專利名稱：雙(氰基苯基)甲基－三唑在預(yù)防乳腺癌中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及下式(I)的雙(氰基苯基)甲基-三唑(下文稱“化合物I”)或其可藥用鹽的用途，用于制備藥物組合物，其中所述藥物組合物在哺乳動物中用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病。
化合物I也已知為來曲唑(Letrozole)[國際非專利商標(biāo)名]。
化合物I，在1987年9月16日公開的歐洲專利0236940號，1990年12月18日公開的美國專利4,978,672號和日本專利2018112號中均以本申請人的名義，已經(jīng)進(jìn)行了明確描述。
化合物I最初鑒定為芳香化酶的抑制劑。
芳香化酶是負(fù)責(zé)雌激素合成最后一步的酶復(fù)合體，其將雄激素雄烯二酮和睪酮轉(zhuǎn)化為雌激素雌酮(E1)和雌二醇(E2)。有相當(dāng)多的數(shù)據(jù)顯示雌激素促進(jìn)乳腺癌。越來越多地認(rèn)為女性乳腺自身為雌激素產(chǎn)生的另一個重要部位。乳腺脂肪組織的基質(zhì)細(xì)胞以旁分泌和自分泌這兩種方式產(chǎn)生有生物學(xué)活性的雌激素。這可能是觀察到的在絕經(jīng)后婦女的健康乳房中雌激素濃度比血清中雌激素濃度出乎意料的高(4至6倍)并和絕經(jīng)前婦女健康乳房中雌激素濃度相似的原因。此外，達(dá)70％乳腺癌細(xì)胞顯示由于細(xì)胞內(nèi)芳香化酶表達(dá)而合成雌激素。這解釋了為什么芳香化酶的表達(dá)和活性在乳腺腫瘤中高于腫瘤周圍脂肪，并解釋了為什么芳香化酶的表達(dá)和活性在乳房的荷瘤扇形區(qū)中較沒有腫瘤的乳房高。在合成源抑制雌激素因此是治療乳腺腫瘤合理的靶。
化合物I已經(jīng)已知是一種芳香化酶抑制劑并用于治療乳腺癌。
現(xiàn)在令人驚訝地發(fā)現(xiàn)化合物I具有治療性質(zhì)，使它在哺乳動物中用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病特別有用。這個化合物顯示了消除雌激素介導(dǎo)的引發(fā)乳腺癌的出乎意料的高潛力。特別出乎意料的是這種化合物的較低劑量仍顯示了消除雌激素介導(dǎo)的引發(fā)乳腺癌的高潛力，而不會影響正常生理功能。的確，特別驚訝的是使用對哺乳動物的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響的化合物I的劑量，顯示了消除雌激素介導(dǎo)的引發(fā)乳腺癌的高潛力。
本發(fā)明因此涉及化合物I用于制備藥物組合物的用途，其中所述藥物組合物用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病。
本發(fā)明更特別地涉及化合物I用于制備藥物組合物的用途，其中所述藥物組合物用于抑制婦女，特別是絕經(jīng)后的婦女或易患乳腺癌的婦女乳腺癌的發(fā)展。
本發(fā)明更特別地涉及化合物I用于制備藥物組合物的用途，其中所述藥物組合物用于抑制婦女，特別是絕經(jīng)后的婦女或易患乳腺癌的婦女乳腺癌的發(fā)展，其特征在于化合物I的劑量或日劑量對哺乳動物的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
本發(fā)明更特別地涉及化合物I的用途，其用于制備單位劑型包含0.1至0.3mg，優(yōu)選地包含0.125至0.25mg化合物I的藥物組合物。
本發(fā)明更特別地涉及化合物I的用途，其用于制備單位劑型包含一定量化合物I的藥物組合物，其中所述化合物I的量對哺乳動物的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
在第二個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及化合物I的用途，其用于制備單位劑型包含0.001至0.11mg，優(yōu)選地包含0.001至0.099mg或0.001至0.09mg，最優(yōu)選地包含0.002至0.02mg化合物I的藥物組合物。
又在另一實施方案中，本發(fā)明提供了用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的方法，該方法包括向需要此種治療的哺乳動物施用治療有效量的化合物I或其可藥用鹽。
又在另一實施方案中，本發(fā)明提供了用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的方法，該方法包括向需要此種治療的哺乳動物施用治療有效量的化合物I或其可藥用鹽，其中化合物I的治療有效量對哺乳動物的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
優(yōu)選的哺乳動物為人，特別是絕經(jīng)后的婦女或易患乳腺癌的婦女。
優(yōu)選地，在哺乳動物中該方法使用的化合物I的日劑量較對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病進(jìn)行治療性治療需要的日劑量低8.3至25倍。用比這些疾病的治療性治療所需要的日劑量低10至20倍的劑量得到好的結(jié)果并用10至16.7倍的低劑量得到最好結(jié)果。
優(yōu)選地，該方法用于抑制乳腺癌的發(fā)展。
在一個優(yōu)選的實施方案中，抑制婦女乳腺癌發(fā)展的化合物I的日有效量為0.1至0.3mg，優(yōu)選地為0.125mg至0.25mg，最優(yōu)選地為0.15至0.25mg。
在第二個優(yōu)選的實施方案中，抑制婦女乳腺癌發(fā)展的化合物I的日有效量為0.001至0.11mg，優(yōu)選地為0.001至0.099mg或0.001至0.09mg，最優(yōu)選地為0.002至0.02mg。
在一個最優(yōu)選的實施方案中，抑制婦女乳腺癌發(fā)展的化合物I的日有效量對受治療婦女的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
優(yōu)選地，化合物I向人類受試者施用至少3周以上，其中只在此時間期間的約14.2％天至約42.8％天施用。
