專利名稱：蛋黃抗癌抗體制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種蛋黃抗癌抗體制備方法，另外還涉及該蛋黃抗癌抗體的用途。
抗癌抗體的制備對(duì)腫瘤的診斷、治療和預(yù)防具有非常重要的意義，因而受到國(guó)內(nèi)外生物醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，已開展了大量的工作并取得了較大的進(jìn)展。在現(xiàn)有技術(shù)中多采用單克隆抗癌抗體應(yīng)用于惡性腫瘤的診斷和生物治療，其中單克隆抗癌抗體的制備方法一般包括獲取癌細(xì)胞相關(guān)抗原、免疫小鼠和融合雜交瘤三個(gè)步驟，亦即a首先利用生化和免疫化學(xué)的方法獲取攜帶有癌細(xì)胞相關(guān)信息的癌細(xì)胞相關(guān)抗原，b然后將該癌細(xì)胞相關(guān)抗原多次重復(fù)注射入小鼠體內(nèi)，待小鼠發(fā)生特異性免疫反應(yīng)一定時(shí)間后，取出其脾臟并分離出帶有癌細(xì)胞相關(guān)抗原信息的致敏淋巴細(xì)胞，再將該致敏淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，再篩選出針對(duì)于癌細(xì)胞相關(guān)抗原的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外擴(kuò)增或接種于小鼠腹腔內(nèi)，即可從培養(yǎng)上清液或小鼠腹水中獲得所需的單克隆抗癌抗體。
上述單克隆抗體(簡(jiǎn)稱單抗)或多單克隆抗體(簡(jiǎn)稱多抗)作為癌癥(亦稱為惡性腫瘤)診斷劑或檢測(cè)劑，近年來(lái)已在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。該類方法的原理是基于單抗或多抗對(duì)相應(yīng)腫瘤抗原的高特異性識(shí)別能力而設(shè)計(jì)的，結(jié)合以相應(yīng)的標(biāo)記物(酶標(biāo)、金標(biāo)、熒光、發(fā)光和放射性標(biāo)記等)而顯示腫瘤抗原的存在與否及其量的多少。
單抗作為治療劑的研究也于近年獲得重要進(jìn)展。單抗藥物(monoclonal antibodyagents)可應(yīng)用于治療腫瘤、病毒性感染、心血管病以及其它疾患，尤其是用于腫瘤治療，已顯示出良好的前景。抗腫瘤抗體藥物一般包括兩類，一是抗腫瘤單抗或多抗；二是抗腫瘤單抗或多抗偶聯(lián)物，或稱免疫偶聯(lián)物(immunoconjugate)。免疫偶聯(lián)物分子由單抗或多抗與“彈頭”藥物兩部分構(gòu)成，故稱為導(dǎo)向藥物，又稱為生物導(dǎo)彈或“魔彈”(magic bullets)，與之相對(duì)應(yīng)的治療方法稱為導(dǎo)向治療。單抗或多抗所針對(duì)的靶標(biāo)通常為腫瘤細(xì)胞表面的腫瘤相關(guān)抗原或特定的受體。用作“彈頭”的物質(zhì)主要有三類，即放射性核素、藥物和毒素，其與單抗或多抗連接分別構(gòu)成放射免疫偶聯(lián)物、化學(xué)免疫偶聯(lián)物和免疫毒素。自80年代以來(lái)對(duì)抗腫瘤單抗藥物進(jìn)行了大量研究，特別是自1997年以來(lái)，Rituxan、Herceptin在美國(guó)相繼獲批準(zhǔn)用于臨床腫瘤治療，單抗藥物的研究與開發(fā)有了新的發(fā)展勢(shì)頭，成為生物技術(shù)藥物的新熱點(diǎn)(甄永蘇，單克隆抗體藥物治療腫瘤的研究現(xiàn)狀與展望，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，229-12)。
盡管單抗藥物的臨床研究結(jié)果已為其應(yīng)用于治療腫瘤展示出良好的前景，但仍有許多問(wèn)題需要進(jìn)一步研究解決(Nguyen DT，Amess JA，Doughty H，et al.IDEC-C2B8anti-CD20(rituximab)im munotherapy in patients with low-grade non-Hodgkin′slymphoma and lymphoproli ferative disordersevaluation of response on 48 patients.Eur JHaematol，1999，6276-82)。單抗藥物存在的問(wèn)題主要涉及免疫學(xué)和藥理學(xué)兩方面。免疫學(xué)方面的問(wèn)題關(guān)鍵是人抗鼠Ig抗體(HAMA)反應(yīng)，因?yàn)槎嗄陙?lái)用于臨床研究的單抗藥物多數(shù)使用小鼠單抗制備，往往導(dǎo)致HAMA反應(yīng)。此外，腫瘤細(xì)胞群體在抗原性方面的異質(zhì)性，腫瘤細(xì)胞的抗原性調(diào)變等也能影響單抗藥物的療效。藥理學(xué)方面的問(wèn)題主要是到達(dá)腫瘤的藥量不足。單抗藥物在體內(nèi)運(yùn)送過(guò)程中受多種因素影響。由于它是異體蛋白，會(huì)被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取，有相當(dāng)數(shù)量將積聚于肝、脾和骨髓；再者就是機(jī)體對(duì)該異體蛋白產(chǎn)生抗體而降低其效力。單抗藥物是大分子物質(zhì)，通過(guò)毛細(xì)血管內(nèi)皮層以及穿透腫瘤細(xì)胞外間隙均受到限制。(甄永蘇，單克隆抗體藥物治療腫瘤的研究現(xiàn)狀與展望，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，229-12)。
腫瘤疫苗免疫治療是利用腫瘤抗原進(jìn)行主動(dòng)免疫來(lái)激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤的主動(dòng)特異性免疫反應(yīng)。目前所研究的腫瘤疫苗主要是基因工程疫苗、肽疫苗、核酸疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗。其中a腫瘤基因工程疫苗是通過(guò)基因重組技術(shù)，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞而制備的疫苗。b肽疫苗制備是基于在免疫反應(yīng)中抗原在胞漿內(nèi)降解為短肽，最后形成肽-MHC-TCR復(fù)合體最終激發(fā)CTL反應(yīng)。肽疫苗主要包括(1)腫瘤特異性抗原肽疫苗其特異性高，作為肽疫苗是最為理想的選擇。(2)病毒相關(guān)肽疫苗一些人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展與病毒密切相關(guān)，這些腫瘤細(xì)胞有病毒基因，能編碼合成病毒相關(guān)抗原作為機(jī)體免疫攻擊的靶抗原。(3)癌基因、抑癌基因突變肽疫苗癌基因、抑癌基因的改變?cè)谀[瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。改變的癌基因、抑癌基因產(chǎn)物可以成為機(jī)體免疫系統(tǒng)攻擊的目標(biāo)。因此，來(lái)源于癌基因、抑癌基因突變產(chǎn)物的肽疫苗在腫瘤的治療及預(yù)防上具有重要意義。c核酸疫苗是由編碼能引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的抗原基因片段和載體構(gòu)建而成的，包括DNA疫苗和RNA疫苗，目前研究較多的為DNA疫苗。核酸腫瘤疫苗能夠同時(shí)刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，誘導(dǎo)許多亞單位疫苗不能誘導(dǎo)的CTL效應(yīng)。d抗獨(dú)特型抗體疫苗(Ab2疫苗)是根據(jù)抗獨(dú)特型抗體具有模擬抗原及免疫調(diào)節(jié)的雙重作用，同時(shí)能克服機(jī)體免疫抑制，打破免疫耐受故能代替腫瘤抗原誘發(fā)特異性主動(dòng)免疫反應(yīng)(Bhattacharya CM，Mukerjee S，biddle W，et al.Murinemonoclonal anti-idiotype antibldy as a potential netword antigen for humancarcinoembryonic antigen.J Immumol，1990，1452758.)。另外還有用腫瘤細(xì)胞制成的腫瘤疫苗進(jìn)行主動(dòng)免疫治療，可使病人體內(nèi)產(chǎn)生大量對(duì)抗腫瘤細(xì)胞的抗體。
