專利名稱：一種治療生殖器皰疹的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療生殖器皰疹的藥物，具體涉及一種以中草藥為原料制備的中成藥，本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法。
本發(fā)明的另一目的在于提供該藥物的制備方法。
本發(fā)明提供的用于治療生殖器皰疹的藥物，是由下述重量配比的原料制成的藥劑大黃10～30 連翹10～30 苦參7～20 蛇床子7～20白屈菜8～20 冰片0.5～6 赤芍5～15上述用于治療生殖器皰疹的藥物，可以制成藥劑學上所說的多種劑型，如軟膏劑、搽劑、涂膜劑或乳劑等。
將上述重量配比的原料制成本發(fā)明藥物的方法，包括以下步驟(1)取連翹、蛇床子加水煎煮2～4次，每次1～3小時，同時收集揮發(fā)油，藥渣備用，水煎液合并，濾過，濾液減壓濃縮，加乙醇至含醇量達70～85％，靜置12～48小時，濾過，濾液備用；(2)取大黃、苦參、赤芍粉碎成粗粉，白屈菜切成小段與步驟(1)中獲得的藥渣，加5～12倍量70～85％乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，醇提液與步驟(1)中獲得的濾液合并，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10～1.15，得浸膏，備用；
(3)取甘油，尼泊金乙酯、三乙醇胺以熱水溶解，與浸膏混合保溫80～85℃，濾過，水溶液作為水相；水不溶部分浸膏，用少量乙醇溶解，加入硬脂酸，羊毛脂，液體石蠟，加熱融化，混勻，濾過，保溫80～85℃左右作為油相；將油相緩緩加入水相中，邊加邊攪拌，冷至40～45℃左右時加入冰片和揮發(fā)油，攪拌至冷卻，制得軟膏劑。
本發(fā)明藥物具有清熱解毒，燥濕止痛的功效。主治生殖器皰疹，癥見患處簇集性水皰，糜爛滲出或潰瘍，灼熱疼痛及瘙癢難忍，小便黃赤，口干口苦，舌質(zhì)紅，苔黃膩，脈旋滑等，中醫(yī)辨證屬濕熱下注者。本發(fā)明的藥物可以直接涂抹于病變部位，具有作用直接、起效迅速、標本兼治，不易復(fù)發(fā)、療效顯著、無毒副作用等特點，可有效治療生殖器皰疹。
下面結(jié)合實施例及藥效學試驗對本發(fā)明作進一步說明。
以上實施例僅為了對本發(fā)明作進一步的說明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實施例的局限。
本發(fā)明提供的是一種治療生殖器皰疹的天然藥物，為證明其治療生殖器皰疹的效果，發(fā)明者使用按上述實施例中提供的方法制備得到的軟膏進行了藥效學試驗，研究結(jié)果如下13.1試驗?zāi)康母鶕?jù)本發(fā)明軟膏的功能主治，選用不同的動物模型，較全面的評價本發(fā)明軟膏對感染II型皰疹病毒小鼠的治療作用、對豚鼠感染II型皰疹病毒的預(yù)防作用、本發(fā)明軟膏的抗炎鎮(zhèn)痛作用，以及本發(fā)明軟膏的體外抗II型皰疹病毒作用、對病毒感染力的影響和本發(fā)明軟膏的細胞毒性作用。以便確定本發(fā)明軟膏的藥效作用，以及藥物的作用強度，為其臨床研究提供依據(jù)。13.2本發(fā)明軟膏的細胞毒性實驗及體外抗病毒實驗13.2.1實驗材料13.2.1.1藥物①受試藥物本發(fā)明軟膏藥膏由廣州歐華醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，研究批號001218-1。
②陽性對照藥物阿昔洛韋，由武漢愛民制藥廠生產(chǎn)，批號20010304，生產(chǎn)批文國藥準字XF19990949。主治單純皰疹病毒引起的皮膚和粘膜感染等。13.2.1.2細胞及病毒Hep-2細胞和HSV-II病毒由武漢大學醫(yī)學院病毒研究所提供。13.2.2實驗方法13.2.2.1病毒感染性滴度的測定將不同稀釋度的病毒接種Hep-2細胞，每孔0.1ml，每個稀釋度3孔，37℃吸附1h后，加2％小牛血清的MEM培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)，每日檢查病毒生長情況，觀察特征性細胞病變(CPE)，2～7天后記錄結(jié)果。