專利名稱：眼新血管疾病的治療方法
技術領域：
本發(fā)明涉及使用抑制VEGF的活性劑治療眼新血管形成的方法。
背景技術：
血管生成或異常血管生長在包括眼科學、癌癥和風濕病學在內的許多醫(yī)學領域中被視為病理情況的主要原因。例如，與年齡相關的黃斑變性(AMD)的滲出性或新血管形式是中老年人失明的主要原因。目前沒有標準而有效的治療大多數(shù)患者滲出性ADM的療法。已經(jīng)證實熱激光光凝術和光動力療法(PDT)對小群體的這類患者有益。然而，僅有部分眼滿足這類治療干預的合格標準且那些經(jīng)這類治療的患者具有高復發(fā)率。
近期的前期臨床研究已經(jīng)提示藥物干預或抗血管生成療法可以用于治療各種形式的眼新血管形成，諸如脈絡膜新血管形成(CNV)。這項工作中絕大部分已經(jīng)集中在阻斷血管內皮生長因子(VEGF)，它與AMD繼發(fā)的CNV的發(fā)病機制和糖尿病性視網(wǎng)膜病的發(fā)病機制有關。VEGF是涉及血管生成的重要細胞生長因子且看起來在眼新血管形成發(fā)生過程中起關鍵作用。人體研究已經(jīng)證實在血管生成性視網(wǎng)膜病玻璃體中存在高濃度的VEGF且并非失活形式或非新血管形成性疾病狀態(tài)。在實驗性黃斑下手術后切下的人CNV也表現(xiàn)出高VEGF水平。其它研究已經(jīng)證實使用不同類型的抗-VEGF劑、包括抗體片段可以使幾種動物模型中的多血管床上的新血管形成消退或防止。因此，抗-VEGF療法是有希望的治療AMD、糖尿病性視網(wǎng)膜病和相關疾病的新療法。
除潛在的抗血管生成作用外，抗-VEGF療法還可以作為抗通透性劑使用。VEGF最初因其誘導從血管中滲漏的有效能力而稱作血管通透因子。近期研究已經(jīng)證實VEGF可能是導致糖尿病性視網(wǎng)膜病中血管滲漏的重要因素且糖尿病誘發(fā)的血液-視網(wǎng)膜屏障的破壞可以以劑量依賴性方式受到抗-VEGF療法的抑制?？?VEGF療法由此可以通過其抗血管生成和抗通透性代表對CNV的雙刃攻擊。
現(xiàn)有的眼新血管疾病的治療方法需要改善它們抑制或消除不同形式新血管形成、包括AMD和糖尿病性視網(wǎng)膜病繼發(fā)的脈絡膜新血管形成的能力。此外，對鑒定治療眼新血管形成的新療法存在持續(xù)和明顯的需求。本發(fā)明滿足了這些需求且進一步提供了其它相關的優(yōu)點。
發(fā)明概述我們已經(jīng)在患有與年齡相關的黃斑變性繼發(fā)的凹下性(subfoveal)脈絡膜新血管形成的患者中進行了抗-VEGF適體與和不與光動力療法聯(lián)用的臨床試驗以測定多重注射療法的安全性。我們發(fā)現(xiàn)抗-VEGF療法與或不與光動力療法(PDT)聯(lián)用在治療患有AMD和相關疾病的患者中均是安全而有效的。大部分接受抗-VEGF適體的患者在治療后3個月表現(xiàn)出穩(wěn)定或改善的視力。那些接受抗-VEGF療法與PDT聯(lián)合療法的患者在視力上表現(xiàn)出最顯著的改善。因此，抗-VEGF療法單獨或與抗血管生成療法聯(lián)合使用顯然是各種形式的眼新血管形成、包括AMD和糖尿病性視網(wǎng)膜病的有希望的治療方法。
因此，本發(fā)明的特征在于患有眼新血管疾病的患者的治療方法，該方法包括下列步驟(a)對所述患者給藥有效量抗-VEGF適體；和(b)給所述患者提供光線療法，諸如光動力療法或熱激光光凝術。
在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的光動力療法(PDT)包括下列步驟(i)將光敏劑轉運至患者的眼組織；和(ii)使所述的光敏劑與具有被該光敏劑所吸收波長的光接觸足以抑制患者眼組織中新血管形成的時間和強度?？梢允褂酶鞣N光敏劑，包括、但不限于苯并卟啉衍生物(BPD)、單天冬氨酰二氫卟酚e6、酞菁鋅、初紫紅素錫、四羥基四苯基卟啉和porfimersodium(PHOTOFRIN)以及綠卟啉類。
本發(fā)明在相關方面中提供了患者眼新血管疾病的治療方法，該方法包括對所述患者給藥(a)有效量抗-VEGF適體；和(b)能夠減少或預防不需要的新脈管系統(tǒng)發(fā)生的第二種化合物。抗-VEGF劑或其它可以與抗-VEGF適體聯(lián)用的化合物包括、但不限于對VEGF具有特異性的抗體或抗體片段；對VEGF受體具有特異性的抗體；抑制、調節(jié)和/或調制酪蛋白激酶信號轉導的化合物；VEGF多肽類；抑制核酸水平上的VEGF表達的寡核苷酸，例如反義RNAs；類視色素；含有生長因子的組合物；結合膠原蛋白的抗體；和具有血管生成抑制活性的各種有機化合物和其它活性劑。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述的抗-VEGF劑是血管內皮生長因子(VEGF)的核酸配體。VEGF核酸配體可以包括核糖核酸、脫氧核糖核酸和/或修飾核苷酸。在特別優(yōu)選的實施方案中，所述的VEGF核酸配體包括2′F-修飾核苷酸；2′-O-甲基(2′-OMe)修飾核苷酸；和/或聚(亞烷基)二醇，諸如聚乙二醇(PEG)。在某些實施方案中，用例如硫代磷酸這樣與未修飾的核酸配體相比降低所述核酸配體上內切核酸酶或外切核酸酶活性的部分修飾所述的VEGF核酸配體，但不會對該配體的結合親和性產生不良影響。
本發(fā)明在另一個方面中提供了患者眼新血管疾病的治療方法，該方法包括下列步驟(a)對所述患者給藥有效量的抑制眼新血管形成發(fā)生的活性劑，例如抗-VEGF適體；和(b)給所述患者提供破壞眼中異常血管的療法，例如PDT。
可以經(jīng)眼球內注入眼內給藥抗-VEGF適體。另一方面，可以使用眼內植入物給藥適體。
可以將本發(fā)明的方法用于治療各種新血管形成疾病，包括、但不限于局部缺血性視網(wǎng)膜病、眼內新血管形成、與年齡相關的黃斑變性、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜缺血、糖尿病性視網(wǎng)膜水腫和增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
從下面的詳細描述和權利要求中顯然可以看出本發(fā)明的其它優(yōu)點和特征。
定義所謂″眼新血管疾病″指的是特征在于眼新血管形成、即患者眼內發(fā)生異常血管的疾病。
所謂″患者″指的是具有可能發(fā)生新血管形成的眼組織的任意動物。優(yōu)選所述的動物是哺乳動物，包括、但不限于人和其它靈長類。該術語還包括馴養(yǎng)動物，諸如牛、豬、綿羊、馬、狗和貓。
所謂″光線療法″指的是患者接觸特定劑量的特定波長的光，包括激光以治療疾病或其它醫(yī)學疾患的任意方法或步驟。
所謂″光動力療法″或″PDT″指的是使用本文稱作光敏劑的光活化藥物或化合物治療疾病或其它醫(yī)學疾患的任意形式的光線療法，所述的疾病或其它醫(yī)學疾患的特征在于組織快速生長，包括異常血管快速生長(即血管生成)。一般來說，PDT是包括局部或全身給藥光敏劑于患者、隨后通過用特定劑量的特定波長的光照射使光敏劑活化的兩步法。
所謂″抗-VEGF劑″指的是抑制血管內皮生長因子(″VEGF″)活性或產生的化合物。
所謂″光敏劑″或″光活化劑″指的是吸收光的藥物或其它化合物，其在接觸特定波長的光時被活化，由此提高所需的生理作用、例如消弱或破壞不需要的細胞或組織。
所謂″熱激光光凝術″指的是光線療法的形式，其中使激光射線直接射入患者的眼以便燒灼眼中的異常血管，從而封閉它們以防止進一步滲漏。
所謂″有效量″指的是足以治療眼新血管疾病癥狀的用量。
本文所用的術語″光″包括所有波長的電磁射線，包括可見光。優(yōu)選對輻射波長進行選擇以便與激發(fā)光敏劑的波長相匹配。甚至更優(yōu)選輻射波長與光敏劑的激發(fā)波長相匹配并對非靶組織而言具有低吸收。
附圖簡述

圖1是抗-VEGF劑NX1838的化學結構。