在上述腫瘤疫苗免疫治療方法中，由于腫瘤抗原的抗原性較弱，且?guī)Я鏊拗鹘?jīng)常處于免疫抑制狀態(tài)，難以激發(fā)有效的抗腫瘤反應(yīng)。盡管抗獨(dú)特型抗體的研究已取得許多進(jìn)展，但事物總是兩方面的。Ab2疫苗應(yīng)用存在許多困難，因?yàn)锳b2β雖能模擬小分子多肽抗原，卻難以精確反映大分子蛋白質(zhì)抗原的決定簇，尤其是Ab2β單抗。再者由于腫瘤抗原極其復(fù)雜，常發(fā)生調(diào)變等，制備廣譜的腫瘤特異性獨(dú)特型疫苗難度很大。更重要的是目前使用的Ab2β主要來(lái)自鼠雜交瘤細(xì)胞，為異種蛋白，能激發(fā)人免疫系統(tǒng)產(chǎn)生人抗鼠Ig抗體(HAMA)，發(fā)生中和反應(yīng)并產(chǎn)生毒性免疫復(fù)合物，而降低療效，嚴(yán)重時(shí)可引起血清病反應(yīng)。
鑒于以上技術(shù)方案所存在的諸多問(wèn)題，為了避免或減少HAMA反應(yīng)，現(xiàn)通常是使鼠源性單抗人源化或研制完全的人源抗體。單抗人源化主要是通過(guò)基因工程技術(shù)制備嵌合抗體(chimeric antibody)或改形抗體(reshaping antibody)。嵌合抗體是將Fc段置換為人源性，其它部分仍為鼠源性。改形抗體是指除互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)為鼠源性外，其它部分均為人源性。使偶聯(lián)物分子小型化，以提高藥物對(duì)腫瘤的滲透力，研制高效單抗藥物。局部注射以提高單抗藥物在腫瘤部位的濃度。多種抗體混合應(yīng)用以彌補(bǔ)單抗的異質(zhì)性問(wèn)題。其中鼠源性單抗人源化和研制完全的人源抗體具有較高的技術(shù)難度，難于普及應(yīng)用。
禽類尤其是雞在系統(tǒng)發(fā)育上與哺乳動(dòng)物有很大差異，雞的免疫球蛋白與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白在免疫學(xué)特性上也有很大不同。雞的免疫系統(tǒng)能識(shí)別更多的免疫反應(yīng)位點(diǎn)和更多的抗原決定簇，因此雞免疫系統(tǒng)對(duì)哺乳動(dòng)物的蛋白或生物分子能產(chǎn)生具有更高效價(jià)和親和力的特異性抗體。雞免疫系統(tǒng)針對(duì)于外源性蛋白所產(chǎn)生的IgY不僅具有更高的免疫特異性，更重要的是這種特異性IgY主要儲(chǔ)存在雞蛋黃中，因此可利用下蛋母雞作為免疫反應(yīng)器來(lái)大量生產(chǎn)具有重要臨床應(yīng)用價(jià)值的抗體藥物。
眾所周知雞蛋作為人類的常用食品和化妝品原料，無(wú)論內(nèi)服和外用均對(duì)人體無(wú)任何生物毒性和不良作用。因此，利用禽類作為免疫反應(yīng)器來(lái)大量生產(chǎn)抗體藥物，并應(yīng)用于腫瘤的診斷和導(dǎo)向治療，將具有極廣闊的應(yīng)用前景。以蛋黃抗癌抗體IgY為原料制備的生物導(dǎo)彈和抗獨(dú)特型抗體腫瘤疫苗(Ab2疫苗)可以很好地解決上述單抗偶聯(lián)物或上述腫瘤疫苗所存在的HAMA反應(yīng)和異質(zhì)性問(wèn)題。
本發(fā)明的目的在于克服上述缺點(diǎn)與不足，提供一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，包括針對(duì)于腫瘤免疫原的蛋黃多克隆抗癌抗體IgY、抗獨(dú)特型抗體和腫瘤特異性表達(dá)抗原的制備方法，另外還涉及該蛋黃抗癌抗體的用途即采用該蛋黃抗癌抗體制備相關(guān)藥物、食品或保健品。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的一種蛋黃抗癌抗體的制備方法是利用禽類作為免疫反應(yīng)器，通過(guò)將腫瘤特異性免疫原(包括腫瘤細(xì)胞、純化或重組抗原或疫苗瘤苗、腫瘤特異性DNA或mRNA及其與相應(yīng)載體組成的重組體、針對(duì)于腫瘤特異性抗原的單克隆或多克隆抗體)及其組合物單獨(dú)或聯(lián)合注射給產(chǎn)蛋禽類尤其是雞，使其產(chǎn)生針對(duì)于腫瘤特異性免疫原的蛋黃IgY抗體或抗獨(dú)特型抗體(包括Ab2α和Ab2β)或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物而被大量地輸送到蛋黃中儲(chǔ)存，然后無(wú)創(chuàng)性的利用蛋黃提純所需要的抗癌抗體(包括腫瘤特異性蛋黃IgY抗體、腫瘤特異性表達(dá)抗原和抗獨(dú)特型抗體Ab2α和Ab2β中的任一種或其組合物)。利用該蛋黃抗癌抗體中的IgY抗體為主要原料可制備成針對(duì)于腫瘤特異性抗原的免疫診斷藥劑和免疫治療藥劑，包括腫瘤體外診斷試劑、腫瘤體內(nèi)導(dǎo)向診斷試劑和特異性蛋黃抗癌抗體免疫治療劑以及特異性蛋黃抗癌抗體偶聯(lián)藥物或毒素的導(dǎo)向藥物即生物導(dǎo)彈；利用該蛋黃抗癌抗體中的腫瘤特異性表達(dá)抗原可制備成針對(duì)于腫瘤特異性抗原的免疫診斷藥劑和免疫治療藥劑，包括腫瘤體外診斷試劑和腫瘤特異性疫苗瘤苗和核酸疫苗；利用該蛋黃抗癌抗體中的抗獨(dú)特型抗體Ab2α和Ab2β為主要原料可制備成針對(duì)于腫瘤的免疫診斷藥劑和免疫治療藥劑，包括腫瘤體外診斷試劑、腫瘤體內(nèi)導(dǎo)向診斷試劑(主要采用Ab2α)和抗獨(dú)特型抗體Ab2α偶聯(lián)藥物或毒素的導(dǎo)向藥物即抗獨(dú)特型生物導(dǎo)彈和抗獨(dú)特型抗體腫瘤疫苗(主要采用Ab2β)；用于腫瘤的診斷、免疫治療和導(dǎo)向治療。另外該蛋黃抗癌抗體還可作為添加劑添加于食品、飲料及保健品中，用于腫瘤的預(yù)防及早期預(yù)防性治療。
由于采用本發(fā)明方法制備蛋黃抗癌抗體，利用雞免疫系統(tǒng)對(duì)哺乳動(dòng)物的蛋白或生物分子能產(chǎn)生具有更高效價(jià)和親和力的特異性抗體，可誘導(dǎo)高滴度的特異性抗人類腫瘤抗原的抗體，且具有成本低、產(chǎn)量高、特異性強(qiáng)、決定簇廣并能進(jìn)行集約化大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，更重要的是該蛋黃抗癌抗體能夠很好地解決上述鼠源性單抗偶聯(lián)物或腫瘤疫苗所存在的HAMA反應(yīng)和異質(zhì)性問(wèn)題，且對(duì)人體無(wú)毒副作用，具有較好的安全性。再者就是本發(fā)明所制備的蛋黃抗癌抗體及其組合物能夠在被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫兩方面共同發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)和治療作用。本發(fā)明適用于腫瘤的免疫診斷、治療和預(yù)防，尤其是適用于腫瘤的被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫治療，將具有極其廣闊的應(yīng)用前景。
為了進(jìn)一步公開本發(fā)明，下就對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征在于以產(chǎn)蛋禽類尤其是雞作為免疫反應(yīng)器，用一種或多種純化或滅活的腫瘤抗原或細(xì)胞或通過(guò)基因工程技術(shù)重組的腫瘤特異性抗原或疫苗瘤苗或腫瘤特異性DNA或mRNA及其與相應(yīng)載體組成的重組體或針對(duì)于腫瘤特異性抗原的單克隆或多克隆抗體或其脂質(zhì)體復(fù)合物作為免疫原，分別單獨(dú)進(jìn)行或多種聯(lián)合進(jìn)行禽類尤其是雞的多次重復(fù)免疫注射，然后再以不完全佐劑進(jìn)行追加強(qiáng)化反應(yīng)，待5-20天后禽類尤其是雞的產(chǎn)蛋中即有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物存在和儲(chǔ)存。其具體步驟包括a)腫瘤免疫原或其組合物進(jìn)行多次免疫注射禽類優(yōu)選為雞。在此所述的腫瘤免疫原是采用純化的人類腫瘤抗原或通過(guò)滅活的腫瘤細(xì)胞或組織、通過(guò)基因工程技術(shù)重組的腫瘤特異性抗原或疫苗瘤苗、通過(guò)提取純化的腫瘤特異性裸DNA或mRNA及其與相應(yīng)載體組成的重組體、腫瘤特異性抗原的單克隆或多克隆抗體，另外還包括上述腫瘤免疫原的脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒的免疫注射，借助于脂質(zhì)體對(duì)組織和細(xì)胞的親和性以強(qiáng)化免疫效果；所述禽類包括雞、鴨、鵝、鵪鶉，首選是雞；注射部位包括肌肉、皮下、皮內(nèi)、血管和生殖腔囊；注射方法包括將上述腫瘤免疫原單獨(dú)進(jìn)行注射和多種免疫原聯(lián)合進(jìn)行多次重復(fù)免疫注射，其中所述的多種腫瘤免疫原聯(lián)合進(jìn)行免疫注射包括用不同種類和來(lái)源的腫瘤抗原、基因重組腫瘤特異性抗原或疫苗瘤苗、腫瘤特異性裸DNA或mRNA及其重組體中的任一種及其組合物；還包括不同種類和來(lái)源的腫瘤特異性單克隆或多克隆抗體中的任一種及其組合物；所述的免疫原注射量為1-2ml(免疫原量10-500μg/ml+等量不完全福氏佐劑，其中抗體Ab1的用量為100～2000μg/ml+等量不完全福氏佐劑)。
