專利名稱：一種組織工程細(xì)胞支架的制備方法及由該方法得到的產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組織工程細(xì)胞支架的制備方法及由該方法得到的產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
組織工程是將工程學(xué)原理同細(xì)胞學(xué)和組織生物學(xué)原理結(jié)合在一起以替代有缺陷(已老化、受損傷或病態(tài))組織和器官的科學(xué)。它是先將自體細(xì)胞或干細(xì)胞在生物材料所制備、與所需修復(fù)的組織或器官具有相同構(gòu)形的支架上進(jìn)行體外培養(yǎng)擴增、而后再植入體內(nèi)的病損部位、使之繁衍、從而最終達(dá)到修復(fù)重建組織或器官、恢復(fù)功能的目的。由于通過組織工程再造的組織和器官不但可以同人工替代物一樣進(jìn)行大批量的生產(chǎn)，而且可同天然的組織和器官一樣具有功能、還可防止免疫排斥的產(chǎn)生，因此可以完全解決如今在組織和器官的修復(fù)重建臨床上所采用的自體移植、異體移植、異種移植和人工器官等方法所存在的免疫排斥、供源不足，和功能不全等問題，被認(rèn)為是最有望徹底解決組織和器官修復(fù)和治療難題的途徑。
組織工程的核心是構(gòu)建由細(xì)胞與細(xì)胞支架結(jié)合而成的復(fù)合體，因此細(xì)胞、細(xì)胞支架，以及組織和器官的形成和再生是組織工程的三大要素。其中細(xì)胞支架的功能是為細(xì)胞的增殖、繁衍提供三維空間、提供營養(yǎng)、進(jìn)行氣體交換、排除廢物，并且決定新生組織、器官的形狀和大小。所以細(xì)胞支架必須保證能讓細(xì)胞很好地貼附、生長和繁衍，因此細(xì)胞支架必須具有良好的細(xì)胞親和性；為保證細(xì)胞能在整個支架的各部分都得到繁衍生長、可以很好地進(jìn)行氣體交換和排除廢物，細(xì)胞支架必須具有一定的孔徑和互相溝通的三維孔結(jié)構(gòu)；為了保證新生的組織和器官具有與需再生的組織和器官有同相同形狀大小，細(xì)胞支架還必須具有一定的幾何形狀；更為重要的是為保證細(xì)胞支架能隨著細(xì)胞的生長而逐漸消失、從而不影響細(xì)胞的繁衍，細(xì)胞支架還必須具備與細(xì)胞繁衍速度相匹配的生物降解速度、能在體內(nèi)的生理環(huán)境下逐漸降解、由大分子變成小分子，以至最終被機體代謝或吸收。從臨床應(yīng)用出發(fā)，對于如軟骨等形狀不規(guī)整的組織，不但要求細(xì)胞支架具備以上的性能，而且還要求細(xì)胞支架具有流動性，這樣可以在不需要外科手術(shù)、只需采用注射的方法就可把已在體外繁殖了細(xì)胞的細(xì)胞支架植入體內(nèi)，因此可注射型細(xì)胞支架對于某些組織工程而言，具有特別重要的意義。
Pluronic是一類由聚乙二醇聚醚(PEO)和聚丙二醇聚醚(PPO)組成的PEO-PPO-PEO三嵌段共聚醚，其最低臨界溶解溫度為約4℃。此材料的特點是在低溫下溶于水、而在室溫或體溫下會由于相分離而形成凝膠，是一類可注射型水凝膠。利用它的溫度效應(yīng)可以在低溫下將細(xì)胞同Pluronic水溶液混合、并通過注射進(jìn)入體內(nèi)、使之充滿需修復(fù)的不規(guī)整組織，再通過Pluronic在體溫下的凝膠化，將細(xì)胞固定，從而可以避免采用外科手術(shù)方法將細(xì)胞支架及細(xì)胞植入體內(nèi)的缺陷。因此，作為一種新穎的組織工程材料，在如軟骨等形狀不規(guī)整、強度要求又不高組織工程中具有十分重要的應(yīng)用(T.Yamaoka等，J Polym Sci.，Polym Chem.37，1513-1521(1999))。然而作為一種細(xì)胞支架，Pluronic并不能在體內(nèi)降解、其力學(xué)強度又很差、由于它的水溶性，它并不能在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，而且它在體內(nèi)的溶解速率在很大程度上受到體內(nèi)部位的影響，因此重復(fù)性差。以上的缺陷使它的使用范圍非常有限。
脂肪族聚內(nèi)酯(聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚己內(nèi)酯(PCL))及其共聚物由于具有良好的生物相容性、從幾MPa至數(shù)百MPa可調(diào)節(jié)的力學(xué)強度，以及從數(shù)周至數(shù)年的降解壽命，已經(jīng)成為一類重要的生物降解高分子材料而被批準(zhǔn)用于臨床，并已在骨科矯形修復(fù)、手術(shù)縫合，以及作為藥物控制釋放載體等方面得到應(yīng)用，近年來，隨著組織工程研究的發(fā)展，它又作為一類最為重要的細(xì)胞支架材料在組織工程領(lǐng)域被廣泛地研究和應(yīng)用(王身國等，中國創(chuàng)傷骨科雜志2(4):277-279(2000))。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種組織工程細(xì)胞支架的制備方法，本發(fā)明的另一目的在于提供由該方法得到的產(chǎn)品。
本發(fā)明的可注射型組織工程細(xì)胞支架就是以脂肪族聚內(nèi)酯為材料、采用乳液-溶劑蒸發(fā)法制備的一類生物降解性高分子微粒體。
