專利名稱：Ⅶ因子多肽和Ⅷ因子多肽的聯(lián)合應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的藥物組合物。本發(fā)明還涉及用于治療出血發(fā)作的、由多部分組成的試劑盒，其含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品。本發(fā)明還涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品用于制備藥物的用途。另外，本發(fā)明涉及治療出血、縮短凝血時(shí)間、增強(qiáng)止血、減少完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥次數(shù)、減少完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥量、延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間、增加血塊強(qiáng)度和增強(qiáng)血纖蛋白塊形成的方法。
背景技術(shù)：
血液凝結(jié)因子VII(FVII)是血漿凝結(jié)因子。活化的VII因子(FVIIa)通過(guò)與因血管壁受損而暴露在外的組織因子(TF)形成復(fù)合物來(lái)起始正常的止血過(guò)程，隨后，將IX和X因子(FIX和FX)激活為其活化形式，即IXa和Xa因子(FIXa和FXa)。在攜有組織因子的細(xì)胞上，Xa因子將有限量的凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?。凝血酶活化血小板，并將V和VIII因子活化為Va和VIIIa因子(FVa和FVIIIa)，在隨后的過(guò)程中，這兩種輔因子導(dǎo)致凝血酶完全裂解。該過(guò)程包括由(與VIIIa因子形成復(fù)合物的)IXa因子產(chǎn)生Xa因子，且發(fā)生于活化的血小板表面。凝血酶最終將血纖蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)檠w蛋白，導(dǎo)致形成血纖蛋白塊。
VII因子主要作為單鏈酶原存在于血漿中，由FXa將其裂解為雙鏈的活化形式FVIIa。已將重組的活化VIIa因子(rFVIIa)開發(fā)成前止血?jiǎng)?。給因抗體形成而不能用凝結(jié)因子產(chǎn)物治療的出血的血友病受試者施用rFVIIa可提供快速而高效的前-止血反應(yīng)。FVIIa可成功治療VII因子缺乏的出血受試者或雖具有正常凝結(jié)系統(tǒng)但遭遇過(guò)度失血的受試者。在這些研究中，未遇到rFVIIa不利的副作用(特別是血栓栓塞的出現(xiàn))。
血液凝結(jié)因子VIII是在血液中循環(huán)的糖蛋白(MW330,000)。它由肝臟和內(nèi)皮分泌，作為與von Willebrand因子的復(fù)合物被分泌至血漿中并在其中循環(huán)。VIII因子在凝血過(guò)程中作為輔因子起作用，因?yàn)樵贗Xa因子、鈣和磷脂的存在下，它可加速X因子至Xa因子的轉(zhuǎn)變。盡管它作為單個(gè)多肽鏈被合成，但它在血漿中主要以兩-鏈分子的形式循環(huán)。將FVIII活化成有活性的輔因子需要通過(guò)凝血酶或其它一些蛋白酶的額外的蛋白酶解。血流中VIII因子的存在量或活性的降低會(huì)導(dǎo)致A型血友病。VIII因子活性降低的水平與疾病的嚴(yán)重程度直接成比例。目前的A型血友病療法就是用得自血漿的或重組的VIII因子重新替換缺失的蛋白質(zhì)(即所謂的FVIII替代或替換療法)。
凝結(jié)因子缺乏(例如FVIII缺乏)反映了不同類型的基因缺損。當(dāng)基因損害較嚴(yán)重時(shí)，例如存在缺失或移碼時(shí)，無(wú)法產(chǎn)生mRNA，會(huì)導(dǎo)致凝結(jié)因子(嚴(yán)重)缺乏。由例如非關(guān)鍵位置的點(diǎn)突變引起的較輕的基因損害導(dǎo)致生物活性有所降低的蛋白質(zhì)的分泌。遺傳模式是隱性的和X-連鎖的，這意味著只有具有一個(gè)X-染色體的男人才會(huì)受影響。凝結(jié)缺損的嚴(yán)重性可以是輕度或重度。嚴(yán)重性取決于血漿中正常起作用的VIII因子的濃度。替換療法的目的是將患者的凝血因子活性水平(下文稱之為“因子水平”)升高至能恢復(fù)止血的水平，并且能維持該水平直至實(shí)質(zhì)上完全愈合。如果有效治療開始得晚，將有損于傷口愈合，并且需要比平常更多的治療。治療的量取決于止血所需凝結(jié)因子的血漿濃度，血液的重獲和轉(zhuǎn)輸物質(zhì)的半壽期。
在一些基因缺損為雜合型的受試者(例如身為疾病載體的女人)中，VIII因子的水平也可能會(huì)或多或少地降低。此類受試者出血的傾向性增加，與病情輕微的血友病患者差不多，因此，也可以對(duì)其進(jìn)行治療。
一些接受VIII因子替換療法的患者(患有A型血友病)產(chǎn)生了抗施用的VIII因子的抗體。然而，出生時(shí)VIII因子水平正常的人(未患有先天性的VIII因子-缺乏癥)在以后的日子里會(huì)因不明原因產(chǎn)生抗VIII因子的自身抗體(獲得性A型血友病)。在這兩種情況下，抗體可以以低、適中或高滴度存在。對(duì)于具有低或適中抑制劑-滴度的患者而言，有時(shí)可以用VIII因子進(jìn)行治療。
血友病以各種各樣的嚴(yán)重程度出現(xiàn)。檢測(cè)不到VIII因子或VIII因子低于1％的患者通常病情嚴(yán)重，微小的創(chuàng)傷會(huì)導(dǎo)致血液流入肌肉和關(guān)節(jié)，有時(shí)明顯是自發(fā)性出血。少量VIII因子能提供相當(dāng)大的保護(hù)作用，通常會(huì)使VIII因子為正常水平的1-5％的患者僅在創(chuàng)傷后出血，而且血液流入肌肉和關(guān)節(jié)的情況也不嚴(yán)重等，通常認(rèn)為患者病情為中度。VIII因子超過(guò)5％的患者通常僅在大的創(chuàng)傷或手術(shù)后出血，可以認(rèn)為患者病情較輕。必須認(rèn)識(shí)到對(duì)個(gè)別的病例而言，上述分類并不總是正確的。一些VIII因子水平很低的患者很少出血，而另一些VIII因子超過(guò)5％的患者卻會(huì)反復(fù)出血，血液流入起初因創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)積血而受損的“靶關(guān)節(jié)”中，看上去病情較嚴(yán)重。然而，一般說(shuō)來(lái)，因子水平越高，出血癥狀越不明顯，VIII因子水平超過(guò)正常水平的35-40％時(shí)，一般不會(huì)出現(xiàn)異常出血。下文顯示了因子水平和A型血友病癥狀之間的一般性關(guān)系。
與VIII因子水平相關(guān)的血友病嚴(yán)重程度嚴(yán)重程度 因子水平(為正常水平的％) 表現(xiàn)類型重度 0-1 明顯自發(fā)性出血。嚴(yán)重出血中度 1-5 出血較少。關(guān)節(jié)積血主要為創(chuàng)傷性出血輕度 5-30 創(chuàng)傷后、手術(shù)后、拔牙后出血。較少發(fā)作目前的A型血友病療法就是用得自血漿的或重組的VIII因子替換缺失的蛋白質(zhì)。使用VIII因子產(chǎn)品進(jìn)行靜脈內(nèi)輸注(用于注射)以緊急治療急性出血。出血類型分類如下1.關(guān)節(jié)積血(關(guān)節(jié)中出血)2.威脅生命和四肢的出血(腹膜后出血、CNS出血、咽后出血、伴有隔間綜合征的肌肉出血和大量GI出血)3與手術(shù)(矯形、選擇操作、緊急手術(shù))有關(guān)的出血預(yù)防經(jīng)驗(yàn)表明如果VIII因子水平維持在超過(guò)正常水平的30-40％，直至完全愈合的話，通常即可維持正常的止血。然而，其它考慮也是至關(guān)重要的。腹部手術(shù)后受影響部位(如積血關(guān)節(jié))的移動(dòng)、咳嗽或走動(dòng)可促進(jìn)出血。自然療法或操作法需要相當(dāng)高的水平，而固定輕微損害能以相對(duì)低的因子水平控制出血。在不同情況下欲達(dá)到的靶水平大致如下所示治療標(biāo)準(zhǔn)型關(guān)節(jié)積血(第1類)正常的目的是使VIII因子的起始血漿濃度達(dá)到正常水平的至少30-40％，接著，使血漿濃度為正常水平的至少10-20％達(dá)2至3天。
治療威脅生命和四肢的出血(第2類)
正常的目的是使VIII因子的起始血漿濃度達(dá)到正常水平的至少50％，接著，使血漿濃度為正常水平的至少20％達(dá)1周。
與手術(shù)有關(guān)的預(yù)防出血(第3類)正常的目的是使手術(shù)當(dāng)天的VIII因子血漿濃度達(dá)到正常水平的至少60-100％，接著，從第2至第7天，使血漿濃度為正常水平的至少30-40％，再將血漿濃度持續(xù)保持為正常水平的至少10-20％達(dá)1至2周。
根據(jù)上述治療方針，以下可以說(shuō)是與出血類型有關(guān)的VIII因子注射次數(shù)。
VIII因子的平均血漿半壽期為10-12小時(shí)，在臨床實(shí)踐中，每次出血發(fā)作通常使用的VIII因子平均注射次數(shù)如下關(guān)節(jié)積血(關(guān)節(jié)中出血)家庭治療，輕微關(guān)節(jié)積血1-3次注射；醫(yī)院治療，較嚴(yán)重的關(guān)節(jié)積血6-14次注射。
威脅生命和四肢的出血10-20次注射。
與手術(shù)有關(guān)的出血預(yù)防30-40次注射。
在血友病的臨床治療中，目前使用FVIIa制止具有FVIII或FIX抑制劑(能妨礙替換療法)的患者出血。然而，由于預(yù)期VIIa因子比VIII因子短的半壽期(2.5小時(shí)10-12小時(shí))可能需要更頻繁的VIIa因子注射才能維持某一水平的止血能力，因此，臨床醫(yī)生一般不使用FVIIa作為不含抑制劑的血友病患者(分別可以使用FVIII或FIX對(duì)其進(jìn)行治療)的一線治療藥物。
歐洲專利號(hào)225.160(Novo Nordisk)涉及FVIIa組合物以及治療不是由凝結(jié)因子缺乏或凝結(jié)因子抑制劑引起的出血紊亂的方法。
歐洲專利號(hào)82.182(Baxter Travenol Lab.)涉及可用于對(duì)抗受試者的血液凝結(jié)因子缺乏或血液凝結(jié)因子抑制劑的作用的VIIa因子組合物。
Lusher等，Haemophilia，1998，4，pp.790-798涉及施用重組VIIa因子以治療含和不含抑制劑的A型和B型血友病患者的關(guān)節(jié)、肌肉和粘膜出血。
Kjalke等，Thrombosis and Haemostasis，1999(Suppl)，0951涉及施用額外的外源性FVIIa，及其在模擬A型或B型血友病的模型系統(tǒng)中，對(duì)活化的血小板表面的凝血酶形成的作用。
美國(guó)專利號(hào)5891,843(Immuno)涉及與具有FEIB-活性的第二種成分，如活化的凝血酶原復(fù)合物或FEIBA制品混合的FVIIa組合物。
目前，治療血友病所用的很多VIII因子產(chǎn)品含有重組產(chǎn)生的VIII因子。然而，所述產(chǎn)品也可以分離自人或豬血漿。這些純化的產(chǎn)品經(jīng)常含有較少量的其它凝結(jié)因子或其它的血漿成分。通常，所述其它的血漿成分是不必要的(因?yàn)榇嬖诓《靖腥净蚱渌廴镜娘L(fēng)險(xiǎn))，據(jù)認(rèn)為，用重組蛋白質(zhì)(例如VIIa因子)部分替代這種產(chǎn)品可以改善組合物和治療，并且有利于患者。
目前，一般在止血之前幾次注射或輸注VIII因子來(lái)治療經(jīng)受出血發(fā)作的、VIII因子水平降低的受試者(例如A型血友病患者)。此外，需要多次注射以維持止血直至導(dǎo)致出血的傷口完全愈合。
一般用大輸注量的液體，如靜脈內(nèi)(i.v.)用的液體、注射膠體輸注產(chǎn)品、白蛋白、紅血細(xì)胞濃縮物等來(lái)治療出血過(guò)多的創(chuàng)傷受害者。需要大量輸血的過(guò)量出血可導(dǎo)致產(chǎn)生多器官衰竭，包括肺和腎功能受損。
較快地停止出血對(duì)這些受試者而言有著重要的益處。所以要減少停止出血并維持止血所需的注射次數(shù)和或減少停止出血并維持止血所用的凝結(jié)蛋白質(zhì)的量。
在本領(lǐng)域中，仍需改善對(duì)經(jīng)受出血發(fā)作的受試者，包括因凝結(jié)因子VIII的水平降低而導(dǎo)致出血發(fā)作的受試者的治療。本領(lǐng)域仍需要改善的、可靠的和應(yīng)用廣泛的方法，用于增強(qiáng)凝結(jié)、增強(qiáng)或確保穩(wěn)定止血栓形成、提高對(duì)所治療的受試者的便利性、或使受試者，特別是凝血酶產(chǎn)生受損的受試者獲得完全或充分止血。仍需要獲得完全或充分止血所需的FVIIa的量或FVIII的量有所減少的方法。還需要獲得完全或充分止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的總量有所減少的方法，和停止出血所需的時(shí)間縮短的方法。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供組合物，所述組合物可有效用于治療或預(yù)防出血發(fā)作和凝結(jié)紊亂。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供單一劑量形式的組合物，所述組合物可有效用于治療或預(yù)防出血發(fā)作或用作前促凝劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供表現(xiàn)出協(xié)同作用的組合物、治療方法或試劑盒。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供基本上不表現(xiàn)出副作用，如凝結(jié)系統(tǒng)高水平的全身性活化的組合物、治療方法或試劑盒。
通過(guò)閱讀本說(shuō)明書的描述，本發(fā)明的其它目的是顯而易見的。
第一方面，本發(fā)明涉及含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的藥物組合物。
第二方面，本發(fā)明涉及含有治療出血發(fā)作的藥物的、由多部分組成的試劑盒，其含有a)以第一種單位劑量形式存在的、有效量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和藥物可接受載體；b)以第二種單位劑量形式存在的、有效量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品和藥物可接受載體；和c)含有所述第一和第二種劑量形式的容器裝置。
另一方面，本發(fā)明涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合物用于制備治療受試者出血發(fā)作的藥物的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合物用于制備縮短凝血時(shí)間的藥物的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合物用于制備延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間的藥物的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合物用于制備增加血塊強(qiáng)度的藥物的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及治療受試者的出血發(fā)作的方法，所述方法包括給需要治療的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效治療出血。
另一方面，本發(fā)明涉及縮短受試者的凝血時(shí)間的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效縮短凝血時(shí)間。
另一方面，本發(fā)明涉及增強(qiáng)受試者止血能力的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)止血。
另一方面，本發(fā)明涉及減少使受試者停止出血并維持止血所需凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥次數(shù)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效停止出血和維持止血。
另一方面，本發(fā)明涉及減少使受試者停止出血并維持止血所需凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥量的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效停止出血和維持止血。
另一方面，本發(fā)明涉及使受試者的血塊裂解時(shí)間延長(zhǎng)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間。
另一方面，本發(fā)明涉及增加受試者的血塊強(qiáng)度的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增加血塊強(qiáng)度。
另一方面，本發(fā)明涉及增強(qiáng)受試者的血纖蛋白塊形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)血纖蛋白塊形成。
另一方面，本發(fā)明涉及含有治療出血發(fā)作的藥物的、由多部分組成的試劑盒，其含有a)以一個(gè)單位劑量形式存在的、有效量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和有效量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品和藥物可接受載體；和b)含有所述一個(gè)單位劑量形式的容器裝置。
在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子-相關(guān)多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子多肽。在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，所述VII因子-相關(guān)多肽是VII因子氨基酸序列變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)按照本說(shuō)明書中描述的“體外水解試驗(yàn)”檢測(cè)時(shí)，VII因子-相關(guān)多肽的活性與天然人VIIa因子(野生型FVIIa)的活性之間的比率至少約為1.25。
在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子是人VII因子。在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子是牛、豬、犬、馬、鼠或鮭魚的VII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子多肽是重組VII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子多肽是得自血漿的VII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子多肽是得自血漿的人VII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子多肽是重組人VII因子。在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽為其活化形式。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子多肽是重組人VIIa因子。