b)上述腫瘤免疫原用不完全佐劑進(jìn)行追加免疫反應(yīng)。
c)待5-20天后禽類尤其是雞的產(chǎn)蛋中即有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的蛋黃抗癌抗體存在和儲(chǔ)存。其中所述的蛋黃抗癌抗體包括針對(duì)于上述人類腫瘤抗原、細(xì)胞或組織、重組腫瘤抗原或疫苗瘤苗或其脂質(zhì)體或納米微粒的蛋黃多克隆抗癌抗體IgY中的任一種或其組合物；針對(duì)于腫瘤特異性裸DNA或mRNA及其重組體或其脂質(zhì)體或納米微粒的腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物；針對(duì)于腫瘤特異性單克隆或多克隆抗體或上述蛋黃多克隆抗癌抗體IgY或其脂質(zhì)體或納米微粒的抗獨(dú)特型抗體Ab2α和Ab2β中的任一種或其組合物。
本發(fā)明用上述腫瘤免疫原注射免疫產(chǎn)蛋禽類尤其是雞，并以所產(chǎn)蛋黃作為針對(duì)于上述腫瘤免疫原的抗癌抗體的來(lái)源，該類方法具有很多優(yōu)點(diǎn)如禽類尤其是雞易于飼養(yǎng)，費(fèi)用不高，收集產(chǎn)蛋方便，無(wú)需抽動(dòng)物血，無(wú)損傷，符合現(xiàn)代動(dòng)物保護(hù)規(guī)則；另外還具有產(chǎn)生有效免疫反應(yīng)所需抗原量小的優(yōu)點(diǎn)，高度保守的哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)對(duì)種系發(fā)生學(xué)上距離較遠(yuǎn)的禽類尤其是雞通常有較強(qiáng)的免疫原性。
一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于該蛋黃抗癌抗體的提取純化方法是采用水稀釋法、反復(fù)凍融法或硫酸銨、硫酸鈉、PEG、硫酸葡聚糖、藻酸鈉或辛酸沉淀或浸提、萃取、濃縮、膜過(guò)濾的方法從上述禽類蛋黃尤其是雞蛋黃中提取純化針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物，然后將該純化的蛋黃抗癌抗體添加相應(yīng)輔料包括海藻糖而制備成藥劑學(xué)上的任意劑型包括片劑、針劑、口服液和噴霧劑。其具體步驟包括a)取禽蛋尤其是雞蛋去殼取黃，除去粘附于蛋黃膜上的蛋白組分，然后將蛋黃置于滅菌蒸餾水中，反復(fù)洗滌三次，進(jìn)一步除去蛋黃膜上的蛋白組分，瀝干后刺破蛋黃膜，收集蛋黃。
b)將上述收集蛋黃充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅尤氲包S勻漿5倍體積的0.1mol/L PH7.2磷酸鹽-海藻糖稀釋液，制成稀釋蛋黃液。在該稀釋蛋黃液中海藻糖的重量百分比是5-30％。
c)將上述稀釋蛋黃液置于冰盒(-20℃)冰凍1-5小時(shí)，然后取出于室溫復(fù)融并低速離心(500-1000r/min)后瀝出收集上清液，然后再向沉淀物中加入2-5倍體積的0.1mol/L PH7.2磷酸鹽-海藻糖稀釋液，充分混勻溶解沉淀物，依上法再次凍融收集上清液，如此反復(fù)凍融3-5次，合并收集各次得到的上清液備用。
d)向上述收集上清液中按比例加入硫酸銨、硫酸鈉、PEG、硫酸葡聚糖、藻酸鈉或辛酸沉淀劑中的任一種或其復(fù)合物，離心收集其沉淀物，該沉淀物中即含有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物。
e)將上述沉淀物用蒸餾水復(fù)溶后透析或超濾濃縮或凝膠層析，進(jìn)一步純化針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物。
f)向上述純化的蛋黃抗癌抗體按比例添加相應(yīng)輔料，將其制備成藥劑學(xué)上的任意劑型包括片劑、針劑、口服液和噴霧劑。在此所述的輔料包括海藻糖。
一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于該蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的修飾處理方法是采用偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合放射性核素、藥物和毒素及其他細(xì)胞毒性物質(zhì)的方法制備免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈；是采用偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶的方法制備體內(nèi)免疫診斷藥劑和體外免疫診斷試劑包括免疫組化試劑；是采用向上述蛋黃抗癌抗體尤其是抗獨(dú)特型抗體Ab2β或腫瘤特異性表達(dá)抗原中添加不完全佐劑及其他組分的方法制備特異性腫瘤疫苗(包括抗獨(dú)特型抗體疫苗和多肽疫苗)。
導(dǎo)彈的主要部件一是能追蹤目標(biāo)的導(dǎo)航系統(tǒng)，二是摧毀特定目標(biāo)的炸彈。應(yīng)用這一原理制備出一種能追蹤腫瘤而又能專一性地殺傷腫瘤的“武器”，即生物導(dǎo)彈，它的基本部件是能特異地識(shí)別腫瘤抗原目標(biāo)的抗體以及在抗體的末端接上殺傷腫瘤細(xì)胞的毒性藥物。這樣從理論上講，只要能研制出可識(shí)別腫瘤細(xì)胞的抗體，并使它帶上毒性藥物就可大功告成。但事實(shí)上并不那么簡(jiǎn)單，首先是抗體問(wèn)題，早期人們是用純度及特異性相對(duì)較高的腫瘤抗原免疫小鼠后的完整抗體(即由識(shí)別抗原簇的Fab片段和Fc片段所組成的免疫球蛋白)，使它的“尾端”(Fc片段)攜帶上放射性核素碘(125I)；1975年雜交瘤技術(shù)的建立及單克隆抗體的問(wèn)世，使單抗與放射性核素的結(jié)合，推動(dòng)了腫瘤導(dǎo)向治療的進(jìn)展。然而，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的實(shí)驗(yàn)，單抗與多抗在體內(nèi)治療的結(jié)果，并沒有明顯的差別，其主要原因是①單抗和多抗都是完整抗體，它們一旦進(jìn)入機(jī)體，就會(huì)被正常組織交叉吸附，不能相對(duì)集中地到達(dá)靶腫瘤；而且不容易清除和排出體外；②由于完整抗體的分子量大，不易通過(guò)機(jī)體的生理屏障(如結(jié)締組織等)進(jìn)入腫瘤中心部位；③由于完整的抗體都來(lái)源于小鼠，對(duì)人體來(lái)說(shuō)是一種異性蛋白，所以可在體內(nèi)產(chǎn)生抗抗體而被中和。由于存在以上問(wèn)題，因此使完整抗體用于導(dǎo)向治療受到限制。
根據(jù)以上存在的問(wèn)題，近幾年來(lái)研究人員已設(shè)法研究制備出應(yīng)用小分子量的抗體片段，而且設(shè)法用人-人雜交瘤來(lái)制備人-人單克隆抗體，目前又用基因工程的方法來(lái)制備出基因工程抗體，這是一種不含F(xiàn)c片段的Fab小分子多肽，并建立了雙功能抗體技術(shù)。后者有特異性識(shí)別的雙臂(即把兩個(gè)Fab片段結(jié)合在一起)，因此有雙重識(shí)別能力，即既可以與腫瘤結(jié)合，又可與藥物彈頭相連接。由于基因工程抗體不含F(xiàn)c片段，因此減少了非特異吸附，并可將鼠源性成分減少到最低限度；小分子的基因工程產(chǎn)物，有利于殺瘤物質(zhì)進(jìn)入腫瘤內(nèi)部且不易被宿主識(shí)別為異物而產(chǎn)生抗抗體；這種雙功能抗體，使彈頭直接命中瘤細(xì)胞，若將雙功能抗體與LAK，TIL細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用，則可獲得更大的效應(yīng)，從而有效地控制惡性腫瘤的發(fā)展。但該類方法均有較高的技術(shù)難度，難于推廣。