發(fā)明詳細描述VEGF(血管內皮生長因子)是眼內新血管生長的重要刺激物。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗-VEGF療法為新血管疾病提供了安全而有效的療法，尤其是當將它與能夠減少或消除眼新血管形成的第二種療法、諸如光動力療法(PDT)聯(lián)用時更是如此。我們發(fā)現(xiàn)這些療法聯(lián)用對特征在于不需要的眼新血管系統(tǒng)發(fā)生的疾病的治療條件遠優(yōu)于最常用的療法，包括單獨使用這些療法之一。
因此，本發(fā)明提供了治療眼新血管疾病的方法，該方法包括對患者給藥抗-VEGF劑并與光線療法(例如PDT)或與其它療法、諸如破壞眼中異常血管的光凝固術一起治療患者。可以將該方法用于治療以發(fā)生眼新血管形成為標志的許多眼科疾病和疾患，包括、但不限于局部缺血性視網(wǎng)膜病、眼內新血管形成、與年齡相關的黃斑變性、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜缺血、糖尿病性視網(wǎng)膜水腫和增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
抗-VEGF療法抑制VEGF活性或產生的各種抗-VEGF療法，包括適體和VEGF抗體是可得到的且可以用于本發(fā)明的方法中。優(yōu)選的抗-VEGF劑是諸如下列文獻中所述的那些VEGF的核酸配體美國專利US 6,168,778 B1；US 6,147,204；US 6,051,698；US 6,011,020；US 5,958,691；US 5,817,785；US 5,811,533；US 5,696,249；US 5,683,867；US 5,670,637；和US 5,475,096。特別優(yōu)選的抗-VEGF劑是EYE001(上文稱作NX1838)，它是與主要的可溶的人VEGF同種型高親和性結合并具有附圖1中所示一般結構的修飾的聚乙二醇化的適體(描述在美國專利US 6,168,788、Journal of Biological Chemistry，273 Vol(32)20556-20567(1998)和In Vitro Cell Dev.Biol.-Animal 35533-542(1999)中)。
另一方面，所述的抗-VEGF劑例如可以是諸如美國專利US 6,100,071、US 5,730,977和WO 98/45331中所述的那些VEGF抗體或抗體片段。可以與本發(fā)明抗-VEGF劑聯(lián)用的其它合適的抗-VEGF劑或化合物包括、但不限于對VEGF受體具有特異性的抗體(例如美國專利US 5,955,311、US 5,874,542和US 5,840,301)；抑制、調節(jié)和/或調制酪蛋白激酶信號轉導的化合物(例如美國專利US 6,313,138 B1)；VEGF多肽類(例如美國專利US 6,270,933 B1和WO 99/47677)；抑制核酸水平上的VEGF表達的寡核苷酸，例如反義RNAs(例如美國專利US 5,710,136；US 5,661,135；US 5,641,756；US5,639,872；和5,639,736)；類視色素(例如美國專利US 6,001,885)；含有生長因子的組合物(例如美國專利US 5,919,459)；結合膠原蛋白的抗體(例如WO00/40597)；和具有血管生成抑制活性的各種有機化合物和其它活性劑(例如美國專利US 6,297,238 B1；US 6,258,812 B1；和US 6,114,320)。
抗-VEGFA劑的給藥一旦將患者診斷為眼新血管疾病，則通過給藥抗-VEGF劑治療患者以阻斷VEGF的副作用，由此緩解與新血管形成相關的癥狀。如上所述的各種抗-VEGF劑在本領域中是公知的且可以用于本發(fā)明。這些抗-VEGF劑的制備方法也是眾所周知的且許多是商購藥物。
可以全身給藥、例如通過口服或通過IM或IV注射給藥混有適合于給藥途徑的藥物上可接受載體的抗-VEGF劑?？梢詫⒏鞣N生理上可接受的載體用于給藥所述的抗-VEGF劑且其制劑是本領域技術人員所公知的且例如描述在Remington′s Pharmaceutical Sciences 18th，ed.A.Gennaro，1990，MackPublishing Company，Easton，PA和PoUock等。
優(yōu)選通過非腸道給藥所述的抗-VEGF劑(例如通過肌內、腹膜內、靜脈內、眼內、玻璃體內或皮下注射或植入物)。非腸道給藥制劑包括無菌的水溶液或非水溶液、混懸液或乳劑?？梢允褂酶鞣N含水載體，例如水、緩沖水、鹽水等。其它適宜載體的實例包括聚丙二醇、聚乙二醇、植物油、明膠、氫化naphalene和可注射的有機酯類，諸如油酸乙酯。這類制劑還可以含有輔助物質，諸如防腐劑、濕潤劑、緩沖劑、乳化劑和/或分散劑?？梢允褂蒙锵嗳菪缘目缮锝到獾谋货ゾ酆衔铩⒈货?乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物以便控制活性組分釋放。
另一方面，可以通過口服攝取給藥抗-VEGF劑。可以按照本領域中所公知的用于制備藥物組合物的任意方法用于口服應用的組合物制備成固體或液體劑型。該組合物可以任選含有增甜劑、調味劑、著色劑、香料和防腐劑以便提供更適口的制劑。
用于口服給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。一般來說，這些藥物制劑含有活性組分與無毒性的藥物上可接受賦形劑的混合物。這些無毒性的藥物上可接受賦形劑可以包括例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、纖維素、淀粉、磷酸鈣、磷酸鈉等。還可以使用粘合劑、緩沖劑和/或潤滑劑(例如硬脂酸鎂)。還可以用腸溶包衣材料制備片劑和丸劑。
用于口服給藥的液體劑型包括藥物上可接受的乳劑、溶液、混懸液、糖漿劑和軟膠囊。這些劑型含有本領域中常用的惰性稀釋劑、諸如水或油介質且還可以包括佐劑、諸如濕潤劑、乳化劑和懸浮劑。
還可以通過局部、例如通過貼劑或通過直接施用在眼部或通過離子電滲療法給藥所述的抗-VEGF劑。
可以將抗-VEGF劑制成緩釋組合物，諸如例如美國專利US5,672,659和US 5,595,760中所述的那些緩釋組合物。即刻釋放組合物或緩釋組合物的應用取決于所治療疾病的性質。如果疾病是急性或過度急性的，那么優(yōu)選用即刻釋放組合物而不是使用延長釋放組合物治療。另一方面，就某些預防性或長期治療而言，緩釋組合物可能是適宜的。
還可以使用眼內植入物轉運所述的抗-VEGF劑。這類植入物可以是可生物降解的和/或生物相容性的植入物或可以是不可生物降解的植入物。這些植入物可以透過或不能透過活性劑且可以將它們插入眼房、諸如前房或后房或可以植入鞏膜、跨脈絡膜空間或玻璃體外的無血管化區(qū)域。在優(yōu)選的實施方案中，將植入物放置在無血管區(qū)域上、諸如鞏膜上以使藥物跨鞏膜擴散至所需治療部位，例如眼內空間和眼中的黃斑。此外，優(yōu)選使跨鞏膜擴散的部位接近黃斑。
用于轉運抗-VEGF劑的植入物的實例包括、但不限于下列文獻中所述的裝置美國專利US 3,416,530；US 3,828,777；US 4,014,335；US 4,300,557；US 4,327,725；US 4,853,224；US 4,946,450；US 4,997,652；US 5,147,647；US 5,164,188；US 5,178,635；US 5,300,114；US 5,322,691；US 5,403,901；US 5,443,505；US 5,466,466；US 5,476,511；US 5,516,522；US 5,632,984；US 5,679,666；US 5,710,165；US 5,725,493；US 5,743,274；US 5,766,242；US 5,766,619；US 5,770,592；US 5773,019；US 5,824,072；US 5,824,073；US 5,830,173；US 5,836,935；US 5,869,079；US 5,902,598；US 5,904,144；US 5,916,584；US 6,001,386；US 6,074,661；US 6,110,485；US 6,126,687；US 6,146,366；US 6,251,090；和US 6,299,895；以及WO01/30323和WO01/28474，將所有這些文獻引入本文作為參考。
