專利名稱：秦皮總香豆素的制備方法及其在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種秦皮提取物的制備方法及其應(yīng)用，特別是秦皮總香豆素的制備方法及其在制藥領(lǐng)域中的用途。
痛風(fēng)和高尿酸血癥已成為當(dāng)今世界，尤其是中老年人常見病，其發(fā)病率為6％-13％。隨著飲食結(jié)構(gòu)和環(huán)境因素的改變，經(jīng)濟的發(fā)展及人類壽命的延長，痛風(fēng)和高尿酸血癥的發(fā)病率日益提高。在我國，由于人民生活水平的普遍提高，動物性食物攝入增加，該病的發(fā)生呈直線上升趨勢，其發(fā)病率已接近發(fā)達國家水平(0.35％)；通過門診走訪，該病在青少年中發(fā)病率也呈直線上升趨勢。
痛風(fēng)具有發(fā)病潛伏、難根治的特點，臨床治療痛風(fēng)主要有兩個目的，及時控制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作；長期治療高尿酸血癥，預(yù)防尿酸鹽沉淀及痛風(fēng)急性復(fù)發(fā)，促進痛風(fēng)石的吸收。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作的控制藥物主要有秋水仙堿、非甾體抗炎藥和腎上腺皮質(zhì)激素類。高尿酸血癥防治藥物主要有兩大類一類是干擾腎小管對尿酸排泄的藥物，如痛風(fēng)利仙、丙磺舒、硫氧唑酮等；另一類是能抑制尿酸生成的黃嘌呤氧化酶抑制劑，代表藥物為別嘌呤醇。以上所述化學(xué)藥品均不同程度存在毒副作用大的缺點，尤其長期用藥更為明顯，而治療該病往往需要長期服藥。
近十年來，中醫(yī)藥治療痛風(fēng)已取得較好效果，且毒副作用少，易被患者接受，達到長期用藥、防病治病的目的。但目前使用的中藥以復(fù)方為主，尚未見報道有單味中藥提取物作為治療痛風(fēng)的制劑，由于中藥及復(fù)方本身的復(fù)雜性，難以確定有效成分，因此，難以準(zhǔn)確評價臨床療效，同時，由于中藥成分含量因產(chǎn)地、批次不同而不同，導(dǎo)致中成藥質(zhì)量的難以控制。
本發(fā)明還提供一種簡便的秦皮總香豆素的制備方法，確切地說是秦皮總香豆素的濃縮純化的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是將秦皮藥材切成顆粒狀，采用a.用水煮醇沉法(50％-90％)或醇提醇沉法(50％-90％)或醇提法(70％-95％)提取得到秦皮提取物浸膏；b.將浸膏置于4-12℃下冷藏8-24小時，形成沉淀；c.過濾得到沉淀并干燥，即得秦皮總香豆素。秦皮總香豆素作為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑可用于制備治療急慢性痛風(fēng)的藥物。本藥物的優(yōu)點是有效成分清楚、療效確切、未見明顯的毒副作用，總有效率為90％，顯效率56.7％。
下面通過藥理實驗及結(jié)果對秦皮總香豆素在制藥領(lǐng)域中的新用途進行說明。
取秦皮100kg，切成顆粒狀，加水提取三次，將水提液濃縮成浸膏，加2.5倍量乙醇，醇沉、過濾，將乙醇液回收溶劑濃縮成比重為1.0的浸膏，然后置于4℃冷藏8小時，過濾，收集沉淀，干燥，得到秦皮總香豆素1.70kg。將制得的秦皮總香豆素加蒸餾水稀釋成所需要的各種濃度的水溶液，消毒，備用。
1、急性毒性實驗取18-21g雌雄各半的昆明種小鼠50只，禁食12小時，不禁水，以濃度為16.38％的秦皮總香豆素溶液灌胃0.4ml/10gB.W.，連續(xù)觀察7天，記錄動物毒性反應(yīng)，7天后復(fù)測體重，以不產(chǎn)生死亡的最大劑量為一次口服給藥的最大耐受量(MTD)，并推算出該劑量相當(dāng)于臨床每日推薦用藥量的倍數(shù)。上述試驗結(jié)果表明，秦皮總香豆素小鼠一次灌胃最大耐受量MTD＞6.55g(總香豆素)/Kg(相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的655倍)。給藥后動物的外觀行為、精神狀態(tài)、體重、大小便及其顏色、被毛、膚色、呼吸、鼻、眼、口腔分泌物等均未見異常，試驗結(jié)束時解剖未見明顯病理改變。從秦皮總香豆素的急性毒性所試劑量與給藥后表現(xiàn)判斷，秦皮總香豆素屬無明顯毒性藥物。