CPE記錄方法(-)為無CPE；(+)為25％的細胞出現(xiàn)CPE；(++)為50％細胞出現(xiàn)CPE；(+++)為75％細胞出現(xiàn)CPE；(++++)為100％細胞出現(xiàn)CPE。計算病毒的半數(shù)感染量(TCID50)13.2.2.2藥物細胞毒性測定在已長成單層的Hep-2細胞中，分別加入不同濃度的藥物，每一濃度的藥物均重復(fù)四孔，并設(shè)置未加藥液的細胞做正常對照。置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。用MTT法檢測細胞存活率。13.2.2.3藥物抗病毒實驗在24孔板上，另0.8×105/ml濃度的Hep-2細胞1ml/孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，棄上清，加1000TCID50/ml的HSV-II，0.1ml/孔，37℃，5％CO2，吸附90min，棄上清，加含藥維持液待檢，陽性藥物濃度為5、10、20、40、80μg/ml；37℃，5％CO2培養(yǎng)33h，觀察CPE，然后以MTT法檢測病毒抑制率，每一藥物劑量均重復(fù)4孔。13.2.3實驗結(jié)果13.2.3.1實驗測得病毒的半數(shù)感染量TCID50為10-5，本實驗用病毒濃度為1000TCID50/ml。
13.2.3.2不同濃度的本發(fā)明軟膏軟膏對細胞存活率的影響藥物對Hep-2細胞毒性作用表現(xiàn)為細胞折光性改變，壁厚，變圓，破碎，脫落，并且吸光值明顯下降。藥物濃度在2000μg/ml以內(nèi)未見明顯的細胞毒性，但經(jīng)較高藥物濃度作用后，細胞死亡數(shù)增加，藥物有細胞毒性。見附圖
。結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計軟件SPSS10.0分析，藥物的細胞毒性與藥物濃度有直線相關(guān)關(guān)系。結(jié)果詳見表13-1。
表13-1不同濃度的本發(fā)明軟膏軟膏對細胞存活率的影響本發(fā)明軟膏(μg/ml)200 1000 2000 4000 8000 16000 24000 32000 48000 62000細胞存活率(％)100 94.7 83.1 70.2 50.0 36.2 24.5 11.7 4.30阿昔洛韋(μg/ml) 10 2040608010012040 160細胞存活率(％)100 90.5 85.7 8161.9 61.9 42.9 14.3 4.813.2.3.3不同濃度的本發(fā)明軟膏軟膏對II型皰疹病毒增殖的抑制作用通過對CPE的觀察發(fā)現(xiàn)，當本發(fā)明軟膏濃度達到6400μg/ml時，病毒的抑制率已經(jīng)超過90％，而且隨著本發(fā)明軟膏藥物濃度的增加，其抗病毒活性也增強。見附圖。結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計軟件SPSS10.0分析，藥物對病毒的抑制作用與藥物濃度有直線相關(guān)關(guān)系。結(jié)果詳見表13-2。
表13-2不同濃度的本發(fā)明軟膏軟膏對II型皰疹病毒增殖的抑制作用本發(fā)明軟膏濃度(μg/ml)400 800160032006400病毒抑制率 (％) 1.7 7.548.365.091.7阿昔洛韋濃度(μg/ml) 5 10 20 40 80病毒抑制率(％)26.3 53.3 63.385.293.313.3本發(fā)明軟膏對感染II型皰疹病毒小鼠的治療作用13.3.1實驗材料13.3.1.1藥物
①受試藥物本發(fā)明軟膏藥膏和對照用基質(zhì)由廣州歐華醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，研究批號001218-1。分別將本發(fā)明軟膏藥膏與基質(zhì)以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制備成不同濃度藥膏備用，其本發(fā)明軟膏濃度倍比關(guān)系為4∶2∶1。