優(yōu)選地，化合物I向人類受試者施用3周或更長時間，其間1周施用1次或2次或3次，隔日進(jìn)行。
優(yōu)選地，將周劑量方案進(jìn)行3、4、5、6、7或8周。每個治療期可接著1至3周不施用藥劑，例如2周不施用藥劑。這個循環(huán)重復(fù)進(jìn)行1至幾個循環(huán)，例如從3或4個循環(huán)至8個或更多個循環(huán)。優(yōu)選地，在治療期間，為了對患者的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響，實施該周劑量方案。
在治療的備選方法中，化合物I向人類受試者每周施用7至4次，或在時間期間的約100％天至約50％天隔日施用，即一天一次或兩天一次，施用1至3周，例如2周，接著1至3周不施用藥劑，例如2周不施用藥劑。這個循環(huán)重復(fù)進(jìn)行1至幾個循環(huán)，例如從3或4個循環(huán)至8或更多個循環(huán)。優(yōu)選地，在治療方法中，在治療期間，為了對患者的雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響，實施該周劑量方案。
一個優(yōu)選的實例為每兩天一次施用0.01至0.04mg，優(yōu)選施用0.02mg。第二個優(yōu)選的實例為每天施用0.001至0.004mg，優(yōu)選施用0.002mg。
在本發(fā)明的第三個方面，提供了一種制品，其包括包裝材料和在所述包裝材料中包含的化合物I或其可藥用鹽，其中所述包裝材料包含標(biāo)簽說明書，其中所述標(biāo)簽說明書標(biāo)明了所述化合物I或所述化合物I的可藥用鹽對婦女特別是絕經(jīng)后的婦女遵循一個具體的劑量方案施用從約0.1mg至約0.3mg，優(yōu)選地從約0.125mg至約0.25mg的量，以抑制乳腺癌的發(fā)展。在第二個優(yōu)選的實施方案中，抑制婦女乳腺癌發(fā)展的化合物I的有效量為0.001至0.11mg，優(yōu)選0.001至0.099mg或0.001至0.09mg，最優(yōu)選0.002至0.02mg。
在一個進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明提供了這樣的藥物組合物，其中包含的化合物I的量比用于預(yù)防性治療哺乳動物中對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病需要的日劑量低8.3至25倍。觀察到的最好結(jié)果是比日劑量低10至20倍優(yōu)選低10至16.7倍。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種制品，其包括包裝材料和在所述包裝材料中包含的化合物I或其可藥用鹽，其中所述包裝材料包含標(biāo)簽說明書，其中所述標(biāo)簽說明書標(biāo)明了所述化合物I或所述化合物I的可藥用鹽對婦女特別是絕經(jīng)后的婦女遵循一個具體的劑量方案施用，施用量對雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響，以抑制乳腺癌的發(fā)展。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了單位劑型包含0.1至0.3mg，優(yōu)選0.125至0.25mg化合物I的藥物組合物，用于婦女中對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的預(yù)防性治療。
在一個最優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了包含0.15至0.25mg化合物I的藥物組合物，用于人類對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的預(yù)防性治療。
在第二個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了包含0.001至0.11mg，優(yōu)選0.001至0.099mg或0.001至0.09mg，最優(yōu)選0.002至0.02mg化合物I的藥物組合物，用于人類對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的預(yù)防性治療。
優(yōu)選地，包含0.125至0.3mg或0.002至0.02mg化合物I的藥物組合物用于婦女中乳腺癌的預(yù)防性治療。
在一個最優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了這樣的藥物組合物，其單位劑型包含的化合物I的量對哺乳動物中雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響，所述藥物組合物用于乳腺癌的預(yù)防性治療。
在以前的研究中顯示通過用5μg化合物I/小鼠/天，這個劑量是基于以前動物研究的劑量，我們可完全消除芳香化酶誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生前的變化/腫瘤性變化。然而，所選擇的劑量在這些動物中不僅對消除芳香化酶誘導(dǎo)的惡變前變化非常有效，也影響一些正常的內(nèi)分泌功能?，F(xiàn)在的發(fā)現(xiàn)表明用低劑量的化合物I可消除轉(zhuǎn)基因小鼠中雌激素介導(dǎo)乳腺癌的引發(fā)而不影響正常生理功能。我們的數(shù)據(jù)清楚地表明了化合物I，甚至用如此處所述的較低劑量使用時，在消除芳香化酶誘導(dǎo)的乳腺增生中非常有效。我們的數(shù)據(jù)顯示我們可通過用對子宮和卵巢的組織形態(tài)學(xué)特征無影響的低劑量化合物I(每只動物每天0.25、0.5μg或1μg，優(yōu)選0.25和0.5μg)完全消除芳香化酶誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生前的變化。
這些出乎意料的好結(jié)果是通過如此處所述的試驗中研究化合物I的作用獲得的；