2、長期毒性試驗以80～110克雌雄各半的一級Wistar大鼠260只為試驗動物，隨機分為4組，分別為低、中、高三個劑量組和一個對照組，采用灌胃法，每日上午9時～10時定時專人給藥。用濃度為8％秦皮總香豆素溶液供高劑量組用，并按比例稀釋成4％、2％藥液分別供中劑量組和低劑量組用。用不等濃度等體積藥液每天灌胃給藥一次，灌胃體積為1ml/100g體重，連續(xù)3個月。對照給灌胃等體積蒸餾水。實驗期每周稱體重一次，并按新的體重調(diào)整給藥量。給藥3個月后，3個劑量組和對照組各留下1/3動物不給受試藥物，繼續(xù)觀察2周，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲性毒性。觀察指標(biāo)包括一般表現(xiàn)，如動物進食量、體重、外觀體征、行為活動、糞便性狀等；血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)；系統(tǒng)尸解和病理組織學(xué)檢查。上述試驗結(jié)果表明，試驗藥物的各劑量組均未見明顯毒性反應(yīng)。
3、藥效學(xué)試驗以體重220～250克的Wistar大鼠、體重2.5～3.0公斤的新西蘭大白兔為試驗動物。秦皮總香豆素在冷水中的最大溶解度為16.38％，但在保溫條件下，其溶解度可以提高到50％以上。我們以秦皮總香豆素的水溶液作為供試藥物，經(jīng)試驗表明，不同濃度的秦皮總香豆素灌胃給藥對微晶型尿酸鈉混懸液局部注射誘發(fā)大鼠急性足爪腫脹以及家兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹均有顯著抑制作用，并能減少家兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔積液量，減輕關(guān)節(jié)囊組織充血、水腫、變性壞死以及淋巴細(xì)胞、中性白細(xì)胞浸潤等病理改變。本藥物還對正常小鼠血尿酸以及高尿酸小鼠血尿酸均有顯著降低作用。秦皮總香豆素對乙酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)有顯著減少作用，還具有一定延長小鼠熱板痛閾值作用，表明該藥物具有一定的鎮(zhèn)痛作用。秦皮總香豆素對二甲苯致小鼠急性耳腫脹、角叉菜膠局部注射誘發(fā)大鼠足爪腫脹均顯著對抗作用，可減輕棉球刺激肉芽舯重量，可以對抗炎癥引起的毛細(xì)血管通透性增加和引起的白細(xì)胞游走，表明秦皮總香豆素具有肯定的抗炎作用，可作用于炎癥初期及后期。以上結(jié)果表明，秦皮總香豆素具有抑制實驗性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹、減輕關(guān)節(jié)囊滑膜組織病理改變，降低血尿酸以及止痛、抗炎、消腫等多方面與痛風(fēng)治療有關(guān)的藥理作用。
表1 秦皮總香豆素對微晶型尿酸鈉誘發(fā)大鼠足爪急性炎癥的影響致炎前動物數(shù) 劑量組別致炎后足腫脹率(x±s，％)(只) (mg/Kg*d)足 體積(ml)1hr2hr 4hr 6hr 8hr26.7933.9142.10 46.14對照1.59± 16.23±10 -± ±±±組O．09 8．4212.0515.8414.14 12.1316.3020.3620.95 32.43總香1.60± 11.80±1040*3± ± ±±豆素0.11 7.287.03 9.16 7.85 10.9410.4616.9914.86 23.56總香1.59± 9.38±1080*3± ± ±±豆素0.11 4.875.12 8.66 8.41 8.7912.2012.9314.04 26.69總香1.63± 8.01±10 160*3± ± ±±豆素0.15 5.736.03 7.74 8.05 8.7211.2411.7910.71 21.50總香1.59± 8.26±10320*3± ± ± ±豆素0.08 5.817.38 7.11 7.54 10.1512.7710.898.93 