專利名稱：治療肝纖維化和丙型肝炎病毒感染的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及肝纖維化和丙肝病毒感染治療領域。
背景技術：
由于對肝臟的慢性毒性損害，如丙肝病毒(HCV)感染、自體免疫損傷和長期暴露于毒物，如酒精等會引發(fā)肝纖維化。慢性毒損傷導致肝細胞損傷和伴隨慢性炎癥的修復的重復循環(huán)。在不定的時段里，由于宿主創(chuàng)傷修復應答的結果使異常的細胞外基質進行性地積累。如果不加控制，這會導致纖維物質沉積增加，直至肝臟結構被扭曲，并危及肝臟的再生能力。疤痕組織在肝臟內進行性地積聚最終引起了組織病理學上所描繪的硬化，被定義為遍布整個肝臟中纖維間隔的形成，同時伴有微節(jié)結形成。
丙型肝炎病毒(HCV)感染在美國是最常見的慢性血源性感染。雖然新發(fā)感染的數量已經下降，但據疾病控制中心(Centers for Disease Control)統計，美國有390萬(1.8％)受感染的病人，慢性感染的負擔是實實在在的。慢性肝臟疾病是美國第十位的成人死亡原因，共計每年大約有25,000人死亡，約占所有死亡人數的1％。研究表明40％的慢性肝臟疾病與HCV有關，導致每年8,000到10,000人的死亡。與HCV有關的終末期肝病是成人肝移植最常見的指征。
隨著治療效果的明顯改善，對慢性丙型肝炎病毒的抗病毒治療在過去十年中很快得到應用。但是，即使是施用聚乙二醇化的IFN-α加利巴韋林的聯合治療，仍有40％到50％的病人治療失敗。這些病人通常被稱為“治療失敗”病人，包括無反應者(指治療期間病毒滴度居高不下的病人)和復發(fā)病人(指治療初期病毒滴度下降，但隨后在治療過程中上升或在治療結束后上升的病人)。至今這些病人沒有有效的治療選擇。特別是肝活檢有晚期纖維化或肝硬化的病人有發(fā)展為晚期肝臟疾病并發(fā)癥的高度危險，這些并發(fā)癥包括腹水、黃疸、曲張靜脈出血、腦病和進行性肝衰竭，同時這些病人有發(fā)展為肝細胞性腫瘤的顯著增加的危險。
慢性HCV感染的高流行對于美國未來的慢性肝臟疾病負荷是一個重大的公眾健康問題。來自國家健康和營養(yǎng)檢測調查中心(NHANES III)的數據顯示從20世紀60年代后期到20世紀80年代初期，特別在20-40歲的人群中，新的HCV感染率大幅度上升。據估計患有20年或以上的長期HCV感染的人群從1990年到2015年會上升4倍多，從750,000到三百萬以上。30或40歲感染人群的比例將會有更大的增長。由于HCV-相關的慢性肝病的風險與感染持續(xù)的時間有關，對于感染20年以上的患者具有硬化進行性增加的危險，這將導致在1965-1985間感染的患者中，與硬化有關的發(fā)病率和死亡率明顯增加。
該技術領域很需要治療肝病如肝纖維化以及治療HCV感染的方法。本發(fā)明旨在解決該需求，并提供相關的優(yōu)點。
文獻METAVIR(1994)Hepatology 2015-20；Brunt(2000)Hepatol.31241-246；Alpini(1997)J.Hepatol.27371-380；Baroni等(1996)Hepatol.231189-1199；Czaja等(1989)Hepatol.10795-800；Grossman等(1998)J.Gastroenterol.Hepatol.131058-1060；Rockey和Chung(1994)J.Invest.Med.42660-670；Sakaida等(1998)J.Hepatol.28471-479；Shi等(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410663-10668；Baroni等(1999)Liver 19212-219；Lortat-Jacob等(1997)J.Hepatol.26894-903；Llorent等(1996)J.Hepatol.24555-563；美國專利5,082,659；歐洲專利申請EP294,160；美國專利4,806,347；Balish等(1992)J.Infect.Diseases 1661401-1403；Katayama等(2001)J.Viral Hepatitis 8180-185；美國專利5,082,659；美國專利5,190,751；美國專利4,806,347；Wandl等(1992)Br.J.Haematol.81516-519；歐洲專利申請294,160號；加拿大專利1,321,348；歐洲專利申請276,120；Wandl等(1992)Sem.Oncol.1988-94 Balish等，(1992)J.Infectious Diseases1661401-1403；Van Dijk等，(1994)Int.J.Cancer 56262-268；Sundmacher等，(1987)Current Eye Res.6273-276。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療丙肝病毒(HCV)感染的方法；減少肝纖維化的方法；在患有肝纖維化的個體中增強肝功能的方法；減少與HCV有關的并發(fā)癥和肝臟硬化的發(fā)病率的方法；減少病毒負荷的方法。所述方法通常包括同時給予治療有效量的IFN-α和IFN-γ。
本發(fā)明的特征本發(fā)明的特征在于一種治療丙肝病毒(HCV)感染的方法，通常包括同時給予實現持續(xù)病毒應答有效量的IFN-α和IFN-γ。
本發(fā)明的特征在于一種減少個體肝纖維化的方法，通常包括同時給予減少肝纖維化有效量的IFN-α和IFN-γ。一些實施方案中，肝纖維化的程度通過肝活體檢查的治療前和治療后分階段測定，其中在將治療前的肝活體檢查和治療后的活性檢查相比時，如通過標準化的評分系統所測定的，肝纖維化的階段減少至降低一個單位。
本發(fā)明還有一個特征是在患有肝纖維化的個體中增強肝功能的方法，通常包括給予增加肝功能有效量的IFN-α和IFN-γ。肝功能可通過測定選自血清轉氨酶水平、凝血酶原時間、血清膽紅素水平、血小板數、血清白蛋白水平、門靜脈壓的改善、腹水的減少、腦病水平的下降和內靜脈曲張的程度下降等參數來顯示。
本發(fā)明的再一個特征是減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率的方法，通常包括對患有肝纖維化的個體給予減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率有效量的IFN-α和IFN-γ。肝硬化并發(fā)癥的例子是門靜脈壓高壓癥、進行性肝功能不全和肝細胞癌。