在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子-相關(guān)多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子氨基酸序列變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)按照本說(shuō)明書中描述的“生色試驗(yàn)”檢測(cè)時(shí)，VIII因子-相關(guān)多肽的活性與天然人VIII因子(野生型FVIII)的活性之間的比率至少約為1.25。在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子是人VIII因子。在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子是牛、豬、犬、馬、鼠或鮭魚的VIII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子多肽是重組的VIII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子多肽是得自血漿的VIII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子多肽是得自血漿的人VIII因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子多肽是重組人VIII因子。在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽為其活化形式。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽以質(zhì)量比約為100∶1至1∶100VII因子∶VIII因子的比率存在。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子-相關(guān)多肽是氨基酸序列變體，與野生型VII因子(即具有美國(guó)專利號(hào)4,784,950中公開的氨基酸序列的多肽)相比，所述變體有不超過(guò)20個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入；在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIIa因子變體有不超過(guò)15個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入；在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子變體有不超過(guò)10個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入；在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子變體有不超過(guò)8個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入；在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子變體有不超過(guò)6個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入；在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子變體有不超過(guò)5個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入；在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子變體與野生型VII因子相比，有不超過(guò)3個(gè)的氨基酸被取代、缺失或插入。在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子變體選自L305-FVIIa，L305V/M306D/D309S-FVIIa，L305I-FVIIa，L305T-FVIIa，F(xiàn)374P-FVIIa，V158T/M298Q-FVIIa，V158D/E296V/M298Q-FVIIa，K337A-FVIIa，M298Q-FVIIa，V158D/M298Q-FVIIa，L305V/K337A-FVIIa，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVIIa，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVIIa，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVIIa，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII和S336G-FVII。
另一方面，與天然人凝結(jié)因子VIIa相比，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽具有增加的不依賴于組織因子的活性。另一方面，增加的活性并不伴隨著底物特異性的改變。在本發(fā)明的另一方面，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽與組織因子的結(jié)合應(yīng)該未受損害，當(dāng)與組織因子結(jié)合時(shí)，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽應(yīng)該至少具有野生型VIIa因子的活性。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是重組人VIIa因子和重組人VIII因子。
在一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液的凝血時(shí)間縮短。在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的止血增強(qiáng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的血塊裂解時(shí)間延長(zhǎng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液的血塊強(qiáng)度增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的血纖蛋白塊形成有所增強(qiáng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液是人血液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液是正常的血液；在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液是具有正常水平的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的血液；在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液是具有正常水平的VIII因子的血液；在另一個(gè)實(shí)施方案中，血液是正常的人血液；在另一個(gè)實(shí)施方案中，血液是凝血酶產(chǎn)生受損的受試者的血液。在一個(gè)實(shí)施方案中，血液是缺乏一種或多種凝結(jié)因子的受試者的血液；在另一個(gè)實(shí)施方案中，血液是含有抗一種或多種凝結(jié)因子的抑制劑的受試者的血液。在一個(gè)實(shí)施方案中，血液是血纖蛋白原濃度有所降低的受試者的血液。在一個(gè)實(shí)施方案中，血液是VIII因子-缺乏的人血液。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是所使用的唯一的止血?jiǎng)?。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是所使用的唯一有活性的止血?jiǎng)?。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是所使用的唯一的凝結(jié)因子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是所使用的唯一有活性的藥劑。本文所用的“唯一的”藥劑或因子指的是以下情況，其中VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽合起來(lái)是藥物組合物或試劑盒中所含的、可以使用的僅有的止血?jiǎng)?、有活性的止血?jiǎng)┗蚰Y(jié)因子，或是在特定療程，如特定出血發(fā)作療程中可用于給患者施用的僅有的止血?jiǎng)⒂谢钚缘闹寡獎(jiǎng)┗蚰Y(jié)因子。應(yīng)理解這些情況還包括可使用的其它止血?jiǎng)┗蚰Y(jié)因子不以足以顯著影響一個(gè)或多個(gè)凝結(jié)參數(shù)的量或活性存在的情況。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將藥物組合物配制成供靜脈內(nèi)給藥使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還含有藥物可接受的賦形劑。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是單一劑量形式，其中單一劑量形式含有兩種凝結(jié)因子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物為由多部分組成的試劑盒形式，其含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品作為第一種單位劑量形式，含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品作為第二種單位劑量形式，并含有包含所述第一和第二種劑量形式的容器裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用的組合物或試劑盒還分別含有施用組合物或獨(dú)立組分的說(shuō)明。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以單一劑量形式施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的第一種單位劑量形式和含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的第二種單位劑量形式施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，同時(shí)施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，依次施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，以不超過(guò)15分鐘，優(yōu)選為10，更優(yōu)選為5，更優(yōu)選為2分鐘的時(shí)間間隔施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，以2小時(shí)，優(yōu)選為1至2小時(shí)，更優(yōu)選為1小時(shí)，更優(yōu)選為30分鐘至1小時(shí)，更優(yōu)選為30分鐘，更優(yōu)選為15至30分鐘的時(shí)間間隔施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽的有效量為約0.05mg/天至約500mg/天(70-kg受試者)。在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的有效量為約0.01mg/天至約500mg/天(70-kg受試者)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽以質(zhì)量比約為100∶1至1∶100VII因子∶VIII因子的比率存在。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物為單一劑量形式，它實(shí)質(zhì)上由VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，以及一種或多種選自藥物可接受賦形劑或載體，穩(wěn)定劑，去污劑，中性鹽，抗氧化劑，防腐劑和蛋白酶抑制劑組成。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，受試者是人；在另一個(gè)實(shí)施方案中，受試者的凝血酶產(chǎn)生受損；在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者的血纖蛋白原的血漿濃度有所降低(例如多次輸血的受試者)；在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者的VIII因子的血漿濃度有所降低。
在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物用于家庭治療。
另一方面，本發(fā)明涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品用于制備藥物的用途，所述藥物可用于治療患有VIII因子-反應(yīng)性綜合征的受試者的出血。
另一方面，本發(fā)明涉及VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品用于制備藥物的用途，所述藥物可用于治療VIII因子水平有所降低的受試者的出血。
另一方面，本發(fā)明涉及與用VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療患有VIII因子反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的止血能力的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)止血。
另一方面，本發(fā)明涉及與用VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療VIII因子水平有所降低的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的止血能力的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)止血。
另一方面，本發(fā)明涉及增強(qiáng)受試者的凝血酶形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)凝血酶形成。
另一方面，本發(fā)明涉及與用VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療患有VIII因子反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的凝血酶形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)凝血酶形成。
另一方面，本發(fā)明涉及與用VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療VIII因子水平有所降低的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的凝血酶形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)凝血酶形成。
另一方面，本發(fā)明涉及與以VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給患有VIII因子反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)所需的給藥次數(shù)相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥次數(shù)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效減少凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥次數(shù)。
另一方面，本發(fā)明涉及與以VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給VIII因子水平有所降低的受試者時(shí)所需的給藥次數(shù)相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥次數(shù)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效減少凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥次數(shù)。
另一方面，本發(fā)明涉及與以VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給患有VIII因子反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)所需的給藥量相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥量的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效減少凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥量。
另一方面，本發(fā)明涉及與以VIII因子作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給VIII因子水平有所降低的受試者時(shí)所需的給藥量相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥量的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效減少凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥量。
另一方面，本發(fā)明涉及治療患有VIII因子反應(yīng)性綜合征的受試者的出血的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效治療出血。
另一方面，本發(fā)明涉及治療VIII因子水平有所降低的受試者的出血的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效治療出血。
在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者具有水平有所降低的VIII因子。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者患有VIII因子反應(yīng)性綜合征。在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子反應(yīng)性綜合征是A型血友病。