劑量與載體物質合并使用以產生單劑量的活性組分用量隨所治療受試者和特定給藥方式的不同而改變。一般來說，應給藥足以減少或消除眼新血管疾病癥狀的用量的抗-VEGF劑。
將約1μg/kg-100mg/kg體重/給藥的劑量水平用于治療上述新血管疾病。當直接對眼部給藥時，每只眼優(yōu)選的劑量范圍在約0.3mg-約3mg?？梢詫⒃搫┝恳詥蝿┝炕蚍殖啥啻蝿┝拷o藥。一般來說，應在設定的間隔給藥所需劑量，持續(xù)延長期限，通常至少為幾周，不過，可能需要幾個月或幾個月以上的較長給藥期限。
本領域技術人員會理解可以適當調整個體的確切劑量，這取決于各種因素，包括所給藥的具體的抗-VEGF劑、給藥時間、制劑的性質、排泄率、所治療的特定疾病、該疾病的嚴重程度和患者的年齡、體重、健康狀況和性別。根據(jù)不同給藥途徑的不同效率預計所需劑量的廣泛變化。例如，一般預計口服給藥需要高于通過靜脈內或玻璃體內注射給藥的劑量水平?？梢允褂帽绢I域中眾所周知的最優(yōu)化標準經(jīng)驗途徑調整這些劑量水平的變化。優(yōu)選由參與的臨床醫(yī)師根據(jù)上述確定因素決定精確的治療有效劑量水平。
除治療預先存在的新血管疾病外，還可以以預防方式給藥抗-VEGF劑以便預防或減緩這些疾病的發(fā)作。在預防性應用中，對易感，或就是處于特定新血管疾病危險中的患者給藥抗-VEGF劑。此外，所給藥的確切用量取決于各種因素，諸如患者的健康狀況、體重等。
抗-VEGF療法的有效性為了評價抗-VEGF療法治療眼新血管形成的有效性，我們進行了下面實施例中所述的大量研究，包括對患有與年齡相關的黃斑變性繼發(fā)的凹下性(subfoveal)脈絡膜新血管形成的患者給藥抗-VEGF適體與和不與光動力療法聯(lián)用。對患有與年齡相關的黃斑變性(AMD)繼發(fā)的凹下性(subfoveal)脈絡膜新血管形成(CNV)的患者進行的抗-VEGF療法的1A期單一玻璃體內注射研究顯示出極佳的安全性分布(實施例6)。眼部評價顯示在治療后3個月有80％的患者表現(xiàn)出穩(wěn)定或改善的視力且27％的眼在該時間期限時在ETDRS圖上顯示出3-線或3-線以上的視力改善。沒有報導存在局部或全身的顯著相關不良反應。這些數(shù)據(jù)證實抗-VEGF療法是治療包括滲出性黃斑變性和糖尿病性視網(wǎng)膜病在內的眼新血管疾病的有希望的新途徑。
我們還對患有AMD繼發(fā)的凹下性(subfoveal)CNV患者進行了使用多次玻璃體內注射抗-VEGF適體的抗-VEGF療法與或不與光動力療法聯(lián)用的1B期多下行劑量安全性研究(實施例7)。安全性研究表明沒有與藥物相關的顯著安全性問題。眼部評價顯示接受單獨的抗-VEGF適體的患者中有87.5％在治療后3個月表現(xiàn)出穩(wěn)定或改善的視力且25％的眼在該時間期限時在ETDRS圖上顯示出3-線或3-線以上的視力改善。在既接受抗-VEGF適體又接受光動力療法的患者中注意到3個月時有60％的患者3-線增加。在該1B期研究中多次玻璃體內注射抗-VEGF適體耐受性極佳。
這一抗-VEGF療法的1B期多次玻璃體內注射臨床研究結果(實施例7)擴展了由我們的1A期單一注射研究(實施例6)報導的極佳安全性分布。1B期研究特別證實了每月連續(xù)三次玻璃體內注射抗-VEGF適體的眼內和全身安全性。沒有注意到嚴重的相關不良反應。在某些病例中所遇到的不良反應看起來是不相關或最低限度的反應，可能是由于玻璃體內注射自身所導致的。
在3個月時僅適體治療組中觀察到的25％的3-線增加比病史對照組、諸如3個月時PDT關鍵試驗(2.2％)及其對照組(1.4％)(Arch Ophthalmol 1999，1171329-1345)和假擬輻射對照組(3％)(Ophthalmology 1999，106；122239-2247)的結果有利，在上述組中只有不超過3％的患者在該相同期限時表現(xiàn)出這類改善。
3個月時25％的3-線增加與在適體1A期研究中注意到的26.7％的改善率相一致?？赡苁撬幬锏目雇ㄍ感宰饔脤е乱暰W(wǎng)膜下液體再吸收和由此這些病例中的視力改善。令人感興趣的是，使用來自Genentech的抗-VEGF抗體片段進行的近期研究也證實了1期臨床試驗中26％的3-線增加率。這種抗體片段與抗-VEGF適體共有相同的阻斷胞外VEGF的機制。
IB期研究中3個月時觀察到的87.5％的穩(wěn)定或改善率也比PDT-治療的患者在該關鍵試驗中的50.5％的比例(Arch Ophthalmol 1999，1171329-1345)、PDT對照組中44％的比例和假擬輻射對照組中48％的比例(Ophthalmology 1999，106；122239-2247)有利。
既接受抗VEGF適體又接受PDT的患者在3個月時獲得60％的3-線增加也極為令人鼓舞。在3期關鍵PDT試驗中僅2.2％的患者表現(xiàn)出這類視覺改善(Arch Ophthalmol 1999，1171329-1345)。這些研究組均包括患有傳統(tǒng)凹下性(subfoveal)CNV的眼。在這些眼中觀察到的視力改善得到了下列發(fā)現(xiàn)的支持，即與關鍵PDT試驗中報導的93％的重新治療率相比，研究人員僅在3個月時的40％病例中選擇重新用PDT治療(Arch Ophthalmol1999，1171329-1345)。
此外，目前大量前期臨床研究表明抗-VEGF療法可以預防角膜、虹膜、視網(wǎng)膜和脈絡膜中VEGF-誘發(fā)的新血管形成(Arch Ophthalmol 1996，11466-7；Invest Ophthalmol Vis Sci 1994，35101)。下面使用EYE001的實施例1-5中所述的前期臨床研究提供了抗-VEGF療法可以用于降低血管通透性并減少新血管形成的證據(jù)。抗-VEGF適體在ROP視網(wǎng)膜新血管形成模型中表現(xiàn)出顯著功效，其中與對照組相比，80％的視網(wǎng)膜新血管形成受到抑制(p＝0.0001)。Miles試驗模型顯示在加入EYE001后VEGF介導的血管滲漏幾乎完全弱化且角膜新生血管生成模型也在使用EYE001后表現(xiàn)出新血管形成顯著減少。在豚鼠中進行的Miles試驗研究提示抗-VEGF適體可以顯著降低血管通透性。這種降低血管通透性的特性可以證明在減少CNV和糖尿病性黃斑水腫中的液體和水腫方面具有臨床重要性。因此，抗-VEGF療法可以作為抗-通透性和/或抗-血管生成活性劑起作用。
光動力療法(PDT)如上所述的本發(fā)明方法的一個實施方案包括給藥抗-VEGF劑與光動力療法(PDT)聯(lián)用。PDT是以局部或全身給藥諸如卟啉衍生物這樣選擇性累積在患者靶組織中的吸光的光敏劑開始的兩步法。在用活化波長的光照射時，活性氧類在含有光敏劑的細胞中產生，它們促進細胞死亡。例如，在治療特征在于眼新血管形成的眼病過程中，選擇累積在眼的新脈管系統(tǒng)中的光敏劑。然后使患者的眼接觸適宜波長的光，這一過程導致異常血管受到破壞，由此改善患者的視力。
光敏劑可以使用許多光活性化合物中的任意一種實施本發(fā)明的光動力療法。例如，所述的光敏劑可以是在一種或多種類型的選擇的靶組織中采集且當接觸特定波長的光時吸收該光并誘導靶組織損害或破壞的任意化合物。實際上，返回選擇的靶組織并吸收光的任意化合物可以用于本發(fā)明。優(yōu)選所述的光敏劑對所給藥的動物而言是無毒性的且能夠將它們配制成無毒性的組合物。優(yōu)選光敏劑在其光降解形式下也是無毒性的。理想的光敏劑的特征在于在沒有光化學作用的情況下對細胞無毒性且易于從非靶組織中清除。