在采取上述方法時，對個體施用了IFN-α和IFN-γ。在一些實施方案中，IFN-α和IFN-γ是在同一制劑中施用的。在其它實施方案中，IFN-α和IFN-γ是在分開的試劑中施用的。當以分開的制劑施用時，IFN-α和IFN-γ可基本上同時施用，或在施用一種后約24小時內施用第二種。在許多實施方案中，IFN-α和IFN-γ是以多劑量皮下施用的。
IFN-γ的劑量約為每劑25μg到300μg。共有序列IFN-α的有效劑量約為每劑3μg、9μg、15μg、18μg或27μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效劑量為每劑3百萬國際單位(MIU)-10MIU。PEG化的IFN-α2a的有效劑量為每劑90-180μg。PEG化的IFN-α2b的有效劑量為每劑每千克體重0.5μg-1.5μg。許多實施方案中，IFN-α和IFN-γ至少要施用3個月，而且可以施用更長時間。
一些實施方案中，IFN-γ是在IFN-α治療的整個過程中施用的。其它實施方案中，IFN-γ的施用期與IFN-α的治療期重疊，例如可在IFN-α治療開始之前進行IFN-γ治療并在IFN-α治療結束前結束；IFN-γ治療可在IFN-α治療開始之后進行并在IFN-γ治療結束后結束；IFN-γ治療可在IFN-α治療開始之后進行并在IFN-α治療結束前結束；或IFN-γ治療可在IFN-α治療開始之前進行并在IFN-α治療結束后結束。
在其它實施方案中，除IFN-α和IFN-γ還施用了利巴韋林。
定義本文使用的術語“肝纖維化”指由于各種慢性肝炎感染導致的肝臟中疤痕組織的生長。
術語“個體”、“宿主”、“對象”和“病人”在本文中可互換使用，指哺乳動物，包括但不限于靈長目，包括猿猴和人，特別是人類。
本文使用的術語“肝功能”指肝的正常功能，包括但不限于，合成功能，包括但不限于，合成蛋白質，如血清蛋白(如白蛋白，凝血因子，堿性磷酸酶，轉氨酶(如丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰轉肽酶等)，合成膽紅素，合成膽固醇和合成膽酸；肝的代謝功能，包括，但不限于，碳水化合物代謝，氨基酸和氨代謝，激素代謝和脂肪代謝；外源性藥物解毒；血液動力學功能，包括內臟和門靜脈的血液動力學；等等。
術語“持續(xù)病毒應答”(SVR；也稱為“持續(xù)應答”或“耐久性應答”)在這里是指個體對治療HCV感染的治療方案的反應，根據血清HCV滴度測定。通常，“持續(xù)病毒應答”是指在治療停止后的至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少約5個月或至少約6個月的時間內在患者血清中未檢測到HCVRNA(例如，每毫升血清少于約500、少于約200、或少于約100個基因組拷貝)。
術語“治療失敗病人”(或“治療失敗”)在本文中通常指對先前的針對HCV治療的反應無效的HCV感染病人(稱為“無反應者”)或對先前的治療一開始有反應(如初期病毒反應(IVR))，但沒有維持治療反應的人(稱為“復發(fā)者”)。先前的治療通常包括IFN-α單一治療或IFN-α聯合治療，其IFN-α聯合治療可能包括施用IFN-α和一種抗病毒藥劑如病毒唑。
用于本文中的術語“治療”，“醫(yī)治”，以及諸如此類的術語指獲得所需要的藥理和/或生理效果。該效果就其防止一種疾病或癥狀的全部或部分而言可能是預防性的，和/或就其部分或完全地治療一種疾病和/或由疾病引起的不良影響而言可能是治療性的?！爸委煛痹诒疚闹邪▽λ胁溉閯游锛膊〉娜魏沃委?，特別是人類的疾病，包括(a)防止疾病或疾病的癥狀在那些對該疾病有易感性但尚未診斷為罹患該病的個體上發(fā)生(如包括與原發(fā)疾病伴發(fā)的或引起的疾病(就象慢性HCV感染的背景會導致肝纖維化。(b)抑制疾病，就是阻止疾病的發(fā)展，(c)減輕疾病，就是造成疾病的消退。
術語“個體”、“宿主”、“對象”和“病人”在本文中可互換使用，指哺乳動物，包括但不限于鼠科、猿類、人類、哺乳類畜牧動物、哺乳類運動動物和哺乳類寵物。
在本發(fā)明被進一步闡述前，應當理解這一發(fā)明不應被限定于所描述的具體實施方案，因為它們肯定會有變化。同樣也應當理解本文中的術語只是用來描述具體實施方案的，而不是限定它們的，因為本發(fā)明的范圍只是被所附的權利要求所限定。
本文中提供的數值范圍，應當理解為每個在其范圍內的數值，直到下限數值單位的十分之一，除非上下文清楚地表述，否則在該范圍上下限之間的數值和在所述范圍間任何其他確定的數值或介于其中的數值都包含在發(fā)明中。這些較小范圍的上下限數值可被單獨包含在較小范圍內，同時它們也包含在發(fā)明中，屬于在所述范圍內任何被(較小范圍)特別除外的范圍。所述的范圍包括其一個或全部二個限定值，排除該一個或全部二個限定值的范圍也包含在本發(fā)明中。
除非另加定義，本文中所用的所有技術和科學術語的含義與本發(fā)明所屬領域的熟練技術人員對它們的普遍理解相同。雖然有許多與本文所述相近或等同的方法和材料能用于實踐或測試本發(fā)明，但本文所述的是優(yōu)先施用的方法和材料。所有本文提及的公開文獻是作為參考來透露和描述與所引用公開文獻有關的方法和/或材料而寫入本文的。
必須注意，除非有上下文清楚表述，否則本文及所附的權利要求中的單數形式都包含復數內容。例如，本文中提及的“一種方法”包括該方法的復數形式，本文中提及的“劑量”包括一種或多種劑量和本領域中熟練技術人員所知曉的等價物，等等。
本文所討論的公開文獻只是因為它們的公開早于本發(fā)明申請的申請日。本文不應被推斷為承認本發(fā)明無權借助在先發(fā)明而產生于上述公開文獻前，而且，所提供的公開文獻的日期可能與實際
公開日不同，該實際
公開日也許需要獨立的確定。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了治療丙肝病毒(HCV)感染的方法；治療肝纖維化的方法，包括降低臨床肝纖維化，降低肝纖維化發(fā)生的可能性，以及降低與肝纖維化有關的參數。所述方法通常包括對有此需要的個體施用治療有效量的IFN-α和IFN-γ。這種聯合治療的協同效果遠高于單獨的IFN-α和IFN-γ治療。在許多實施例中，特別感興趣的是治療人。
肝纖維化是與肝硬化有關的并發(fā)癥，如門靜脈高壓癥、進行性的肝功能不全和肝細胞癌等的先兆。降低肝纖維化因此可降低這類并發(fā)癥的發(fā)病率。因此，本發(fā)明進一步提供了降低個體形成與肝硬化有關的并發(fā)癥的可能性的方法。