②陽性對照藥物阿昔洛韋，由武漢愛民制藥廠生產(chǎn)，批號20010304，生產(chǎn)批文國藥準字XF19990949。主治單純皰疹病毒引起的皮膚和粘膜感染等。阿昔洛韋用量為每只小鼠約50mg，若阿昔洛韋臨床每天使用6次，共計用量為2g，則實驗用劑量為臨床用量的11.3倍。13.3.1.2動物雌性清潔級昆明種小鼠，體重17±1g，動物質(zhì)量合格證號醫(yī)動字第19-052號(TJLA-2001-60)。由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，檢疫后備用。13.3.2實驗方法取雌性清潔級昆明種小白鼠140只，隨機分為正常對照組(N＝20)、模型對照組(N＝20)、西藥對照組(N＝20)、基質(zhì)對照組(N＝20)、本發(fā)明軟膏高劑量組(N＝20)、本發(fā)明軟膏中劑量組(N＝20)、本發(fā)明軟膏低劑量組(N＝20)。受試各組小鼠除正常對照組外，分別取50μl II型皰疹病毒(由武漢大學病毒研究所提供)用3mm×3mm×3mm大小海綿吸附，用眼科鑷小心塞入小鼠陰道，每日1次，連續(xù)7天。造模成功后，開始分別給藥治療，藥物用小棉簽小心塞入小鼠陰道，每日給藥兩次。治療7天后，眼眶取血，無菌分離血清，-20℃凍存?zhèn)錂z。其中半數(shù)血清檢測IFN-γ(ELISA法，試劑盒由北京幫定生物技術(shù)公司提供)，半數(shù)血清檢測IgG含量(ELISA法，試劑盒由武漢大學醫(yī)學院病毒研究所提供)。實驗結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行統(tǒng)計分析。完整分離小鼠陰道，半數(shù)用4％多聚甲醛固定送病檢，半數(shù)-20℃凍存，用于病毒分離(正常組小鼠陰道粘膜不做病毒分離實驗)。13.3.3實驗結(jié)果13.3.3.1本發(fā)明軟膏對II型皰疹病毒引起小鼠陰道組織學改變的影響病理組織學檢查結(jié)果顯示(1)正常組小鼠陰道粘膜表面未見膿性分泌物，粘膜上皮光滑完整，結(jié)構(gòu)清晰，粘膜下未見明顯炎癥細胞浸潤，無明顯充血。結(jié)果詳見附圖。
(2)模型組小鼠陰道粘膜表面見較多膿性分泌物，粘膜結(jié)構(gòu)紊亂，粘膜上皮可見明顯增生、缺損、水樣變性，粘膜損傷深達基底層，粘膜下可見充血及大量炎癥細胞浸潤。
(3)基質(zhì)組小鼠陰道粘膜病理改變與模型組相似。
(4)西藥組小鼠陰道粘膜表面未見明顯膿性分泌物，粘膜結(jié)構(gòu)尚清楚，粘膜上皮可見增生、缺損、氣球樣變形，粘膜下層可見充血及炎癥細胞浸潤。
(5)中藥大劑量組小鼠陰道粘膜表面無分泌物，粘膜結(jié)構(gòu)清晰，粘膜上皮基本光滑，可見輕度缺損，粘膜增生不明顯，粘膜下炎癥細胞浸潤明顯較模型組、基質(zhì)組和西藥組為輕，未見明顯充血。
(6)中藥中劑量組小鼠陰道粘膜表面有少量膿性分泌物，粘膜結(jié)構(gòu)清晰，粘膜欠光滑，有缺損，粘膜內(nèi)可見膿腔，粘膜下炎癥細胞浸潤較模型組明顯減輕，可見充血。
(7)中藥小劑量組小鼠陰道粘膜表面有少許分泌物，粘膜上皮可見較明顯缺損，可見氣球樣變形，粘膜顯著增生，粘膜下可見明顯炎性細胞浸潤，顯著充血。13.3.3.2本發(fā)明軟膏對II型皰疹病毒引起小鼠血清IFN-γ含量的影響實驗結(jié)果表明，經(jīng)本發(fā)明軟膏各劑量治療的小鼠血清IFN-γ含量均與正常組有顯著性差異，本發(fā)明軟膏中劑量組和阿昔洛韋組與模型組有顯著性差異，本發(fā)明軟膏大劑量組、中劑量組和阿昔洛韋組與基質(zhì)對照組有顯著性差異。結(jié)果詳見表13-3。
表13-3本發(fā)明軟膏對小鼠血清中INF-α含量的影響組別動物數(shù)INF-α含量(pg/ml)正常對照組 109.50±4.35模型對照組 1016.2±6.27※基質(zhì)對照組 1015.5±4.01阿昔洛韋組 1024.2±6.68※●▲本發(fā)明軟膏小劑量組 1021.8±7.45※本發(fā)明軟膏中劑量組 1022.8±8.55※●▲本發(fā)明軟膏大劑量組 1022±10.23※▲注※與正常組比較p＜0.05 ●與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.05 ★與西藥組比較p＜0.0513.3.3.3本發(fā)明軟膏對II型皰疹病毒引起小鼠血清IgG含量的影響實驗結(jié)果表明，經(jīng)病毒感染后各組小鼠血清IgG含量較正常組明顯升高，本發(fā)明軟膏大劑量組小鼠血清中IgG含量與模型組、基質(zhì)組有顯著性差異，中劑量組小鼠血清中IgG含量與基質(zhì)組有顯著性差異。本發(fā)明軟膏各劑量組小鼠血清中IgG含量與阿昔洛韋對照組無顯著性差異。結(jié)果詳見表13-4。