特別地，結(jié)果數(shù)據(jù)顯示我們可通過用低劑量的化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)完全消除芳香化酶誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生前的變化。這些劑量對子宮和卵巢無影響。對照組(12.5pg/ml)和用低劑量化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)處理的個體組間在循環(huán)雌激素水平上(分別為12.1和12.5pg/ml)沒有顯著差異。對照組和用0.5μg化合物I處理的動物間在循環(huán)FSH水平上(200ng/ml)無顯著差異。我們也注意到受治療的動物用低劑量化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)在PCNA和細(xì)胞周期蛋白D1水平上無顯著變化，其中所述PCNA和細(xì)胞周期蛋白D1也是雌激素介導(dǎo)的增生的好標(biāo)志物。這與觀察到的低劑量化合物(每只動物每天0.25或0.5μg)對子宮和卵巢的組織形態(tài)學(xué)特征沒有影響一致。子宮標(biāo)志物乳鐵蛋白的表達(dá)顯示對照與0.25和0.5μg處理的動物間沒有差異。
這些研究表明用非常低濃度的芳香化酶抑制劑可消除轉(zhuǎn)基因小鼠中雌激素介導(dǎo)的乳腺癌的引發(fā)，而不影響子宮和卵巢的正常功能。
血中雌激素和其它激素水平通常用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法)或RIA(放射免疫測定法)進(jìn)行測定，其中所述兩種方法可從多個供應(yīng)商處獲得并為本領(lǐng)域熟知。更敏感和更復(fù)雜并因此不常用的方法為HPLC(高效液相色譜法)或質(zhì)譜法。
因此，顯示化合物I非常適用于預(yù)防哺乳動物中對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病，特別是用比哺乳動物中對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的治療性治療需要的日劑量低8.3至25倍的日劑量。觀察到的最好結(jié)果是用低10至20倍優(yōu)選地用低10至16.7倍的日劑量。
因此，顯示化合物I非常適用于預(yù)防哺乳動物中對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病，特別是用在哺乳動物中對雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響的劑量或日劑量。
此處應(yīng)用的術(shù)語“對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病”包括但不限于乳腺癌。
此用應(yīng)用的術(shù)語“在哺乳動物中對雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響”是指沒有用化合物I治療的患者和用化合物I治療的患者間的雌二醇和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著差異。
此處應(yīng)用的術(shù)語“無顯著影響”是指雌二醇和/或促卵泡激素循環(huán)水平的變化相對于治療前的對照水平不超過15％，優(yōu)選地不超過10％，最優(yōu)選不超過5％。
乳腺癌是婦女，特別是35歲以上婦女的主要醫(yī)學(xué)問題。現(xiàn)在，估計婦女在她們的一生中，9個人中有1個人有發(fā)展這種疾病的可能性。乳腺癌是引起婦女死亡的主要原因，也是引起勞動能力喪失、心理創(chuàng)傷和經(jīng)濟(jì)損失的原因。很多患此病的婦女最終死于它的直接影響或來自其并發(fā)癥的間接影響。
此用應(yīng)用的術(shù)語“治愈性”是指治療哺乳動物中對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的持久性疾病中有效。
在本說明書中，術(shù)語“預(yù)防性”包括治療處于有患病危險或疑似患病的患者，以避免對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)(即抑制乳腺癌的發(fā)展)。
此處應(yīng)用的術(shù)語“抑制乳腺癌的發(fā)展”主要是指抑制正常乳腺細(xì)胞向癌細(xì)胞或惡性細(xì)胞從頭轉(zhuǎn)化的狀況。然而，可能有婦女臨床上在她們的乳房中沒有檢測到癌細(xì)胞的情形，抑制這樣的、迄今臨床上不顯著的癌的發(fā)展也形成本發(fā)明的一部分。治療現(xiàn)存的、臨床上可檢測的乳腺癌不包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
術(shù)語“易患乳腺癌的婦女”涉及與內(nèi)科醫(yī)生公知的一些特定標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)的婦女，其中所述標(biāo)準(zhǔn)如年齡(這時，年齡是主要的可鑒別的危險度因子。超過80％的乳腺癌病例發(fā)生于50歲以上的婦女)、種族、遺傳因素和家族史(所有患乳腺癌的婦女估計10％有該病的強(qiáng)家族史，這常出現(xiàn)在年齡低于50歲的年輕婦女——現(xiàn)在認(rèn)為是基因中已知為BRCA1或BRCA2基因的遺傳突變引起了30％至50％的乳腺癌)、過度暴露于雌二醇(因為乳房組織的生長對雌二醇高度敏感，婦女一生中暴露于雌二醇越多，患乳腺癌的危險性越高)、體格特征、某些乳房異常。
為了證明化合物I特別適用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病、化合物I具有好的治療安全系數(shù)和其它優(yōu)點，可用技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行臨床試驗。
現(xiàn)在應(yīng)用于婦女對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)疾病的治療性治療的化合物I的劑量為每日口服量2.5mg。
