專利名稱：一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及從金黃色葡萄球菌分泌物中提取活性物質(zhì)的相關(guān)技術(shù)。
背景技術(shù)：
青春痘，學(xué)名“痤瘡”，是一種常發(fā)于青春期青少年男女的毛囊皮脂腺疾病，。常于面部、前胸、后背等部位出現(xiàn)黑頭粉刺、白頭粉刺、紅丘疹、膿皰、囊腫及疥、痛、蜂窩織織等。其形成與成脂分泌旺盛，內(nèi)分泌激素刺激及毛囊內(nèi)細(xì)菌寄生繁殖等多種因素有關(guān)。其治療時(shí)間由數(shù)月至數(shù)年不等，因此，加強(qiáng)日常皮膚護(hù)理，輔以藥物治療是消除青春痘的極為有效的辦法。但目前市場(chǎng)上的許多專用藥物及專用化妝品對(duì)其治療效果不佳，僅起護(hù)膚美容的作用居多。因此開發(fā)對(duì)青春痘有特殊療效的消痘生物活性劑，是有市場(chǎng)優(yōu)勢(shì)的。
相關(guān)方面的發(fā)明創(chuàng)造，如申請(qǐng)?zhí)枮椤?110606.7”，名稱為“從金黃色葡萄球菌代謝產(chǎn)物中提取治療惡性腫瘤用藥的方法”中，提出了用金黃色葡萄球菌代謝產(chǎn)物提取活性物質(zhì)的方法，但其菌株和發(fā)明的目的及方法與本發(fā)明不同。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，為社會(huì)提供一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效，制作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)效率高的生物制劑的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法。
包括以下步驟a、培養(yǎng)基的制備按重量百分比稱取以下原料蛋白胨0.8-1.1％ 牛肉膏或營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基0.3-0.5％氯化鈉5-7％葡萄糖0.5-0.8％ 蒸餾水91-93％以上除葡萄糖外，其余組份先用少量蒸餾水充分混合溶解，再將蒸餾水加至標(biāo)準(zhǔn)，用2m氫氧化鈉或2m鹽酸調(diào)節(jié)pH為7.3-7.6，然后高壓蒸氣15磅、121.3℃滅菌15分鐘得液體培養(yǎng)基；b、菌種制備開啟凍干菌種管、用上述滅菌過(guò)的液體培養(yǎng)基或用pH值為7.4的PBS適量(約0.5m)稀釋，溶解后移種到增菌培養(yǎng)基，在35-37℃培養(yǎng)18-25小時(shí)，得備用菌種，置于冰箱備用；c、活性劑的制備①擴(kuò)大培養(yǎng)將備用菌種，按培養(yǎng)基總體積的1-1.5％移種到液體培養(yǎng)基中，經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，在培養(yǎng)14-16小時(shí)時(shí)，加入05％葡萄糖再繼續(xù)培養(yǎng)4-8小時(shí)得擴(kuò)大培養(yǎng)菌液。
②分泌物的提?。?
③用0.45um濾膜將擴(kuò)大培養(yǎng)液中的菌體分離棄之，濾液再用0.22um濾膜過(guò)濾，濾液加入0.1％甲醛，在37℃下置12小時(shí)，轉(zhuǎn)4℃置7天后得半成品活性劑。
D、配制將半成品活性劑加入20％的滅菌甘油，充分混合后用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)pH值7.0-7.2，得成品，置冰箱貯存。做毒性、安全等芥定實(shí)驗(yàn)，合格轉(zhuǎn)分包裝。芥定①活性5mg/ml以上，②毒性、安全等藥試驗(yàn)，按生物制品規(guī)程執(zhí)行。
對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法，其最佳配方在于所述培養(yǎng)基的制備中各原料的重量百分比為蛋白胨1％市售牛肉膏或市售營(yíng)養(yǎng)肉湯(固體)0.4％，氯化鈉5％，葡萄糖0.5％，蒸餾水93.1％或加至所需總量本發(fā)明的技術(shù)進(jìn)步在于，生產(chǎn)生物制劑的方法簡(jiǎn)單適用，所得產(chǎn)品對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效。
具體實(shí)施方法一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法，所述生物制劑的生產(chǎn)方法包括以下步驟a、培養(yǎng)基的制備按重量百分比稱取以下原料蛋白膠0.8-1.1％ 牛肉膏或市售營(yíng)養(yǎng)肉湯0.3-0.5％，也可按廠家說(shuō)明配制 氯化鈉5-7％ 葡萄糖0.5-0.8％ 蒸餾水93.1％或加至所需總量以上除葡萄糖外，其余組份充分混合溶解，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)PH為7.3-7.5，然后高壓蒸氣15磅、121.3℃滅菌15分鐘得液體培養(yǎng)基；b、菌種制備開啟凍干菌種管、用上述液體培養(yǎng)基或用pH值7.4的PBS適量(約0.5ml)稀釋，溶解后移種到增菌培養(yǎng)基在35-37℃培養(yǎng)18-25小時(shí)，得備用菌種置于冰箱備用；c、活性劑的制備①擴(kuò)大培養(yǎng)將備用菌種，按培養(yǎng)基體積的1-1.5％移種到pH值7.2-7.4液體培養(yǎng)基中，經(jīng)35-37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，在培養(yǎng)14-18小時(shí)時(shí)，加入0.5％葡萄糖得擴(kuò)大培養(yǎng)液。