表13-4本發(fā)明軟膏對小鼠血清中IgG含量的影響組別 動物數(shù) IgG含量(P/N)正常對照組8 1.73±0.28模型對照組8 3.45±0.45※基質(zhì)對照組8 3.30±0.51阿昔洛韋組8 4.15±0.56※●▲本發(fā)明軟膏小劑量組8 3.65±0.56本發(fā)明軟膏中劑量組8 3.85±0.67※▲本發(fā)明軟膏大劑量組8 4.05±0.56※●▲注※與正常組比較p＜0.05 ●與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.05 ★與西藥組比較p＜0.0513.3.3.4小鼠陰道粘膜病毒分離結(jié)果表明，經(jīng)本發(fā)明軟膏治療后，本發(fā)明軟膏大劑量組小鼠陰道粘膜病毒檢出率顯著低于模型組和基質(zhì)對照組。結(jié)果詳見表13-5。
表13-5不同濃度本發(fā)明軟膏對小鼠陰道粘膜病毒檢出率的影響組別 動物數(shù)檢出病毒樣本數(shù)病毒檢出率(％)模型對照組 108 80基質(zhì)對照組 9 7 77.78本發(fā)明軟膏小劑量組 105 50本發(fā)明軟膏中劑量組 8 4 50本發(fā)明軟膏大劑量組 9 2 22.22●▲注●與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.0513.4本發(fā)明軟膏對II型皰疹病毒感染豚鼠的預(yù)防作用13.4.1實驗材料13.4.1.1藥物①受試藥物本發(fā)明軟膏藥膏和對照用基質(zhì)由廣州歐華醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，研究批號001218-1。分別將本發(fā)明軟膏藥膏與基質(zhì)以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制備成不同濃度藥膏備用，其本發(fā)明軟膏濃度倍比關(guān)系為4∶2∶1。
13.4.1.2動物雌性普通級清潔級豚鼠，體重300±20g，動物質(zhì)量合格證號醫(yī)動字第19-023號(TJLA-2001-65)。由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，檢疫后備用。
13.4.2實驗方法取雌性普通級清潔級豚鼠70只，隨機分為正常對照組(N＝10)、模型對照組(N＝10)、基質(zhì)對照組(N＝10)、本發(fā)明軟膏高劑量組(N＝10)、本發(fā)明軟膏中劑量組(N＝10)、本發(fā)明軟膏低劑量組(N＝10)。本發(fā)明軟膏各劑量組豚鼠給予不同濃度的本發(fā)明軟膏藥膏100mg，基質(zhì)對照組給予等量的空白基質(zhì)。藥物均用小棉簽小心塞入豚鼠陰道，連續(xù)用藥7天。停止用藥后，取100μl II型皰疹病毒(由武漢大學病毒研究所提供)用4mm×4mm×4mm大小海綿吸附，用眼科鑷小心塞入豚鼠陰道，每日1次，連續(xù)7天后，完整分離陰道并縱向剖開，取一半4％多聚甲醛固定，送病檢，另一半進行病毒分離。13.4.3實驗結(jié)果13.4.3.1病理組織學改變正常組豚鼠陰道粘膜表面未見膿性分泌物，粘膜上皮光滑完整，結(jié)構(gòu)清晰，粘膜下未見明顯炎癥細胞浸潤，無明顯充血。
模型組、基質(zhì)組、阿昔洛韋組、中藥各劑量組豚鼠陰道粘膜表面均見大量膿性分泌物，粘膜結(jié)構(gòu)紊亂，明顯增生、缺損，損傷深達基底層，粘膜可見空泡樣變形，粘膜下可見大量炎性細胞浸潤，顯著充血。
