專利名稱：高密度脂蛋白反應(yīng)性肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能夠特異地結(jié)合高密度脂蛋白(HDL)膽固醇的肽、泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽和含有這種肽的藥物。
背景技術(shù)：
在血液中，脂質(zhì)總是以脂蛋白存在。目前闡明了脂質(zhì)通過(guò)脂蛋白介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝機(jī)制。
三酰甘油(TGs)、膽固醇和膽固醇酯(CEs)是以極低密度脂蛋白(VLDLs)的形式分泌到血液中的。VLDLs以脂肪酸的形式為外周組織提供部分TGs，且也參與HDLs和中密度脂蛋白(IDLs)之間脂質(zhì)部分的轉(zhuǎn)運(yùn)和交換。與HDLs進(jìn)行脂質(zhì)交換的IDLs失去TGs，從而變?yōu)榈兔芏戎鞍?LDLs)，該低密度脂蛋白反過(guò)來(lái)被外周組織攝取并提供膽固醇。
其間，在外周組織中變得無(wú)用的膽固醇可由HDLs收回并轉(zhuǎn)變?yōu)镃Es，并隨后與包含于上述富含TG的VLDLs、IDLs或LDLs中的TG進(jìn)行交換，直到反向轉(zhuǎn)運(yùn)到肝中。從外周組織如血管壁向肝的該膽固醇轉(zhuǎn)移過(guò)程已知為反向膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)，且認(rèn)為該過(guò)程有助于防止膽固醇的累積(Medical Practice，Vol.18，No.3，473-480(2001))。
已知在反向膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)或在HDLs和富含TG的脂蛋白之間的脂質(zhì)交換中起重要作用的物質(zhì)包括酶如卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)、肝脂肪酶(HTLC)、脂蛋白脂肪酶(LPL)和膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)(CETP)。然而，其作用機(jī)制、脂蛋白之間的相互作用和與脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的關(guān)系仍然未闡明。
泡沫細(xì)胞參與外周組織中膽固醇的累積。即源自血液中單核細(xì)胞并存在于血管壁上的巨噬細(xì)胞吞食了脂肪并在那里累積了大量的脂肪顆粒(主要為CEs)?；瘜W(xué)修飾的LDLs是通過(guò)清除受體(Scavengerreceptors)的介導(dǎo)而不斷攝入巨噬細(xì)胞的，借此形成了泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞的出現(xiàn)已知是高膽固醇血癥(cholestrolemia)中動(dòng)脈硬化的發(fā)作和發(fā)展的關(guān)鍵因素。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用于闡明HDL和富含TG的脂蛋白之間的相互作用的新信息。
本發(fā)明也提供關(guān)于富含TG的脂蛋白的參與上述相互作用的特定成分的信息、這種成分的區(qū)域和結(jié)構(gòu)，并進(jìn)一步提供了具有特定結(jié)構(gòu)的HDL-反應(yīng)性肽。
本發(fā)明也提供關(guān)于在外周組織如血管壁和脂蛋白中膽固醇累積之間相互作用的新信息，且特別是關(guān)于膽固醇流出機(jī)制的信息。
此外，本發(fā)明提供了某些手段，該手段用于估計(jì)和改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤，該脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤極大地影響心臟疾病如心肌梗死以及不同類型的動(dòng)脈硬化(包括腦血管病癥如腦中風(fēng))的發(fā)作、發(fā)展、預(yù)后等。
發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容本發(fā)明者進(jìn)行了對(duì)脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的研究，并提供了(除了別的之外)充當(dāng)指示該錯(cuò)誤的臨床指數(shù)的殘跡樣(remnant-like)脂蛋白(RLP)(參見(jiàn)如Arteriosclerosis，20，79-88(1992)；Clin.Chim.Acta.，223，53-71(1993)；或日本專利No.2657225)，以及改進(jìn)或測(cè)量參與上述脂質(zhì)交換的CETP的技術(shù)(日本專利No.3043528)。
在其隨后的研究中，本發(fā)明者相當(dāng)出乎意料地獲得了HDL直接與LDL反應(yīng)的新發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明已在確定該反應(yīng)通過(guò)LDL的apo B-100的特定區(qū)域介導(dǎo)的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了。
HDL直接與富含TG的脂蛋白反應(yīng)并借此交換脂質(zhì)的新發(fā)現(xiàn)滿意地解釋了RLP的特征和RLP的上述現(xiàn)象的原因，該RLP是異常的脂蛋白，據(jù)認(rèn)為它緩慢代謝并在血液中累積。RLP是一種血清脂蛋白，其特征在于RLP不與apo B-100(VLDL、IDL和LDL的一種結(jié)構(gòu)脫輔基蛋白質(zhì))或apo A-I(HDL的一種結(jié)構(gòu)脫輔基蛋白質(zhì))的抗體反應(yīng)。因而，與正常的富含TG的脂蛋白不同，據(jù)認(rèn)為RLP不提供apoB-100的特定區(qū)域，其中該特定區(qū)域參與與HDL的反應(yīng)，因此RLP不能與HDL反應(yīng)，從而導(dǎo)致脂質(zhì)交換和RLP代謝的停滯。
因此，本發(fā)明涉及新信息的提供，即在上述脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制或在脂蛋白代謝機(jī)制中，HDL通過(guò)包含于VLDL、IDL和LDL中的apo B-100的介導(dǎo)直接與富含TG的VLDL、IDL和LDL反應(yīng)。此外，本發(fā)明涉及提供參與apo B-100的反應(yīng)的特定區(qū)域。