在一個(gè)實(shí)施方案中，降低的VIII因子水平為正常水平的90％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子水平為正常水平的80％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為50％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為40％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為30％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為20％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為10％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為5％或以下，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為2％或以下。適當(dāng)時(shí)，術(shù)語(yǔ)可互換使用。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，VIII因子水平為正常水平的30％以下。
另一方面，本發(fā)明涉及治療患有VIII因子反應(yīng)性綜合征的受試者的出血的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效治療出血。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VII因子是人重組VIIa因子(rFVIIa)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，rFVIIa是NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子是人重組VIII因子(rFVIII)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，VIII因子產(chǎn)品是ReFacto(AHP/Genetics Institute)，Alphanate(Alpha)，Bioclate(Aventis)，Monoclate-P(Aventis)，Helixate(Aventis)，Recombinate(Baxter)，Hemofil M(Baxter)，Kogenate (Bayer)，Nordiate(HemaSure)，F(xiàn)ACTEUR VIII-LFB(Laboratoire Francais duFractionnement et des Biotechnologies(LFB))，HyateC(Speywood)和KogenateSF(Bayer)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，將藥物組合物配制成靜脈內(nèi)給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還含有纖溶系統(tǒng)的抑制劑，包括但不限于抑蛋白酶肽、ε-氨基己酸或凝血酸。


圖1圖1顯示了當(dāng)缺乏FVIII的血漿中缺乏和存在FVIII時(shí)，rFVIIa縮短凝血時(shí)間的效果。
圖2圖2顯示了當(dāng)正常人血漿中缺乏和存在FVIII時(shí)，rFVIIa縮短凝血時(shí)間的效果。
發(fā)明詳述與未遭受任何出血的受試者相比，因手術(shù)或嚴(yán)重創(chuàng)傷而出血過(guò)多因此需要輸血的受試者會(huì)產(chǎn)生更多的并發(fā)癥。然而，如果需要施用人血液或血液制品(用于治療凝結(jié)因子缺乏的血小板、白細(xì)胞、得自血漿的濃縮物等)，這會(huì)有轉(zhuǎn)移人病毒(例如肝炎病毒、HIV、細(xì)小病毒或其它迄今為止仍不為人所知的病毒)以及非病毒病原體的風(fēng)險(xiǎn)，因此，中度出血也會(huì)導(dǎo)致并發(fā)癥。需要大量輸血的過(guò)度出血可導(dǎo)致產(chǎn)生多器官衰竭，包括肺和腎功能受損。一旦受試者產(chǎn)生這些嚴(yán)重的并發(fā)癥，就會(huì)引起與多個(gè)細(xì)胞因子和炎性反應(yīng)有關(guān)的級(jí)聯(lián)事件，使得任何治療都變得十分困難，而且不幸地是，所述治療經(jīng)常不能成功。因此，手術(shù)以及治療嚴(yán)重組織損傷的主要目的是避免出血或使出血量最少。為了避免或最少化不合乎需要的出血，重要的是確保形成穩(wěn)定和固體狀的止血栓，所述止血栓不易于被纖溶酶溶解。另外，重要的是確保快速而有效地形成止血栓或血塊。
患有血小板減少癥(血小板的數(shù)目減少或活性降低)的受試者凝血酶產(chǎn)生受損，并且血纖蛋白栓的穩(wěn)定性較差，導(dǎo)致止血栓易于過(guò)早溶解。另外，遭受嚴(yán)重創(chuàng)傷或器官損害，因此需頻繁輸血的受試者的血小板數(shù)目降低，血纖蛋白原、VIII因子和其它凝結(jié)蛋白的水平也會(huì)降低。這些受試者的凝血酶產(chǎn)生受損(或減少)。因此，這些受試者的止血功能有缺陷，或止血效果較差，導(dǎo)致形成易于過(guò)早被蛋白酶溶解的血纖蛋白栓，在以深度創(chuàng)傷和器官損害為特征的情況下，所述酶還會(huì)大量釋放。
遭遇大量失血的患者在臨床上不穩(wěn)定。所述患者有遭受心房纖維性顫動(dòng)的風(fēng)險(xiǎn)，這會(huì)導(dǎo)致心臟活性的致命性停止；腎功能受損；或肺部液體外滲(所謂的“濕肺”或ARDS)。
組織出血也可導(dǎo)致血腫的形成。(特別是頭內(nèi)和脊髓)血腫的大小與神經(jīng)功能喪失的程度、康復(fù)困難、和/或康復(fù)后的永久性神經(jīng)功能損傷的嚴(yán)重性和程度密切相關(guān)。當(dāng)血腫位于腦部時(shí)，結(jié)果最為嚴(yán)重，甚至?xí)?dǎo)致患者死亡。所謂的區(qū)室綜合征是由體內(nèi)嚴(yán)重出血流至四肢而導(dǎo)致的臨床病癥。在胳膊和腿中，肌肉和骨的外部受被稱為筋膜的幾乎無(wú)彈性的膠原層束縛。受筋膜束縛的腔隙出血導(dǎo)致該區(qū)室的壓力增加，繼而壓迫神經(jīng)、血管和肌肉組織，如果得不到及時(shí)治療即會(huì)導(dǎo)致大面積組織壞死。壞死組織一旦形成，即會(huì)在治愈過(guò)程中在很大程度上轉(zhuǎn)化至與原先的肌肉組織相比有所收縮的結(jié)締組織。這種攣縮使受試者受影響關(guān)節(jié)易于遭受運(yùn)動(dòng)性損害，又會(huì)需要矯正手術(shù)。嚴(yán)重血腫還會(huì)導(dǎo)致假囊腫形成，假囊腫看上去象良性腫瘤，因?yàn)檫@種腫瘤樣囊腫侵蝕受影響的肌肉或骨組織。需要進(jìn)行手術(shù)以除去這種假囊腫。
血腫的形成還增加了受試者被感染的頻率。輸入血液制品，如紅血細(xì)胞也是如此。輸入紅血細(xì)胞導(dǎo)致在受試者體內(nèi)形成抗體的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)已形成抗血型抗原的抗體時(shí)，就很難給受試者輸血，因?yàn)閷ふ液线m血型的難度將會(huì)不斷增加。
因此，治療出血的主要目的是以最短的時(shí)間達(dá)到止血，從而使血液的損失最少。
因此，本發(fā)明提供了用于給需要治療的受試者治療出血發(fā)作的有益的組合物、用途和方法。所述組合物、用途和方法與有益的效果有關(guān)，例如在止血之前血液損失較小，手術(shù)過(guò)程中需要的血液較少，能將血壓維持在可接受的水平直至止血，血壓能較快地穩(wěn)定下來(lái)，經(jīng)治療患者的恢復(fù)時(shí)間較短，經(jīng)治療患者的康復(fù)時(shí)間較短，減少血腫形成或形成較小的血腫，包括腦部血腫，較少形成假囊腫，較少形成肌肉攣縮，較快停止出血，停止出血并維持止血所需的注射次數(shù)減少，停止出血并維持止血所用凝結(jié)蛋白的量減少。
與單獨(dú)施用VIIa因子或VIII因子時(shí)的凝血時(shí)間相比，聯(lián)合施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽，如VIIa因子制品與VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品提供了較短的凝血時(shí)間。
與單獨(dú)施用VIIa因子或VIII因子時(shí)的蛋白質(zhì)用量相比，聯(lián)合施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽，如VIIa因子制品與VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品使需要這種治療的受試者停止出血并維持止血所用凝結(jié)因子的總量減少。
與單獨(dú)施用VIIa因子或VIII因子時(shí)的情況相比，聯(lián)合施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽，如VIIa因子制品與VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品使停止出血所需的時(shí)間縮短，并使維持止血所需的注射次數(shù)減少。與單獨(dú)施用VIII因子或VIIa因子時(shí)的情況相比，聯(lián)合施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽，如VIIa因子制品與VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品使確保完全止血所需的注射次數(shù)減少。
對(duì)于患有A型血友病的患者而言，本發(fā)明提供了同時(shí)或依次服用VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品和VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的有益效果。凝結(jié)因子VIII代用品和VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品都可以在這些患者群體中誘導(dǎo)止血，但它們具有不同的生化作用機(jī)制。同時(shí)服藥可增加止血效果。
本發(fā)明提供了藥物組合物，其為含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合物。該組合物可以是單一組合物的形式，也可以是多-組分試劑盒(由多部分組成的試劑盒)的形式。本發(fā)明的組合物可用作哺乳動(dòng)物，包括靈長(zhǎng)類動(dòng)物如人的治療和預(yù)防性前止血?jiǎng)１景l(fā)明還提供了治療(包括預(yù)防性治療或預(yù)防)受試者，包括人的出血發(fā)作的方法。
不論何時(shí)，本說(shuō)明書上下文中提及的第一或第二或第三等單位劑量都不表示給藥的優(yōu)選次序，這樣做僅是為方便表述而已。
VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合是有利的產(chǎn)品，它能確保較短的凝血時(shí)間和止血栓的快速形成。本發(fā)明人將會(huì)證明與單獨(dú)施用VIIa因子或VIII因子相比，聯(lián)合施用VIIa因子和VIII因子可更加有效地縮短正常人血漿的凝血時(shí)間。因此，通過(guò)縮短凝血時(shí)間，即可獲得更加有效的治療受試者出血的方法。另外，可以用總量較少的VII因子和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽來(lái)治療患者。
VII因子多肽在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，可以使用任何能有效預(yù)防或治療出血的VII因子多肽。包括得自血液或血漿的、或通過(guò)重組方法產(chǎn)生的VII因子多肽。
本發(fā)明包括VII因子多肽，例如具有美國(guó)專利號(hào)4784950所公開的氨基酸序列的VII因子多肽(野生型人VII因子)。在一些實(shí)施方案中，VII因子多肽是公開于例如美國(guó)專利號(hào)4784950中的人VIIa因子(野生型VII因子)。在一系列實(shí)施方案中，VII因子多肽包括表現(xiàn)出至少約10％，優(yōu)選至少約30％，更優(yōu)選至少約50％，最優(yōu)選至少約70％人VIIa因子特定生物活性的多肽。在一系列實(shí)施方案中，VII因子多肽包括表現(xiàn)出至少約90％，優(yōu)選至少約100％，優(yōu)選至少約120％，更優(yōu)選至少約140％，最優(yōu)選至少約160％人VIIa因子特定生物活性的多肽。在一系列實(shí)施方案中，VII因子多肽包括與美國(guó)專利號(hào)4784950中公開的野生型VII因子序列至少約70％，優(yōu)選至少約80％，更優(yōu)選至少約90％，最優(yōu)選至少約95％相同的多肽。
本文所用“VII因子多肽”包括但不限于VII因子以及VII因子-相關(guān)多肽。術(shù)語(yǔ)“VII因子”欲包括但不限于具有野生型人VII因子(公開于美國(guó)專利號(hào)4784950)以及得自其它物種的野生型VII因子，如牛、豬、犬、鼠和鮭魚VII因子的氨基酸序列1-406的多肽，所述VII因子得自血液或血漿，或是通過(guò)重組方法產(chǎn)生的。VII因子還包括可能在不同個(gè)體中出現(xiàn)和產(chǎn)生的VII因子天然等位基因變異體。糖基化或其它翻譯后修飾的水平和位置隨著所選擇的宿主細(xì)胞和宿主細(xì)胞環(huán)境特性的不同而不同。術(shù)語(yǔ)“VII因子”也欲包括未裂解(酶原)形式的VII因子多肽，以及經(jīng)蛋白酶解加工，產(chǎn)生其各自的生物活性形式(被稱為VIIa因子)的VII因子多肽。VII因子一般在殘基152和153之間被裂解，產(chǎn)生VIIa因子。
“VII因子-相關(guān)多肽”包括但不限于相對(duì)于人VII因子而言已被化學(xué)修飾和/或相對(duì)于人VII因子而言含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列改變(即VII因子變體)，和/或相對(duì)于人VII因子而言含有截短的氨基酸序列(即VII因子片段)的VII因子多肽。所述VII因子-相關(guān)多肽可表現(xiàn)出不同于人VII因子的特性，包括穩(wěn)定性、磷脂結(jié)合、改變的比活性等。術(shù)語(yǔ)“VII因子-相關(guān)多肽”欲包括未裂解(酶原)形式的多肽，以及經(jīng)蛋白酶解加工，產(chǎn)生其各自的生物活性形式(被稱為“VIIa因子-相關(guān)多肽”或“活化的VII因子-相關(guān)多肽”)的多肽。
本文所用“VII因子-相關(guān)多肽”包括但不限于相對(duì)于野生型人VII因子而言，表現(xiàn)出基本上相同或有所改良的生物活性的多肽，以及相對(duì)于野生型人VIIa因子的活性而言，VIIa因子生物活性實(shí)質(zhì)上被修飾或降低的多肽。這些多肽包括但不限于經(jīng)化學(xué)修飾的VII因子或VIIa因子以及導(dǎo)入了特定的氨基酸序列改變的VII因子變體，所述改變可修飾或破壞多肽的生物活性。
所述多肽還包括氨基酸序列略有修飾的多肽，例如具有經(jīng)修飾的N-末端，包括N-末端氨基酸缺失或添加的多肽，和/或相對(duì)于人VIIa因子而言已被化學(xué)修飾的多肽。
VII因子-相關(guān)多肽，包括VII因子變體，無(wú)論其與野生型VII因子相比，表現(xiàn)出基本上相同或更好的生物活性，還是相對(duì)于野生型VII因子而言表現(xiàn)出實(shí)質(zhì)上被修飾或降低的生物活性，都包括但不限于因一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入、缺失或取代而具有不同于野生型VII因子序列的氨基酸序列的多肽。
VII因子-相關(guān)多肽，包括變體包括那些經(jīng)上文所述的一個(gè)或多個(gè)凝血試驗(yàn)、蛋白酶解試驗(yàn)或TF結(jié)合試驗(yàn)檢測(cè)，可表現(xiàn)出至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約75％，至少約80％，至少約90％，至少約100％，至少約110％，至少約120％，或至少約130％在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型VIIa因子的比活性的多肽。
相對(duì)于野生型VIIa因子而言，具有基本上相同或有所改良的生物活性的VII因子-相關(guān)多肽，包括變體包括那些經(jīng)上文所述的一個(gè)或多個(gè)凝血試驗(yàn)、蛋白酶解試驗(yàn)或TF結(jié)合試驗(yàn)檢測(cè)，可表現(xiàn)出至少約25％，優(yōu)選至少約50％，更優(yōu)選至少約75％，更優(yōu)選至少約100％，更優(yōu)選至少約110％，更優(yōu)選至少約120％，最優(yōu)選至少約130％在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型VIIa因子的比活性的多肽。
相對(duì)于野生型VIIa因子而言，具有實(shí)質(zhì)上有所降低的生物活性的VII因子-相關(guān)多肽，包括變體包括那些經(jīng)上文所述的一個(gè)或多個(gè)凝血試驗(yàn)、蛋白酶解試驗(yàn)或TF結(jié)合試驗(yàn)檢測(cè)，可表現(xiàn)出低于約25％，優(yōu)選低于約10％，更優(yōu)選低于約5％，最優(yōu)選低于約1％在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型VIIa因子的比活性的多肽。相對(duì)于野生型VII因子而言，具有實(shí)質(zhì)上被修飾的生物活性的VII因子變體包括但不限于表現(xiàn)出不依賴于TF的X因子蛋白酶解活性的VII因子變體，和與TF結(jié)合但不裂解X因子的VII因子變體。
在一些實(shí)施方案中，VII因子多肽是VII因子-相關(guān)多肽，特別是變體，其中，當(dāng)在“體外水解試驗(yàn)”(參見下文“試驗(yàn)”)中檢測(cè)時(shí)，所述VII因子多肽活性和天然人VIIa因子(野生型FVIIa)活性之間的比率至少約為1.25；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為2.0；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為4.0。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，VII因子多肽是VII因子-相關(guān)多肽，特別是變體，其中，當(dāng)在“體外水解試驗(yàn)”(參見下文“試驗(yàn)”)中檢測(cè)時(shí)，所述VII因子多肽活性和天然人VIIa因子(野生型FVIIa)活性之間的比率至少約為1.25；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為2.0；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為4.0；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為8.0。