用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對抑制雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的化合物I的精確劑量取決于幾個因素，包括宿主、正在被治療的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性及施用方式。然而，當(dāng)化合物I在人中腸胃外施用(檢查優(yōu)選的施用途徑)，如腹膜內(nèi)注射、靜脈內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、瘤內(nèi)注射或直腸施用、或腸內(nèi)施用如口服時，日劑量0.1至0.3mg，優(yōu)選0.125至0.25mg可達(dá)到滿意的預(yù)防。最優(yōu)選在哺乳動物中對雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響的劑量或日劑量。
最優(yōu)選地，化合物I通過劑型如微乳劑、軟凝膠劑或固體分散劑口服施用，劑量為0.1至0.25mg/天，每天最多施用3次。最優(yōu)選在哺乳動物中對雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響的劑量或日劑量。
劑量上限是由副作用所決定并可通過試驗確定正在進(jìn)行治療宿主的劑量上限。
預(yù)防性治療常常是長期治療，因此治療方案應(yīng)適應(yīng)減少體內(nèi)化合物I累積的危險和減少治療起始后幾周可能發(fā)生的隨后肝臟酶升高的危險。所采用的治療方案也應(yīng)避免針對化合物I藥理作用抗性的發(fā)展，或應(yīng)避免對正在治療的宿主藥理作用的降低。
在進(jìn)一步的方面，為了降低上述危險，本發(fā)明涉及這樣的治療方案，其中對至少3周的治療方案，化合物I只在約14.2％天至約42.8％天施用。
備選地，化合物I向人類受試者每周施用7至4次或在時間期間的約100％天至約50％天隔日施用，即一天一次或兩天一次，施用1至3周，例如2周，接著1至3周不施用藥劑，例如2周不施用藥劑。這個循環(huán)重復(fù)1至幾個循環(huán)，例如3或4個循環(huán)至8個循環(huán)。
在所述治療方案或制品中，雙(氰基苯基)甲基-三唑的有效量可以為如于此描述的藥物組合物形式。
化合物I以單位劑型包含0.1至0.3mg，優(yōu)選0.125至0.25mg，最優(yōu)選0.15至0.25mg施用。最優(yōu)選地單位劑型對哺乳動物中雌二醇循環(huán)水平和/或促卵泡激素循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
如此處應(yīng)用的，表達(dá)“周”是指連續(xù)7天。因此3周為從日歷周任何一天開始的連續(xù)21天。施用第一個劑量的那天認(rèn)為是周的第一天。任何用日歷周的討論只用于闡述的目的。
化合物I可與一種或多種可藥用載體組合，并任選地與一種或多種其它常規(guī)的藥用輔劑組合，以片劑、膠囊劑、囊形片劑等的形式腸內(nèi)施用，例如口服，或以無菌可注射溶液或無菌可注射懸液的形式腸胃外施用，例如腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)施用。腸內(nèi)和腸胃外組合物可通過常規(guī)方法制備。
本發(fā)明的輸注液更優(yōu)選為無菌的。這例如通過無菌濾膜過濾易于實現(xiàn)。液體形式的任何組合物的無菌形式、無菌填充小藥瓶和/或本發(fā)明的藥物組合物在無菌條件下與合適的稀釋劑的組合是本領(lǐng)域人員公知的。
化合物I在這些病理中可單獨應(yīng)用或與至少一種其它的藥學(xué)活性化合物組合應(yīng)用。這些活性化合物可組合入同一藥物制劑，或這些活性化合物可為組合制劑“組分包(kit ofb part)”的形式，因為組合的各組分可獨立施用或可通過使用不同的固定組合施用，其中所述不同的固定組合為具有不同量的各組合組分，其中所述的施用即同時施用或在不同的時間點施用。然后組分包的各組分可例如同時施用或時間上錯后地施用，其中所述時間上錯后地施用即對組分包的任一組分在不同時間點并且以相同或不同的時間間隔施用。
此后描述的為有用組合物的兩個非限制性實例。
組合物A制備10000片100mg片劑，每片包含0.2mg活性成分式(I)的雙(氰基苯基)甲基-三唑 2.00g
膠態(tài)二氧化硅 2.00g微晶纖維素 100.00g噴霧干燥的乳糖 836.00g硬脂酸鎂 10.00g羥甲基纖維素鈉 50.00g1000.00g所有片芯的組分混合在一起。一旦獲得均質(zhì)的混合物，就壓成片芯。
組合物B制備10000片100mg片劑，每片包含0.15mg活性成分式(I)的雙(氰基苯基)甲基-三唑 1.5g結(jié)晶乳糖 741.50g微晶纖維素 237.00g膠態(tài)二氧化硅 10.00g硬脂酸鎂 10.00g1000g所有片芯的組分混合在一起。一旦獲得均質(zhì)的混合物，就壓成片芯。
組合物C制備10000片100mg片劑，每片包含0.015mg活性成分式(I)的雙(氰基苯基)甲基-三唑 0.15g結(jié)晶乳糖 742.85g微晶纖維素 237.00g膠態(tài)二氧化硅 10.00g硬脂酸鎂 10.00g1000g所有片芯的組分混合在一起。一旦獲得均質(zhì)的混合物，就壓成片芯。
優(yōu)選的較低劑量片劑可例如包含0.05mg、0.02mg、0.015mg、0.01mg、0.009mg、0.008mg、0.007mg、0.006mg、0.005mg、0.004mg、0.003mg、0.002mg或0.001mg活性成分。
然而，應(yīng)清楚理解它只用作闡述的目的。
本發(fā)明也可與較低劑量的其它芳香化酶抑制劑如，阿那曲唑、醋酸甲地孕酮、伏羅唑、法倔唑、依西美坦(exemestane)、氨魯米特實施。通過代號、屬名或商品名確定的活性劑結(jié)構(gòu)可從標(biāo)準(zhǔn)提綱“Merck索引”的目前版本中或從數(shù)據(jù)庫，例如國際專利(例如IMS國際公開)得到。其相應(yīng)的內(nèi)容在此引用作為參考。