本發(fā)明就是為了克服以上問(wèn)題而利用蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的修飾處理即采用其偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合放射性核素、藥物和毒素及其他細(xì)胞毒性物質(zhì)的方法制備免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈。其具體步驟包括a)蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的酶分解或偶聯(lián)活性基團(tuán)預(yù)修飾處理，其中酶分解是利用胃蛋白酶或無(wú)花果蛋白酶將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α分解再用二巰基蘇糖醇或β-巰基乙醇還原為Fab′小片斷，以使其具有更好的組織穿透力；或用不同的活化試劑將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其Fab′小片斷上的氨基或羧基或巰基或醛基活化，如用1-乙基-3-(3-二甲氨基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(NHS)把其變成活潑酯，然后再同各種不同的藥物分子偶聯(lián)。
b)偶聯(lián)藥物的預(yù)修飾處理包括將放射性核素、藥物和毒素分子用不同的活化試劑活化，如用1-乙基-3-(3-二甲氨基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(NHS)把其變成活潑酯，如此采用類似公知共用的方法，可以分別把含有羥基、氨基、醛基、肼基、巰基等基團(tuán)的偶聯(lián)藥物活化，以使其能夠與蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其Fab′小片斷發(fā)生共價(jià)結(jié)合。
c)蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其Fab′小片斷與已活化處理的偶聯(lián)藥物包括將放射性核素、藥物和毒素分子共價(jià)結(jié)合而成為腫瘤特異性免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈。
本發(fā)明是采用蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的修飾處理即采用偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶的方法制備體內(nèi)免疫診斷藥劑和體外免疫診斷試劑。其具體步驟包括a)將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α采用公知共用的方法進(jìn)行放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶標(biāo)記而制備其相應(yīng)的標(biāo)記物。
b)將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶標(biāo)記物中的任一種配合其他組分制備體內(nèi)免疫診斷藥劑和體外免疫診斷試劑(包括免疫組化試劑)。
本發(fā)明是采用蛋黃抗癌抗體中的蛋黃抗癌抗體IgY制備腫瘤特異性免疫治療劑。其具體步驟包括向上述中蛋黃抗癌抗體IgY添加不完全佐劑及其他組分，然后再進(jìn)行免疫注射，免疫機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)于蛋黃抗癌抗體IgY的抗獨(dú)特型抗體Ab2β，從面誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤的特異性免疫應(yīng)答。
本發(fā)明是采用蛋黃抗癌抗體中的抗獨(dú)特型抗體Ab2β或腫瘤特異性表達(dá)抗原制備特異性腫瘤疫苗。其具體步驟包括向上述抗獨(dú)特型抗體Ab2β、腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物中添加不完全佐劑及其他組分制備特異性腫瘤疫苗。在此所述的抗獨(dú)特型抗體Ab2β疫苗是采用向禽類尤其是雞注射腫瘤特異性單克隆或多克隆抗體尤其是注射蛋黃抗癌抗體中的抗癌抗體IgY而制備的。
針對(duì)外來(lái)抗原的抗體分子(Ab1)可變區(qū)上獨(dú)特型(Id)可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗Id抗體(Ab2)。其中Ab2β具有與外來(lái)抗原相似的氨基酸排列順序或空間構(gòu)型，它能夠在體內(nèi)模擬始動(dòng)抗原的作用，故被認(rèn)為是外部抗原在機(jī)體免疫系統(tǒng)中的＂內(nèi)影像＂(internalimage)。應(yīng)用Ab2β的這一特性，可有目的地制備Ab2β，將其作為抗原的替代物用于誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗病原體的特異性免疫應(yīng)答，即所謂抗獨(dú)特型疫苗(anti-idiotypevaccine)。
一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于將上述蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α制備成脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒然后再偶聯(lián)上述細(xì)胞毒性物質(zhì)成免疫導(dǎo)向藥物的方法，以增加其對(duì)腫瘤組織的親和性和滲透性；將上述抗獨(dú)特型抗體Ab2β或腫瘤特異性表達(dá)抗原制備成脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒的特異性腫瘤疫苗的方法。
脂質(zhì)體技術(shù)是被喻為“生物導(dǎo)彈”的第四代靶向給藥技術(shù)，脂質(zhì)體屬于納米級(jí)藥物載體，該技術(shù)利用脂質(zhì)體的獨(dú)有特性，將毒副作用大、在血液中穩(wěn)定性差、降解快的藥物包裹在脂質(zhì)體內(nèi)，根據(jù)人體病灶部位血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙較大，脂質(zhì)體藥物可透過(guò)此間隙到達(dá)病灶部位，在病灶部堆積釋放，從而達(dá)到定向給藥。脂質(zhì)體主要輔料為磷脂，而磷脂在血液中消除極為緩慢，因此脂質(zhì)體藥物在血循環(huán)系統(tǒng)保留時(shí)間長(zhǎng)，使病灶部位得到充分治療的效果。利用該技術(shù)可將一大批已知高毒性活性藥物安全有效地應(yīng)用于臨床治療，其中有抗癌藥、抗生素類藥、抗真菌類藥、抗寄生蟲類藥、蛋白質(zhì)或多肽類藥物，極大地提高了臨床治療水平，減輕了患者的病痛。同時(shí)可將單克隆抗體連接到脂質(zhì)體上，借助于抗原與抗體的特異反應(yīng)，將載藥脂質(zhì)體定向送入。本發(fā)明就是利用上述蛋黃抗癌抗體包括蛋黃抗癌抗體IgY、抗獨(dú)特型抗體Ab2α、抗獨(dú)特型抗體Ab2β和腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物所制備的脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒，能夠有效到達(dá)腫瘤靶區(qū)，共同發(fā)揮其主動(dòng)和被動(dòng)免疫治療作用。
一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于將上述蛋黃抗癌抗體中的具有相同或相近作用的兩種或兩種以上組分同其他輔料按一定配比混合成組合物，使相應(yīng)蛋黃抗癌抗體組分針對(duì)于腫瘤發(fā)揮協(xié)同作用。
一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征在于上述蛋黃抗癌抗體中的任一種或任意組合的任意劑型單獨(dú)或聯(lián)合用于腫瘤的診斷、治療和預(yù)防。
