專利名稱：含有β－帕拉酮或其衍生物、類似物的藥用組合物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用組合物和配方，以及將這些藥用組合物和配方用藥的方法，其中含有與增溶載體分子混合的β-帕拉酮(β-lapachone)或其衍生物、類似物，用以增強(qiáng)β-帕拉酮在不同溶劑系統(tǒng)中的溶解度。
背景技術(shù)：
僅在2001年美國就診斷出超過122萬新癌癥病例。隨著每年死亡人數(shù)超過563,000，癌癥已經(jīng)成為排在心臟病后第二大致死因(UBS Warburg“Disease DynamicsThe Cancer Market”，Nov.8，2000)。如果癌癥發(fā)現(xiàn)得早，手術(shù)與放射療法都可能會(huì)起到治療作用，但是針對轉(zhuǎn)移性癌癥，現(xiàn)有的藥物療法通常只能減輕癥狀，很少獲得長期治愈。即使是新進(jìn)入市場的化學(xué)療法，對病體的生存期的延長也只能以月計(jì)算，而不能以年計(jì)算，因此，依舊需要有效的新型藥劑，與現(xiàn)存的藥劑結(jié)合使用，作為一線療法，在治療耐久性腫瘤中作為二線和三線療法。
過去，最成功的藥物治療方式是將兩種或多種藥劑結(jié)合使用，其中每種藥劑具有不同的作用機(jī)理，并且單獨(dú)使用時(shí)都具有抗腫瘤活性。盡管它們的作用機(jī)理不同，當(dāng)前用于癌癥化學(xué)療法的大部分試劑都具有嚴(yán)重?fù)p害DNA的相同特性，因此被命名為“DNA損害劑”，其中包括烷化劑、鉑類似物、anthracycline、喜樹堿類的拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。放射療法具有相似的作用。大部分DNA損害劑以及微管靶劑(例如，paclitaxel)造成了細(xì)胞在細(xì)胞周期G2/M轉(zhuǎn)化期時(shí)的停止，G2/M轉(zhuǎn)化期是一個(gè)重要的細(xì)胞周期檢測點(diǎn)，在此期間細(xì)胞進(jìn)行DNA修補(bǔ)，如果DNA損傷不可修補(bǔ)，就會(huì)啟動(dòng)細(xì)胞死亡程序。最近，人們更加重視鑒別深入開發(fā)細(xì)胞檢查點(diǎn)功能的新型治療劑。
β-帕拉酮(3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-萘[1，2-b]吡喃-5，6-二酮)是一種醌，由拉帕醇(一種萘醌)制得，拉帕醇可以從lapacho樹(Tabebuia avellanedae)中分離出來，lapacho樹屬于梓屬植物科(Bignoniaceae)。拉帕醇和β-帕拉酮(帶有編號(hào))具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu) Lapachol拉帕醇 β-帕拉酮β-帕拉酮以及其中間體、衍生物、類似物參見Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem，1993。盡管機(jī)理不同，與喜樹堿、topotecan相同，β-帕拉酮抑制了DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem，1993)。
業(yè)內(nèi)已經(jīng)公開了大量的β-帕拉酮類似物，例如參見PCT國際專利申請PCT/US93/07878(WO94/04145)，其全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文，和美國專利6,245,807，其全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文，其中各種取代基可以附著在β-帕拉酮化合物的3-、4-位。PCT國際專利申請PCT/US00/10169(WO00/61142)的全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文，其中公開了β-帕拉酮在3-位帶有多種取代基，而且取代基還替代了2-位的甲基。美國專利5,763,625與5,824,700和5,969,163公開了在2-、3-、4-位帶有多種取代基的類似物與衍生物，上述專利所有內(nèi)容通過在此引述合并于本文。此外，大量雜志報(bào)道了在下列一個(gè)或多個(gè)位上帶有取代基的β-帕拉酮類似物與衍生物2-、3-、8-和/或9-位(參見Sabba et al.，J.Med.Chem.27990-994，1984)(取代基在2-、8-和9-位)；(Molina Portela and Stoppani，Biochem Pharm51275-283，1996)(取代基在2-和9-位)；Goncalves et al.，Molecular and Biochemical Parasitology 1167-176(1998)(取代基在2-、3-位)。
經(jīng)證實(shí)，作為單一試劑，濃度范圍通常在1-10μM(IC50)的β-帕拉酮具有有效的抗腫瘤活性，抑制人癌細(xì)胞系。經(jīng)證實(shí)，來源于早幼粒細(xì)胞性白血病病體(Planchon et al.，Cancer Res.，55(1996)3706)、前列腺病體(Li，C.J.et al.，Cancer Res.，55(1995)3712)、惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤病體(Weller，M.et al.，Int.J.Cancer，73(1997)707)、肝癌病體(Lai，C.C.et al.，Histol Histopathol，13(1998)8)、結(jié)腸病體(Huang，L.，et al.，Mol Med，5(1999)711)、乳腺病體(Wuertzberger，SM et al Cancer Res.，58(1998)1876)、卵巢病體(Li C J et al，Proc Natl Acad.Sci USA，96(23)(1999)13369-74)、胰腺病體(Li，Y.，et al.，Mol Med，6(2000)1008；Li，Y.Z.，Mol Med，5(1999)232)的變性細(xì)胞系和多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系(其中包括抗藥系(Li，Y.，Mol Med，6(2000)1008))具有細(xì)胞毒性。在正常新生或分裂繁殖的人PBMC中未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞毒性作用(Li，Y.，Mol Med，6(2000)1008)。
經(jīng)證實(shí)，β-帕拉酮是DNA修補(bǔ)抑制劑，使細(xì)胞對DNA損害劑敏感，其中包括放射作用(Boothman，D.A.et al.，Cancer Res.，47(1987)5361；Boorstein，R.J.，et al.，Biochem.Biophys.Commun.，117(1983)30)。盡管細(xì)胞致死的確切細(xì)胞內(nèi)靶與機(jī)理仍不得而知，但是也已經(jīng)證實(shí)β-帕拉酮以新作用機(jī)理在生命體外有效地抑制人DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem.，268(1993)22463)和人DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II(Frydman，B.et al.，Cancer Res.，57(1997)620)。拓?fù)洚悩?gòu)酶“抑制劑”(例如喜樹堿、etoposide、阿酶素)使共價(jià)拓?fù)洚悩?gòu)酶-DNA復(fù)合體穩(wěn)定，并導(dǎo)致拓?fù)洚悩?gòu)酶為介質(zhì)的DNA斷裂，與拓?fù)洚悩?gòu)酶“抑制劑”不同，β-帕拉酮與酶直接作用抑制其催化能力，并阻止可斷裂的復(fù)合體生成(Li，C.J.，et al.，J.Biol.Chem.，268(1993)22463)，或直接作用于復(fù)合體本身，造成斷裂的DNA重新連接，并從DNA上分離酶(Krishnan，P.et al.，Biochem.Pharm.，60(2000)1367)。β-帕拉酮及其衍生物也被合成出來，作為抗病毒劑和抗寄生物劑進(jìn)行檢測(Goncalves，A.M.，et al.，Mol.Biochem.Parasitology，1(1980)167-176；Schaffner-Sabba，K.，et al.，J.Med.Chem.，27(1984)990-994)。
更具體地講，β-帕拉酮表現(xiàn)出作用是，針對各種人類癌細(xì)胞系，在不損害DNA和未喪失獨(dú)立的p53狀態(tài)下，其斷裂了DNA的重新連接，造成了細(xì)胞周期在G1和/或S期的延遲，從而既導(dǎo)致了細(xì)胞程序死亡，又導(dǎo)致了壞死細(xì)胞死亡(Li，Y.Z.et al(1999)；Huang，L.et al.))。拓?fù)洚悩?gòu)酶I是解開構(gòu)成染色體DNA的酶。為了讓細(xì)胞使用遺傳信息合成蛋白質(zhì)，必須將染色體解開；而β-帕拉酮保持染色體緊密盤繞，以至細(xì)胞不能產(chǎn)生蛋白質(zhì)。結(jié)果，細(xì)胞停止生長。因?yàn)榘┘?xì)胞不斷復(fù)制，并阻止正常細(xì)胞中一些限制復(fù)制的機(jī)理起作用，所以癌細(xì)胞比正常細(xì)胞更易受到拓?fù)洚悩?gòu)體酶的抑制。
腫瘤細(xì)胞中β-帕拉酮另一可能的細(xì)胞內(nèi)靶是酶NAP(P)H醌氧化還原酶(NQO1)。生化研究表明，由NQO1還原β-帕拉酮，造成了醌與氫醌狀態(tài)之間的“無益循環(huán)”，伴隨著還原性NADH或NAD(P)H的喪失(Pink，J.J.et al.，J.Biol.Chem.，275(2000)5416)。這些還原性酶輔助因子的枯竭可能是β-帕拉酮治療后激活細(xì)胞程序死亡路徑的關(guān)鍵因素。
作為這些發(fā)現(xiàn)的結(jié)果，人們正在積極地開發(fā)用于治療癌癥和腫瘤的β-帕拉酮。例如，專利WO00/61142中公開了一種治療癌癥的方法和組合物，該方法包括將有效用量的第一化合物、G1或S期藥劑、(例如β-帕拉酮)與G2/M期藥劑(例如taxane衍生物)結(jié)合使用。此外，美國專利6,245,807公開了在其它β-帕拉酮衍生物中使用β-帕拉酮，用于治療人前列腺病。
然而，在開發(fā)適合非腸道與局部用藥的含有β-帕拉酮藥用配方中存在一個(gè)障礙，那就是β-帕拉酮在藥用溶劑中溶解度很低。β-帕拉酮的水溶解度很低，并且在用于局部和非腸道用藥的普通溶劑系統(tǒng)中僅有有限的溶解度，特別是靜脈和通過皮膚輸送藥物。因此，依舊需要用于非腸道和局部用藥的β-帕拉酮改進(jìn)配方，使兩種用藥形式對于施用的病體都安全可靠，并具有快速的生物可用性。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及治療哺乳動(dòng)物癌癥、含有β-帕拉酮的藥用組合物，其克服了現(xiàn)有業(yè)內(nèi)組合物的缺點(diǎn)與障礙。更具體地講，本發(fā)明涉及藥用組合物，其含有β-帕拉酮、或其衍生物、類似物和藥用增溶載體分子，用于治療哺乳動(dòng)物癌癥，包括肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、前列腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑素瘤、非黑素瘤皮膚癌，以及增生癥和皮膚病、例如牛皮癬。藥用組合物可以與藥用增溶載體分子混合，形成單一的組合物、或包含物復(fù)合體。優(yōu)選的藥用增溶載體分子是水增溶載體分子、或油基增溶載體分子。
本發(fā)明提供了β-帕拉酮或其衍生物、類似物和藥用增溶載體分子的藥用組合物，該組合物增強(qiáng)了β-帕拉酮的溶解度，使其在哺乳動(dòng)物體內(nèi)具有生物可用性，適用于非腸道和局部用藥。溶液中β-帕拉酮濃度優(yōu)選的是至少1毫克/毫升，更優(yōu)選的是至少3毫克/毫升，更甚優(yōu)選的是至少5毫克/毫升。對于濃縮藥用組合物，β-帕拉酮濃度設(shè)計(jì)為10毫克/毫升或更高。
本發(fā)明還提供了治療哺乳動(dòng)物癌癥、與taxane衍生物或其它抗癌劑結(jié)合使用的藥用組合物，該藥用組合物含有β-帕拉酮和藥用增溶載體分子。
本發(fā)明還提供了與藥用增溶載體分子混合的β-帕拉酮或其衍生物、類似物的配方，其中該混合物冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，具有了有效的溶解度。
本發(fā)明還提供了治療哺乳動(dòng)物癌癥的方法，將本發(fā)明的藥用組合物和配方給藥于病體。
本發(fā)明還提供了治療癌癥和皮膚病的方法，將β-帕拉酮的衍生物或類似物給藥于病體，例如4-乙酸基-β-帕拉酮或4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮。
本發(fā)明還提供了包括一個(gè)或多個(gè)藥用組合物瓶劑的藥用試劑盒，該藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物。如果需要，該試劑盒可以包括一個(gè)或多個(gè)不同的常規(guī)藥用試劑盒的瓶劑，例如含有一種或多種藥用載體的瓶劑、補(bǔ)充瓶劑等。印刷說明也可以放入試劑盒中，既可以作為插入物也可以作為標(biāo)簽，指示各瓶劑用藥量、用藥準(zhǔn)則和各瓶劑的混合準(zhǔn)則。
為了理解本發(fā)明下文的詳細(xì)描述，為了可以更好地理解本發(fā)明對業(yè)內(nèi)的貢獻(xiàn)，上述描述概括地闡明了本發(fā)明的重要特點(diǎn)。結(jié)合附圖參考下文的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它目的與特點(diǎn)將會(huì)更加明了。然而，可以理解，設(shè)計(jì)附圖的目的僅在于說明本發(fā)明，而不是作為對本發(fā)明范圍的限定，本發(fā)明范圍應(yīng)當(dāng)參照所附的權(quán)利要求。
附圖簡述參照附圖可以更好地理解本發(fā)明

圖1是說明不同增溶劑水溶液中β-帕拉酮相對溶解度的條形圖。
圖2是說明羥丙基-β-環(huán)糊精濃度(HPBCD)作用下β-帕拉酮溶解度的條形圖。
圖3是20％羥丙基-β-環(huán)糊精濃度下5毫克/毫升β-帕拉酮溶液的HPLC色譜圖。
圖4是說明β-帕拉酮和Taxol_抑制癌細(xì)胞存活的圖表。
圖5是由MTT測定、說明β-帕拉酮與Taxol_結(jié)合使用抑制卵巢腫瘤細(xì)胞系生長的圖表。
圖6是說明OVCAR-3卵巢腫瘤細(xì)胞系中β-帕拉酮和Taxol_藥物與藥物協(xié)同作用的測異輻射熱儀記錄。
圖7說明MDAH-2774卵巢腫瘤細(xì)胞系中β-帕拉酮和Taxol_藥物與藥物協(xié)同作用的測異輻射熱儀記錄。
圖8是說明β-帕拉酮對順氯氨鉑敏感(A2780s)和順氯氨鉑耐受(A2780s)卵巢癌系細(xì)胞毒性作用的圖表。
圖9是說明人卵巢癌鼠模型中β-帕拉酮和Taxol_藥物與藥物協(xié)同作用的圖表。
圖10是說明應(yīng)用于人卵巢癌鼠模型、配制在HPBCD溶液中β-帕拉酮具有等效性的條形圖。
圖11說明了β-帕拉酮和Taxol_在人乳腺癌異種移植模型中的抗腫瘤活性。
圖12說明根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的β-帕拉酮類似物與衍生物。
圖13說明在Bg-Nu-Xid鼠中注射RPMI8226MM細(xì)胞并引起腫瘤生成的方案。
圖14是說明研究過程中平均重量特征的圖形。
圖15是說明β-帕拉酮/羥丙基-β-環(huán)糊精對腫瘤體積影響的圖形。
圖16是說明β-帕拉酮/羥丙基-β-環(huán)糊精對兩組鼠成活率影響的圖形。
圖17是說明β-帕拉酮/羥丙基-β-環(huán)糊精對腫瘤以及肝、脾、肺、心、腦和腎影響的代表性顯微照片。
本發(fā)明詳述β-帕拉酮及其衍生物、類似物(本文中也稱為“活性化合物”)參見Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem.，1993。這些活性化合物可以加入適合非腸道用藥的藥用組合物。通常，該組合物含有活性化合物和藥用載體、賦形劑、稀釋劑或輔劑。然而，大多數(shù)藥用溶劑中β-帕拉酮的低溶解度已經(jīng)成為開發(fā)適合非腸道和局部用藥配方的障礙，特別是靜脈內(nèi)用藥和皮膚用藥。表1說明了靜脈用藥常規(guī)溶劑系統(tǒng)中β-帕拉酮的有限溶解度。臨床前藥用動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)表明，理想的血漿峰值濃度范圍是10微克/毫升。為了達(dá)到該峰值血漿濃度，靜脈內(nèi)用藥配方必須含有接近10毫克/毫升濃度的β-帕拉酮，并能夠由無菌液體(例如鹽溶液或D5W)稀釋5-10倍。
