專(zhuān)利名稱(chēng)：作為雌激素制劑的取代的6H－二苯并[c,h]色烯的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用作雌激素制劑的取代的6H-二苯并[c，h]色烯(苯并吡喃)。
背景技術(shù)：
雌激素在哺乳動(dòng)物組織的多效性已有文獻(xiàn)報(bào)道，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)雌激素可以影響許多器官系統(tǒng)[Mendelsohn和Karas，New England Journal ofMedicine 3401801-1811(1999)，Epperson等，Psychosomatic Medicine 61676-697(1999)，Crandall，Journal of Womens Health & Gender BasedMedicine 81155-1166(1999)，Monk和Brodaty，Dementia & GeriatricCognitive Disorders 111-10(2000)，Hurn和Macrae，Journal of CerebralBlood Flow & Metabolism 20631-652(2000)，Calvin，Maturitas 34195-210(2000)，F(xiàn)inking等，Zeitschrift fur Kardiologie 89442-453(2000)，Brincat，Maturitas 35107-117(2000)，Al-Azzawi，Postgraduate MedicalJournal 77292-304(2001)]。雌激素對(duì)組織發(fā)揮作用的方式有數(shù)種，其中最具特征的是其與雌激素受體相互作用，導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的改變。雌激素受體是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，屬于核激素受體超家族。該家族的其他成員包括孕酮、雄激素、糖皮質(zhì)激素以及鹽皮質(zhì)激素受體。與配體結(jié)合后，這些受體二聚化并激活基因轉(zhuǎn)錄，激活基因轉(zhuǎn)錄的方式有直接結(jié)合于DNA上的特異序列(應(yīng)答元件)或與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用(如AP1)，后者直接與DNA上的特異序列相結(jié)合[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等，Journal of Biological Chemistry27636869-36872(2001)，McDonnell，Principles Of Molecular Regulation.p351-361(2000)]。一類(lèi)“共調(diào)節(jié)蛋白”也可以與配體-結(jié)合受體相互作用，進(jìn)一步調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性[McKenna等，Endocrine Reviews 20321-344(1999)]。已表明，雌激素受體能以配體依賴和非依賴的方式[Quaedackers等，Endocrinology 1421156-1166(2001)，Bhat等，Journal of SteroidBiochemistry & Molecular Biology 67233-240(1998)，Pelzer，等，Biochemical & Biophysical Research Communications 2861153-7(2001)]抑制NFκB-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄。
雌激素受體也可以通過(guò)磷酸化激活。這種磷酸化通過(guò)生長(zhǎng)因子如EGF的介導(dǎo)，在配體缺失的情況下，引起基因轉(zhuǎn)錄的改變[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等，Journal ofBiological Chemistry 27636869-36872(2001)]。
雌激素影響細(xì)胞的另一種不太特異的方式是通過(guò)所謂的膜受體。此種受體的存在是有爭(zhēng)議的，但已報(bào)道雌激素能從細(xì)胞激發(fā)非?？焖俚姆腔蚪M應(yīng)答。轉(zhuǎn)導(dǎo)這些效應(yīng)的分子本質(zhì)還不清楚，但有證據(jù)表明其至少與雌激素受體的核形式相關(guān)[Levin，Journal of Applied Physiology911860-1867(2001)，Levin，Trends in Endocrinology & Metabolism 10374-377(1999)]。
到目前為止已發(fā)現(xiàn)兩種雌激素受體。第一種雌激素受體在15年前被克隆，稱(chēng)為ERα[Green等，Nature 320134-9(1986)]。第二種受體發(fā)現(xiàn)較晚，稱(chēng)為ERβ[Kuiper等，Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America 935925-5930(1996)]。針對(duì)ERβ的前期工作主要集中在定義其對(duì)各種配體的親合性，發(fā)現(xiàn)它與ERα有所不同。已繪出ERβ的嚙齒類(lèi)動(dòng)物組織分布圖，與ERα不太一致。一些組織如小鼠和大鼠的子宮ERα的表達(dá)占優(yōu)勢(shì)，而小鼠和大鼠的肺組織則ERβ的表達(dá)占優(yōu)勢(shì)[Couse等，Endocrinology 1384613-4621(1997)，Kuiper等，Endocrinology 138863-870(1997)]。即使在同一器官，ERα和ERβ的表達(dá)也會(huì)區(qū)室化。例如，在小鼠的卵巢，ERβ在顆粒細(xì)胞高表達(dá)，而ERα則局限于膜和間充質(zhì)細(xì)胞[Sar和Welsch，Endocrinology140963-971(1999)，F(xiàn)itzpatrick等，Endocrinology 1402581-2591(1999)]。然而，有證據(jù)表明受體可以共表達(dá)，ERα和ERβ可以形成異源二聚體[Cowley等，Journal of Biological Chemistry 27219858-19862(1997)]。
已描述有大量的化合物可以模擬或阻斷17β-雌二醇。具有與效力最強(qiáng)的內(nèi)源雌激素17β-雌二醇大概相同的生物學(xué)效應(yīng)的化合物被稱(chēng)為“雌激素受體激動(dòng)劑”。當(dāng)與17β-雌二醇組合時(shí)，會(huì)阻斷其效應(yīng)的化合物稱(chēng)為“雌激素受體拮抗劑”。實(shí)際上，在雌激素受體激動(dòng)劑與拮抗劑活性之間存在連續(xù)區(qū)，一些化合物在一些組織作為雌激素受體激動(dòng)劑，在另一些組織作為雌激素受體拮抗劑。這些具有混合活性的化合物稱(chēng)為選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMS)，在治療上非常有用(如EVISTA)[McDonnell，Journal of the Society for GynecologicInvestigation 7S10-S15(2000)，Goldstein等，Human Reproduction Update6212-224(2000)]。為什么同樣的化合物具有細(xì)胞特異的效果，原因還不清楚，但可能是由于受體構(gòu)象和/或共調(diào)節(jié)蛋白環(huán)境的不同。
知曉雌激素受體與配體結(jié)合時(shí)采取不同的構(gòu)象已有一段時(shí)間，但最近才揭示這種改變的結(jié)果和微妙差異。通過(guò)與各種配體共結(jié)晶，將ERα和ERβ的三維結(jié)構(gòu)溶解，明確表明在雄激素受體拮抗劑(空間上抑制受體-共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用所需要的蛋白序列)存在下的螺旋12的重新定位[Pike等，Embo 184608-4618(1999)，Shiau，等，Cell 95927-937(1998)]。而且，已用噬菌體展示技術(shù)來(lái)識(shí)別不同配體存在下，與雌激素受體相互作用的多肽[Paige等，Proceedings ofthe National Academyof Sciences of the United States of America 963999-4004(1999)]。例如，已識(shí)別出一種多肽可以區(qū)別ERα與全雌激素受體激動(dòng)劑17β-雌二醇和二乙基己烯雌酚的結(jié)合。另一種肽可以區(qū)別氯芷酚與ERα和ERβ的結(jié)合。這些數(shù)據(jù)表明每種配體將受體置于獨(dú)特的無(wú)法預(yù)測(cè)的構(gòu)象，可能具有不同的生物活性。
如上所述，雌激素影響多種生物過(guò)程。而且，在提及性別差異時(shí)(如疾病的發(fā)病率、對(duì)壓力的反應(yīng)等)，其解釋很可能涉及性別之間的雌激素水平差異。
發(fā)明描述本發(fā)明提供有如下結(jié)構(gòu)的式I的雌激素化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽
式中R1和R2各自獨(dú)立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C1-6烷氧基、或鹵素；其中，R1或R2的烷基或烯基片段可以任選地有羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；先決條件是R1或R2中至少一個(gè)是羥基；R3、R4、R5、R6、和R7各自獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、-CN、C2-7烯基、C2-7炔基、-CHO、苯基、或者一個(gè)有1～4個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5員或6員雜環(huán)式環(huán)；其中，R4、R5、R6、或R7中的烷基或烯基片段可以任選地有羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；其中，R4或R5的苯基片段可以任選地有選自下列的相同或不同取代基的一、二、或三取代C1-6烷基、C2-7烯基、鹵素、羥基、C1-6烷氧基、-CN、-NO2、氨基、C1-6烷基氨基、每個(gè)烷基1-6個(gè)碳原子的二烷基氨基、硫、C1-6烷硫基、C1-6烷亞磺酰基、C1-6烷磺?；?、C2-7烷氧羰基、C2-7烷羰基、或苯甲?；?。
當(dāng)本發(fā)明化合物含有堿性片段時(shí)，醫(yī)藥上可接受的鹽可以從下列有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸生成例如，乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來(lái)酸、丙二酸、扁桃酸、蘋(píng)果酸、鄰苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸、和類(lèi)似已知可接受酸。當(dāng)本發(fā)明化合物含有酸性片段時(shí)，也可以從有機(jī)堿和無(wú)機(jī)堿生成鹽，例如堿金屬鹽(如鈉鹽、鋰鹽、或鉀鹽)、堿土金屬鹽、銨鹽、含有1～6個(gè)碳原子的烷銨鹽、每個(gè)烷基中含有1～6個(gè)碳原子的二烷銨鹽、和每個(gè)烷基中含有1～6個(gè)碳原子的三烷銨鹽。
烷基和烯基這些術(shù)語(yǔ)，作為一種基團(tuán)或一種基的組成部分(例如烷氧基、烷硫基、烷羰基)，分別包括例如C1-6和C2-7的枝化片段和直鏈片段兩種。實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、丁基、異丙基、仲丁基、叔丁基、乙烯基、烯丙基、1-甲基乙烯基等。當(dāng)烷基片段或烯基片段有取代時(shí)，它們可以典型地有一取代、二取代、三取代或全取代。鹵素取代基的實(shí)例包括1-溴乙烯基、1-氟乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。鹵素這一術(shù)語(yǔ)包括溴、氯、氟、和碘。
較好的5～6員雜環(huán)式環(huán)包括呋喃、噻吩、吡咯、異吡咯、吡唑、咪唑、三唑、二硫雜環(huán)戊二烯、氧硫雜環(huán)戊二烯、異噁唑、噁唑、噻唑、異噻唑、噁二唑、呋咱、噁三唑、二噁唑、噁噻唑、四唑、吡喃、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、噁嗪、噁噻嗪、或噁二嗪。更好的是，該雜環(huán)式環(huán)是呋喃或噻吩。
按照本發(fā)明使用的“提供”這一術(shù)語(yǔ)，就提供本發(fā)明所涵蓋的化合物或物質(zhì)而言，是指要么直接給藥這樣一種化合物或物質(zhì)，要么給藥一種能在體內(nèi)形成有效量該化合物或物質(zhì)的藥物前體、衍生物、或類(lèi)似物。
在一些實(shí)施方案中，R6和R7各自獨(dú)立地是氫或鹵素，例如R6是氫或氟。
R4和R5可以例如各自獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、C2-7烯基、-CN、呋喃基和噻吩基。在一些實(shí)施方案中，R4不是氫，例如，R4諸如選自氰基、氯、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙烯基、噻吩-2-基和噻吩-3-基。
R5的實(shí)例是氫和鹵素例如氯。
R2和R3的實(shí)例各自獨(dú)立地是氫、鹵素例如氯、或羥基。
R1的實(shí)例是氫、羥基和鹵素例如氯。
在一些實(shí)施方案中，R1和R2中只有一個(gè)是羥基。
R3的實(shí)例是諸如4-位上的氫和鹵素例如氯。
在本發(fā)明化合物中，較好的是R6和R7各自獨(dú)立地是氫或鹵素；且R4和R5各自獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、C2-7烯基、-CN、呋喃基、或噻吩基。更好的是，R1、R2、和R3各自獨(dú)立地是氫、鹵素、或羥基；甚至更好的是R4不是氫。
也提供的是本發(fā)明化合物的制備方法。因此，本發(fā)明提供一種式I化合物制備方法，該方法包含下列之一
a)使式II化合物脫烷基化 式中R是一個(gè)C1-6烷基且R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7同本文中定義，給出式I化合物；或b)使式III化合物脫酰基化 式中R′是一個(gè)?；鏑2-7鏈烷?；缫阴；?，R11是R1或一個(gè)酰氧基例如C2-7鏈烷?；缫阴；?，R12是R2或一個(gè)酰氧基例如C2-7鏈烷?；缫阴；?，且R3、R4、R5、R6、R7同本文中定義，給出對(duì)應(yīng)的式I化合物；或c)使必要時(shí)有保護(hù)的式IV的12-溴化合物