所述的乳液-溶劑蒸發(fā)法為先將脂肪族聚內(nèi)酯溶解于有機溶劑中，在攪拌條件下將聚合物溶液注入含有乳化劑和穩(wěn)定劑的水溶液中，在持續(xù)攪拌下使溶劑完全蒸發(fā)，爾后通過離心分離收集、用蒸餾水洗滌，最后冷凍干燥，得到粉末狀的脂肪族聚內(nèi)酯微粒體。
本發(fā)明的一種組織工程細(xì)胞支架的制備方法，在4～37℃溫度下，按如下順序步驟進(jìn)行(1)將分子量為1萬～50萬(5萬～20萬更佳)的生物降解性脂肪族聚內(nèi)酯用油性有機溶劑溶解，配制成濃度為5-200毫克/毫升(以20-100毫克/毫升為更佳)的溶液。
所述生物降解性脂肪族聚內(nèi)酯可以是聚丙交酯(PLA)、聚己內(nèi)酯(PCL)；或內(nèi)酯間的二元或三元無規(guī)或嵌段共聚物如聚(丙交酯-乙交酯)共聚物(PLGA)、聚(丙交酯-己內(nèi)酯)共聚物(PLC)、聚(乙交酯-己內(nèi)酯)共聚物(PGC)或聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)共聚物(PGLC)；或內(nèi)酯與聚醚間的二元或三元無規(guī)或嵌段共聚物如聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物(PLE)、聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)共聚物(PCE)、聚(丙交酯-乙交酯-聚乙二醇醚)共聚物(PLGE)、聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)共聚物(PCLE)或聚(乙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)共聚物(PGCE)(以上所述共聚物在現(xiàn)有文獻(xiàn)中皆有報導(dǎo)，具體制法詳見王身國等，中國發(fā)明專利99105984.0；ZL92 113100.3；98102212.X等文獻(xiàn))。
所述油性有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷等。
(2)在攪拌速度為100-10000轉(zhuǎn)/分(以500-3000轉(zhuǎn)/分為更佳)的攪拌條件下，將上述的脂肪族聚內(nèi)酯有機溶液注入含有濃度為0.3～5％w/v(以0.5～3％w/v為更佳)乳化劑，以及0.5～10％w/v(以1～5％w/v為更佳)穩(wěn)定劑的水溶液中，制得水包油乳液。然后在50-5000轉(zhuǎn)/分(以300-2000轉(zhuǎn)/分為更佳)攪拌速度下持續(xù)攪拌(一般2～10小時即可，以3～6小時為更佳)，使溶劑完全蒸發(fā)。
所述乳化劑為司班80，司班60，吐溫60，吐溫80等小分子表面活性物質(zhì)。
所述穩(wěn)定劑為聚乙烯醇(PVA)、明膠、聚乙烯吡咯烷酮等天然或合成的高分子物質(zhì)。
(3)將上述體系離心分離，用蒸餾水洗滌沉淀的產(chǎn)物后，對所得到的微粒體進(jìn)行冷凍干燥，得到本發(fā)明的目的產(chǎn)物-可注射型組織工程細(xì)胞支架。
本發(fā)明所述的聚(丙交酯-己內(nèi)酯)(PLC)中，聚丙交酯的含量可從1～99mol％，最佳比例為10～90mol％；所述的聚(乙交酯-己內(nèi)酯)(PGC)中，聚乙交酯的含量可從1～30mol％，最佳比例為3～20mol％；所述的聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)(PGLC)中，聚乙交酯的含量可從1至30mol％，最佳比例為3～20mol％；聚己內(nèi)酯的含量最佳比例為3～75mol％。
所述的聚乙二醇醚的分子量為200～20000，優(yōu)選聚乙二醇醚的分子量為800～8000范圍；在聚乙二醇醚同脂肪族聚內(nèi)酯的共聚物中聚乙二醇醚含量為1～50mol％，最佳用量為10～40mol％。
由本發(fā)明所制備方法所得到的產(chǎn)品，即粉末狀脂肪族聚內(nèi)酯微粒體，該微粒體隨制備條件的變化，粒徑可在1～500微米之間調(diào)節(jié)。
本發(fā)明所制備的粉末狀脂肪族聚內(nèi)酯微粒體，對骨、軟骨、皮膚等各種細(xì)胞都具有很好地貼附性、可以在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并且細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。
本發(fā)明所制備的粉末狀脂肪族聚內(nèi)酯微粒體，在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)前、后都可以用生理鹽水等配成懸濁液，并且用注射器注入體內(nèi)，可以充滿形狀不規(guī)整的組織空腔，以進(jìn)行組織的修復(fù)和重建。
本發(fā)明所制備的粉末狀脂肪族聚內(nèi)酯微粒體，是一類骨、軟骨、皮膚等各種組織和器官修復(fù)重建用的可注射型組織工程細(xì)胞支架。
具體實施例方式
實施例一在30℃，將分子量為50000的聚丙交酯0.50g溶解于10ml三氯甲烷中，在1000rpm攪拌速度，將聚合物溶液注入含有2ml吐溫80溶液的200ml明膠水溶液(1％w/v)中，持續(xù)攪拌5小時，而后進(jìn)行離心分離，得到的沉淀物用蒸餾水洗滌3次，最后冷凍干燥。得到粒徑為10～30微米、表面光滑的聚丙交酯微球。