本方法通常包括給予治療有效量的IFN-α和IFN-γ。本文使用的“治療有效量的”IFN-α和IFN-γ的聯合表示IFN-α和IFN-γ的這樣的量，它能有效地治療HCV感染；達到持續(xù)性的病毒應答；降低肝纖維化；和/或能有效地降低個體形成肝纖維化可能性；和/或有效地降低與肝纖維化有關的參數；和/或能有效地減少與肝硬化有關的疾病。
丙肝病毒本發(fā)明提供了治療HCV的方法。所述方法通常包括對個體施用IFN-α和IFN-γ，施用量可有效降低個體的病毒負荷，從而實現持續(xù)病毒應答。
上述方法能否有效治療HCV感染可通過測定病毒負荷來確定，或通過測量與HCV感染有關的參數，包括但不限于肝纖維化、血清轉氨酶水平的升高和肝臟的壞死炎癥活性。肝纖維化的指示劑將在下文討論。
檢測病毒負荷可以通過檢測血清中的病毒滴度或病毒水平來測定。這些方法包括但不限于定量聚合酶鏈式反應(PCR)和分支DNA(bDNA)測試。已經開發(fā)了測定HCVRHN的病毒負荷(滴度)的定量測定方法。包括檢測HCVRNA的病毒負荷(滴度)的定量反轉錄PCR(RT-PCR)(Amplicor HCV MonitorTM，Roche MoledularSystems，新澤西)和分支DNA(脫氧核糖核酸)信號放大檢測(QuantiplexTMHCVRNA Assay(bDNA)，Chiron公司，Emeryville，加利福尼亞)在內的許多這種測定法可在市場購得。見如Gretch等(1995)Ann.Intern.Med.123321-329。
通常，IFNα和IFNγ的有效量是可將病毒負荷有效降低至不可測水平，如至每毫升血清小于約500、小于約1000、小于約500或小于約200基因組拷貝的量。一些實施方案中，IFNα和IFNγ的有效量是可將病毒負荷有效降低至每毫升血清小于約100個基因組拷貝的量。在許多實施方案中，本發(fā)明的方法可實現持續(xù)病毒應答，即在治療停止后的至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少約5個月或至少約6個月的時間內病毒負荷被降至不可測水平。
如上所述，上述方法能否有效治療HCV感染可通過測定與HCV感染有關的參數，如肝纖維化，來確定。測定肝纖維化程度的方法將在下面討論。一些實施方案中，肝纖維化的血清標記水平說明了肝纖維化的程度。
一個非限制性的例子是用標準測定法測定血清丙氨酸轉移酶(ALT)水平。通常，ALT水平小于約45國際單位被認為是正常的。一些實施方案中，IFNα和IFNγ的有效劑量是可將ALT水平有效降至每毫升血清45IU以下的量。
與未治療個體或用安慰劑治療的個體的肝纖維化的標記物的血清水平相比，治療有效量的IFN-α和IFN-γ是使標記物的血清水平降低至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。測量血清標記物的方法包括基于免疫學的方法，如酶聯免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫分析等，它們使用對給定的血清標記物具有特異性的抗體。
纖維化用IFN-α和IFN-γ治療是否能有效地降低肝纖維化通過許多成熟的檢測肝纖維化和肝功能的任何技術來測定。是否減少了肝纖維化通過分析肝活組織檢查樣品來決定。肝的活組織檢查的分析包括評估兩個主要部分通過“分級”評估壞死炎癥來測定疾病的嚴重程度和進展中的疾病活動性，通過分“階段”來評估纖維化的損害和實質或脈管改變的損傷以反應長期疾病的進展。參見，如Brunt(2000)Hepatol.31241-246；和METAVIR(1994)Hepatology 2015-20。基于肝活組織檢查的分析可給出評分。有許多標準化的評分系統，它們可定量地評估纖維化的程度和嚴重性。這些評分系統包括METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig和Ishak評分系統。
METAVIR評分系統基于肝活組織檢查的各種特征分析，包括纖維化(門靜脈纖維化、小葉中心纖維化和硬化)；壞死(粉碎性和裂片性壞死，嗜酸性收縮和氣脹變性)；炎癥(門靜脈管炎癥、門靜脈淋巴聚合和門靜脈炎癥的分布)；膽管改變；和Knodell指數(對外周門靜脈壞死、小葉壞死、門靜脈炎癥、纖維化和總體疾病活性的評分)。METAVIR系統中的每個階段的定義如下0分，沒有纖維化；1分，門靜脈管星狀擴張但沒有形成隔膜；2分，門靜脈管擴張，有少量隔膜形成；3分，有許多隔膜，沒有硬化；4分，硬化。
Knodell評分系統也稱為肝炎活性指數，根據組織學特征分為4類I.外周門靜脈和/或橋壞死；II.小葉內變性，灶性壞死；III.門靜脈炎癥；和IV.纖維化。在Knodell分階段系統中，評分如下0分，沒有纖維化；1分，輕度纖維化(纖維性門靜脈擴張)；2分，中度纖維化；3分，嚴重纖維化(橋纖維化)；4分，硬化。分數越高，肝組織損傷越嚴重。Knodell(1981)Hepatol.1431。
Scheuer評分系統的評分如下0分，沒有纖維化；1分，擴大的、纖維化的門靜脈管；2分；外周門靜脈或門靜脈-門靜脈隔膜，但具有完整的結構；3分，纖維化，結構被扭曲，但沒有明顯的硬化；4分，可能或肯定硬化。Scheuer(1991)J.Hepatol.13372。
Ishak評分系統如Ishak(1995)J.Hepatol.22696-699所述。階段0，沒有纖維化；階段1，一些門靜脈區(qū)域纖維性擴張，有或沒有短纖維隔膜；階段2，大多數門靜脈區(qū)域有纖維性擴張，有或沒有短纖維隔膜；階段3，大多數門靜脈區(qū)域有纖維性擴張，偶有門靜脈到門靜脈(P-P)橋；階段4，門靜脈區(qū)域纖維性擴張，有明顯的P-P橋和門靜脈到中心(P-C)橋；階段5，明顯的P-P和P-C橋，偶有小節(jié)結(不完全硬化)；階段6，硬化，可能的或肯定的。抗纖維療法的益處也可用Child-Pugh評分系統進行測定和評估，該評分系統包括一個多組成點系統，該系統基于血清膽紅素水平異常，血清白蛋白水平異常，凝血酶原時間異常，腹水的存在和嚴重程度，和腦病的存在和嚴重程度。根據這些參數異常性的存在和嚴重程度，患者可分為三類A、B或C，其嚴重程度遞增。
在一些實施方案中，治療有效量的IFN-α和IFN-γ是能使治療前和治療后肝活組織檢查比較中纖維化階段改變一個單位或更多單位的IFN-α和IFN-γ的量。在特定的實施方案中，治療有效量IFN-α和IFN-γ能減少肝纖維化程度至少一個單位(METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig或Ishak評分系統中的單位)。