式中R1、R2、R3、R5、R6和R7同本文中定義，與下式的適當(dāng)反應(yīng)性衍生物反應(yīng)R4-L式中R4是C1-6烷基、C2-7烯基、或者有1～4個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5員或6員雜環(huán)式環(huán)，且式中L是一個(gè)適當(dāng)離去基團(tuán)，例如L是一種硼酸(例如丁基硼酸或2-噻吩硼酸)或丁基錫衍生物(例如烯丙基三丁基錫)；并脫除任何保護(hù)基團(tuán)，給出對(duì)應(yīng)的式(I)化合物；或d)將上述定義的、必要時(shí)有保護(hù)的、且式中R1、R2、R3、R4和R5中至少一個(gè)是氫的式I化合物 用一種鹵化劑例如N-溴琥珀酰亞胺、N-氯琥珀酰亞胺鹵化，必要時(shí)隨后脫保護(hù)，給出一種式中R1、R2、R3和R4中至少一個(gè)是鹵素的式I化合物；或e)將上述定義的、必要時(shí)有保護(hù)的、且式中R4是溴的式I化合物
用一種腈化劑例如氰化鋅腈化(即導(dǎo)入CN)，必要時(shí)隨后脫保護(hù)，給出一種式中R4是氰基的式I化合物；或f)使一種堿性的式I化合物轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接受的鹽，或反之亦然。
本發(fā)明化合物制備中使用的試劑要么可以是商業(yè)上可得的，要么可以用文獻(xiàn)上描述的標(biāo)準(zhǔn)程序制備。在本文中所述的任何反應(yīng)中，反應(yīng)性取代基基團(tuán)或部位可以在所進(jìn)行的反應(yīng)之前加以保護(hù)并在其后脫除保護(hù)基。
在式中R1和R2中任意一個(gè)也是烷氧基的以上方法a)中，這個(gè)基團(tuán)可以在相同反應(yīng)中脫烷基化，給出一種式中R1和/或R2是羥基的對(duì)應(yīng)式I化合物。
在以下方案1-10中描述了按照以上方法的本發(fā)明的若干代表性
方案2
方案3 方案4
方案5 方案6
方案7 方案8
方案10
可以很容易的用標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)待測(cè)化合物的活性概況。以下簡(jiǎn)述一些代表性的實(shí)驗(yàn)方法，也包括本發(fā)明代表化合物的數(shù)據(jù)?？梢杂酶鞣N分析方法(除外放射配體結(jié)合分析)檢測(cè)化合物的雌激素受體激動(dòng)劑以及拮抗劑活性。通常，雌激素受體激動(dòng)劑活性通過(guò)與參照雌激素(例如17β-雌二醇、17α-乙炔，17β雌二醇、雌酮、二乙基己烯雌酚等)對(duì)比來(lái)檢測(cè)。雌激素受體拮抗劑活性檢測(cè)的方式通常是，將待測(cè)化合物與參照雌激素一起處理的結(jié)果與參照雌激素單獨(dú)處理的結(jié)果相對(duì)比。SERMs的標(biāo)準(zhǔn)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法在US Patent 4,418,068以及5,998,402中有提供，此處引用作為參考。
ERα和ERβ的結(jié)合親合力評(píng)價(jià)用常規(guī)的放射配體結(jié)合分析方法，對(duì)本發(fā)明的代表性實(shí)例與17β-雌二醇競(jìng)爭(zhēng)ERα和ERβ的能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。該實(shí)驗(yàn)可以來(lái)檢測(cè)對(duì)ERα和ERβ受體的相對(duì)結(jié)合親和力。所用方法簡(jiǎn)述如下。
用于結(jié)合選擇性特征分析的受體提取物的制備。以全長(zhǎng)cDNA為模板，用含有適當(dāng)限制性位點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR，得到配體結(jié)合域(此處為方便將其定義為DNA結(jié)合域下游的所有序列)，其中的引物使所擴(kuò)增片段適于亞克隆，同時(shí)保持正確的表達(dá)讀碼框。這些模板包含人ERα的M250-V595[Green等，Nature 320134-9(1986)]以及人ERβ的M214-V530[Ogawa等，Biochemical&Biophysical Research Communicat ions243122-6(1998)]。將人ERβ克隆入pET15b，產(chǎn)生帶有C-末端標(biāo)簽的Nco1-BamH1片段。人ERα的克隆方法與ERβ相同，只是在其N(xiāo)-末端加了His標(biāo)簽。所有構(gòu)建體的序列均通過(guò)雙鏈的完整測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。
BL21(DE3)細(xì)胞用于表達(dá)人蛋白。通常，將10ml的過(guò)夜培養(yǎng)物接種于1L含100μg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中。37℃培養(yǎng)過(guò)夜后，加入終濃度為1mM的IPTG，繼續(xù)在25℃培養(yǎng)2小時(shí)。然后，通過(guò)離心收集細(xì)胞(1500×g)，沉淀用100mL 50mM Tris-CI(pH7.4)，150mMNaCI洗滌并重懸。細(xì)胞通過(guò)French壓力12000psi兩次而裂解。裂解物通過(guò)在4℃ 12,000×g離心30min而變澄清，然后貯存于-70℃。
提取物的特異[3H]-雌二醇結(jié)合評(píng)價(jià)。添加有1mM EDTA的Dulbecco’s磷酸緩沖鹽(Gibco，1×終濃度)作為分析緩沖液。為優(yōu)化分析中使用的受體量，將3H-17β雌二醇(New England Nuclear；終濃度＝2nM)±0.6μM二乙基己烯雌酚和100μL各種稀釋度的E.Coli裂解物加入高結(jié)合遮蓋微量滴定板(EG & G Wallac)。最終的分析體積是120μL并且DMSO的濃度≤1％。室溫孵育5-18小時(shí)后，吸出未結(jié)合的物質(zhì)，然后用大約300μL的分析緩沖液洗板3次。洗滌后，加入135μL的閃爍雞尾酒((Optiphase Supermix，EG & G Wallac)，將板封閉，振動(dòng)至少5分鐘，使閃爍液與殘留的洗液混合。最后，用液體閃爍計(jì)數(shù)儀分析結(jié)合的放射活性(EG & G Wallac Microbeta Plus)。
在確定能提供最大特異結(jié)合的每一受體制備物的稀釋度后，通過(guò)用受體制備物的各種稀釋液評(píng)價(jià)未標(biāo)記的17β-雌二醇的IC50，進(jìn)一步優(yōu)化分析。每種受體制備物的最終的工作稀釋度選定為其對(duì)未標(biāo)記的17β-雌二醇的IC50是2-4nM。
配體結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)。待測(cè)化合物先溶解于DMSO，結(jié)合分析中DMSO的終濃度≤1％。每種待測(cè)化合物的8個(gè)稀釋度作為3H-17β雌二醇的未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)劑。通常，同時(shí)檢測(cè)對(duì)人ERα和ERβ的一組化合物稀釋度。結(jié)果通過(guò)DPM對(duì)待測(cè)化合物濃度的圖來(lái)表示。為了對(duì)劑量應(yīng)答曲線進(jìn)行擬合，將4個(gè)參數(shù)的邏輯模型對(duì)轉(zhuǎn)化的加權(quán)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，IC50定義為使最大的3H-雌二醇結(jié)合降低50％的化合物濃度。
本發(fā)明代表性實(shí)例對(duì)ERα和ERβ的結(jié)合親合力(通過(guò)IC50檢測(cè))如表(1)所示。

上述標(biāo)準(zhǔn)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果表明本發(fā)明的化合物能與雌激素受體的兩種亞型結(jié)合。IC50s通常低于ERβ的IC50，表明這些化合物優(yōu)選是ERβ選擇性配體，但仍對(duì)ERα有活性。本發(fā)明的化合物基于，至少部分，其受體親合性選擇圖譜，表現(xiàn)出一定范圍的活性。由于本發(fā)明的化合物與ER-β結(jié)合的親合力高于與ER-α的親合力，所以可以用于治療或抑制可以通過(guò)ER-β調(diào)節(jié)的疾病。另外，由于每種受體-配體復(fù)合物是獨(dú)特的，所以其與各種共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用也是獨(dú)特的，本發(fā)明的化合物依賴于細(xì)胞環(huán)境，會(huì)表現(xiàn)出不同的預(yù)料不到的活性。例如，很有可能，在一些細(xì)胞類(lèi)型，化合物作為雌激素受體激動(dòng)劑而在另一些組織作為雌激素受體拮抗劑。具有此活性的化合物有時(shí)被稱(chēng)為SERMs(選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑)。然而，與許多雌激素不同，許多SERMs不引起子宮濕重的增加。這些化合物在子宮是抗雌激素的，能完全拮抗雌激素受體激動(dòng)劑在子宮組織的營(yíng)養(yǎng)效應(yīng)。然而，這些化合物在骨組織、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)作為雌激素受體激動(dòng)劑。由于這些化合物的組織選擇性，所以可以用于治療或抑制哺乳動(dòng)物疾病或綜合征，這些疾病和綜合征由雌激素缺乏(在一些組織如骨或心血管)或過(guò)量(在子宮或哺乳動(dòng)物腺體)引起。而且，本發(fā)明的化合物還有在一種受體型表現(xiàn)為雌激素受體激動(dòng)劑而在另一種受體型表現(xiàn)為雌激素受體拮抗劑的特性。例如，已表明化合物可以通過(guò)ERβ拮抗17β-雌二醇的作用，而通過(guò)ERα表現(xiàn)雌激素受體激動(dòng)劑的作用[Sun等，Endocrinology 140800-804(1999)]。這樣的ERSAA(雌激素受體選擇性激動(dòng)劑拮抗劑)活性在該系列化合物中表現(xiàn)出藥代動(dòng)力學(xué)不同的雌激素活性。
金屬硫蛋白IImRNA的調(diào)節(jié)如Harris[Endocrinology 142645-652(2001)]所述，雌激素在Saos-2細(xì)胞通過(guò)ERβ而非ERα上調(diào)金屬硫蛋白IImRNA?？梢詫纳鲜鰧?shí)驗(yàn)得到的結(jié)果與下述實(shí)驗(yàn)結(jié)果(ERE報(bào)告實(shí)驗(yàn)方法)相結(jié)合而產(chǎn)生本發(fā)明化合物的選擇性圖譜(還參見(jiàn)WO 00/37681)。
在MCF-7乳腺癌細(xì)胞用ERE-報(bào)告實(shí)驗(yàn)方法來(lái)評(píng)價(jià)待測(cè)化合物待測(cè)化合物的貯存液(通常0.1M)用DMSO制備，然后用DMSO稀釋10-100倍，制備1或10mM的工作溶液。DMSO貯存液貯存于4℃(0.1M)或-20℃(＜0.1M)。MCF-7細(xì)胞用生長(zhǎng)培養(yǎng)基[含10％(v/v)熱滅活胎牛血清、1％(v/v)青-鏈霉素以及2mM glutaMax-1的D-MEM/F-12]傳代，一周兩次。將細(xì)胞置于通氣的瓶中，在5％CO2/濕度為95％的孵箱中37℃培養(yǎng)。治療前一天，細(xì)胞按照25,000細(xì)胞/孔置于有生長(zhǎng)培養(yǎng)基的96孔板，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。
細(xì)胞用50μl/孔1∶10稀釋的腺病毒5-ERE-tk-熒光素酶在實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基[含10％(v/v)熱滅活胎牛血清、1％(v/v)青-鏈霉素、2mMglutaMax-1以及1mM的丙酮酸鈉的無(wú)酚紅的D-MEM/F-12]中感染2hr。然后用150μl的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基洗滌一次。最后，細(xì)胞用150μl/孔的載體(≤0.1％ v/v DMSO)或化合物處理，每次處理8孔的復(fù)孔，化合物稀釋≥1,000倍，加入實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)24hr。
待測(cè)化合物單獨(dú)或與0.1nM的17β-雌二醇組合(EC80；雌激素受體拮抗劑模式)的起始篩選在1μM的單劑量下進(jìn)行。每個(gè)96孔板還包含一個(gè)載體對(duì)照組(0.1％ v/v DMSO)和一個(gè)雌激素受體激動(dòng)劑對(duì)照組(0.1或1nM的17β-雌二醇)。劑量應(yīng)答實(shí)驗(yàn)以雌激素受體激動(dòng)劑和/或雌激素受體拮抗劑模式對(duì)活性化合物進(jìn)行，對(duì)數(shù)值升高從10-14到10-5M。從這些劑量應(yīng)答曲線可以分別得出EC50和IC50值。每個(gè)處理組的終孔包含5μl的3×10-5M ICI-182,780(終濃度10-6M)，作為雌激素受體拮抗劑對(duì)照。
處理后，細(xì)胞用25μl/孔的1×細(xì)胞培養(yǎng)裂解劑(PromegaCorporation)在搖床上振搖裂解15min。將細(xì)胞裂解物(20μl)轉(zhuǎn)移至96孔發(fā)光計(jì)數(shù)板，用100μl/孔的熒光素酶底物(Promega Corporation)和MicroLumat LB 96 P發(fā)光計(jì)(EG & G Berthold)檢測(cè)熒光素酶活性。加入底物之前，對(duì)每孔進(jìn)行1秒的背景檢測(cè)。加入底物，1秒延遲后，檢測(cè)10秒的熒光素酶活性。將數(shù)據(jù)從發(fā)光計(jì)轉(zhuǎn)移到Macintosh個(gè)人電腦，用JMP軟件進(jìn)行分析(SAS研究所)；該程序可以從每孔的熒光素酶檢測(cè)中除去背景讀數(shù)，計(jì)算出每次處理的平均和標(biāo)準(zhǔn)差。
熒光素酶數(shù)值取對(duì)數(shù)，并用Huber M-估計(jì)量使極端轉(zhuǎn)化值的權(quán)數(shù)降低。用JMP軟件來(lái)分析轉(zhuǎn)化和加權(quán)的數(shù)據(jù)，進(jìn)行單向ANOVA(Dunnett’s檢驗(yàn))。將化合物處理與雌激素受體激動(dòng)劑模式的載體對(duì)照結(jié)果或雌激素受體拮抗劑模式的陽(yáng)性雌激素受體激動(dòng)劑對(duì)照結(jié)果(0.1nM的17β-雌二醇)進(jìn)行對(duì)比。對(duì)于起始的單劑量實(shí)驗(yàn)，如果化合物處理結(jié)果與對(duì)照明顯不同(p＜0.05)，則結(jié)果按17β-雌二醇對(duì)照的相對(duì)百分比來(lái)報(bào)告[即((化合物-載體對(duì)照)/(17β-雌二醇對(duì)照-載體對(duì)照))×100]。JMP軟件還用于從非線性劑量應(yīng)答曲線確定EC50和/或IC50值。
子宮營(yíng)養(yǎng)活性的評(píng)價(jià)可以按照下述標(biāo)準(zhǔn)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)待測(cè)化合物的子宮營(yíng)養(yǎng)活性。
方法1性不成熟(18天齡)的Sprague-Dawley大鼠獲自Taconic，無(wú)限制的給予酪蛋白為基礎(chǔ)的食物(Purina Mills 5K96C)和水。19，20和21日，通過(guò)皮下注射給予17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)、待測(cè)化合物或載體((50％DMSO/50％ Dulbecco′s PBS)。為分析雌激素受體拮抗劑，將化合物與17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)同服。每組6只大鼠，在CO2窒息和氣胸后大約24小時(shí)安樂(lè)死。取出子宮，剝離附著的脂肪及表達(dá)內(nèi)部液體后，稱(chēng)重。組織樣品也可以速凍后，分析基因表達(dá)(如補(bǔ)體因子3mRNA)。