化合物I用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的功效已通過此處提到的藥理試驗進(jìn)行了證明。在較低劑量下該出乎意料的藥理活性也可用臨床研究如通過Harper-Wynne C和col.描述的方法(Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2002 Jul；11(7)614-21)進(jìn)行證實。其相應(yīng)的內(nèi)容在此引用作為參考。
藥理試驗通過以下藥理方法進(jìn)行實施。
這些試驗用來說明本發(fā)明而不以任何方式限制其范圍。
1.過表達(dá)芳香化酶的轉(zhuǎn)基因小鼠和動物的治療雌性芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠在標(biāo)準(zhǔn)群中進(jìn)行維持。小鼠在AAALAC和USDA認(rèn)證的集中動物設(shè)施中飼養(yǎng)并根據(jù)NIH用于實驗動物的照料和應(yīng)用指南制定的方法進(jìn)行維持。乳腺中過表達(dá)芳香化酶的轉(zhuǎn)基因小鼠(以前稱為int-5/芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠)的產(chǎn)生以前進(jìn)行了描述(R.R.Tekmal等人，轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺中int-5/芳香化酶的過表達(dá)誘導(dǎo)增生和核異常，Cancer Res.56(1996)3180-3185)。用Southern印跡分析對所有動物進(jìn)行基因分型并在所有實驗中用年齡一致的非轉(zhuǎn)基因同窩出生小鼠作為對照。
2.乳腺和其它組織的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)評估包含乳房脂肪墊的皮膚在10％中性緩沖福爾馬林中固定至少24小時。然后將乳腺與皮膚分離開并進(jìn)行組織學(xué)檢查(D.Medina，小鼠乳房腫瘤發(fā)生中的瘤前病變，Methods Cancer Res.7(1973)3-53.514)。通過石蠟包埋固定后制備乳房組織、子宮和卵巢的常規(guī)切片，切成5μM，并用H&E染色。為免疫定位芳香化酶的表達(dá)，用芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠和非轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺組織的5μM厚的切片。脫蠟和在二甲苯和乙醇中再水化后，非特異位點通過用含1％正常山羊血清的0.05M Tris-HCl緩沖液中孵育進(jìn)行封閉。倒出試劑后，切片用1∶100稀釋的針對大鼠芳香化酶合成肽的兔多克隆抗體覆蓋(芳香化酶抗體獲自得克薩斯大學(xué)西南醫(yī)學(xué)中心，Dallas，TX；現(xiàn)在在澳大利亞Prince Henry′s Institute，Clayon，Vic.的Dr.EvanSimpson)。樣本在濕盒中4℃孵育過夜。用0.05M Tris-HCl緩沖液洗3次后，載玻片于室溫與堿性磷酸酶連接的二級抗體孵育30分鐘并反復(fù)洗滌，切片與1％堅牢紅/萘酚AS磷酸溶液孵育5分鐘。切片再進(jìn)行洗滌并蓋上蓋玻片，用光學(xué)顯微鏡觀察染色模式。
3.細(xì)胞的制備和特性來自我們芳香化酶群體的芳香化酶轉(zhuǎn)基因雌性小鼠和非轉(zhuǎn)基因雌性同窩出生小鼠為乳腺組織源。乳房上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞按以前描述[B.K.Levay-Young等人，用于乳房生物學(xué)研究的原代培養(yǎng)系統(tǒng)，在D.Medina(編輯)的癌的細(xì)胞與分子生物學(xué)，Plenum Press，New York一書中的第181-204頁(1987)-F.S.Kittrel，C.J.Oborn，D.Medina，來自體內(nèi)小鼠上皮細(xì)胞系的體內(nèi)乳房的副瘤形成的發(fā)展，Cancer Res.52(1992)1924-1932.]進(jìn)行分離。對來自16周齡的處女雌性小鼠的乳腺進(jìn)行解剖，在含有抗生素的無菌磷酸緩沖鹽水中洗滌，用剃刀刀片仔細(xì)切碎，在存在0.15％膠原酶(A型；Boehirnger-Mannhem，Indianapolis，IN)的旋轉(zhuǎn)水浴中37℃分離4小時。
如前述對細(xì)胞懸液進(jìn)行差速離心以獲得上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞。為確定上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的純度，用上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞特異抗體對細(xì)胞類型進(jìn)行免疫組織化學(xué)鑒別。上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞鋪到有孔玻片上并用Bouin’s溶液固定。進(jìn)行細(xì)胞角蛋白和波形纖維蛋白免疫染色?；|(zhì)細(xì)胞被波形纖維蛋白抗體(Zymed)免疫染色但不被細(xì)胞角蛋白抗體免疫染色，這證實了它們的基質(zhì)細(xì)胞表型。上皮細(xì)胞通過細(xì)胞角蛋白抗體(Dako)免疫染色證實了它們的上皮細(xì)胞來源。
4.用芳香化酶抑制劑的治療用年齡(約16-20周齡)的芳香化酶轉(zhuǎn)基因雌性處女小鼠研究芳香化酶抑制劑化合物I的效果，化合物I作為這些小鼠乳腺中誘導(dǎo)腫瘤前和瘤形成變化的化學(xué)預(yù)防性藥劑。在本研究中，年齡一致的轉(zhuǎn)基因雌性小鼠分為四組。一組(n＝10)作為對照組，其它組每天皮下注射化合物I，并為3種不同劑量；每只動物施用在100μl的0.3％羥丙基纖維素(溶于磷酸緩沖鹽水)中的0.25、0.5、1.0μg化合物I。對照動物皮下注射賦形劑。化合物I為Novartis Pharma(Basel，瑞士)的Drs.Ajay Bhatnagar和Dean Evans的贈送。在6周的治療后，去除乳腺并將每組中一個乳腺用于組織學(xué)分析。所有其它乳腺混合然后用于如下描述的生物化學(xué)分析。同乳腺一起，收集子宮和卵巢用于生物化學(xué)和組織學(xué)分析。