聚丙交酯微球的細(xì)胞培養(yǎng)效果是通過在96孔培養(yǎng)板中通過靜態(tài)培養(yǎng)方法進(jìn)行測試的。測試前先將聚丙交酯微球用75％的乙醇溶液浸泡30分鐘，取出后用磷酸緩沖液(PBS)沖洗3次除去殘余的乙醇后，再用DMEM培養(yǎng)基浸泡過夜、并且在超凈工作臺內(nèi)風(fēng)干1～2小時。
在96孔培養(yǎng)板的孔中各加入100μl聚丙交酯微球含量為30mg/ml的懸液，使培養(yǎng)板的孔底能被聚丙交酯微球鋪滿。然而將100微升經(jīng)5代培養(yǎng)、細(xì)胞濃度為3×106/ml的成骨細(xì)胞懸液種植到孔中，在溫度為37℃的5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)，3小時后再加2mlDMEM培養(yǎng)基，每48小時換培養(yǎng)液一次，以測定細(xì)胞的生長曲線。結(jié)果表明在接種細(xì)胞7天后，聚丙交酯微球表面已粘附大量的細(xì)胞，并有大量細(xì)胞外基質(zhì)分泌，說明聚丙交酯微球可以很好地貼附細(xì)胞、在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并且細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。
實施例二在15℃，將分子量為40000的聚(丙交酯-乙交酯)無規(guī)共聚物PLGA，丙交酯/乙交酯＝70/30(mol％))0.6g溶解于10ml二氯甲烷中，在800rpm攪拌速度，將聚合物溶液注入含有2ml吐溫60溶液的200ml聚乙烯醇水溶液(1％w/v)中，持續(xù)攪拌5小時，而后進(jìn)行離心分離，得到的沉淀物用蒸餾水洗滌3次，最后冷凍干燥。得到粒徑為40～200微米、表面光滑的聚(丙交酯-乙交酯)無規(guī)共聚物微球。
同實施例一的細(xì)胞培養(yǎng)效果測試方法，但是采用人皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)試驗。結(jié)果表明在接種細(xì)胞7天后，聚丙交酯微球表面已粘附大量的細(xì)胞，并有大量細(xì)胞外基質(zhì)分泌，說明聚(丙交酯-乙交酯)無規(guī)共聚物微球可以很好地貼附細(xì)胞、在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并且細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。
實施例三在20℃，將分子量為65000的聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三元共聚物(PCEL，丙交酯/己內(nèi)酯/乙二醇＝9/74/17(mol％)，其中聚乙二醇醚分子量為4000)用二氯乙烷溶解，以實施例一相同的條件制備，得到粒徑為20～100微米、呈多孔結(jié)構(gòu)的聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三元共聚物微球。
同實施例一的細(xì)胞培養(yǎng)效果測試方法，但是采用人皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)試驗。結(jié)果表明在接種細(xì)胞7天后，在聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三元共聚物微球表面粘附的細(xì)胞量和所分泌的細(xì)胞外基質(zhì)量，都比實施例一和實施例二多。說明聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三元共聚微球不但可以在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，而且具有比聚丙交酯微球和聚(丙交酯-乙交酯)無規(guī)共聚物微球更好的細(xì)胞貼附和細(xì)胞生長性能。
實施例四在10℃，將分子量為55000的聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三嵌段共聚物(PCE，己內(nèi)酯/乙二醇＝60/40(mol％)，其中聚乙二醇醚分子量為4000)用三氯甲烷溶解，以實施例一相同的條件制備，得到粒徑為10～200微米、呈多孔結(jié)構(gòu)的聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三嵌段共聚物微球。同實施例三采用人皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)試驗。結(jié)果表明在接種細(xì)胞7天后，聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三嵌段共聚物微球表面粘附大量的細(xì)胞，并有大量細(xì)胞外基質(zhì)分泌，聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三嵌段共聚物微球可以很好地貼附細(xì)胞、在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并且細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。