例如，可以在Kreimer-Bimbaum，Sem.Hematol.26157-73，1989中找到光敏劑的綜合列表。光敏化合物包括、但不限于二氫卟酚類；菌綠素類；酞菁類；卟啉類；紫紅素類；步花菁類；脫鎂葉綠酸類；補骨脂素類；氨基乙酰丙酸(ALA)；血卟啉衍生物；porphycenes；porphacyanine；可膨脹的卟啉樣化合物和藥物前體，諸如δ-氨基乙酰丙酸，它可以產生諸如原卟啉這樣的藥物。(例如，參見美國專利US 5,438,071、US 5,405,957、US 5,198,460、US 5,190,966、US 5,173、US 504、US 5,171,741、US 5,166,197、US 5,095,030、US 5,093,349、US 5,079,262、US 5,028,621、US 5,002,962、US 4,968,715、US 4,920,143、US 4,883,790、US 4,866,168和US 4,649,151中任意一篇所述的光敏劑。)。優(yōu)選的光敏劑是苯并卟啉衍生物(BPD)、單天冬氨酰二氫卟酚e6、酞菁鋅、初紫紅素錫、四羥基四苯基卟啉和卟吩姆鈉(PHOTOFRIN)。特別有效的一類光敏劑包括綠卟啉類，它們具體描述在Levy等的美國專利US 5,171,749中。
上述任意一種光敏劑均可以用于本發(fā)明的方法中。當然，也可以使用兩種或更多種光活性化合物的混合物；不過，治療的有效性取決于所述光敏劑對光的吸收情況，使得如果使用混合物，那么優(yōu)選具有相同最大吸收的成分。
本發(fā)明的光敏劑優(yōu)選具有的吸收光譜在350nm-1200nm、優(yōu)選約400-900nm，且最優(yōu)選600-800nm的波長范圍。
可以對所述光敏劑進行配制以便對靶眼組織提供有效濃度?？梢允构饷魟┡c可以結合靶眼組織特定表面成分的特異性結合配體偶聯(lián)，或如果需要，可以使用含有載體的制劑將較高濃度轉運至靶組織。制劑的性質部分取決于給藥方式和所選擇的光敏劑的性質?？梢允褂眠m合于特定光活性化合物的任意藥物上可接受的賦形劑或其組合。因此，可以將所述的光敏劑制成含水組合物、如跨粘膜或經(jīng)皮組合物或以口服制劑形式給藥。
如上所述的本發(fā)明方法對治療患有與不需要的新脈管系統(tǒng)相關的視力下降的患者特別有效。已經(jīng)證實LDL受體數(shù)量增加與新血管形成有關。綠卟啉類且特別是BPD-MA與這類脂蛋白發(fā)生強力相互作用。LDL自身可以用作綠卟啉類的載體；或可以使用脂質體制劑。認為脂質體制劑可以將綠卟啉類選擇性轉運至血漿中的低密度脂蛋白成分，其本身也起載體作用而將活性組分更有效地轉運至所需部位。通過增加分配入血液的脂蛋白相中的綠卟啉類，脂質體制劑可以更有效地將所述光敏劑轉運至新脈管系統(tǒng)。包括脂復合體的綠卟啉類的組合物描述在美國專利US 5,214,036中。用于靜脈內給藥的脂質體BPD-MA可以獲自QLT Photo Therapeutics Inc.，Vancouver，BritishColumbia。
可以通過局部或全身以各種方式任意一種給藥所述的光敏劑，例如通過口服、通過非腸道(例如靜脈內、肌內、腹膜內或皮下注射)給藥、使用貼劑或植入物經(jīng)局部或可以將所述化合物直接置于眼內?？梢砸愿芍苿┑男问?，諸如丸劑、膠囊、栓劑或貼劑給藥光敏劑。還可以以液體形式給藥所述的光敏劑，這些液體制劑中可以單獨含有水或含有諸如上文Remington′sPharmaceutical Sciences中所述的藥物上可接受的賦形劑。該液體制劑還可以是混懸劑或乳劑。用于混懸劑和乳劑的適宜賦形劑包括水、鹽水、葡萄糖、甘油等。這些組合物可以含有少量無毒性的輔助物質，諸如潤濕劑、乳化劑、抗氧化劑、pH緩沖劑等。
光敏劑的劑量可以隨各種因素廣泛改變，諸如光敏劑的類型；給藥方式；攜帶光敏劑的制劑，諸如脂質體形式；或光敏劑是否與靶特異性配體、諸如抗體或免疫活性片段偶聯(lián)。影響光敏劑劑量的其它因素包括所尋找的靶細胞、患者體重和定時的光療。盡管各種光活性化合物需要不同的劑量范圍，但是如果使用綠卟啉類，那么典型的劑量范圍在0.1-50mg/M2(體表面積)，優(yōu)選約1-10mg/M2且更優(yōu)選約2-8mg/M2。
用于本發(fā)明光動力療法的各種參數(shù)是相關的。因此，還應根據(jù)其它參數(shù)調整劑量，例如能量密度、輻照度、光動力療法中所用光的時間和給藥所述劑量與治療性照射之間的時間間隔。所有這些參數(shù)均應進行調整以便顯著強化視力而不會對眼組織造成明顯損害。
光療法在對患者給藥光敏劑后，用由所用光敏劑吸收的波長的光照射靶組織。本文所述的光敏劑的光譜在本領域中是公知的；對任意特定的光活性化合物而言，確定該光譜并不重要。對于綠卟啉類而言，所需波長范圍一般在約550-695nm。特別優(yōu)選將該范圍的波長用于強化透入體組織。
作為接觸光的結果，光敏劑進入激發(fā)狀態(tài)且認為與其它化合物發(fā)生相互作用而形成諸如單態(tài)氧這樣的反應中間體，它們可以使細胞結構破壞。可能的細胞靶包括細胞膜、線粒體、溶酶體膜和細胞核。來自腫瘤和新血管模型的證據(jù)表明脈管系統(tǒng)閉塞是光動力療法的主要機制，它通過損害內皮細胞發(fā)生，隨后血小板粘著、脫粒且血栓形成。
照射療法過程中的能量密度可以隨組織類型、靶組織深度和上面的液體或血液的量的不同而廣泛改變，但優(yōu)選在約50-200焦耳/cm2內改變。
輻照度一般在約150-900mW/cm2，優(yōu)選約150-600mW/cm2的范圍。然而，選擇應用較高的輻照度可能有效且具有縮短治療時間的優(yōu)點。
光活性劑給藥后至光療的最佳時間也可以隨給藥方式和所靶向的特定眼組織的不同而廣泛改變。給藥光活性劑后的一般時間在約1分鐘-約2小時、優(yōu)選約5-30分鐘且更優(yōu)選約10-25分鐘的范圍。
照射接觸時間優(yōu)選在約1分鐘-30分鐘，這取決于照射源的強度。光照射時間還取決于所需的能量密度。例如，就600mW/cm2的輻射度而言，50J/cm2的能量密度需要照射90秒；150J/cm2需要照射270秒。
照射進一步通過其強度、時間和相應于使用光敏劑給藥的定時(注射后的間隔)來決定。強度必須足以照射至穿透皮膚和/或達到所治療的靶組織。時間必須足以使光活化足夠的光敏劑以便對靶組織起作用。強度和時間必須受到限制以避免對患者治療過度。注射后與施用光前的間隔是重要的，因為一般給藥光敏劑后將光施用的越迅速，則1)所需光的量越少；和2)光敏劑的有效量越低。
臨床實驗和眼底照相術一般顯示光動力療法后沒有立即出現(xiàn)顏色改變，不過在約24小時后的某些病例中發(fā)生輕度的視網(wǎng)膜變白。優(yōu)選通過觀察對內皮細胞的損害而經(jīng)組織學方法證實了脈絡膜新血管形成關閉。還可以評價檢測形成空泡的細胞質和與新血管組織破裂有關的異常核的觀察結果。
一般來說，可以在治療后的特定時間使用標準熒光素血管造影技術實施光動力療法對減少新血管形成產生作用。還可以通過使用本領域中標準的方式對視力進行臨床評價來確定PDT的有效性，其中所述的本領域中標準的方式諸如有常用的眼圖，其中通過辨別一定大小的字母的能力來評價視力，通常使用給定大小線上的5個字母。
用于治療新血管疾病的其它療法除PDT外，還存在許多可以與抗-VEGF療法聯(lián)用治療新血管疾病的療法。例如，稱作熱激光光凝術的光線療法形式是用于治療一定范圍眼病的標準眼科手術，所述的眼病包括視網(wǎng)膜血管問題(例如糖尿病性視網(wǎng)膜病)、脈絡膜血管問題和黃斑損害(例如老年性黃斑變性)。該手術包括使用激光燒灼患者眼內的異常血管以便封閉它們而避免進一步滲漏。(例如，參見Arch.Ophthalmol.1991，1091109-1114)。另一方面，可以將能夠減少或預防不需要的新脈管系統(tǒng)發(fā)生的化合物、包括其它抗-VEGF劑、抗-血管生成劑或其它抑制眼新血管形成發(fā)生的活性劑與抗-VEGF療法聯(lián)用。
現(xiàn)在更具體地描述并在下面描述優(yōu)選技術和實驗結果的實施例中指出了本發(fā)明的特征和其它具體內容。提供這些實施例的目的是為了解釋本發(fā)明而不應將它們視為起限定作用。