人體對(duì)癌癥有一定的免疫力，但不同的人，免疫力有強(qiáng)有弱。腫瘤免疫治療是設(shè)法調(diào)動(dòng)人體內(nèi)各種積極防御因素，提高機(jī)體的免疫力，以消除手術(shù)或化療后殘余的腫瘤細(xì)胞，以防止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。腫瘤的免疫治療概括起來(lái)可分為特異性免疫治療和非特異性免疫治療兩大類。免疫治療是一種扶正措施，副作用少，所以易受病人歡迎。腫瘤的被動(dòng)免疫治療是指給機(jī)體輸注外源的免疫效應(yīng)物質(zhì)，由這些外源性效應(yīng)物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮治療腫瘤作用。目前主要有以下兩大類a)抗腫瘤導(dǎo)向治療即利用高度特異性的單克隆抗體為載體，將細(xì)胞毒性的殺傷分子帶到腫瘤病灶處，可特異地殺傷腫瘤細(xì)胞。目前根據(jù)所用的殺傷分子的性質(zhì)不同，將腫瘤的導(dǎo)向治療分為①放射免疫治療，將高能放射性核素與單克隆抗體連接，可將放射性核素帶至瘤灶殺死腫瘤細(xì)胞；②抗體導(dǎo)向化學(xué)療法，抗腫瘤藥物與單抗通過(guò)化學(xué)交聯(lián)組成的免疫偶聯(lián)物，可以將藥物導(dǎo)向腫瘤部位，殺傷腫瘤細(xì)胞，常用的有氨甲蝶呤(MTX)、阿霉素等；③免疫毒素療法(immunotoxintherapy)，將毒素與單克隆抗體相連，制備的免疫毒素對(duì)腫瘤細(xì)胞有特異性的強(qiáng)殺傷活性。常用的毒素有兩類一類是植物毒素，包括篦麻籽毒素(RT)、相思子毒素(abrin)、苦瓜毒素(MD)等。另一類是細(xì)胞毒素，包括白喉毒素(DT)、綠膿桿菌外毒素(PE)。但目前所用的單克隆抗體多為鼠源單克隆抗體，應(yīng)用人體后會(huì)產(chǎn)生抗鼠源單克隆抗體的抗體，使其不能反復(fù)應(yīng)用影響了其療效。用基因工程的方法，使鼠源抗體人源化可減少這個(gè)問(wèn)題，但技術(shù)難度較高，廣泛推廣受限。
b)過(guò)繼免疫療法(adoptive immunotherapy)是取對(duì)腫瘤有免疫力的供者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，或取患者自身的免疫細(xì)胞在體外活化、增殖后，再轉(zhuǎn)輸入患者體內(nèi)，使其在患者體內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤作用。過(guò)繼免疫療法的效應(yīng)細(xì)胞具有異質(zhì)性，如CTL、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)和腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞(TIL)等都在殺傷腫瘤細(xì)胞中起作用。
本發(fā)明就是針對(duì)以上問(wèn)題利用蛋黃抗癌抗體中的IgY抗體為主要原料制備成針對(duì)于腫瘤特異性抗原的免疫診斷藥劑和免疫治療藥劑，包括腫瘤體外診斷試劑、腫瘤體內(nèi)導(dǎo)向診斷試劑和特異性蛋黃抗癌抗體免疫治療劑以及特異性蛋黃抗癌抗體偶聯(lián)藥物或毒素的導(dǎo)向藥物即生物導(dǎo)彈；利用該蛋黃抗癌抗體中的腫瘤特異性表達(dá)抗原可制備成針對(duì)于腫瘤特異性抗原的免疫診斷藥劑和免疫治療藥劑，包括腫瘤體外診斷試劑和腫瘤特異性疫苗瘤苗和核酸疫苗；利用該蛋黃抗癌抗體中的抗獨(dú)特型抗體Ab2α和Ab2β為主要原料可制備成針對(duì)于腫瘤的免疫診斷藥劑和免疫治療藥劑，包括腫瘤體外診斷試劑、腫瘤體內(nèi)導(dǎo)向診斷試劑(主要采用Ab2α)和抗獨(dú)特型抗體Ab2α偶聯(lián)藥物或毒素的導(dǎo)向藥物即抗獨(dú)特型生物導(dǎo)彈和抗獨(dú)特型抗體腫瘤疫苗(主要采用Ab2β)；用于腫瘤的診斷、免疫治療和導(dǎo)向治療。另外該蛋黃抗癌抗體IgY和抗獨(dú)特型抗體還可作為添加劑添加于食品、飲料及保健品中，用于腫瘤的預(yù)防及早期預(yù)防性治療。
由于采用本發(fā)明方法制備蛋黃抗癌抗體，利用雞免疫系統(tǒng)對(duì)哺乳動(dòng)物的蛋白或生物分子能產(chǎn)生具有更高效價(jià)和親和力的特異性抗體，可誘導(dǎo)高滴度的特異性抗人類腫瘤抗原的抗體，且具有成本低、產(chǎn)量高、特異性強(qiáng)、決定簇廣并能進(jìn)行集約化大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，更重要的是該蛋黃抗癌抗體能夠很好地解決上述鼠源性單抗偶聯(lián)物或腫瘤疫苗所存在的HAMA反應(yīng)和異質(zhì)性問(wèn)題，且對(duì)人體無(wú)毒副作用，具有較好的安全性。再者就是本發(fā)明所制備的蛋黃抗癌抗體及其組合物能夠在被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫兩方面共同發(fā)揮其免疫治療作用。本發(fā)明適用于腫瘤的免疫診斷、治療和預(yù)防，尤其是適用于腫瘤的被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫治療。
一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其熒光、發(fā)光、酶、金屬標(biāo)記物中的任一種用于配制體外用免疫診斷試劑；上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其脂質(zhì)體甚至納米微粒的放射性核素標(biāo)記物用于配制體內(nèi)免疫導(dǎo)向診斷試劑。上述所述的免疫診斷試劑包括免疫組化試劑。
一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其脂質(zhì)體甚至納米微粒用于制備治療性免疫制劑；上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其脂質(zhì)體甚至納米微粒與放射性核素、藥物和毒素的偶聯(lián)物用于制備免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈。
一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的腫瘤特異性表達(dá)抗原用于制備腫瘤多肽疫苗；上述蛋黃抗癌抗體中的抗獨(dú)特型抗體Ab2β用于制備腫瘤抗獨(dú)特型抗體疫苗。
特異性主動(dòng)免疫治療是通過(guò)激活特定的免疫系統(tǒng)，達(dá)到消滅腫瘤細(xì)胞的目的，這種治療并不影響周圍正常組織。從理論上講，由疫苗介導(dǎo)的特異性免疫治療，能夠激活特定的淋巴細(xì)胞〔B細(xì)胞和(或)T細(xì)胞〕反應(yīng)，產(chǎn)生即刻的抗腫瘤作用，并對(duì)將來(lái)的腫瘤產(chǎn)生記憶反應(yīng)。最初，利用自體或同種異體腫瘤細(xì)胞制備疫苗；后來(lái)，腫瘤細(xì)胞膜成為制備疫苗的材料。隨著分子生物學(xué)方法的進(jìn)展，利用可表達(dá)抗原的基因修飾腫瘤細(xì)胞來(lái)增強(qiáng)免疫原性或利用修飾基因以分泌細(xì)胞因子等技術(shù)用于疫苗制備。同時(shí)，也可利用提純的腫瘤相關(guān)抗原、DNA編碼蛋白抗原和(或)蛋白衍生肽制備疫苗。疫苗接種的最終目的是激活免疫系統(tǒng)的某一部分，如抗體或淋巴細(xì)胞，來(lái)殺滅腫瘤。目前，特異性主動(dòng)免疫治療有很多方法，如完整腫瘤細(xì)胞與卡介苗等佐劑的混合物；用遺傳學(xué)方法改變腫瘤細(xì)胞，(如轉(zhuǎn)導(dǎo)粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因的腫瘤細(xì)胞)。另外，亦可用肽、黏蛋白和碳水化合物等單個(gè)抗原制備疫苗。許多重組疫苗可表達(dá)各種抗原如癌胚抗原。利用重組疫苗，其他基因(例如編碼協(xié)同刺激因子分子的基因)亦可以腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。針對(duì)特異性抗體還可采用抗獨(dú)特型抗體，因?yàn)槟[瘤抗原的抗原性較弱，且?guī)Я鏊拗鹘?jīng)常處于免疫抑制狀態(tài)，難以激發(fā)有效的抗腫瘤反應(yīng)。80年代以來(lái)，許多學(xué)者通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明用抗原內(nèi)影像型Ab2(又稱抗獨(dú)特型疫苗)能夠克服免疫抑制，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。免疫網(wǎng)絡(luò)理論認(rèn)為，抗體(Ab1)分子上存在的獨(dú)特型(Id)抗原決定簇可以刺激機(jī)體產(chǎn)生A-Id抗體(Ab2)及Ab3等一系列抗體的產(chǎn)生，從而構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)。根據(jù)抗獨(dú)特型抗體與抗體獨(dú)特位反應(yīng)的特點(diǎn)和抗獨(dú)特型抗體的功能，可將A-Id分為Ab2α、Ab2β、Ab2γ、Ab2δ。其中Ab2β可識(shí)別Ab1上與抗原互補(bǔ)的決定簇，能完全抑制抗原與Id的結(jié)合。它具有類似抗原的結(jié)構(gòu)，可以＂模擬＂抗原，產(chǎn)生與抗原相同的生物學(xué)效應(yīng)，被認(rèn)為是外部抗原在機(jī)體免疫系統(tǒng)中的“內(nèi)影像”(internal image)。Ab2β具有下列特點(diǎn)a)能特異性與不同種屬個(gè)體產(chǎn)生的抗體(Ab1)反應(yīng)；b)能特異性與不同類抗體(Ab1)反應(yīng)；c)Ab2β與抗原能競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合Ab1，二者之間存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用；d)能誘導(dǎo)不同種屬個(gè)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。