次級的或非直接的肝功能指數也可用來評估IFN-α和IFN-γ治療的效果。根據特定的膠原質著色和/或肝纖維化的血清標記對肝臟纖維化定量程度的形態(tài)測定計算機化的半自動評估也可作為患者治療方法的效果的指征進行測定。次級的肝功能指數包括，但不限于，血清轉氨酶水平、凝血酶原時間、膽紅素水平、血小板數、門靜脈壓、白蛋白水平和Child-Pugh評分的評估。與未治療的個體或用安慰劑治療的個體的肝功能指數相比，有效量的IFN-α和IFN-γ是使肝功能指數增加至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。本領域的熟練的技術人員可使用標準的分析方法(許多都可市售，且在臨床上常規(guī)使用)容易地測得這類肝功能指數。
肝纖維化的血清標記也可作為本發(fā)明治療方法的效果的指征進行測量。肝纖維化的血清標記物包括，但不限于，透明質酸鹽、N-末端前膠原III肽、7S域的IV型膠原、C-末端前膠原I肽和層粘連蛋白。另外的肝纖維化的生物化學標記物包括α-2-巨球蛋白、結合珠蛋白、γ球蛋白、載脂蛋白A和γ谷氨酰轉肽酶。
與未治療個體或用安慰劑治療的個體的肝纖維化的標記物的血清水平相比，治療有效量的IFN-α和IFN-γ是使標記物的血清水平增加至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。本領域熟練的技術人員可使用標準的分析方法(許多都可市售，且在臨床上常規(guī)使用)容易地測得這類肝纖維化的血清標記物。測量血清標記物的方法包括基于免疫的方法，如酶聯免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫分析等，它們使用對給定的血清標記物具有特異性的抗體。
也可使用功能性肝保留的定量試驗來評估用IFN-α和IFN-γ治療的效果。這些試驗包括靛氰綠清除(ICG)、半乳糖消除能力(GEC)、氨基比林呼吸試驗(ABT)、安替比林清除試驗、單乙基甘氨酸-xylidide(MEG-X)清除試驗和咖啡因清除試驗。
本文使用的“與肝硬化有關的并發(fā)癥”指代謝失調的肝病的后遺癥，即它們在肝纖維化后發(fā)生，并是肝纖維化發(fā)展的結果，它們包括，但不限于，形成腹水、靜脈曲張出血、門靜脈高壓癥、黃疸、進行性肝功能不全、腦病、肝細胞癌、肝衰竭需要肝移植和與肝有關的死亡。
治療有效量的IFN-α和IFN-γ是與未治療個體或用安慰劑治療的個體相比，能有效減少與肝硬化有關的疾病(如個體形成這些疾病的可能性)的發(fā)病率至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。
用IFN-α和IFN-γ治療是否能有效地減少與肝硬化有關的疾病的發(fā)病率可由該領域熟練的技術人員容易地測定。
肝纖維化的減少能增加肝功能。因此，本發(fā)明提供了提高肝功能的方法，通常包括給予治療有效量的IFN-α和IFN-γ。肝功能包括，但不限于，合成蛋白質，如血清蛋白(如白蛋白，凝血因子，堿性磷酸酶，轉氨酶(如丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰轉肽酶等)，合成膽紅素，合成膽固醇和合成膽酸；肝的代謝功能，包括，但不限于，碳水化合物代謝，氨基酸和氨代謝，激素代謝和脂肪代謝；外源性藥物解毒；血液動力學功能，包括內臟和門靜脈的血液動力學；等等。
肝功能是否增加可由本領域熟練的技術人員使用成熟的肝功能試驗容易地確定。這樣，如白蛋白，堿性磷酸酶，丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶、膽紅素等肝功能標記物的合成可通過用標準的免疫學和酶分析測量血清中這些標記物的水平進行評估。用標準方法通過門靜脈楔入壓和/或耐受力可測量內臟循環(huán)和門靜脈的血液動力學。代謝功能可通過測量血清中氨水平進行測定。
肝臟通常分泌的血清蛋白是否在正常的范圍內可通過使用標準的免疫學和酶分析方法測量這類蛋白質的水平來決定。本領域熟練的技術人員知道這類血清蛋白的正常范圍。下列是非限定性實例。丙氨酸轉氨酶的正常范圍是約45IU/升血清。天冬氨酸轉氨酶的正常范圍是約5-40單位/升血清。膽紅素用標準分析測量。正常的膽紅素水平通常低于約1.2mg/dL。血清白蛋白水平用標準分析測量。正常的血清白蛋白范圍是約35-55g/L。用標準分析測定凝血酶原時間的延長。正常的凝血酶原時間比對照長約不足4秒。
治療有效量的IFN-α和IFN-γ是能有效提高肝功能至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％或更多的量。例如，治療有效量的IFNγ是能將肝功能的血清標記物的升高水平減少至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％或更多的量，或將肝功能的血清標記物水平降低到正常范圍里。治療有效量的IFNγ也是能將肝功能的血清標記物的降低水平增加至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％或更多的量，或將肝功能的血清標記物水平提高到正常范圍里。
干擾素-α任何已知的IFN-α都可用于本發(fā)明。術語“干擾素-α”在這里是指可抑制病毒復制和細胞增殖以及調節(jié)免疫應答的相關多肽家族。術語“IFN-α”包括天然產生的IFN-α；合成的IFN-α；衍生的IFN-α(如PEG化的IFN-α，糖基化的IFN-α等)以及天然產生的IFN-α或合成的IFN-α的類似物；實質上任何IFN-α都具有天然產生的IFN-α一樣的抗病毒特性。
合適的α干擾素包括但不限于天然產生的IFN-α(包括但不限于天然產生的IFN-α2a、IFN-α2b)；重組干擾素-α2b，如Schering公司(Kenilworth，N.J.)的Intron-A干擾素；重組干擾素-α2a，如Hoffmann-La Roche公司(Nutley，N.J.)的Roferon干擾素；重組干擾素-α2c，如Boehringer Ingelheim醫(yī)藥有限公司(Ridgefield，Conn)的Berofor alpha 2干擾素；干擾素-αn1，一種自然α干擾素的提純混合物，如日本Sumitomo公司的Sumiferon；如Glaxo-ukllcome Ltd.，London，英國的Wellferon干擾素-αn1(INS)；干擾素-αn3，一種天然α干擾素的混合物，由Interferon Science制造和Purdue Frederick公司(Norwalk，Conn)提供，商品名為Alferon。