實施例在下面的實施例中，使用抗-VEGF的聚乙二醇化的適體EYE001。如上所述，這種適體是結合主要可溶性人VEGF同種型VEGF165的具有高特異性和親和性的聚乙二醇(PEG)綴合的寡核苷酸。這種適體以與定向于VEGF的高親和性抗體類似的方式結合VEGF并使其失活。實施例1-5報導了使用抗VEGF適體在不同眼新血管形成模型中進行的前期臨床研究結果；實施例6報導了在患有滲出性AMD的人中進行的IA期臨床安全性結果；且實施例7報導了IB期臨床結果。一般來說，將劑量和濃度表示為僅EYE001(NX1838)的寡核苷酸重量且基于37μg/mL/A260單位的適體的近似消光系數(shù)。
實施例1皮膚血管滲透性試驗(Miles試驗)VEGF的生物活性之一是通過與血管內皮細胞上的受體的特異性結合而增加血管通透性。這種相互作用使緊密的內皮交界處松弛，結果血管液體滲漏。可以根據(jù)作為經(jīng)皮注射VEGF結果的從豚鼠脈管系統(tǒng)中滲漏的Evans藍染料測定體內由VEGF誘導的血管滲漏(Dvorak HF，Brown LF，Detmar M，Dvorak AM.“血管通透因子/血管內皮生長因子、微血管高通透性和血管生成”-Am J Pathol.1995，1461029。)類似地，該試驗可以用于測定化合物阻斷VEGF的這種生物活性的能力。
在活體外將VEGF165(20-30nM)與EYE001(30nM-1μM)預混合且隨后通過經(jīng)皮注入豚鼠背部剃刮的皮膚。注射后30分鐘通過使用計算機化的形態(tài)測量分析系統(tǒng)對注射部位周圍的Evans藍染料滲漏量進行定量。數(shù)據(jù)(未顯示)證實VEGF-誘導的指示劑染料從脈管系統(tǒng)中的滲漏幾乎可以被到共同給藥的濃度低至100nM的EYE001的完全抑制。
實施例2角膜血管生成試驗將含有VEGF165(3pmol)的甲基丙烯酸酯(Methacyrate)聚合物顆粒植入大鼠角膜基質以便誘發(fā)血管生長成正常無血管角膜。經(jīng)靜脈內對大鼠給藥1、3和10mg/kg劑量的EYE001，每天一次或兩次，持續(xù)5天。在治療期結束時，對所有的各角膜進行顯微照相。通過對顯微照片進行標準化形態(tài)測量分析對新血管在角膜組織中發(fā)生的程度及其由EYE001產生的抑制作用定量。
數(shù)據(jù)(未顯示)證實用EYE001進行系統(tǒng)性治療與用磷酸緩沖鹽水(PBS)相比對角膜中的VEGF-依賴性血管生成產生了顯著抑制作用(65％)。每天用10mg/kg治療一次與每天治療兩次具有同樣的效果。3mg/kg劑量具有與10mg/kg劑量相同的活性，但在1mg/kg下顯然功效不明顯。
實施例3早熟性視網(wǎng)膜病研究盡管ROP顯然不同于糖尿病性視網(wǎng)膜病和AMD，但是已經(jīng)將ROP小鼠模型用于證實VEGF在發(fā)生這種疾病的異常視網(wǎng)膜血管形成中的作用(Smith LE，Wesolowski E，McLellan A，Kostyk SK，Amato DR，Sullivan R，D′Amore PA.“小鼠中氧誘導的視網(wǎng)膜病”-Invest Ophthalmol Vis Sci.1994，35101。)。這些數(shù)據(jù)為研究EYE001在這種模型中的抗血管生成作用提供了基本原理。
分別將9、8、8、7和7只小鼠同窩仔(litter)放入空氣室或含氧量高的室內并經(jīng)腹膜內用PBS或EYE001(1、3或10mg/kg天)治療。通過顯微鏡鑒定并對20個來自所有治療組和對照組小鼠的每只眼的組織切片上的新血管芽進行計數(shù)來評價試驗的終點，即通過視網(wǎng)膜的內界膜進入玻璃體液內的新毛細血管生長物。在10mg/kg和3mg/kg劑量下觀察到與未經(jīng)治療的對照組相比視網(wǎng)膜新血管形成減少了80％(對兩組而言p＝0.0001)。
實施例4人腫瘤異種移植物用植入裸鼠體內的人腫瘤異種移植物(A673橫紋肌肉瘤和維爾姆斯瘤)測試EYE001的體內功效。在兩種情況中，在建立的腫瘤發(fā)育(200mg)后，用每天一次經(jīng)腹膜內給藥10mg/kg EYE001來治療小鼠。用順序雜亂的對照品適體(寡核苷酸)治療對照組。
與對照組相比，每天一次用10mg/kg的EYE001治療小鼠抑制A673橫紋肌肉瘤生長達80％且抑制維爾姆斯瘤生長達84％。在維爾姆斯瘤模型中，終止治療后兩周，在所治療的動物中腫瘤大小劇烈反彈，使得腫瘤大小與對照組相比不再有任何差異。
實施例5EYE001在家兔玻璃體內的藥動學特性獲得家兔并按照所有適合的州和聯(lián)邦政府法規(guī)護理且符合″實驗室動物護理原則″(NIH出版#85-23，1985年修訂)。通過玻璃體內注射對總計18只雄性新西蘭白色家兔給藥EYE001。每只動物兩側接受0.50mg/眼(1.0mg/動物)的注射劑量，體積為40μL/眼。在給藥劑量后28天期限內采集EDTA-血漿和玻璃體液樣品且冷凍儲存(-70℃)至試驗為止。在通過放血處死動物后，分別從每只眼中采集玻璃體液。通過與Tucker等在以前所述(“抗-血管內皮生長因子寡核苷酸-適體(NX1838)在獼猴中的檢測和血漿藥動學”-J.Chromatogr.Biomed.Appl.1999，732203-212)類似的HPLC試驗方法并通過與Drolet等在以前所述(“抗-血管內皮生長因子適體(NX1838)在注入獼猴玻璃體液后的藥動學和安全性”-Pharm.Res.，2000，171503-1510。)類似的雙重雜交試驗方法測定玻璃體液樣品中EYE001的濃度。通過求兩次試驗結果的平均值計算玻璃體液濃度。僅通過雙重雜交試驗測定血漿中的EYE001濃度。
在兩側給藥0.50mg/眼(1.0mg/動物)的單劑量EYE001后，最初的玻璃體液濃度約為350μg/mL且通過表觀一級消除反應降至第28天的約1.7μg/mL。據(jù)估計的最終半衰期為83小時，與在獼猴中觀察到的94-小時半衰期類似(Drolet等，文獻同上)。在給藥EYE001后4周時，玻璃體液中的藥物濃度(～190nM)適當保持在VEGF的KD(200pM)以上，這一結果提示每月一次對人體給藥是合適的，從而推定藥動學參數(shù)在家兔與人玻璃體液中相差無幾。與在玻璃體液內發(fā)現(xiàn)的高濃度EYE001相反，血漿濃度顯著降低且從第1天的0.092ug/mL降至第21天的0.005ug/mL。血漿濃度也因表觀一級消除反應而下降，其中估計的最終半衰期為84小時。血漿最終半衰期由此與在獼猴中觀察到的玻璃體液半衰期類似(Drolet等，文獻同上)且特征在于傳統(tǒng)的翻轉動力學，其中從眼中的清除是血漿清除的決速步驟。這些數(shù)據(jù)與從玻璃體液中慢速釋放入循環(huán)系統(tǒng)的高度穩(wěn)定的(核酸酶抗性)適體相一致。
實施例6IA期臨床試驗研究我們在患有與年齡相關的黃斑變性繼發(fā)的凹下性(subfoveal)CNV且視力差于ETDRS圖上的20/200的患者中進行單一玻璃體內注射EYE001的多中心、開放式標記、劑量增加研究。起始劑量為玻璃體內一次注射0.25mg。還測試了0.5、1、2和3mg劑量。使用眼底照相術和熒光素血管造影術進行完全的眼部檢查?？傆嬛委?5位患者。
選擇標準使用下面的包括和排除標準選擇本研究中的患者包括標準要求患者＞50歲且一般健康狀況良好、在本研究的眼中具有最佳校正的差于ETDRS圖上20/200的視力且每組(n＝3)中至少第1位患者為20/400或差于20/400；對側眼(fellow eye)的最佳校正的視力等于或優(yōu)于20/64；按尺寸計凹下性(subfoveal)CNV(傳統(tǒng)和/或潛隱性CNV)＞3.5的黃斑光凝固術研究(MPS)的圓片面積；清澈的眼介質和足夠的瞳孔擴張以便實施良好質量的立體鏡眼底照相；且眼內壓為22mmHg或22mmHg以下。