結(jié)果詳見附圖。13.4.3.2不同濃度本發(fā)明軟膏對豚鼠陰道粘膜病毒檢出率的影響結(jié)果表明，經(jīng)本發(fā)明軟膏治療后，本發(fā)明軟膏大劑量組豚鼠陰道粘膜病毒檢出率顯著低于模型組和基質(zhì)對照組。結(jié)果詳見表13-6。
表13-6不同濃度本發(fā)明軟膏對豚鼠陰道粘膜病毒檢出率的影響組別 動物數(shù)檢出病毒樣本數(shù)病毒檢出率(％)模型對照組 9 7 77.78基質(zhì)對照組 8 6 75本發(fā)明軟膏小劑量組 9 5 55.56本發(fā)明軟膏中劑量組 8 4 50本發(fā)明軟膏大劑量組 102 20●▲注●與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.0513.5本發(fā)明軟膏的抗炎作用13.5.1實驗材料13.5.1.1藥物①受試藥物本發(fā)明軟膏藥膏和對照用基質(zhì)由廣州歐華醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，研究批號001218-1。分別將本發(fā)明軟膏藥膏與基質(zhì)以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制備成不同濃度藥膏備用，其本發(fā)明軟膏濃度倍比關(guān)系為4∶2∶1。
②陽性對照藥物醋酸地塞米松軟膏，由福建省沙縣制藥廠生產(chǎn)，批號20010301。批準文號閩衛(wèi)藥準字(1996)第002253號。13.51.2動物清潔級SD大鼠，雌雄各半，體重200±20g，動物質(zhì)量合格證號醫(yī)動字第19-053號(TJLA-2001-63)，由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，檢疫后備用。清潔級昆明種小鼠，雌性180只，雄性90只，體重20±2g，動物質(zhì)量合格證號醫(yī)動字第19-052號(TJLA-2001-62)。由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，檢疫后備用。
13.5.2實驗方法13.5.2.1本發(fā)明軟膏對蛋清引起的大鼠足腫脹的影響取清潔級SD大鼠60只，雌雄各半。隨機分為模型對照組(N＝10)、醋酸地塞米松組(N＝10)、基質(zhì)對照組(N＝10)、本發(fā)明軟膏高劑量組(N＝10)、本發(fā)明軟膏中劑量組(N＝10)、本發(fā)明軟膏低劑量組(N＝10)。將受試大鼠右側(cè)后肢絨毛仔細剪干凈，并在其踝關(guān)節(jié)突起處劃線標記，參照陳奇方法[1]制作測量裝置，測量鼠爪初始體積，連續(xù)測2次，取平均值視為大鼠足跖體積。分別給予每只大鼠足跖部注射新鮮雞蛋清0.05ml，注射后立即分組給藥，本發(fā)明軟膏各劑量組分別取等體積不同濃度的本發(fā)明軟膏藥膏均勻涂在大鼠右后肢，基質(zhì)對照組給予同等體積的純基質(zhì)，醋酸地塞米松組每只大鼠給予醋酸地塞米松軟膏外涂。所有外用藥膏用量每次均約為0.5g。在造模1h后，用溫水洗凈殘留的藥膏，用吸水紙吸干足跖部殘余的水分，連續(xù)兩次測量大鼠足跖體積，測量后再次給藥。在造模3h后再次測量大鼠足跖體積并給藥，在造模6h后再次測量大鼠足跖體積。分別計算大鼠足跖腫脹率，公式如下。實驗結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行統(tǒng)計分析。 13.5.2.2本發(fā)明軟膏對二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的影響取清潔級昆明種小白鼠60只，雌雄各半。隨機分為模型對照組(N＝10)、西藥對照組(N＝10)、基質(zhì)對照組(N＝10)、本發(fā)明軟膏高劑量組(N＝10)、本發(fā)明軟膏中劑量組(N＝10)、本發(fā)明軟膏低劑量組(N＝10)。給予各實驗組小鼠以二甲苯0.1ml均勻涂布右耳上下兩面，隨后立即分組給藥，本發(fā)明軟膏各劑量組分別取不同濃度的本發(fā)明軟膏藥膏均勻涂在小鼠右側(cè)耳廓上下兩面，每只小鼠給藥量約為100mg，基質(zhì)對照組給予等量純基質(zhì)，醋酸地塞米松組每只小鼠給予醋酸地塞米松軟膏100mg外涂。給藥2h后用φ6mm打孔器在小鼠兩側(cè)耳廓正中各取一片耳片，用電子精密分析天平(Denver Instrument Compony出品，型號AA-200)稱重，計算腫脹度和腫脹率，公式如下。實驗結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS 10.0進行統(tǒng)計分析。
