專利名稱：一種凍干人血漿病毒滅活方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用材料消毒方法，特別是一種凍干人血漿病毒滅活方法。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)期以來(lái)成分輸血在救死扶傷中成為醫(yī)學(xué)上的重要手段。然而自二十世紀(jì)六十年代以后，肝炎病毒通過(guò)輸血引起肝炎傳染的嚴(yán)重事件，人們對(duì)血漿的病毒安全性有了新的關(guān)注。八十年代中期，艾滋病的出現(xiàn)以及艾滋病毒通過(guò)注射血液制品導(dǎo)致傳染的事件，引起了世界各國(guó)的高度重視。歐美各國(guó)臨床上要求使用經(jīng)病毒滅活的全血漿。我國(guó)政府1995年禁止使用未經(jīng)病毒滅活的凍干人全血漿，生產(chǎn)凍干人血漿的廠家均已停止生產(chǎn)。但現(xiàn)在國(guó)內(nèi)各地的中心血站提供的新鮮冰凍血漿仍未使用病毒滅活的技術(shù)措施，因此，我國(guó)現(xiàn)行使用新鮮冰凍血漿應(yīng)認(rèn)為是一種高危險(xiǎn)度的血液制品。全血漿的病毒滅活技術(shù)成為我國(guó)輸血界急迫需要解決的一項(xiàng)課題。
目前，國(guó)外在制備病毒滅活血漿或血液制品時(shí)，已經(jīng)使用S/D、低PH孵放和巴氏滅活法等，其中S/D病毒滅活技術(shù)得到了美國(guó)衛(wèi)生部門的認(rèn)可，其使用有十五年的歷史，其病毒滅活效果是肯定的。S/D滅活病毒的方法是，在血漿中加入1％的TNBP(磷酸三丁酯)和1％的Tritonx-100(曲拉通一100)，加熱至30±1℃，攪拌4小時(shí)，即可滅活病毒。盡管S/D、低PH孵放和巴氏滅活法能使原有的血液制品病毒傳播的可能性大為降低，由于上述滅活病毒方法對(duì)病毒滅活機(jī)制的差異性而不能保證受者在大量、多次輸注這些制品而不受其感染。已知S/D法僅能滅活脂包膜病毒，而對(duì)細(xì)小病毒不能滅活，而目前國(guó)外的病毒滅活血漿僅采用一步法進(jìn)行病毒滅活，因此，這種一步法制備的病毒滅活血漿仍存在有病毒感染的危險(xiǎn)性，同時(shí)，S/D滅活病毒血漿為冰凍劑型，其儲(chǔ)存和運(yùn)輸要求-30℃的條件，為儲(chǔ)存和運(yùn)輸造成較大困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，采用雙病毒滅活方法使血漿中的病毒滅活更徹底，并且便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的，本方法包含有以下步驟，(1)將冰凍血漿置于融漿罐中，融漿水溫≤30℃，使?jié){液溫度升至20-25℃，(2)上述的融漿置于滅活病毒罐中，將重量比1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血漿中并攪拌均勻和升溫，當(dāng)血漿升溫至30±1℃時(shí)，保持4小時(shí)，其間攪拌不停止，(3)將滅活病毒的血漿從滅活病毒罐中移入杯式離心機(jī)中，并加入體積比5％的植物油，進(jìn)行離心分離20分鐘，棄油相保留水相血漿備用，(4)將分離后的水相血漿經(jīng)含有C18樹脂層析柱流出，制得不含磷酸三丁酯和曲拉通-100的血漿，(5)將上述血漿經(jīng)超濾膜進(jìn)行濃縮，(6)將濃縮的血漿經(jīng)孔徑為0.2微米的濾膜過(guò)濾除菌后進(jìn)行分裝，其特征在于還有以下步驟，(7)將分裝的血漿瓶在0-4℃環(huán)境中預(yù)凍，并于-40℃以下旋凍，然后置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍至-40℃以下，并進(jìn)行抽真空，真空度為10pa以下，升華40～45小時(shí)，然后緩慢升溫至小于35℃，整個(gè)過(guò)程為100～120小時(shí)，瓶?jī)?nèi)血漿呈粉末狀，對(duì)瓶口進(jìn)行真空密封，(8)將冷凍干燥后的瓶裝血漿置于沸水中浴加溫30分鐘，沸水溫度為98-100℃。本發(fā)明由于在現(xiàn)有的S/D病毒滅活工藝制取的血漿進(jìn)一步實(shí)施干熱滅活技術(shù)，和冷凍干燥技術(shù)，血漿的劑型為粉末狀，因此，本發(fā)明所制取的血漿具有輸注更安全，且存儲(chǔ)溫度為2-8℃，三年，便于存儲(chǔ)和運(yùn)輸。