排除標準排除包括明顯的可能干擾視力、毒性評價或眼底照相的介質混濁，包括白內障；存在可能明顯影響視力的眼病，包括青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜血管閉塞或其它疾病(非因AMD導致的CNV)；存在其它CNV原因，包括病理性近視(-8屈光度或更高負值的球形等位癥)、眼組織胞漿菌病綜合、血管樣紋、脈絡膜破裂和多灶性脈絡膜炎；可能指示或考慮其它CNV激光療法的患者；在進入研究的3個月內實施任何眼內手術；血液占有量＞50％的損害；預先進行了玻璃體切割術；與另一種除復合維生素和微量元素外的治療AMD的研究活性劑的預先或伴隨療法；包括未加控制的糖尿病或存在糖尿病性視網(wǎng)膜病在內的下面系統(tǒng)性疾病中的任意一種；在進入研究前12個月內發(fā)生包括心肌梗死在內的心臟??；和/或與臨床癥狀相關的冠狀動脈疾病；和/或在ECG上注意到的局部缺血適應征；中風(在進入研究的12個月內)；活動性出血疾?。贿M入研究的1個月內進行任何大手術；進入研究的6個月內出現(xiàn)伴有出血的活動性消化性潰瘍??；和用皮質類固醇(例如口服潑尼松)或其它抗血管生成藥(例如沙利度胺)的伴隨系統(tǒng)性療法。
研究藥物藥物產品為由溶于10mM磷酸鈉和0.9％氯化鈉緩沖注射液的EYE001(上述NX1838)組成的并制成無菌和無致熱原的1cc玻璃體注射器桶的備用的無菌溶液，該注射器上帶有與塑料活塞連接的涂敷塞子和預連接27號劑量針頭上的橡膠頂蓋。以1、2.5、5、10、20或30mg/ml活性藥物濃度的EYE001(表示為寡核苷酸含量)提供聚乙二醇化的適體以便達到100μl的轉運體積。
患者登記在將患者補充入本研究前，獲得書面的公共機構評述委員會(IRB)批準的方案，以資料為依據(jù)的書面許可和任何其它患者信息。
結果在15位患者中以0.25-3.0mg/眼而不會達到劑量限制毒性的劑量進行單劑量范圍安全性研究。該制劑的粘度阻止了3mg后其它劑量增加?；颊叩哪挲g在64-92歲。8位男性和7位女性患者進入研究且全部為白種人。15位患者中有11位發(fā)生總計17種輕度或中度不良反應，包括6種很可能或可能與給藥EYE001相關的不良反應輕度眼內炎癥、暗點、視覺失真、蕁麻疹、眼痛和疲勞。此外，存在一種與測試藥物不相關的嚴重不良反應。它在1位患者被診斷為乳腺癌，其中在治療前已經(jīng)注意到了腫塊。
在注射EYE001后3個月時，15只眼中的12只(80％)表現(xiàn)出穩(wěn)定或改善的視力。4位患者(26.7％)在相同時間點處具有顯著改善的視力，將其定義為在ETDRS圖上的視力增加為3-線或3-線以上。在3個月時注意到具有這類改善的患者在ETDRS圖上存在+6、+4和+3線的增加。沒有注意到出人意料的視力安全性問題。對彩色照片和熒光素血管造影照片的評價顯示沒有視網(wǎng)膜或脈絡膜毒性的征候。
我們的IA期臨床研究證實可以安全地給藥玻璃體內單劑量達3mg/眼的抗-VEGF適體。沒有注意到顯著的眼或全身副作用。
臨床醫(yī)師同意最少需要1年的隨訪以便評價對滲出性AMD的任何可能的療法。盡管如此，然而，從一定的預期研究中得到了3個月的數(shù)據(jù)且用于評價眼部安全性和任何潛在的新療法趨勢。
病史對照組顯示僅1.4％(關鍵光動力學試驗)(Arch Ophthalmol 1999，1171329-1345)和3.0％(照射研究)(1999，106；122239-2247)的眼在3個月時已經(jīng)表現(xiàn)出如ETDRS圖上獲得3線或3線以上所確定的顯著視力改善。此外，3個月時僅在TAP研究的PDT-治療組(Arch Ophthalmol 1999，1171329-1345)中注意到有2.2％的病例具有這類改善的視力。這些發(fā)現(xiàn)證實了在任何時間范圍均難以觀察到患有AMD繼發(fā)的任何類型(傳統(tǒng)的、潛隱性的或混合型的)的CNV的顯著視力改善的臨床印象。
在我們的研究中，在玻璃體內給藥抗-VEGF適體后3個月時，80％的眼表現(xiàn)出穩(wěn)定或改善的視力，其中在ETDRS圖上表現(xiàn)出3線或3線以上增加的有26.7％。這些視力改善得到了在某些適體-治療的患者中的臨床和血管造影發(fā)現(xiàn)的支持。視力的穩(wěn)定性始終是滲出性AMD研究的目的，所以沒有預計到只用一劑量3個月時在26.7％的患者中觀察到了顯著的視力改善(3條ETDRS線)。顯然病史對照組不適于比較。此外，短期隨訪、小樣品尺寸和不同CNV類型(即傳統(tǒng)的、潛隱性的或混合型的CNV的百分比)排除了任何最終的結論或比較。然而，看起來適體-治療的眼在3個月時當然顯示出至少極佳的視力安全性且證明了其它研究的正確性。
概括的說，使用單一玻璃體內注射抗-VEGF適體得到的前期臨床和早期臨床結果極為令人鼓舞。已經(jīng)建立了達3mg/眼的單劑量玻璃體內注射的安全性。
實施例7IB期臨床試驗研究我們在患有AMD繼發(fā)的凹下性(subfoveal)CNV的患者中進行了多中心、開放式標記、3mg/眼的EYE001(抗-VEGF適體)重復劑量的IB期研究，在本研究的眼中視力差于20/100且在對側眼中視力好于或等于20/400。如果3或3位以上的患者發(fā)生劑量限制毒性(DLT′s)，則將劑量減至2mg然后減至1mg，如果必要。計劃治療的患者數(shù)量為20；10位患者使用單獨的抗-VEGF適體且10位患既用抗-VEGF療法又用PDT。在美國選擇11個地點進行本研究。
DLT(s)的定義如果在本研究中的患者發(fā)生下列DLTs中的任意一種，則如上所述減劑量眼部DIT照片評價白內障加速形成通過根據(jù)Wisconsin白內障分級系統(tǒng)采用的與年齡相關的眼病研究(AREDS)晶狀體混濁分級方案確定的1個單位的進展。
臨尿買驗嚴重(使視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)的影像模糊)和視力危兆的臨床明顯炎癥。
通常不會在患有諸如視網(wǎng)膜、動脈這樣AMD或靜脈閉塞、急性視網(wǎng)膜脫落和彌漫性視網(wǎng)膜出血的患者中觀察到的其它眼部異常。
視力視角加倍或惡化(失去≥15個字母)；患者過渡至失去光感(NLP)，他們開始的視力評分低于15個字母，除非因與第2-7天、第30-35天或第58-63天間的注射過程相關的玻璃體出血而導致視力降低。
眼壓測量法盡管進行了藥物干預，但是在兩次單獨的實驗時，來自基線的眼內壓(IOP)增加至≥25mmHg，其中至少有1天間隔或持續(xù)30mmHg的眼內壓1周以上。
熒光素血管造影照片在基線上沒有觀察到顯著的視網(wǎng)膜或脈絡膜血管異常，諸如動靜脈轉換時間上脈絡膜未灌注(影響一個或多個四分體)延緩(超過15秒)；視網(wǎng)膜動脈或靜脈閉塞(從基線的任何偏離)；或在沒有眼內炎癥的情況下影響視網(wǎng)膜循環(huán)的擴散性視網(wǎng)膜通透性改變。
系統(tǒng)性DLTIII級(嚴重)或IV級(危及生命)毒性或研究人員認為與研究藥物相關的任何明顯嚴重的毒性。
選擇標準使用下列包括和排除標準選擇用于本研究的患者包括標準眼標準包括本研究眼的最佳校正的差于ETDRS圖上20/200的視力；對側眼的最佳校正的視力等于或優(yōu)于20/400；具有與年齡相關的黃斑變性繼發(fā)的按尺寸計的小于12的總圓片面積的活動性CNV(傳統(tǒng)和/或潛隱性)的凹下性(subfoveal)脈絡膜新血管形成；清澈的眼介質和足夠的瞳孔擴張以便可能有良好質量的立體鏡眼底照相；且眼內壓為21mmHg或21mmHg以下。一般標準包括男性和女性患者、年齡≥50歲；根據(jù)東方腫瘤合作組織(ECOG)/世界衛(wèi)生組織(WHO)等級的行為狀態(tài)＜2、正常心電圖(ECG)或臨床上無顯著性改變；女性必須使用有效的避孕藥、在進入研究前必須是絕經(jīng)后至少12個月或實施無菌手術；如果不是這樣，則必須在治療前48小時內進行血清妊娠試驗且在治療開始前必須得到結果，在最后劑量的EYE001后應使有效形式的避孕藥生效至少28天；足夠的血液功能血紅蛋白≥10g/dl；血小板計數(shù)≥150×109/L；WBC≥4×109/l；PTT在規(guī)定的正常范圍內；足夠的腎功能血清肌酸酐和BUN在2x正常(ULN)規(guī)定上限的范圍內；足夠的肝功血清膽紅素≤1.5mg/dl；SGOT/ALT、SGPT/AST和堿性磷酸酶在2x規(guī)定的ULN范圍內；以資料形式提供的書面許可；和具有對所有研究回訪的能力。