在一些實(shí)施方案中，VII因子多肽是公開于例如美國(guó)專利號(hào)4784950中的人VII因子(野生型VII因子)。在一些實(shí)施方案中，VII因子多肽是人VIIa因子。在一系列實(shí)施方案中，VII因子多肽是表現(xiàn)出至少約10％，優(yōu)選至少約30％，更優(yōu)選至少約50％，最優(yōu)選至少約70％人VIIa因子特定生物活性的VII因子-相關(guān)多肽。在一些實(shí)施方案中，VII因子多肽具有因一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入、缺失或取代而不同于野生型VII因子序列的氨基酸序列。
與野生型VII因子相比，具有基本上相同或有所改良的生物活性的VII因子變體的非限制性例子包括S52A-FVII，S60A-FVII(Iino等，Arch.Biochem.Biophys.352182-192，1998)；L305-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F(xiàn)374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII和S336G-FVII；美國(guó)專利號(hào)5580560中公開的表現(xiàn)出增加的蛋白酶解穩(wěn)定性的FVIIa變體；在殘基290和291之間或殘基315和316之間被蛋白酶裂解的VIIa因子(Mollerup等，Biotechnol.Bioeng.48501-505，1995)；和VIIa因子的氧化形式(Kornfelt等，Arch.Biochem.Biophys.36343-54，1999)。相對(duì)于野生型VII因子而言，具有實(shí)質(zhì)上降低或經(jīng)修飾的生物活性的VII因子變體的非限制性例子包括R152E-FVIIa(Wildgoose等，Biochem 293413-3420，1990)，S344A-FVIIa(Kazama等，J.Biol.Chem.27066-72，1995)，F(xiàn)FR-FVIIa(Holst等，Eur.J.Vasc.Endovasc.Surg.15515-520，1998)，和缺乏Gla結(jié)構(gòu)域的VIIa因子(Nicolaisen等，F(xiàn)EBS Letts.3 17245-249，1993)。經(jīng)化學(xué)修飾的VII因子多肽和序列變體的非限制性例子描述于例如美國(guó)專利號(hào)5997864。
VIIa因子在凝血中的生物活性源自其(i)結(jié)合組織因子(TF)的能力和(ii)催化蛋白酶裂解IX因子或X因子以產(chǎn)生活化的IX因子或X因子(分別為IXa或Xa因子)的能力。
為了本發(fā)明的目的，通過(guò)按照美國(guó)專利號(hào)5997864所述，使用缺乏VII因子的血漿和促凝血酶原激酶測(cè)定制品促進(jìn)凝血的能力，可以定量測(cè)定VII因子多肽的生物活性(“VII因子生物活性”)。在此試驗(yàn)中，生物活性被表示為相對(duì)于對(duì)照樣品而言，凝血時(shí)間的減少，通過(guò)與含有1個(gè)單位/ml VII因子活性的集中的人血清標(biāo)準(zhǔn)比較，將所述生物活性轉(zhuǎn)化為“VII因子單位”?；蛘撸ㄟ^(guò)下述方法定量測(cè)定VIIa因子的生物活性(i)在含有包埋于脂質(zhì)膜的TF和X因子的系統(tǒng)中，測(cè)定VIIa因子或VIIa因子-相關(guān)多肽產(chǎn)生活化的X因子(Xa因子)的能力(Persson等，J.Biol.Chem.27219919-19924，1997)；(ii)在含水系統(tǒng)中測(cè)定X因子水解(參見下文的“體外水解試驗(yàn)”)；(iii)使用基于表面胞質(zhì)基因組共振的儀器測(cè)定VIIa因子或VIIa因子-相關(guān)多肽與TF的物理結(jié)合(Persson，F(xiàn)EBS Letts.413359-363，1997)；和(v)測(cè)定VIIa因子和/或VIIa因子-相關(guān)多肽對(duì)合成底物的水解(參見下文的“體外水解試驗(yàn)”)；和(v)在不依賴于TF的體外系統(tǒng)中測(cè)定凝血酶的產(chǎn)生。
術(shù)語(yǔ)“VII因子生物活性”或“VII因子活性”欲包括產(chǎn)生凝血酶的能力；該術(shù)語(yǔ)還包括在缺乏組織因子時(shí)，在活化的血小板表面產(chǎn)生凝血酶的能力。
本發(fā)明可以使用的VIIa因子制品是，但不限于NovoSeven(NovoNordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)。
VIII因子多肽本發(fā)明包括VIII因子多肽，例如具有公開于例如Toole等，Nature 1984；312342-347的氨基酸序列(野生型人VIII因子)的VIII因子多肽。
在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，可以使用任何能有效預(yù)防或治療出血的VIII因子多肽。其包括得自血液或血漿，或通過(guò)重組方法產(chǎn)生的VIII因子多肽。
本文所用“VIII因子多肽”包括但不限于VIII因子以及VIII因子-相關(guān)多肽。術(shù)語(yǔ)“VIII因子”欲包括但不限于具有Toole等，Nature 1984(見上文)所述氨基酸序列(野生型人VIII因子)的多肽，以及得自其它物種的野生型VIII因子，例如牛、豬、犬、鼠和鮭魚VIII因子。還包括可能在不同個(gè)體中出現(xiàn)和產(chǎn)生的VIII因子天然等位基因變異體。糖基化或其它翻譯后修飾的水平和位置隨著所選擇的宿主細(xì)胞和宿主細(xì)胞環(huán)境特性的不同而不同。術(shù)語(yǔ)“VIII因子”也欲包括未裂解(酶原)形式的VIII因子多肽，以及經(jīng)蛋白酶解加工，產(chǎn)生其各自的生物活性形式(被稱為VIIIa因子)的VIII因子多肽。
“VIII因子-相關(guān)多肽”包括但不限于相對(duì)于人VIII因子而言已被化學(xué)修飾和/或相對(duì)于人VIII因子而言含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列改變(即VIII因子變體)，和/或相對(duì)于人VIII因子而言含有截短的氨基酸序列(即VIII因子片段)的VIII因子多肽。所述VIII因子-相關(guān)多肽可表現(xiàn)出不同于人VIII因子的特性，包括穩(wěn)定性、磷脂結(jié)合、改變的比活性等。術(shù)語(yǔ)“VIII因子-相關(guān)多肽”欲包括未裂解(酶原)形式的多肽，以及經(jīng)蛋白酶解加工，產(chǎn)生其各自的生物活性形式(被稱為“VIIIa因子-相關(guān)多肽”或“活化的VIII因子-相關(guān)多肽”)的多肽。
本文所用“VIII因子-相關(guān)多肽”包括但不限于相對(duì)于野生型人VIII因子而言，表現(xiàn)出基本上相同或有所改良的生物活性的多肽，以及相對(duì)于野生型人VIII因子的活性而言，VIII因子生物活性實(shí)質(zhì)上被修飾或降低的多肽。這些多肽包括但不限于經(jīng)化學(xué)修飾的VIII因子或VIIIa因子以及導(dǎo)入了特定的氨基酸序列改變的VIII因子變體，所述改變可修飾或破壞多肽的生物活性。
所述多肽還包括氨基酸序列略有修飾的多肽，例如具有經(jīng)修飾的N-末端，包括N-末端氨基酸缺失或添加的多肽，和/或相對(duì)于人VIII因子而言已被化學(xué)修飾的多肽。
VIII因子-相關(guān)多肽，包括VIII因子變體，無(wú)論其與野生型VIII因子相比，表現(xiàn)出基本上相同或更好的生物活性，還是相對(duì)于野生型VIII因子而言表現(xiàn)出實(shí)質(zhì)上被修飾或降低的生物活性，都包括但不限于因一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入、缺失或取代而具有不同于野生型VIII因子序列的氨基酸序列的多肽。
VIII因子-相關(guān)多肽，包括變體包括那些經(jīng)本文說(shuō)明書所述的VIII因子活性試驗(yàn)檢測(cè)，可表現(xiàn)出至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％，至少約90％，至少約100％，至少約110％，至少約120％，和至少約130％在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型VIII因子的比活性的多肽。
相對(duì)于野生型VIII因子而言，具有基本上相同或有所改良的生物活性的VIII因子-相關(guān)多肽，包括變體包括那些經(jīng)上文所述的一個(gè)或多個(gè)特定的VIII因子活性試驗(yàn)檢測(cè)，可表現(xiàn)出至少約25％，優(yōu)選至少約50％，更優(yōu)選至少約75％，更優(yōu)選至少約100％，更優(yōu)選至少約110％，更優(yōu)選至少約120％，最優(yōu)選至少約130％在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型人VIII因子的特定生物活性的多肽。為了本發(fā)明的目的，可按照本說(shuō)明書下文(“試驗(yàn)部分”)所描述的方法定量測(cè)定VIII因子生物活性。
相對(duì)于野生型VIII因子而言，具有實(shí)質(zhì)上有所降低的生物活性的VIII因子-相關(guān)多肽，包括變體包括那些經(jīng)上文所述的一個(gè)或多個(gè)特定的VIII因子活性試驗(yàn)檢測(cè)，可表現(xiàn)出低于約25％，優(yōu)選低于約10％，更優(yōu)選低于約5％，最優(yōu)選低于約1％在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型VIII因子的比活性的多肽。
VIII因子多肽的非限制性例子包括得自血漿的人VIII因子，其描述于例如Fulcher等；Proc.Acad.Nat.Sci.USA 1982；791648-1652和Rotblat等；Biochemistry 1985；244294-4300，以及得自血漿的豬FVIII，其描述于例如Fass等；Blood 1982；59594-600和Knutson等；Blood 1982；59615-624。
在一些實(shí)施方案中，VIII因子是VIII因子-相關(guān)多肽，其中，當(dāng)在“生色試驗(yàn)”(參見下文)中檢測(cè)時(shí)，所述VIII因子多肽活性和天然人VIII因子(野生型VIII因子)活性之間的比率至少約為1.25；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為2.0；在其它實(shí)施方案中，該比率至少約為4.0。
VIII因子序列變體的非限制性例子描述于例如Lollar等；Blood 2000；95(2)564-568(雜合的豬/人FVIII多肽)和Lollar等；Blood 2001；97(1)169-174。
可商購(gòu)的FVIII產(chǎn)品(所謂的替代產(chǎn)品)得自正常的血漿收集物或經(jīng)基因工程改造的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。通常根據(jù)被定義為比活性(每mg蛋白質(zhì)的凝血因子活性國(guó)際單位數(shù)，IU/mg)的最終純度對(duì)替代產(chǎn)品進(jìn)行分類。中間產(chǎn)品具有相對(duì)較低的比活性(＜50IU/mg)，因?yàn)樗鼈円埠袩o(wú)關(guān)緊要的血漿蛋白質(zhì)，如血纖蛋白原，纖連蛋白和其它非-促凝劑蛋白質(zhì)。高純度(＞50IU/mg)和超高純度(＞3000IU/mg)除了添加有白蛋白作為穩(wěn)定劑外，只含有很少或?qū)嵸|(zhì)上不含其它的血漿蛋白質(zhì)。
本發(fā)明可以使用的商購(gòu)VIII因子產(chǎn)品(濃縮物及制品)的非限制性例子是，但不限于例如AHP/Genetics Institute的ReFacto(B結(jié)構(gòu)域缺失的rFVIII)，Alpha的Alphanate(FVIII)，Aventis的Biocalte(rFVIII)，Aventis的Monoclate-P(VIII因子C)，Aventis的Helixate(rFVIII)，Baxter的Recombinate(rFVIII)，Baxter的Hemofil M(FVIII)，Bayer的Kogenate(rFVIII)，HemaSure的Nordiate(FVIII)，Laboratoire Francais du Fractionnement et desBiotechnologies(LFB)的FACTEUR VIII-LFB(基于人血漿的FVIII)，Speywood的HyateC(豬FVIII)和Bayer的Kogenate SF(用蔗糖配制的rFVIII)。
高和超高活性產(chǎn)品的非限制性例子是Alphanate(Alpha)(低)；ReFacto(AHP/Genetics Institute)，Kogenate SF(Bayer)，Kogenate(Bayer)，Helixate(Aventis)，Recombinate(Baxter)，Monoclate-P(Aventis)，HemofilM(Baxter)(皆為超高純度)。
定義在本發(fā)明的上下文中，按照下表1所示以常規(guī)方式使用氨基酸的三字母或單字母表示法。除非另有說(shuō)明，本文所提及的氨基酸是L-氨基酸。例如，應(yīng)理解K337的第一個(gè)字母表示天然存在于野生型VII因子的所示位置的氨基酸，例如，K337A-FVIIa表示FVII-變體，其中由天然存在于所示位置的單字母密碼K表示的氨基酸被由單字母密碼A表示的氨基酸所取代。
表1氨基酸的簡(jiǎn)稱

術(shù)語(yǔ)“VII因子”或“FVII”可以互換使用。術(shù)語(yǔ)“VIIa因子”或“FVIIa”可以互換使用。術(shù)語(yǔ)“VIII因子”或“FVIII”可以互換使用。
在本發(fā)明的上下文中，“凝血酶產(chǎn)生受損的受試者”指的是不能在活化的血小板表面產(chǎn)生充足凝血酶的受試者，并包括相對(duì)于具有功能完全的正常止血系統(tǒng)，包括具有正常的凝結(jié)因子、血小板和血纖蛋白原量和功能的受試者的凝血酶產(chǎn)生而言，產(chǎn)生的凝血酶較少的受試者，包括但不限于缺乏VIII因子的受試者；血小板數(shù)目減少或血小板功能有缺陷的受試者(例如血小板減少癥或Glanzmann血小板機(jī)能不全或出血過(guò)多的受試者)；凝血酶原、FX或FVII水平下降的受試者；(例如，因創(chuàng)傷或大手術(shù)導(dǎo)致出血過(guò)多而使)幾種凝結(jié)因子水平下降的受試者；和血纖蛋白原的血漿濃度有所降低的受試者(例如多次輸血的受試者)。
術(shù)語(yǔ)“增強(qiáng)止血系統(tǒng)”指的是增強(qiáng)產(chǎn)生凝血酶的能力。術(shù)語(yǔ)“增強(qiáng)止血”欲包括下述情況，即當(dāng)以相同的凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，相對(duì)于分別僅含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的對(duì)照樣品各自的凝血酶產(chǎn)生而言，含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的受試樣品的已測(cè)定的凝血酶產(chǎn)生有所延長(zhǎng)?？梢园凑毡菊f(shuō)明書的凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)中的描述(見“試驗(yàn)部分”)檢測(cè)凝血酶產(chǎn)生。
血塊裂解時(shí)間、血塊強(qiáng)度、血纖蛋白塊形成和凝血時(shí)間是用于檢測(cè)患者止血系統(tǒng)狀況的臨床參數(shù)。以適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔從患者體內(nèi)取血樣，利用例如Meh等，Blood Coagulation & Fibrinolysis 2001；12627-637；Vig等，Hematology，Vol.6(3)pp.205-213(2001)；Vig等，Blood Coagulation &Fibrinolysis，Vol.12(7)pp.555-561(2001)Oct；Glidden等，Clinical and appliedthrombosis/hemostasis，Vol.6(4)pp.226-233(2000)Oct；McKenzie等，Cardiology，Vol.92(4)pp.240-247(1999)Apr；或Davis等，Journal of theAmerican Society of Nephrology，Vol.6(4)pp.1250-1255(1995)所述的凝血彈性描記法檢測(cè)一個(gè)或多個(gè)參數(shù)。
術(shù)語(yǔ)“延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間”欲包括下述情況，即當(dāng)以相同的血塊裂解試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，相對(duì)于分別僅含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的對(duì)照樣品各自的血塊裂解時(shí)間而言，含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的受試樣品的已測(cè)定的血塊裂解時(shí)間有所延長(zhǎng)?？梢园瓷鲜鰴z測(cè)血塊裂解時(shí)間。
術(shù)語(yǔ)“增加血塊強(qiáng)度”欲包括下述情況，即當(dāng)以相同的血塊強(qiáng)度試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，相對(duì)于分別僅含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的對(duì)照樣品各自的血塊裂解時(shí)間而言，含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的受試樣品的已測(cè)定的血塊強(qiáng)度，例如機(jī)械強(qiáng)度有所增加?？梢园凑绽鏑arr等，1991.(Carr ME，Zekert SL.Measurement of platelet-mediated fbrce developmentduring plasma clot formation.AM J MED SCI 1991；30213-8)所述，或按上述通過(guò)凝血彈性描記法檢測(cè)血塊強(qiáng)度。
術(shù)語(yǔ)“增強(qiáng)血纖蛋白塊形成”欲包括下述情況，即當(dāng)以相同的凝血試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，相對(duì)于分別僅含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的對(duì)照樣品各自的血纖蛋白塊形成的速率或水平而言，含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的受試樣品的已測(cè)定的血纖蛋白塊形成的速率或水平有所提高?？梢园瓷鲜鰴z測(cè)血纖蛋白塊形成。