方法2性不成熟(18天齡)的129SvE小鼠獲自Taconic，無(wú)限制的給予酪蛋白為基礎(chǔ)的食物((Purina Mills 5K96C)和水。22，23，24和25日，通過(guò)皮下注射給予化合物或載體(玉米油)。每組6只大鼠，在CO2窒息和氣胸后大約6小時(shí)安樂(lè)死。取出子宮，剝離附著的脂肪及表達(dá)內(nèi)部液體后，稱(chēng)重。本發(fā)明的代表性化合物的結(jié)果見(jiàn)下表(2)。

骨質(zhì)疏松及脂類(lèi)調(diào)節(jié)的評(píng)價(jià)(心臟保護(hù))卵巢切除或假手術(shù)1天后的雌性Sprague-Dawley大鼠獲自Taconic Farms(體重范圍240-275g)，將其按3或4只大鼠/籠，置于12/12(明/暗)循環(huán)的屋子，隨意給予食物(Purina 5K96C大鼠糧)和水。所有處理均在動(dòng)物到達(dá)后1天開(kāi)始，按照所述每周7天給予處理，持續(xù)6周。一組年齡相應(yīng)的假手術(shù)后大鼠不進(jìn)行任何處理，作為每組研究的完整的雌激素去勢(shì)對(duì)照。
所有待測(cè)化合物均按定義的濃度在50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco′s磷酸鹽(GibcoBRL，Grand Island，NY)的載體中制備，以便處理的體積是0.1mL/100g體重。17-β-雌二醇溶于玉米油中(20μg/ml)，通過(guò)皮下注射給予，0.1ml/大鼠。三周后，按照組平均體重，對(duì)劑量進(jìn)行調(diào)整，通過(guò)皮下注射給予。
起始處理后5周，研究終止前1周，對(duì)每只大鼠進(jìn)行骨質(zhì)鹽密度(BMD)評(píng)價(jià)。用XCT-960M(pQCT；Stratec Medizintechnik，Pforzheim，Germany)，對(duì)麻醉大鼠進(jìn)行近端脛骨的總密度及小梁密度檢測(cè)。檢測(cè)如下進(jìn)行掃描前15分鐘，每只大鼠腹膜內(nèi)注射45mg/kg氯氨酮，8.5mg/kg甲苯噻嗪以及1.5mg/kg乙酰丙嗪進(jìn)行麻醉。
右后肢通過(guò)直徑為25mm的聚碳酸酯的管子，然后按照踝關(guān)節(jié)90°角，膝關(guān)節(jié)180°角置于丙烯酸框架上。聚碳酸酯的管子附著于滑動(dòng)的平臺(tái)上，使其與pQCT的孔徑相垂直。對(duì)平臺(tái)進(jìn)行調(diào)整，使股骨的遠(yuǎn)端及脛骨的近端位于掃描范圍內(nèi)。二維掃描長(zhǎng)度為10mm，行分辨率為0.2mm，掃描結(jié)果出現(xiàn)在監(jiān)控器上之后，定位于脛骨的遠(yuǎn)端。pQCT掃描從該點(diǎn)的3.4mm遠(yuǎn)處開(kāi)始。pQCT掃描厚度是1mm，三維象素值是0.140mm，每個(gè)薄層由145個(gè)投影組成。
PQCT掃描完成后，圖象顯示在監(jiān)控器上。勾畫(huà)出包含脛骨但排除腓骨的目的區(qū)域。用迭代算法以數(shù)學(xué)方式去除軟組織。所保留骨的密度(總密度)以mg/cm3方式報(bào)告。同心螺旋的骨的外層55％以數(shù)學(xué)方式去除。所保留骨的密度(小梁密度)以mg/cm3方式報(bào)告。
BMD評(píng)價(jià)后一周，大鼠通過(guò)CO2窒息和氣胸安樂(lè)死，收集血液進(jìn)行膽固醇分析。取出子宮，剝離附著的脂肪及表達(dá)腔液后，稱(chēng)重。用Boehringer-Mannheim Hitachi 911臨床分析儀，膽固醇/HP試劑盒，分析總膽固醇。用Dunnet’s檢驗(yàn)單向變異分析，對(duì)統(tǒng)計(jì)數(shù)字進(jìn)行對(duì)比。
抗氧化物活性評(píng)價(jià)從屠宰場(chǎng)取來(lái)豬的主動(dòng)脈，洗滌，轉(zhuǎn)入冰的PBS，收集主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。為收集細(xì)胞，將主動(dòng)脈的肋間血管及一端結(jié)扎。將新鮮的、無(wú)菌過(guò)濾的0.2％的膠原酶(Sigma Type I)加入血管，結(jié)扎另一端，形成封閉系統(tǒng)。然后，將主動(dòng)脈在37℃孵育15-20分鐘，隨后收集膠原酶溶液，在2000×g離心5min。將沉淀重懸于7mL的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中，后者由添加有去除炭的FBS(5％)，NuSerum(5％)，L-谷氨酰胺(4mM)，青霉素-鏈霉素(1000U/ml，100ug/ml)以及慶大霉素(75lig/ml)的DMEM/Ham’s F12培養(yǎng)基組成。接種于100mm的培養(yǎng)皿中，在5％的CO2，37℃下孵育。20min后，細(xì)胞用PBS漂洗，然后加入新鮮培養(yǎng)基，24小時(shí)后，重復(fù)操作一次。大約1周后，細(xì)胞融合成片。內(nèi)皮細(xì)胞常規(guī)1周喂養(yǎng)兩次，融合后，用胰蛋白酶消化，按1∶7的比例接種。細(xì)胞介導(dǎo)的12.5μg/ml的LDL的氧化在待測(cè)化合物(5μM)存在的條件下，37℃進(jìn)行4小時(shí)。結(jié)果以氧化過(guò)程受抑制的百分比表示，用分析自由醛的TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)物)檢測(cè)[Yagi，BiochemicalMedicine 15212-6(1976)]。
孕酮受體mRNA調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法該方法可用于評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的雌激素或抗雌激素活性[Shughrue，et al.，Endocrinology 1385476-5484(1997)]。本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)如下表(3)所示。

大鼠熱潮紅實(shí)驗(yàn)方法待測(cè)化合物對(duì)熱潮紅實(shí)驗(yàn)的影響可以用標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)，該方法檢測(cè)待測(cè)化合物減緩尾部皮膚溫度升高(嗎啡成癮的大鼠急性戒斷納洛酮時(shí)發(fā)生)的能力[Merchenthaler，et al.，Maturitas 30307-16(1998)]。也可以通過(guò)將待測(cè)化合物與對(duì)照雌激素共同服用來(lái)檢測(cè)雌激素受體拮抗劑活性。
分離的大鼠主動(dòng)脈環(huán)的血管舒縮功能評(píng)價(jià)將Sprague-Dawley大鼠(240-260克)分為4組1.正常未進(jìn)行卵巢切除術(shù)(完整)2.卵巢切除，載體處理的3.卵巢切除，17-β-雌二醇處理的(1mg/kg/day)4.卵巢切除，待測(cè)化合物處理(各種劑量)在大約處理前3周，將動(dòng)物的卵巢切除。每種動(dòng)物通過(guò)胃腸管飼法，給予懸于含1％吐溫-80的雙蒸去離子水中的17-β-雌二醇硫酸鹽(1mg/kg/day)或待測(cè)化合物。載體處理的動(dòng)物給予藥物處理組使用的適當(dāng)體積的載體。
CO2吸入和放血后，使動(dòng)物安樂(lè)死。快速取出胸主動(dòng)脈，置于37℃具有下列組成的生理溶液中(mM)NaCl(54.7)，KCl(5.0)，NaHCO3(25.0)，MgCl22H2O(2.5)，D-葡萄糖(11.8)以及CaCl2(0.2)充以CO2-O2，95％/5％，最終pH值為7.4。從外表面除去外膜，將血管切成2-3mm長(zhǎng)的環(huán)。將環(huán)懸于10mL的組織電解槽，環(huán)的一端附于電解槽的底部，另一端連接于力轉(zhuǎn)導(dǎo)器。給予環(huán)1克的靜止張力。環(huán)平衡1小時(shí)后，獲取信號(hào)，進(jìn)行分析。
平衡后，將環(huán)暴露于濃度遞增的脫羥腎上腺素(10-8到10-4)，記錄張力。然后，將電解槽用新鮮的緩沖液漂洗3次。洗滌完后，將200mM的L-NAME加于組織電解槽，平衡30min。然后重復(fù)脫羥腎上腺素濃度應(yīng)答曲線。
心臟保護(hù)活性評(píng)價(jià)從Taconic農(nóng)場(chǎng)得到載脂蛋白E-缺陷的C57/B1J(apo E KO)小鼠。所有的動(dòng)物操作都嚴(yán)格按照IACUC的指南進(jìn)行。卵巢切除的雌性apo EKO小鼠，4-7周齡，置于鞋盒樣的籠子中，不限制食物和水。動(dòng)物按體重隨機(jī)分組(n＝12-15只小鼠每組)。按照Precise-dosingProtocol，在飲食中給動(dòng)物加入待測(cè)化合物或雌激素(17-β-雌二醇硫酸鹽，1mg/kg/day)，每周檢測(cè)所消耗飲食的量，并按照動(dòng)物的體重相應(yīng)的調(diào)節(jié)劑量。所用飲食為Purina制備的Western-型飲食(57U5)，含有0.5％的膽固醇、20％的豬油以及25IU/KG維生素E。動(dòng)物按照此范例飼養(yǎng)12周。對(duì)照動(dòng)物給予Western-型飲食，不給予化合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，動(dòng)物安樂(lè)死，取其血漿樣品。心臟進(jìn)行原位灌注，先用生理鹽水，再用中性平衡的10％福爾馬林溶液。
血漿脂類(lèi)和脂蛋白分析可以選用Boehringer Mannheim和WakoBiochemicals的酶分析試劑盒，用Boehringer-Mannheim Hitachi 911分析儀檢測(cè)總膽固醇和甘油三酯。血漿脂蛋白的分離和定量用FPLC體積分級(jí)分離進(jìn)行。簡(jiǎn)言之，即過(guò)濾50-100ml的血清，加入系列連接的Superose 12和Superose 6柱，用1mM的EDTA鈉鹽及0.15M的NaCl以恒定的流速進(jìn)行洗脫。用Waters MillenniumTM軟件對(duì)每個(gè)曲線的代表VLDL、LDL及HDL的區(qū)域進(jìn)行整合，然后用總膽固醇值乘以各自色譜峰的相對(duì)百分區(qū)域，對(duì)脂蛋白組分進(jìn)行定量。
對(duì)于主動(dòng)脈粥樣硬化的定量，先仔細(xì)分離主動(dòng)脈，然后置于福爾馬林固定液48-72小時(shí)。用Oil Red O染色，識(shí)別粥樣硬化損傷。血管進(jìn)行簡(jiǎn)單的脫色，然后用配有Sony 3CCD攝像系統(tǒng)并用IMAQConfiguration Utility(National Instrument)作為圖象捕捉軟件的NikonSMU800顯微鏡成像。然后用定制的閾值應(yīng)用軟件包(ColemanTechnologies)沿著主動(dòng)脈弓對(duì)損傷進(jìn)行定量。用程序的閾值功能，對(duì)血管進(jìn)行自動(dòng)的損傷評(píng)價(jià)，尤其是主動(dòng)脈弓的頭臂干近端到左側(cè)鎖骨下動(dòng)脈的遠(yuǎn)端之間的區(qū)域。主動(dòng)脈粥樣硬化損傷的數(shù)據(jù)嚴(yán)格按損傷占定義腔區(qū)域的百分比表示。
認(rèn)知增強(qiáng)的評(píng)價(jià)卵巢切除的大鼠(n＝50)用8-臂基本臂迷宮進(jìn)行馴服，連續(xù)5天，每天10min。馴服和檢測(cè)前，禁水。將100μl的水置于每個(gè)臂的末端，作為再增強(qiáng)。基本臂迷宮里的勝利-轉(zhuǎn)換目標(biāo)通過(guò)允許動(dòng)物接近一個(gè)誘餌臂而完成。飲水后，動(dòng)物出臂，重新進(jìn)入中央室，在此動(dòng)物可以接觸曾經(jīng)進(jìn)過(guò)的臂或新臂。當(dāng)動(dòng)物選擇進(jìn)入新臂時(shí)，記錄為正確的應(yīng)答。每個(gè)動(dòng)物每天進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)，持續(xù)3天。最后一次認(rèn)知實(shí)驗(yàn)后，將動(dòng)物分為以下4組1.陰性對(duì)照用10％的DMSO/芝麻油載體每天1次注射，共6天(1ml/kg，SC)2.陽(yáng)性對(duì)照用17β-雌二醇苯甲酸酯注射2天，第二次注射4天后進(jìn)行檢測(cè)(每只大鼠10μg/0.1ml的17β-雌二醇苯甲酸酯)3.雌二醇每天注射17β-雌二醇，共6天(20μg/kg，SC)4.待測(cè)化合物每天注射，共6天(劑量不同)所有的注射均在認(rèn)知最后一天檢測(cè)后開(kāi)始。組1，3和4的最后一次注射在檢測(cè)工作記憶前2小時(shí)進(jìn)行。
工作記憶檢測(cè)是延遲的非配對(duì)樣品目標(biāo)(DNMS)，其利用15，30或60秒的延遲。該目標(biāo)是認(rèn)知目標(biāo)的變量，其中大鼠置于中央室，如前允許進(jìn)入一個(gè)臂。當(dāng)大鼠在穿越第一個(gè)臂的途中時(shí)，打開(kāi)第二個(gè)臂，然后要求大鼠選擇該臂。當(dāng)大鼠在在穿越第二個(gè)臂的途中時(shí)，兩個(gè)門(mén)都關(guān)閉，延遲開(kāi)始。一旦延遲屆時(shí)，原先的兩個(gè)門(mén)及第三個(gè)新的門(mén)同時(shí)打開(kāi)。當(dāng)動(dòng)物接著穿越第三個(gè)新的臂時(shí)，記錄為正確應(yīng)答。當(dāng)動(dòng)物穿越第一或第二個(gè)門(mén)時(shí)，記錄為錯(cuò)誤的應(yīng)答。每個(gè)動(dòng)物在3個(gè)延遲間歇期的每一次接受5次實(shí)驗(yàn)，每個(gè)動(dòng)物共計(jì)進(jìn)行15次實(shí)驗(yàn)。
對(duì)胸膜炎影響的評(píng)價(jià)按照Cuzzocrea[Endocrinology 1411455-63(2000)]所述方法，對(duì)減輕實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)大鼠胸膜炎癥狀的能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。
抗谷氨酸誘導(dǎo)細(xì)胞毒性的保護(hù)的評(píng)價(jià)(神經(jīng)保護(hù))本發(fā)明化合物的神經(jīng)保護(hù)活性可以用谷氨酸攻擊的體外藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)[Zaulyanov等，Cellular & Molecular Neurobiology 19705-18(1999)；Prokai等，Journal of Medicinal Chemistry 44110-4(2001)]。
