專利名稱：抗癌類斑蟊素－氨基葡萄糖偶聯(lián)物及其制備方法與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類具有抗腫瘤活性的類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物及其制備方法與應用。
斑蝥素是從中藥斑蝥中提取的一種抗腫瘤活性成分，去甲斑蝥素因為去除了斑蝥素結(jié)構(gòu)中兩個甲基團，從而對癌細胞具有較強的親和性，能在癌瘤局部形成較高的濃度，維持較長的時間，并可通過多種途徑破壞癌細胞促使其凋亡。斑蝥素雖然在治療腫瘤方面有一定療效，然而對人體泌尿系統(tǒng)和胃腸系統(tǒng)有不良反應，如尿頻、尿急、血尿和惡心等，并且其選擇性差，毒性大。
本發(fā)明的目的是提供一種類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物，即將類斑蝥素化合物與氨基葡萄糖衍生物偶聯(lián)起米，制備一系列類斑蝥素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物，以克服現(xiàn)有技術(shù)上的上述缺點。
一種抗癌類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物，其特征是氨基葡萄糖或它的衍生物在氨基部位與類斑蟊素化合物以酰胺鍵相連接。
一種抗癌類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物的制備方法，其特征是由氨基葡萄糖衍生物與類斑蟊素化合物在溶劑及脫水劑存在下室溫進行脫水偶聯(lián)反應。
一種抗癌類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物，其特征是將它用作抗癌藥物。
本發(fā)明的化合物具有體外抗腫瘤活性，通過兩種反應物的相加互補，提高了化合物的靶向性及機體吸收率，降低了毒副作用。
下面通過實施例說明本發(fā)明。
實施例1將12mmol的D-葡萄糖胺鹽酸鹽加入60ml 50％的乙腈水溶液中，再加入等摩爾的三乙胺，室溫攪拌，瓶中物變成透明液后，加入等摩爾5，6-二溴去甲基斑蝥素，在脫水劑二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)存在下攪拌五小時。減壓蒸餾去溶劑，以甲醇-乙酸乙酯為洗脫液柱層析，得到本發(fā)明的一種白色產(chǎn)物2’(2-脫氧葡萄糖-2-氨基甲?；?-5’，6’-二溴-7’-氧雜雙環(huán)[2，2，1]庚烷-1’-羧酸(1)2.32g，收率38.5％。mp92-93℃。從其溴化鉀壓片紅外光譜可以看到3331cm-1，2500-3000cm-1，1656cm-1，1723cm-1處的NH，OH，C＝O的特征吸收峰。此化合物的核磁共振氫譜(CDCl3，δ，ppm)中，7.52-7.53是NH的峰，6.46是COOH的峰，4.82-4.83是OH的峰，4.61是糖環(huán)Cl位H的峰。紅外光譜和核磁共振氫譜可以確定所合成的偶聯(lián)物其結(jié)構(gòu)為如下所示。 其中，偶聯(lián)物(1)的R為H，偶聯(lián)物(2)的R為-COCH3，偶聯(lián)物(3)的R為-COC6H6。元素分析結(jié)果為C為33.53％，H為4.25％，N為2.04％，證明該產(chǎn)物的純度達到99％。
本實施例所用的反應物D-氨基葡萄糖胺鹽酸鹽可改為1，3，4，6-四-O-乙?；?D-葡萄糖胺鹽酸鹽、1，3，4，6-四-O-苯甲?；?D-葡萄糖胺鹽酸鹽或1，3，4，6-四-O-芐基-D-葡萄糖胺鹽酸鹽；另一反應物5，6-二溴去甲基斑蝥素可改用去甲斑蟊素或5，6-去氫去甲基斑蝥素。
實施例2將3mmol 1，3，4，6-四-O-乙酰基-D-葡萄糖胺鹽酸鹽放入30ml乙腈中，攪拌，不溶解，當加入等摩爾的三乙胺后固體很快溶解，過濾，向濾液中加入等摩爾的5，6-二溴去甲基斑蝥素，在脫水劑DCC存在下室溫攪拌10小時，析出本發(fā)明得偶聯(lián)物(2)2’(1，3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧葡萄糖-2-氨基甲?；?-5’，6’-二溴-7’-氧雜雙環(huán)[2，2，1]庚烷-1’-羧酸白色固體，抽濾，濾餅用冷乙腈洗滌2次，干燥得本發(fā)明的產(chǎn)品1.00g，收率48.5％，mp196-197。從其溴化鉀壓片紅外光譜可以看到3350cm-1，2500-3000cm-1，1669cm-1，1746cm-1處的NH，OH及C＝O的特征吸收峰。其核磁共振氫譜(CDCl3，δ，ppm)在5.70-5.72是糖環(huán)碳1位上的氫峰，4.86-4.91是糖環(huán)碳3、碳4位上的氫峰，4.25-4.26是糖環(huán)碳6位上的氫峰的峰，1.92-2.03是CH3的峰。紅外光譜及核磁共振氫譜可以確定所合成的偶聯(lián)物(2)的結(jié)構(gòu)。元素分析證明該產(chǎn)物的純度達到99％。
糖環(huán)上反應位點較多，當應用羥基未保護的糖進行反應時往往產(chǎn)生許多副產(chǎn)物。本實施例中反應物應用?；Ｗo的氨基葡萄糖胺可以避免付產(chǎn)物的產(chǎn)生，其優(yōu)點是提高產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化率。