5.RNA分析對來自小鼠乳房組織和子宮組織的總RNA進(jìn)行分離，在對組織進(jìn)行勻漿化后，根據(jù)制造商的方法，用Tri試劑(Sigma，St.Louis，MO)進(jìn)行。ER、PR、PCNA、細(xì)胞周期蛋白D1和其它基因的特異表達(dá)通過RT-PCR進(jìn)行驗證，用GeneAmp RNA PCR試劑盒(Perkin-Elmer，F(xiàn)oster City，CA)進(jìn)行。應(yīng)用的特異引物和RT-PCR條件如前述(N.Kirma，K.Gill，U.Mandava，R.R.Tekmal，芳香化酶的過表達(dá)導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺的增生和參與編程性細(xì)胞死亡、細(xì)胞周期、生長和腫瘤抑制功能基因表達(dá)的變化，Cancer Res.，2001，待發(fā)表)。根據(jù)特異mRNA種類的豐度，將70ng-1.0mg總RNA用作反轉(zhuǎn)錄(RT)反應(yīng)混合物的起始模板。RT-PCR產(chǎn)物在溴化乙錠染色的1％瓊脂糖凝膠上進(jìn)行觀察。為證明每個樣本用等量的總RNA用于估計各種基因的表達(dá)，管家基因甘油醛-3磷酸脫氫酶(GAPDH)用作不變的對照。來自瓊脂糖凝膠上溴化乙錠染色的RT-PCR產(chǎn)物用Bio-Rad(Hercules，CA)GS-700圖象光密度儀測得的光密度數(shù)據(jù)用于計算不同組織樣本中多種mRNA表達(dá)水平的相對差異。
6.Western印跡分析為了從對照和化合物I治療的芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺和子宮組織分離蛋白質(zhì)，組織在裂解緩沖液中進(jìn)行勻漿化。來自每個樣本的等量蛋白質(zhì)(60μg)于變性聚丙烯酰胺凝膠上分離并轉(zhuǎn)移到尼龍膜上。抗體的非特異結(jié)合通過用包含0.05％Triton X-100(TBST)和5％脫脂奶粉的Tris-緩沖鹽水(TBS)室溫孵育至少4小時進(jìn)行封閉。然后將膜與各自的一級抗體(肌動蛋白、ER、PR、乳鐵蛋白、PCNA和細(xì)胞周期蛋白D1)于TBST-奶中4℃孵育過夜，通過用種特異(二級抗體)IgG并隨后通過增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光檢測(ECL試劑盒；Amersham Pharmacia Biotech，NJ)和ECL X-射線膠片曝光觀察特異結(jié)合。Western印跡的光密度數(shù)據(jù)(化學(xué)發(fā)光檢測抗體結(jié)合蛋白的X射線顯象)用于計算各個蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。如果需要，管家蛋白肌動蛋白的表達(dá)作為不變的對照用于校正。
7.血清中雌二醇和FSH水平收獲組織前，對來自對照組和化合物I治療組的血液通過直接心臟穿刺進(jìn)行收集。雌二醇的血清濃度用商業(yè)上可獲得的試劑(Diagnostic ProductsCorp.，洛杉磯，CA)通過雙抗體放射免疫分析進(jìn)行測量。用等量的雙份200μl血清，本測定法有較低靈敏度為2.5pg/ml，上限為500pg/ml。從50至200μl增加血清體積的測定產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)曲線平行的替代線。測定內(nèi)和測定間的變異系數(shù)分別平均＜10.0和6.7％，用標(biāo)準(zhǔn)雙抗體放射免疫分析測量FSH水平。獲自NIH激素源獲得的純化FSH用作標(biāo)準(zhǔn)品。比較了平均雌二醇或FSH水平的差異，并用成對學(xué)生t檢驗確定了顯著性。
結(jié)果芳香化酶抑制劑(化合物I)對哺乳動物乳腺、卵巢和子宮中雌激素誘導(dǎo)的增生的影響。
為檢驗芳香化酶抑制劑對轉(zhuǎn)基因小鼠中芳香化酶誘導(dǎo)的腫瘤前/腫瘤性變化是否可完全消除或降低，我們用不同劑量的芳香化酶抑制劑(化合物I)(每只動物每天0.25，0.5，1.0和5g)治療芳香化酶轉(zhuǎn)基因雌性小鼠可完全消除或降低乳房組織中芳香化酶誘導(dǎo)的增生和其它變化。以前研究顯示每只動物每天用5g化合物I(基于腫瘤減小)可完全消除或降低乳房組織中芳香化酶誘導(dǎo)的增生和其它變化。化合物I治療6周后，對對照組和多種濃度化合物I治療的芳香化酶轉(zhuǎn)基因動物的乳腺進(jìn)行了檢查。我們的發(fā)現(xiàn)表明與沒有治療的芳香化酶轉(zhuǎn)基因雌性小鼠相反，用化合物I治療6周的芳香化酶轉(zhuǎn)基因雌性小鼠顯示了在這些動物中芳香化酶過表達(dá)誘導(dǎo)的增生和其它腫瘤前和腫瘤性變化完全降低/消失。這些結(jié)果清楚證實通過芳香化酶過表達(dá)誘導(dǎo)的乳腺增生和其它腫瘤前/腫瘤性變化可通過強(qiáng)效芳香化酶抑制劑如化合物I消除。我們的數(shù)據(jù)顯示我們可通過用低劑量的化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)消除芳香化酶誘導(dǎo)的腫瘤前變化。
不同濃度的化合物I對乳腺、卵巢和子宮組織形態(tài)學(xué)特性的影響。對來自對照和不同濃度化合物I處理的芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺進(jìn)行了組織學(xué)分析。所得數(shù)據(jù)顯示了我們可通過用低劑量的化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)完全消除芳香化酶誘導(dǎo)的腫瘤前變化。這些劑量對子宮和卵巢沒有影響。這些低劑量的化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)對子宮和卵巢的組織形態(tài)學(xué)沒有影響。