因而，本發(fā)明提供了下面(a)或(b)中的HDL-反應(yīng)性肽(a)具有由SEQ ID NO1描述的氨基酸序列的肽；或(b)具有由(a)描述的氨基酸序列的肽，該肽中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已通過(guò)替代、缺失、添加或插入而進(jìn)行修飾，且該肽具有對(duì)HDL膽固醇的特異結(jié)合能力。
本發(fā)明者進(jìn)一步進(jìn)行了對(duì)肽和修飾的肽作用的各種研究，且發(fā)現(xiàn)這些肽具有使膽固醇從在動(dòng)脈硬化早期產(chǎn)生的泡沫細(xì)胞中流出的作用。一種具有使膽固醇從泡沫細(xì)胞流出作用的物質(zhì)防止了蝕斑的形成、血栓的形成、泡沫細(xì)胞發(fā)展成動(dòng)脈硬化或相似的反應(yīng)。因此，肽和修飾的肽可用作改進(jìn)脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物。
本發(fā)明提供了下面(a)或(b)中的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽(a)具有由SEQ ID NO1描述的氨基酸序列的肽；或(b)具有由(a)描述的氨基酸序列的肽，該肽中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已通過(guò)替代、缺失、添加或插入而進(jìn)行修飾，且該肽誘導(dǎo)膽固醇從泡沫細(xì)胞中流出。
本發(fā)明也提供了一種藥物如外周組織膽固醇流出藥物、用于改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或用于防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物，該藥物含有HDL-反應(yīng)性肽或泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽作為活性成分。
本發(fā)明也提供了一種藥物組合物如外周組織膽固醇流出藥物、一種用于改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或一種用于防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物，該藥物包含HDL-反應(yīng)性肽或泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽和一種藥物學(xué)可接受的載體。
本發(fā)明也提供了HDL-反應(yīng)性肽或泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽在生產(chǎn)藥物時(shí)的用途，該藥物如外周組織膽固醇流出藥物、用于改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或一種用于防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物。
本發(fā)明也提供了治療外周組織中膽固醇累積、脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤或動(dòng)脈硬化的方法，該方法包含以有效量給予需要其治療的被試者HDL-反應(yīng)性肽或泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽。
在本說(shuō)明書(shū)中，用于指明氨基酸、肽、核苷酸序列、核酸等的縮寫(xiě)與IUPAC或IUB“Guideline for Preparing a SpecificationContaining a Nucleotide Sequence or an Amino Acid Sequence”(日本專利局編)的規(guī)則一致，或者與現(xiàn)有技術(shù)中慣例的編碼一致。
apo B-100的氨基酸序列和位置編號(hào)與“apolipoprotein B-100precursor-human，ACCESSIONLPHUB，PIDg71789，NCBISequence Viewer”一致。
附圖簡(jiǎn)述

圖1表示B100FL與抗-apo B-100單克隆抗體(JI-H)的反應(yīng)性；圖2表示在不結(jié)合B100FL凝膠(A)的組分中或不結(jié)合對(duì)照凝膠(B)的組分中含有的脂蛋白的分析(HPLC)結(jié)果；圖3表示在不結(jié)合B100FL凝膠的組分中和結(jié)合B100FL凝膠的組分中含有的蛋白質(zhì)的分析(SDS凝膠電泳)結(jié)果；圖4表示本發(fā)明肽在膽固醇從RAW264細(xì)胞中流出時(shí)的作用；和圖5表示本發(fā)明肽在鵪鶉動(dòng)脈硬化模型中的血管組織中的作用(A(×16)和B(×40)對(duì)照組；和C(×16)和D(×40)已向其中給予了本發(fā)明肽的組)。
實(shí)施本發(fā)明的最佳模式本發(fā)明的HDL-反應(yīng)性多肽將詳細(xì)進(jìn)行描述。
本發(fā)明的HDL-反應(yīng)性多肽的特征在于其對(duì)HDL膽固醇的特異結(jié)合能力。
如在此處所用的，措辭“具有對(duì)HDL膽固醇的特異結(jié)合能力”指一種如下情形，其中HDL-反應(yīng)性肽展示了與游離膽固醇和/或在HDL中含有的CE的特異的親和力，并從而特異地與其進(jìn)行結(jié)合。該措辭也指一種如下情形，其中游離膽固醇和/或在HDL中含有的CE展示了與HDL-反應(yīng)性肽的特異親和力，并從而特異地與其進(jìn)行結(jié)合。
SEQ ID NO1是顯示與HDL膽固醇有結(jié)合能力的特征肽的氨基酸序列。即具有這種氨基酸序列的肽具有與HDL膽固醇的特異結(jié)合能力。因此，這種肽是本發(fā)明的HDL-反應(yīng)性肽的優(yōu)選的實(shí)施方案。
SEQ ID NO1代表在apo B-100(VLDL、IDL和LDL的一種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì))中含有的區(qū)域，該區(qū)域具有51個(gè)氨基酸殘基；即apoB-100的第2,297～2,347個(gè)氨基酸殘基。