術語“IFN-α”還包括共有序列IFN-α。共有序列干擾素-α(也稱為“CIFN”和“IFN-con”)包括但不限于如美國專利4,897,471和4,695,621公開的以氨基酸序列命名的IFN-con1、IFN-con2、IFN-con3；以及通過檢測天然產生的干擾素α的共有序列而確定的共有序列干擾素(如Infergen，Amgen，Thousand Oaks，加利福尼亞)。編碼IFN-con的DNA可按照上述專利或其他標準方法的描述進行合成。CIFN的使用特別引人矚目。
術語“IFN-α”還包括經過衍生(如經過化學修飾)以改變某些性質如血清半衰期的IFN-α的衍生物。因此，術語“IFN-α”包括糖基化的IFN-α；用聚乙二醇衍生化的IFN-α(“PEG化的IFN-α”)等等。PEG化的干擾素-α及其制備方法描述在美國專利5,382,657；5,981,709；5,824,784；5,985,265和5,951,974。PEG化的IFN-α包括PEG與上述任何IFN-α分子的結合物，所述IFN-α分子包括但不限于干擾素-α2a(Roferon，Hoffmann-La Roche，Nutley，新澤西)，干擾素-α2b(Intron，Schering-Plough，Madison，新澤西)，干擾素-α2c(Berofor Alpha，Boehringer Ingelheim，Ingelheim，德國)；以及通過檢測天然產生的干擾素α的共有序列而確定的共有序列干擾素(Infergen，Amgen，Thousand Oaks，加利福尼亞)。
干擾素-γ可從公共數據庫，如Genbank，雜志出版物等得到編碼IFN-γ多肽的核酸序列。雖然對各種哺乳動物的IFN-γ感興趣，但對于治療人體疾病，一般使用人蛋白。人IFN-γ編碼序列可在Genbank中找到，登錄號為X13274；V00543和NM_000619。在Genbank中可發(fā)現相應的基因組序列，登錄號J00219；M37265和V00536。參見，例如，Gray等(1982)Nature 295501(Genbank X13274)和Rinderknecht等(1984)J.B.C.2596790。
IFN-γ1b(Actimmune；人干擾素)是140個氨基酸的單鏈多肽。它在大腸桿菌中重組制備，其未糖基化。Rinderknecht等(1984)J.Biol.Chem.2596790-6797。
用于本發(fā)明組合物的IFN-γ可為任何天然的IFN-γ、重組IFN-γ及其衍生物，只要它們具有IFN-γ活性，特別是人IFN-γ活性即刻。如本技術領域所知，人IFN-γ顯示了干擾素特性的，抗病毒和抗增殖性質，以及許多其它免疫調節(jié)活性。雖然IFN-γ基于上述提供的序列，但其蛋白質的形成和分解蛋白過程中會形成其加工變體。由Gray等(同上)提供的未加工的序列由166個氨基酸(aa)構成。雖然在大腸桿菌中產生的重組IFN-γ開始被認為有146個氨基酸(在氨基酸20開始)，但結果發(fā)現天然的人IFN-γ在殘基23后酶切，產生143氨基酸的蛋白質，或144氨基酸(若如細菌表達所需存在末端的甲硫氨酸)。在純化過程中，成熟蛋白質在殘基162(參見Gray等序列)后的C末端處再酶切，得到139個氨基酸的蛋白質或140氨基酸的蛋白質(若有起始的甲硫氨酸存在，如若需要細菌表達)。N-末端的甲硫氨酸是由mRNA翻譯的“起始”信號AUG編碼的人工物品，AUG在大腸桿菌表達的具體情況下不會被加工除去。在其它的微生物系統或真核表達系統中，可去除甲硫氨酸。
對于用于本發(fā)明的方法，可使用任何天然的IFN-γ肽、它們的修飾物和變體，或一種或多種肽的組合。感興趣的IFN-γ肽包括片段，并可在相對于全序列的羧基末端進行各種截斷。只要氨基酸24-約149(從未加工的多肽殘基開始計數)存在，這類片段就繼續(xù)展示人γ干擾素的特性。在氨基酸155后可用外來的序列代替氨基酸序列而不會喪失活性。參見，例如美國專利5,690,925，在此引入供參考。天然IFN-γ部分包括分別從氨基酸殘基24-150；24-151；24-152；24-153；24-155和24-157擴展出來的分子。任何這些變體，和本領域已知且具有IFN-γ活性的其它變體可用于本發(fā)明的方法。
IFN-γ多肽序列可用本領域已知的各種方法進行改變，以在序列中產生目標性的改變。變化的多肽通常與這里提供的序列基本上相似，即至少一個氨基酸不同，或可能至少兩個氨基酸不同，但不會超過約10個氨基酸不同。序列改變可以是取代、插入或刪除。系統地引入丙氨酸或其它殘基的掃描變異可用來測定關鍵的氨基酸。感興趣的特定氨基酸替代包括保守和非保守的改變。保守氨基酸替代典型地包括下列基團(甘氨酸，丙氨酸)；(纈氨酸，異亮氨酸，亮氨酸)；(天冬氨酸，谷氨酸)；(天冬酰胺，谷氨酰胺)；(絲氨酸，蘇氨酸)；(賴氨酸，精氨酸)；或(苯丙氨酸，酪氨酸)。
可以或不能改變基本氨基酸序列的感興趣的修飾包括多肽的化學衍生化，如乙酰化或羧基化；引入或除去糖基化位點的氨基酸序列的改變；使蛋白質對PEG化敏感的氨基酸序列的改變等等。還包括糖基化修飾，如通過在其合成和加工過程中或進一步加工的步驟中修飾多肽的糖基化方式進行的修飾，例如，通過將多肽暴露于影響糖基化的酶，如哺乳動物糖基化或去糖基化的酶。也包含具有磷酸化氨基酸殘基的序列，如，磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸。
包括在本發(fā)明中是業(yè)已用普通化學技術修飾的多肽，以改進它們對蛋白水解降解的耐受性，使其溶解度性質最優(yōu)化，或使它們更適合作為治療劑。例如，可環(huán)化肽的骨架以增加穩(wěn)定性(參見Friedler等(2000)J.Biol.Chem.27523783-23789)?？墒褂玫念愃莆锇ǚ翘烊划a生的L-氨基酸殘基，如D-氨基酸或非天然產生的合成氨基酸。蛋白質可被PEG化以增加穩(wěn)定性。
使用本領域已知的常規(guī)方法，通過重組方法體外合成制備多肽，或從誘導的或天然產生蛋白質的細胞中分離得到多肽。具體的序列和制備方法可由其方便性、經濟性、所需的純度等來決定。如果需要，在合成期間或表達期間可向多肽中引入各種基團，這可使其與其它分子或表面連接。這樣，半胱氨酸可用來制備硫醚、組氨酸，供與金屬離子絡合物連接的羧基用來形成酰胺或酯，氨基用來形成酰胺等等。