化合物I對芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠中雌二醇循環(huán)水平的影響。對照的循環(huán)雌激素水平(12.5pg/ml)和低劑量化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)治療的各組間循環(huán)雌激素水平(分別為12.1和12.5pg/ml)沒有顯著差異。每只動物每天0.5μg劑量的化合物I導(dǎo)致雌二醇循環(huán)水平為2pg/ml。
化合物I對芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠中促卵泡激素的循環(huán)水平的影響。對照和用0.5μg化合物I治療的動物間循環(huán)FSH水平(200ng/ml)沒有顯著差異。對照和用5.0μg化合物I治療組間循環(huán)FSH水平(480ng/ml)的差異非常顯著(成對學(xué)生t檢驗)化合物I對芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠的乳房組織中雌激素受體(ER)、孕酮受體(PR)、細(xì)胞周期蛋白D1和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的蛋白質(zhì)水平的影響。基于肌動蛋白水平校正任何差異后用來自Western印跡的光密度數(shù)據(jù)進(jìn)行圖解表示。與對乳腺增生的降低一致，我們也看到化合物I治療動物的乳房組織中ER、PR的蛋白質(zhì)水平降低。我們也注意到用低劑量的化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)治療動物對PCNA和細(xì)胞周期蛋白D1的水平?jīng)]有顯著變化，其中所述PCNA和細(xì)胞周期蛋白D1也為雌激素介導(dǎo)增生的好標(biāo)志物。用5μg劑量的化合物I，PCNA水平降低了50％。這與觀察到的低劑量化合物I(每只動物每天0.25或0.5μg)對子宮和卵巢的組織形態(tài)學(xué)特性沒有影響一致。
化合物I對芳香化酶轉(zhuǎn)基因小鼠的子宮組織中乳鐵蛋白、ER和PR的蛋白質(zhì)水平的影響。根據(jù)肌動蛋白水平校正任何差異后用來自Western印跡的光密度數(shù)據(jù)進(jìn)行圖解表示。為檢查化合物I治療是否影響這些動物的內(nèi)分泌功能，我們通過Western印跡分析檢驗了子宮中雌激素調(diào)節(jié)下的基因表達(dá)。對照和0.25和0.5μg藥物治療的動物間的子宮標(biāo)志物乳鐵蛋白的表達(dá)顯示沒有差異；然而，觀察到每只動物每天用1.0μg藥物治療的動物乳鐵蛋白表達(dá)比對照降低了1.8倍。發(fā)現(xiàn)治療動物子宮中ER和PR的表達(dá)沒有差異。
權(quán)利要求
1.雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽用于制備藥物組合物的用途，其中所述藥物組合物在哺乳動物中用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，用于抑制婦女乳腺癌的發(fā)展，特別是用于抑制絕經(jīng)后婦女或易患乳腺癌的婦女乳腺癌的發(fā)展。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的劑量對哺乳動物中雌二醇的循環(huán)水平和/或促卵泡激素的循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
4.在哺乳動物中預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病的方法，其包括向需要此種治療的哺乳動物施用治療有效量的雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中哺乳動物為人，特別是絕經(jīng)后的婦女或易患乳腺癌的婦女。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5的方法，用于抑制乳腺癌的發(fā)展。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或6的方法，其中在哺乳動物中雙(氰基苯基)甲基-三唑的日劑量比預(yù)防性治療對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病所需要的日劑量低8.3至25倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中雙(氰基苯基)甲基-三唑的日劑量比預(yù)防性治療此類疾病所需要的日劑量低10至20倍，優(yōu)選地低10至16.7倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項所述的方法，其中用于抑制婦女乳腺癌發(fā)展的雙(氰基苯基)甲基-三唑的日有效量為0.1至0.3mg，優(yōu)選地為0.125mg至0.25mg，最優(yōu)選地為0.15mg至0.25mg的雙(氰基苯基)甲基-三唑。
10.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項所述的方法，其中用于抑制婦女乳腺癌發(fā)展的雙(氰基苯基)甲基-三唑的日有效量為0.001至0.099mg，優(yōu)選地為0.002mg至0.02mg的雙(氰基苯基)甲基-三唑。
11.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項所述的方法，其中雙(氰基苯基)甲基-三唑的日劑量對哺乳動物中雌二醇的循環(huán)水平和/或促卵泡激素的循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
12.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項所述的方法，其中將治療有效量的雙(氰基苯基)甲基-三唑向人類受試者施用至少3周，其中只在此時間期間的約14.2％天至約42.8％天施用。