②分泌物的提取；③用0.45um濾膜將擴(kuò)大培養(yǎng)液中的菌體分離棄之，濾液再用0.22um濾膜過(guò)濾，濾液加入0.1％甲醛，在37℃下置12小時(shí)，轉(zhuǎn)4℃置7天后得半成品制劑。
D、配制將半成品制劑加入20％的滅菌甘油，充分混合后調(diào)pH值為7.0-7.2，置冰箱貯，備分包裝。
對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法，最佳方法所述培養(yǎng)基的制備中各原料的重量百分比為蛋白胨1％ 市售牛肉膏0.4％或市售營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基按廠家提供的說(shuō)明配制，氯化鈉5％，葡萄糖0.5％，蒸餾水加至所配總量。
例如配1000ml液體培養(yǎng)基蛋白胨10克，氯化鈉50克，葡萄糖5克(培養(yǎng)14小時(shí)時(shí)加入)，市售固體營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基17克，(培養(yǎng)基制造廠瓶簽說(shuō)明提供)，以上除葡萄糖外，其余成份先用600ml蒸餾水稀釋，使其溶解后，再補(bǔ)加到1000ml，攪拌均勻，用的氫氧化鈉或鹽酸調(diào)pH7.4-7.6高壓蒸氣滅菌；15磅121.3℃，15分鐘后，自然冷卻至37℃以下備用。
本發(fā)明臨床實(shí)驗(yàn)實(shí)例1用藥人數(shù)33人，采用擦涂方法，洗凈患處后，直接將活性劑涂于患處，此次試驗(yàn)只用藥一次，試驗(yàn)結(jié)果，次日見效13人，第二日見效9人，第三日見效6人，無(wú)效5人，按百分比統(tǒng)計(jì)有效率84.9％。
實(shí)例2中學(xué)生23人，用藥一次，有效率達(dá)82％。
實(shí)例3零散青年至壯年43人，次日見效17人，占39.5％，5日內(nèi)有效19人，占44.2％，無(wú)效7人占16.3％，有效率為83.7％，無(wú)效為16.3％。
用“痘立消”和生物活性劑作同時(shí)同人不同部位對(duì)比試驗(yàn)人數(shù)為8人，痘立消2天內(nèi)全不見效，第4天見效2人，占25％?；钚詣┐稳找娦?人占50％，4日內(nèi)見效3人，占37.5％無(wú)效1人，占12.5％，還有一例膏劑，一工人用80元買來(lái)，用藥一月余無(wú)任何好轉(zhuǎn)，后并用活性劑3天見效。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法，其特征在于所述生物制劑的生產(chǎn)方法包括以下步驟a、培養(yǎng)基的制備按重量百分比稱取以下原料蛋白胨0.8-1.1％，牛肉膏或營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，氯化鈉5-7％，葡萄糖0.5-0.8％，蒸餾水91-93％；以上除葡萄糖外，其余組份先用少量蒸餾水使其充分溶解，然后加蒸餾水并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值7.3-7.5，然后高壓蒸氣15磅、121.3℃滅菌15分鐘得液體培養(yǎng)基；b、菌種制備開啟凍干菌種管、用上述滅菌過(guò)的液體培養(yǎng)基或用0.5ml、pH值為7.4的PBS稀釋，溶解后移種到增菌培養(yǎng)基，在35-37℃培養(yǎng)18-25小時(shí)，得備用菌種，置于冰箱備用；c、活性劑的制備①擴(kuò)大培養(yǎng)將備用菌種，按培養(yǎng)基總體積的1-1.5％移種到液體培養(yǎng)基中，經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，在培養(yǎng)14-16小時(shí)時(shí)，加入0.5％葡萄糖再繼續(xù)培養(yǎng)4-8小時(shí)，得擴(kuò)大培養(yǎng)菌液。②分泌物的提??；③用0.45um濾膜將擴(kuò)大培養(yǎng)液中的菌體分離棄之，濾液再用0.22um濾膜過(guò)濾，濾液加入0.1％甲醛，在37℃下置12小時(shí)，轉(zhuǎn)4℃置7天后得半成品活性劑。D、配制將半成品活性劑加入20％的滅菌甘油，充分混合后用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)pH值為7.0-7.2得成品，置冰箱貯存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法，其特征在于所述培養(yǎng)基的制備中各原料的重量百分比為蛋白胨1％ 牛肉膏0.4％ 氯化鈉5％葡萄糖0.5％ 蒸餾水93.1％
全文摘要
一種對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效的生物制劑的生產(chǎn)方法，涉及從金黃色葡萄球菌分泌物中提取活性物質(zhì)相關(guān)技術(shù)，具體技術(shù)包括①用蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、葡萄糖、蒸餾水制備培養(yǎng)基；②用得到的液體培養(yǎng)基制菌種；③用制得的菌種擴(kuò)大培養(yǎng)活性物，分泌物并過(guò)濾，得成品。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，生效效率高，對(duì)痤瘡、粉刺、毛囊炎有特殊療效。
文檔編號(hào)A61K35/74GK1401333SQ02108868
公開日2003年3月12日 申請(qǐng)日期2002年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月16日
發(fā)明者袁文潭 申請(qǐng)人:袁文潭