也可根據常規(guī)的重組體合成方法來分離和純化多肽?？蓮谋磉_宿主中制備溶解產物，用HPLC、排阻層析、凝膠電泳、親和層析或其它純化技術來純化溶解產物。大多數情況下，使用的組合物包含至少20％重量的所需產品，更通常的是至少約75％重量，優(yōu)選的是至少95％重量的所需產品，對于治療用組合物，相對于制備和純化方法中產生的污染來說，通常包含至少約99.5％重量的所需產品。通常情況下，百分數是基于總蛋白的百分數。
劑量、制劑和給藥途徑IFN-α和IFN-γ以與可接受的賦形劑進行制劑來給藥。本技術領域已知各種藥學上可接受的賦形劑，在此不需要詳細討論。藥學上可接受的賦形劑在各種公開物(如A.Gennaro(2000)“雷明頓制藥科學與實踐(RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy)”，第20版，Lippincott，Williams，&Wilkins；藥物劑型和藥物傳遞系統(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)(1999)H.C.Ansel等編，第7版，Lippincott，Willlams，&Wilkins；以及藥物賦形劑手冊(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.Kibbe等編輯，第3版，Amer.Pharmaceutical Assoc.)中業(yè)已作了大量的描述。
藥學上可接受的賦形劑，如賦形劑、佐劑、載體或稀釋劑是公眾容易獲得的。此外，藥學上可接受的輔助物質，如pH調節(jié)劑和緩沖劑、張力調節(jié)劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑等，也是公眾容易獲得的。
在本發(fā)明方法中，活性劑可使用任何能夠產生所需治療效果的常規(guī)方法給予宿主。這樣，該藥劑可摻入各種制劑供治療給藥。更具體的是，本發(fā)明的藥物通過與合適的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合來配制成藥物組合物，它們可配制成固體、半固體、液體或氣體形式，如片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、膏劑、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。
結果，可通過各種途徑給藥，包括口服、頰內給藥、直腸給藥、非胃腸道給藥、腹腔內給藥、皮內給藥、經皮膚給藥、氣管內等給藥。
在藥物劑型中，藥劑可以它們的藥學上可接受的鹽形式給予，或它們可單獨或以適當的合方式，以及與其它藥學活性化合物組合使用。下列方法和賦形劑僅用于舉例，并非用作限定。
對于口服制劑，可單獨使用藥劑或與適當的添加劑組合制成片劑、粉末、顆粒劑或膠囊劑，例如，與常規(guī)的添加劑，諸如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或土豆淀粉組合；與諸如晶體纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠等的粘合劑組合；與諸如滑石粉或硬脂酸鎂的潤滑劑組合；需要時，與稀釋劑、緩沖劑、濕潤劑、防腐劑和調味劑組合。
通過將藥劑溶解、懸浮或乳化在水性或非水性溶劑中，如植物油或其它相似的油、合成的脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸酯或丙二醇，將藥劑配制成用于注射的制劑；需要時，與常規(guī)的添加劑，如助溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑混合。
此外，通過將藥劑與各種基質，如乳化的基質或水溶性基質混合可制備栓劑。本發(fā)明的化合物可通過栓劑直腸給藥。栓劑可包括諸如可可脂、碳蠟和聚乙二醇的賦形劑，這些賦形劑在體溫下熔化，在室溫下固化。
用于口服或直腸給藥的單位劑型可為糖漿劑、酏劑和懸浮劑，其中每個劑量單位，例如一茶匙的量、一大湯匙的量、一個片劑或一個栓劑包含預定量的含有一種或多種抑制劑的組合物。相似的是，注射用或靜脈給藥的單位劑量在組合物中可包含抑制劑，該組合物為存在于無菌水、生理鹽水或另一種藥學上可接受的載體中的溶液。
本文使用的術語“單位劑型”指適合用于人和動物患者的單一劑量的身體上不連續(xù)的單位，每個單位含有預定量的本發(fā)明化合物，該量是通過以足以產生與藥物可接受的稀釋劑、載體有關的所需效應的量計算的。本發(fā)明的新穎的單位劑型依賴于所用的特定化合物和所欲達到的效果，以及與宿主中每個化合物有關的藥物動力學。
所有實施方案中，IFN-γ是與至少一種劑量的IFN-α同時施用的。術語“同時”在這里是指IFN-α和IFN-γ是獨立施用的，且在施用另一種藥劑約5-15秒之內、在約15-30秒之內、在約30-60秒之內、在約1-5分鐘之內、在約5-15分鐘之內、在約15-30分鐘之內、在約30-60分鐘之內、在約1-2小時之內、在約2-6小時之內、在約6-12小時之內、在約12-24小時之內或在約24-48小時之內施用。
一些實施方案中，IFN-γ在IFN-α治療的整個過程中施用。在其它實施方案中，IFN-γ的施用期與IFN-α的治療期重疊，例如可在IFN-α治療開始之前進行IFN-γ治療并在IFN-α治療結束前結束；IFN-γ治療可在IFN-α治療開始之后進行并在IFN-γ治療結束后結束；IFN-γ治療可在IFN-α治療開始之后進行并在IFN-α治療結束前結束；或IFN-γ治療可在IFN-α治療開始之前進行并在IFN-α治療結束后結束。
IFN-γ的有效劑量范圍為約0.5-500μg/m2，通常是約1.5-200μg/m2，取決于患者個體的大小。該活性基于106國際單位(IU)/50μg蛋白質。IFN-γ可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上連續(xù)施用。
IFN-α的有效劑量約為每劑3μg、9μg、15μg、18μg或27μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效劑量為每劑3百萬國際單位(MIU)-10MIU。PEG化的IFN-α2a的有效劑量為每劑90-180μg。PEG化的IFN-α2b的有效劑量為每劑每千克體重0.5μg-1.5μg。IFN-α可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上連續(xù)施用。