乳房端芽實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)雌激素對(duì)于全部導(dǎo)管的延伸以及乳腺導(dǎo)管的分支是必須的，隨后的葉泡末端芽的發(fā)育則受孕酮的影響。在該實(shí)驗(yàn)方法中，按照下述標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法對(duì)本發(fā)明化合物的乳腺營(yíng)養(yǎng)活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。將28天齡的Sprague-Dawley大鼠(Taconic Farms，Germantown，NY)的卵巢切除，讓其休息9天。將動(dòng)物置于12/12(明/暗)循環(huán)的屋子，給予酪蛋白為基礎(chǔ)的Purina Laboratory Rodent Diet 5K96(Purina，Richmond，IN)，對(duì)水不加限制。然后，通過(guò)皮下注射給予大鼠載體(50％DMSO(JTBaker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco′s磷酸鹽(GibcoBRL，GrandIsland，NY)、17β-雌二醇(0.1mg/kg)或待測(cè)化合物(20mg/kg)連續(xù)6天。最后3天，還通過(guò)皮下注射給予大鼠孕酮(30mg/kg)。第7天，動(dòng)物安樂(lè)死，切除乳房脂墊。對(duì)脂墊進(jìn)行酪蛋白激酶IImRNA分析，后者是末端芽體的增殖標(biāo)志。酪蛋白激酶IImRNA的分析用TaqmanGold(PE Applied Biosystem)方法通過(guò)實(shí)時(shí)RT-PCR進(jìn)行。用酪蛋白激酶II特異引物對(duì)(5′引物，CACACGGATGGCGCATACT；3′引物，CTCGGGATGCACCA TGAAG)，每個(gè)樣品分3個(gè)孔，對(duì)共計(jì)50ng的RNA進(jìn)行分析，所用探針為定制的探針(TAMRA-CGGCACTGGTTTCCCTCACATGCT-FAM)。酪蛋白激酶IImRNA水平用PE Applied Biosystem提供的包含在每個(gè)樣品反應(yīng)所用引物和探針中的18s核糖體RNA進(jìn)行校準(zhǔn)。本發(fā)明一個(gè)實(shí)例的結(jié)果見(jiàn)下表(表(4))。

HLA大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法對(duì)炎性腸道疾病的評(píng)價(jià)本發(fā)明的代表性化合物用HLA大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，在大鼠模仿人的腸道疾病。以下對(duì)所用方法及所得結(jié)果進(jìn)行簡(jiǎn)述。從Taconic獲得雄性HLA-B27大鼠，不限制食物((PMI Lab diet 5001)和水。給予大鼠每日1次(口服)載體(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)或?qū)嵗?d(10mg/kg)，持續(xù)26日。每日觀察糞便的質(zhì)量，并按下述公式分級(jí)腹瀉＝3；軟便＝2；正常糞便＝1。表(5)顯示，在使用例1d后，糞便質(zhì)量有所改善。在實(shí)驗(yàn)?zāi)占?，貯存于-70℃。結(jié)腸的一部分用于組織學(xué)分析，，另一部分進(jìn)行髓過(guò)氧化物酶活性分析。

組織學(xué)分析將結(jié)腸組織浸于10％中性平衡的福爾馬林溶液。每個(gè)結(jié)腸標(biāo)本分為4個(gè)樣品進(jìn)行分析。福爾馬林固定的組織在Tissue Tek真空過(guò)濾加工器((Miles，Inc；West Haven，Connecticut)中進(jìn)行石蠟包埋。然后切成5μm厚，用蘇木精和伊紅(H&E)染色，按照調(diào)整的Boughton-Smith方法進(jìn)行盲法組織學(xué)評(píng)價(jià)。計(jì)分完成后，樣品去盲，將數(shù)據(jù)列表，用ANOVA線性模型多重平均對(duì)照進(jìn)行分析。對(duì)結(jié)腸組織進(jìn)行一些疾病指征的分析，給出相對(duì)分值。如表(6)所示，例1d在減輕組織損傷方面有效。

兩個(gè)關(guān)節(jié)炎模型的評(píng)價(jià)Lewis大鼠佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎分析。60只，雌性，12周齡的Lewis大鼠按照標(biāo)準(zhǔn)的操作方法進(jìn)行飼養(yǎng)。隨意給予標(biāo)準(zhǔn)配制的食物和水。每個(gè)動(dòng)物通過(guò)籠上的卡片而識(shí)別，卡片上標(biāo)明組別和動(dòng)物號(hào)。每個(gè)大鼠號(hào)用不能拭除的墨水標(biāo)記在尾部。在實(shí)驗(yàn)前至少10-21天，將大鼠麻醉，用標(biāo)準(zhǔn)的無(wú)菌手術(shù)進(jìn)行卵巢切除術(shù)。
用弗氏完全佐劑(Sigma Immuno Chemicals，St.Louis，MO)來(lái)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎，每ml包含熱滅活的結(jié)核分枝桿菌1mg干粉，0.85ml礦物油及0.15ml二縮甘露醇油酸Lot No.084H8800。
以下是兩個(gè)實(shí)驗(yàn)方法的例子。抑制實(shí)驗(yàn)方法給30只大鼠在尾巴的基部皮內(nèi)注射0.1ml的弗氏完全佐劑。將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組6只大鼠。每天，給予動(dòng)物載體(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco′s磷酸鹽(GibcoBRL，Grand Island，NY)或待測(cè)化合物(10mg/kg，皮下注射)。所有大鼠均在第1天開(kāi)始處理。本發(fā)明的代表性化合物的數(shù)據(jù)見(jiàn)表(7)。
處理實(shí)驗(yàn)方法給30只大鼠在尾巴的基部皮內(nèi)注射0.1ml的弗氏完全佐劑。將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組6只大鼠。每天，給予動(dòng)物載體(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco′s磷酸鹽(GibcoBRL，Grand Island，NY)或待測(cè)化合物(10mg/kg，皮下注射)。所有大鼠均在佐劑注射后第8天開(kāi)始處理。本發(fā)明的代表性化合物的數(shù)據(jù)見(jiàn)表(8)，(9)和(10)。
用Abacus Concepts Super ANOVA(Abacus Concepts，Inc.，Berkeley，CA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有的目的參數(shù)均用Duncan’s新復(fù)極事后檢驗(yàn)進(jìn)行組間變異分析。數(shù)據(jù)以平均±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，p＜0.05視為相差顯著。
關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度每天按照下述疾病指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)后爪紅斑、后爪腫脹、關(guān)節(jié)觸痛以及活動(dòng)和姿勢(shì)。用0-3的整數(shù)來(lái)定量后爪的紅斑水平(0＝正常爪，1＝輕微紅斑，2＝中度紅斑，3＝嚴(yán)重紅斑)以及腫脹(0＝正常爪，1＝輕微腫脹，2＝中度腫脹，3＝嚴(yán)重腫脹)。每天的最大值是12。
實(shí)驗(yàn)?zāi)?，大鼠用CO2安樂(lè)死，尸體解剖時(shí)取下后爪，在10％的平衡福爾馬林液中固定，跗關(guān)節(jié)脫鈣，用石蠟包埋。組織切片用蘇木精和伊紅或番紅(Saffranin)-O-快速綠染色。
給玻片加密，使檢查者不知道哪個(gè)是處理組。用滑膜增生、炎細(xì)胞浸潤(rùn)以及血管翳形成等對(duì)跗關(guān)節(jié)的滑膜組織進(jìn)行評(píng)價(jià)[Poole和Coombs，International Archives of Allergy & Applied Immunology 5497-113(1977)]，簡(jiǎn)況如下。

另外，如下表所述用Mankin′s組織分級(jí)系統(tǒng)[Mankin等，Journal ofBone & Joint Surgery-American Volume 53523-37(1971)]對(duì)關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)骨進(jìn)行評(píng)價(jià)





HLA-B27大鼠關(guān)節(jié)炎模型評(píng)價(jià)。本發(fā)明的代表性化合物用模擬人關(guān)節(jié)炎的HLA-B27大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。以下簡(jiǎn)述所用方法和所得結(jié)果。雄性HLA-B27大鼠(8-10周齡)獲自Taconic，不限制食物((PMI Lab diet 5001)和水。大鼠每日口服載體(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)或待測(cè)化合物(10mg/kg)，連續(xù)26天。關(guān)節(jié)評(píng)分和組織學(xué)檢測(cè)如上Lewis大鼠佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型。本發(fā)明的代表性化合物的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下表(11)所述。

體內(nèi)癌發(fā)生模型評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物治療和抑制各種惡性腫瘤或過(guò)度增殖紊亂的能力可以用標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，后者很容易從文獻(xiàn)中獲得，包括以下兩種方法。
乳腺癌 無(wú)胸腺nu/nu(裸)小鼠獲自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)。腫瘤細(xì)胞注射前1天，給動(dòng)物移植定時(shí)釋放的含有0.36-1.7mg17β-雌二醇的顆粒(60或90天釋放，InnovativeResearch of America，Sarasota，F(xiàn)L)或安慰劑。顆粒用10G精密套針皮下注射到肩胛骨內(nèi)區(qū)域。隨后，給大鼠的乳腺組織皮下注射1×10-7MCF-7細(xì)胞或1×10-7BG-1細(xì)胞。細(xì)胞與等體積的基質(zhì)膠混合，后者是一種基底膜基質(zhì)制備物，可以促進(jìn)腫瘤建立。待測(cè)化合物可以通過(guò)在腫瘤細(xì)胞移植后1天(抑制組)給予或在腫瘤已達(dá)到一定體積后給予(治療組)而進(jìn)行評(píng)價(jià)。每天通過(guò)腹膜內(nèi)或口服給予化合物，化合物處于含1％生理鹽水的載體中。每3或7天，評(píng)價(jià)腫瘤大小。
結(jié)腸癌 治療或抑制結(jié)腸癌的能力可以按照Smirnoff[OncologyResearch 11255-64(1999)]的方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。
兩種體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法的神經(jīng)保護(hù)評(píng)價(jià)長(zhǎng)爪沙鼠(蒙古沙鼠，Mongolian gerbil)的瞬時(shí)全身缺血。用下述實(shí)驗(yàn)方法對(duì)待測(cè)化合物在預(yù)防或治療氧缺失/再灌注引起的腦損傷方面的作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。
雌性長(zhǎng)爪沙鼠(60-80g；Charles River Laboratories，Kinston，NY)喂養(yǎng)于Wyeth-Ayerst動(dòng)物看護(hù)設(shè)施(AAALAC認(rèn)證)，12小時(shí)明/暗循環(huán)，自由接觸自來(lái)水以及低-雌激素酪蛋白飲食(Purina；Richmond，IN)。馴化后(3-5天)，用isoflurane(與氧的2-3％混合)將長(zhǎng)爪沙鼠麻醉，切除卵巢(Day 0)。次日晨(Day 1)開(kāi)始，每天通過(guò)皮下注射給予載體(10％ETOH/玉米油)，17β-雌二醇(1mg/kg，sc)或待測(cè)化合物。在Day 6，用異氟烷將長(zhǎng)爪沙鼠(n＝4-5/組)麻醉，通過(guò)頸中線切開(kāi)，觀察頸動(dòng)脈，用非創(chuàng)傷性微血管瘤鉗夾閉兩側(cè)頸動(dòng)脈5分鐘。夾閉后，去除微血管瘤鉗，使大腦再灌注，用傷口鉗封閉頸部切口。全身缺血手術(shù)前，所有動(dòng)物禁食過(guò)夜，這一步驟可以使缺血損傷較一致。在Day 12，將長(zhǎng)爪沙鼠暴露于損傷劑量的CO2，將腦組織在干冰上冷凍，貯存于-80℃。本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物操作均得到了Wyeth-Ayerst Research的Radnor/Collegeville Animal Care and Use Committee(RACUC/CACUC)的同意。
神經(jīng)元保護(hù)的程度通過(guò)原位神經(jīng)顆粒素(neurogranin)mRNA雜交分析進(jìn)行評(píng)價(jià)。簡(jiǎn)言之，即在明膠包被的玻片上收集20μm的冠狀恒冷箱切片，在處理時(shí)，將干燥的玻片盒預(yù)熱至室溫，玻片用4％的低聚甲醛固定，醋酸酐處理，然后用氯仿和乙醇脫脂脫水。處理過(guò)的含有組織的切片與200μl(6×106DPM/玻片)的神經(jīng)顆粒素的反義或正義(對(duì)照)核酸探針(35S-UTP-標(biāo)記NG-241；99-340堿基)進(jìn)行雜交。將玻片置于有濕度的玻片盒內(nèi)，在50％的甲酰胺雜交液中，55℃過(guò)夜孵育，不開(kāi)蓋。次晨，用玻片架收集玻片，浸入2×SSC(0.3M NaCI，0.03M檸檬酸鈉；pH7.0)/10mM DTT，用RNase A處理(20μg/ml)，在1×SSC中67℃洗滌(2×30min)除去非特異標(biāo)記。脫水后，玻片對(duì)BioMax(BMR-1；Kodak)X-光片過(guò)夜。
神經(jīng)顆粒素雜交信號(hào)的水平可以用來(lái)分析損傷后CA1區(qū)域的神經(jīng)元損傷程度，評(píng)價(jià)17β-雌二醇及實(shí)驗(yàn)化合物的有效性。之所以選擇神經(jīng)顆粒素mRNA，是因?yàn)樗诎–A1的海馬回神經(jīng)元高表達(dá)，而在這些腦區(qū)域的膠質(zhì)和其他細(xì)胞無(wú)表達(dá)。因而，檢測(cè)出現(xiàn)的神經(jīng)顆粒素mRNA的數(shù)量可以反映存活的神經(jīng)元。神經(jīng)顆粒素雜交信號(hào)的相對(duì)光密度檢測(cè)獲自帶有計(jì)算機(jī)圖象分析系統(tǒng)的膠片放射自顯影(C-ImagingInc.，Pittsburgh，PA)。對(duì)來(lái)自每只動(dòng)物的6個(gè)切片(40μm厚)的結(jié)果進(jìn)行平均，然后統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)值以平均±SEM的方式報(bào)告。用單向變異分析來(lái)檢驗(yàn)神經(jīng)顆粒素mRNA水平的差異，結(jié)果部分的非差異表述提示p＞0.05。