表1
*在0.9％鹽溶液中稀釋表1所列溶劑中β-帕拉酮最大溶解度是大約12毫克/毫升?；谙♂?，在所有系統(tǒng)中溶解度的降低超過了稀釋因子。盡管各種臨床前研究已經(jīng)使用了各種常見的溶劑系統(tǒng)、例如磺油、花生油、Cremophor/乙醇或聚乙二醇400，但是對于腹膜內(nèi)用藥和靜脈內(nèi)用藥，這些溶劑都已證實(shí)不具有開發(fā)靜脈內(nèi)臨床配方的適用性。將藥用水增溶載體分子與β-帕拉酮或其衍生物、類似物混合，增加了β-帕拉酮的水溶性，如表2所示，在50％HPBCD溶液中β-帕拉酮濃度高達(dá)20毫克/毫升，優(yōu)選的藥用水增溶載體分子是羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)。
表2
這些β-帕拉酮/HPBCD溶液在室溫下長期穩(wěn)定，為了靜脈用藥可用無菌液多倍稀釋(例如無菌鹽溶液，D5W)，并且在未出現(xiàn)β-帕拉酮沉淀的情況下，至少保持24小時(shí)。β-帕拉酮/HPBCD溶液也可以經(jīng)過無菌過濾、凍干處理后，在水中快速重新構(gòu)成。實(shí)驗(yàn)證明，20％HPBCD和5毫克/毫升β-帕拉酮提供了易于凍干、相對快速重新構(gòu)成的高濃度β-帕拉酮。然而，本發(fā)明不只限于此方面，制備出并測定如1毫克/毫升低濃度的β-帕拉酮，其具有穩(wěn)定性，可以經(jīng)凍干處理后重新構(gòu)成。與β-帕拉酮與乙醇溶液復(fù)合相比，β-帕拉酮與HPBCD的混合或復(fù)合表現(xiàn)出，β-帕拉酮光致還原穩(wěn)定性得到了改善。
對HPBCD水溶液中β-帕拉酮的深入研究表明，隨著HPBCD濃度增長，β-帕拉酮溶解度呈線性增長?；?0-100倍的稀釋，所有HPBCD系統(tǒng)中β-帕拉酮濃度的降低與稀釋倍數(shù)成比例。
環(huán)糊精是來源于淀粉、α-D-吡喃葡糖的結(jié)晶體、不吸水的環(huán)狀低聚物。由于連接吡喃葡糖單元的鍵不能旋轉(zhuǎn)，因此環(huán)糊精的形狀不呈圓柱狀，而是環(huán)狀。因?yàn)榇诵D(zhuǎn)受限，環(huán)糊精具有帶有中心穴的剛性結(jié)構(gòu)，根據(jù)分子中吡喃葡糖單元的數(shù)量，穴的尺寸各不相同。最常見的三種環(huán)糊精是α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、γ-環(huán)糊精，它們分別由6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)吡喃葡糖單元構(gòu)成。由于環(huán)糊精分子內(nèi)羥基基團(tuán)的排列和分子形狀，穴的內(nèi)表面具有疏水性，而外表面具有親水性。第一羥基基團(tuán)位于環(huán)形分子的窄邊(里側(cè))，而第二羥基基團(tuán)位于環(huán)形分子的寬邊(外側(cè))。通過形成包含物復(fù)合體，此排列允許環(huán)糊精在疏水穴中容納各種疏水小分子。
HPBCD具有七個(gè)吡喃葡糖單元，并且在環(huán)形結(jié)構(gòu)外表面的每個(gè)吡喃葡糖單元上附著羥丙基基團(tuán)。經(jīng)證實(shí)，HPBCD在水中的溶解度遠(yuǎn)高于β-環(huán)糊精的溶解度。將羥丙基基團(tuán)導(dǎo)入β-環(huán)糊精中，通過斷裂環(huán)糊精穴羥基部分之間的分子內(nèi)氫鍵，致使其具有更高的溶解度。因此，與β-環(huán)糊精形成的包含物復(fù)合體相比，由HPBCD形成的包含物復(fù)合體也會(huì)具有更高的溶解度。取代的程度決定了溶解度和復(fù)合模式。取代程度越低，在結(jié)合度與溶解度方面，與未取代的環(huán)糊精越相似。取代程度越高，致使環(huán)糊精水中的溶解度越高，結(jié)合度越低。環(huán)糊精的取代程度很容易受到控制。
當(dāng)按照本發(fā)明將水增溶載體分子與β-帕拉酮或其衍生物、類似物混合時(shí)，混合的溶液通常形成單一的組合物，或者在水增溶載體分子是HPBCD的情況下，形成包含物復(fù)合體，其中不溶的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物位于環(huán)糊精的穴中。然而，本發(fā)明不僅限于生成復(fù)合體。
雖然HPBCD是優(yōu)選的增溶劑，但本發(fā)明不僅限于此方面，也可以設(shè)計(jì)與β-帕拉酮、或其衍生物、類似物混合的其它水增溶劑，例如Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol。此外，本發(fā)明不僅限于水增溶劑，也可以使用油基增溶劑，例如磺油和花生油。
表面活性劑也可以作為本發(fā)明的一部分，用于增溶β-帕拉酮、或其衍生物、類似物。然而，當(dāng)β-帕拉酮、或其衍生物、類似物在水中稀釋時(shí)，所用表面活性劑必須具有足夠的濃度，從而保證有足量的表面活性劑，維持溶液中的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物。但是，表面活性劑不能過多，否則會(huì)產(chǎn)生無法忍受的副作用。
本發(fā)明也設(shè)計(jì)并生成了β-帕拉酮、或其衍生物、類似物的乳濁液?？梢灾苽浜杏行в昧康摩?帕拉酮、或其衍生物、類似物的乳濁液，其包裹在一種或多種的乳化劑中，或包裹在產(chǎn)生非腸道用藥水包油型乳濁液的乳化劑中。適合的乳化劑可以包括任何藥用乳化劑，但不限于此，優(yōu)選的是從蛋黃或大豆提取的磷脂、合成的磷脂酰膽堿、或從蔬菜源提純的磷脂酰膽堿。也可以使用氫化衍生物，例如氫化磷脂酰膽堿(蛋)、氫化磷脂酰膽堿(大豆)。乳化劑也可以是非離子表面活性劑，例如poloxamer(poloxamer188和407)、poloxamine、聚氧乙烯硬脂酸脂、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、或山梨聚糖脂肪酸酯。也可以使用離子表面活性劑，例如膽酸、脫氧膽酸或表面活性衍生物或其鹽。乳化劑也可以是上述一種或多種成分的混合物。乳化劑還含有其它成分，例如緩沖劑、穩(wěn)定劑、和其它脂類。
Intralipid_是一種用于注射的脂肪乳濁液。脂肪乳濁液可以含有蛋黃、豆油、和紅花油。在美國，Intralipid_以商標(biāo)為Liposyn II_和Liposyn III_(Abbot Laboratories，Abbott Park，Illinois)銷售，可以作為卡路里和脂肪酸來源，以維持或增加用藥病體的體重，也可以作為不能直接注射水溶性差、親油性藥物的載體。Intralipid_和LiposynII_都以10％和20％的濃度在市場上出售。根據(jù)本發(fā)明，可以制備非腸道用藥的乳濁液，其中含有β-帕拉酮、或其衍生物、類似物和Intralipid_或其它任何藥用脂肪乳濁液。
最近，生命體內(nèi)與生命體外的研究表明，與其它化學(xué)治療劑和抗癌劑結(jié)合使用，β-帕拉酮具有有效的協(xié)同作用，特別是順式-鉑和taxane衍生物，例如Taxol_(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibb Co.，New York，N.Y.)。例如，WO00/61142公開了治療癌癥的方法和組合物，其中包括將有效用量的第一化合物、G或S期藥劑(例如β-帕拉酮)與G2/M期藥劑(例如taxane衍生物)結(jié)合用藥。由于其具有兩個(gè)主要的功能特性—與其它化學(xué)治療劑協(xié)同作用和抑制耐藥性細(xì)胞的活性，β-帕拉酮或其衍生物、類似物的應(yīng)用可以明顯增加癌癥病狀得到長期緩解的比率，其中包括卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、惡性骨髓瘤、惡性黑素瘤和非黑素瘤的皮膚癌。β-帕拉酮或、其衍生物、類似物也可以用于治療增生癥和皮膚病，例如牛皮癬。
如上所述，本發(fā)明的藥用組合物和配方涉及非腸道用藥，優(yōu)選的是靜脈內(nèi)用藥。然而，本發(fā)明不限于此方面，根據(jù)本發(fā)明可以制備口服用藥的液體藥用組合物與配方。
優(yōu)選的是，非腸道用藥的藥用組合物含有與HPBCD混合的、所需用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物。常規(guī)的β-環(huán)糊精不適用于非腸道用藥配方，但是可以用于制備口服用藥的配方。如上所述，實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，隨著HPBCD濃度的增長，β-帕拉酮、或其衍生物、類似物的溶解度線性增長。
盡管β-帕拉酮是本發(fā)明的優(yōu)選化合物，但是本發(fā)明不限于此方面，β-帕拉酮衍生物、類似物(例如拉帕醇)和其藥用組合物與配方都是本發(fā)明的一部分。該β-帕拉酮類似物包括PCT國際申請PCT/US93/07878(WO94/04145)公開的化合物，該專利的全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文，所公開化合物的結(jié)構(gòu)式如下 其中R和R1彼此獨(dú)立地選取氫、取代和非取代的芳基、取代和非取代的烯基、取代或非取代的烷基、取代或非取代的烷氧基。烷基基團(tuán)優(yōu)選地帶有大約1-15個(gè)碳原子，更優(yōu)選地帶有大約1-10個(gè)碳原子，更甚優(yōu)選地帶有大約1-6個(gè)碳原子。除非另有所述，名詞烷基指的是，既包括環(huán)基團(tuán)也包括非環(huán)基團(tuán)，當(dāng)然環(huán)基團(tuán)的環(huán)上至少含有3個(gè)碳原子。直鏈或帶支鏈的非環(huán)烷基基團(tuán)通常優(yōu)于環(huán)基團(tuán)。直鏈烷基基團(tuán)通常優(yōu)于帶支鏈的烷基基團(tuán)。烯基基團(tuán)優(yōu)選地帶有大約2-15碳原子，更優(yōu)選地帶有大約2-10個(gè)碳原子，更甚優(yōu)選地帶有大約2-6個(gè)碳原子。更優(yōu)選的烯基基團(tuán)帶有3個(gè)碳原子(例如，1-丙基或2-丙基)，并且特別優(yōu)選是烯丙基基團(tuán)。苯基和萘基通常是優(yōu)選的芳基。烷氧基基團(tuán)包括含有一個(gè)或多個(gè)氧連接的烷氧基基團(tuán)，優(yōu)選地含有1-15個(gè)碳原子，更優(yōu)選地含有大約1-6個(gè)碳原子。取代的R和R1基團(tuán)可以在一個(gè)或多個(gè)可用的位上被一個(gè)或多個(gè)適合的基團(tuán)取代，諸如烷基基團(tuán)、例如含有1-10或1-6個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)，烯基基團(tuán)、例如含有2-10或2-6個(gè)碳原子的烯基基團(tuán)，含有6-10個(gè)碳原子的芳基基團(tuán)，鹵素、例如氟、氯、溴，以及氮、氧和硫，其中包括雜烷基、例如含有一個(gè)或多個(gè)雜原子連接(因此包括烷氧基、氨烷基和硫代烷基)、1-10或1-6個(gè)碳原子的雜烷基。
根據(jù)本發(fā)明所包括的其它β-帕拉酮類似物包括美國專利6,245,807公開的化合物，該專利的全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文，并公開了具有此結(jié)構(gòu)式的β-帕拉酮類似物和衍生物 其中R和R1可以彼此獨(dú)立地選取氫、羥基、巰基、鹵素、取代烷基、非取代烷基、取代烯基、非取代烯基、取代芳基、非取代芳基、取代烷氧基、非取代烷氧基、及其鹽，其中碳環(huán)原子之間的虛線雙鍵代表任意的環(huán)雙鍵。
PCT國際申請PCT/US00/10169(WO00/61142)公開了其它β-帕拉酮類似物和衍生物，其全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文，并公開了此結(jié)構(gòu)的化合物
其中R5和R6彼此獨(dú)立地選取羥基、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-苯基；并且R7可以選取氫、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-氨基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-雜芳基、-(CH2)n-雜環(huán)、或-(CH2)n-苯基，其中n是0-10的整數(shù)。
其它β-帕拉酮類似物和衍生物參見美國專利5,763,625、5,824,700和5,969,163，以及科學(xué)刊物上發(fā)表的文章，例如Sabba et al.，J.Med.Chem.27990-994(1984)，其公開了在一個(gè)或多個(gè)下述位上帶有取代基的β-帕拉酮2-、8-和/或9-位。參見Portela et al.，Biochem Pharm 51275-283(1996)(取代基在2-和9-位)；Maruyama et al.，Chem Lett 847-850(1977)；Sun et al.，Tetrahedron Lett 398221-8224(1998)；Goncalves et al.，Molecularand Biochemical Parasitology 1167-176(1998)(取代基在2-和3-位)；Gupta et al.，Indian Journal of Chemistry 16B35-37(1978)；Gupta et al.，Curr Sci 46337(1977)(取代基在3-和4-位)；DiChennaet al.，J Med Chem 442486-2489(2001)(單芳氨基衍生物)。上述參考的全部內(nèi)容通過在此引述合并于本文。
更優(yōu)選的是，本發(fā)明設(shè)計(jì)的類似物和衍生物包括通式I和II表示的化合物 通式I通式II其中環(huán)上碳原子之間的虛線雙鍵代表任意的環(huán)雙鍵，其中R和R1可以彼此獨(dú)立地選取氫、羥基、巰基、鹵素、取代烷基、非取代烷基、取代的烯基、非取代的烯基、取代芳基、非取代芳基、取代的烷氧基、非取代的烷氧基、及其鹽。優(yōu)選的烷基基團(tuán)帶有大約1-15個(gè)碳原子，更優(yōu)選地帶有大約1-10個(gè)碳原子，更甚優(yōu)選地帶有大約1-6個(gè)碳原子。名詞烷基指的是，既包括環(huán)基團(tuán)，也包括非環(huán)基團(tuán)。直鏈或帶支鏈的非環(huán)烷基基團(tuán)通常優(yōu)于環(huán)基團(tuán)。直鏈烷基基團(tuán)通常優(yōu)于帶支鏈的烷基基團(tuán)。烯基基團(tuán)優(yōu)選地帶有大約2-15碳原子，更優(yōu)選地帶有大約2-10個(gè)碳原子，更甚優(yōu)選地帶有大約2-6個(gè)碳原子。更優(yōu)選的烯基基團(tuán)帶有3個(gè)碳原子(例如，1-丙基或2-丙基)，并且特別優(yōu)選的是烯丙基基團(tuán)。苯基和萘基通常是優(yōu)選的芳基。烷氧基團(tuán)包括含有一個(gè)或多個(gè)氧連接的烷氧基團(tuán)，優(yōu)選地含有1-15個(gè)碳原子，更優(yōu)選地含有大約1-6個(gè)碳原子。取代的R和R1基團(tuán)可以在一個(gè)或多個(gè)可用的位上被一個(gè)或多個(gè)適合的基團(tuán)取代，例如含有1-10或1-6個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)，含有2-10或2-6個(gè)碳原子的烯基基團(tuán)，含有6-10個(gè)碳原子的芳基基團(tuán)，鹵素、例如氟、氯、溴，以及氮、氧和硫，其中包括雜烷基、例如含有一個(gè)或多個(gè)雜原子連接(因此包括烷氧基、氨烷基和硫代烷基)、1-10或1-6個(gè)碳原子的雜烷基；其中R5和R6可以獨(dú)立地選取氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-雜芳基、-(CH2)n-雜環(huán)或-(CH2)n-苯基；R7可選取氫、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-氨基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-雜芳基、-(CH2)n-雜環(huán)、或-(CH2)n-苯基，其中n是從0-10的整數(shù)。
