的變化

從上述結(jié)果可以看出，蘑菇提取物和乳酸菌對于血清葡萄糖水平的下降有協(xié)同作用。
按照本發(fā)明方法制得的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液具有極佳的味道、風味及口味，并且對于抑制過氧化脂質(zhì)的形成和使血清葡萄糖水平下降是有效的。由此，本發(fā)明適用于藥物和食品工業(yè)。
權(quán)利要求
1.一種制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法，包括如下步驟(a)制備含有蘑菇成分的培養(yǎng)基；(b)將乳酸菌株接種在所述的培養(yǎng)基上；(c)培養(yǎng)所述接種了菌株的培養(yǎng)基；及(d)老化所述經(jīng)培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的步驟(a)包括如下步驟i)通過研磨或提取，從蘑菇的果肉或菌絲體得到蘑菇成分；ii)制備乳酸菌培養(yǎng)基；iii)在75-110℃的溫度范圍熱處理所述含有蘑菇成分的培養(yǎng)基15-40分鐘；及iv)將所述的熱處理培養(yǎng)基冷卻至35-40℃的溫度范圍。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述的蘑菇選自姬松茸、靈芝、灰樹花、Elfvingia applanata、平菇、洋菇、金針菇、香茹及Crdycepsspp.。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中在步驟i)中所述的蘑菇提取物是靈芝提取物。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其中在步驟i)中所述的蘑菇成分是從香菇、平菇及靈芝的混合物得到的。
6.如權(quán)利要求2所述的方法，其中在步驟ii)中所述的乳酸菌培養(yǎng)基由重量為0.1-10％的蘑菇成分、重量為1-50％的脫脂乳、重量為0.1-20％的白糖和平衡重量的純化水組成。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中基于含有所述蘑菇成分的培養(yǎng)基總重量計，在步驟b)中將重量為1-10％的冷藏乳酸菌或熱處理的乳酸菌接種。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的欲接種菌株是保加利亞乳酸桿菌。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的菌株是熱處理的乳酸菌。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的熱處理是通過將冷藏的菌株放進培養(yǎng)箱，并將所述的菌株培養(yǎng)至25-40℃的溫度范圍而實現(xiàn)的。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的培養(yǎng)是在35-40℃的溫度范圍內(nèi)進行3-20小時。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的培養(yǎng)進行3-6小時。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的老化是在3-5℃的溫度范圍內(nèi)進行10-20小時。
14.由權(quán)利要求1至13任一項所述方法制得的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液。
15.如權(quán)利要求14所述的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，包括可使血糖水平下降的有效成分。
16.如權(quán)利要求15所述的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，其中所述的有效成分是從靈芝提取物得到的。
17.如權(quán)利要求14所述的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，包括可使血清中過氧化脂質(zhì)形成下降的有效成分。
18.如權(quán)利要求17所述的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，其中所述的有效成分是從香菇、平菇及靈芝的混合物得到的。
全文摘要
一種按照制備蘑菇乳酸發(fā)酵溶液的方法制得的蘑菇乳酸發(fā)酵溶液，其具有極佳的味道、風味及口味，并且對過氧化脂質(zhì)形成表現(xiàn)出抑制作用，對血糖水平表現(xiàn)出下降作用。該方法包括如下步驟(a)制備含有蘑菇成分的培養(yǎng)基；(b)將乳酸菌株接種在該培養(yǎng)基上；(c)培養(yǎng)該接種了菌株的培養(yǎng)基；及(d)老化該經(jīng)培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
文檔編號A61K35/74GK1511193SQ01823234
公開日2004年7月7日 申請日期2001年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月7日
發(fā)明者金梵奎, 申甲均, 車載英, 全炳三, 裵東園 申請人:拜奧哈步株式會社