術(shù)語(yǔ)“縮短凝血時(shí)間”欲包括下述情況，即當(dāng)以相同的凝血試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，相對(duì)于分別僅含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的對(duì)照樣品各自的凝血時(shí)間而言，含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的受試樣品的已測(cè)定的凝血塊形成時(shí)間(凝血時(shí)間)有所縮短?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)PT og aPTT試驗(yàn)檢測(cè)凝血時(shí)間。
本文所用術(shù)語(yǔ)“出血紊亂”反映了表現(xiàn)為出血發(fā)作的任何先天性、獲得性或被誘導(dǎo)的、源于細(xì)胞或分子水平的缺陷。出血紊亂的例子包括但不限于凝血因子缺乏癥(例如缺乏凝結(jié)因子VIII、IX、XI或VII)，凝血因子抑制劑，血小板機(jī)能不全(例如Glanzmann血小板機(jī)能不全和Bernard-Soulier綜合征)，血小板減少癥，遺傳性假血友病，以及例如因出血和/或輸血(例如遭遇手術(shù)或創(chuàng)傷故需多次輸血的受試者)而使凝結(jié)蛋白被稀釋，血纖蛋白溶解增加，血小板數(shù)目減少，從而導(dǎo)致的凝血病。
出血指的是血液從循環(huán)系統(tǒng)的任何組成部分中外滲。術(shù)語(yǔ)“出血發(fā)作”包括與手術(shù)，創(chuàng)傷或其它形式的組織損害相關(guān)聯(lián)的不必要的，不受控制的和經(jīng)常性的過(guò)度出血，以及患有出血紊亂的受試者的不必要的出血。出血發(fā)作可發(fā)生于凝血系統(tǒng)基本正常，但遭遇(暫時(shí)性)凝血病的受試者，以及患有先天性或獲得性凝血或出血紊亂的受試者。在血小板機(jī)能不全的受試者中，出血可被看成是由血友病導(dǎo)致的出血，因?yàn)榕c血友病一樣，止血系統(tǒng)缺乏或具有異常的必需凝血“化合物”(例如血小板或von Willebrand因子蛋白)。在遭遇深度組織損害，例如與手術(shù)或大創(chuàng)傷有關(guān)的損害的受試者中，相對(duì)于正常的止血機(jī)制而言，對(duì)立即止血的需求占據(jù)優(yōu)勢(shì)，盡管(創(chuàng)傷前或手術(shù)前)有基本正常的止血機(jī)制，這些受試者仍會(huì)過(guò)度出血。這些經(jīng)常需要多次輸血的受試者因出血和/或輸血(例如因出血和/或輸血而使凝結(jié)蛋白被稀釋，血纖蛋白溶解增加，血小板數(shù)目減少)，會(huì)發(fā)展為(暫時(shí)性的)凝血病。出血也可發(fā)生在器官，例如腦，內(nèi)耳區(qū)和眼部；這些是外科止血的可能性有限的區(qū)域，因此，成功止血成為一個(gè)難題。在從多個(gè)器官(肝臟、肺、腫瘤組織、胃腸道)取活檢樣品的過(guò)程中，以及在腹腔鏡檢查手術(shù)和根本性恥骨后前列腺切除術(shù)中也會(huì)產(chǎn)生類似的問(wèn)題。所有這些情況的共同之處是通過(guò)手術(shù)技術(shù)(縫線、小夾子等)難以達(dá)到止血的目的，當(dāng)出血擴(kuò)散時(shí)(例如出血性胃炎和大量的子宮出血)，情況也是如此。出血也會(huì)發(fā)生于接受抗促凝劑療法的受試者，這些受試者所接受的療法誘導(dǎo)了止血缺陷；這些出血經(jīng)常是急性的和過(guò)多的。給予抗促凝劑療法經(jīng)常是為了預(yù)防血栓栓塞性疾病。所述療法可包括肝素，其它形式的蛋白聚糖，丙酮芐羥香豆素或其它形式的維生素K-拮抗劑以及阿斯匹林和其它血小板聚集抑制劑，例如抗體或其它GP IIb/IIIa活性抑制劑。出血發(fā)作還意味著包括但不限于與受試者的手術(shù)或創(chuàng)傷有關(guān)的不受控制的過(guò)度出血，所述受試者經(jīng)歷了急性關(guān)節(jié)積血(關(guān)節(jié)出血)、慢性嗜血性關(guān)節(jié)病、血腫(例如肌肉、腹膜后、舌下和咽后血腫)、其它組織出血、血尿(腎管出血)、大腦出血、手術(shù)(例如肝切除)、拔牙和胃腸出血(例如UGI出血)。出血發(fā)作可能與抗VIII因子抑制劑；A型血友??；具有抑制劑的A型血友?。籅型血友??；VII因子缺乏；XI因子缺乏；血小板減少；von Willebrand因子缺乏(遺傳性假血友病)；嚴(yán)重的組織損害；嚴(yán)重的創(chuàng)傷；手術(shù)；腹腔鏡檢查手術(shù)；出血性胃炎；取活檢樣品；抗促凝劑療法；上胃腸道出血(UGI)；或干細(xì)胞移植有關(guān)。出血發(fā)作可以是過(guò)多的子宮出血；發(fā)生于機(jī)械止血的可能性有限的器官中的出血；發(fā)生于腦部的出血；發(fā)生于內(nèi)耳區(qū)的出血；或發(fā)生于眼的出血。術(shù)語(yǔ)“出血發(fā)作”和“出血”在適當(dāng)時(shí)可以互換使用。
在此上下文中，術(shù)語(yǔ)“治療”意味著包括預(yù)防可以預(yù)見的出血(例如手術(shù)中的出血)，以及調(diào)節(jié)已發(fā)生的出血(例如創(chuàng)傷出血)，目的是為了抑制出血或使出血量最少。以上提及的“可以預(yù)見的出血”可以是有望發(fā)生在特定組織或器官中的出血，或者是不確定的出血。因此，術(shù)語(yǔ)“治療”包括預(yù)防性施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品。
本文所用術(shù)語(yǔ)“受試者”欲指任何動(dòng)物，尤其是哺乳動(dòng)物，如人，適當(dāng)時(shí)可以與術(shù)語(yǔ)“患者”互換使用。
可以同時(shí)或依次施用本說(shuō)明書中定義的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽?？梢砸院袃煞N凝結(jié)因子的單劑量形式，或以含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品作為第一種單位劑量形式，含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品作為第二種單位劑量形式的由多部分組成的試劑盒的形式提供因子。第二種單位劑量形式可以是高-，中-或低-活性VIII因子產(chǎn)品形式。優(yōu)選高-活性產(chǎn)品。最優(yōu)選重組高-活性產(chǎn)品。不論何時(shí)，本說(shuō)明書上下文中提及的第一或第二或第三等單位劑量都不表示給藥的優(yōu)選次序，這樣做僅是為方便表述而已。
“同時(shí)”施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品指的是以單劑量形式施用凝結(jié)因子蛋白質(zhì)，或先施用第一種凝結(jié)因子蛋白質(zhì)，接著在不超過(guò)15分鐘，優(yōu)選10，更優(yōu)選5，更優(yōu)選2分鐘的時(shí)間間隔之后施用第二種凝結(jié)因子蛋白質(zhì)?？梢韵仁┯萌我环N因子。
“依次”施用指的是先施用第一種凝結(jié)因子蛋白質(zhì)，接著在2小時(shí)，優(yōu)選1至2小時(shí)，更優(yōu)選1小時(shí)，更優(yōu)選30分鐘至1小時(shí)，更優(yōu)選30分鐘，更優(yōu)選15至30分鐘的時(shí)間間隔之后施用第二種凝結(jié)因子蛋白質(zhì)?？梢韵仁┯脙煞N單位劑量形式或凝結(jié)因子蛋白質(zhì)中的任一種。優(yōu)選通過(guò)相同的靜脈內(nèi)進(jìn)入方式注射這兩種產(chǎn)品。
“VIII因子水平”指的是與健康受試者水平相比較的患者VIII凝血因子活性水平。該水平被表示為正常水平的百分比。適當(dāng)時(shí)，該術(shù)語(yǔ)可以互換使用。
“VIII因子水平降低”指的是與不具有凝結(jié)因子VIII缺陷或凝結(jié)因子VIII抑制劑的受試者群體的平均VIII水平相比，血流中VIII因子存在量或活性的降低。根據(jù)其從人血漿中的純化情況看，正常成年人的VIII因子濃度約為100-200ng/毫升血漿(平均值)，相當(dāng)于約0.1μM；也等于0.60-1.60U/ml。
在正常的健康個(gè)體中，VIII因子活性和抗原水平在60至160％于正常的血漿收集物之間變化。臨床上，通過(guò)促凝劑或免疫學(xué)試驗(yàn)即可測(cè)定循環(huán)的VIII因子水平。通過(guò)患者血漿校正VIII因子-缺乏的血漿的凝血時(shí)間的能力測(cè)定VIII因子前促凝劑活性(例如APTT試驗(yàn)，參見下文；也可參見本說(shuō)明書的“試驗(yàn)部分”)。
一個(gè)單位的VIII因子被定義為1毫升正常(收集的)人血漿中存在的VIII因子的量(相當(dāng)于100％的VIII因子水平)。
一個(gè)單位的VII因子被定義為1毫升正常血漿中存在的VII因子的量，相當(dāng)于約0.5μg蛋白質(zhì)?；罨螅?0個(gè)單位相當(dāng)于約1μg蛋白質(zhì)。
“缺乏”指的是與正常健康個(gè)體相比，血漿中VIII因子的存在量或活性有所降低。適當(dāng)時(shí)，該術(shù)語(yǔ)可與“VIII因子水平降低”互換使用。
“APTT”或“aPTT”指的是活化的部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間(描述于例如Proctor RR，Rapaport SIThe partial thromboplastin time with kaolin；a simple screening test for first-stage plasma clotting factor deficiencies.Am JClin Pathol 36212，1961)。
“VIII因子-反應(yīng)性綜合征”指的是給需要治療的受試者施用外源性VIII因子即可預(yù)防、治愈或緩解由綜合征引起的可預(yù)見的或已存在的任何癥狀、病癥或疾病的綜合征。包括但不限于由VIII因子水平降低引起的綜合征，例如出血紊亂(例如但不限于A型血友病)或者由VIII因子抑制劑引起的綜合征。
“VII因子-反應(yīng)性綜合征”指的是給需要治療的受試者施用外源性VII因子，優(yōu)選VIIa因子即可預(yù)防、治愈或緩解由綜合征引起的可預(yù)見的或已存在的任何癥狀、病癥或疾病的綜合征。包括但不限于因凝血因子VIII，IX，XI或VII水平降低，凝血因子抑制劑，血小板機(jī)能不全(例如Glanzmann血小板機(jī)能不全和Bernard-Soulier綜合征)，血小板減少，遺傳性假血友病和凝血病，例如(遭遇手術(shù)或創(chuàng)傷故需多次輸血的受試者)因出血和/或輸血而使凝結(jié)蛋白被稀釋，血纖蛋白溶解增加，血小板數(shù)目減少所導(dǎo)致的凝血病而引起的綜合征。
“半壽期”指的是VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的血漿濃度從一個(gè)特定的值降低至該值的一半所需的時(shí)間。
“初級(jí)止血”指的是起初由FXa和TFVIIa因子產(chǎn)生凝血酶，隨后激活血小板，形成最初的由活化的粘附血小板構(gòu)成的松散血栓，所述血栓尚未被血纖蛋白(最終被交聯(lián)的血纖蛋白)穩(wěn)定化。如果未被止血過(guò)程的第二個(gè)步驟(維持止血)所形成的血纖蛋白穩(wěn)定化，血栓容易被纖溶系統(tǒng)溶解。
“次級(jí)止血”或“維持止血”指的是發(fā)生于活化的血小板表面、并由VIIIa因子和VIIIa因子催化的次級(jí)、完全和較多的凝血酶突增或產(chǎn)生，隨后形成血纖蛋白，最初的血小板栓被穩(wěn)定化。血纖蛋白對(duì)血栓的穩(wěn)定化導(dǎo)致完全止血。
“完全止血”指的是在受傷部位形成穩(wěn)定的固體血纖蛋白塊或栓，它們能有效止血，并且不易被纖溶系統(tǒng)溶解。在本發(fā)明的上下文中，使用術(shù)語(yǔ)止血表示上述的完全止血。
本文所用凝結(jié)因子，如VIII因子的“制品”是VIII因子占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的制品。在一個(gè)實(shí)施方案中，凝結(jié)因子以占蛋白質(zhì)總量20％(w/w)以上，更優(yōu)選30％，更優(yōu)選40％，更優(yōu)選50％，更優(yōu)選60％，更優(yōu)選70％，更優(yōu)選80％，更優(yōu)選90％，更優(yōu)選95％，更優(yōu)選98％，更優(yōu)選99％的量存在于制品中。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，凝結(jié)因子以占凝結(jié)因子蛋白質(zhì)總量50％(w/w)以上，更優(yōu)選80％，更優(yōu)選90％，更優(yōu)選95％，更優(yōu)選98％，更優(yōu)選99％的量存在。
通過(guò)公知方法，例如通過(guò)測(cè)定光密度即可測(cè)定所述制品中蛋白質(zhì)的總量。通過(guò)公知方法，例如標(biāo)準(zhǔn)的ELISA免疫測(cè)定法即可測(cè)定VIII因子凝結(jié)蛋白的量。一般說(shuō)來(lái)，通過(guò)下述方法可進(jìn)行這種試驗(yàn)，即使含有VIII因子蛋白質(zhì)的制品溶液與固定于ELISA板上的抗-FVIII抗體接觸，隨后使固定化的抗體-VIII因子復(fù)合物與攜有標(biāo)記的第二抗-FVIII抗體接觸，第三步，可測(cè)定標(biāo)記的量?？梢允褂眠m當(dāng)?shù)目贵w，以類似的方法測(cè)定每種凝結(jié)因子的量。通過(guò)將每一種凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的量加在一起，即可測(cè)定制品中存在的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的總量。在一個(gè)實(shí)施方案中，制品含有分離的凝結(jié)因子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制品不含凝結(jié)因子II和凝結(jié)因子IIa。
本文所用術(shù)語(yǔ)“分離的”指的是已從合成凝結(jié)因子的細(xì)胞，或凝結(jié)因子天然存在的介質(zhì)(例如血漿或血液)中分離出來(lái)的凝結(jié)因子，例如VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法，從其來(lái)源細(xì)胞中分離多肽，所述方法包括但不限于從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物中取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過(guò)濾以除去未-貼壁的細(xì)胞等?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法，從其天然存在的介質(zhì)中分離多肽，所述方法包括但不限于親和層析，如分別在抗-VII因子或抗-VIII因子抗體柱上進(jìn)行的親和層析；疏水作用層析；離子交換層析；大小排阻層析；電泳方法(例如制備性等電聚焦(IEF))，差別溶解性(例如硫酸銨沉淀)，或提取等。
縮寫TF組織因子FVII 單鏈，未活化形式的VII因子FVIIa 活化形式的VII因子rFVIIa活化形式的重組VII因子VIII因子 酶原，未活化形式的VIII因子VIIIa因子 活化形式的VIII因子rFVIII重組VIII因子rFVIIIa 重組VIIIa因子化合物的制備優(yōu)選通過(guò)DNA重組技術(shù)，例如描述于Hagen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 832412-2416，1986或歐洲專利號(hào)200,421(ZymoGenetics，Inc.)中的技術(shù)制備適用于本發(fā)明的純化的人VIIa因子。
也可通過(guò)Broze和Majerus，J.Biol.Chem.255(4)1242-1247，1980以及Hedner和Kisiel，J.Clin.Invest.711836-1841，1983所述的方法制備VII因子。這些方法生產(chǎn)出VII因子，其中不含可測(cè)量的其它凝結(jié)因子。通過(guò)包括額外的凝膠過(guò)濾作為最終的純化步驟，甚至可以獲得進(jìn)一步純化的VII因子制品。然后通過(guò)已知方法，例如通過(guò)幾種不同的血漿蛋白質(zhì)，如XIIa、IXa或Xa因子，將VII因子轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨腣IIa因子。或者，按Bjoern等(ResearchDisclosure，269 September 1986，pp.564-565)所述，通過(guò)使VII因子流經(jīng)離子交換層析柱，如Mono Q(Pharmacia fine Chemicals)等而使其被活化。
通過(guò)修飾野生型VII因子或通過(guò)重組技術(shù)，可以生產(chǎn)VII因子-相關(guān)多肽。通過(guò)例如位點(diǎn)特異性誘變改變編碼天然VII因子的核酸中的氨基酸密碼子或除去其中的一些氨基酸密碼子，即可修飾編碼野生型VII因子的核酸序列，從而產(chǎn)生與野生型VII因子相比，氨基酸序列有所改變的VII因子-相關(guān)多肽。
本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚地知道可在對(duì)VIIa因子或VIII因子-分子的功能無(wú)關(guān)緊要的區(qū)域進(jìn)行取代，仍然會(huì)得到有活性的多肽?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域已知的方法，例如定點(diǎn)誘變或丙氨酸-掃描誘變(參見例如Cunningham and Wells，1989，Science 2441081-1085)，鑒定出對(duì)VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子相關(guān)多肽的活性至關(guān)重要，因此優(yōu)選不對(duì)其進(jìn)行取代的氨基酸殘基。在后一技術(shù)中，在分子中的每一個(gè)帶正電的殘基處導(dǎo)入突變，檢測(cè)所得突變分子各自交聯(lián)的促凝劑活性，以鑒定出對(duì)分子的活性至關(guān)重要的氨基酸殘基。通過(guò)分析按照如核磁共振分析，晶體學(xué)或光親和性標(biāo)記(參見例如de Vos等，1992，Science 255306-312；Smith等，1992，Journal ofMolecular Biology 224899-904；Wlodaver等，1992，F(xiàn)EBS Letters 30959-64)之類的技術(shù)測(cè)定的三維結(jié)構(gòu)，也可以測(cè)定底物-酶相互作用的位點(diǎn)。
通過(guò)使用本領(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行定點(diǎn)誘變，可以在核酸序列中導(dǎo)入突變以用一個(gè)核苷酸交換另一個(gè)核苷酸。特別有用的方法利用了含有所需插入物的超螺旋雙鏈DNA載體和兩個(gè)含有所需突變的合成引物。在溫度循環(huán)過(guò)程中，各與載體的相反鏈互補(bǔ)的寡核苷酸引物利用pfu DNA聚合酶延伸。引物摻入之后，即可產(chǎn)生含有交錯(cuò)切口的突變質(zhì)粒。溫度循環(huán)之后，用特異于甲基化和半甲基化DNA的DpnI處理產(chǎn)物，以消化親代DNA模板并選擇出含有突變的合成DNA。也可以使用本領(lǐng)域已知的其它產(chǎn)生、鑒定和分離變體的方法，例如基因改組或噬菌體展示技術(shù)。