本發(fā)明設(shè)計(jì)的優(yōu)選類似物與衍生物包括通式III表示的化合物 通式III其中R1是(CH2)n-R2，其中n是0-10的整數(shù)，R2可選自氫、烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)、脂族基、烷氧基、烯丙氧基、羥基、胺基、硫醇、酰胺、或鹵素。
本發(fā)明設(shè)計(jì)的類似物和衍生物包括4-乙酸基-β-帕拉酮、4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮、4-酮-β-帕拉酮、7-羥基-β-帕拉酮、7-甲氧基-β-帕拉酮、8-羥基-β-帕拉酮、8-甲氧基-β-帕拉酮、8-氯-β-帕拉酮、9-氯-β-帕拉酮、8-甲基-β-帕拉酮和8，9-二甲氧基-β-帕拉酮。
本發(fā)明設(shè)計(jì)的優(yōu)選類似物和衍生物包括通式IV代表的化合物 通式IV其中R1-R4彼此獨(dú)立地選取氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-雜芳基、-(CH2)n-雜環(huán)或-(CH2)n-苯基；或者在---是雙鍵的情況下，R1和R2綜合在一起只選取上述的單一取代基，并且R3和R4綜合在一起只選取上述的單一取代基。
本發(fā)明設(shè)計(jì)的優(yōu)選類似物與衍生物包括董尼酮和2-乙基-6-羥萘[2，3-b]-呋喃-4，5-二酮。
本發(fā)明設(shè)計(jì)的優(yōu)選類似物與衍生物還包括通式V代表的化合物
通式V其中R1選取氫、CH3、OCH3和NO2。
在圖12中，圖解說明了上式代表的優(yōu)選化合物。
β-帕拉酮及其類似物在40％(重量/體積)HPBCD溶液中溶解度與水中溶解度的比較參見表3和4。為了測定溶解度，測定化合物首先溶解在乙醇中，制備濃度范圍在2.5-10毫克/毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用水稀釋到10微克/毫升。紫外線掃描獲得10微克/毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液，并且測定最大吸收波長和最大吸收波長下的吸收度。對于每種測定化合物，將50微升等分試樣的水和40％HPBCD加入到含有大約1毫克化合物的單個(gè)Eppendorf試管中。將此試管在30℃水浴中加熱、旋轉(zhuǎn)，再以15,000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘。重復(fù)上述步驟，然后將試管冷卻至室溫1小時(shí)后，再次離心處理。用水將每個(gè)試管的上清液稀釋到適當(dāng)?shù)奈斩确秶诨衔镒畲笪詹ㄩL下，測定紫外光的吸收度。然后，通過與10微克/毫升乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的比率，計(jì)算這些飽和溶液的濃度。如表3和表4所示，在40％HPBCD溶液中，測定化合物的水溶解度增長了7-323倍。
表3β-帕拉酮及其類似物在40％(重量/體積)羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)溶液的吸收度值化合物 最大吸10微克/水溶液 HPBCD溶液收波長 毫升標(biāo)準(zhǔn)(納米) 溶液的吸 稀釋因子 吸收度 稀釋 吸收度收度 因子β-帕拉酮 2581.041 10 0.452 2000 0.73(B1)3-溴-βL2560.788 10 0.286 1000 0.5453，4-二氫-β-L 2620.71 10 0.171 1000 0.41董尼酮 2620.944 1000.449 5000 0.3224-乙酸基-βL2540.89 50 0.506 5000.3734-羥基-βL 2540.973 50 0.742 5000.5964-酮-βL2801.216 50 1.224 5001.073-羥基-βL 2560.995 2000.687 2000 0.7273-(3-甲基-2-丁 2580.697 20 0.233 1000 0.284烯基)-βL
表4β-帕拉酮及其類似物在水溶液和40％(重量/體積)羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)溶液的溶解度化合物 水溶解度 HPBCD溶液中的溶 溶解度增(微克/毫升) 解度(毫克/毫升) 強(qiáng)的倍數(shù)β-帕拉酮 4314.0 323(βL)3-溴-βL 366.91913，4-二氫-βL 245.8240董尼酮 476 17.0 364-乙酸基-βL 284 2.17.44-羥基-βL 381 3.18.04-酮-βL 503 4.48.73-羥基-βL 1381 14.6 10.63-(3-甲基-2- 674.161丁烯基)-βL本發(fā)明的其它特殊配方將在下文與實(shí)例部分加以闡明?？傊?，可以按照有機(jī)合成業(yè)內(nèi)公知的多種方法，制備β-帕拉酮及其衍生物、類似物。可以按照下文概述的方法，以及合成有機(jī)化學(xué)業(yè)內(nèi)公知的合成方法，或者為業(yè)內(nèi)技術(shù)人員理解、基于此方法的改進(jìn)方法，合成β-帕拉酮及其衍生物、類似物。優(yōu)選的方法包括下文所述的合成與配制方法，但不限于此。
合成β-帕拉酮和/或其衍生物、類似物的多種方法為業(yè)內(nèi)所公知。第一種方法參見Schaffner-Sabba，K et al.，β-帕拉酮衍生物的合成和腫瘤模型中的活性，J.Med.Chem.，27，(1984)990-994，并被稱為鉀鹽法。第二種方法參見Sun，J.S.et al.，拉帕醇和相關(guān)萘醌的初步合成，Tetrahedron Letters，39(1998)8221-8224，并被稱為鋰鹽法。這兩種方法最初都生成了拉帕醇，一種合成β-帕拉酮的中間體。這兩種方法都需要生成金屬鹽。此外，在β-帕拉酮總合成，J.Heterocyclic Chem.，29(1992)1457-1460中，Amaral等人公開了八步合成β-帕拉酮α-萘酚的方法，獲得只有23％的總得率。在美國專利5,763,625中，拉帕醇首先轉(zhuǎn)化為3-溴帕拉酮，然后用兩個(gè)步驟將3-溴帕拉酮轉(zhuǎn)化為3-羥基-β-帕拉酮。此外，與公開的方法不同，如待審的美國專利系列申請09/975,776所述，在原位上加入氫化鋰，或單獨(dú)將氫氧化鉀加入醌溶液，制備2-羥基-1，4-萘醌的金屬鹽(鋰或鉀)作為第一步，然后用溴化物與金屬鹽反應(yīng)生成拉帕醇；如待審的美國專利系列申請09/975,776公開的方法取消了第一步，在碘化鈉和弱堿條件下，開始直接用2-羥基-1，4-萘醌與1-溴-3-甲基-2-丁烯反應(yīng)，生成帕拉醇，然后，由拉帕醇合成β-帕拉酮，其中弱堿包括三乙胺、吡啶、三甲胺、N，N-二異丙基乙胺、2，6-二甲基吡啶。
如上所述，作為單一試劑，IC50值在低微摩爾范圍(1-10)的β-帕拉酮對于廣泛的癌細(xì)胞系表現(xiàn)出有效的細(xì)胞毒性。生命體外的研究已經(jīng)證實(shí)，微摩爾濃度的β-帕拉酮與IC50水平的Taxol_結(jié)合應(yīng)用到腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中，完全消除了菌落的生成。這些研究更證明，β-帕拉酮與Taxol_起到了協(xié)同作用，有效地增加了兩個(gè)單獨(dú)試劑的效力，且未增加附帶的毒性(Li，C.J.et al.，Proc Natl Acad Sci U.S.A.96(1999)13369)，其中Taxol_含有活性化合物paclitaxel。
在人卵巢癌異種移植的裸鼠模型中，已經(jīng)證實(shí)了β-帕拉酮與Taxol_生命體內(nèi)有效地抑制了腫瘤的生長。在接受人乳腺癌異種移植的雌裸鼠中，已經(jīng)證實(shí)了有效的抗腫瘤活性(在下文的實(shí)例中詳細(xì)討論)。
增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和類似物也可以與其它taxane衍生物和抗癌劑結(jié)合使用。結(jié)合使用中，增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和類似物可以與抗癌劑或taxane衍生物混合，并裝入單一的小瓶中，或分別裝入不同的小瓶中。當(dāng)增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和類似物、與抗癌劑或taxane衍生物裝入不同的小瓶，所有瓶劑可以同時(shí)用藥或次序用藥。
在另一實(shí)施方案中，增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和類似物用藥可以與放射治療結(jié)合使用。優(yōu)選的是，按照臨床醫(yī)師治療病體的要求，在β-帕拉酮用藥之前或之后規(guī)定的數(shù)小時(shí)內(nèi)，病體接受放射治療。
β-帕拉酮、及其衍生物和類似物的類型與用量、HPBCD或所用的其它載體變化很大，并取決于暖血?jiǎng)游锘蛉说姆N類、體重、所治療的腫瘤類型。同樣地，用藥劑量也具有多樣性，并取決于多種公知因素，例如特殊藥劑的藥效、用藥方式和線路、受體的年齡、健康狀況和體重；癥狀的種類與程度；共同治療的種類；治療的頻率；和希望的效果。
用藥劑量具有多樣性，并取決于多種公知因素，例如特殊活性成分的藥效、用藥方式和線路；受體的年齡、性別、健康狀況、代謝率、吸收率和/或體重；癥狀的種類與程度；共同治療的種類、治療的頻率；和希望達(dá)到的效果。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用藥劑量大約在0.1-10毫克/千克，用藥頻率在每周2次到每4周一次。
文中所用，名詞“有效用量”指的是，研究者或臨床醫(yī)師要求的、在動(dòng)物或人體組織、系統(tǒng)內(nèi)引起生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的藥劑用量。
為了易于用藥和統(tǒng)一劑量，更優(yōu)選的是，以單位劑量形式配制口服或非腸道組合物。單位劑量可以含有單一化合物，例如β-帕拉酮、及其衍生物和類似物，或其與其它化合物、或其它抑制癌癥化合物、或抑制腫瘤生長的化合物、或抗病毒化合物的混合物。適合非腸道用藥的組合物優(yōu)選地含有無菌注射水溶液，而且也可以含有非水溶液，其中包括抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使配方與受體血液等壓的溶質(zhì)；以及無菌的水性懸液和非水性懸液，其中可以含有助懸劑和增稠劑。配方可以是單位劑量的瓶劑、也可以是多組用藥的瓶劑，例如封裝在細(xì)頸瓶和小瓶中，如文中所述，也可以凍干狀態(tài)儲(chǔ)存，在使用前只需加入無菌液體載體，例如加入水用于注射。文中所用單位劑量形式指的是，對于接受治療的病體，適合作為單一劑量的物理分離單元；每個(gè)單元含有經(jīng)計(jì)算產(chǎn)生所需治療效果、規(guī)定用量的活性化合物、和與之結(jié)合所需的藥用載體?？梢詮臉I(yè)內(nèi)公知所需的無菌粉末、顆粒和片劑，制備臨時(shí)注射溶液和懸液?；钚曰衔锏莫?dú)特性質(zhì)和所要達(dá)到的特殊治療效果、為了治療病體混合此化合物所固有的局限性，規(guī)定并直接決定了本發(fā)明單位用藥形式的規(guī)格。
應(yīng)該理解的式，除了本發(fā)明特效組合物與配方特別提到的成分外，本發(fā)明組合物和配方可以含有與用藥形式相關(guān)的其它常規(guī)試劑，例如適合口服用藥的組合物可以含有調(diào)味劑和著色劑。
除了本發(fā)明的β-帕拉酮及其衍生物、類似物與HPBCD的復(fù)合體外，適合非腸道用藥、注射或注入的藥用組合物還可以含有無菌水溶液(水溶性)、或分散相和無菌粉末，用于臨時(shí)制備無菌注射溶液或分散系。對于靜脈用藥，適合的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，例如包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)、油及其適當(dāng)?shù)幕旌衔?。在所有情況下，該組合物必須無菌，其流動(dòng)性應(yīng)該達(dá)到易于注射的程度。在生產(chǎn)和儲(chǔ)存條件下，該組合物必須穩(wěn)定且不受微生物污染作用的侵害，例如細(xì)菌和真菌。例如，通過使用包衣、例如磷脂酰膽堿，在分散系情況下維持所需顆粒尺寸，并且使用表面活性劑，保持組合物的適當(dāng)流動(dòng)性。通過使用各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑，可以抑制微生物的作用，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等。在一些情況下，優(yōu)選的組合物含有等壓劑，例如糖，多元醇、例如甘露醇、山梨醇、氯化鈉。組合物含有吸收延遲劑、例如一硬脂酸鋁和明膠，也可以實(shí)現(xiàn)注射組合物的延遲吸收。非腸道和靜脈組合物還可以含有無機(jī)物以及有利于所用注射類型或輸送系統(tǒng)適應(yīng)性的其它材料。此外，非腸道用藥溶液可以含有活性化合物的水溶性鹽、適合的穩(wěn)定劑，如果需要，還可以含有緩沖物質(zhì)。抗氧化劑、例如亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、或抗壞血酸，單獨(dú)使用或組合使用，都是適合的穩(wěn)定劑。也可以使用檸檬酸及其鹽、和EDTA的鈉鹽。此外，非腸道用藥的溶液可以含有防腐劑、例如氯苯甲烴銨、甲基-或丙基-對苯、和氯丁醇。
按照需要，通過將所需用量的活性化合物與一種或多種上述成分的組合加入適當(dāng)?shù)娜軇┲?，再過濾滅菌，制成無菌注射溶液。通常，通過將活性化合物加入無菌賦形劑，制備分散系，其中無菌賦形劑含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和上述所需的其它成分。就拿制備無菌注射溶液的無菌粉末來說，制備方法有真空干燥和冷凍干燥，從上文所述的無菌過濾溶液生成活性成分和其它任何所需成分的粉末。文中所述的β-帕拉酮及其衍生物、類似物可以經(jīng)冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，并具有相當(dāng)?shù)娜芙庑?參見下文的實(shí)例5)。
為了以液體藥劑形式口服用藥，口服藥劑成分優(yōu)選地與β-環(huán)糊精結(jié)合，更優(yōu)選地與羥丙基-β-環(huán)糊精結(jié)合，然而，本發(fā)明不限于此方面，口服藥劑成分可以與任何口服、無毒的藥用惰性載體結(jié)合，例如乙醇、甘油、水、油等。此外，如果希望或需要時(shí)，也可以將適當(dāng)?shù)恼澈蟿?、潤滑劑、蹦散劑、著色劑加入混合物。適當(dāng)?shù)恼澈蟿┌ǖ矸?，明膠，天然糖類、例如葡萄糖或β-乳糖，玉米甜味劑，天然和合成的樹膠、例如阿拉伯樹膠、黃蓍膠，或藻酸鈉，羧甲基纖維素，聚乙二醇，石蠟等。這些藥劑形式中所用的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。蹦散劑包括淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等，且不限于此?？诜盟幍囊后w藥劑形式也可以含有增加病體容忍度的著色劑和調(diào)味劑。
適合液體藥劑形式的其它實(shí)例可以包括水溶液、或水懸液、藥用脂肪和油、乙醇或其它有機(jī)溶劑，其中包括酯類、乳濁液、糖漿或酏劑、懸液、由非泡騰顆粒劑重新構(gòu)成的溶液和/或懸液、由泡騰顆粒重新構(gòu)成的泡騰配方。該液體藥劑形式還可以含有其它溶劑，如防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、增稠劑和融解劑。
活性化合物也可以與作為靶向藥劑載體的可溶性聚合物結(jié)合。該聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥乙基天冬酰胺苯酚、或由棕櫚?；〈木郗h(huán)氧乙烷-聚賴氨酸。此外，本發(fā)明的化合物可以與控制藥物釋放的生物降解聚合物結(jié)合，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸與聚乙醇酸的共聚體、聚ε羥基己酸內(nèi)酯、多羥丁酸、聚原酸酯、聚乙縮醛、聚二氫吡喃、聚氰酰化物、交聯(lián)的或親水與疏水兩性的水凝膠成塊共聚物。