具有內(nèi)影像特點(diǎn)的抗獨(dú)特型抗體能模擬腫瘤相關(guān)抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生主動(dòng)免疫應(yīng)答，其應(yīng)答過(guò)程極其復(fù)雜，但主要涉及體液免疫和細(xì)胞免疫兩方面。Ab2β作為胸腺依賴抗原(TD)激活輔助T淋巴細(xì)胞亞群(Th1和Th2)，分泌一系列細(xì)胞因子，如Th1細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ、IL-10、TNF和IL-2；Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等。Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子影響和促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分化和增殖，產(chǎn)生特異性抗體Ab3，Ab3一部分能與Ab1互相模擬，即具有與抗原結(jié)合性，稱之為抗腫瘤抗體(Ab1′)?？侫b3的產(chǎn)生已被證實(shí)與微小腫瘤病灶消退和/或病人生存時(shí)間延長(zhǎng)呈正相關(guān)。被激活的Th1細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，如INF-γ可通過(guò)影響NK細(xì)胞及T細(xì)胞功能而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，IL-2可促進(jìn)T細(xì)胞生長(zhǎng)、克隆性擴(kuò)增而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，亦可誘導(dǎo)或促進(jìn)多種細(xì)胞毒性細(xì)胞活性，如NK、CTL、LAK及TIL等，發(fā)揮免疫監(jiān)視及抗腫瘤效應(yīng)。同時(shí)IL-2還可協(xié)同刺激B細(xì)胞增殖及分泌抗體，與補(bǔ)體及效應(yīng)細(xì)胞相作用，發(fā)揮ADCC及CDC抗腫瘤作用(龔非力等，醫(yī)學(xué)免疫學(xué)，第二版，武漢科學(xué)出版社，2000)。人體內(nèi)免疫系統(tǒng)是一個(gè)處于自身動(dòng)態(tài)平衡中的系統(tǒng)。在腫瘤患者體內(nèi)的免疫系統(tǒng)中，抗獨(dú)特型抗體是一個(gè)較關(guān)鍵的系統(tǒng)要素，用人為的方法改變抗獨(dú)特型抗體的質(zhì)量和數(shù)量，必然會(huì)使系統(tǒng)發(fā)生變化，再在更高的層次上達(dá)到新的平衡。使腫瘤免疫的系統(tǒng)平衡按照理論上預(yù)測(cè)的有利于患者的方向發(fā)展變化，在某種意義上這正是抗獨(dú)特型抗體應(yīng)用的關(guān)鍵所在。
本發(fā)明就是采用上述方法所制備的蛋黃腫瘤特異性表達(dá)抗原和腫瘤抗獨(dú)特型抗體Ab2β作為腫瘤特異性疫苗而用于腫瘤的特異性免疫治療，能夠激活特定的淋巴細(xì)胞〔B細(xì)胞和(或)T細(xì)胞〕反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗腫瘤作用，并對(duì)將來(lái)的腫瘤產(chǎn)生記憶反應(yīng)，激活機(jī)體免疫系統(tǒng)甚至重新調(diào)節(jié)腫瘤免疫的系統(tǒng)平衡，調(diào)動(dòng)體液免疫和細(xì)胞免疫作用，產(chǎn)生特異性腫瘤抗體或殺傷性淋巴細(xì)胞，來(lái)共同殺滅腫瘤細(xì)胞，達(dá)到免疫性治療腫瘤的目的。
一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY、腫瘤特異性表達(dá)抗原、抗獨(dú)特型抗體Ab2α、Ab2β的任一種或任意組合用于制備預(yù)防腫瘤的食品、飲料和保健品。即采用將本發(fā)明中的多克隆抗癌抗體IgY、腫瘤特異性表達(dá)抗原、抗獨(dú)特型抗體Ab2α、Ab2β中的任一種或任意組合按一定配比添加于食品、飲料及保健品中，用于腫瘤的預(yù)防及早期預(yù)防性治療。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1用具有免疫活性的腫瘤特異性免疫原包括腫瘤特異性抗原、疫苗瘤苗、DNA或mRNA和抗體及其脂質(zhì)體復(fù)合物中的任一種或其復(fù)合物免疫產(chǎn)蛋禽類尤其是雞，然后再以不完全佐劑進(jìn)行追加強(qiáng)化反應(yīng)，待5-20天后禽類尤其是雞的產(chǎn)蛋中即有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物存在和儲(chǔ)存，其具體步驟包括取6月齡SPF純系萊航產(chǎn)蛋母雞于標(biāo)準(zhǔn)II級(jí)清潔級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，每只雞于胸腹部多點(diǎn)注射上述腫瘤免疫原1-2ml(免疫原量10-500μg/ml+等量不完全福氏佐劑，其中抗體Ab1的用量為100～2000μg+等量不完全福氏佐劑)，2～4周后加強(qiáng)免疫注射3-5次，待5-20天后免疫母雞所產(chǎn)的免疫蛋中即含有蛋黃抗癌抗體。
實(shí)施例2蛋黃抗癌抗體的制備 將上述免疫雞蛋去蛋清后的卵黃充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，加入蛋黃勻漿5倍體積的0.1mol/L PH7.2磷酸鹽-海藻糖稀釋液，然后置于冰盒(-20℃)冰凍1-5小時(shí)，取出于室溫復(fù)融并低速離心(500-1000r/min)后瀝出收集上清液，再向沉淀物中加入2-5倍體積的0.1mol/L PH7.2磷酸鹽-海藻糖稀釋液，充分混勻溶解沉淀物，依上法再次凍融收集上清液，如此反復(fù)凍融3-5次，合并收集各次得到的上清液加入硫酸鈉，使硫酸鈉的終濃度達(dá)10-30％，離心收集其沉淀物，并將該沉淀物用蒸餾水復(fù)溶后對(duì)鹽透析后超濾濃縮、凝膠過(guò)濾、冷凍干燥即得到純化的蛋黃抗癌抗體包括蛋黃多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明批量制備的蛋黃抗癌抗體，每只雞蛋大約可提取57～152mg的腫瘤特異性蛋黃抗癌抗體，平均每只雞蛋可提取84mg。
實(shí)施例3蛋黃抗癌抗體的檢測(cè) 癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY的檢測(cè)采用ELISA間接法檢測(cè)，以癌胚抗原CEA液包被酶標(biāo)板孔，采用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鼠抗雞IgY單抗作為二抗；特異性表達(dá)癌胚抗原的檢測(cè)采用ELISA雙抗體夾心法，以抗癌胚抗原抗體包被酶標(biāo)板孔，采用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗癌胚抗原抗體作為標(biāo)記抗體；癌胚抗原特異性蛋黃抗獨(dú)特型抗體的檢測(cè)采用ELISA間接法，以癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY包被酶標(biāo)板孔，采用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鼠抗雞IgY單抗作為二抗；上述ELISA檢測(cè)依常規(guī)操作進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體的效價(jià)在1∶5000-1∶15000之間，其中蛋黃抗癌抗體IgY的平均效價(jià)在1∶12000左右；特異性表達(dá)癌胚抗原的平均效價(jià)在1∶5400左右；癌胚抗原特異性蛋黃抗獨(dú)特型抗體的平均效價(jià)在1∶9600左右。