耳廓腫脹度＝右側(cè)耳片重-左側(cè)耳片重 13.5.3實驗結(jié)果13.5.3.1本發(fā)明軟膏對蛋清引起的大鼠足腫脹的影響在給藥1h時段，本發(fā)明軟膏大、中、小劑量組與空白組、基質(zhì)組大鼠足腫脹率無顯著性差異。而在給藥后3h、6h時段，本發(fā)明軟膏大、中、小劑量組大鼠足腫脹率明顯低于空白組和基質(zhì)對照組。西藥醋酸地塞米松組在各時段抗蛋清引起大鼠足腫脹效應(yīng)顯著優(yōu)于本發(fā)明軟膏各劑量組和空白組、基質(zhì)組。結(jié)果詳見表13-7。
表13-7本發(fā)明軟膏對蛋清引起大鼠足腫脹的影響(x±s，n＝10)組別1h腫脹率(％)3h腫脹率(％) 6h腫脹率(％)模型對照組 86.36±11.1682.59±9.88 65.58±6.74基質(zhì)對照組 87.88±8.57 83.80±8.56 64.00±7.72西藥對照組 44.92±7.72※▲ 37.80±5.55※▲ 27.40±4.45※▲本發(fā)明軟膏小劑量組 83.55±4.61 75.72±3.88※▲★ 59.05±3.19※▲★本發(fā)明軟膏中劑量組 82.53±7.95 66.63±5.05※▲★ 42.44±3.57※▲★本發(fā)明軟膏大劑量組 82.33±8.05 63.23±5.42※▲★ 40.22±3.37※▲★注※與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.05 ★與西藥組比較p＜0.0513.5.3.2本發(fā)明軟膏對二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的影響在給藥2h后，本發(fā)明軟膏大、中、小劑量組小鼠耳廓腫脹率顯著低于空白組和基質(zhì)組，西藥醋酸地塞米松組抗二甲苯引起小鼠耳廓的效應(yīng)顯著優(yōu)于本發(fā)明軟膏大、中、小劑量組和空白組與基質(zhì)對照組。結(jié)果詳見表13-8。
表13-8本發(fā)明軟膏對二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的影響(x±s，n＝10)組別動物數(shù) 腫脹度(mg) 腫脹率(％)模型對照組 10 12.37±1.01 88.41±6.65基質(zhì)對照組 10 12.16±1.02 88.23±10.28西藥對照組 10 6.45±0.65 46.61±4.91※▲本發(fā)明軟膏小劑量組 10 9.91±0.83 71.77±4.89※▲★本發(fā)明軟膏中劑量組 10 8.14±0.93 59.70±10.31※▲★本發(fā)明軟膏大劑量組 10 7.94±0.88 57.64±8.98※▲★注※與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.05 ★與西藥組比較p＜0.0513.6本發(fā)明軟膏的鎮(zhèn)痛作用13.6.1實驗材料13.6.1.1藥物①受試藥物本發(fā)明軟膏藥膏和對照用基質(zhì)由廣州歐華醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，研究批號001218-1。分別將本發(fā)明軟膏藥膏與基質(zhì)以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制備成不同濃度藥膏備用，其本發(fā)明軟膏濃度倍比關(guān)系為4∶2∶1。0.6％的乙酸溶液。