實施例五在23℃，將分子量為40000的聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物(PLE，丙交酯/乙二醇＝84/16(mol％)，其中聚乙二醇醚分子量為6000)用二氯甲烷溶解，以實施例一相同的條件制備，得到粒徑為10～150微米、呈微多孔結(jié)構(gòu)的聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物微球。同實施例三采用人皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)試驗。結(jié)果表明在接種細(xì)胞7天后，聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物微球表面粘附大量的細(xì)胞，并有大量細(xì)胞外基質(zhì)分泌，表明聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物微球可以很好地貼附細(xì)胞、在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并且細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。
實施例六在10℃，將分子量為80000的聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)三元共聚物(PGLC，丙交酯/己內(nèi)酯/乙二醇＝45/45/10(mol％))用二氯甲烷溶解，以實施例一相同的條件制備，得到粒徑為20～100微米、表面光滑的聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)三元共聚物微球。
同實施例一的細(xì)胞培養(yǎng)效果測試方法，但是采用軟骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)試驗。結(jié)果表明在接種細(xì)胞5天后，在聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)三元共聚物微球表面粘附大量的細(xì)胞量，并且分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)量。說明聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)三元共聚物微球可以在體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，而且有良好的細(xì)胞生長性能。
實施例七同實施例一方法，用聚己內(nèi)酯(分子量55000)制備得到的粒徑為40～150微米、表面光滑的微球，對成骨細(xì)胞表現(xiàn)良好的細(xì)胞貼附和生長性能。
實施例八將由實施例一～六所制備的聚丙交酯、聚(丙交酯-乙交酯)無規(guī)共聚物、聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三元共聚物、聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三嵌段共聚物、聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物、聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)三元共聚物和聚己內(nèi)酯微球，在用生理鹽水配成0.02g/ml的懸濁液后，分別用帶有0.5mm針頭的注射器在大鼠背部皮下注射1ml。爾后定期將大鼠處死，取樣切片觀察皮下注射的微球情況。結(jié)果表明微球周圍均無發(fā)現(xiàn)有炎癥等不良反應(yīng)發(fā)生，并且聚丙交酯微球在半年后消失、聚(丙交酯-乙交酯)無規(guī)共聚物微球在一個半月后消失、聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三元共聚物微球在三個月后消失、聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)三嵌段共聚物微球在四個月后消失、聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物微球在兩個月后消失、聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)三元共聚物微球在一個月后消失，聚己內(nèi)酯微球在一年后消失。表明各種微球都具有可注射性、良好的生物相容性和生物降解性。
對照例一在5℃，將人皮成纖維細(xì)胞種植到涂有Pluronic凝膠的培養(yǎng)皿上后，在溫度為37℃的5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)，3小時后加入2mlDMEM培養(yǎng)基，且每48小時換培養(yǎng)液一次。結(jié)果表明在接種細(xì)胞7天后，培養(yǎng)皿上的細(xì)胞數(shù)量極少、并且基本呈圓型，說明Pluronic凝膠不能很好地貼附細(xì)胞、且不能在體外培養(yǎng)細(xì)胞。
對照例二同對照例一方法，但是采用成骨細(xì)胞，結(jié)果與對照例一相同。
對照例三同對照例一方法，但是采用軟骨細(xì)胞，結(jié)果與對照例一相同。