小鼠的中腦動(dòng)脈夾閉 神經(jīng)保護(hù)可以按照Dubal[參見(jiàn)，Dubal，等，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica 981952-1957(2001)，Dubal等，Journal of Neuroscience 196385-6393(1999)]所述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。
排卵抑制標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法本方法用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)化合物能否抑制或改變排卵時(shí)間。也可以用來(lái)評(píng)價(jià)卵母細(xì)胞排卵的數(shù)量[Lundeen等，J Steroid Biochem Mol Biol 78137-143(2001)]。
基于標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)方法所得結(jié)果，本發(fā)明的化合物是雌激素受體調(diào)節(jié)劑，可以用于至少部分由雌激素不足或過(guò)量介導(dǎo)的或者可以用雌激素制劑治療或抑制的體征、失調(diào)或疾病狀態(tài)的治療或抑制。本發(fā)明的化合物尤其可用于治療圍絕經(jīng)、絕經(jīng)或絕經(jīng)后病人，后者內(nèi)源雌激素大大減少。絕經(jīng)通常定義為最后一次自然月經(jīng)期，以卵巢功能的停止為特征，導(dǎo)致血流中循環(huán)雌激素的顯著減少。此處所述絕經(jīng)還包括雌激素產(chǎn)生減少的狀態(tài)，后者可以由外科手術(shù)、化學(xué)或?qū)е侣殉补δ艹墒烨皽p少或停止的疾病引起。
本發(fā)明化合物還可以用于治療或抑制其他雌激素不足的癥狀包括熱潮紅、陰道或陰門(mén)萎縮，萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、性交疼痛、排尿困難、尿頻、尿失禁及尿道感染。其他生殖道用途包括功能不良子宮出血的治療或抑制?；衔镞€可用于治療或抑制子宮內(nèi)膜異位癥。
化合物在腦部也有活性，因而可以用于治療或抑制阿爾茨海默氏病、認(rèn)知能力降低、性欲降低、老年癡呆、神經(jīng)退行性變紊亂、抑郁、焦慮、失眠、精神分裂癥以及不育。本發(fā)明的化合物還可以用于治療或抑制良性或惡性異常組織生長(zhǎng)包括腎小球硬化、前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、硬皮病、纖維瘤病、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合癥、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳腺疾病、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、CNS癌如神經(jīng)膠質(zhì)瘤或astioblastomia。
本發(fā)明的化合物可保護(hù)心臟，是抗氧化劑，可用于降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)及LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、粥樣硬化、外周血管病、再狹窄及血管痙攣，抑制細(xì)胞導(dǎo)致的免疫介導(dǎo)血管損傷引起的血管壁損傷。本發(fā)明的化合物還可以用于治療炎癥或自身免疫病相關(guān)的紊亂，包括炎性腸道疾病(Crohn’s疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、原因不明結(jié)腸炎)、關(guān)節(jié)炎(風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、椎關(guān)節(jié)病、骨關(guān)節(jié)炎)、胸膜炎、缺血/再灌注損傷(如中風(fēng)、移植排斥、心肌梗塞等)、哮喘、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎答、前列腺炎間質(zhì)膀胱炎、葡萄膜炎、銀屑病、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性狼瘡紅斑和膿毒。
本發(fā)明的化合物還可以用于治療或抑制眼部疾病，包括白內(nèi)障、葡萄膜炎和黃斑退行性變，還可以治療皮膚疾病如老化、禿頂以及粉刺。
本發(fā)明的化合物還可以用于治療或抑制代謝紊亂如脂類(lèi)代謝的II型糖尿病、食欲紊亂(如神經(jīng)性厭食和食欲過(guò)剩)。
本發(fā)明的化合物還可以用于治療或抑制血液疾病如遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張、異常子宮出血以及對(duì)抗出血性體克。
本發(fā)明的化合物還可用于治療疾病狀態(tài)，其中閉經(jīng)，如白血病、子宮內(nèi)膜消融、慢性腎或肝臟疾病或凝血疾病或障礙。
本發(fā)明的化合物還可用作避孕制劑，尤其當(dāng)與孕激素聯(lián)用時(shí)。
當(dāng)給予化合物來(lái)治療或抑制某種特殊疾病或紊亂時(shí)，其有效劑量依賴于化合物的種類(lèi)、給予方式、病情的狀況及嚴(yán)重性以及各種與治療個(gè)體相關(guān)的物理參數(shù)。本發(fā)明化合物口服的有效劑量為約0.1-1,000mg/天。優(yōu)選約10-600mg/天，更優(yōu)選約50-600mg/天，可以單次給予，也可以分兩或三次。日用劑量因給予方式不同而不同。
可以選用任何能將活性化合物導(dǎo)入血流的給予方式，包括口服，通過(guò)植入體，胃腸外(包括靜脈、腹膜內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)以及皮下注射)，直腸，鼻內(nèi)，局部給藥，眼部給藥(經(jīng)眼滴入)，陰道內(nèi)給藥以及經(jīng)皮給藥。
包含本發(fā)明活性化合物的口服制劑可以包含任何常規(guī)使用的口服劑型，包括片劑、膠囊、含劑、含錠、錠劑和口服液(懸液或溶液)。膠囊可以含有活性化合物與惰性填料和/或稀釋劑如藥學(xué)可接受的淀粉(如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖類(lèi)、人工甜化劑、粉狀纖維素如晶狀的和微晶纖維素、面粉、明膠、樹(shù)膠等。使用的片劑制劑可以通過(guò)常規(guī)的壓縮、濕成粒法和干成粒法以及使用藥學(xué)可接受的稀釋劑、結(jié)合劑、潤(rùn)滑劑、分解劑、表面修飾劑(包括表面活性劑)、懸浮或穩(wěn)定劑包括但不局限于硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、月桂基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、藻酸、阿拉伯膠、黃素膠、枸櫞酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨醇、磷酸氫二鈣、硫酸鈣、乳糖、白陶土、甘露醇、氯化鈉、滑石粉、干淀粉和粉狀糖。優(yōu)選的表面修飾劑包括非離子和陰離子表面修飾劑。優(yōu)選的表面修飾劑的示例包括但不局限于泊洛沙姆188、benzalkonium chloride、硬脂酸鈣、西托硬脂乙醇、聚西托醇乳化蠟、山梨醇酯、膠質(zhì)二氧化硅、磷酸鹽、十二烷基硫酸鈉、硅酸鋁鎂和三乙醇胺。此處的口服制劑可以利用標(biāo)準(zhǔn)的緩釋或定時(shí)釋放制劑來(lái)改變活性化合物的吸收?？诜苿┮部梢杂煞玫幕钚猿煞衷谒谢蚬薪M成，含有需要的合適的溶劑或乳化劑。
有些情況下，可以將化合物以汽霧劑的形式直接給入呼吸道。
本發(fā)明的化合物還可以通過(guò)胃腸外或腹膜內(nèi)方式給予。這些化合物作為自由基的溶液或懸浮液或藥學(xué)可接受鹽可以在與表面活性劑如羥基-丙基纖維素等適當(dāng)混合的水中制備。分散劑可以在甘油、液態(tài)聚乙二醇及其在油中的混合物中制備。在常規(guī)貯存和使用條件下，這些制備物包含防腐劑來(lái)抑制微生物生長(zhǎng)。
適于注射的藥學(xué)形式包括無(wú)菌水溶液或分散劑和即席制備無(wú)菌水溶液或分散劑的無(wú)菌粉劑。無(wú)論何種情況，制劑必須是無(wú)菌的且是流動(dòng)的以便于注射。在常規(guī)的加工和貯存條件下必須是穩(wěn)定的，且能抗微生物如細(xì)菌和真菌污染。載體可以是溶劑或含有例如水、乙醇、多醇(如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)及其合適的混合物和蔬菜油。
此處的經(jīng)皮給予包括所有通過(guò)體表或體內(nèi)通道內(nèi)層包括內(nèi)皮和粘膜組織的給藥方式?？梢酝ㄟ^(guò)本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽以乳液、面霜、泡沫、膜片、懸液、溶液和栓劑(直腸和陰道內(nèi))。
經(jīng)皮給予可以通過(guò)使用含有活性化合物以及對(duì)該活性化合物具有惰性的載體的的經(jīng)皮膜片(對(duì)皮膚無(wú)毒)來(lái)實(shí)施，制劑可以通過(guò)皮膚進(jìn)入血液全身吸收。載體可以采用任何形式如霜?jiǎng)┖蛙浉唷⒑齽?、膠體和咬合裝置。這些霜?jiǎng)┖蛙浉嗫梢允钦承砸后w或半固體乳劑(油包水或水包油)。也可以用由分散于石油或疏水石油中的含有活性組分的可吸收粉末組成的糊劑?？梢允褂酶鞣N咬合裝置將活性組分釋放于血液如半滲透膜，其中包含含有活性組分及或無(wú)載體的貯存庫(kù)或含有活性組分的基質(zhì)。還有其它已知的咬合裝置。
栓劑可以由傳統(tǒng)材料制得，包括可可油及或無(wú)添加的蠟來(lái)改變栓劑的熔點(diǎn)，以及甘油。水溶性的栓劑如各種分子量的聚乙二醇也可以使用。
以下描述本發(fā)明代表性實(shí)施例的制備。
中間體26-甲氧基-1-萘酚6-甲氧基-1-四氫萘酮(20.84g，118.3mmol)、10％Pd/C(10.1g)、和對(duì)繖花烴(500mL)的混合物回流加熱60小時(shí)。將懸浮液冷卻到室溫、通過(guò)Celite過(guò)濾。固體用乙酸乙酯洗滌直至紫外線透明，合并的有機(jī)溶液用1N氫氧化鈉(3×200mL)萃取。合并的水層用6N HCl調(diào)成酸性、用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥、過(guò)濾。溶劑蒸發(fā)、用硅膠柱(25％乙酸乙酯-己烷)精制，得到17.02g(83％)淡棕色固體狀標(biāo)題化合物。用第二硅膠柱(40-60％二氯甲烷-己烷)精制制備一種分析樣品，得到一種白色固體mp 73-75℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.85(3H，s)，6.70-6.74(1H，m)，7.06(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝9.15Hz)，7.20-7.27(3H，m)，8.02(1H，d，J＝9.12Hz)，10.01(1H，s)；MS(ESI)m/z 174(M-H)-。
分析C11H10O2計(jì)算值C75.84 H5.79實(shí)測(cè)值C75.56 H5.39中間體51-〔(2-溴-5-甲氧基芐基)氧〕-6-甲氧基萘向6-甲氧基萘酚(12.9g，74.1mmol)、5-甲氧基-2-溴芐醇(17.7g，81.6mmol)、和三苯膦(31.1g，119mmol)的THF(400mL)溶液中慢慢添加DEAD(20.6g，119mmol)的THF(50mL)溶液。溶液攪拌過(guò)夜、用硅膠濃縮、用硅膠柱(10％乙酸乙酯-己烷)精制，得到16.38g(59％)白色固體狀標(biāo)題化合物mp 83-84℃；1H NMR(CDCl3)δ3.78(3H，s)，3.92(3H，s)，5.25(2H，s)，6.75-6.77(2H，m)，7.12(1H，d，J＝2.44Hz)，7.15(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝9.28Hz)，7.24(1H，d，J＝2.93Hz)，7.32-7.36(2H，m)，7.48(1H，d，J＝8.79Hz)，8.27(1H，d，J＝9.23Hz)；MS(ESI)m/z 373/375([M+H]+)；分析C19H17BrO3計(jì)算值C61.14 H4.59實(shí)測(cè)值C60.97 H4.49中間體61-〔(2-溴-5-甲氧基芐基)氧〕萘標(biāo)題化合物是通過(guò)使1-萘酚(5.7g，39.6mmol)與5-甲氧基-2-溴芐醇像對(duì)中間體5所述那樣反應(yīng)制備的，得到5.94g(44％)白色固體mp 74-75℃；1H NMR(CDCl3)δ3.78(3H，s)，5.28(2H，s)，6.77(1H，dd，J＝2.93Hz，J＝8.79Hz)，6.88(1H，d，J＝7.69Hz)，7.27(1H，d，J＝3.30Hz)，7.36-7.39(1H，m)，7.47-7.53(4H，m)，7.81-7.83(1H，m)，8.37-8.39(1H，m)；MS(ESI)m/z 343/345([M+H]+)；分析C18H15BrO2計(jì)算值C62.99 H4.41實(shí)測(cè)值C63.19 H4.30中間體84-溴-2-氟-5-甲基苯酚在0℃向2-氟-5-甲基苯酚(20.27g，160.7mmol)的乙腈(500mL)溶液中添加NBS(30.0g，168.7mmol)?；旌衔镌?℃攪拌1小時(shí)。所得到的溶液吹脫溶劑、通過(guò)短硅膠柱過(guò)濾、以二氯甲烷洗脫，得到29.6g(90％)油狀橙色固體。用硅膠柱精制(5％乙酸乙酯-己烷)制備一種分析樣品，得到白色固體狀標(biāo)題化合物mp 44-46℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.22(3H，s)，6.93(1H，d，J＝9.28Hz)，7.40(1H，d，J＝10.74Hz)，10.05(1H，s)；MS(ESI)m/z 203/205([M-H]-)分析C7H6BrFO計(jì)算值C41.01 H2.95實(shí)測(cè)值C40.69 H2.80中間體91-溴-5-氟-4-甲氧基-2-甲基苯向4-溴-2-氟-5-甲基苯酚(29.6g，144.2mmol)和碳酸鉀(30.0g，218mmol)的丙酮(500mL)混合物中添加碘甲烷(69.0g，486mmol)。所得到的懸浮液回流攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫、傾入HCl(250mL 1N溶液)中、用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有機(jī)層用碳酸氫鈉溶液洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。溶劑蒸發(fā)、用硅膠柱精制(5％乙酸乙酯-己烷)，得到29.50g(93％)透明無(wú)色油狀標(biāo)題化合物1H NMR(CDCl3)δ2.33(3H，s)，3.85(3H，s)，6.82(1H，d，J＝8.79Hz)，7.23(1H，d，J＝10.25Hz)；MS m/z。