有趣的是，由SEQ ID NO1代表的區(qū)域含有一個(gè)區(qū)域，該區(qū)域被認(rèn)為是單克隆抗體“JI-H”(一種用于RLP測(cè)量中的apo B-100抗體)的抗原決定部位(J.Clin.Ligand Assay，19(3)，177(1996))。
因此，本發(fā)明中的發(fā)現(xiàn)非常好地與下面的事實(shí)吻合，即異常的富含TG的脂蛋白R(shí)LP與單克隆抗體不具有結(jié)合能力，該RLP緩慢代謝且在血液中累積。
關(guān)于HDL-反應(yīng)性肽，SEQ ID NO1的氨基酸序列可采取修飾的形式，其中部分氨基酸或者一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被修飾了，只要該肽展示與HDL膽固醇結(jié)合的能力。
在修飾(即替代、缺失、添加或插入)的程度和位點(diǎn)上沒(méi)有限制，只要具有修飾的氨基酸序列的肽展示與具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相同的作用；即該肽具有對(duì)HDL膽固醇的結(jié)合能力。突變體的例子包括具有約100個(gè)氨基酸殘基的肽，且突變體優(yōu)選地具有約6～約60個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選地為約20～約50個(gè)氨基酸殘基?；镜囊笫峭蛔凅w具有由SEQ ID NO4所描述的6個(gè)氨基酸殘基，且優(yōu)選地突變體具有由SEQ ID NO5所描述的20個(gè)氨基酸殘基。突變體的例子包括具有由SEQ ID NO2所描述的30個(gè)氨基酸殘基的肽和具有由SEQ ID NO3所描述的30個(gè)氨基酸殘基的肽。本發(fā)明的HDL-反應(yīng)性肽特別優(yōu)選地是具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽。
HDL-反應(yīng)性肽是否具有與HDL膽固醇的結(jié)合能力可依照慣例方法來(lái)證實(shí)。一個(gè)特定的例子將在下面的實(shí)施例中進(jìn)行描述。
本發(fā)明的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽將詳細(xì)進(jìn)行描述。泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽的特征在于其使膽固醇從泡沫細(xì)胞中流出的作用。
關(guān)于泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽，SEQ ID NO1的氨基酸序列可采取修飾的形式，其中部分氨基酸或者一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被修飾了，只要該肽展示使膽固醇從泡沫細(xì)胞中流出的能力。
在修飾(即替代、缺失、添加或插入)的程度和位點(diǎn)上沒(méi)有限制，只要具有修飾的氨基酸序列的肽展示與具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相同的作用；即該肽展示使膽固醇從泡沫細(xì)胞中流出。突變體的例子包括具有約100個(gè)氨基酸殘基的肽，且突變體優(yōu)選地具有約6～約60個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選地為約20～約50個(gè)氨基酸殘基?；镜囊笫峭蛔凅w具有由SEQ ID NO4所描述的6個(gè)氨基酸殘基，且優(yōu)選地突變體具有由SEQ ID NO5所描述的20個(gè)氨基酸殘基。突變體的例子包括具有由SEQ ID NO2所描述的30個(gè)氨基酸殘基的肽和具有由SEQ ID NO3所描述的30個(gè)氨基酸殘基的肽。本發(fā)明的HDL-反應(yīng)性肽特別優(yōu)選地是具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽。
泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽是否具有使膽固醇從泡沫細(xì)胞流出的能力可依照下面在實(shí)施例中描述的方法來(lái)證實(shí)。
在下文中，HDL-反應(yīng)性肽和泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽可共同稱為體發(fā)明肽”。
本發(fā)明肽可通過(guò)常規(guī)的化學(xué)合成方法進(jìn)行生產(chǎn)從而使得該肽具有所提及的氨基酸序列。該方法包含各種以慣例的固相技術(shù)和慣例的液相技術(shù)為基礎(chǔ)的肽合成技術(shù)。
特定地，肽合成方法包括逐步延伸和片段縮合。在逐步延伸中，肽是通過(guò)依照目標(biāo)氨基酸序列信息而相繼結(jié)合氨基酸殘基而生成的，借此鏈得以延伸。在片段縮合中，肽片段是通過(guò)依照目標(biāo)氨基酸序列信息合成的，合成的片段具有多數(shù)氨基酸殘基并隨后使得片段相互進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。本發(fā)明肽可通過(guò)這些方法中的任何一個(gè)來(lái)合成。
在上述肽合成中采用的縮合可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行。該方法的特定例子包括氮化物方法、混合酸酐方法、DCC方法、活性酯方法、氧化-還原方法、DPPA(二苯磷酸氮化物(diphenylphosphorylazide))方法、作為DCC方法和添加物(如1-羥基苯并三唑、N-羥基琥珀酰胺、N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酰亞胺)的組合的修飾的DCC方法和Woodward方法。在這些方法中所用的溶劑可適當(dāng)?shù)剡x自那些眾所周知在這種肽縮合反應(yīng)中應(yīng)用的溶劑。溶劑的例子包括二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、六磷酸酰胺(hexaphosphoramide)、二噁烷、四氫呋喃(THF)、乙酸乙酯及其混合物。