實施例3取2.5mmol 1，3，4，6-四-O-苯甲?；?D-葡萄糖胺鹽酸鹽加入25ml乙腈中，攪拌，不溶，加入等摩爾的三乙胺，基本全溶，過濾，向濾液中加入等摩爾的5，6-二溴去甲基斑蟊素，在脫水劑DCC存在下室溫攪拌24小時，減壓蒸去大部分溶劑，拌入硅膠，用乙酸乙酯-氯仿為洗脫劑柱層析得本發(fā)明的產(chǎn)品3’(1，3，4，6-四-O-苯甲酰基-2-脫氧葡萄糖-2-氨基甲酰基)-5’，6’-二溴-7’-氧雜雙環(huán)[2，2，1]庚烷-1’-羧酸(3)白色產(chǎn)物0.98g，收率43.5％。mp169-170℃。從其溴化鉀壓片紅外光譜可以看到3353cm-1，3066cm-1，2500-3000cm-1，1680cm-1，1731cm-1處的NH，ArH，OH及C＝O的特征吸收峰。該化合物的核磁共振氫譜(CDCl3，δ，ppm)在7.44-7.98處是苯環(huán)的氫峰，6.19-6.20是糖環(huán)碳1位的氫峰，5.85-5.87是糖環(huán)碳3位的氫峰，5.53-5.55是糖環(huán)碳4位的氫峰，4.85-4.86是糖環(huán)碳2位的氫峰，4.29是糖環(huán)碳5位的氫峰，4.07-4.09是糖環(huán)碳6位的氫峰。紅外光譜和核磁共振氫譜可以確定所合成的偶聯(lián)物(3)的結(jié)構(gòu)。元素分析證明該產(chǎn)物的純度達到99％。
本發(fā)明所合成的偶聯(lián)物的抗腫瘤活性本發(fā)明采用噻唑藍實驗方法(MTT法)測定本發(fā)明所合成化合物的抗癌活性，在人肺癌(PC-14)，卵巢癌(A2780)細胞株上進行了抗癌活性篩選?？鼓[瘤活性實驗結(jié)果表明所合成的化合物均有抑制PC-14、A2780細胞株的作用。特別是本發(fā)明所合成的偶聯(lián)物(2)對PC-14、A2780細胞株的抑制率高于對照品五氟脲嘧啶的抑制率，顯示了較好的抑制腫瘤細胞生長的效果。在藥物濃度為0.15μmol/ml時，偶聯(lián)物(2)對PC-14細胞株的抑制率可達87.16％，對A2780細胞株抑制率可達93.83％，而五氟尿嘧啶(5-Fu)對PC-14細胞株的抑制率達到90.73％所需藥物濃度為0.77μmol/ml，對A2780細胞株抑制率達到94.39％所需藥物濃度為0.77μmol/ml。這表明類斑蝥素化合物和氨基糖及其衍生物相連，抑瘤活性顯著提高。說明糖對該類化合物的修飾，可以改變其特性，增加其活性。
惡性腫瘤細胞的惡性行為，如血襲轉(zhuǎn)移，細胞表面糖復合物的合成，聚糖結(jié)構(gòu)以及細胞表面和基質(zhì)中的粘附分子及其受體均與糖有十分密切的關(guān)系。細胞惡變過程中表面膜的聚糖結(jié)構(gòu)有明顯變化，腫瘤細胞合成和分泌的糖蛋白及糖鏈結(jié)構(gòu)也有類似的變化，從腫瘤細胞進入體內(nèi)中的糖脂組成也和正常有顯著差別。因此研究和開發(fā)直接作用于膜水平靶點上的藥物，勢必有助于發(fā)現(xiàn)高效特異性抗腫瘤藥。
D-氨基葡萄糖存在于多種動物體內(nèi)，是高等動物糖蛋白鏈的一個重要單糖。在蛋白多糖中組成糖鏈的單糖，大多數(shù)也帶有氨基，它們主要存在于細胞間質(zhì)，細胞膜表面，軟骨組織，角膜基質(zhì)，主動脈和一些滑囊粘液結(jié)構(gòu)中?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)氨基糖具有多種生物活性，特別是對腫瘤細胞具有較好的殺傷作用而對人體正常細胞毒性很小。另外，許多研究結(jié)果表明糖苷類化合物也具有多種生理活性和良好的藥理作用。
本發(fā)明基于上述兩方面因素，應用拼合原理，將類斑蝥素化合物與D-氨基葡萄糖或氨基葡萄糖衍生物連接起來，制備一系列類斑蝥素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物。通過兩者相加互補，目的是提高化合物的靶向性及其生物利用度，尋找療效高，毒副作用低的新的抗腫瘤化合物，以期為臨床提供新型抗腫瘤藥物。
權(quán)利要求
1.一種抗癌類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物，其特征是氨基葡萄糖或它的衍生物在氨基部位與類斑蟊素化合物以酰胺鍵相連接。
2.一種抗癌類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物的制備方法，其特征是由氨基葡萄糖衍生物與類斑蟊素化合物在溶劑及脫水劑存在下室溫進行脫水偶聯(lián)反應。
3.一種抗癌類斑蟊素-氨基葡萄糖偶聯(lián)物，其特征是將它用作抗癌藥物。
4.如權(quán)力要求2所述的制備方法，其特征是所述的反應物氨基葡萄糖衍生物的羥基接有乙?；虮郊柞；蚱S基。
全文摘要
一種抗癌類斑蟊素－氨基葡萄糖偶聯(lián)物，其特征是由氨基葡萄糖衍生物與類斑蟊素化合物在溶劑及脫水劑存在下室溫進行脫水偶聯(lián)反應而得到。本發(fā)明的化合物具有體外抗腫瘤活性，通過兩種反應物的相加互補，提高了化合物的靶向性及機體吸收率，降低了毒副作用。
文檔編號A61P35/00GK1398591SQ0213540
公開日2003年2月26日 申請日期2002年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月2日
發(fā)明者江濤, 左代姝, 管華詩 申請人:青島海洋大學