本發(fā)明的活性化合物可作為藥物使用，可以任何方式將此活性化合物輸送到試劑作用的身體部位，治療癌癥、抑制腫瘤。如上所述，β-帕拉酮及其衍生物、類似物、活性成分的優(yōu)選用藥方式是通過非腸道用藥，優(yōu)選的是靜脈內(nèi)用藥(bolus和注入)。然而，本發(fā)明不限于此，本發(fā)明的活性成分能夠以任何結(jié)合藥劑的常規(guī)方式用藥，既可以作為單獨(dú)藥劑，也可以與抑制腫瘤的其它藥劑結(jié)合使用。例如，活性化合物還可以腹膜內(nèi)用藥、皮下用藥、或肌肉內(nèi)用藥?；钚曰衔镞€可以局部用藥，治療皮膚癌，例如基細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、卡波濟(jì)氏肉瘤和黑素瘤。活性化合物可以單獨(dú)用藥，但是通常與用藥路線和標(biāo)準(zhǔn)用藥慣例選擇的藥用載體共同用藥。
本發(fā)明還包括將本發(fā)明的組合物和配方給藥于病體的癌癥治療方法。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法包括將組合物與配方非腸道用藥于病體，優(yōu)選的是通過如上文所述的靜脈注射或注入。在另一實(shí)施方案中，該方法包括將本發(fā)明的組合物與配方局部用藥。“局部用藥”和“局部施用”可以互換使用，指的是將本發(fā)明的一種或多種組合物施用或涂抹到受體皮膚表面的過程。局部用藥配方可以由水包油膏狀乳濁液組成，且是不限于此。本發(fā)明的局部用藥配方可以含有能夠緩慢釋放β-帕拉酮衍生物和類似物的釋放延遲組合物。
局部用藥配方任選地含有各種附加成分，以改進(jìn)配方的整體需要、外觀、物理特性、和/或人體感覺，但條件是，該任選添加劑要與文中所述的核心成分物理、化學(xué)相容，并且不能過度損害配方的穩(wěn)定性、安全性或藥效。任選的添加劑可以分散、溶解到本組合物的載體中。任選添加劑包括可能的美化劑(例如吸收劑，包括化妝膏形式的油性吸收劑和聚合吸收劑)、研磨劑、抗結(jié)塊劑、去沫劑、其它抗菌劑、結(jié)合劑、緩沖劑、膨脹劑、美容殺菌劑、其它變性劑和滲透劑(前述)、美容收斂劑、藥物收斂劑、外用鎮(zhèn)痛劑、成膜劑、遮光劑、芳香劑、顏料、著色劑、皮膚緩解劑、pH調(diào)節(jié)劑、螯合劑、紫外光吸收劑、增塑劑、防腐劑、防腐增強(qiáng)劑、去毛劑、脫落劑、膠原蛋白及其分解產(chǎn)物、成膜劑等。這些物質(zhì)的代表實(shí)例參見Harry的美容學(xué)，7thEd.，Harry &Wilkinson(Hill Publishers，London 1982)；藥劑形式—分散系統(tǒng)，Lieberman，Rieger & Banker，Vols.1(1988) & 2(1989)，MarcelDecker，Inc.；化妝品化學(xué)和制造，2nd.Ed.，deNavarre(VanNostrand 1962-1965)；化妝科學(xué)與技術(shù)手冊，1stEd.Knowlton &Pearce(Elsevier 1993)。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法使用的組合物還包括含有親水和疏水相的組合物。適合的非天然疏水相成分的非限定實(shí)例有(1)從石油獲得的液體碳?xì)浠衔锏臒o毒非致癌混合物(64，65)；(2)非直鏈固體碳?xì)浠衔锖透叻悬c(diǎn)液體碳?xì)浠衔锏臒o毒非致癌膠體系統(tǒng)，其中大部分的液體碳?xì)浠衔锍誓z束態(tài)(64，66，67)；(3)無毒非致癌的、直鏈和帶支鏈的大約C7-40碳?xì)浠衔?，例如十二烷、異十二烷、角鯊?fù)?、膽固醇、氫化聚異丁烯、甘二?既C22碳?xì)浠衔?、十六烷、異十六烷(Permethyl.RTM101A，Presperse，South Plainfield，N.J.)等；(4)無毒非致癌的C1-30醇的C1-30羧酸酯和C2-30二羧酸酯，其中包括直鏈和帶支鏈的物質(zhì)以及芳香衍生物，例如癸二酸二異丙酯、己二酸二異丙酯、十四酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸甲酯、丙酸十四烷酯、棕櫚酸2-乙基己酯、新戊酸異癸酯、馬來酸二-2-乙基己酯、棕櫚酸鯨蠟酯、十四酸十四烷基酯、硬脂酸十八烷酰酯、硬脂酸異丙酯、硬脂酸甲酯、硬脂酸鯨蠟酯、山崳酸二十二烷基酯、馬來酸二辛酯、癸二酸二辛酯、己二酸二異丙酯、辛酸鯨蠟酯、二亞油酸二異丙酯；(5)無毒非致癌的C1-30羧酸的一、二和三甘油酯，例如辛酸三甘油酯、PEG-6辛酸三甘油酯、PEG-8辛酸三甘油酯；(6)無毒非致癌的C1-30羧酸烷撐二醇酯，例如C1-30羧酸的乙二醇單酯和雙酯、和C1-30羧酸的丙二醇單酯和雙酯、例如二硬脂酸乙二醇酯；(7)無毒非致癌的、前述物質(zhì)的丙氧基化和乙氧基化衍生物；(8)C1-30無毒非致癌的、單糖和低聚糖的單酯和多酯。疏水相中起作用的液態(tài)酯實(shí)例有葡萄糖四油酸酯、大豆油脂肪酸的葡萄糖四酯(未飽和)、混合大豆油脂肪酸的甘露糖四酯、油酸的半乳糖四酯、亞油酸的阿拉伯糖四酯、木糖的四亞油酸酯、半乳糖的五油酸酯、山梨醇的五油酸酯、未飽和的大豆油脂肪酸山梨醇六酯、木糖醇的五油酸酯、山梨醇的四油酸酯、山梨醇的五油酸酯、山梨醇的六油酸酯、山梨醇的七油酸酯、山梨醇的八油酸酯，及其混合物。
在其它實(shí)施方案中，按照本發(fā)明適合局部用藥的組合物包括含有替換載體的組合物。替換載體的實(shí)例有含有一個(gè)或多個(gè)單體的交聯(lián)聚合化合物，這些單體來自丙烯酸、取代的丙烯酸、丙烯酸鹽和丙烯酸酯，其中交聯(lián)劑含有2個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵，并來源于(1)丙烯酸均勻聚合的多羥醇，例如丙烯酸單體或其衍生物的交聯(lián)均聚物(例如-CN、或-COOH取代的C1-4烷基)，其中丙烯酸在2碳和3碳位置具有取代基(例如丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、和其混合物)；或(2)含有丙烯酸單體(或其衍生物)和C1-4醇的丙烯酸酯單體(或其衍生物)的交聯(lián)丙烯酸共聚體，并且第二單體是長鏈醇(例如C8-40)的丙烯酸酯單體(或其衍生物)，例如丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、及其混合物。按照本發(fā)明治療方法，后兩種類型聚合物的組合也被證實(shí)在特定組合物中起作用。
除了治療如皮膚癌的病癥外，本發(fā)明配方也可用于治療各種皮膚病。皮膚病可以是與皮膚有關(guān)的任何癥狀。皮膚病未限定地包括，皮炎癥，例如接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、脂溢性皮炎、錢串狀皮炎(Nummular Dermatitis)、手和腳的慢性皮炎、全身脫落性皮炎、郁滯性皮炎、局部搔癢性皮炎；皮膚的細(xì)菌感染，例如皮膚的葡萄球菌病、葡萄球菌頭癬皮膚綜合癥、丹毒、毛囊炎、疵瘡、癰、化膿性汗腺炎、甲溝炎感染和紅癬；表面真菌感染，例如皮膚癬菌感染、酵母菌感染、念珠菌病、花斑病；皮膚寄生蟲感染，例如疥瘡、虱病、匐行疹；毛囊和皮脂腺癥，例如粉刺、紅斑痤瘡、口周皮炎、多毛癥、脫發(fā)、假毛囊炎胡須(Pseudofolliculitis Barbae)、角質(zhì)蛋白囊腫(Keratinous Cyst)；排列丘疹癥(scaling papular)，例如牛皮癬、玫瑰糠疹、扁平苔癬、褥瘡、良性腫瘤和惡性腫瘤。
有關(guān)制備構(gòu)成本發(fā)明組合物和配方的組合物、配方和成分的其它信息參見本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)，例如“雷明頓的藥用科學(xué)”，Mack Publishing Co.，Ester，PA，15thEd.(1975)。
本發(fā)明也涉及包括一種或多種瓶劑的藥用試劑盒，該瓶劑含有由有效用量活性化合物組成的藥用組合物。如果需要，該試劑盒還包括一種或多種不同常規(guī)藥用試劑盒的瓶劑，例如含有一種或多種藥用載體的瓶劑、以及其它瓶劑，這些對業(yè)內(nèi)技術(shù)人員顯而易見。在優(yōu)選實(shí)施方案中，試劑盒用于治療哺乳動(dòng)物的癌癥，其中包括至少一個(gè)含有β-帕拉酮或其衍生物、類似物的瓶劑。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，試劑盒用于治療哺乳動(dòng)物的腫瘤，其中包括一個(gè)或多個(gè)瓶劑，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物和藥用水增溶載體分子的復(fù)合體，并在相同或不同的瓶劑中，還含有抗癌劑，特別是taxane衍生物。
印刷說明也可以放入試劑盒中，作為插入物或標(biāo)簽，指示各成分的用藥量、用藥準(zhǔn)則、和/或各成分的混合規(guī)則。應(yīng)當(dāng)理解，在本專利公開中，對于實(shí)施本發(fā)明，特定的材料和條件是重要的，但是未限定的材料和條件并未被排除在外，只要它們未對實(shí)現(xiàn)本發(fā)明益處造成障礙。
下列實(shí)例會(huì)對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，而不是限定本發(fā)明的范圍。業(yè)內(nèi)技術(shù)人員顯而易見，在不超出本發(fā)明目的和權(quán)益的情況下，材料與方法上的一些改變會(huì)是可行的。
實(shí)施例1.評價(jià)增加疏水藥用物質(zhì)溶解度、可接受的公知溶劑系a.制備β-帕拉酮與羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)溶液用β-帕拉酮，評價(jià)增加疏水藥用物質(zhì)溶解度、各種可接受的公知藥用溶劑系。如下表5所示，在評價(jià)的多種溶液中，溶液都達(dá)到靶向的最低濃度(10毫克/毫升)。然而，在溶液中不出現(xiàn)β-帕拉酮明顯沉淀的情況下，這些溶劑系都不能被無菌鹽水稀釋5倍。此外，大部分的助溶劑和表面活性劑具有其自身毒性和承受度的問題，需要在高劑量用藥過程中加以解決。
表5溶劑系 未被稀釋 5倍稀釋*(毫克/毫升)(毫克/毫升)Poloxamer(20％)2.03500.0331Povidone K17(20％) 1.82500.0312Povidone K12(20％) 1.86000.0313聚山梨醇酯80 11.1700 1.6550乙醇(76％) 10.6600 0.1025PEG400 11.6800 0.1400丙二醇 8.78000.0950Trappsol(20％) 1.46500.0300*在0.9％鹽溶液中稀釋按照上文所述，兩種不同方案用于增強(qiáng)β-帕拉酮在水溶液中的溶解度。第一方案中，β-帕拉酮經(jīng)金屬螯合劑(例如鈣、鎂)處理，生成可溶性復(fù)合物；第二種方案中，β-帕拉酮經(jīng)增溶劑β-環(huán)糊精和γ-環(huán)糊精處理，生成可溶性的包涵物復(fù)合體。為了評價(jià)這四種試劑，向這些試劑的水溶液中(或向作為對照的PBS緩沖液中)，加入含有14C-標(biāo)記β-帕拉酮的微量乙醇，然后，根據(jù)離心后上清液的剩余放射性，測定每種溶液中β-帕拉酮的相對溶解度。
具體地講，向每個(gè)含有900微升PBS緩沖液的1.5毫升Eppendorf試管中加入下列物質(zhì)含有8毫摩爾CaCl2的PBS緩沖液，含有8毫摩爾MgCl2的PBS緩沖液，含有8毫摩爾β-環(huán)糊精的PBS緩沖液，含有8毫摩爾γ-環(huán)糊精的PBS緩沖液。然后，將含有10微升C14標(biāo)記β-帕拉酮(40,000CPM，0.55微克)的75％乙醇加入到每個(gè)試管中。經(jīng)過旋轉(zhuǎn)和以13,000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘后，使用貝克閃爍計(jì)數(shù)儀，測定100微升上清液的放射性。向剩余混合物中，加入含有0.5微克(10毫克/毫升溶液50微升)或600微克β-帕拉酮的75％乙醇。經(jīng)過旋轉(zhuǎn)和以13,000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘后，再次測定100微升上清液的放射性。
當(dāng)加入0.5微克β-帕拉酮時(shí)，所有5種水溶液中幾乎100％的β-帕拉酮出現(xiàn)在上清液中。然而，當(dāng)加入600微克β-帕拉酮時(shí)，只有β-環(huán)糊精溶液的上清液中保持了大于50％的β-帕拉酮。使用閃爍計(jì)數(shù)儀，測定出上清液中標(biāo)記β-帕拉酮的百分比。圖1說明了各種增溶劑水溶液中β-帕拉酮的相對溶解度。圖1中，溶液1由PBS緩沖液構(gòu)成，溶液2由含有8毫摩爾氯化鈣的PBS緩沖液構(gòu)成，溶液3由含有8毫摩爾氯化鎂的PBS緩沖液構(gòu)成，溶液4由含有8毫摩爾β-環(huán)糊精的PBS緩沖液構(gòu)成，溶液5由含有8毫摩爾γ-環(huán)糊精的PBS緩沖液構(gòu)成。
b.羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)濃度對β-帕拉酮溶解度的影響由于β-環(huán)糊精適合口服用藥，而不適合非腸道或局部用藥，選擇其類似物HPBCD做深入研究。為了測定HPBCD濃度對β-帕拉酮溶解度的影響，將含有β-帕拉酮的微量乙醇加入到8種不同HPBCD濃度(0-16毫摩或0-25％(重量/重量))的水溶液中，經(jīng)過離心后，測定上清液中剩余放射性的百分比，確定相對溶解度。為了去除乙醇可能的影響，并確定凍干處理后是否能夠維持增長的溶解度，該混合物凍干處理后，再次溶解到相同體積水中。測定再次溶解混合物上清液中β-帕拉酮的百分比，確保再次實(shí)現(xiàn)凍干物質(zhì)增長的溶解度。
具體地講，向每個(gè)1.5毫升Eppendorf試管中，分別加入足量的水、50毫摩爾HPBCD溶液、含有14C標(biāo)記β-帕拉酮溶液的75％乙醇、含有10毫克/毫升β-帕拉酮溶液的乙醇、0.9％氯化鈉溶液，以制備如表6所列成分和濃度的1毫升溶液。
表6
經(jīng)過旋轉(zhuǎn)和以13,000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘后，使用貝克閃爍計(jì)數(shù)儀，測定每個(gè)試管100微升上清液的放射性。凍干處理剩余混合物(每樣900微升)，然后再溶解到900微升水中。經(jīng)過旋轉(zhuǎn)和以13,000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘后，再次測定每個(gè)試管100微升上清液的放射性。
圖2說明，隨著HPBCD濃度的增長，β-帕拉酮溶解度相應(yīng)地增長，同時(shí)也說明，β-帕拉酮經(jīng)過凍干處理后，增長的溶解度全部再次實(shí)現(xiàn)。
c.加熱制備β-帕拉酮和羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)溶液沒有用乙醇溶液增溶β-帕拉酮的情況下，制備β-帕拉酮和HPBCD溶液。先將β-帕拉酮與不同濃度的HPBCD水溶液混合，然后加熱至70℃，再冷卻至室溫。過濾冷卻的溶液(0.22μ)，再用HPLC分析，測定β-帕拉酮的增溶含量。各種HPBCD水溶液中β-帕拉酮的溶解度列于表7。
表7
在50％HPBCD溶液中(檢測的最高濃度)，實(shí)現(xiàn)了β-帕拉酮的最高濃度19.7毫克/毫升。添加鹽溶液或乙醇沒有明顯增加β-帕拉酮在HPBCD中的溶解度。
d.HPLC分析和UV測定75％乙醇中的β-帕拉酮溶液和β-帕拉酮與HPBCD復(fù)合體的水溶液用水稀釋200微克/毫升乙醇溶液、或5毫克/毫升HPBCD溶液，制備5微克/毫升β-帕拉酮溶液，用于HPLC和UV分析。以2％乙醇或200微克/毫升HPBCD作為參考溶液，按照常規(guī)步驟，完成258納米的UV測定。HPLC分析中，將所得的5微克/毫升β-帕拉酮溶液100微升注入C18反相分析柱，以1毫升/分鐘的流速在10分鐘內(nèi)將B緩沖液濃度梯度從25％線性提升至75％。通過258納米的紫外線吸收量，檢測出吸收峰，并根據(jù)峰面積與外部標(biāo)準(zhǔn)的比率定量峰值。
在紫外光譜的258納米處觀察到β-帕拉酮的λmax。對于單獨(dú)的β-帕拉酮和β-帕拉酮-HPBCD復(fù)合體，β-帕拉酮溶液在258納米處的紫外線測定說明，共同作用的吸收度是26620M-1cm-1。
圖3說明了20％HPBCD中5毫克/毫升β-帕拉酮溶液的典型HPLC色譜圖，為了HPLC分析用水將該β-帕拉酮溶液稀釋至5微克/毫升。β-帕拉酮洗提出現(xiàn)在大約5.4分鐘。在β-帕拉酮單獨(dú)的5微克/毫升水溶液與可比的5微克/毫升β-帕拉酮-HPBCD復(fù)合體之間，色譜圖未顯示出保存時(shí)間與整體峰面積上的差別。這些結(jié)果證明，β-帕拉酮在低濃度時(shí)(即5微克/毫升)未與HPBCD結(jié)合。當(dāng)將增加含量的HPBCD加入5微克/毫升β-帕拉酮-HPBCD溶液時(shí)，HPLC分析說明，柱空體積的峰洗提(保存時(shí)間大約是1.2分鐘)推測是β-帕拉酮與HPBCD的復(fù)合體，隨著對應(yīng)β-帕拉酮峰值的減小，該峰尺寸增大。然而，在顯示β-帕拉酮含量的分析條件下，需要將檢測溶液稀釋到5微克/毫升，大約5.4分鐘的整體峰面積規(guī)定了溶液中β-帕拉酮的總含量。