實(shí)施例4蛋黃抗癌抗體穩(wěn)定性試驗(yàn) 蛋黃抗癌抗體經(jīng)過(guò)濾除菌，以10mg/ml分裝小試管中，分別于-20℃冰凍、4℃和室溫保存，定期進(jìn)行其效價(jià)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蛋黃抗癌抗體于-20℃冰凍保存，其穩(wěn)定性至少可保持12個(gè)月以上；于4℃保存，其穩(wěn)定性至少可保持6個(gè)月以上；于室溫保存，其穩(wěn)定性至少可保持2個(gè)月以上。
實(shí)施例5癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY與絲裂霉素的偶聯(lián)試驗(yàn) 首先取葡聚糖1.0g，加入200mL蒸餾水后加高碘酸鈉0.3g，室溫下避光反應(yīng)過(guò)夜，使葡聚糖充分氧化為多醛基葡聚糖，蒸餾水充分透析后凍干；注射治療前2小時(shí)內(nèi)取多醛基葡聚糖10mg加入0.15mol/L(pH7.2)的磷酸緩沖液2mL中，加絲裂霉素10mg，室溫下反應(yīng)24小時(shí)后，再加入已純化的癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY10mg，4℃攪拌反應(yīng)24小時(shí)；然后在上述反應(yīng)混合物中加硼氫化鈉0.2mg，在4℃下還原2小時(shí)，離心后經(jīng)Sephadex G-150層析柱過(guò)柱，收集第一峰即可用于治療。
實(shí)施例6治療效果觀察 通過(guò)對(duì)37例大腸癌患者(其中術(shù)后26例，術(shù)前7例，晚期術(shù)后轉(zhuǎn)移4例)分別給予單獨(dú)化療、癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY-絲裂霉素導(dǎo)向治療、癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY-絲裂霉素和癌胚抗原特異性蛋黃抗獨(dú)特型抗體Ab2β聯(lián)合治療并進(jìn)行療效觀察和比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明就毒副作用來(lái)講后兩組明顯優(yōu)于單獨(dú)化療組；組織病理學(xué)顯示癌細(xì)胞退變程度后兩組(達(dá)3級(jí))亦明顯優(yōu)于單獨(dú)化療組(多為2級(jí))；大腸癌組織內(nèi)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞CD3的數(shù)目聯(lián)合治療組(81.3％)明顯多于導(dǎo)向治療組(67.1％)和單獨(dú)化療組(58.6％)。進(jìn)一步說(shuō)明癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY-絲裂霉素導(dǎo)向治療具有特異性強(qiáng)、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)；癌胚抗原特異性蛋黃抗癌抗體IgY-絲裂霉素和癌胚抗原特異性蛋黃抗獨(dú)特型抗體Ab2β聯(lián)合治療具有激活機(jī)體細(xì)胞及體液免疫的作用。
權(quán)利要求
1.一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征在于以產(chǎn)蛋禽類尤其是雞作為免疫反應(yīng)器，用一種或多種純化的或采用基因工程技術(shù)重組的腫瘤特異性抗原或疫苗瘤苗或腫瘤特異性DNA或mRNA及其與之相應(yīng)載體組成的重組體或針對(duì)于腫瘤特異性抗原的單克隆或多克隆抗體或腫瘤組織細(xì)胞或上述腫瘤免疫原的脂質(zhì)體復(fù)合物作為免疫原，分別單獨(dú)進(jìn)行或多種聯(lián)合進(jìn)行禽類尤其是雞的多次重復(fù)免疫注射，然后再以不完全佐劑進(jìn)行追加強(qiáng)化反應(yīng)，待5-20天后禽類尤其是雞的產(chǎn)蛋中即有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物存在和儲(chǔ)存。其具體步驟包括a)腫瘤免疫原或其組合物進(jìn)行多次免疫注射禽類優(yōu)選為雞。在此所述的腫瘤免疫原是通過(guò)純化的人類腫瘤抗原或通過(guò)滅活的腫瘤細(xì)胞或組織、通過(guò)基因工程技術(shù)重組的腫瘤特異性抗原或疫苗瘤苗、通過(guò)提取純化的腫瘤特異性裸DNA或mRNA及其與相應(yīng)載體組成的重組體、腫瘤特異性抗原的單克隆或多克隆抗體，另外還包括上述腫瘤免疫原的脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒；所述禽類包括雞、鴨、鵝、鵪鶉，首選是雞；注射部位包括肌肉、皮下、皮內(nèi)、血管和生殖腔囊；注射方法包括將上述腫瘤免疫原單獨(dú)進(jìn)行注射和多種免疫原聯(lián)合進(jìn)行多次重復(fù)免疫注射，其中所述的多種腫瘤免疫原聯(lián)合進(jìn)行免疫注射包括用不同種類和來(lái)源的腫瘤抗原、基因重組腫瘤特異性抗原或疫苗瘤苗、腫瘤特異性裸DNA或mRNA及其重組體中的任一種及其組合物；還包括不同種類和來(lái)源的腫瘤特異性單克隆或多克隆抗體中的任一種及其組合物；所述的免疫原注射量為1-2ml(免疫原量10-500μg/ml+等量不完全福氏佐劑，其中抗體Ab1的用量為100～2000μg/ml+等量不完全福氏佐劑)。b)上述腫瘤免疫原用不完全佐劑進(jìn)行追加免疫反應(yīng)。c)待5-20天后禽類尤其是雞的產(chǎn)蛋中即有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的蛋黃抗癌抗體存在和儲(chǔ)存。其中所述的蛋黃抗癌抗體包括針對(duì)于上述人類腫瘤抗原、細(xì)胞或組織、重組腫瘤抗原或疫苗瘤苗或其脂質(zhì)體或納米微粒的蛋黃多克隆抗癌抗體IgY中的任一種或其組合物；針對(duì)于腫瘤特異性裸DNA或mRNA及其重組體或其脂質(zhì)體或納米微粒的腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物；針對(duì)于腫瘤特異性單克隆或多克隆抗體或上述蛋黃多克隆抗癌抗體IgY或其脂質(zhì)體或納米微粒的抗獨(dú)特型抗體Ab2α和Ab2β中的任一種或其組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體的提取純化方法是采用水稀釋法、反復(fù)凍融法或硫酸銨、硫酸鈉、PEG或辛酸沉淀或浸提、萃取、濃縮、膜過(guò)濾的的方法從上述禽類尤其是雞蛋黃中提取純化針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物，然后將該純化的蛋黃抗癌抗體添加相應(yīng)輔料包括海藻糖而制備成藥劑學(xué)上的任意劑型包括片劑、針劑、口服液和噴霧劑。其具體步驟包括a)取禽蛋尤其是雞蛋去殼取黃，除去粘附于蛋黃膜上的蛋白組分，然后將蛋黃置于滅菌蒸餾水中，反復(fù)洗滌三次，進(jìn)一步除去蛋黃膜上的蛋白組分，瀝干后刺破蛋黃膜，收集蛋黃。b)將上述收集蛋黃充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，加入蛋黃勻漿5倍體積的0.1mol/L PH7.2磷酸鹽-海藻糖稀釋液，制成稀釋蛋黃液。在該稀釋蛋黃液中海藻糖的重量百分比是5-30％。c)將上述稀釋蛋黃液置于冰盒(-20℃)冰凍1-5小時(shí)，然后取出于室溫復(fù)融并低速離心(500-1000r/min)后瀝出收集上清液，然后再向沉淀物中加入2-5倍體積的0.1mol/L PH7.2磷酸鹽-海藻糖稀釋液，充分混勻溶解沉淀物，依上法再次凍融收集上清液，如此反復(fù)凍融3-5次，合并收集各次得到的上清液備用。d)向上述收集上清液中按比例加入硫酸銨、硫酸鈉、PEG、硫酸葡聚糖、藻酸鈉或辛酸沉淀劑中的任一種或其復(fù)合物，離心收集其沉淀物，該沉淀物中即含有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物。