權(quán)利要求
1.一種組織工程細(xì)胞支架的制備方法，在4～37℃溫度下，按如下順序步驟進(jìn)行(1)將分子量為1萬～50萬的生物降解性脂肪族聚內(nèi)酯用油性有機溶劑溶解，配制成濃度為5-200毫克/毫升的溶液；(2)在攪拌速度為100-10000轉(zhuǎn)/分的攪拌條件下，將上述的脂肪族聚內(nèi)酯有機溶液注入含有濃度為0.3～5％w/v乳化劑，以及0.5～10％w/v穩(wěn)定劑的水溶液中，制得水包油乳液；然后在50-5000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢杷俣认鲁掷m(xù)攪拌，使溶劑完全蒸發(fā)；(3)將上述體系離心分離，用蒸餾水洗滌沉淀的產(chǎn)物后，對所得到的微粒體進(jìn)行冷凍干燥即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于所述生物降解性脂肪族聚內(nèi)酯是聚丙交酯(PLA)、聚己內(nèi)酯(PCL)；或內(nèi)酯間的二元或三元無規(guī)或嵌段共聚物；或內(nèi)酯與聚醚間的二元或三元無規(guī)或嵌段共聚物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于所述內(nèi)酯間的二元或三元無規(guī)或嵌段共聚物為聚(丙交酯-乙交酯)共聚物、聚(丙交酯-己內(nèi)酯)共聚物、聚(乙交酯-己內(nèi)酯)共聚物或聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)共聚物(PGLC)；所述內(nèi)酯與聚醚間的二元或三元無規(guī)或嵌段共聚物為聚(丙交酯-聚乙二醇醚)共聚物、聚(己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)共聚物、聚(丙交酯-乙交酯-聚乙二醇醚)共聚物、聚(丙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)共聚物或聚(乙交酯-己內(nèi)酯-聚乙二醇醚)共聚物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的制備方法，其特征在于所述聚(丙交酯-己內(nèi)酯)中，聚丙交酯的含量為1～99mol％；所述聚(乙交酯-己內(nèi)酯)中，聚乙交酯的含量為1～30mol％；所述的聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)中，聚乙交酯的含量為1至30mol％，聚己內(nèi)酯的含量為3～75mol％；所述聚乙二醇醚的分子量為200～20000，在聚乙二醇醚同脂肪族聚內(nèi)酯的共聚物中聚乙二醇醚含量為1～50mol％。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，其特征在于所述聚(丙交酯-己內(nèi)酯)中，聚丙交酯的含量為10～90mol％；所述聚(乙交酯-己內(nèi)酯)中，聚乙交酯的含量為3～20mol％；所述的聚(乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯)中，聚乙交酯的含量為3～20mol％，；所述聚乙二醇醚的分子量為800～8000，在聚乙二醇醚同脂肪族聚內(nèi)酯的共聚物中聚乙二醇醚含量為10～40mol％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一制備方法，其特征在于所述油性有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一制備方法，其特征在于所述乳化劑為司班80，司班60，吐溫60，吐溫80。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一制備方法，其特征在于所述穩(wěn)定劑為聚乙烯醇、明膠、聚乙烯吡咯烷酮。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一制備方法得到的產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種組織工程細(xì)胞支架的制備方法，在4～37℃溫度下，按如下順序步驟進(jìn)行(1)將分子量為1萬～50萬的生物降解性脂肪族聚內(nèi)酯用油性有機溶劑溶解，配制成濃度為5－200毫克/毫升的溶液；(2)在攪拌條件下，將上述的脂肪族聚內(nèi)酯有機溶液注入含有濃度為0.3～5％w/v乳化劑，以及0.5～10％w/v穩(wěn)定劑的水溶液中，制得水包油乳液；然后持續(xù)攪拌，使溶劑完全蒸發(fā)；(3)將上述體系離心分離，用蒸餾水洗滌沉淀的產(chǎn)物后，對所得到的微粒體進(jìn)行冷凍干燥即可。本發(fā)明還公開了由該方法得到的產(chǎn)品，即粉末狀脂肪族聚內(nèi)酯微粒體，是一類骨、軟骨、皮膚等各種組織和器官修復(fù)重建用的可注射型組織工程細(xì)胞支架。
文檔編號A61K31/74GK1465406SQ02124389
公開日2004年1月7日 申請日期2002年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月21日
發(fā)明者王身國, 崔文瑾, 貝建中 申請人:中國科學(xué)院化學(xué)研究所