13.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項所述的方法，其中將治療有效量的雙(氰基苯基)甲基-三唑向人類受試者施用3周或更長期間，其間每周施用1至3次，隔日進(jìn)行。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中將周劑量方案實施3、4、5、6、7或8周。
15.根據(jù)權(quán)利要求12至14中任意一項所述的方法，其中治療期之后接著1至3周不施用藥劑的期間，并將此循環(huán)重復(fù)進(jìn)行1至幾個循環(huán)。
16.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項所述的方法，其中將治療有效量的雙(氰基苯基)甲基-三唑向人類受試者每周施用7至4次，或在此時間期間的約100％天至約50％天施用，施用1至3周，接著1至3周不施用藥劑，并將此循環(huán)重復(fù)進(jìn)行1至幾個循環(huán)。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中將治療有效量的雙(氰基苯基)甲基-三唑向人類受試者每天施用一次或每兩天施用一次。
18.根據(jù)權(quán)利要求12至16中任意一項所述的方法，其中治療有效量的雙(氰基苯基)甲基-三唑?qū)Σ溉閯游镏写贫嫉难h(huán)水平和/或促卵泡激素的循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
19.根據(jù)權(quán)利要求12至16中任意一項所述的方法，其中用于抑制婦女乳腺癌發(fā)展的雙(氰基苯基)甲基-三唑的有效量為0.1至0.3mg，優(yōu)選地為0.125mg至0.25mg，最優(yōu)選地為0.15mg至0.25mg的雙(氰基苯基)甲基-三唑。
20.在單位劑型中包含一定量雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的藥物組合物，其中所述雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的量比在哺乳動物中預(yù)防性治療對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病所需要的日劑量低5至20倍。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的藥物組合物，其中雙(氰基苯基)甲基-三唑的量比在哺乳動物中預(yù)防性治療對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病所需要的日劑量低8.3至25倍，優(yōu)選地低10至20倍，且最優(yōu)選地低10至16.7倍。
22.藥物組合物，其在根據(jù)權(quán)利要求20的單位劑型中包含0.1mg至0.3mg，優(yōu)選地包含0.125mg至0.25mg，最優(yōu)選地包含0.15mg至0.25mg的雙(氰基苯基)甲基-三唑。
23.在單位劑型中包含一定量雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的藥物組合物，其特征在于雙(氰基苯基)甲基-三唑的量對哺乳動物中雌二醇的循環(huán)水平和/或促卵泡激素的循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響。
24.在單位劑型中包含一定量雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的藥物組合物，其特征在于該活性成分的量為0.001至0.099mg，優(yōu)選地為0.002至0.02mg的雙(氰基苯基)甲基-三唑，用于在哺乳動物中預(yù)防性治療對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病。
25.根據(jù)權(quán)利要求20至24中任意一項所述的藥物組合物，用于婦女乳腺癌的預(yù)防性治療。
26.包含包裝材料和在所述包裝材料中含有雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的制品，其中所述包裝材料包含標(biāo)簽說明書，所述標(biāo)簽說明書標(biāo)明了所述雙(氰基苯基)甲基-三唑或雙(氰基苯基)甲基-三唑的可藥用鹽將遵循一個特定的劑量方案施用于婦女，優(yōu)選地施用于絕經(jīng)后的婦女或易患乳腺癌的婦女，其施用量為從約0.1mg至約0.3mg，優(yōu)選地施用量為從約0.125mg至約0.25mg，以抑制乳腺癌的發(fā)展。
27.包含包裝材料和在所述包裝材料中含有雙(氰基苯基)甲基-三唑或其可藥用鹽的制品，其中所述包裝材料包含標(biāo)簽說明書，所述標(biāo)簽說明書標(biāo)明了所述雙(氰基苯基)甲基-三唑或雙(氰基苯基)甲基-三唑的可藥用鹽將遵循一個特定的劑量方案施用于婦女，優(yōu)選地施用于絕經(jīng)后的婦女或易患乳腺癌的婦女，其施用量為對哺乳動物中雌二醇的循環(huán)水平和/或促卵泡激素的循環(huán)水平?jīng)]有顯著影響，以抑制乳腺癌的發(fā)展。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的制品，其中雙(氰基苯基)甲基-三唑的有效量為如權(quán)利要求20至24中所述的藥物組合物形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及較低劑量下式(I)的雙(氰基苯基)甲基－三唑或其可藥用鹽的用途，用于制備藥物組合物，其中所述藥物組合物在哺乳動物中用于預(yù)防對芳香化酶抑制和對雌激素生物合成的抑制起反應(yīng)的疾病，特別是乳腺癌。
文檔編號A61K31/4196GK1602302SQ02824842
公開日2005年3月30日 申請日期2002年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月11日
發(fā)明者R·R·泰克默 申請人:埃默里大學(xué)