e.β-帕拉酮的穩(wěn)定性通過HPLC分析，監(jiān)測75％乙醇中或β-帕拉酮與HPBCD水性復(fù)合體形式的β-帕拉酮溶液穩(wěn)定性。在室溫的黑暗中儲(chǔ)存時(shí)，β-帕拉酮-HPBCD溶液表現(xiàn)出明顯優(yōu)于乙醇溶液的穩(wěn)定性。經(jīng)過5天儲(chǔ)存，HPBCD溶液未表現(xiàn)出可測的分解產(chǎn)物峰，經(jīng)過21天儲(chǔ)存，在保存時(shí)間3.28分鐘出現(xiàn)了濃度大約為0.1％的單一降解產(chǎn)物峰。比較起來，經(jīng)過5天儲(chǔ)存，黑暗中儲(chǔ)存的乙醇溶液表現(xiàn)出β-帕拉酮的峰值明顯損失。當(dāng)室溫下兩者暴露于正常房間亮度的光線時(shí)，與75％乙醇溶液中的β-帕拉酮相比，在β-帕拉酮-HPBCD溶液中觀察到了明顯增強(qiáng)的穩(wěn)定性。然而，暴露在光線下，β-帕拉酮-HPBCD溶液還是會(huì)發(fā)生輕微的降解，暴露21天后降解產(chǎn)物占到峰總面積的3.4％。
乙醇溶液中β-帕拉酮降解的機(jī)理已經(jīng)得到了證實(shí)，涉及相對穩(wěn)定半還原態(tài)醌基的光致還原(Ci，Xiohong，et al.，J.Am.Chem.Soc.1989111，1337-1343)。在上述研究中，通過與硼氫化鈉還原β-帕拉酮所得產(chǎn)物保存時(shí)間相比較，乙醇溶液中主要的降解產(chǎn)物鑒定為還原(氫化醌)態(tài)的β-帕拉酮。這種物質(zhì)的洗提出現(xiàn)在大約6.9分鐘，并尚未在β-帕拉酮的HPBCD溶液中發(fā)現(xiàn)，似乎說明兩者具有不同的降解路徑。
2.凍干β-帕拉酮與HPBCD復(fù)合體溶液按照實(shí)例1a和1c的過程，制備β-帕拉酮與HPBCD復(fù)合體的溶液樣品。將這些樣品移入凍干容器，預(yù)先冷卻至-40℃，持續(xù)2小時(shí)。真空處理此容器，并持續(xù)12-20小時(shí)，處理時(shí)間取決于樣品(樣品的數(shù)量、尺寸、組合物和其它性質(zhì)與特征)，從而獲得冷凍干燥的產(chǎn)物。攪拌下用5.9毫升去離子水，使凍干樣品重新構(gòu)成，得到10毫克/毫升的β-帕拉酮。檢測樣品的結(jié)果列于表8中。
表8檢測的β-帕拉酮與HPBCD系統(tǒng)(所有的都是80毫克/瓶劑)
基于上述結(jié)果，40％HPBCD與10毫克/毫升的β-帕拉酮需要稀釋10-100倍，達(dá)到溶解度要求。如果儲(chǔ)存條件下溶液穩(wěn)定，它可以作為不需要凍干處理的、適合的非腸道溶液。如果優(yōu)選采用凍干處理，經(jīng)證實(shí)，20％HPBCD與5毫克/毫升的β-帕拉酮是快速凍干、且相對快速重新構(gòu)成的良好選擇。
3.結(jié)合Taxol的β-帕拉酮的生命體外研究已經(jīng)證實(shí)，微摩爾濃度的β-帕拉酮與IC50水平的Taxol_結(jié)合應(yīng)用到腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中，完全消除了菌落的生成。在這些研究中，將指數(shù)增長細(xì)胞以每孔1,000個(gè)細(xì)胞種植在6孔平板中，并允許其附著48小時(shí)。將DMSO中增加溶解度的β-帕拉酮和/或Taxol_加入孔中。用等體積的DMSO處理對照孔。4小時(shí)后清洗細(xì)胞并加入新鮮的介質(zhì)。每天觀察培養(yǎng)，并持續(xù)10-20天，再固定染色。將多于30個(gè)細(xì)胞的菌群作為存活記錄。如圖4所示，在人類不同組織類型范圍廣泛的癌細(xì)胞中，觀察到對癌細(xì)胞生存的協(xié)同抑制，其中組織類型包括卵巢、乳腺、前列腺、黑素瘤、肺、胰腺細(xì)胞系。在減少癌細(xì)胞群落生成方面，單獨(dú)的β-帕拉酮或Taxol_都缺乏有效性。MTT和tryptan blue排除分析證明，細(xì)胞存活的降低是由于細(xì)胞死亡造成的。形成梯形DNA與膜聯(lián)蛋白的染色說明，細(xì)胞死亡歸因于細(xì)胞程序性死亡。
在兩個(gè)卵巢腫瘤細(xì)胞系OVCAR-3和MDAH-2774中，參照測異輻射熱儀的記錄分析，深入評價(jià)β-帕拉酮與Taxol_藥物與藥物之間的相互作用。確定每種藥物單獨(dú)的IC50值，然后將2種藥物按其IC50濃度的固定比率混合并施用于細(xì)胞。連續(xù)暴露4天后，用MTT分析測定細(xì)胞生活力。如圖5、6、7所示，在這些細(xì)胞系中2種藥物的混合證明了協(xié)同抑制細(xì)胞的特性。
圖5中，當(dāng)注釋成組合曲線時(shí)，每個(gè)測試組合與2個(gè)端點(diǎn)(100％β-帕拉酮與100％Taxol_)構(gòu)成統(tǒng)計(jì)對照。統(tǒng)計(jì)上的有效觀測需要在組合(β-帕拉酮與Taxol_)吸收值與端點(diǎn)值(單獨(dú)的β-帕拉酮或Taxol_)之間存在差別。如果大部分值(5個(gè)數(shù)值中要大于等于3)統(tǒng)計(jì)上(p＜0.05)都低于端點(diǎn)連線，那么就反映出了協(xié)同作用。圖6中，與2種單獨(dú)的藥物相比，5種評價(jià)的藥物組合中有3種表現(xiàn)出有效的差別(p＜0.05)。圖7中，與2種單獨(dú)的藥物相比，5種評價(jià)的藥物組合全部表現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞毒性(p＜0.05)。
β-帕拉酮同樣表現(xiàn)出具有抑制順式-鉑耐藥性細(xì)胞系的活性。卵巢系A(chǔ)2780DDP具有抗順式-鉑(順氯氨鉑)的強(qiáng)耐藥性，其順氯氨鉑的IC50濃度通常大于100微摩爾。如圖8所示，對于強(qiáng)耐藥系及其來源的親本系(A2780s)，β-帕拉酮作為單獨(dú)藥劑，具有同等的細(xì)胞毒性。在檢測β-帕拉酮抑制順氯氨鉑耐藥性細(xì)胞系中，細(xì)胞暴露在β-帕拉酮溶液中4小時(shí)。然后，清洗細(xì)胞，再加入新鮮介質(zhì)。每天觀察細(xì)胞培養(yǎng)，持續(xù)10-20天后，再固定染色。將大于30個(gè)細(xì)胞的菌群作為存活記錄。
4.與Taxol_結(jié)合的β-帕拉酮的生命體內(nèi)研究通過腹膜內(nèi)注射，將人卵巢癌細(xì)胞(36M2，最初從惡性腹水中離析的)接種到24小時(shí)前接受照射的無胸腺雌裸鼠。在此模型中，接種后大約1周形成轉(zhuǎn)移性病灶，在4-5周出現(xiàn)腹膜的腫瘤結(jié)核和惡性腹水。腫瘤接種(10×106個(gè)細(xì)胞)后10天，開始治療控制。對照組只用載體處理。在每個(gè)典型的處理循環(huán)中，僅用β-帕拉酮的組接受含有25-50毫克/公斤β-帕拉酮的磺油溶液腹膜內(nèi)注射，僅用Taxol_的組接受1毫克/千克(在磺油中稀釋的Taxol配方)腹膜內(nèi)注射，兩組在24小時(shí)后接受載體腹膜內(nèi)注射。在組合用藥的組中，裸鼠先接受25-50毫克/千克β-帕拉酮的注射，24小時(shí)后再接受1毫克/千克Taxol_的注射。所有組都接受10個(gè)循環(huán)的療程，每個(gè)循環(huán)之間間隔1天。在最后治療循環(huán)的2周后(第50天)殺死鼠，測定抗腫瘤活性。通過總體外觀和體重評價(jià)宿主的毒性。
圖9說明了三組獨(dú)立治療實(shí)驗(yàn)之一的代表性結(jié)果，其中每組有6只鼠。與對照相比，單獨(dú)使用β-帕拉酮治療的鼠明顯表現(xiàn)出腫瘤數(shù)量降低(大約75％)。單獨(dú)使用Taxol_治療的鼠表現(xiàn)出稍微欠缺的效果(大約60％)，并且兩組在腫瘤結(jié)核和腹水?dāng)?shù)量上都表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)臏p少。用β-帕拉酮和Taxol_治療的動(dòng)物中，剖腹手術(shù)中未發(fā)現(xiàn)惡性腹水，而且除了每只鼠有0-3個(gè)微小的病灶外，腹膜都很干凈。盡管這些病灶呈現(xiàn)為纖維化疤，但是將它們記錄為腫瘤結(jié)核。用組合方式治療的鼠表現(xiàn)健康，在整個(gè)治療周期中，體重沒有損失，并且在尸體解剖中沒有發(fā)現(xiàn)內(nèi)部器官的整體異常。
在人卵巢異種移植模型中完成相似研究，比較含有β-帕拉酮的HPBCD溶液與含有β-帕拉酮的磺油溶液。與上述研究相同，向無胸腺的雌性裸鼠、腹膜內(nèi)接種10×106個(gè)36M2人卵巢癌細(xì)胞，10天后開始治療，其中每組有8只鼠(腫瘤接種前未經(jīng)照射)。對照組只用載體處理。在每個(gè)典型的處理循環(huán)中，僅用β-帕拉酮的組接受含有25或10毫克/公斤β-帕拉酮的HPBCD溶液腹膜內(nèi)注射，僅用Taxol_的組接受1毫克/千克(磺油中稀釋的Taxol_配方)腹膜內(nèi)治療，兩組在24小時(shí)后接受腹膜內(nèi)載體注射。在2個(gè)組合用藥的組中，鼠先接受含有25或10毫克/千克β-帕拉酮的HPBCD的治療，24小時(shí)后再接受1毫克/千克Taxol_的治療。組合用藥的第3組接受了含有25毫克/千克β-帕拉酮的磺油的治療，24小時(shí)后接受1毫克/千克Taxol_的治療。所有組都經(jīng)過6次循環(huán)的療程，每個(gè)循環(huán)之間間隔1天。在大約第50天(大約最后治療的第4周)殺死鼠，測定抗腫瘤活性。
圖10說明了此研究結(jié)果。與使用含有β-帕拉酮可比含量的磺油溶液治療的鼠相比，使用含有β-帕拉酮的HPBCD溶液治療的鼠表現(xiàn)出，腫瘤結(jié)核數(shù)量同樣減少。
接受人乳腺癌異種移植(MCF-7細(xì)胞系)的雌性裸鼠中，有效的抗腫瘤活性同樣得到了證實(shí)。皮下腫瘤結(jié)核的直徑達(dá)到了大約0.5厘米時(shí)，開始治療鼠。如圖11所示，與對照相比，接受了β-帕拉酮與Taxol_的6次循環(huán)治療的鼠表現(xiàn)出，腫瘤體積驚人地減少。此外，隨著實(shí)驗(yàn)的繼續(xù)，經(jīng)治療的鼠腫瘤體積沒有增加。圖11中，皮下腫瘤異種移植的體積如圖A所示，終止治療后6周測定的鼠體重如圖B所示。
5.Intralipid_中β-帕拉酮配方的研究制備β-帕拉酮濃度為10毫克/毫升的乙醇溶液。將其濃度稀釋5倍，得到100-500微升的總體積。伴隨著旋轉(zhuǎn)，向Intralipid_逐滴加入乙醇溶液，制備β-帕拉酮濃度為2毫克/毫升的10％Intralipid_溶液。沒有觀察到沉淀與破乳的直接跡象。
重復(fù)上述過程，其中將濃度稀釋10倍，制備含有1毫克/毫升β-帕拉酮的10％Intralipid_。旋轉(zhuǎn)下將乙醇溶液逐滴加入Intralipid_。沒有觀察到沉淀與破乳的直接跡象。3天后，2毫克/毫升制備物發(fā)生結(jié)晶，而1毫克/毫升制備物沒有變化。6天后，1毫克/毫升制備物依舊沒有變化。
6.單獨(dú)試劑的β-帕拉酮類似物的抑制作用在6種人癌細(xì)胞系中A2780和A2780/CP(卵巢)、MCF-7(乳腺)、HT-29(結(jié)腸)、BxPC-3(胰腺)、和A549(肺)，與β-帕拉酮(CO-501)相比，評價(jià)本發(fā)明一些β-帕拉酮類似物和衍生物、以及董尼酮、4-已酰氧-1，2-萘醌(如上文所述，參見圖12)的抑制生長活性。將人腫瘤細(xì)胞系(購自ATCC，Rockville，MD)培養(yǎng)在37℃(5％CO2)的RPMI介質(zhì)中(RPMI；Nova Tech，Grand Island，N.Y.)，其中含有10％牛胎兒血清(FBS，Nova Tech)。以104個(gè)細(xì)胞/孔的最終濃度，將等分細(xì)胞種植到96孔微滴定度平板的每個(gè)孔中，暴露在檢測化合物之前培養(yǎng)24小時(shí)。經(jīng)過4小時(shí)處理后，再用無藥劑介質(zhì)培養(yǎng)24小時(shí)后，通過MTS分析測定每種化合物DMSO溶液的抑制生長活性。MTS分析是一種比色分析法，其基于生活細(xì)胞將MTS轉(zhuǎn)化為著色甲_產(chǎn)物的能力，其中MTS是一種新型四唑化合物和電子偶合劑，并且著色的甲_產(chǎn)物可溶于細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)。然后，通過用490納米波長測定甲_產(chǎn)物的吸收度，確定細(xì)胞濃度。對比用載體處理的對照細(xì)胞，計(jì)算用IC50表達(dá)的抑制生長活性。3次獨(dú)立分析的結(jié)果列于表9，其中每次分析包括每個(gè)藥劑含量的3個(gè)平行測定。
如人們所期望的，在所有6種腫瘤細(xì)胞系中，都觀察到β-帕拉酮(CO-501)的劑量依賴性抑制作用。如文獻(xiàn)所述，董尼酮類似物(CO-506)表現(xiàn)出與CO-501相似的抑制活性。在3種β-帕拉酮的類似物與衍生物中，CO-504(4-乙酸基β-帕拉酮)也具有與CO-501相似的抑制活性；在所有細(xì)胞中，CO-503(4-羥基β-帕拉酮)明顯缺乏抑制活性；而CO-505不具有抑制活性(在濃度高達(dá)20微摩/升下沒有觀察到生長抑制作用)。CO-507是一種萘醌衍生物，也不具有抑制活性。
表9β-帕拉酮(CO-501)和5種類似物與衍生物的抑制生長活性
*在20微摩爾/升濃度下沒有抑制生長的作用7.在Bg-Nu-Xid鼠生命體內(nèi)測定β-帕拉酮化學(xué)藥品合成β-帕拉酮，將其以10毫克/毫升濃度溶解于40％羥丙基-β-環(huán)糊精中，放入黑色容器室溫下保存。將羥丙基-β-環(huán)糊精溶解在蒸餾水中濃度達(dá)到10毫克/毫升，室溫下保存。MATRIGEL_、一種基膜基質(zhì)，從Becton Dickinson Labware(BDBiosciences，Two Oak Park Drive，Bedford，MA)購得，溶解在含有50微克/毫升慶大酶素的Dulbecoo改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基中，并在-20℃下保持冷凍。MATRIGEL_是從Engelbreth-Holm-Swarm鼠腫瘤提取出來的，此腫瘤富含于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白中。主要的基質(zhì)成分是層粘連蛋白、膠原蛋白IV、巢蛋白和類肝素硫酸蛋白多糖(基底膜蛋白聚糖)；此基質(zhì)還含有生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs[膠原酶])和纖溶酶原活化劑，不含任何金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)。MATRIGEL_基質(zhì)4℃下呈液態(tài)，室溫下形成膠體，產(chǎn)生重新構(gòu)成的三維基質(zhì)。此模型系統(tǒng)精密地模仿了生命體內(nèi)基膜的結(jié)構(gòu)、構(gòu)成、物理特性和功能特性，為研究細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生化功能、遷移或侵入、基因表達(dá)，提供了相應(yīng)的生理環(huán)境。
細(xì)胞培養(yǎng)Dr William Dalton(Lee Moffit Cancer Center，Tampa，F(xiàn)L)提供了RPMI8226細(xì)胞(人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系)。這種細(xì)胞的保存是通過在RPMI1640(Collgro_，Mediatech Inc.，Herndon，VA)中頻繁傳代，其中RPMI1640含有10％牛胎兒血清(FBS)(GibcoBRL，Life Technologies，Grend Island，N.Y.)，并在162立方厘米細(xì)胞培養(yǎng)瓶(Costar_，Corning Incorporated，NY)中，添加了2×10-3摩L-谷氨酰胺、100單位/毫升青霉素(Pen)、100微克/毫升鏈霉素(Cellgro_，Mediatech Inc.，Herndon，VA)。指數(shù)生長的細(xì)胞系有CD138+、CD38+/CD45RA、負(fù)性EBV和不含病原體。