9.71秋水1.61± 8.02±10 0.8*3± ± ±±仙堿0.11 4.365.795.79 5.27 5.94表2 秦皮總香豆素對MSU誘發(fā)兔急性痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腫脹率影響(x±s)組別動物數(shù)(只) 劑量(mg/Kg*d)腫脹率(％)正常對照 8 - 0±0模型對照 9 - 10.89±5.86秦皮總香豆素 8 20×43.30±3.16秦皮總香豆素 8 40×43.12±1.73秦皮總香豆素 9 80×42.89±2.03秦皮總香豆素 9 160×4 4.89±2.52秋水仙堿 9 0.4×4 4.00±1.58吲哚美辛 9 20×44.67±2.55表3 秦皮總香豆素對高尿酸血癥小鼠血尿酸的影響(x±s)組別 動物數(shù)(只)劑量(mg/Kg*d)血尿酸(μmol/L)正常對照 10 - 89.39±32.75模型對照 10 - 173.65±46.57秦皮總香豆素 10 50× 92.97±25.11秦皮總香豆素 10100×5 83.36±18.40秦皮總香豆素 10200×5 85.60±16.32秦皮總香豆素 10400×5 68.61±10.00別嘌呤醇 10100×5 67.16±5.71將制得的秦皮總香豆素按照常規(guī)的制劑方法，制成膠囊，規(guī)格為200mg/粒，對30例痛風(fēng)病人進行臨床觀察，結(jié)果如下表4 臨床觀察表例數(shù) 服用量服用時間總有效率(％) 總顯效率(％)30例 1粒/次 30天 90 56.73次/日經(jīng)測定，所得的秦皮總香豆素中，秦皮甲素含量超過60％，為了進一步研究秦皮甲素的藥理作用，我們采用以下方法分離得到秦皮甲素以溫?zé)峒状既芙?，回收部分甲醇，濃縮至秦皮甲素的甲醇飽和溶液，放置過夜，得到黃色針晶，經(jīng)甲醇、水反復(fù)重結(jié)晶得到秦皮甲素，純度94.4％。秦皮甲素在水中的溶解度與秦皮總香豆素相近，我們以秦皮甲素水溶液作為供試藥物，以體重220～250克的Wistar大鼠、體重2.5～3.0公斤的新西蘭大白兔為試驗動物。經(jīng)試驗表明，不同濃度的秦皮甲素灌胃給藥對微晶型尿酸鈉混懸液局部注射誘發(fā)大鼠急性足爪腫脹以及家兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹均有顯著抑制作用，并能減少家兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔積液量，減輕關(guān)節(jié)囊組織充血、水腫、變性壞死以及淋巴細(xì)胞、中性白細(xì)胞浸潤等病理改變。秦皮甲素還對正常小鼠血尿酸以及高尿酸小鼠血尿酸均有顯著降低作用。秦皮甲素對乙酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)有顯著減少作用，還具有一定延長小鼠熱板痛閾值作用，表明該藥物具有一定的鎮(zhèn)痛作用。秦皮甲素對二甲苯致小鼠急性耳腫脹、角叉菜膠局部注射誘發(fā)大鼠足爪腫脹均顯著對抗作用，可減輕棉球刺激肉芽舯重量，可以對抗炎癥引起的毛細(xì)血管通透性增加和引起的白細(xì)胞游走，表明秦皮甲素具有肯定的抗炎作用，可作用于炎癥初期及后期。以上結(jié)果表明，秦皮甲素具有抑制實驗性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹、減輕關(guān)節(jié)囊滑膜組織病理改變，降低血尿酸以及止痛、抗炎、消腫等多方面與痛風(fēng)治療有關(guān)的藥理作用。