分析C8H8BrFO·0.3H2O計(jì)算值C42.81 H3.86實(shí)測(cè)值C42.38 H3.44中間體111-〔(2-溴-4-氟-5-甲氧基芐基)氧〕-6-甲氧基萘1-溴-5-氟-4-甲氧基-2-甲基苯(29.50g，134.7mmol)、NBS(25.18g，141.4mmol)和過(guò)氧化苯甲酰(8.14g，33.7mmol)在四氯化碳(500mL)中的混合物回流攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)冷卻到室溫、通過(guò)硅膠過(guò)濾、用二氯甲烷洗脫。蒸發(fā)溶劑，得到芐基溴中間體。這種淺黃色固體與6-甲氧基-1-萘酚(23.4g，134.7mmol)、碳酸鉀(37.2g，269mmol)和丙酮(500mL)合并，回流攪拌12小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物通過(guò)硅膠過(guò)濾、用丙酮洗脫、吹脫溶劑、用硅膠柱色譜法精制(10％～30％乙酸乙酯-己烷)，隨后用乙酸乙酯研制，得到20.3g(39％)白色固體狀標(biāo)題化合物mp 138-142℃；1H NMR(CDCl3)δ3.85(3H，s)，3.92(3H，s)，5.22(2H，s)，7.75(1H，dd，J＝2.07Hz，J＝6.50Hz)，7.12-7.17(2H，m)，7.25-7.38(4H，m)，8.22(1H，d，J＝8.80Hz)；MS(ESI)m/z 391/393([M+H]+)；分析C19H16BrFO3計(jì)算值C58.33 H4.12實(shí)測(cè)值C58.15 H3.98中間體122，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯方法A1-〔(2-溴-5-甲氧基芐基)氧〕-6-甲氧基萘(13.03g，34.93mmol)、乙酸鈉(10.3g，105mmol)、和二氯二(三苯膦)鈀(II)(3.68g，5.25mmol)在DMA(600mL)中的混合物在120℃攪拌12小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物傾入1500mL水中。粗固體產(chǎn)物過(guò)濾收集、用硅膠柱色譜法精制(5％～10％乙酸乙酯-己烷)，得到5.76g(56％)白色固體狀標(biāo)題化合物mp 175-178℃；1H NMR(CDCl3)δ3.85(3H，s)，3.92(3H，s)，5.25(2H，s)，6.75(1H，d，J＝2.20Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝8.42Hz)，7.10(1H，d，J＝2.56Hz)，7.13(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝9.15Hz)，7.41(1H，d，J＝8.79Hz)，7.63(1H，d，J＝8.42Hz)，7.74(1H，d，J＝8.79Hz)，8.14(1H，d，J＝9.15Hz)；MS(ESI)m/z 293([M+H]+)；分析C19H16O3計(jì)算值C78.06 H5.52實(shí)測(cè)值C78.01 H5.41中間體138-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯標(biāo)題化合物是通過(guò)使1-〔(2-溴-5-甲氧基芐基)氧〕萘(3.05g，8.89mmol)按照方法A反應(yīng)制備的，得到0.94g(40％)白色固體mp 128-130℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，5.31(2H，s)，6.96-7.02(2H，m)，7.47-7.53(2H，m)，7.60(1H，d，J＝8.55Hz)，7.82(1H，d，J＝8.48Hz)，7.86-7.91(1H，m)，7.94(1H，d，J＝8.65Hz)，8.12-8.15(1H，m)；MS(ESI)m/z 263([M+H]+)；分析C18H14O2計(jì)算值C82.42 H5.38實(shí)測(cè)值C81.98 H5.07中間體149-氟-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯標(biāo)題化合物是通過(guò)使1-〔(2-溴-4-氟-5-甲氧基芐基)氧〕-6-甲氧基萘(10.3g，26.3mmol)按照方法A反應(yīng)制備的，得到4.51g(55％)白色固體mp 201-206℃；1H NNR(CDCl3)δ3.93(3H，s)，3.94(3H，s)，5.23(2H，s)，6.84(1H，d，J＝8.24Hz)，7.11-7.13(2H，m)，7.40-7.443(2H，m)，7.64(1H，d，J＝8.60Hz)，8.11-8.13(1H，m)；MS(ESI)m/z 311([M+H]+)；分析C19H15FO3計(jì)算值C73.54 H4.87實(shí)測(cè)值C73.84 H4.60實(shí)施例1a6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇方法D在190℃，向HCl吡啶鎓(11g)中添加2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(2.48g，8.49mmol)。所得到的溶液在190℃攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)冷卻到室溫，收集于水(400mL)中。將固體產(chǎn)物過(guò)濾收集、用硅膠柱精制，得到2.09g(93％)淺黃色固體。這種材料用制備型逆相HPLC進(jìn)一步精制，得到白色固體狀標(biāo)題化合物mp 248-252℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.19(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.44Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.30Hz)，7.04(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.79Hz)，7.08(1H，d，J＝2.44Hz)，7.34(1H，d，J＝8.79Hz)，7.62(1H，d，J＝8.30Hz)，7.76(1H，d，J＝8.79Hz)，7.96(1H，d，J＝9.28Hz)，9.63(1H，s)，9.78(1H，s)；MS(ESI)m/z 265([M+H]+)；MS(ESI)m/z 263([M-H]-)；分析C17H12O3·0.1H2O計(jì)算值C76.74 H4.62實(shí)測(cè)值C76.57 H4.25
實(shí)施例1b9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(1.29g，4.16mmol)與HCl吡啶鎓(30g)按照方法D反應(yīng)制備的，得到1.01g(86％)褐色固體。這種材料用制備型逆相HPLC進(jìn)一步精制，得到白色固體狀標(biāo)題化合物mp 230-231℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.19(2H，s)，6.89(1H，d，J＝8.73Hz)，7.04-7.10(2H，m)，7.35(1H，d，J＝8.65Hz)，7.64(1H，d，J＝12.48Hz)，7.77(1H，d，J＝8.75Hz)，7.97(1H，d，J＝8.90Hz)，9.89(1H，bs)，10.01(1H，bs)；MS(ESI)m/z 283([M+H]+)；MS(ESI)m/z 281([M-H]-)；分析C17H11FO3·0.75H2O計(jì)算值C69.03 H4.26實(shí)測(cè)值C69.34 H3.70實(shí)施例1c6H-二苯并[c，h]色烯-8-醇方法D標(biāo)題化合物是通過(guò)使8-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(0.73g，2.79mmol)與HCl吡啶鎓(10g)按照方法D反應(yīng)制備的，得到0.63g(91％)白色固體mp 192-194℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.25(2H，s)，6.73(1H，bs)，6.83(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.40Hz)，7.45-7.52(2H，m)，7.58(1H，d，J＝8.58Hz)，7.70(1H，d，J＝8.34Hz)，7.84-7.93(2H，m)，8.10-8.12(1H，m)，9.73(1H，s)；MS(ESI)m/z 247([M-H]-)；分析C17H12O2計(jì)算值C82.24 H4.87實(shí)測(cè)值C81.85 H4.86
中間體1512-溴-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯方法B在0℃，向2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(1.97g，6.75mmol)的乙腈(70mL)混合物中添加NBS(1.44g，8.10mmol)?；旌衔镌?℃攪拌15分鐘、傾入300mL水中、用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑、用硅膠色譜法精制，得到一種白色固體，用50mL異丙醇重結(jié)晶，得到1.77g(71％)白色結(jié)晶固體狀標(biāo)題化合物mp 96-98℃；1H NMR(CDCl3)δ3.86(3H，s)，3.98(3H，s)，5.24(2H，s)，6.74(1H，d，J＝2.444Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.68Hz，J＝8.54Hz)，7.15(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝9.28Hz)，7.43(1H，d，J＝2.41Hz)，7.59(1H，d，J＝8.79Hz)，8.04(1H，s)，8.16(1H，d，J＝9.28Hz)；MS m/z；分析C19H15BrO3計(jì)算值C61.47 H4.07實(shí)測(cè)值C61.66 H3.89中間體1612-溴-9-氟-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯標(biāo)題化合物是通過(guò)使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(1.47g，4.74mmol)與NBS(1.01g，5.69mmol)按照方法B反應(yīng)制備的，得到1.14g(62％)褐色固體mp 139-143℃；1H NMR(CDCl3)δ3.98(3H，s)，3.98(3H，s)，5.22(2H，s)，6.78(1H，d，J＝8.24Hz)，7.16(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝9.15Hz)，7.37(1H，d，J＝12.08Hz)，7.43(1H，d，J＝2.56Hz)，7.92(1H，s)，8.14(1H，dd，J＝0.37Hz，J＝9.15Hz)；MS(ESI)m/z 387/389([M+H]+)；分析C19H14BrFO3計(jì)算值C58.63 H3.63實(shí)測(cè)值C58.82 H3.58
中間體172，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈方法C12-溴-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(8.33g，22.45mmol)、氰化鋅(3.15g，26.9mmol)、和四(三苯膦)鈀(O)(1.30g，1.12mmol)在DMF(100mL)中的混合物在120℃攪拌過(guò)夜。冷卻的反應(yīng)混合物傾入氯化銨溶液(600mL 1N溶液)中，用乙酸乙酯(4×300mL)萃取。合并的有機(jī)層用氯化銨溶液洗滌、通過(guò)硅膠層(silica plug)過(guò)濾、吹脫溶劑、用硅膠柱精制(40％～60％二氯甲烷-己烷)，得到一種黃色固體。這種固體用乙酸乙酯研制，得到5.43g(76％)黃色固體狀標(biāo)題化合物mp 161-165℃；1H NMR(CDCl3)δ3.86(3H，s)，3.98(3H，s)，5.32(2H，s)，6.73(1H，d，J＝2.56Hz)，6.96(1H，dd，J＝2.56Hz)，J＝8.42Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝9.15Hz)，7.37(1H，d，J＝2.20Hz)，7.60(1H，d，J＝8.42Hz)，8.16(1H，s)，8.18(1H，d，J＝9.52Hz)；MS(ESI)m/z 317([M+H]+)；分析C20H15NO3計(jì)算值C75.70 H4.76 N4.41實(shí)測(cè)值C75.53 H4.48 N4.32中間體189-氟-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈標(biāo)題化合物是通過(guò)使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(0.99g，2.55mmol)與氰化鋅(0.45g，3.8mmol)按照方法C反應(yīng)制備的，得到0.55g(64％)白色固體mp＞220℃；1H NMR(CDCl3)δ3.92(3H，s)，3.97(3H，s)，5.29(2H，s)，6.77(1H，d，J＝8.05Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.24Hz)，7.36-7.39(2H，m)，8.04(1H，s)，8.17(1H，d，J＝9.15Hz)；MS m/z；分析C20H14FNO3·0.1H2O計(jì)算值C71.25 H4.25 N4.16實(shí)測(cè)值C70.87 H3.91 N4.31。
實(shí)施例1d2，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈標(biāo)題化合物是通過(guò)使2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-12-腈(5.43g，17.1mmol)與HCl吡啶鎓(50g)按照方法D反應(yīng)制備的，得到3.43g(69％)黃色固體mp＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.34(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.36Hz)，6.82(1H，dd，J＝2.48Hz，J＝8.41Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.11Hz)，7.30(1H，d，J＝2.26Hz)，7.78(1H，d，J＝8.56Hz)，8.11(1H，d，J＝9.14Hz)，8.50(1H，s)，9.81(1H，s)，10.46(1H，bs)；MS(ESI)m/z288([M-H]-)；分析C18H11NO3·0.25H2O計(jì)算值C73.59 H3.95 N4.77實(shí)測(cè)值C73.69 H3.84 N4.53.