可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法從其來(lái)源細(xì)胞中分離多肽，所述方法包括但不限于從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物中取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過(guò)濾以除去未-貼壁的細(xì)胞等。
任選進(jìn)一步純化VII因子或VII因子-相關(guān)多肽?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行純化，所述方法包括但不限于親和層析，如在抗-VII因子抗體柱上進(jìn)行的親和層析(參見例如Wakabayashi等，J.Biol.Chem.26111097，1986；和Thim等，Biochem.277785，1988)；疏水作用層析；離子交換層析；大小排阻層析；電泳方法(例如制備性等電聚焦(IEF))，差別溶解性(例如硫酸銨沉淀)，或提取等。一般可參見Scopes，Protein Purification，Springer-Verlag，New York，1982；和Protein Purification，J.C.Janson and LarsRyden，editors，VCH Publishers，New York，1989。純化后，優(yōu)選制品含有低于約10％重量，更優(yōu)選低于約5％，最優(yōu)選低于約1％重量的得自宿主細(xì)胞的非-VII因子或VII因子相關(guān)多肽。
通過(guò)使用XIIa因子或其它具有胰蛋白酶樣特異性的蛋白酶，例如IXa因子、激肽釋放酶、Xa因子和凝血酶進(jìn)行蛋白酶裂解，可以活化VII因子或VII因子-相關(guān)多肽。參見例如Osterud等，Biochem.112853(1972)；Thomas，美國(guó)專利號(hào)4,456,591；和Hedner等，J.Clin.Invest.711836(1983)?；蛘撸ㄟ^(guò)使VII因子或VII因子-相關(guān)多肽流經(jīng)離子交換層析柱，如MonoQ(Pharmacia)等而使其被活化。然后可按下文所述配制所得的活化VII因子或VII因子-相關(guān)多肽并給藥。
可根據(jù)已知方法，從血漿中分離本發(fā)明中使用的VIII因子，所述方法公開于例如Fulcher等；Proc.Acad.Nat.Sci.USA 1982；791648-1652和Rotblat等；Biochemistry 1985；244294-4300。然而，優(yōu)選使用重組VIII因子以避免使用存在傳播疾病之風(fēng)險(xiǎn)的源自血液或組織的產(chǎn)品。優(yōu)選通過(guò)DNA重組技術(shù)制備適用于本發(fā)明的純化的人VIII因子，所述技術(shù)描述于例如美國(guó)專利號(hào)4757006和4965199。
通過(guò)修飾野生型VIII因子或通過(guò)重組技術(shù)，可以生產(chǎn)VIII因子-相關(guān)多肽。通過(guò)已知方法，例如上文詳細(xì)描述的位點(diǎn)特異性誘變改變編碼天然VIII因子的核酸中的氨基酸密碼子或除去其中的一些氨基酸密碼子，即可修飾編碼野生型VIII因子的核酸序列，從而產(chǎn)生與野生型VIII因子相比，氨基酸序列有所改變的VIII因子-相關(guān)多肽?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法從其來(lái)源細(xì)胞中分離多肽，所述方法包括但不限于從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物中取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過(guò)濾以除去未-貼壁的細(xì)胞等。任選進(jìn)一步純化VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行純化，所述方法包括但不限于上文詳細(xì)描述的親和層析，如在抗-VIII因子抗體柱上進(jìn)行的親和層析；疏水作用層析；離子交換層析；大小排阻層析；電泳方法(例如制備性等電聚焦(IEF))，差別溶解性(例如硫酸銨沉淀)，或提取等。純化后，優(yōu)選制品含有低于約10％重量，更優(yōu)選低于約5％，最優(yōu)選低于約1％重量的得自宿主細(xì)胞的非-VIII因子或VIII因子相關(guān)多肽。然后可按下文所述配制所得的活化VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽并給藥。
本領(lǐng)域技術(shù)人員懂得優(yōu)選使用與受試者同源的VIII因子多肽和VII因子多肽，以降低誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的風(fēng)險(xiǎn)。非人VIII因子的制備和鑒定描述于例如Fass等，Blood 1982，59594-600。本發(fā)明還包括在獸醫(yī)方法中使用所述VIII因子多肽和VII因子多肽。
藥物組合物和使用方法可以使用本發(fā)明的制品治療任何VIII因子反應(yīng)性綜合征，例如出血紊亂，包括但不限于因缺乏凝血因子(如A型血友病)或由(低或中等滴度的)VIII因子抑制劑所導(dǎo)致的疾病。
可以使用本發(fā)明的制品治療任何VII因子反應(yīng)性綜合征，例如出血紊亂，包括但不限于因凝血因子VIII，IX，XI或VII水平降低，凝血因子抑制劑，血小板機(jī)能不全(例如Glanzmann血小板機(jī)能不全和Bernard-Soulier綜合征)，血小板減少，遺傳性假血友病和凝血病，例如(遭遇手術(shù)或創(chuàng)傷故需多次輸血的受試者)因出血和/或輸血而使凝結(jié)蛋白被稀釋，血纖蛋白溶解增加，血小板數(shù)目減少所導(dǎo)致的凝血病而引起的綜合征。
主要打算將含有本發(fā)明的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的藥物組合物供非腸道給藥使用，以進(jìn)行預(yù)防和/或治療性治療。優(yōu)選非腸道施用藥物組合物，即靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥；最優(yōu)選靜脈內(nèi)給藥。也可以通過(guò)連續(xù)或脈沖式灌注給藥。
本發(fā)明的藥物組合物或制劑含有混合于，優(yōu)選溶解于藥物可接受載體，優(yōu)選為含水載體或稀釋劑中的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的制品，或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的制品，或VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的制品與VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的制品的組合物。可以使用多種含水載體，如水、緩沖水、0.4％鹽水、0.3％甘氨酸等。也可以使用不含水的載體，例如凝膠形式或脂質(zhì)體制品形式配制本發(fā)明的制品，以傳遞或靶向至受傷部位。脂質(zhì)體制品一般描述于例如美國(guó)專利號(hào)4837028，4501728和4975282?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)的眾所周知的滅菌技術(shù)對(duì)組合物進(jìn)行滅菌。將所得的水溶液包裝待用或在無(wú)菌條件下過(guò)濾并凍干，給藥前將凍干制品與無(wú)菌水溶液混合。
組合物可含有藥物可接受的輔助物質(zhì)或佐劑，包括但不限于pH調(diào)節(jié)和緩沖劑和/或張力調(diào)節(jié)劑，例如醋酸鈉，乳酸鈉，氯化鈉，氯化鉀，氯化鈣等。
制劑可進(jìn)一步包括一種或多種稀釋劑、乳化劑、防腐劑、緩沖液、賦形劑等，可以以液體、粉末、乳劑、控釋等方式提供制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以按照公認(rèn)的常規(guī)作法，例如描述于Remington’s PharmaceuticalSciences，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990的方法，以適當(dāng)?shù)姆绞脚渲票景l(fā)明的組合物。因此，可以制備靜脈內(nèi)灌注所用的典型藥物組合物，使其含有250ml無(wú)菌的Ringer’s溶液和10mg制品。
可以施用含有本發(fā)明制品的組合物以進(jìn)行預(yù)防和/或治療性治療。在治療應(yīng)用中，可按上文所述，以足以治愈、緩解或部分終止疾病及其并發(fā)癥的臨床表現(xiàn)的量給已患病的受試者施用組合物。將足以達(dá)到此目的的量定義為“治療有效量”。針對(duì)每個(gè)目的的有效量取決于疾病或創(chuàng)傷的嚴(yán)重程度，以及受試者的體重和一般狀況。應(yīng)懂得通過(guò)構(gòu)建數(shù)值矩陣并檢測(cè)矩陣中的不同點(diǎn)，使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)即可測(cè)定適當(dāng)?shù)膭┝俊?br> 例如，利用噴霧、灌注、雙球囊導(dǎo)管、摻入血管移植物的一個(gè)或多個(gè)斯滕特氏印模、用于包被球囊導(dǎo)管的水凝膠，或其它已成熟建立的方法可以進(jìn)行本發(fā)明制品的局部傳遞，例如局部應(yīng)用。在任何事件中，藥物組合物應(yīng)該提供足以有效治療疾病的大量制品。
在這些配制品中，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽，VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽，或VII因子或VII因子-相關(guān)多肽與VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的組合物的濃度可以有很大的不同，即從低于約0.5％重量，通常為或至少約為1％重量至高達(dá)15或20％重量，主要根據(jù)所選擇的特定給藥模式，液體的體積，粘度等選擇所述濃度。優(yōu)選通過(guò)注射或灌注，特別是注射進(jìn)行給藥。因此，以適于靜脈內(nèi)給藥的方式制備VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽，例如制備成含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的單劑量形式的可溶解凍干粉末或液體制劑制品，或制備成含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽的單劑量形式的可溶解凍干粉末或液體制劑制品，以及含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的另一劑量形式的可溶解凍干粉末或液體制劑制品。
應(yīng)理解VII因子或VII因子-相關(guān)多肽的量和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的量合起來(lái)含有可用于治療出血發(fā)作的集合有效量。
必須記住本發(fā)明的物質(zhì)一般用于嚴(yán)重的疾病或創(chuàng)傷，即威脅生命或?qū)ι袧撛谕{的狀況。在這種情況下，考慮到外來(lái)物質(zhì)的最少化以及人一般缺乏VIIa因子和VIII因子的免疫原性，可以，并且治療醫(yī)生也認(rèn)為需要施用實(shí)質(zhì)上過(guò)量的這些組合物。
在預(yù)防性的應(yīng)用中，給容易患病或要不然有患病或受傷風(fēng)險(xiǎn)的受試者施用含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合物，以增強(qiáng)受試者自身的凝血能力。所述量被定義為“預(yù)防有效劑量”。應(yīng)理解VII因子或VII因子-相關(guān)多肽的量和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的量合起來(lái)含有可用于預(yù)防出血發(fā)作的集合有效量。
可根據(jù)治療醫(yī)生選擇的劑量水平和模式進(jìn)行組合物的單次或多次給藥。每天或每周可以單次或多次施用組合物。所述藥物組合物的有效量是能提供抗出血發(fā)作的顯著臨床效果的量。所述量部分取決于受試者欲治療的特定病癥、年齡、體重和一般健康狀況以及本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其它因素。
一般在預(yù)期的出血之前或在開始出血時(shí)以單劑量施用本發(fā)明的組合物。然而，也可以重復(fù)(以多劑量)給藥，優(yōu)選的時(shí)間間隔為2-4-6-12小時(shí)，這取決于給藥劑量和受試者的病情。
為了進(jìn)行與審慎的干預(yù)相關(guān)聯(lián)的治療，一般在進(jìn)行干預(yù)之前的約24小時(shí)內(nèi)施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽，隨后持續(xù)給藥多達(dá)7天或更長(zhǎng)時(shí)間。可通過(guò)本文描述的多種途徑施用促凝劑。
組合物可以是單個(gè)制品的形式(單-劑量形式)，其含有適當(dāng)濃度的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的制品。組合物也可以是由多部分組成的試劑盒的形式，所述試劑盒由第一種單位劑量形式和第二種單位劑量形式組成，前者含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的制品，后者含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的制品。在此情況下，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽應(yīng)該依次給藥，優(yōu)選彼此間隔約15分鐘，例如彼此間隔10分鐘，或優(yōu)選間隔5分鐘，或更優(yōu)選彼此間隔2分鐘。可以先施用兩種單位劑量形式中的任一種。
試劑盒包括至少兩種獨(dú)立的藥物組合物。試劑盒包括盛裝獨(dú)立組合物的容器，例如分開的瓶子或分開的小包裝袋。試劑盒一般包括施用獨(dú)立成分的說(shuō)明書。當(dāng)優(yōu)選以不同的劑量形式施用獨(dú)立的組分，以不同的劑量間隔施用獨(dú)立的組分時(shí)，或當(dāng)開處方的醫(yī)生需要滴定組合物中的各個(gè)組分時(shí)，試劑盒形式特別有利。
根據(jù)本發(fā)明施用的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽的量和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的量的比例在約1∶100至約100∶1(w/w)之間變化。因此，VII因子與VIII因子的比例是例如約1∶100，或1∶90，或1∶80，或1∶70，或1∶60，或1∶50，或1∶40，或1∶30，或1∶20，或1∶10，或1∶5，或1∶2，或1∶1，或2∶1，或5∶1，或10∶1，或20∶1，或30∶1，或40∶1，或50∶1，或60∶1，或70∶1，或80∶1，或90∶1，或100∶1，或在約1∶90至約1∶1之間，或在約1∶80至約1∶2之間，或在約1∶70至約1∶5之間，或在約1∶60至約1∶10之間，或在約1∶50至約1∶25之間，或在約1∶40至約1∶30之間，或在約90∶1至約1∶1之間，或在約80∶1至約2∶1之間，或在約70∶1至約5∶1之間，或在約60∶1至約10∶1之間，或在約50∶1至約25∶1之間，或在約40∶1至約30∶1之間。
就70-kg受試者的荷載和維持劑量而言，VII因子或VII因子-相關(guān)多肽的劑量范圍對(duì)應(yīng)于約0.05mg至約500mg/天的野生型VII因子，例如約1mg至約200mg/天，或例如約5mg至約175mg/天，具體劑量取決于受試者的體重、病癥和病癥的嚴(yán)重程度。
就70-kg受試者的荷載和維持劑量而言，VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的劑量范圍對(duì)應(yīng)于約0.01mg至約500mg/天的野生型VIII因子，例如約1mg至約200mg/天，或例如約5mg至約175mg/天，具體劑量取決于受試者的體重、病癥和病癥的嚴(yán)重程度。
當(dāng)治療VIII因子水平降低的受試者時(shí)，優(yōu)選以下劑量當(dāng)所給劑量使VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的血漿活性水平達(dá)正常VIII因子活性的10％時(shí)優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平15-300微克/kg體重更優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平30-250微克/kg體重最優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平60-180微克/kg體重當(dāng)所給劑量使VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的血漿活性水平達(dá)正常VIII因子活性的30％時(shí)優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平15-300微克/kg體重更優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平30-250微克/kg體重最優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平60-180微克/kg體重當(dāng)所給劑量使VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的血漿活性水平達(dá)正常VIII因子活性的50％時(shí)優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平15-300微克/kg體重更優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平30-250微克/kg體重最優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平60-180微克/kg體重當(dāng)所給劑量使VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的血漿活性水平達(dá)正常VIII因子活性的80％時(shí)優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平5-300微克/kg體重更優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平10-180微克/kg體重更優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平30-120微克/kg體重最優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平60-120微克/kg體重當(dāng)所給劑量使VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽的血漿活性水平達(dá)正常VIII因子活性的100％時(shí)優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平5-300微克/kg體重更優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平10-180微克/kg體重最優(yōu)選VII因子或VII因子-相關(guān)多肽水平60-120微克/kg體重通過(guò)假定每kg體重1個(gè)單位的FVIII替代使血漿活性提高約0.02U/ml(2％)，即可計(jì)算出劑量。通過(guò)以適當(dāng)?shù)拈g隔取出血液樣品并分析VIII因子活性，可以監(jiān)測(cè)患者的VIII因子水平(見上文說(shuō)明書)。