在肽合成反應(yīng)中，在氨基酸或肽中含有的且不參與反應(yīng)的羧基基團(tuán)一般可通過(guò)形成酯來(lái)進(jìn)行保護(hù)；如低級(jí)烷基酯如甲酯、乙酯或叔丁酯；芐酯；對(duì)甲氧基芐酯；對(duì)硝基芐酯或芳烷基酯。當(dāng)氨基酸殘基在其側(cè)鏈具有功能基團(tuán)時(shí)，可將該功能基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。例如，Tyr的羥基基團(tuán)可用乙?；鶊F(tuán)、芐基基團(tuán)、芐氧基羰基基團(tuán)或叔丁基基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。但是，這種功能基團(tuán)并非必須進(jìn)行保護(hù)。此外，Arg的胍基基團(tuán)可用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，如硝基基團(tuán)、甲苯磺?；鶊F(tuán)、2-甲氧基苯磺酰基(2-methoxybenzenesulfonyl)基團(tuán)、亞甲基-2-磺酰基基團(tuán)、芐氧基羰基基團(tuán)、異冰片基氧基羰基基團(tuán)或金剛烷氧基羰基基團(tuán)。
上述保護(hù)的氨基酸或肽或以保護(hù)的形式最終獲得的本發(fā)明肽的去保護(hù)可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行；如催化還原或采用液態(tài)氨/鈉、氟化氫、溴化氫、氯化氫、三氟乙酸、乙酸、蟻酸或甲磺酸的方法。
依照所需，這樣獲得的本發(fā)明肽可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行純化。該方法的例子包括離子交換、分配層析、凝膠層析、親和層析、高效液相層析(HPLC)和逆流分配。這些方法已慣例地應(yīng)用于肽化學(xué)領(lǐng)域中。
可選擇地，本發(fā)明肽可通過(guò)基因工程技術(shù)來(lái)生產(chǎn)，該技術(shù)利用編碼本發(fā)明肽的DNA序列。
基因工程技術(shù)可通過(guò)常規(guī)程序進(jìn)行。例如，DNA片段的合成、使得DNA片段能夠表達(dá)的載體的生產(chǎn)和載體在宿主細(xì)胞中的表達(dá)可通過(guò)與用于慣例的基因工程技術(shù)中的那些相似的技術(shù)來(lái)進(jìn)行(參見(jiàn)如Molecular Cloning 2d.Ed.，Cold Spring Harbor Lab.Press(1989)；或由Japan Biochemical Sociaty編輯的Zoku-seikagaku Jikken Kouza“Idenshi Kenkyu-ho I，II，III，”(1986))。例如，編碼本發(fā)明肽的DNA片段是通過(guò)依照由本發(fā)明提供的HDL-結(jié)合肽的氨基酸序列信息而通過(guò)常規(guī)方法生產(chǎn)的(參見(jiàn)如Science，224，1431(1984)；Biochem.Biophys.Res.Comm.，130，692(1985)或Proc.Natl.Acad.Sci.，USA.，80，5990(1983))。
更特定地，DNA片段可通過(guò)亞磷酰胺法或三酯法進(jìn)行化學(xué)合成。這種方法的例子包括使用商業(yè)上可購(gòu)得的自動(dòng)寡核苷酸合成設(shè)備的方法。雙鏈DNA片段是通過(guò)合成與單鏈DNA片段互補(bǔ)的DNA片段并使兩個(gè)片段在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行退火程序而從化學(xué)合成的單鏈DNA片段生產(chǎn)的，或者是通過(guò)使用適當(dāng)?shù)囊锖虳NA聚合酶并向單鏈DNA片段添加互補(bǔ)的DNA片段而生產(chǎn)的。
依照所需，由DNA片段編碼的氨基酸序列可以進(jìn)行修飾。這可通過(guò)已知的方法來(lái)實(shí)施。該方法的例子包括寡核苷酸定點(diǎn)特異性誘變(zoller，M.等人，Nucl.Acids Res.，10，6487-6500(1982))和盒式誘變(Well，J.等人，Gene，34，315-323(1985))。
通過(guò)利用DNA片段進(jìn)行想要的肽的生產(chǎn)或表達(dá)可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的慣例方法來(lái)進(jìn)行(參見(jiàn)如Science，224，1431(1984)；Biochem.Biophys.Res.Comm.，130，692(1985)或Proe.Natl.Acad.Sci.，USA.，80，5990(1983))。
編碼本發(fā)明肽的DNA片段可通過(guò)用能夠編碼apo B-100的現(xiàn)有DNA片段來(lái)制備。
這樣獲得的目標(biāo)肽可利用其物理或化學(xué)特征通過(guò)分離技術(shù)進(jìn)行分離和純化(參見(jiàn)如“Biochemistry Data Book II”，pp.1175-1259，第一版，第一次印刷，1980年6月23日，Tokyo Kagaku Dozin Co.Ltd.出版；Biochemistry，25(25)，8274-8277(1986)或Eur.J.Biochem.，163，313-321(1987))。
如上所述，本發(fā)明肽包括具有對(duì)HDL膽固醇特異性結(jié)合能力的肽和誘導(dǎo)膽固醇從外周組織特別是從泡沫細(xì)胞中流出的肽。因此，利用這些作用，本發(fā)明肽可用作試劑以研究解釋脂質(zhì)轉(zhuǎn)錄和代謝的機(jī)制、外周組織中動(dòng)脈硬化的發(fā)生機(jī)制或血栓的形成機(jī)制。例如，此外本發(fā)明肽可用于生產(chǎn)含有肽作為活性成分的藥物組合物。由于藥物組合物含有展示對(duì)HDL膽固醇特異性結(jié)合能力的本發(fā)明肽作為活性成分，所以該藥物組合物可用于如提供與HDL到富含TG的脂蛋白或異常脂蛋白(如RLP)的反應(yīng)性，該異常脂蛋白代謝緩慢并在血液中累積，或者用于促進(jìn)反應(yīng)。此外，由于本發(fā)明肽導(dǎo)致膽固醇從外周組織細(xì)胞中流出，所以藥物組合物可用于改善冠狀動(dòng)脈、主動(dòng)脈、外周動(dòng)脈等中的脂質(zhì)代謝及防止或治療動(dòng)脈硬化。
因而，這種脂蛋白的代謝可得到正常化或促進(jìn)，且可防止動(dòng)脈硬化的發(fā)展。因此，藥物組合物可用作改善脂質(zhì)代謝的藥物或用作防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物。