具體實(shí)施例方式取AB型或者同種凝集素含量較低的A型或者B型的血漿20l置于(1)融漿罐中進(jìn)行融漿，融漿水溫20-30℃，不停地進(jìn)行攪拌，當(dāng)漿液溫度升至23℃為止；(2)將上述融漿置于滅活病毒罐中，在罐外先配2LS/D濃液，即取磷酸三丁酯224.4Ml(11％，W/V)和曲拉通-100為220克(11％，W/V)加入注射用水至2L攪勻后以500ml/分鐘的速度加入到滅活病毒罐內(nèi)的血漿中，此時(shí)血漿的體積為22L，攪拌并升溫至30±1℃后，繼續(xù)攪拌4小時(shí)，實(shí)現(xiàn)滅活病毒；(3)將滅活病毒的血漿置于杯式離心機(jī)，取1.1L蓖麻油加入到血漿中攪拌30分鐘進(jìn)行萃取后，開動(dòng)離心機(jī)，其轉(zhuǎn)速為2500轉(zhuǎn)/分，保持溫度20±1℃，分離20分鐘，用泵抽出上層油層廢棄物約1.3L，大部分的滅活劑磷酸三丁酯和曲拉通-100從血漿中取出，得水相血漿約21.6L；(4)將上述的水相血漿注入樹脂C18層析柱流出進(jìn)行層析分離，將血漿中的殘余滅活劑吸附在C18樹脂中。要求每次經(jīng)過(guò)C18樹脂的血漿量為6倍的樹脂量，流速為60cm/小時(shí)，得層析柱流出液約25L，由于注射用水進(jìn)行沖洗樹脂柱，所以流出液量會(huì)增加；(5)將上述的層析柱流出液在分子量為10K的超濾膜中進(jìn)行濃縮，得濃縮液約18-19L，其濃度約為5-5.5％；(6)濃縮液經(jīng)孔徑為0.2微米的濾膜過(guò)濾進(jìn)行除菌后用玻璃瓶分裝，分裝瓶規(guī)格可以有100毫升、50毫升和25毫升/瓶，瓶塞半壓在瓶口中；(7)對(duì)分裝瓶中的血漿進(jìn)行冷凍干燥，首先對(duì)分裝瓶進(jìn)行4℃的預(yù)凍，然后將分裝瓶放在凍干機(jī)內(nèi)，凍干機(jī)溫度為-40℃以下，同時(shí)抽真空，真空度為10pa以下進(jìn)行升華40-45小時(shí)后，逐漸地緩緩升溫到≤35℃，全部過(guò)程為100-120小時(shí)，得粉末血漿，血漿中的水份小于1％，對(duì)分裝瓶進(jìn)行真空密封；(8)對(duì)密封的瓶?jī)?nèi)粉末血漿進(jìn)行干熱滅活病毒處理，將分裝瓶置于沸水浴中加熱30分鐘，沸水溫度為98-100℃，得到二次滅活病毒的凍干血漿成品。
凍干血漿的適應(yīng)癥與使用方法，本品主要用于防止手術(shù)、燒傷、失血、創(chuàng)傷性休克及治療低蛋白血癥，凝血因子水平低下者。使用本品時(shí)應(yīng)先用30-37℃的0.1％枸櫞酸溶液溶解，并以帶有濾網(wǎng)的輸血器進(jìn)行靜脈輸注，輸注劑量一般為12-15毫升/公斤體重。
本發(fā)明制品于2002年1月已經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢測(cè)，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。
權(quán)利要求
1.一種凍干人血漿病毒滅活方法，本方法包含有以下步驟，(1)將冰凍血漿置于融漿罐中，融漿水溫≤30℃，使?jié){液溫度升至20-25℃，(2)上述的融漿置于滅活病毒罐中，將重量比1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血漿中并攪拌均勻和升溫，當(dāng)血漿升溫至30±1℃時(shí)，保持4小時(shí)，其間攪拌不停止，(3)將滅活病毒的血漿從滅活病毒罐中移入杯式離心機(jī)中，并加入體積比5％的植物油，進(jìn)行離心分離20分鐘，棄油相保留水相血漿備用，(4)將分離后的水相血漿經(jīng)含有C18樹脂層析柱流出，制得不含磷酸三丁酯和曲拉通-100的血漿，(5)將上述血漿經(jīng)超濾膜進(jìn)行濃縮，(6)將濃縮的血漿經(jīng)孔徑為0.2微米的膜過(guò)濾除菌后進(jìn)行分裝，其特征在于還有以下步驟，(7)將分裝的血漿瓶在0-4℃冷浴中預(yù)凍，并于-40℃下旋凍，然后置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍至-40℃以下，并進(jìn)行抽真空，真空度為10pa以下，升華40～45小時(shí)，然后緩慢升溫至小于35℃，整個(gè)過(guò)程為100～120小時(shí)，瓶?jī)?nèi)血漿呈粉末狀，對(duì)瓶口進(jìn)行真空密封，(8)將冷凍干燥后的瓶裝血漿置于沸水浴中加溫30分鐘。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凍干人血漿病毒滅活方法，其特征在于步驟(8)所述的沸水溫度為98-100℃。
全文摘要
一種凍干人血漿病毒滅活方法,它包含有以下步驟,冰凍血漿→融漿→S/D滅活病毒→植物萃取滅活劑→C18層析柱吸附滅活劑→超濾濃縮→濾膜除菌分裝,其特征在于:將分裝的血漿置于凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行真空低溫升華干燥密封→在沸水浴中進(jìn)行干熱滅活制得粉狀成品血漿。本發(fā)明的血漿制品病毒滅活更徹底,使用更安全,且具有保存和運(yùn)輸更方便的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61L2/16GK1376520SQ02103960
公開日2002年10月30日 申請(qǐng)日期2002年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月28日
發(fā)明者安康, 馬小偉, 潘若文, 劉文芳, 范蓓 申請(qǐng)人:華蘭生物工程股份有限公司