實(shí)施例1e9-氟-2，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈標(biāo)題化合物是通過(guò)使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-12-腈(0.40g，1.19mmol)與HCl吡啶鎓(15g)按照方法D反應(yīng)制備的，得到0.32g(88％)白色固體mp＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.29(2H，s)，6.86(1H，d，J＝8.69Hz)，7.16(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.15Hz)，7.28(1H，d，J＝2.32Hz)，7.80(1H，d，J＝12.40Hz0，8.08(1H，d，J＝9.04Hz)，8.49(1H，s)，10.16(1H，s)，10.4(1H，s)；MS(ESI)m/z 306([M-H]-)；分析C18H10FNO3·0.3H2O計(jì)算值C69.14 H3.42 N4.48實(shí)測(cè)值C68.91 H3.10 N4.30。
實(shí)施例1f1-氯-2，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈標(biāo)題化合物是通過(guò)使2，8-二羥基-H-二苯并[c，h]色烯-12-腈(0.20g，0.7mmol)與NCS(0.11g，0.83mmol)在THF(10mL)中在室溫下按照方法B反應(yīng)過(guò)夜制備的，得到0.10g(45％)黃色固體mp＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.34(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.35Hz)，6.83(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.44Hz)，7.37(1H，d，J＝9.22Hz)，7.84(1H，d，J＝8.57Hz)，8.14(1H，d，J＝9.20Hz)，8.53(1H，s)，9.87(1H，bs)，1.12(1H，bs)；MS(ESI)m/z 322/324([M-H]-)；分析C18H10ClNO3·0.75H2O計(jì)算值C64.11 H3.44 N4.33實(shí)測(cè)值C64.45 H3.05 N4.03。
實(shí)施例1g1-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.218g，0.83mmol)與NCS(0.13g，0.99mmol)在THF(10mL)中按照方法B反應(yīng)制備的，得到0.17g(67％)標(biāo)題化合物以及0.025g(10％)12-氯-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇異構(gòu)體。這些異構(gòu)體是用制備型HPLC分離的。
mp 216-218℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.24(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.29Hz)，6.82(1H，dd，J＝2.40Hz，J＝8.39Hz)，7.25(1H，d，J＝9.11Hz)，7.67(2H，d，J＝8.69Hz)，7.94-7.99(2H，m)，9.72(1H，bs)，10.50(1H，bs)；MS(ESI)m/z 297/299([M-H]-)；分析C17H11ClO3·0.25H2O計(jì)算值C67.34 H3.82實(shí)測(cè)值C67.25 H3.89中間體19乙酸2-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯方法EH-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(1.82g，6.49mmol)、吡啶(25mL)和乙酸酐的混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜并傾入水(300mL)中。白色固體產(chǎn)物過(guò)濾收集、用水洗滌、在105℃真空干燥，得到2.11g(88％)白色固體狀標(biāo)題化合物mp 172-173℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.34(3H，s)，5.36(2H，s)，7.17(1H，d，J＝2.44Hz)，7.21(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.29Hz)，7.21(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝9.28Hz)，7.63(1H，d，J＝8.30Hz)，7.68(1H，d，J＝2.44Hz)，7.94(1H，d，J＝8.30Hz)，8.04(1H，d，J＝8.79Hz)，8.18(1H，d，J＝9.28Hz)；MS(ESI)m/z 349([M+H]+)；分析C21H16O5計(jì)算值C72.41 H4.63實(shí)測(cè)值C72.20 H4.67中間體20乙酸2-(乙酰氧基)-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.84g，2.98mmol)與吡啶(10mL)和乙酸酐(10mL)按照方法E反應(yīng)制備的，得到0.93g(86％)白色固體mp 206-212℃；1HNMR(DMSO-d6)δ2.30(3H，s)，2.33(3H，s)，5.30(2H，s)，7.28-7.32(2H，m)，7.59(1H，d，J＝8.61Hz)，7.64(1H，d，J＝2.38Hz)，7.92(1H，d，J＝11.54Hz)，8.01(1H，d，J＝8.79Hz)，8.15(1H，d，J＝9.16Hz)；MS(ESI)m/z 367([M+H]+)；分析C21H15FO5計(jì)算值C68.85 H4.13實(shí)測(cè)值C68.41 H4.06中間體21乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(1.63g，4.68mmol)與NBS(1.00g，5.62mmol)在乙腈(100mL)中在室溫按照方法B反應(yīng)過(guò)夜制備的，得到2.00g(定量產(chǎn)率)白色固體
mp 192-194℃；1H NMR(CDCl3)δ2.33(3H，s)，2.38(3H，s)，5.28(2H，s)，6.99(1H，d，J＝2.20Hz)，7.14(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝8.42Hz)，7.29(1H，dd，J＝2.26Hz，J＝9.11Hz)，7.69(1H，d，J＝8.47Hz)，7.86(1H，d，J＝2.17Hz)，8.09(1H，s)，8.28(1H，d，J＝9.05Hz)；MS m/z；分析C21H15BrO5計(jì)算值C59.04 H3.54實(shí)測(cè)值C58.95 H3.43中間體22乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.26g，0.75mmol)與NCS(0.12g，0.90mmol)在乙腈(10mL)中按照方法B回流反應(yīng)3小時(shí)制備的，得到0.24g(84％)白色固體mp 183-184℃；1H NMR(CDCl3)δ2.33(3H，s)，2.38(3H，s)，5.28(2H，s)，6.99(1H，d，J＝2.27Hz)，7.14(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝8.42Hz)，7.30(1H，dd，J＝2.27Hz，J＝9.07Hz)，7.68(1H，d，J＝8.49Hz)，7.88-7.89(2H，m)，8.29(1H，d，J＝9.08Hz)；MS m/z；分析C21H15ClO5·0.1H2O計(jì)算值C65.58 H3.98實(shí)測(cè)值C65.37 H3.55中間體23乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.47g，1.28mmol)與NBS(0.27g，1.54mmol)在乙腈(25mL)中在室溫下按照方法B反應(yīng)過(guò)夜制備的，得到0.57g(定量產(chǎn)率)白色固體。通過(guò)用乙酸乙酯研制得到一個(gè)分析樣品，得到白色固體狀標(biāo)題化合物mp 190-193℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.36(3H，S)，2.37(3H，s)，5.34(2H，s)，7.34(1H，d，J＝7.69Hz)，7.46(1H，dd，J＝2.23Hz，J＝9.05Hz)，7.81(1H，d，J＝2.18Hz)，8.09(1H，d，J＝11.65Hz)，8.28(1H，d，J＝9.08Hz)，8.47(1H，s)；MS(ESI)m/z 462/464([M+NH4]+)；分析C21H14BrFO5計(jì)算值C56.65 H3.17實(shí)測(cè)值C56.59 H3.16中間體24乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.47g，1.28mmol)與NCS(0.21g，1.54mmol)在乙腈(15mL)中在回流下按照方法B反應(yīng)4小時(shí)制備的，得到0.55g(定量產(chǎn)率)黃色固體。通過(guò)用乙酸乙酯研制得到一個(gè)分析樣品，得到白色固體狀標(biāo)題化合物mp 194-198℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.36(3H，s)，2.37(3H，s)，5.37(2H，s)，7.34(1H，d，J＝7.66Hz)，7.48(1H，dd，J＝2.16Hz，J＝9.06Hz)，7.85(1H，d，J＝2.07Hz)，8.08(1H，d，J＝11.61Hz)，8.28(1H，d，J＝9.10Hz)，8.32(1H，s)，MS(ESI)m/z 399/401([M-H]-)；分析C21H14ClFO5計(jì)算值C62.93 H3.52實(shí)測(cè)值C62.53 H3.53實(shí)施例1h12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇方法F乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(1.40g，3.28mmol)的甲醇鈉(40mL 1N甲醇溶液)溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。將該溶液傾入100mL 1N HCl中，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有機(jī)層用碳酸氫鈉溶液洗滌、用食鹽水洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑、用硅膠色譜法精制(40％乙酸乙酯-己烷)，得到0.91g(81％)白色固體狀標(biāo)題化合物mp 178-180(分解)、160℃以上變色；1H NMR(DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.32Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.39Hz)，7.12(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.03Hz)，7.34(1H，d，J＝2.28Hz)，7.58(1H，d，J＝8.53Hz)，8.04(1H，d，J＝9.07Hz)，8.14(1H，s)，9.73(1H，bs)，10.20(1H，bs)；MS(ESI)m/z 341/343([M-H]-)；分析C17H11BrO3計(jì)算值C59.50 H3.23實(shí)測(cè)值C59.33 H3.26實(shí)施例1i12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.18g，0.47mmol)與甲醇鈉溶液(75mL 1N甲醇溶液)按照方法F反應(yīng)制備的，得到0.13g(93％)褐色固體。這種材料用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到淺桃紅色固體狀標(biāo)題化合物mp 212-216℃(d)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.33Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.39Hz)，7.14(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝9.09Hz)，7.35(1H，d，J＝2.31Hz)，7.68 (1H，d，J＝8.54Hz)，7.98(1H，s)，8.05(1H，d，J＝9.07Hz)，9.74(1H，bs)，10.19(1H，bs)；MS(ESI)m/z 299/301([M+H]+)；MS(ESI)m/z 297/299([M-H]-)；分析C17H11ClO3·0.1H2O計(jì)算值C67.94 H3.76實(shí)測(cè)值C67.77 H3.67實(shí)施例1j12-溴-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.48g，1.08mmol)與甲醇鈉溶液(40mL 1N甲醇溶液)按照方法F反應(yīng)制備的，用逆相制備型HPLC精制得到0.20g(53％)白色固體狀標(biāo)題化合物mp 194-197℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.22(2H，s)，6.89(1H，d，J＝8.68Hz)，7.13(1H，dd，J＝2.31Hz，J＝9.05Hz)，7.35(1H，d，J＝2.27Hz)，7.75(1h，D，J＝12.46Hz)，8.04(1H，d，J＝9.06Hz)，8.19(1H，s)，10.21(2H，bs)；MS(ESI)m/z 359/361([M-H]-)；分析C17H10BrFO3·0.75H2O計(jì)算值C54.50 H3.09實(shí)測(cè)值C54.85 H2.89實(shí)施例1k12-氯-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.44g，1.10mmol)與甲醇鈉溶液(40mL 1N甲醇溶液)按照方法F反應(yīng)制備的，得到0.30g(86％)褐色固體。此材料用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到白色固體狀標(biāo)題化合物mp 215-220℃(dec)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.22(2H，s)，6.89(1H，d，J＝8.68Hz)，7.15(1H，dd，J＝2.22Hz，J＝9.05Hz)，7.35(1H，d，J＝2.13Hz)，7.74(1H，d，J＝12.42Hz)，8.03-8.06(2H，m)，10.21(2H，bs)；MS (ESI)m/z 315/317([M-H]-)；分析C17H10ClFO3·0.25H2O計(jì)算值C63.57 H3.29實(shí)測(cè)值C63.22 H3.27實(shí)施例1l12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇乙酸2-(乙酰氧基)-12-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(2.06g，6.00mmol)、CuBr(0.86g，6.00mmol)、甲醇鈉(15mL 25％甲醇溶液)和DMF(30mL)的混合物回流加熱3小時(shí)。將反應(yīng)冷卻到室溫、傾入HCl溶液(200mL 2N)中、用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有機(jī)層用碳酸氫鈉溶液洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑、用硅膠柱色譜法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到1.11g(63％)褐色固體狀標(biāo)題化合物mp 224℃(分解)；1HNMR(DMSO-d6)δ3.98(3H，s)，5.12(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.47Hz)，6.81(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝8.24Hz)，7.05(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.06Hz)，7.18(1H，s)，7.35(1H，d，J＝2.47Hz)，7.68(1H，d，J＝8.51Hz)，7.92 91H，d，J＝9.06Hz)，9.63(1H，s)，9.80(1H，s)；MS(ESI)m/z 293([M-H]-；MS(ESI)m/z 295([M+H]+)；分析C18H14O4·0.3H2O計(jì)算值C72.14 H4.90實(shí)測(cè)值C71.88 H4.74中間體25乙酸2-(乙酰氧基)-12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使12-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(1.11g，3.78mmol)與吡啶和乙酸酐按照方法E反應(yīng)制備的，得到1.11g(78％)淺黃色固體mp 126-134℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.33(3H，s)，4.05(3H，s)，5.28(2H，s)，7.16(1H，d，J＝2.32 Hz)，7.22(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.34Hz)，7.35(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.04Hz)，7.42(1H，s)，7.80(1H，m)，8.01(1H，d，J＝8.58Hz)，8.14(1H，dd，J＝0.35Hz，J＝9.04Hz)；分析C22H18O6·0.25H2O計(jì)算值C69.01 H4.87實(shí)測(cè)值C69.08 H4.88實(shí)施例1m11-氯-12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸2-(乙酰氧基)-12-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.41g，1.08mmol)與NCS(0.17g，1.30mmol)在乙腈(10mL)中按照方法B反應(yīng)隨后按照方法F脫?；苽涞?，得到0.050g(14％)桃色固體mp＞230℃變色；1H NMR(DMSO-d6)δ3.87(3H，s)，5.06(2H，s)，6.80(1H，d，J＝2.35Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.55Hz，J＝8.63Hz)，7.11(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝9.06Hz)，7.23(1H，d，J＝2.30Hz)，8.01(1H，d，J＝9.05Hz)，8.11(1H，d，J＝8.60Hz)，9.81(1H，bs)，10.14(1H，bs)；MS(ESI)m/z 329/331([M+H]+)；MS(ESI)m/z 327/329([M-H]-)；分析C18H13ClO4·0.25H2O計(jì)算值C64.87 H4.08實(shí)測(cè)值C64.90 H4.09實(shí)施例1n12-甲基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(3.05g，8.89mmol)、四甲基錫(2.39g，13.3mmol)、和二氯二(三鄰甲苯膦)鈀(II)(0.70g，0.9mmol)在DMF(100mL)中的混合物在80℃在氮?dú)庀聰嚢?6小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻到室溫、傾入水(250mL)中、用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有機(jī)層用氯化銨溶液(50mL)洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑、用硅膠柱色譜法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到2.28g(92％)淺棕色固體。一個(gè)樣品用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到灰白色固體狀標(biāo)題化合物mp 220-224℃(分解)；1H NMR(丙酮-d6)δ2.56(3H，s)，5.20(2H，s)，6.78(1H，d，J＝2.74Hz)，6.89(1H，dd，J＝2.74Hz，J＝8.24Hz)，7.12(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.06Hz)，7.25(1H，d，J＝2.20Hz)，7.64-7.66(2H，m)，8.09(1H，d，J＝8.79Hz)，8.46(1H，s)，8.60(1H，s)；MS(ESI)m/z 279([M+H]+)；MS(ESI)m/z 277([M-H]-)；分析C18H14O3·0.30H2O計(jì)算值C76.20 H5.19實(shí)測(cè)值C75.90 H4.75