表5秦皮甲素對MSU誘發(fā)兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔積液量的(x±s)關(guān)節(jié)腔積液量組別 動物數(shù)(只) 劑量(mg/Kg*d)(ml)正常對照 8 - 0±0模型對照 9 - 0.309±0.106秦皮甲素 8 20×4 0.189±0.094秦皮甲素 8 40×4 0.170±0.055秦皮甲素 9 80×4 0.214±0.108秦皮甲素 9 160×40.160±0.060秋水仙堿 9 0.4×40.241±0.137吲哚美辛 9 20×4 0.140±0.101表6 秦皮甲素對高尿酸血癥小鼠血尿酸的影響(x±s)組別 動物數(shù)(只)劑量(mg/Kg*d) 尿酸(μmol/L)正常對照 10 - 69.34±22.35模型對照 10 - 74.25±16.57秦皮甲素 1050×192.97±55.11秦皮甲素 10 100×563.34±10.40秦皮甲素 10 200×582.23±15.42秦皮甲素 10 400×588.51±16.20別嘌呤醇 10 100×565.25±8.36下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明實施例一取秦皮100kg，切成顆粒狀，加水提取三次，將水提液濃縮成浸膏，加3.5倍量乙醇，醇沉、過濾，將乙醇液回收溶劑濃縮成比重為1.1的浸膏，然后置于8℃冷藏10小時，過濾，收集沉淀，干燥，得到秦皮總香豆素2.15kg。
實施例二取秦皮100kg，切成顆粒狀，加水提取三次，將水提液濃縮成浸膏，加5倍量乙醇，醇沉、過濾，將乙醇液回收溶劑濃縮成比重為1.2的浸膏，然后置于12℃冷藏12小時，過濾，收集沉淀，干燥，得到秦皮總香豆素2.22kg。
實施例三將實施例一或?qū)嵤├们仄た傁愣顾?kg，或其他本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，如用醇提醇沉法或醇提法制成浸膏后用大孔樹脂吸附法濃縮得到秦皮總香豆素，按照常規(guī)制劑的方法，加入適當(dāng)賦形劑，制成規(guī)格為200mg/粒的秦皮總香豆素膠囊。
實施例四將制得的秦皮總香豆素2kg，按照常規(guī)制劑的方法，加入適當(dāng)賦形劑，制成規(guī)格為200mg/片的秦皮總香豆素片劑。
實施例五將制得的秦皮總香豆素2kg，按照常規(guī)制劑的方法，加入適當(dāng)賦形劑，制成規(guī)格為200mg/袋的秦皮總香豆素顆粒劑。
實施例六將制得的秦皮總香豆素2kg，以溫?zé)?40-50℃)甲醇3000ml溶解，回收部分甲醇，濃縮至秦皮甲素的甲醇飽和溶液，放置過夜，得到黃色針晶，經(jīng)甲醇、水反復(fù)重結(jié)晶得到秦皮甲素1.91kg，純度為94.4％。然后照實施例三、四、五的方法分別制成規(guī)格為200mg秦皮甲素膠囊、片劑和顆粒劑。
權(quán)利要求
1.一種秦皮總香豆素的制備方法，包括a.用水煮醇沉法(50％-90％)或醇提醇沉法(50％-90％)或醇提法(70％-95％)提取得到秦皮提取物浸膏；b.將浸膏置于4-12℃下冷藏8-24小時，形成沉淀；c.過濾得到沉淀并干燥，即得秦皮總香豆素。
2.秦皮總香豆素在制備治療急慢性痛風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
3.秦皮甲素在制備治療急慢性痛風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
痛風(fēng)具有發(fā)病潛伏、難根治的特點，化學(xué)藥品均不同程度存在毒副作用大的缺點，中醫(yī)藥治療痛風(fēng)雖已取得較好效果，但由于中藥及復(fù)方本身的復(fù)雜性，難以確定有效成分，因此，難以準(zhǔn)確評價臨床療效，同時，由于中藥成分含量因產(chǎn)地、批次不同而不同，導(dǎo)致中成藥質(zhì)量的難以控制。針對復(fù)方中成藥的缺點，我們提供一種單味中藥秦皮的提取物——秦皮總香豆素的新用途，還提供秦皮甲素的新用途，兩者均可以明顯陣痛、抗炎及降低患者血尿酸的作用，對急慢性痛風(fēng)有明顯的治療作用。總有效率為90％，顯效率56.7％，未見明顯毒副作用，其有效成分清楚、療效確切、毒副作用小。本發(fā)明還提供一種簡便的秦皮總香豆素的制備方法，確切地說是秦皮總香豆素的濃縮純化的方法。
文檔編號A61K31/37GK1398861SQ02133680
公開日2003年2月26日 申請日期2002年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月29日
發(fā)明者楊安東, 趙軍寧 申請人:成都迪康藥物研究所, 四川省中藥研究所