e)將上述沉淀物用蒸餾水復(fù)溶后透析或超濾濃縮或凝膠層析，進(jìn)一步純化針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物。f)向上述純化的蛋黃抗癌抗體按比例添加相應(yīng)輔料，將其制備成藥劑學(xué)上的任意劑型包括片劑、針劑、口服液和噴霧劑。在此所述的輔料包括海藻糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的修飾處理方法是偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合放射性核素、藥物和毒素制備免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈；是偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶制備體內(nèi)免疫診斷藥劑和體外免疫診斷試劑包括免疫組化試劑；是向上述蛋黃抗癌抗體IgY中添加不完全佐劑制備腫瘤特異性免疫治療劑；是向上述蛋黃抗癌抗體尤其是抗獨(dú)特型抗體Ab2β或腫瘤特異性表達(dá)抗原中添加不完全佐劑及其他組分制備特異性腫瘤疫苗。其具體步驟包括a)蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的酶分解或偶聯(lián)活性基團(tuán)預(yù)修飾處理，其中酶分解是利用胃蛋白酶或無(wú)花果蛋白酶將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α分解再用二巰基蘇糖醇或β-巰基乙醇還原為Fab′小片斷，以使其具有更好的組織穿透力；或用相應(yīng)的活化試劑將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其Fab′小片斷上的氨基或羧基或巰基或醛基活化，然后再同各種不同的藥物分子偶聯(lián)。b)偶聯(lián)藥物的預(yù)修飾處理包括將放射性核素、藥物和毒素分子用相應(yīng)的活化試劑，分別把含有羥基、氨基、醛基、肼基、巰基等基團(tuán)的偶聯(lián)藥物活化，然后再使其與蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其Fab′小片斷發(fā)生共價(jià)結(jié)合。c)蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其Fab′小片斷與已活化處理的偶聯(lián)藥物包括將放射性核素、藥物和毒素分子共價(jià)結(jié)合而制備腫瘤特異性免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈。d)將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α進(jìn)行放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶標(biāo)記而制備其相應(yīng)的標(biāo)記物。e)將蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α的放射性核素、發(fā)光物質(zhì)、膠體金或酶標(biāo)記物中的任一種配合其他組分制備體內(nèi)免疫診斷藥劑和體外免疫診斷試劑(包括免疫組化試劑)。f)向上述中蛋黃抗癌抗體IgY添加不完全佐劑及其他組分，然后再進(jìn)行免疫注射，免疫機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)于蛋黃抗癌抗體IgY的抗獨(dú)特型抗體Ab2β，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤的特異性免疫應(yīng)答。g)向上述抗獨(dú)特型抗體Ab2β、腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物中添加不完全佐劑及其他組分制備特異性腫瘤疫苗(包括抗獨(dú)特型抗體疫苗和多肽疫苗)。h)向禽類尤其是雞注射腫瘤特異性單克隆或多克隆抗體尤其是注射蛋黃抗癌抗體中的抗癌抗體IgY，制備所述的抗獨(dú)特型抗體Ab2β疫苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于將上述蛋黃抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α制備成脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒然后再偶聯(lián)上述細(xì)胞毒性物質(zhì)而制備免疫導(dǎo)向藥物的方法；將上述抗獨(dú)特型抗體Ab2β或腫瘤特異性表達(dá)抗原制備成脂質(zhì)體微粒甚至是納米微粒的特異性腫瘤疫苗的方法。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的一種蛋黃抗癌抗體的制備方法，其特征還在于將上述蛋黃抗癌抗體中的具有相同或相近作用的兩種或兩種以上組分同其他輔料按一定配比混合成組合物，使相應(yīng)蛋黃抗癌抗體組分針對(duì)于腫瘤發(fā)揮協(xié)同作用。
6.一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征在于上述蛋黃抗癌抗體中的任一種或任意組合的任意劑型單獨(dú)或聯(lián)合用于腫瘤的診斷、治療和預(yù)防。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其熒光、發(fā)光、酶、金屬標(biāo)記物中的任一種用于配制體外用免疫診斷試劑；上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其脂質(zhì)體甚至納米微粒的放射性核素標(biāo)記物用于配制體內(nèi)免疫導(dǎo)向診斷試劑。上述所述的免疫診斷試劑包括免疫組化試劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其脂質(zhì)體甚至納米微粒用于制備治療性免疫制劑；上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體Ab2α或其脂質(zhì)體甚至納米微粒與放射性核素、藥物和毒素的偶聯(lián)物用于制備免疫導(dǎo)向藥物或生物導(dǎo)彈。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的抗癌抗體IgY用于制備腫瘤免疫治療劑；上述蛋黃抗癌抗體中的腫瘤特異性表達(dá)抗原用于制備腫瘤多肽疫苗；上述蛋黃抗癌抗體中的抗獨(dú)特型抗體Ab2β用于制備腫瘤抗獨(dú)特型抗體疫苗。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種蛋黃抗癌抗體的用途，其特征還在于上述蛋黃抗癌抗體中的多克隆抗癌抗體IgY、腫瘤特異性表達(dá)抗原、抗獨(dú)特型抗體Ab2α、Ab2β的任一種或其組合物用于制備預(yù)防腫瘤的食品、飲料和保健品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蛋黃抗癌抗體的制備方法,包括針對(duì)于腫瘤免疫原的蛋黃多克隆抗癌抗體IgY、抗獨(dú)特型抗體和腫瘤特異性表達(dá)抗原的制備方法,另外還涉及該蛋黃抗癌抗體的用途。本發(fā)明主要以產(chǎn)蛋禽類尤其是雞作為免疫反應(yīng)器,用一種或多種腫瘤免疫原進(jìn)行免疫注射,特點(diǎn)是多種免疫原單獨(dú)或多種聯(lián)合進(jìn)行禽類尤其是雞的免疫注射,其產(chǎn)蛋中即有針對(duì)于上述腫瘤免疫原的多克隆抗癌抗體IgY或抗獨(dú)特型抗體或腫瘤特異性表達(dá)抗原中的任一種或其組合物存在和儲(chǔ)存。本發(fā)明具有成本低、產(chǎn)量高、特異性強(qiáng)、決定簇廣并能進(jìn)行集約化大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn),尤其是能避免HAMA反應(yīng)和異質(zhì)性問(wèn)題,且無(wú)毒副作用、安全性好。適用于腫瘤的免疫診斷、治療和預(yù)防,尤其適用于腫瘤的主、被動(dòng)免疫治療。
文檔編號(hào)A61K39/395GK1377894SQ0211870
公開日2002年11月6日 申請(qǐng)日期2002年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月23日
發(fā)明者郭占軍, 趙華, 郭愛芹, 楊煥云, 李慶鑫, 夏存華, 徐銀才, 初瑞雪 申請(qǐng)人:郭占軍