排除標準如果在研究的眼中或全身存在下面標準中的任意一項，則患者無資格進入本研究患者預定接受或已經(jīng)接受任何現(xiàn)有的用維替泊芬的光動力療法；明顯的介質混濁，包括可能干擾視力、毒性評價或眼底照相的白內障；存在其它原因的脈絡膜新血管形成，包括病理性近視(-8屈光度或更高負值的球形等位癥)、眼組織胞漿菌病綜合癥、血管樣紋、脈絡膜破裂和多灶性脈絡膜炎；可能指示或考慮其它脈絡膜新血管形成激光療法的患者；在進入研究的3個月內進行任何眼內手術；預先進行玻璃體切割術；用另一種除復合維生素和微量元素外的治療AMD的研究活性劑的預先或伴隨療法；用光子或質子對對側眼進行預先照射；已知對血管造影術中所用熒光素染料或對EYE001制劑成分的過敏反應；下述系統(tǒng)性疾病中的任意一種，包括未加控制的糖尿病或存在糖尿病性視網(wǎng)膜??；心臟病在進入研究前12月內發(fā)生的心肌梗死和/或與臨床癥狀相關的冠狀動脈疾病和/或在ECG上注意到的局部缺血適應征；腎功或肝功異常；中風(在進入研究的12個月內)；活動性感染；活動性出血疾?。贿M入研究的1個月內實施任何大手術；進入研究的6個月內出現(xiàn)伴有出血的活動性消化性潰瘍?。挥闷べ|類固醇(例如口服潑尼松)或其它抗血管生成藥(例如沙利度胺)的伴隨系統(tǒng)性療法；預先照射頭頸；對任何疾病在過去的60天內使用研究用活性劑進行任何治療；在過去的5年內任何對癌癥的診斷，不包括基底細胞癌或鱗狀細胞癌。
研究藥物藥物提供將EYE001作為抗-VEGF療法在本研究中使用。EYE001藥物物質是聚乙二醇化的抗-VEGF適體。將它配制成pH 5-7的磷酸緩沖鹽水?？梢约尤霘溲趸c或鹽酸來調節(jié)pH。
將EYE001配制成3種不同濃度3mg/100ul、2mg/100ul和1mg/100ul，將它們包裝在配有27號計量無菌針頭的1ml無菌USP I型刻度玻璃注射器中。該藥物產品不含防腐劑且僅通過玻璃體內注射一次應用。如果出現(xiàn)混濁或顆粒，則不使用該產品。
活性組分為EYE001藥物物質，即(聚乙二醇化的)抗-VEGF適體且濃度為30mg/ml、20mg/ml和10mg/ml。賦形劑為氯化鈉，USP；磷酸一鈉一水合物，USP；磷酸二鈉七水合物，USP；氫氧化鈉，USP；鹽酸，USP；和注射用水，USP。
劑量和給藥制劑。藥物產品為備用的裝入一次應用的玻璃注射器的無菌溶液。在使用前至少30分鐘(不超過4小時)從冷藏儲存中取出注射器以使溶液達到室溫。注射器內含物的給藥包括使條狀塑料活塞桿與注射器桶體內部的橡膠塞子連接。然后取下橡膠頂蓋以便給藥所述產品。
治療方案和期限將EYE001作為100μl玻璃體內注射液在3種情況下間隔28天給藥?；颊叩怯浗邮?mg/注射。如果3位或3位以上的患者發(fā)生劑量限制毒性(DLT′s)，則將劑量減至2mg且進一步減至1mg，如果必要，在其他10位患者中給藥每一劑量。
給藥PDT僅在患有主要為傳統(tǒng)CNV的病例中給藥PDT與EYE001。如ArchOphthalmol 1999，1171329-1345中所述使用給藥PDT的標準要求和步驟。要求在給藥抗-VEGF適體前5-10天給藥PDT。
患者登記在將患者補充入本研究前，獲得書面的公共機構評述委員會(IRB)批準的方案和以資料依據(jù)的書面許可。由地區(qū)研究人員完成病例報告表格的選擇頁。使?jié)M足資格標準并提供了資料形式的書面許可的患者在本研究中登記。
隨訪方案在注射后幾天且再次在下一次注射前1個月以上由眼科醫(yī)師對患者進行臨床評價。在前4個月期間每月測ETDRS視力、進行柯達鉻照相和熒光素血管造影。
終點上述DLT部分給出的安全性參數(shù)是這些研究的初期終點。此外，由研究人員確定的在3個月時具有穩(wěn)定(0線改變或更好)或改善的視力的患者百分比、在3個月時具有3-線或3-線以上改善的患者百分比和需要在3個月時使用PDT重新治療的患者百分比是其它研究的終點。
結果對在本研究中治療的21位患者沒有注意到嚴重的相關不良反應。2位患者發(fā)生嚴重的不相關的不良反應。1位86歲的具有長期外周血管疾病以及臨界性高血壓和II型糖尿病病史的老年婦女發(fā)生2次心肌梗死，其中的第二次是致命的。第一種情況發(fā)生在第一次眼內注射抗-VEGF適體后的11天。第二種情況發(fā)生在第三次和最后一次注射后的16天。急性心肌梗死間隔約2個月發(fā)生。研究人員認為這些情況與適體療法無關且基于藥動學數(shù)據(jù)認為藥物的全身水平可以忽略不計。第2位76歲具有10個月抑郁癥病史的男性在給藥第三次和最后一次劑量的抗-VEGF適體后試圖用吞服對乙酰氨基酚的方式自殺。該患者的精神狀態(tài)改善。對該患者的治療保持不變且該患者目前仍跟隨進行本研究。
表1A-C表示在這些組中報導的不相關或不嚴重的反應。在單獨用抗-VEGF適體治療的患者中，很可能與給藥抗-VEGF適體相關的眼部不良反應包括玻璃體懸浮物(4例)、輕度前房炎癥(3例)、眼刺激(2例)、眼內壓升高(1例)、眼內空氣(1例)、玻璃體混濁(1例)、結膜下出血(1例)、眼痛(1例)、眼瞼水腫/紅斑(1例)、干眼(1例)和結膜充血(1例)。可能與給藥抗-VEGF適體相關的反應包括星形玻璃體退變(1例)、視力異常(1例)和疲勞(1例)。認為與給藥抗-VEGF適體不相關的反應包括頭痛(1例)和虛弱(1例)。在用抗-VEGF適體和PDT治療的患者中，很可能與這種聯(lián)合療法相關的不良反應包括上瞼下垂(5例)、輕度前房炎癥(4例)、角膜擦傷(3例)、眼痛(3例)、異物感(2例)、結膜水腫(1例)、結膜下出血(1例)和玻璃體脫落(1例)。可能與聯(lián)合療法相關的反應包括疲勞(2例)。與聯(lián)合療法不相關的反應包括色素上皮脫離(1例)、關節(jié)痛(1例)、上呼吸道感染(1例)和膀胱感染(1例)。在聯(lián)合療法中觀察到的上瞼下垂和角膜擦傷的增加可能與應用附著透鏡與PDT有關。顯然所有前房炎癥或玻璃體混濁的情況均是輕度的且實際上是短暫的。
表1A.與單獨給藥抗-VEGF適體或抗-VEGF適體與PDT聯(lián)用相關的不良反應
表1B.與單獨給藥抗-VEGF適體相關的不良反應
表1C.與給藥抗-VEGF適體和PDT相關的不良反應
所選擇的2位患者因早產而終止她們參與本研究。1位患者認為她的視力沒有得到改善且不想進一步注射。另1位患者患有抑郁癥和轉運難題。2位患者在進行第三次和最后一次注射適體前撤回了她們的許可。2位患者的視力在參與本研究的整個過程中均保持穩(wěn)定。在最終的隨訪前第3位患者死亡。
對本研究中的任何患者而言均不需要減劑量。這些患者的彩色照片和熒光素血管造影照片的評述顯示沒有視網(wǎng)膜血管或脈絡膜毒性的征候。
在完成單獨抗-VEGF適體的3個月治療方案的那些患者(N＝8)中，87.5％具有穩(wěn)定或改善的視力且25.0％在3個月時的ETDRS圖上具有3-線的視力改善(參見表2)。
表2.用單獨的抗-VEGF適體治療的患有凹下性CNV的患者視力數(shù)據(jù)
3個月時的視力改變
用抗-VEGF適體和PDT治療11位患者。在完成3個月治療方案的該組患者(N＝10)中，90％具有穩(wěn)定或改善的視力且60％在3個月時的ETDRS圖上表現(xiàn)出視力的3-線改善(表3)。這些3-線改善包括+3、+5、+4、+4、+6和+3的視力ETDRS線增加。
表3.用抗-VEGF適體與PDT聯(lián)用治療的患有凹下性CNV的患者視力數(shù)據(jù)
3個月時的視力改變
在沒有表現(xiàn)出獲得3-線的剩余患者中，僅1位患者在3個月時表現(xiàn)出視力下降，而該患者在該時間點處僅失去了1條視力線。在該組中沒有患者在3個月時失去1條以上的視力線。
對參與本研究完整期限中的10只眼中的4只(40％)在3個月時進行重復PDT治療(其需要僅由研究人員決定)。