一些實施方案中，IFN-α在第一劑量方案中施用，然后是第二劑量方案。IFN-α的第一劑量方案(也稱為“誘導方案”)通常包括給予高劑量的IFN-α。例如，對于共有序列IFN-α(CIFN)，第一劑量方案包括給予約9μg、15μg、18μg或27μg的CIFN。第一劑量方案可包括單劑量事件，或至少兩次或多次劑量。IFN-α的第一劑量方案可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上連續(xù)施用，以便獲得所需的IFN-α的平均日血清濃度。
IFN-α的第一劑量方案可施用至少約4周、至少約8周或至少約12周，IFN-α的第二劑量方案(也稱為“維持劑量”)通常包括給予低劑量的IFN-α。例如，對于CIFN，第二劑量方案包括給予至少約3μg、9μg、15μg或18μg的CIFN。第二劑量方案可包括單劑量事件，或至少兩次或多次劑量。
IFN-α的第二劑量方案可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上連續(xù)施用，以便獲得所需的IFN-α的平均日血清濃度。
一些實施方案中，采用了IFN-α的“誘導”/“維持”劑量方案，其中包括“引導”劑量的IFN-γ。在這些實施方案中，在IFN-α治療開始之前施用IFN-γ約1-14天、約2-10天或約3-7天。這段時期被稱為“引導”期。在其中一些實施方案中，在整個IFN-α治療階段連續(xù)進行IFN-γ治療。在其它實施方案中，IFN-γ治療在IFN-α治療結束前結束。在這些實施方案中，IFN-γ治療的總時間(包括“引導”期)約為2-30天、約4-25天、約8-20天，約10-18天，或約12-16天。再在其它實施方案中，一旦IFN-α治療開始就結束IFN-γ治療。
在其它實施方案中，IFN-α是以單劑量方案施用的。在這些實施方案中，IFN-α的劑量通常約為3-15μg或約9-15μg。IFN-α的劑量通常每日施用、隔日施用、一周三次或基本上連續(xù)施用。所述IFN-α劑量可施用，例如，至少約24周至至少約48周，或更長時間。
在一些實施方案中，當采用IFN-α的單劑量方案時包括IFN-γ的“引導”劑量。在這些實施方案中，IFN-γ在IFN-α治療開始后施用了約1-14天、約2-10天或約3-7天。在其中一些實施方案中，在整個IFN-α治療階段連續(xù)進行IFN-γ治療。在其它實施方案中，IFN-γ治療在IFN-α治療結束前結束。在這些實施方案中，IFN-γ治療的總時間(包括“引導”期)約為2-30天、約4-25天、約8-20天，約10-18天，或約12-16天。再在其它實施方案中，一旦IFN-α治療開始就結束IFN-γ治療。再在其它實施方案中，一旦IFN-α治療開始就結束IFN-γ治療。
本領域熟練的技術人員容易地理解，劑量水平會隨特定化合物的功能、癥狀的嚴重程度和患者對副作用的敏感性而改變。所給化合物的優(yōu)選劑量容易由精通此領域的技術人員通過各種方法確定。
本領域熟練的技術人員容易地理解，劑量水平會隨特定化合物的功能、癥狀的嚴重程度和患者對副作用的敏感性而改變。所給化合物的優(yōu)選劑量容易由精通此領域的技術人員通過各種方法確定。優(yōu)選的方法是測量給定化合物的生理效價。
在一些實施方案中，IFN-α和IFN-γ以同一制劑同時施用。在其它實施方案中，IFN-α和IFN-γ是分別施用的，如以單獨制劑給予。在其中一些實施方案中，IFN-α和IFN-γ是單獨給予的，且是同時給予的。在其它實施方案中，IFN-α和IFN-γ是單獨給予的，且在施用一種制劑后約5-15秒之內、在約15-30秒之內、在約30-60秒之內、在約1-5分鐘之內、在約5-15分鐘之內、在約15-30分鐘之內、在約30-60分鐘之內、在約1-2小時之內、在約2-6小時之內、在約6-12小時之內、在約12-24小時之內或在約24-48小時之內給予第二種制劑。
可采用IFN-α和IFN-γ的多劑量方案，例如可每月一次、每月兩次、每月三次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天施用IFN-α和IFN-γ，治療期為約1天至1周、約2-4周、約2-4個月、約2-4個月、約4-6個月、約6-8個月、約8個約至1年，約1-2年、約2-4年或更長時間。在感興趣的特定實施方案中，施用IFN-α和IFN-γ約48周，每周3次。
當藥劑是多肽、聚核苷酸(如編碼IFN-α和IFN-γ的聚核苷酸)時，它可通過許多途徑，包括病毒感染、微注射或小泡融合引入組織或宿主細胞。對于肌內給藥也可使用噴射注射，如Furth等(1992)，Anal Biochem 205365-368所述。DNA可包被在金微顆粒上，通過文獻(參見，如Tang等(1992)，Nature 356152-154)所述的顆粒轟擊裝置或“基因槍”皮內輸遞，其中，金微轟擊粒子用治療用DNA包被，然后轟入皮膚細胞。在這些實施方案中，特別感興趣的是使用肝特異性啟動子優(yōu)選地驅動肝臟細胞中操作連接的IFN-α和IFN-γ編碼序列的轉錄。
其它治療劑在一些實施例中，方法還包括施用病毒唑。病毒唑，1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三氮唑-3-甲酰胺，由ICN醫(yī)藥有限公司，Costa Mesa，加利福尼亞，提供。該藥記載于第11版默克手冊(Merck Index)，化合物第8199號。該藥的制造與配方可見于美國專利4,211,771。本發(fā)明也考慮到施用病毒唑的衍生物(見美國專利6,277,830)。病毒唑可以用膠囊或片劑的形式口服施用，或以與IFN-α相同或不同的施用形式或以與IFN-α相同或不同的途徑施用。當然，這兩種藥劑的其他施用形式也可加以考慮，如鼻噴霧劑、透皮劑型、靜脈內劑栓劑、緩釋劑型等等。只要釋出合適的劑量，不破壞活性成份，任何施用形式都會起作用。
病毒唑通常每日的施用范圍從約30mg到約60mg、從約60mg到約125mg、從約125mg到約200mg、從約200mg到約300mg、從約300mg到約400mg、從約400mg到約1200mg、從約600mg到約1000mg或從約700mg到約900mg。
在一些實施例中，在IFN-α治療的全過程中都施用病毒唑。在其它實施方案中，病毒唑不在IFN-α治療的全過程中施用，例如僅在IFN-α治療的第一階段施用，僅在IFN-α治療的第二階段施用，或在IFN-α治療的其它階段施用。