鼠從FCRCC、Frederick、Bethesda、MD獲得40只6周大Bg-Nu-Xid鼠(T、B和NK細(xì)胞存在缺陷)，飼養(yǎng)在DFCI的Redstone動(dòng)物裝置中。這些鼠帶有3個(gè)獨(dú)立的變異—與損害巨噬細(xì)胞化學(xué)趨向性與活動(dòng)性、以及NK細(xì)胞缺陷相關(guān)的Beige(Bg)常染色體隱性變異；與胸腺發(fā)育不全造成的T細(xì)胞缺陷有關(guān)的nude(nu)常染色體隱性變異；和造成B淋巴細(xì)胞功能缺陷的X連接免疫缺陷(xid)。將動(dòng)物飼養(yǎng)在帶有障礙結(jié)構(gòu)的籠子中，此籠子由鋸末襯底，帶有分層空間，其溫度保持在19-22℃。隨意供應(yīng)嚙齒動(dòng)物的食物和無菌食用水。鼠全部被檢疫，排除了任何患病的可能。1只鼠死于運(yùn)輸途中，由于脫水(n＝2)、可能的感染(n＝2)和外傷造成的失血過多(n＝1)，另外損失了5只鼠。1周后，在所有鼠的飲用水中，加入enrofloxacin(一種喹諾酮抗生素)。涉及動(dòng)物的所有步驟都獲得the Dana Farber CancerInstitute(DFCI)學(xué)會(huì)的動(dòng)物保護(hù)與使用委員會(huì)準(zhǔn)則的認(rèn)可，并按照該準(zhǔn)則執(zhí)行。
組織分析按照DFCI動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)的原則，當(dāng)腫瘤最大直徑達(dá)到20毫米或動(dòng)物垂死時(shí)，殺死鼠。使用異氟烷麻醉鼠，再采集逆流(retroorbital)血液。采用頸錯(cuò)位的方式殺死鼠。解剖軟組織(筋膜、肌肉、皮膚等)，取出腫瘤，固定在10％中性的福爾馬林中。取出每組鼠的肝、脾、腎、肺、心臟、和腦，固定在福爾馬林中。將組織脫水，嵌入石蠟塊中。并切成5微米厚的切片，再用蘇木精和曙紅(HE)染色，使用光學(xué)顯微鏡檢查細(xì)胞程序死亡的痕跡。
統(tǒng)計(jì)分析利用student’s“t”檢測法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較使用β-帕拉酮組與對照組之間細(xì)胞程序死亡程度與腫瘤體積的差別。
設(shè)計(jì)有34只鼠應(yīng)用到本研究中。將RPMI8226(3×107)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞清洗3次，再次懸浮在100微升RPMI1640中，使用皮下注射器27G針頭和1毫升針管，將含有RPMI8226的100微升RPMI1640連同100微升MATRIGEL基質(zhì)一起皮下注射入所有鼠的右肋腹部。每天觀察鼠的健康狀況和腫瘤發(fā)展?fàn)顩r，并且每周給鼠稱重。
注射RPMI8226細(xì)胞后平均7天，所有鼠(n＝34)都出現(xiàn)局部明顯的腫瘤。一旦腫瘤明顯，每隔一天使用手持游標(biāo)卡尺測量其正交直徑。將31只鼠隨機(jī)分配到β-帕拉酮組(n＝16)和對照組(n＝15)。對照組的鼠每隔一天在左下腹部位接受皮下注射50毫克/千克體重的40％羥丙基-β-環(huán)糊精溶液。β-帕拉酮組的鼠每隔一天接受皮下注射50毫克/千克體重的含有β-帕拉酮的40％羥丙基-β-環(huán)糊精(圖13)。每次注射的常規(guī)體積是125微升。記錄腫瘤直徑，使用圓柱體標(biāo)準(zhǔn)公式0.523×(小直徑)2×大直徑，計(jì)算其體積。當(dāng)腫瘤最大直徑大于等于20毫米時(shí)、或鼠垂死時(shí)，殺死鼠。
由于它容易建立，并允許體外測定監(jiān)視皮下腫瘤的生長，而且可用于研究不同化學(xué)治療劑的效果，因此此異種移植鼠模型具有吸引力。迅速生長的腫瘤會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞程序死亡與細(xì)胞壞死的部位，但是本實(shí)驗(yàn)中它并不是評價(jià)不同新型有效治療劑細(xì)胞毒性的主要障礙。以前已經(jīng)報(bào)道了相似模型，使用抗-gp130刺激物單克隆抗體(B1+I2)，研究多發(fā)性骨髓瘤患者細(xì)胞(Reme et al.Br JHacematol 114406，2001)的生長與永生化；使用抗人IL-6R抗體PM1和抗人IL-6抗體MH116，抑制IL-6依賴細(xì)胞系(S6B45)(Suzuki et al.，Eur J Immunol 221989，1992)的生長。以前已經(jīng)報(bào)道了檢測多發(fā)性骨髓瘤治療劑的各種動(dòng)物模型(Gado et al.，Haematologica 86227，2001；Dallas et al.Blood 931697，1999；Manning et al.Immunol Cell Biol 73326，1995；Takura et al.CancerRes 262564，1996；Potter et al. J Exp Med 161996，1985；Yaccobyet al.Blood 922908，1998；Urashima et al.Blood 90754，1997)。
β-帕拉酮與環(huán)糊精毒性的測定對于β-帕拉酮與羥丙基-β-環(huán)糊精，兩組鼠都有很好的耐藥性。兩組中沒有鼠死亡，而且所有鼠的體重都有增長(圖14)。兩組中，β-帕拉酮與羥丙基-β-環(huán)糊精不具有明顯的毒性。在注射溶解36小時(shí)的β-帕拉酮后，1只鼠醫(yī)原性內(nèi)腹膜出血。在β-帕拉酮組與對照組中，還都發(fā)現(xiàn)了腎臟輕微管狀空泡化現(xiàn)象。由于此作用出現(xiàn)在兩組中，因此暗示，羥丙基-β-環(huán)糊精與以前對環(huán)糊精的報(bào)道相似(Frank et al.Am J Pathol83367，1976)，然而這種腎中毒變化可以隨著治療的停止發(fā)生逆轉(zhuǎn)(Donaubauer et al.Regul Toxicol Pharmacol 27189，1998)。
β-帕拉酮對腫瘤體積的影響對照組的鼠最多接受6次的羥丙基-β-環(huán)糊精用藥，然而，β-帕拉酮組的鼠可以最多接受8次此種用藥。在第11天與對照組相比(圖15)，β-帕拉酮組(p＝0.007)的鼠腫瘤體積出現(xiàn)明顯的統(tǒng)計(jì)性下降。重要的是，在第5、7、9、11、13、15和17天，β-帕拉酮組的存活率高于對照組(圖16)，暗示著，在β-帕拉酮組中腫瘤生長緩慢。
組織染色組織病理學(xué)檢查顯示，腫瘤沒有得到密封，并局部侵入軟組織中，其中包括肌肉，但沒有任何遠(yuǎn)距離遷移。腫瘤被鼠來源的血管脈管化，并且腫瘤核具有主要細(xì)胞死亡的最小變化度(0-10％)。確定細(xì)胞程序死亡的組織病理學(xué)依據(jù)有(1)靠近核膜染色質(zhì)的凝縮與聚集、與卷積的核膜；(2)增大并異常的顆粒狀核仁；(3)細(xì)胞的皺縮和變圓；(4)細(xì)胞膜的起泡；(5)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與線粒體的較小擴(kuò)張。由兩位獨(dú)立觀察員使用光學(xué)顯微鏡(圖17A)確定，與對照組相比(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差＝20.0％±10.4)，在β-帕拉酮組(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差＝41.1％±12.7)的腫瘤中，MM細(xì)胞程序死亡的比例統(tǒng)計(jì)性地明顯升高。
顯微證據(jù)證明，在β-帕拉酮組或?qū)φ战M中，對于鼠的肝、心臟、肺、腦、脾，β-帕拉酮、或羥丙基-β-環(huán)糊精不帶有任何毒性(圖17B、C、D、E、F)。來自兩組的腎臟都表現(xiàn)出輕微的管狀空泡化，說明羥丙基-β-環(huán)糊精具有成管狀毒性(圖17G、H)?；趯⒘u丙基-β-環(huán)糊精配制在HPBCD溶液中，此毒性不期望在預(yù)期的人治療劑中出現(xiàn)。這些結(jié)論說明，配制在HPBCD中的β-帕拉酮具有安全性，并可以有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長，與宿主生命體存活期的延長有關(guān)。因此，可以得出結(jié)論，β-帕拉酮具有明顯的抗腫瘤活性，只帶有最低的毒性，可用于在生命體內(nèi)治療多發(fā)性骨髓瘤。
等價(jià)方案盡管本發(fā)明已經(jīng)詳細(xì)公開了特殊具體的實(shí)施方案，但是這樣做的目的只是通過實(shí)例加以說明本發(fā)明，并沒有對所附權(quán)利要求的范圍加以限制。特別是，本發(fā)明認(rèn)為，在不超出權(quán)利要求所定的發(fā)明范圍，可以對本發(fā)明進(jìn)行各種替換、改造與修改。所附權(quán)利要求是所公開的本發(fā)明的代表。此外，沒有以權(quán)利要求書尋求保護(hù)的本發(fā)明也已經(jīng)被考慮到了?？梢岳斫?，附圖沒有必要按比例，實(shí)際上它們只是概念性地說明。申請人保留在后續(xù)權(quán)利要求中尋求對本發(fā)明進(jìn)行保護(hù)的權(quán)利。
權(quán)利要求
1.一種藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥用組合物，其中藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的混合物或溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥用組合物，其中該組合物是水溶液或油溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的藥用組合物，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的藥用組合物，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的藥用組合物，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的藥用組合物，其中藥用增溶載體分子是油基增溶載體分子。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的藥用組合物，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
9.根據(jù)權(quán)利要求3的藥用組合物，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
11.一種藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，在非腸道給藥時(shí)用水溶液稀釋后，在水溶液中仍保持有效的溶解度。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物與藥用水增溶載體混合。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的藥用組合物，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的藥用組合物，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的藥用組合物，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
16.根據(jù)權(quán)利要求11的藥用組合物，其中藥用增溶載體分子是油基增溶載體分子。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的藥用組合物，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
18.根據(jù)權(quán)利要求11的藥用組合物，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
19.根據(jù)權(quán)利要求12的藥用組合物，其中該混合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
20.根據(jù)權(quán)利要求11的藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
21.一種β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的配方，該配方冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，具有了有效的溶解度。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的配方，其中β-帕拉酮或其衍生物、類似物與藥用增溶載體分子混合。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的配方，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的配方，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的配方，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
26.根據(jù)權(quán)利要求21的配方，其中溶液中β-帕拉酮濃度至少是1毫克/毫升。
27.根據(jù)權(quán)利要求21的配方，其中β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
28.一種治療哺乳動(dòng)物癌癥的試劑盒，其中至少包括一個(gè)含有符合1、11或21任一權(quán)利要求的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物的瓶劑。
29.一種藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的藥用組合物，其中該組合物含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的混合物或溶液，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30的藥用組合物，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的藥用組合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
33.根據(jù)權(quán)利要求29或30的藥用組合物，其中該組合物是水溶液或油溶液。
34.根據(jù)權(quán)利要求29的藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子與第二抗癌劑和藥用載體相混合，并裝入單一的小瓶中。
35.根據(jù)權(quán)利要求29的藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子裝入第一個(gè)小瓶中，第二抗癌劑和藥用載體裝入第二個(gè)小瓶中。
36.根據(jù)權(quán)利要求29的藥用組合物，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的藥用組合物，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的藥用組合物，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
39.根據(jù)權(quán)利要求29的藥用組合物，其中藥用增溶載體分子是油基增溶載體分子。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的藥用組合物，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
41.根據(jù)權(quán)利要求33的藥周組合物，其中溶液中β-帕拉酮濃度至少是1毫克/毫升。
42.根據(jù)權(quán)利要求29的藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用水增溶載體分子、第二抗癌劑和藥用載體以乳濁液狀態(tài)存在。
43.一種治療哺乳動(dòng)物腫瘤的試劑盒，其中包括一個(gè)或多個(gè)小瓶，該小瓶含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子；在相同或不同的小瓶中，還含有第二抗癌劑。
44.根據(jù)權(quán)利要求43的試劑盒，其中一個(gè)或多個(gè)小瓶含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的混合物，在相同或不同的小瓶中，還含有第二抗癌劑。