②陽性對照藥物阿司匹林片，由武漢制藥廠生產(chǎn)，批號20000603。將阿司匹林溶于適量的生理鹽水中，制成濃度為20mg/ml的混懸液備用。13.6.1.2動物清潔級昆明種小鼠，雌雄各半，體重20±2g，動物質(zhì)量合格證號醫(yī)動字第19-052號(TJLA-2001-62)。由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，檢疫后備用。13.6.2實驗方法13.6.2.1扭體法取清潔級昆明種小鼠120只，雌雄各半，隨機分為模型對照組(N＝20)、西藥對照組(N＝20)、基質(zhì)對照組(N＝20)、本發(fā)明軟膏高劑量組(N＝20)、本發(fā)明軟膏中劑量組(N＝20)、本發(fā)明軟膏低劑量組(N＝20)。用脫毛膏(硫化鋇25g、滑石粉35g、淀粉35g、肥皂粉5g，加水調(diào)成糊狀)將基質(zhì)對照組，本發(fā)明軟膏小、中、大劑量組小鼠腹部各脫去一1.5cm×2.5cm的區(qū)域，分別取0.5g基質(zhì)和不同濃度的本發(fā)明軟膏藥膏均勻涂在各小鼠脫毛區(qū)域，用紗布和膠布外固定。阿司匹林組小鼠給予阿司匹林1g/kg劑量灌胃，模型對照組不予其他處理。給藥180min后，給予每只小鼠腹腔注射0.6％的乙酸溶液0.2ml，隨即觀察并記錄15min內(nèi)小鼠扭體的次數(shù)。小鼠應(yīng)分別放置不同的鼠籠進行觀察，以防止小鼠相互擁擠，計數(shù)不準確。同時，實驗中只能記錄小鼠標準的扭體動作腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行。實驗結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行統(tǒng)計分析。13.6.2.2熱板法實驗前先對小鼠進行預(yù)篩，對于熱板耐受時間小于5s，或大于60s的小鼠應(yīng)棄去。取符合實驗要求的清潔級昆明種雌性小鼠90只，隨機分為空白對照組(N＝15)、阿司匹林對照組(N＝15)、基質(zhì)對照組(N＝15)、本發(fā)明軟膏高劑量組(N＝15)、本發(fā)明軟膏中劑量組(N＝15)、本發(fā)明軟膏低劑量組(N＝15)。分別將約50mg不同濃度的本發(fā)明軟膏藥膏和對照組基質(zhì)均勻涂布于各小鼠后足掌側(cè)，阿司匹林組小鼠給予阿司匹林1g/kg劑量灌胃，模型對照組不予其他處理。30min后用無菌棉簽將殘余藥膏去除，并將小鼠置于熱板上，熱板溫度控制在55±0.5℃，記錄小鼠上熱板至首次舔后足的時間。以此熱板耐受時間的變化反映小鼠痛閾的變化，耐熱超過1min的小鼠按1min記。分別記錄用藥后30min、60min、90min各小鼠熱板耐受時間，并計算痛閾提高率。公式如下。實驗結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行統(tǒng)計分析。 13.6.3實驗結(jié)果13.6.3.1本發(fā)明軟膏對乙酸引起小鼠扭體次數(shù)的影響在給藥2h后，本發(fā)明軟膏大、中、小劑量組小鼠在腹腔注射乙酸后引起的扭體次數(shù)顯著低于模型對照組和基質(zhì)對照組，阿司匹林組小鼠扭體次數(shù)顯著低于本發(fā)明軟膏各劑量組。結(jié)果詳見表13-9。
表13-9本發(fā)明軟膏對乙酸引起小鼠扭體次數(shù)的影響組別 動物數(shù) 扭體次數(shù)模型對照組 20 23±5.44基質(zhì)對照組 20 22.10±5.78阿司匹林組 20 15.50±6.03※▲本發(fā)明軟膏小劑量組 20 19.80±4.23本發(fā)明軟膏中劑量組 20 20.65±9.22※本發(fā)明軟膏大劑量組 20 18.50±5.60※注※與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.05 ★與西藥組比較p＜0.0513.6.3.2本發(fā)明軟膏對各組小鼠熱板耐受時間的影響本發(fā)明軟膏在給藥后30min、60min、90min等各個時間段對小鼠熱板耐受時間均有顯著的提高，其中，在給藥后30min時段和90min時段，本發(fā)明軟膏大劑量組與阿司匹林組療效無顯著性差異，在60min時段，阿司匹林對小鼠痛閾提高效果顯著優(yōu)于本發(fā)明軟膏各劑量組。結(jié)果詳見表13-10。