檢測(cè)法VIIa因子活性試驗(yàn)可以以簡(jiǎn)單的初步體外試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)VIIa因子活性從而選擇出適當(dāng)?shù)腣IIa因子變體的適當(dāng)檢測(cè)法體外水解試驗(yàn)可以檢測(cè)天然(野生型)VIIa因子和VIIa因子變體(下文皆稱為“VIIa因子”)的比活性。也可以平行地進(jìn)行檢測(cè)以直接比較它們的比活性。在微滴板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進(jìn)行試驗(yàn)。將終濃度為1mM的生色底物D-Ile-Pro-Arg-p-硝基酰苯胺(S-2288，Chromogenix，Sweden)加入到含VIIa因子(終濃度為100nM)，0.1M NaCl，5mM CaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白的5 0mM Hepes，pH7.4中。在SpectraMaxTM340平板讀數(shù)儀(Molecular Devices，USA)中連續(xù)測(cè)定405nm下的光吸收值。用20分鐘保溫過(guò)程中產(chǎn)生的光吸收值減去不含酶的空白孔中的光吸收值，得數(shù)用于計(jì)算變體和野生型VIIa因子活性之間的比率比率＝(A405nmVIIa因子變體)/(A405nmVIIa因子野生型)
基于此，可以鑒定出活性約等于或高于天然VIIa因子的VIIa因子變體，例如變體活性和天然VII因子(野生型FVII)活性之間的比率約等于對(duì)大于1.0的變體。
也可以使用適當(dāng)濃度為100-1000nM的生理底物，如X因子測(cè)定VIIa因子或VIIa因子變體的活性，其中在加入適當(dāng)?shù)纳孜?如S-2765)之后測(cè)定所產(chǎn)生的Xa因子。另外，在生理溫度下進(jìn)行活性試驗(yàn)。
體外蛋白酶解試驗(yàn)可以平行檢測(cè)天然(野生型)VIIa因子和VIIa因子變體(下文皆稱為“VIIa因子”)以直接比較它們的比活性。在微滴板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進(jìn)行試驗(yàn)。將100μl含有VIIa因子(10nM)和X因子(0.8μM)，0.1M NaCl，5mMCaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白的50mM Hepes，pH7.4保溫15分鐘。然后加入50μl含有0.1M NaCl，20mM EDTA和1mg/ml牛血清白蛋白的50mMHepes，pH7.4以終止X因子裂解。通過(guò)加入終濃度為0.5mM的生色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-p-硝基酰苯胺(S-2765，Chromogenix，Sweden)，測(cè)定所產(chǎn)生的Xa因子的量。在SpectraMaxTM340平板讀數(shù)儀(Molecular Devices，USA)中連續(xù)測(cè)定405nm下的光吸收值。用10分鐘內(nèi)產(chǎn)生的光吸收值減去不含F(xiàn)VIIa的空白孔中的光吸收值，得數(shù)用于計(jì)算變體和野生型VIIa因子蛋白酶解活性之間的比率比率＝(A405nm VIIa因子變體)/(A405nm VIIa因子野生型)基于此，可以鑒定出活性約等于或高于天然VIIa因子的VIIa因子變體，例如變體活性和天然VII因子(野生型FVII)活性之間的比率約等于對(duì)大于1.0的變體。
凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)可在含有具有生理濃度的所有相關(guān)凝結(jié)因子和抑制劑以及活化的血小板的試驗(yàn)中，測(cè)定VII因子或VII因子-相關(guān)多肽或VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽(例如變體)產(chǎn)生凝血酶的能力(如Monroe等(1997)Brit.J.Haematol.99，542-547中的第543頁(yè)所述，列入本文作為參考)。
VIII因子活性試驗(yàn)可以以例如Kirkwood TBL，Rizza CR，Snape TJ，Rhymes IL，Austen DEG，Identification of sources of interlaboratory variation in factor VII assay.B JHaematol 1981；37；559-68；或Kessels等，British Journal of Haematology，Vol.76(Suppl.1)pp.16(1990)所述的簡(jiǎn)單的體外試驗(yàn)進(jìn)行適當(dāng)?shù)臋z測(cè)法，用于檢測(cè)VIII因子活性從而提供選擇適當(dāng)?shù)腣III因子變體以用于本發(fā)明的方法。也可以通過(guò)基于所產(chǎn)生的FXa的酰胺裂解活性的兩-步生色試驗(yàn)來(lái)測(cè)定VIII因子活性(Wagenvoord等，1989，Haemostasis，19(4)196-204)(“生色試驗(yàn)”)。
也可以按照例如Nilsson等，1959(Nilsson IM，Blombaeck M，Thilen A，von Francken I.，Carriers of haemophilia A-A laboratory study，Acta Med Scan1959；165357)所述，通過(guò)測(cè)定制品校正缺乏VIII因子的血漿的凝血時(shí)間的能力，來(lái)定量測(cè)定VIII因子的生物活性。在此試驗(yàn)中，生物活性被表示為單位/ml血漿(1個(gè)單位相當(dāng)于正常的血漿收集物中存在的FVIII的量)。
本發(fā)明的方面一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其含有FVII多肽和FVIII多肽作為僅有的有活性的凝結(jié)因子。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VII多肽是人重組FVIIa。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII多肽是人重組FVIII。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VII多肽和FVIII多肽被混合使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VII多肽和FVIII多肽被放置在獨(dú)立的容器中。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物供家庭治療用。
另一方面，本發(fā)明涉及用于治療出血發(fā)作的試劑盒，其含有a)第一種單位劑量形式的有效量的FVII多肽，以及任選還含有藥物可接受載體；b)第二種單位劑量形式的有效量的FVIII多肽，以及任選還含有藥物可接受載體；和c)含有所述第一和第二種劑量形式的容器。
在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VII多肽是人重組FVIIa。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII多肽是人重組FVIII。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒供家庭治療用。另一方面，本發(fā)明涉及FVII多肽和FVIII多肽用于制備藥物的用途，所述藥物可用于治療患有FVIII反應(yīng)性綜合征的受試者的出血。另一方面，本發(fā)明涉及FVII多肽和FVIII多肽用于制備藥物的用途，所述藥物可用于治療FVIII水平降低的受試者的出血。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物可治療A型血友病患者的出血發(fā)作。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物含有FVII多肽和FVIII多肽的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，以含有FVII多肽的第一種劑量形式和含有FVIII多肽的第二種劑量形式制備藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VII多肽是人重組FVIIa。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII多肽是人重組FVIII。
另一方面，本發(fā)明涉及與用FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療患有FVIII反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的止血能力的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與用FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療FVIII水平有所降低的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的止血能力的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與用FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療患有FVIII反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的凝血酶形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與用FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)來(lái)治療FVIII水平有所降低的受試者時(shí)相比，能增強(qiáng)所述受試者的凝血酶形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與以FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給患有FVIII反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)所需的給藥次數(shù)相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥次數(shù)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與以FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給FVIII水平有所降低的受試者時(shí)所需的給藥次數(shù)相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥次數(shù)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與以FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給患有FVIII反應(yīng)性綜合征的受試者時(shí)所需的給藥量相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥量的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及與以FVIII作為唯一的凝結(jié)蛋白質(zhì)施用給FVIII水平有所降低的受試者時(shí)所需的給藥量相比，能減少所述受試者完成止血所需的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)給藥量的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和有效量的FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及治療患有FVIII反應(yīng)性綜合征的受試者的出血的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和FVIII多肽。
另一方面，本發(fā)明涉及治療FVIII水平降低的受試者的出血的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的FVII多肽和FVIII多肽。
在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VII多肽是人重組FVIIa。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII多肽是人重組FVIII。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者患有A型血友病。
以下將通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，然而，這些實(shí)施例并不能限制保護(hù)范圍。上述描述和下述實(shí)施例中公開的特征獨(dú)立地、和以任何組合形式成為以多種多樣的方式了解本發(fā)明的素材。
實(shí)施例實(shí)施例1體內(nèi)治療顱內(nèi)出血的血友病患者當(dāng)用商購(gòu)的FVIII產(chǎn)品治療遭遇顱內(nèi)出血的不含抑制劑的A型血友病患者時(shí)，一般需要10至20次FVIII注射或灌注才能使其止血。FVIII灌注欲使最初的FVIII血漿濃度至少為正常水平的80％，接著使血漿濃度為50％達(dá)一周。
用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和同時(shí)給藥的FVIII產(chǎn)品治療所述患者，或間隔一段時(shí)間，如5分鐘，依次用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(NovoNordiskA/S，Bagsvaerd，Denmark)和FVIII產(chǎn)品治療所述患者。通過(guò)相同的靜脈內(nèi)入口注射這兩種產(chǎn)品?；颊咧寡璧臅r(shí)間減少，維持止血所需的注射次數(shù)減少。該治療方案導(dǎo)致止血所用的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的總量減少。
實(shí)施例2體內(nèi)治療伴有區(qū)室綜合征出血的血友病患者該患者是不含-抑制劑的A型血友病患者，因外部創(chuàng)傷而遭遇右上肢區(qū)室綜合征出血。當(dāng)用商購(gòu)的FVIII產(chǎn)品治療該患者時(shí)，一般需要20至40次FVIII注射或灌注才能獲得常與急診手術(shù)相關(guān)聯(lián)的止血。FVIII灌注欲使最初的FVIII血漿濃度至少為80至100％，接著使血漿濃度為50％達(dá)1至2周。
用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和同時(shí)給藥的FVIII產(chǎn)品治療所述患者，或間隔一段時(shí)間，如5分鐘，依次用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(NovoNordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和FVIII產(chǎn)品治療所述患者。通過(guò)相同的靜脈內(nèi)入口注射這兩種產(chǎn)品。患者止血所需的時(shí)間減少，維持止血所需的注射次數(shù)減少。該治療方案導(dǎo)致止血所用的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的總量減少。
就在手術(shù)之前，再施用重復(fù)劑量的FVIIa與FVIII的組合。
實(shí)施例3體內(nèi)治療上胃腸道出血的血友病患者該患者是不含-抑制劑的A型血友病患者，因使用NSAID(非類固醇抗炎癥藥物)而繼發(fā)胃腸出血。當(dāng)用商購(gòu)的FVIII產(chǎn)品治療該患者時(shí)，一般需要20至40次FVIII注射或灌注才能獲得常與急診胃鏡檢查相關(guān)聯(lián)的止血。
FVIII灌注欲使最初的FVIII血漿濃度至少為80至100％，接著使血漿濃度為50％達(dá)5至10天。
用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和同時(shí)給藥的FVIII產(chǎn)品治療所述患者，或間隔一段時(shí)間，如5分鐘，依次用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(NovoNordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和FVIII產(chǎn)品治療所述患者。通過(guò)相同的靜脈內(nèi)入口注射這兩種產(chǎn)品。患者止血所需的時(shí)間減少，維持止血所需的注射次數(shù)減少。該治療方案導(dǎo)致止血所用的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的總量減少。
就在胃鏡檢查之前，再施用重復(fù)劑量的FVIIa與FVIII的組合。
實(shí)施例4體內(nèi)治療伴有彌散性出血的多次接受輸注的受傷患者該患者因外部創(chuàng)傷而遭遇彌散性出血。在出現(xiàn)彌散性出血病癥之前，該患者已接受了大量靜脈內(nèi)注射液體、膠體灌注產(chǎn)品、白蛋白和紅血細(xì)胞濃縮物的治療。多次輸注的臨床狀態(tài)的特征在于血小板數(shù)目低，血纖蛋白原和FVIII的濃度低。
治療包括輸入血小板、新鮮的冷凍血漿和FVIII產(chǎn)品。FVIII灌注欲達(dá)到正常水平的至少80％，并持續(xù)至已消除彌散性出血。