45.根據(jù)權(quán)利要求43或44的試劑盒，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的試劑盒，其中taxane衍生物是paclitaxel。
47.根據(jù)權(quán)利要求43或44的試劑盒，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的試劑盒，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的試劑盒，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
50.根據(jù)權(quán)利要求43或44的試劑盒，其中增溶載體分子是油基增溶載體分子。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的試劑盒，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
52.根據(jù)權(quán)利要求43或44的試劑盒，其中溶液中β-帕拉酮濃度至少是1毫克/毫升。
53.一種將藥用組合物給藥于病體的癌癥治療方法，該方法包括向病體給予含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的藥用組合物。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的混合物或溶液。
55.根據(jù)權(quán)利要求53或54的方法，其中該組合物是水溶液或油溶液。
56.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
57.根據(jù)權(quán)利要求56的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
58.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
59.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中藥用增溶載體分子是油基增溶載體分子。
60.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
61.根據(jù)權(quán)利要求55的方法，其中溶液中β-帕拉酮濃度至少是1毫克/毫升。
62.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中藥用組合物以非腸道方式用藥。
63.根據(jù)權(quán)利要求62的方法，其中該藥用混合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
64.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
65.一種將藥用組合物給藥于病體的癌癥治療方法，該方法包括向病體給予藥用組合物，其中該藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，在非腸道給藥時(shí)用水溶液稀釋后，在水溶液中仍保持有效的溶解度。
66.根據(jù)權(quán)利要求65的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物與藥用增溶載體混合。
67.根據(jù)權(quán)利要求65的方法，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
68.根據(jù)權(quán)利要求67的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
69.根據(jù)權(quán)利要求68的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
70.根據(jù)權(quán)利要求65的方法，其中藥用增溶載體分子是油基增溶載體分子。
71.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
72.根據(jù)權(quán)利要求65的方法，其中溶液中β-帕拉酮濃度至少是1毫克/毫升。
73.根據(jù)權(quán)利要求65的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用水增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
74.一種治療癌癥的方法，該方法包括將β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的配方給藥于病體，其中該混合物冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，具有了有效的溶解度。
75.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中β-帕拉酮或其衍生物、類似物與藥用增溶載體混合。
76.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
77.根據(jù)權(quán)利要求76的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
78.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
79.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
80.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中配方以非腸道方式用藥。
81.根據(jù)權(quán)利要求80的方法，其中該藥用組合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
82.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
83.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，該藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
84.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的混合物，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
85.根據(jù)權(quán)利要求83或84的方法，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
86.根據(jù)權(quán)利要求85的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
87.根據(jù)權(quán)利要求83或84的方法，其中該組合物是水溶液或油溶液。
88.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子與第二抗癌劑taxane衍生物和藥用載體相混合，并裝入單一的小瓶中。
89.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中將有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子裝入第一小瓶中，將第二抗癌劑和藥用載體裝入第二小瓶中，第一與第二瓶劑可以同時(shí)用藥，也可以次序用藥。
90.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
91.根據(jù)權(quán)利要求90的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
92.根據(jù)權(quán)利要求91的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
93.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中增溶載體分子是油基增溶載體分子。
94.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
95.根據(jù)權(quán)利要求87的方法，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
96.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中藥用組合物以非腸道方式用藥。
97.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用水增溶載體分子、抗癌劑和藥用載體以乳濁液狀態(tài)存在。
98.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，非腸道給藥時(shí)用水溶液稀釋后，在水溶液中仍保持有效的溶解度，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
99.根據(jù)權(quán)利要求88的方法，其中藥用組合物中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物與藥用增溶載體分子混合，非腸道給藥時(shí)用水溶液稀釋后，在水溶液中仍保持有效的溶解度。
100.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
101.根據(jù)權(quán)利要求100的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
102.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子與第二抗癌劑和藥用載體相混合，并裝入單一的小瓶中。
103.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中將有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子裝入第一小瓶中，將第二抗癌劑和藥用載體裝入第二小瓶中，第一與第二瓶劑可以同時(shí)用藥，也可以次序用藥。
104.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
105.根據(jù)權(quán)利要求104的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
106.根據(jù)權(quán)利要求105的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
107.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中增溶載體分子是油基增溶載體分子。
108.根據(jù)權(quán)利要求107的方法，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
109.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
110.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中藥用組合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
111.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子、第二抗癌劑和藥用載體以乳濁液狀態(tài)存在。
112.一種治療癌癥的方法，其中將β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子的配方給藥于病體，該配方冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，具有了有效的溶解度，配方還含有第二抗癌劑和藥用載體。
113.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中配方中的β-帕拉酮或其衍生物、類似物與藥用增溶載體相混合。
114.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子與第二抗癌劑和藥用載體相混合，并裝入單一的小瓶中。
115.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中將有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子裝入第一小瓶中，將第二抗癌劑和藥用載體裝入第二小瓶中，第一與第二瓶劑可以同時(shí)用藥，也可以次序用藥。
116.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
117.根據(jù)權(quán)利要求116的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
118.根據(jù)權(quán)利要求117的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
119.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
120.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中抗癌劑是taxane衍生物。
121.根據(jù)權(quán)利要求120的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
122.根據(jù)權(quán)利要求112的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子、第二抗癌劑和藥用載體以乳濁液狀態(tài)存在。
123.一種治療癌癥的方法，先將藥用組合物給藥病體，再讓病體接受放射治療，該藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及增溶載體分子。
124.根據(jù)權(quán)利要求123的方法，其中藥用增溶載體分子是下列水增溶載體分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-環(huán)糊精或其類似物、β-環(huán)糊精或其類似物、γ-環(huán)糊精或其類似物。
125.根據(jù)權(quán)利要求124的方法，其中水增溶載體分子是β-環(huán)糊精。
126.根據(jù)權(quán)利要求125的方法，其中β-環(huán)糊精是羥丙基-β-環(huán)糊精。
127.根據(jù)權(quán)利要求123的方法，其中增溶載體分子是油基增溶載體分子。
128.根據(jù)權(quán)利要求127的方法，其中油基增溶載體分子是磺油分子。
129.根據(jù)權(quán)利要求123的方法，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
130.根據(jù)權(quán)利要求123的方法，其中該藥用組合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
131.根據(jù)權(quán)利要求123的方法，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
132.一種藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、類似物，并以藥用脂肪乳濁液賦形劑配制成適合非腸道用藥的乳濁液。
133.根據(jù)權(quán)利要求132的藥用組合物，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
134.根據(jù)權(quán)利要求132的藥用組合物，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
135.根據(jù)權(quán)利要求132的藥用組合物，其中該乳濁液含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
136.一種β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用脂肪乳濁液賦形劑的配方，其中配方冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，具有了有效的溶解度。