其它實施方案盡管已經(jīng)參照優(yōu)選實施方案描述了本發(fā)明，但是本領域技術人員易于確定其主要特征且不會脫離本發(fā)明的實質和范圍，可以對本發(fā)明進行各種改變和修改以使其適合于不同的應用和條件。本領域技術人員會認識到能夠僅使用不多的常規(guī)實驗確定與本文所述的本發(fā)明的具體實施方案等同的許多技術方案。這類等同技術方案包括在本發(fā)明的范圍內。
將本說明書中所述的所有公開文獻、專利和專利申請引入本文作為參考。
權利要求
1.患者眼新血管疾病的治療方法，所述的方法包括下列步驟(a)對所述的患者給藥有效量的抗-VEGF適體；和(b)給所述患者提供光線療法。
2.權利要求1所述的方法，其中所述的光線療法包括光動力療法(PDT)。
3.權利要求1所述的方法，其中所述的光線療法包括熱激光光凝術。
4.權利要求1所述的方法，其中所述的新血管疾病選自局部缺血性視網(wǎng)膜病、眼內新血管形成、與年齡相關的黃斑變性、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜缺血、糖尿病性視網(wǎng)膜水腫和增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
5.權利要求4所述的方法，其中所述的新血管疾病是與年齡相關的黃斑變性。
6.權利要求4所述的方法，其中所述的新血管疾病是增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
7.權利要求1所述的方法，其中所述的抗-VEGF適體包括血管內皮生長因子(VEGF)的核酸配體。
8.權利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括核糖核酸。
9.權利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括脫氧核糖核酸。
10.權利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括修飾核苷酸。
11.權利要求10所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括2′F-修飾核苷酸。
12.權利要求11所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括聚(亞烷基)二醇。
13.權利要求11所述的方法，其中所述的聚(亞烷基)二醇是聚乙二醇(PEG)。
14.權利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括核糖核酸和脫氧核糖核酸。
15.權利要求10所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括2′-O-甲基(2′-OMe)修飾核苷酸。
16.權利要求10所述的方法，其中用與未修飾的核酸配體相比降低所述核酸配體上內切核酸酶或外切核酸酶活性的部分修飾所述的VEGF核酸配體，但不會對所述的配體的結合親和性產生不良影響。
17.權利要求16所述的方法，其中所述的部分包括硫代磷酸。
18.權利要求1所述的方法，其中通過注射給藥所述的抗-VEGF適體。
19.權利要求1所述的方法，其中所述的給藥步驟包括將一種裝置導入所述患者眼部，所述的裝置中含有所述的抗-VEGF適體。
20.權利要求19所述的方法，其中所述的裝置通過跨鞏膜擴散轉運所述的抗-VEGF適體至眼部。
21.權利要求19所述的方法，其中所述的裝置將抗-VEGF適體直接轉運入眼的玻璃體液。
22.權利要求2所述的方法，其中所述的光動力療法(PDT)包括下列步驟(i)將光敏劑轉運至所述患者的眼組織；和(ii)使所述的光敏劑接觸具有被所述光敏劑吸收的波長的光，接觸時間和強度足以抑制所述眼組織中的新血管形成。
23.權利要求22所述的方法，其中所述的光敏劑選自苯并卟啉衍生物(BPD)、單天冬氨酰二氫卟酚e6、酞菁鋅、初紅紫素錫、四羥基四苯基卟啉和porfimer sodium(PHOTOFRIN)以及綠卟啉類。
24.權利要求22所述的方法，其中所述的光敏劑是苯并卟啉衍生物。
25.患者眼新血管疾病的治療方法，所述的方法包括對所述患者給藥(a)有效量的抗-VEGF適體；和(b)能夠減少或預防不需要的新脈管系統(tǒng)發(fā)生的第二種化合物。
26.權利要求25所述的方法，其中所述的新血管疾病選自局部缺血性視網(wǎng)膜病、眼內新血管形成、與年齡相關的黃斑變性、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜缺血、糖尿病性視網(wǎng)膜水腫和增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
27.權利要求26所述的方法，其中所述的新血管疾病是與年齡相關的黃斑變性。
28.權利要求27所述的方法，其中所述的新血管疾病是增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
29.權利要求25所述的方法，其中所述的抗-VEGF適體包括血管內皮生長因子(VEGF)的核酸配體。
30.權利要求29所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括核糖核酸。
31.權利要求29所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括脫氧核糖核酸。
32.權利要求29所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括修飾核苷酸。
33.權利要求32所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括2′F-修飾核苷酸。
34.權利要求33所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括聚(亞烷基)二醇。
35.權利要求34所述的方法，其中所述的聚(亞烷基)二醇是聚乙二醇(PEG)。
36.權利要求25所述的方法，其中所述的第二種化合物包括VEGF抗體。
37.權利要求32所述的方法，其中所述的VEGF核酸配體包括2′-O-甲基(2′-OMe)修飾核苷酸。
38.權利要求32所述的方法，其中用與未修飾的核酸配體相比降低所述核酸配體上內切核酸酶或外切核酸酶活性的部分修飾所述的VEGF核酸配體，但不會對所述的配體的結合親和性產生不良影響。
39.權利要求38所述的方法，其中所述的部分包括硫代磷酸。
40.權利要求25所述的方法，其中通過注射給藥所述的抗-VEGF的適體。
41.權利要求25所述的方法，其中所述的給藥步驟包括將一種裝置導入所述患者眼部，所述的裝置中含有所述的抗-VEGF適體。
42.權利要求41所述的方法，其中所述的裝置通過跨鞏膜擴散轉運所述的抗-VEGF適體。
43.權利要求41所述的方法，其中所述的裝置將所述的抗-VEGF適體直接轉運入眼的玻璃體液。
44.患者眼新血管疾病的治療方法，所述的方法包括下列步驟(a)對所述患者給藥有效量的抑制眼新血管形成發(fā)生的抗-VEGF適體；和(b)給所述患者通過破壞眼中異常血管的療法。
45.權利要求44所述的方法，其中所述的適體抑制生長因子。
46.權利要求45所述的方法，其中所述的生長因子是VEGF。
47.權利要求46所述的方法，其中所述的適體是VEGF的核酸配體。
48.權利要求47所述的方法，其中所述的療法是光動力療法(PDT)。
49.患者眼新血管疾病的治療方法，所述的方法包括對所述患者的眼給藥約0.3mg-約3mg的VEGF的修飾核酸配體。
全文摘要
本說明書公開了使用抗－VEGF療法與第二種療法的聯(lián)合療法治療眼新血管疾病的方法，所述的第二種療法抑制眼新血管形成的發(fā)生或破壞眼內的異常血管，諸如光動力療法。
文檔編號A61K39/395GK1582156SQ02821956
公開日2005年2月16日 申請日期2002年11月8日 優(yōu)先權日2001年11月9日
發(fā)明者戴維·R·蓋耶 申請人:眼科技術藥物公司