用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和同時(shí)給藥的FVIII產(chǎn)品治療所述患者，或間隔一段時(shí)間，如5分鐘，依次用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(NovoNordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和FVIII產(chǎn)品治療所述患者。通過(guò)相同的靜脈內(nèi)入口注射這兩種產(chǎn)品?；颊咧棺《鄠€(gè)出血點(diǎn)的出血所需的時(shí)間減少，維持止血所需的注射次數(shù)減少。該治療方案導(dǎo)致止血所用的凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的總量減少，并能改善存活。
就在手術(shù)或侵害性操作之前，再施用重復(fù)劑量的FVIIa與FVIII的組合。
實(shí)施例5檢測(cè)不含-抑制劑的A型血友病患者的凝血狀況該患者是遭遇出血，例如顱內(nèi)出血的不含-抑制劑的A型血友病患者。
當(dāng)用商購(gòu)的FVIII產(chǎn)品治療該患者時(shí)，一般需要10至20次FVIII注射或灌注才能使其止血。FVIII灌注欲使最初的FVIII血漿濃度至少為正常水平的80％，接著使血漿濃度為50％達(dá)一周。體內(nèi)試驗(yàn)用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和同時(shí)給藥的FVIII產(chǎn)品治療所述患者，或間隔一段時(shí)間，如5分鐘，依次用1個(gè)劑量，即90-180μg/kg體重的NovoSeven(NovoNordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)和FVIII產(chǎn)品治療所述患者。通過(guò)相同的靜脈內(nèi)入口注射這兩種產(chǎn)品。施用兩種凝結(jié)蛋白質(zhì)中的后一種之后10分鐘，取血樣，使用臨床上與凝血狀況相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)，即凝血彈性描記法進(jìn)行全血凝結(jié)分析(參見例如Meh等，BLOOD COAGULATION&FIBRINOLYSIS 2001；12627-637)。使用讀自該試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，闡明了增強(qiáng)的血纖蛋白塊形成；增加的血塊強(qiáng)度和延長(zhǎng)的血塊裂解時(shí)間。連續(xù)血樣的檢測(cè)結(jié)果闡明了在注射VII因子和VIII因子產(chǎn)品之后，作為時(shí)間的函數(shù)存在的這些參數(shù)的變化。
實(shí)施例6用VIIa因子和VIII因子的組合縮短凝血時(shí)間方法凝血試驗(yàn)按現(xiàn)有的描述(Persson等，J Biol Chem 27629195-9，2001)，在一-步驟試驗(yàn)中測(cè)定缺乏或存在多種濃度的血漿純化的人VIII因子(FVIII)時(shí)，重組人凝結(jié)因子VIIa(rFVIIa)的特定凝血活性。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將包含在50mM Pipes，100mM NaCl，2mM EDTA，1％BSA，pH7.2中的(55μl)rFVIIa等分試樣(0.2-3μg/ml，Novo Nordisk貯存物)與等體積的緩沖液混合，所述緩沖液含有50mM CaCl2和磷脂酰膽堿/磷脂酰絲氨酸載體(總磷脂濃度100μM；80％磷脂酰膽堿/20％磷脂酰絲氨酸)，通過(guò)加入55μl添加有多種濃度的FVIII(10，50和80％血漿濃度，Haematologic Technologies)的缺乏FVIII的血漿(Helena Labs Helena Labs#5793)以開始凝血過(guò)程。使用標(biāo)準(zhǔn)的APTT方法，在ACL 300 Research凝血檢測(cè)儀(Instrumentation Laboratory，Milan，Italy)中持續(xù)凝血400秒。
結(jié)果凝血試驗(yàn)在缺乏FVIII的血漿中分開和組合地添加rFVIIa和FVIII，測(cè)定凝血時(shí)間。在加入rFVIIa/FVIII之前，兩種血漿的凝血時(shí)間都長(zhǎng)于400秒的監(jiān)測(cè)時(shí)間。圖1和2分別顯示了當(dāng)缺乏FVIII的和正常的人血漿中缺乏和存在FVIII時(shí)，rFVIIa的縮短凝血時(shí)間的效果。
結(jié)論這些結(jié)果表明rFVIIa和FVIII的組合能縮短缺乏FVIII和正常血漿的凝血時(shí)間，其效果優(yōu)于分開添加蛋白質(zhì)時(shí)所觀察到的效果。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，其含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子-相關(guān)多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述VII因子-相關(guān)多肽是VII因子氨基酸序列變體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或權(quán)利要求3的組合物，其中當(dāng)按照本說(shuō)明書中描述的“體外水解試驗(yàn)”檢測(cè)時(shí)，所述VII因子-相關(guān)多肽的活性與天然人VIIa因子(野生型FVIIa)的活性之間的比率至少約為1.25。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子多肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中所述VII因子是人VII因子。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中所述VII因子多肽是重組人VII因子。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的組合物，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽為其活性形式。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中所述VII因子多肽是重組人VIIa因子。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的組合物，其中所述VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子-相關(guān)多肽。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子氨基酸序列變體。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或權(quán)利要求11的組合物，其中當(dāng)按照本說(shuō)明書中描述的“生色試驗(yàn)”檢測(cè)時(shí)，VIII因子-相關(guān)多肽的活性與天然人VIII因子(野生型FVIII)的活性之間的比率至少約為1.25。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的組合物，其中所述VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子多肽。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中所述VIII因子是人VIII因子。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述VIII因子多肽是重組人VIII因子。
16.根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)的組合物，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和所述VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽以質(zhì)量比約為100∶1至1∶100 VII因子∶VIII因子的比率存在。
17.含有治療出血發(fā)作的藥物的、由多部分組成的試劑盒，其含有a)以第一種單位劑量形式存在的、有效量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和藥物可接受載體；b)以第二種單位劑量形式存在的、有效量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品和藥物可接受載體；和c)容納所述第一和第二種劑量形式的容器裝置。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的試劑盒，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子-相關(guān)多肽。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的試劑盒，其中所述VII因子-相關(guān)多肽是VII因子氨基酸序列變體。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或權(quán)利要求19的試劑盒，其中當(dāng)按照本說(shuō)明書中描述的“體外水解試驗(yàn)”檢測(cè)時(shí)，所述VII因子-相關(guān)多肽的活性與天然人VIIa因子(野生型FVIIa)的活性之間的比率至少約為1.25。
21.根據(jù)權(quán)利要求17的試劑盒，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽是VII因子多肽。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的試劑盒，其中所述VII因子是人VII因子。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的試劑盒，其中所述VII因子多肽是重組人VII因子。
24.根據(jù)權(quán)利要求17至23中任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽為其活性形式。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的試劑盒，其中所述VII因子多肽是重組人VIIa因子。
26.根據(jù)權(quán)利要求17至25中任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子-相關(guān)多肽。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的試劑盒，其中所述VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子氨基酸序列變體。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或權(quán)利要求27的試劑盒，其中當(dāng)按照本說(shuō)明書中描述的“生色試驗(yàn)”檢測(cè)時(shí)，VIII因子-相關(guān)多肽的活性與天然人VIII因子(野生型FVIII)的活性之間的比率至少約為1.25。
29.根據(jù)權(quán)利要求17至25中任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽是VIII因子多肽。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的試劑盒，其中所述VIII因子是人VIII因子。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的試劑盒，其中所述VIII因子多肽是重組人VIII因子。
32.根據(jù)權(quán)利要求17至31中任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和所述VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽以質(zhì)量比約為100∶1至1∶100 VII因子∶VIII因子的比率存在。
33.VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合用于制備治療受試者出血發(fā)作的藥物的用途。
34.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的組合物用于制備治療受試者出血發(fā)作的藥物的用途。
35.VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合用于制備縮短凝血時(shí)間的藥物的用途。
36.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的組合物用于制備縮短凝血時(shí)間的藥物的用途。
37.VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合用于制備延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間的藥物的用途。
38.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的組合物用于制備延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間的藥物的用途。
39.VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合用于制備增加血塊強(qiáng)度的藥物的用途。
40.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的組合物用于制備增加血塊強(qiáng)度的藥物的用途。
41.VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的組合用于制備增強(qiáng)血纖蛋白塊形成的藥物的用途。
42.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的組合物用于制備增強(qiáng)血纖蛋白塊形成的藥物的用途。
43.根據(jù)權(quán)利要求33至42中任一項(xiàng)的用途，其中受試者患有VIII因子反應(yīng)性綜合征。
44.根據(jù)權(quán)利要求33至43中任一項(xiàng)的用途，其中受試者在治療前具有降低的VIII因子水平。
45.根據(jù)權(quán)利要求43或權(quán)利要求44的用途，其中受試者患有A型血友病。
46.根據(jù)權(quán)利要求33至45中任一項(xiàng)的用途，其中藥物為單一劑量形式。
47.根據(jù)權(quán)利要求33至45中任一項(xiàng)的用途，其中以含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的第一種劑量形式，和含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的第二種劑量形式的方式制備所述藥物。
48.治療受試者的出血發(fā)作的方法，所述方法包括給需要治療的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效治療出血。
49.縮短受試者的凝血時(shí)間的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效縮短凝血時(shí)間。
50.增強(qiáng)受試者止血能力的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)止血。
51.減少使受試者停止出血并維持止血所需凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥次數(shù)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效停止出血和維持止血。
52.減少使受試者停止出血并維持止血所需凝結(jié)因子蛋白質(zhì)的給藥量的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效停止出血和維持止血。
53.使受試者的血塊裂解時(shí)間延長(zhǎng)的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效延長(zhǎng)血塊裂解時(shí)間。
54.增加受試者的血塊強(qiáng)度的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增加血塊強(qiáng)度。
55.增強(qiáng)受試者的血纖蛋白塊形成的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用第一種量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品和第二種量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品，其中第一和第二種量合起來(lái)能有效增強(qiáng)血纖蛋白塊形成。
56.根據(jù)權(quán)利要求48至55中任一項(xiàng)的方法，其中受試者患有VIII因子反應(yīng)性綜合征。
57.根據(jù)權(quán)利要求48至56中任一項(xiàng)的方法，其中受試者在治療前具有降低的VIII因子水平。
58.根據(jù)權(quán)利要求56或權(quán)利要求57的方法，其中受試者患有A型血友病。
59.根據(jù)權(quán)利要求48至58中任一項(xiàng)的方法，其中以單一劑量形式施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。
60.根據(jù)權(quán)利要求48至58中任一項(xiàng)的方法，其中以含有VII因子或VII因子-相關(guān)多肽制品的第一種劑量形式，和含有VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品的第二種劑量形式的方式施用VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽。
61.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中以不超過(guò)15分鐘的時(shí)間間隔施用第一種劑量形式和第二種劑量形式。
62.含有治療出血發(fā)作的藥物的試劑盒，其含有d)以一個(gè)單位劑量形式存在的、有效量的VII因子或VII因子-相關(guān)多肽和有效量的VIII因子或VIII因子-相關(guān)多肽制品和藥物可接受載體；和e)容納所述一個(gè)單位劑量形式的容器裝置。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有VII因子或VII因子－相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子－相關(guān)多肽的藥物制品。本發(fā)明還涉及VII因子或VII因子－相關(guān)多肽和VIII因子或VIII因子－相關(guān)多肽用于制備藥物的用途，以及預(yù)防或治療受試者的出血發(fā)作的方法。
文檔編號(hào)A61K38/36GK1592632SQ02807618
公開日2005年3月9日 申請(qǐng)日期2002年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月5日
發(fā)明者詹斯·B·克努德森, 烏拉·赫德納, 拉斯穆斯·羅杰克杰爾 申請(qǐng)人:諾沃挪第克健康護(hù)理股份公司