藥物組合物是這樣給予的，從而其活性成分可有效地遞送到目標(biāo)位點(diǎn)，如RLP、富含TG的脂蛋白或動(dòng)脈(特別是血管)中。例如，藥物組合物是通過(guò)食物給予的，或者將藥物組合物進(jìn)行加工從而其活性成分在腸吸收，進(jìn)而制得藥物制劑，且該制劑是經(jīng)口服給予的。這種藥物制劑可通過(guò)常規(guī)方法生產(chǎn)并以慣例的方式給予。可選擇地，本發(fā)明肽，即藥物組合物的活性成分可用脂質(zhì)或其它物質(zhì)進(jìn)行處理。
藥物組合物可用藥物遞送物質(zhì)來(lái)與藥物遞送系統(tǒng)(DDS)組合，該藥物遞送物質(zhì)結(jié)合目標(biāo)RLP或富含TG的脂蛋白。
藥物遞送物質(zhì)的例子包括在目標(biāo)脂蛋白中含有的脫輔基蛋白質(zhì)如apo B-100的抗體(優(yōu)選地為單克隆抗體)。用這種抗體修飾的本發(fā)明肽可由目標(biāo)脂蛋白實(shí)現(xiàn)有效的導(dǎo)向。
藥物組合物含有藥物學(xué)有效量的本發(fā)明肽作為活性成分，且該組合物是通過(guò)常規(guī)方法與一種或多種藥物學(xué)可接受的載體一起制備的，并借此制備藥物組合物。
本發(fā)明提供了具有編碼本發(fā)明肽的核苷酸序列的DNA片段。該DNA片段在通過(guò)如上所述的基因工程技術(shù)生產(chǎn)本發(fā)明肽中是有用的。此外，該DNA片段可用于生產(chǎn)含有DNA片段作為活性成分的藥物組合物。結(jié)果所得的藥物組合物可用作目標(biāo)為RLP、富含TG的脂蛋白或動(dòng)脈的藥物，且該藥物組合物可用于與如上所述含有本發(fā)明肽作為活性成分的藥物組合物相同的用途。
本發(fā)明肽導(dǎo)致膽固醇和/或脂質(zhì)如TG從HDL中流出。因此，通過(guò)與HDL的反應(yīng)，本發(fā)明肽可用于如上所述激活反向膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)或促進(jìn)有利的HDL代謝。例如為了使用本發(fā)明肽，可生產(chǎn)含有本發(fā)明肽或其DNA片段作為活性成分的藥物組合物，或者通過(guò)使膽固醇從HDL中流出而將本發(fā)明肽用于生產(chǎn)不含膽固醇的HDL(在下文中稱為“無(wú)脂質(zhì)的apo A-1”)(參見(jiàn)如Curr.Opin.Lipidol.，7，82-87，(1986))。
當(dāng)以上述方式使用本發(fā)明肽時(shí)，本發(fā)明肽與HDL進(jìn)行反應(yīng)，從而在血液中獲得無(wú)脂質(zhì)的apo A-1的陽(yáng)性產(chǎn)物。因而，除此之外，本發(fā)明肽通過(guò)強(qiáng)制膽固醇的流出可相當(dāng)有效地用于(經(jīng)由HDL)防止膽固醇在組織中的沉積，或者防止血管的動(dòng)脈硬化或再狹窄。
如上所述，本發(fā)明肽具有直接的使膽固醇從動(dòng)脈泡沫細(xì)胞中流出的作用。因此，即使將本發(fā)明肽用于已經(jīng)發(fā)展了動(dòng)脈硬化的血管中，本發(fā)明肽在例如防止動(dòng)脈硬化的發(fā)展或治療動(dòng)脈硬化中、或者經(jīng)由膽固醇的流出來(lái)防止血管的再狹窄中也是相當(dāng)有用的。
本發(fā)明肽作為藥物組合物的用途包含其體外的用途。
如上所述，當(dāng)本發(fā)明肽與HDL進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，則產(chǎn)生了無(wú)脂質(zhì)的apo A-1，且無(wú)脂質(zhì)的apo A-1在預(yù)防或治療上述疾病或病理狀況中是有用的。本發(fā)明肽的體外用途的例子包括使用含有本發(fā)明肽作為有效成分的柱子的體外循環(huán)。在體外循環(huán)的方式上沒(méi)有限制，只要該方法使得本發(fā)明肽能夠有效地與試驗(yàn)血液樣品(HDL)相接觸。例如，在其上固定有本發(fā)明肽的載體是優(yōu)選采用的。除使用在其上固定本發(fā)明肽的載體的方法之外，體外循環(huán)可通過(guò)在日本專利No.2835923中描述的方法實(shí)施。
實(shí)施例本發(fā)明下一步將通過(guò)實(shí)施例來(lái)更加詳細(xì)地加以描述，該實(shí)施例不應(yīng)該理解為限制本發(fā)明的。
實(shí)施例1(1)肽合成具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽(B100FL)是依照常規(guī)方法化學(xué)合成的。
特定地，該肽是通過(guò)Fmoc方法合成的，從而使得可以用Fmoc-NH-SAL樹(shù)脂(Watanabe Kagaku的產(chǎn)品)獲得上述序列。保護(hù)的含肽樹(shù)脂用溶劑混合物(TFA∶苯酚∶苯硫基甲烷∶1，4-二巰基丁烷(1，4-butanedithiol)∶水＝82.5∶5∶5∶2.5∶5)處理3小時(shí)，從而除去保護(hù)基團(tuán)。
粗產(chǎn)物是通過(guò)如下所述的反相HPLC進(jìn)行純化的，從而得到目標(biāo)肽。
<反相HPLC>
柱Cosmosil 5C18MS(10×250mm；Nacalai Tesque)洗脫液含有0.1％TFA的水/乙腈(乙腈的線性梯度；2.5mL/分)這樣獲得的目標(biāo)肽可通過(guò)質(zhì)譜分析法(Perseptive Biosystems；Voyager DE/矩陣輔助的激光解吸電離-飛行時(shí)間MALDI-TOF/矩陣α-氰基-4-羥基肉桂酸)和氨基酸分析(在密封的的試管中于110℃在恒定沸騰的鹽酸中水解24小時(shí)(Hitachi L-8500 Amino AcidAnalyzer))進(jìn)行分析。
(2)與抗-apo B-100的單克隆抗體(JI-HJ.Clin.LigandAssay，19(3)，177(1999))的反應(yīng)性反應(yīng)性是依照常規(guī)方法用由上面獲得的肽(B100FL)覆蓋的平板通過(guò)ELISA來(lái)證實(shí)的(參見(jiàn)如公開(kāi)的日本專利申請(qǐng)(Kokai)No.4-104798)。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)B100FL具有與JI-H的特定反應(yīng)性(圖1Y-軸和X-軸分別代表吸收值(OD450)和固定的肽的濃度(ng/mL))。