137.根據(jù)權(quán)利要求136的配方，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
138.根據(jù)權(quán)利要求136的配方，其中配方中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
139.一種藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物，并以藥用脂肪乳濁液賦形劑配制成適合非腸道用藥的乳濁液，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
140.根據(jù)權(quán)利要求139的藥用組合物，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
141.根據(jù)權(quán)利要求139的藥用組合物，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
142.根據(jù)權(quán)利要求141的藥用組合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
143.根據(jù)權(quán)利要求139的藥用組合物，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
144.根據(jù)權(quán)利要求139的藥用組合物，其中該乳濁液含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
145.根據(jù)權(quán)利要求139的藥用組合物，其中乳濁液含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用脂肪乳濁液賦形劑，并與第二抗癌劑和藥用載體相混合，裝入單一的小瓶中。
146.根據(jù)權(quán)利要求139的藥用組合物，其中乳濁液含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用脂肪乳濁液賦形劑，并裝入第一小瓶中，第二抗癌劑和藥用載體裝入第二小瓶中。
147.一種治療哺乳動(dòng)物癌癥的試劑盒，其中至少包括一個(gè)含有符合132、136或139任一權(quán)利要求的β-帕拉酮或其衍生物、類似物的瓶劑。
148.一種治療哺乳動(dòng)物腫瘤的試劑盒，其中包括一個(gè)或多個(gè)小瓶，該小瓶中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用脂肪乳濁液賦形劑的乳濁液，在相同或不同的小瓶中，還含有第二抗癌劑。
149.根據(jù)權(quán)利要求148的試劑盒，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
150.根據(jù)權(quán)利要求148的試劑盒，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
151.根據(jù)權(quán)利要求150的試劑盒，其中taxane衍生物是paclitaxel。
152.根據(jù)權(quán)利要求148的試劑盒，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
153.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物用藥于病體，其中該藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及非腸道方式用藥的藥用脂肪乳濁液賦形劑。
154.根據(jù)權(quán)利要求153的方法，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
155.根據(jù)權(quán)利要求153的方法，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
156.根據(jù)權(quán)利要求153的方法，其中該乳濁液含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
157.一種癌癥治療方法，該方法包括將乳濁液用藥于病體，所述的乳濁液含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物，并配制在適用于非腸道用藥的藥用脂肪乳濁液賦形劑中，而且還含有第二抗癌劑和藥用載體。
158.根據(jù)權(quán)利要求157的方法，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
159.根據(jù)權(quán)利要求157的方法，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
160.根據(jù)權(quán)利要求159的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
161.根據(jù)權(quán)利要求157的方法，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
162.根據(jù)權(quán)利要求157的方法，其中乳濁液含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
163.一種治療癌癥的方法，先將乳濁液給藥于病體，再讓病體接受放射治療，該乳濁液含有配制在藥用脂肪乳濁液賦形劑中的有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物。
164.根據(jù)權(quán)利要求163的方法，其中藥用脂肪乳濁液賦形劑是Intralipid_。
165.根據(jù)權(quán)利要求163的方法，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
166.根據(jù)權(quán)利要求163的方法，其中乳濁液含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
167.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是以一處或多處固體腫瘤為特征的。
168.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是前列腺癌。
169.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是多發(fā)性骨髓瘤。
170.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是血液瘤。
171.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是淋巴瘤。
172.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是卵巢癌。
173.一種根據(jù)權(quán)利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一項(xiàng)的方法，其中癌癥是乳腺癌。
174.一種可靜脈用藥的無菌注射藥用組合物，其中該藥用組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物和藥用水增溶載體分子的混合物。
175.根據(jù)權(quán)利要求174的無菌注射藥用組合物，其中該組合物在水溶液中。
176.根據(jù)權(quán)利要求174的無菌注射藥用組合物，其中藥用水增溶載體分子是羥丙基-β-環(huán)糊精。
177.根據(jù)權(quán)利要求174的無菌注射藥用組合物，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
178.根據(jù)權(quán)利要求177的無菌注射藥用組合物，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
179.根據(jù)權(quán)利要求178的無菌注射藥用組合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
180.根據(jù)權(quán)利要求174的無菌注射藥用組合物，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
181.根據(jù)權(quán)利要求174的無菌注射藥用組合物，其中該藥用組合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
182.根據(jù)權(quán)利要求174的無菌注射藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用水增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
183.一種靜脈用藥的無菌注射藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物和藥用油基增溶載體分子的混合物。
184.根據(jù)權(quán)利要求183的無菌注射藥用組合物，其中藥用油基增溶載體分子是磺油分子。
185.根據(jù)權(quán)利要求183的無菌注射藥用組合物，還含有第二抗癌劑和藥用載體。
186.根據(jù)權(quán)利要求185的無菌注射藥用組合物，其中第二抗癌劑是taxane衍生物。
187.根據(jù)權(quán)利要求186的無菌注射藥用組合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
188.根據(jù)權(quán)利要求183的無菌注射藥用組合物，其中溶液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
189.根據(jù)權(quán)利要求183的無菌注射藥用組合物，其中該藥用組合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
190.根據(jù)權(quán)利要求183的無菌注射藥用組合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用水增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
191.一種靜脈用藥的無菌注射藥用組合物，該藥用組合物在藥用脂肪乳濁液賦形劑中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物。
192.根據(jù)權(quán)利要求191的無菌注射藥用組合物，其中脂肪乳濁液是Intralipid_。
193.根據(jù)權(quán)利要求191的無菌注射藥用組合物，還含有抗癌劑和藥用載體。
194.根據(jù)權(quán)利要求191的無菌注射藥用組合物，其中抗癌劑是taxane衍生物。
195.根據(jù)權(quán)利要求194的無菌注射藥用組合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
196.根據(jù)權(quán)利要求191的無菌注射藥用組合物，其中乳濁液中β-帕拉酮的濃度至少是1毫克/毫升。
197.根據(jù)權(quán)利要求191的無菌注射藥用組合物，其中該藥用組合物含有范圍在0.1-10毫克/千克的單位給藥量，用藥頻率是從每周兩次到每4周一次。
198.一種治療病體皮膚病的局部用藥組合物，該組合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，其中該組合物局部施用于病體，治療皮膚病。
199.根據(jù)權(quán)利要求198的局部用藥組合物，其中該組合物是水溶液或油溶液。
200.根據(jù)權(quán)利要求198的局部用藥組合物，其中藥用增溶載體分子是水增溶載體分子。
201.根據(jù)權(quán)利要求198的局部用藥組合物，其中藥用增溶載體分子是油基增溶載體分子。
202.根據(jù)權(quán)利要求198的局部用藥組合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子以乳濁液狀態(tài)存在。
203.根據(jù)權(quán)利要求198的局部用藥組合物，其中皮膚病包括基細(xì)胞癌、扁平細(xì)胞癌、卡波濟(jì)氏肉瘤和黑素瘤。
204.根據(jù)權(quán)利要求198的局部用藥組合物，其中皮膚病是牛皮癬。
205.一種治療皮膚癌的方法，其中包括使用有效用量的符合權(quán)利要求198的藥用組合物給藥于病體。
206.根據(jù)權(quán)利要求205的方法，其中藥用組合物是局部用藥。
207.一種治療皮膚病的方法，其中包括使用有效用量的符合權(quán)利要求198的藥用組合物給藥于病體。
208.根據(jù)權(quán)利要求207的方法，其中皮膚病是牛皮癬。
209.根據(jù)權(quán)利要求207的方法，其中藥用組合物是局部用藥。
210.一種藥用組合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、類似物，并且與適合局部用藥的脂肪乳濁液賦形劑共同配方。
211.一種治療皮膚癌的方法，其中包括使用有效用量的符合權(quán)利要求210的藥用組合物給藥于病體。
212.一種治療皮膚病的方法，其中包括使用有效用量的符合權(quán)利要求210的藥用組合物給藥于病體。
213.根據(jù)權(quán)利要求212的方法，其中皮膚病是牛皮癬。
214.一種具有如下結(jié)構(gòu)式的化合物
215.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的符合權(quán)利要求214的化合物和增溶載體分子。
216.一種皮膚病治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的權(quán)利要求214的化合物和增溶載體分子。
217.根據(jù)權(quán)利要求216的方法，其中皮膚病是牛皮癬。
218.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的4-乙酸基-β-帕拉酮和增溶載體分子。
219.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮和增溶載體分子。
220.一種癌癥治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的2-乙基-6-羥基萘[2，3-b]呋喃-4，5-二酮和增溶載體分子。
221.一種皮膚病治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的4-乙酸基-β-帕拉酮和增溶載體分子。
222.根據(jù)權(quán)利要求221的方法，其中皮膚病是牛皮癬。
223.一種皮膚病治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮和增溶載體分子。
224.根據(jù)權(quán)利要求223的方法，其中皮膚病是牛皮癬。
225.一種皮膚病治療方法，該方法包括將藥用組合物給藥于病體，所述的組合物含有有效用量的2-乙基-6-羥基萘[2，3-b]呋喃-4，5-二酮和增溶載體分子。
226.根據(jù)權(quán)利要求225的方法，其中皮膚病是牛皮癬。
全文摘要
經(jīng)證實(shí)，β－帕拉酮具有有效的抗腫瘤活性，抑制人類的癌癥系，但是在大多數(shù)藥用溶劑中其溶解性很差。本發(fā)明采用新型藥用組合物克服這一重要缺陷，該新型藥用組合物含有有效用量的β－帕拉酮或其衍生物、類似物以及藥用增溶載體分子，此增溶載體分子可以是水增溶載體分子、例如羥丙基－β－環(huán)糊精，也可以是油基增溶載體分子，以增強(qiáng)β－帕拉酮水性溶液中的溶解度。有效用量的β－帕拉酮或其衍生物、類似物可以在水溶液中與藥用增溶載體分子混合。新型藥用組合物可以與第二抗癌劑共同用藥，或與放射療法結(jié)合使用。本發(fā)明還公開了一個(gè)配方，將藥用增溶載體分子與β－帕拉酮或其衍生物、類似物混合，該混合物冷凍干燥后，在水溶液中重新構(gòu)成，具有了有效的溶解度。本發(fā)明還提供藥用脂肪乳濁液賦形劑中的β－帕拉酮乳濁液。本發(fā)明還公開了將新型藥用組合物和配方給藥病體治療癌癥的方法。本發(fā)明還提供了藥品試劑盒。
文檔編號(hào)A61K47/40GK1561209SQ02819029
公開日2005年1月5日 申請日期2002年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月31日
發(fā)明者江志偉, 達(dá)謝瑞瑟·G·瑞蒂 申請人:阿奎利公司