表13-10本發(fā)明軟膏對小鼠痛閾的影響(x±s，n＝15)組別30min痛閾提高率(％)60min痛閾提高率(％)90min痛閾提高率(％)模型對照組 4.07±20.61-2.56±17.83 2.09±17.92基質(zhì)對照組 3.40±29.462.08±20.652.52±15.87阿司匹林組 94.26±41.51※▲ 87.77±24.13※▲ 74.98±19.04※▲本發(fā)明軟膏小劑量組 41.58±23.20※▲★ 42.76±27.25※▲★ 36.92±16.18※▲★本發(fā)明軟膏中劑量組 67.56±45.40※▲★ 63.85±23.21※▲★ 60.38±23.15※▲★本發(fā)明軟膏大劑量組 69.67±45.08※▲ 70.36±20.38※▲★ 65.18±13.48※▲注※與模型組比較p＜0.05 ▲與基質(zhì)組比較p＜0.05 ★與西藥組比較p＜0.05結(jié)論通過抗II型皰疹病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛的研究，結(jié)果表明本發(fā)明軟膏具有抗II型皰疹病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛的作用。本發(fā)明軟膏軟膏在體外實驗有較好的抗病毒作用，且其對病毒的抑制作用與藥物濃度呈正相關(guān)；在體抗病毒試驗，可提高INF-α與IgG的含量，病理組織學檢查顯示，經(jīng)本發(fā)明軟膏治療后，小鼠陰道粘膜上皮因感染II型皰疹病毒引起的病毒性炎癥、上皮缺損、上皮增生、細胞空泡樣變性等病理變化均顯著減輕；預(yù)先給予本發(fā)明軟膏能降低給予病毒后豚鼠陰道粘膜的病毒檢出率；有良好的抗炎及鎮(zhèn)痛作用。
權(quán)利要求
1.一種治療生殖器皰疹的藥物，其特征在于是由下述重量配比的原料制成的藥劑大黃10～30 連翹10～30 苦參7～20 蛇床子7～20白屈菜8～20 冰片0.5～6 赤芍5～15
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療生殖器皰疹的藥物，其特征在于所述的藥劑是藥劑學上所說的任何一種劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療生殖器皰疹的藥物，其特征在于所述的藥劑是軟膏劑、搽劑、涂膜劑或乳劑。
4.權(quán)利要求3所述的治療生殖器皰疹的藥物的制備方法，包括以下步驟(1)取連翹、蛇床子加水煎煮2～4次，每次1～3小時，同時收集揮發(fā)油，藥渣備用，水煎液合并，濾過，濾液減壓濃縮，加乙醇至含醇量達70～85％，靜置12～48小時，濾過，濾液備用；(2)取大黃、苦參、赤芍粉碎成粗粉，白屈菜切成小段與步驟(1)中獲得的藥渣，加5～12倍量70～85％乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，醇提液與步驟(1)中獲得的濾液合并，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10～1.15，得浸膏，備用；(3)取甘油，尼泊金乙酯、三乙醇胺以熱水溶解，與浸膏混合保溫80～85℃，濾過，水溶液作為水相；水不溶部分浸膏，用少量乙醇溶解，加入硬脂酸，羊毛脂，液體石蠟，加熱融化，混勻，濾過，保溫80～85℃左右作為油相；將油相緩緩加入水相中，邊加邊攪拌，冷至40～45℃左右時加入冰片和揮發(fā)油，攪拌至冷卻，制得軟膏劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療生殖器皰疹的藥物，它以中藥大黃、連翹、苦參、蛇床子、白屈菜、赤芍、冰片為原料，經(jīng)過提取、精制而成的中藥藥劑。本發(fā)明藥物具有清熱解毒，燥濕止痛的功效，主治生殖器皰疹，中醫(yī)辨證屬濕熱下注者。經(jīng)藥效試驗表明，本發(fā)明藥物具有較好的抑殺皰疹病毒作用和抗炎、鎮(zhèn)痛作用，并且無毒副作用。
文檔編號A61P31/22GK1433796SQ02149689
公開日2003年8月6日 申請日期2002年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月20日
發(fā)明者張晴龍 申請人:張晴龍