(3)與HDL的反應(yīng)性將上述(1)中獲得的肽(B100FL，0.1mg)加入到親和凝膠(25μL)中，在該凝膠中已固定了抗-apo B-100的單克隆抗體(JI-H)，由此制備了B100FL-結(jié)合的親和凝膠。對(duì)照凝膠是通過(guò)以上述相似的方式用PBS(不含B100FL)處理凝膠來(lái)制備的。
將人血漿(1mL)加入到親和凝膠(2mL)中，在該凝膠中已固定了抗-apo A-1的單克隆抗體，由此導(dǎo)致HDL特異性地與凝膠結(jié)合。結(jié)合的HDL是用3M的硫氰酸鈉洗脫的，且將這樣獲得的洗脫液的緩沖液通過(guò)用脫鹽柱而改變?yōu)镻BS，由此制備了HDL樣品。
前述固定了抗-apo A-I單克隆抗體的親和凝膠和固定了抗-apoB-100單克隆抗體(JI-H)的親和凝膠是依照常規(guī)方法制備的(日本專利出版物(kokoku)No.7-104351)。
使HDL樣品(含有20μg apo A-I)與B100FL-結(jié)合的親和凝膠在室溫反應(yīng)30分鐘。隨后，使反應(yīng)混合物放置15分鐘，借此導(dǎo)致凝膠沉淀，從而從反應(yīng)混合物中去除凝膠。
不結(jié)合凝膠的組分(在下文中稱為“B100FL-不結(jié)合的組分”)和結(jié)合凝膠的組分(在下文中稱為“B100FL-結(jié)合的組分”)是依照常規(guī)方法分別進(jìn)行下面描述的分析的。
總膽固醇水平總膽固醇水平是依靠自動(dòng)分析儀(TBA20R；Toshiba)用測(cè)量膽固醇水平的試劑(L-TCII，Kyowa Medex Co.，Ltd.)確定的。
脂蛋白分析脂蛋白是通過(guò)監(jiān)控由膽固醇產(chǎn)生的顏色而由脂蛋白分析系統(tǒng)的HPLC來(lái)分析的(Lipopropax XL，洗脫液TSK洗脫液LP-1，1mL/分，樣品體積100μL；Tosoh)。
蛋白質(zhì)濃度每一蛋白質(zhì)濃度是通過(guò)測(cè)量吸收值(OD280)確定的；或者通過(guò)勞里(Lowry)方法確定，在該方法中使每一個(gè)樣品(該樣品已用乙醇-乙醚脫脂)進(jìn)行顏色反應(yīng)。
蛋白質(zhì)分析蛋白質(zhì)是用SDS-凝膠電泳進(jìn)行分析的。特定地，使每一個(gè)樣品進(jìn)行脫脂處理并用1％的SDS進(jìn)行溶解，隨后用緩沖液(2％SDS/10％甘油/0.005％BPB/20％2-巰基乙醇)進(jìn)行處理，借此制備用于電泳的樣品。結(jié)果所得的樣品是依照常規(guī)方法在4-20％的梯度凝膠上進(jìn)行電泳的。
<結(jié)果>
圖2表示通過(guò)脂蛋白分析獲得的結(jié)果，該脂蛋白包含于不結(jié)合B100FL凝膠的組分(圖2A)和不結(jié)合對(duì)照凝膠的組分(圖2B)中。在圖2中，實(shí)線表示通過(guò)將每一個(gè)組分都用作樣品的分析獲得的結(jié)果；且虛線表示通過(guò)將HDL用作樣品的分析獲得的結(jié)果(基線)。
下面的表1表示通過(guò)對(duì)不結(jié)合B100FL凝膠的組分(表1中為“B100FL”)和不結(jié)合對(duì)照凝膠(表1中為“PBS”)的組分的每一分析所獲得的結(jié)果。每一分析都是關(guān)于總膽固醇水平(表1中為“膽固醇”)、由脂蛋白分析(圖2)獲得的HDL-膽固醇水平(表1中為“HDL-C”)、由測(cè)量吸收值確定的蛋白質(zhì)濃度(表1中為“O.D.280”)和通過(guò)顏色反應(yīng)測(cè)量的蛋白質(zhì)濃度(表1中為“脫脂蛋白質(zhì)”)而進(jìn)行的。
表1

從表1顯而易見(jiàn)的是，用B100FL-結(jié)合的凝膠處理的HDL樣品的總膽固醇水平是0.25mg/dl，該值是用對(duì)照凝膠處理的HDL樣品的值的約1/15。此外，圖2(脂蛋白分析)包括在用對(duì)照凝膠處理的HDL樣品中屬于膽固醇(HDL-C)的峰，但不包括在用B100FL-結(jié)合的凝膠處理的HDL樣品中的峰。
蛋白質(zhì)濃度是通過(guò)測(cè)量吸收值和通過(guò)顏色反應(yīng)來(lái)確定的。發(fā)現(xiàn)用B100FL-結(jié)合的凝膠處理的HDL樣品的蛋白質(zhì)濃度幾乎與用對(duì)照凝膠處理的HDL樣品中的一樣(表1)。
蛋白質(zhì)分析是通過(guò)SDS-凝膠電泳進(jìn)行的。結(jié)果顯示于圖3中。
在圖3中，每一個(gè)泳道代表下面的樣品。
標(biāo)準(zhǔn)(低)低分子量標(biāo)準(zhǔn)B100FL(+)未結(jié)合的B100FL-未結(jié)合的組分B100FL(+)結(jié)合的B100FL-結(jié)合的組分B100FL(-)未結(jié)合的對(duì)照凝膠-未結(jié)合的組分B100FL(-)結(jié)合的對(duì)照凝膠-結(jié)合的組分B100FL(-)/凝膠(-)HDL未用凝膠處理的HDLHDL-4未用凝膠處理的HDL-組分4LDL-3未用凝膠處理的LDL-組分3標(biāo)準(zhǔn)(高)高分子量標(biāo)準(zhǔn)在圖3中，不僅在未處理的HDL樣品中，而且在已用B100FL-結(jié)合的凝膠處理的樣品中，在分子量28,000位置附近存在一條代表A-1(HDL的主要脫輔基蛋白質(zhì))的條帶作為主要條帶。此外，也存在代表除A-I之外的HDL-結(jié)構(gòu)化蛋白質(zhì)(apo C，apo A-II，apo E，apo A-IV等)的條帶，且在這些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)比例中未發(fā)現(xiàn)差異。
因此，在通過(guò)用HDL與B100FL反應(yīng)而獲得的反應(yīng)溶液中，只存在蛋白質(zhì)(例如HDL的apo A-I)，且膽固醇和膽固醇酯基本不存在。上述結(jié)果顯示B100FL與HDL的膽固醇或膽固醇酯具有相互作用，且具有使膽固醇和膽固醇酯從HDL的脫輔基蛋白質(zhì)顆粒中流出的作用。
實(shí)施例2肽合成具有在表2中顯示的氨基酸序列的每一個(gè)肽都是以與在實(shí)施例1中描述的相似的方式合成的。
表2

實(shí)施例3膽固醇流出試驗(yàn)對(duì)前述的肽關(guān)于膽固醇從RAW264細(xì)胞(動(dòng)脈粥樣硬化的模型)中流出的作用進(jìn)行了檢查。