可治療的疾病本發(fā)明提供了通過對有此需要的個體給予治療有效量的IFN-α和IFN-γ來治療HCV感染的方法。根據本發(fā)明方法治療的個體包括臨床上已被診斷出患有肝纖維化的個體，被診斷帶有HCV的個體，以及臨床上還沒有出現肝纖維化，但具有形成肝纖維化危險的個體。這類個體包括感染HCV的個體。
臨床上已被診斷感染HCV的個體在許多技術方案中特別受到關注。感染了HCV的個體被發(fā)現在其血液中具有HCV RNA和/或在他們的血清中有抗HCV抗體。臨床上已被診斷感染HCV的個體包括首次被診斷感染的個體(例如，以前未對HCV進行治療的個體)和在以前的HCV治療中失敗的個體(“治療失敗”個體)。治療失敗個體包括無反應者(指治療期間病毒滴度居高不下的病人)和復發(fā)病人(指治療初期病毒滴度下降，但隨后在治療過程中上升或在治療結束后上升的病人)。
同樣感興趣的有HCV-陽性個體(如上所述)，所述個體由于慢性HCV感染而具有嚴重纖維化或早期硬化(非-代償失調的，為Child’s-Pugh的A級或更低)，或晚期硬化(代償失調的，為Child’s-Pugh的B級或C級)，且盡管以前已用基于IFN-α的療法治療但仍是病毒血癥，或者他們不能耐受基于IFN-α療法的治療，或者他們對這類療法有禁忌癥。在特別感興趣的實施方案中，患有階段3或4(METAVIR評分系統)的肝纖維化的HCV-陽性個體適合用本發(fā)明的方法進行治療。在其它的技術方案中，適合用本發(fā)明方法治療的個體是患有具有臨床表征的代償失調的硬化的患者，包括患有極晚期肝硬化的患者，等待肝移植的患者。在另外的實施方案中，適合用本發(fā)明方法治療的個體包括患有輕度的纖維化，包括早期纖維化的患者(METAVIR、Ludwig和Scheuer評分系統中的階段1和2；或Ishak評分系統中的階段1，2或3)。
雖然本發(fā)明參照其特定的技術方案進行了描述，應當理解，在不背離本發(fā)明的真實精神和范圍的情況下可進行各種改變和替代等價物。另外，可進行許多修飾以使具體的情況、材料、組成、方法、加工步驟適應本發(fā)明的目的、精神和范圍。所有這類修飾都在本發(fā)明權利要求范圍內。
權利要求
1.一種在個體中減少肝纖維化的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效減少肝纖維化的量的IFN-α和IFN-γ。
2.一種在個體中治療丙肝病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效實現持續(xù)病毒應答的量的IFN-α和IFN-γ。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝纖維化程度分期衡量，其中肝纖維化期，如用標準評分系統測定的，降低至少一個單位。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中所述IFN-α和IFN-γ同時施用。
5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且在施用IFN-α和IFN-γ中的一種的24小時內施用另一種。
6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以多劑量施用。
7.一種提高肝纖維化個體肝功能的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效提高肝功能的量的IFN-α和IFN-γ。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述肝功能通過測定選自血清轉氨酶水平、凝血酶原時間、血清膽紅素水平、血小板數、病毒負荷和血清白蛋白水平的參數來指征。
9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以連續(xù)劑量施用。
10.一種降低肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率的方法，其特征在于，所述方法包括給予肝纖維化個體有效減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率的量的IFN-α和IFN-γ的組合。
11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以多劑量施用。
12.一種在個體中治療丙肝病毒的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體治療有效量的IFN-α和IFN-γ。
13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，丙氨酸氨基轉移酶水平被降至約每毫升血清約45國際單位以下。
14.如權利要求12所述的方法，其特征在于，個體的病毒負荷被降至約每毫升血清約500個基因組拷貝以下。
15.如權利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中所述IFN-α和IFN-γ同時施用。
16.如權利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中所述IFN-α和IFN-γ分別施用。
17.如權利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25-300μg的量皮下施用，IFN-α以約3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以連續(xù)劑量施用。
18.一種降低丙肝病毒感染個體的病毒負荷的方法，其特征在于，所述方法包括施用有效降低病毒負荷的量的IFN-α和IFN-γ。
全文摘要
本發(fā)明提供了減少肝纖維化的方法；在患有肝纖維化的個體中增加肝功能的方法；降低與HCV和肝硬化有關的并發(fā)癥的發(fā)病率的方法；減少病毒負荷的方法，以及治療HCV感染的方法。這些方法通常包括同時給予治療有效量的IFN－α和IFN－γ。
文檔編號A61P31/14GK1564693SQ02819488
公開日2005年1月12日 申請日期2002年10月3日 優(yōu)先權日2001年10月5日
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