特定地，將RAW264細(xì)胞(小鼠單核細(xì)胞白血病品系)加入到補(bǔ)充了10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中，從而制備了具有4×105細(xì)胞/mL的濃度的樣品。將樣品(1mL)的等份試樣加入到12-孔平板的每一個(gè)孔中，隨后在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天(37℃)。將每一個(gè)孔中的培養(yǎng)基去除，并用1mL含有0.2％BSA和20mM谷氨酰胺的DMEM(在下文中稱為“DMEM”)洗滌孔中的細(xì)胞1次。隨后，將DMEM中乙?；腖DL溶液(40μg/mL，1mL)加入到每一個(gè)孔中，接著在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)(37℃)，借此乙?；腖DL進(jìn)入到細(xì)胞中。將細(xì)胞用補(bǔ)充了0.2％BSA的PBS洗滌2次。其后，將DMEM中的二丁基cAMP溶液(0.3mM，1mL)加入到每一個(gè)孔中，隨后在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)(37℃)。
將試驗(yàn)肽(20μL)加入到每一個(gè)孔中從而獲得20、2.0或0.2μg/mL的終濃度，隨后在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)(37℃)。
24小時(shí)之后，將每一個(gè)孔中的上清液收集到微量試管中，并將該微量試管于10,000rpm離心5分鐘。上清液的膽固醇水平是依靠上述的自動(dòng)分析儀進(jìn)行測(cè)量的。
使每一個(gè)試驗(yàn)的肽溶于DMSO(5mg/mL)中，并將這樣形成的溶液用DMEM稀釋，從而獲得1mg/mL的濃度。隨后，將結(jié)果所得的溶液用DMEM稀釋10倍或100倍，從而制得試驗(yàn)樣品。此外，為了制備對(duì)照樣品，僅將DMSO用DMEM稀釋以得到0.4、0.04或0.004％的終濃度；同時(shí)為了制備正對(duì)照樣品，將脫脂的HDL用DMEM稀釋，從而獲得2.5、5.0或10μg/mL的濃度。
結(jié)果顯示于圖4中。
可發(fā)現(xiàn)3個(gè)肽(P51(B-100FL，SEQ ID NO1)、PS505(SEQ IDNO2)和PS509(SEQ ID NO3))依賴于所應(yīng)用的肽濃度展示強(qiáng)的使膽固醇從RAW264細(xì)胞(被乙?；疞DL泡沫化)中流出的作用。然而，發(fā)現(xiàn)4個(gè)不含有由6個(gè)氨基酸(相應(yīng)于B-100的第2,321-2,326個(gè)氨基酸)組成的序列的肽(P21、PS506、PS507和PS508)不展示該作用。
令人信服地，含有6個(gè)氨基酸(B-100的第2,321-2,326個(gè)氨基酸)(SEQ ID NO4)序列的肽和含有20個(gè)氨基酸(B-100的第2,307-2,326個(gè)氨基酸)(SEQ ID NO5)序列的肽展示膽固醇流出作用，并且具有抗動(dòng)脈硬化作用。
實(shí)施例4用動(dòng)脈硬化模型所做的作用試驗(yàn)將膽固醇(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.)和玉米油(CornGerm Oil 100；Ajinomoto Co.，Inc.)混合入商業(yè)上可購(gòu)得的飼料(Natural Pet Foods產(chǎn)品，“Chicks and nestlings(Quail)”)中以分別獲得2％和15％的終濃度，從而制備高膽固醇的飼料。
使健康的鵪鶉在能夠自由地?cái)z入高膽固醇飼料的情況下飼養(yǎng)8周。在開(kāi)始飼喂的第5周，將試驗(yàn)肽(B-100FL)在鹽中的溶液(1.0mg/mL)以2～3天的間隔每周2次給予肱(翅)靜脈中(200μL；200μg/個(gè)體)。以與上述相似的方式，僅將鹽給予對(duì)照組的鵪鶉。
在對(duì)鵪鶉進(jìn)行飼喂8個(gè)星期之后，將每一個(gè)鵪鶉的頭切下進(jìn)行放血，從而獲得主動(dòng)脈樣品。迅速將主動(dòng)脈樣品在固定溶液(10％福爾馬林)中固定3天。隨后制備了弓動(dòng)脈(在那里最容易發(fā)生動(dòng)脈硬化病灶)的組織樣品(厚度為4μm的冷凍切片)。將組織樣品進(jìn)行蘇木精和伊紅染色(常規(guī)染色)，并進(jìn)行油紅染色(脂肪染色)，隨后在顯微鏡下進(jìn)行檢查。
在對(duì)照組的組織樣品中，觀察到了下面的情況血管內(nèi)膜相當(dāng)程度的加厚、大量脂質(zhì)在內(nèi)膜加厚部分的累積、脂質(zhì)向許多部分(不僅是內(nèi)膜而且是中膜)的滲入，以及組織包括脂質(zhì)，且平滑肌細(xì)胞在彈性纖維中存在。
在向其中給予了試驗(yàn)肽的組的組織樣品中，在內(nèi)膜中觀察到了小量脂質(zhì)的累積。然而，累積的脂質(zhì)的大小和量都小，且未觀察到血管內(nèi)膜的形態(tài)病癥。此外，發(fā)現(xiàn)不存在內(nèi)膜的加厚和脂質(zhì)向中膜的滲入。
圖5表示組織樣品的典型圖象。在圖5中，A(×16)和B(×40)代表對(duì)照組的組織樣品的圖象，C(×16)和D(×40)代表試驗(yàn)組的組織樣品的圖象。
在上述中顯而易見(jiàn)的是，本發(fā)明的肽通過(guò)防止脂質(zhì)向血管的滲入而在早期抑制了動(dòng)脈硬化病灶的出現(xiàn)；并且通過(guò)使?jié)B入的脂質(zhì)從血管中流出而阻止了該病灶的發(fā)展。
實(shí)施例5以與在實(shí)施例1(3)中描述的相似的方式，檢查了HDL與PS509(在實(shí)施例2中合成)的反應(yīng)性(作為試驗(yàn)肽，應(yīng)用了B-100FL或PS509，且應(yīng)用的HDL樣品的總膽固醇濃度為12.7mg/dl)。
當(dāng)用B-100FL處理HDL時(shí)，總膽固醇濃度水平減少了約72個(gè)百分點(diǎn)，而當(dāng)用PS509處理HDL時(shí)，總膽固醇濃度水平減少了約48個(gè)百分點(diǎn)。
工業(yè)應(yīng)用本發(fā)明提供了一種具有新氨基酸序列的肽，該氨基酸序列具有HDL-膽固醇-特異性結(jié)合能力。同樣地，本發(fā)明提供了一種導(dǎo)致膽固醇從外周組織中流出的肽。這些肽可用作多種疾病的藥物，該疾病由如動(dòng)脈硬化、脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤和外周組織膽固醇累積所導(dǎo)致。
序列表<110>Japan Immuno Research Laboratories Co.，Ltd.
<120>高密度脂蛋白反應(yīng)性肽<130>OP0041<140>
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<150>JP P2001-144304<151>2001-05-15<160>5<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>51<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列描述基于apoB-100設(shè)計(jì)的肽<400>1Leu Leu Asp Gln Leu Gly Thr Thr Ile Ser Phe Glu Arg Ile Asn Asp1 5 10 15Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val Ile Asn Leu Ile Gly Asp Phe20 25 30Glu Val Ala Glu Lys Ile Asn Ala Phe Arg Ala Lys Val His Glu Leu35 40 45Ile Glu Arg50<210>2<211>30<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列描述基于apoB-100設(shè)計(jì)的肽<400>2Leu Leu Asp Gln Leu Gly Thr Thr Ile Ser Phe Glu Arg Ile Asn Asp1 5 10 15Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val Ile Asn Leu Ile Gly20 25 30<210>3<211>30<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列描述基于apoB-100設(shè)計(jì)的肽<400>3Phe Glu Arg Ile Asn Asp Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val Ile1 5 10 15Ash Leu Ile Gly Asp Phe Glu Val Ala Glu Lys Ile Asn Ala20 25 30<210>4<211>6<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列描述基于apoB-100設(shè)計(jì)的肽<400>4Val Ile Asn Leu Ile Gly1 5<210>5<211>20<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列描述基于apoB-100設(shè)計(jì)的肽<400>5
Phe Glu Arg Ile Asn Asp Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val Ile1 5 10 15Asn Leu Ile Gly20
權(quán)利要求
1.一種下面(a)或(b)的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽(a)具有由SEQ ID NO1描述的氨基酸序列的肽；或(b)具有由(a)描述的氨基酸序列的肽，該肽中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已通過(guò)替代、缺失、添加或插入而進(jìn)行修飾，且該肽具有對(duì)高密度脂蛋白膽固醇的特異結(jié)合能力。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽，該肽具有由SEQID NO4描述的氨基酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽，該肽具有由SEQID NO5描述的氨基酸序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽，該肽具有由SEQID NO1、2或3描述的氨基酸序列。
5.一種下面(a)或(b)的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽(a)具有由SEQ ID NO1描述的氨基酸序列的肽；或(b)具有由(a)描述的氨基酸序列的肽，該肽中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已通過(guò)替代、缺失、添加或插入而進(jìn)行修飾，且該肽誘導(dǎo)膽固醇從泡沫細(xì)胞中流出。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽，該肽具有由SEQ IDNO4描述的氨基酸序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽，該肽具有由SEQ IDNO5描述的氨基酸序列。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽，該肽具有由SEQ IDNO1、2或3描述的氨基酸序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求5的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽，該肽具有對(duì)高密度脂蛋白膽固醇的特異結(jié)合能力。
10.一種藥物，該藥物含有在權(quán)利要求1～4的任何一項(xiàng)中所述的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽作為活性成分。
11.一種藥物，該藥物含有在權(quán)利要求5～9的任何一項(xiàng)中所述的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽作為活性成分。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11的藥物，該藥物是防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物、改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或?qū)е履懝檀紡耐庵芙M織中流出的藥物。
13.一種含有在權(quán)利要求1～4的任何一項(xiàng)中所述的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽和藥物學(xué)可接受的載體的藥物組合物。
14.一種含有在權(quán)利要求5～9的任何一項(xiàng)中所述的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽和藥物學(xué)可接受的載體的藥物組合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的藥物組合物，該藥物組合物是防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物、改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或?qū)е履懝檀紡耐庵芙M織中流出的藥物。
16.在權(quán)利要求1～4的任何一項(xiàng)中所述的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用。
17.在權(quán)利要求5～9的任何一項(xiàng)中所述的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽和藥物學(xué)可接受的載體在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17的應(yīng)用，其中該藥物是防止或治療動(dòng)脈硬化的藥物、改善脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤的藥物或?qū)е履懝檀紡耐庵芙M織中流出的藥物。
19.一種治療動(dòng)脈硬化、脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤或膽固醇在外周組織中累積的方法，該方法特征在于向需要其治療的被試者給予有效量的在權(quán)利要求1～4的任何一項(xiàng)中所述的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽。
20.一種治療動(dòng)脈硬化、脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤或膽固醇在外周組織中累積的方法，該方法特征在于向需要其治療的被試者給予有效量的在權(quán)利要求5～9的任何一項(xiàng)中所述的泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽。
全文摘要
如在下面(a)或(b)中表示的高密度脂蛋白反應(yīng)性肽或泡沫細(xì)胞反應(yīng)性肽(a)包含由SEQ ID NO1描述的氨基酸序列的肽；和(b)包含某個(gè)氨基酸序列的肽，該氨基酸序列通過(guò)對(duì)在上面(a)中說(shuō)明的氨基酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的替代、缺失、添加或插入而得到，且該肽能夠特異地結(jié)合高密度脂蛋白膽固醇或?qū)⒛懝檀紡呐菽?xì)胞中收回。因而，提供了具有新的氨基酸序列的肽，且該肽能夠特異地結(jié)合HDL膽固醇或?qū)⒛懝檀紡呐菽?xì)胞中收回。這些肽可用作治療由動(dòng)脈硬化、脂質(zhì)代謝錯(cuò)誤和外周膽固醇沉著導(dǎo)致的各種疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1509294SQ02809930
公開(kāi)日2004年6月30日 申請(qǐng)日期2002年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月15日
發(fā)明者新見(jiàn)學(xué), 金谷一司, 足立正一, 一, 司 申請(qǐng)人:株式會(huì)社日本抗體研究所