實(shí)施例1o12-乙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇向12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.63g，1.84mmol)、二氯二(三鄰甲苯膦)鈀(II)(0.07g，0.09mmol)和二乙氧基乙烷(10mL)的混合物中添加三丁基乙烯基錫(0.87g，2.76mmol)。混合物在110℃攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻到室溫、傾入氯化銨溶液(100mL 1N)中、用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有機(jī)層用氯化銨溶液(100mL)洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑、用硅膠柱色譜法(30％乙酸乙酯-己烷)精制，得到0.40g(75％)淺黃色固體狀標(biāo)題化合物mp＞220℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.20(2H，s)，5.40(1H，dd，J＝1.65Hz，J＝10.99Hz)，5.87(1H，dd，J＝1.65Hz，J＝17.58Hz)，6.71(1H，d，J＝2.75Hz)，6.81(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝8.51Hz)，7.08(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.06Hz)，7.26-7.31(2H，m)，7.72(1H，d，J＝8.79Hz)，7.94(1H，s)，8.01(1H，d，J＝9.34Hz)，9.63(1H，s)，9.85(1H，s)；MS(ESI)m/z 291([M+H]+)；MS(ESI)m/z 289([M-H]-)；分析C19H14O3·0.25H2O計(jì)算值C77.41 H4.96實(shí)測(cè)值C77.34 H4.77實(shí)施例1p12-乙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇向12-乙烯基-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.19g，0.66mmol)的乙酸乙酯(30mL)溶液中添加Pd/C(0.23g)。燒瓶連接一個(gè)充了氫氣的氣球，懸浮液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)物通過(guò)硅藻土(Celite)過(guò)濾、用硅膠柱色譜法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到0.11g(58％)淺棕色固體，用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到淺紅紫色固體狀標(biāo)題化合物mp 184-192℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.31(3H，t，J＝7.48Hz)，2.89-2.95(2H，m)，5.16(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.55Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.49Hz，J＝8.40Hz)，7.04(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.04Hz)，7.20(1H，d，J＝2.21Hz)，7.61-7.63(2H，m)，8.00(1H，d，J＝9.04Hz)，9.58(1H，s)，9.74(1H，s)；MS(ESI)m/z 291([M-H]-)；分析C19H16O3·0.10H2O計(jì)算值C77.59 H5.55實(shí)測(cè)值C77.37 H5.58實(shí)施例1q12-噻吩-3-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇方法G12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.51g，1.49mmol)、3-噻吩硼酸(0.38g，3mmol)、四(三苯膦)鈀(0.17g，0.15mmol)、碳酸鈉溶液(1.5mL 2N)、水(1mL)、和DME(5mL)的混合物在85℃攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)物冷卻到室溫、傾入水(100mL)中、用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有機(jī)層用食鹽水洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑、用硅膠柱色譜法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到0.43g(84％)褐色固體。此材料用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到褐色固體狀標(biāo)題化合物mp 179-182℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.38Hz)，6.78(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.33Hz)，7.06(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.92Hz)，7.21(1H，d，J＝2.38Hz)，7.63-7.67(2H，m)，7.72-7.73(2H，m)，8.05(1H，d，J＝8.93Hz)，9.63(1H，s)，9.75(1H，s)；MS(ESI)m/z 345([M-H]-)；分析C21H14O3S·0.25C2H3N·0.50H2O計(jì)算值C70.62 H4.34 N0.96實(shí)測(cè)值C70.34 H4.41 N1.39。
中間體2612-噻吩-2-基-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯12-溴-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(0.53g，1.43mmol)、2-噻吩硼酸(0.2g，1.57mmol)、四(三苯膦)鈀(0.08g，0.07mmol)、碳酸鈉溶液(2mL 2N)、水(1mL)和DME(20mL)的混合物按照方法G在85℃反應(yīng)過(guò)夜，得到0.48g(90％)褐色固體mp 110-112℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.80(3H，s)，3.81(3H，s)，5.33(2H，s)，6.95-6.99(2H，m)，7.22-7.27(2H，m)，7.39-7.40(1H，m)，7.48(1H，d，J＝2.44hz)，7.70(1H，dd，J＝0.98，5.37Hz)，7.76(1H，d，J＝8.3hz)，7.92(1H，s)，8.16(1H，d，J＝9.28Hz)；MS(ESI)m/z 345([M-H]-)分析C23H18O3S計(jì)算值C73.77 H4.85實(shí)測(cè)值C74.43 H4.78實(shí)施例1r12-噻吩-2-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使中間體26與HCl吡啶鎓(2.85g)按照方法D反應(yīng)制備的，得到0.3g(88％)淺綠黃色固體mp 191-193℃；；1H NMR(DMSO-d6)δ5.25(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.75Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.75，8.24Hz)，7.90(1H，dd，J＝2.20，9.06Hz)，7.24-7.29(2H，m)，7.37(1H，d，J＝2.20Hz)，7.65-7.68(2H，m)，7.79(1H，s)，8.07(1H，d，J＝8.79Hz)，9.66(1H，bs)，9.85(1H，bs)；HRMS計(jì)算值C23H18O3S+H(M+1)375.10495實(shí)測(cè)值375.10497。
分析C21H14O3S·0.65H2O計(jì)算值C70.43 H4.30實(shí)測(cè)值C70.02 H3.85實(shí)施例1s12-丁基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(1.07g，3.12mmol)與丁基硼酸(0.46g，4.55mmol)按照方法G反應(yīng)制備的，得到0.12g(12％)淺黃色固體，用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到淺紅紫色固體mp 118-121℃；1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(3H，t，J＝7.30Hz)，1.38-1.47(2H，m)，1.62-1.69(2H，m)，2.90(2H，t，J＝7.59Hz)，5.16(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.09Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.39Hz)，7.04(1H，dd，J＝2.20Hz，J＝9.04Hz)，7.20(1H，d，J＝2.09Hz)，7.60-7.62(2H，m)，7.99(1H，d，J＝9.04Hz)，9.58(1H，s)，9.73(1H，s)；MS(ESI)m/z 321([M+H]+)；MS(ESI)m/z 319([M-H]-)；分析C21H20O3·0.10H2O計(jì)算值C78.29 H6.32實(shí)測(cè)值C78.13 H6.30中間體272，8-二甲氧基-12-丙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯12-溴-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯(1.4g，3.78mmol)、烯丙基三丁基錫(1.76mL，5.68mmol)、二氯二(三苯膦)鈀(II)(133mg，0.19mmol)、和間二甲苯(38mL)的混合物在130℃攪拌加熱1小時(shí)。TLC和LC-MS監(jiān)測(cè)表明反應(yīng)沒(méi)有完成?；旌衔锿ㄟ^(guò)Celite過(guò)濾，向反應(yīng)物中添加新鮮二氯二(三苯膦)鈀(II)(133mg，0.19mmol)催化劑，混合物在130℃加熱2小時(shí)。TLC和LC-MS監(jiān)測(cè)表明反應(yīng)仍未完成。因此，過(guò)濾和新鮮催化劑的添加再重復(fù)2次?；旌衔锿ㄟ^(guò)Celite過(guò)濾、吹脫溶劑、用硅膠柱色譜法(20％～40％二氯甲烷-己烷)精制，得到0.84g(67％)黃色固體狀標(biāo)題化合物1H NMR(DMSO-d6)δ2.02(3H，dd，J＝6.57Hz，J＝1.73Hz)，3.86(3H，s)，3.96(3H，s)，5.24(2H，s)，6.17-6.18(1H，m)，6.75(1H，d，J＝2.52Hz)，6.94(1H，dd，J＝8.57Hz，J＝2.61Hz)，7.01(1H，J＝15.43Hz，J＝1.54Hz)，7.14(1H，dd，J＝9.14Hz，J＝2.52Hz)，7.31(1H，d，J＝2.44Hz)，7.69(1H，d，J＝8.57Hz)，7.81(1H，s)，8.17(1H，d，J＝9.16Hz)；MS(ESI)m/z 333(M+H)+。
中間體282，8-二甲氧基-12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯2，8-二甲氧基-12-丙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯(460mg，1.38mmol)、鈀(92mg，以10％載于活性炭上)和36mL乙酸乙酯的混合物，在氫氣球下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)Celite過(guò)濾和濃縮，給出430mg(94％)淺棕色固體狀標(biāo)題化合物。通過(guò)用逆相制備型HPLC進(jìn)一步精制，得到一種分析樣品mp 88-90℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(3H，t，J＝7.31Hz)，1.68-1.80(2H，m)，2.98(2H，t，J＝7.29Hz)，3.81(3H，s)，3.91(3H，s)，5.25(2H，s)，6.93(1H，d，J＝2.53Hz)，6.98 (1H，dd，J＝8.46Hz，J＝2.04Hz)，7.17(1H，dd，J＝9.20Hz，J＝2.38Hz)，7.28(1H，d，J＝2.36Hz)，7.72(1H，s)，7.77(1H，d，8.57Hz)，8.08(1H，d，J＝9.14Hz)；MS(ESI)m/z 335 (M+H)+。
分析C22H22O3計(jì)算值C79.02 H6.63實(shí)測(cè)值C78.48 H6.75實(shí)施例1t12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇向2，8-二甲氧基-12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯(220mg，0.658mmol)和CH2Cl2(33mL)的混合物中在0℃徐徐添加三溴化硼(3.95mL 1N CH2Cl2溶液，3.95mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌3小時(shí)、邊在冰水浴中攪拌邊向該混合物中注射4mL水。減壓下脫除該混合物中的CH2Cl2。所得到的混合物用乙酸乙酯(×3)萃取。合并的有機(jī)層用食鹽水洗滌、用硫酸鈉干燥、過(guò)濾、吹脫溶劑，給出120mg(60％)白色固體狀標(biāo)題化合物。通過(guò)用硅膠柱色譜法(20％～30％乙酸乙酯-己烷)精制、然后用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶，得到分析樣品mp 86-95℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.00(3H，t，J＝7.24Hz)，1.63-1.76(2H，m)，2.87(2H，t，J＝7.22Hz)，5.16(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.28Hz)，6.79(1H，dd，J＝8.39Hz，J＝2.28Hz)，7.03(1H，dd，J＝9.02Hz，J＝2.18Hz)，7.20(1H，d，J＝2.10Hz)，7.60(1H，s)，7.62(1H，d，J＝7.85Hz)，7.99(1H，d，J＝9.01Hz)，9.61(1H，s)，7.76(1H，s)；MS(ESI)m/z 305(M-H)-，307(M+H)+；HRMS計(jì)算值C20H18O3，306.1256；實(shí)測(cè)值(ESI)，305.11827。
分析C20H18O3計(jì)算值C78.41 H5.92實(shí)測(cè)值C72.79 H6.62中間體305-甲氧基-1-萘酚在一個(gè)2000mL燒瓶中，5-甲氧基-1-四氫萘酮(30.0g，170.2mmol)和10％Pd/C(40g)在1000mL對(duì)繖花烴中的混合物進(jìn)行回流并用LC-MS監(jiān)測(cè)，直至不再有起始原料存在(大約24小時(shí))。然后，將混合物冷卻到室溫、通過(guò)硅膠/Celite層過(guò)濾、真空濃縮，得到26.6g(90％)灰白色固體1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.90(3H，s)，6.83(1H，appd，J＝7.5Hz)，6.89(1H，appd，J＝7.7Hz)，7.24(1H，appt)，7.30(1H，appt)，7.54(1H，appd，J＝8.5Hz)，7.65(1H，d，J＝8.5Hz)，9.98(1H，s)。
中間體311-〔(2-溴-5-甲氧基芐基)氧〕-5-甲氧基萘向5-甲氧基-1-萘酚(26.0g，149mmol)、三苯膦(43.3g，165mmol)、(2-溴-5-甲氧基苯基)甲醇(36.0g，166mmol)、和THF(500mL)的混合物中滴加DEAD(28.7g在50mL THF中，165mmol)。然后，反應(yīng)物攪拌過(guò)夜、濃縮、溶于少量乙醚中、冷卻到大約-30℃生成一種白色沉淀(PPh3O和還原的DEAD)，將后者濾出。將濾液濃縮、溶于少量二氯甲烷中、冷卻到-30℃。沉淀物在硅膠層上濾出、濾液濃縮，得到28.7g(51.5％)白色固體。
mp120-121℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.77(3H，s)，3.96(3H，s)，5.26(2H，s)，6.94(1H，dd，J＝8.8Hz，3.1Hz)，7.01(1H，d，J＝7.6Hz)，7.11(1H，d，J＝7.6Hz)，7.28(1H，d，J＝3.1Hz)，7.42(2H，m)，7.61(1H，d，J＝8.8Hz)，7.75(2H，appd)；MS m/z 373/275(Br圖案)(M+H+)。
分析C19H17BrO3計(jì)算值C61.14 H4.59實(shí)測(cè)值C60.86 H4.42
中間體321，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯向一個(gè)2000mL回收燒瓶中添加1-〔(2-溴-5-甲氧基芐基)氧〕-5-甲氧基萘(3.0g，8.03mmol)、乙酸鉀(2.4g，無(wú)水，24.10mmol)、PdCl2(PPh3)2(1.12g，1.60mmol)、和N，N-二甲基乙酰胺(500mL，99％)。該燒瓶用氮?dú)獯祾摺⒃?30℃加熱12小時(shí)、在高真空下濃縮。然后將暗色固體溶解于乙醚/CH2Cl2(1/1，300mL)中并通過(guò)硅膠/Celite層過(guò)濾。減壓下蒸發(fā)，得到2.32g(99％)褐色固體狀產(chǎn)物。mp 166-167℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，3.97(3H，s)，5.30(2H，s)，6.98(3H，m)，7.42(1H，t，J＝8.1Hz)，7.69(1H，d，J＝8.5Hz)，7.81(2H，appd，J＝8.6Hz)，7.91(1H，d，J＝8.9Hz)；MS m/z 293(M+H+)。
分析C19H16O3計(jì)算值C78.06 H5.52實(shí)測(cè)值C77.67 H5.28實(shí)施例1u6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使1，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯(1.0g，3.42mmol)與鹽酸吡啶鎓(5.0g，43.3mmol)按照方法D反應(yīng)制備的，得到0.93g(99％)白色泡沫體。mp 213-214℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 5.21(2H，s)，6.72(1H，d，J＝1.9Hz)，6.82(2H，m)，7.27(1H，t，J＝7.9Hz)，7.54(1H，d，J＝8.3Hz)，7.68(1H，d，J＝8.4Hz)，7.78(2H，brs)，9.72(1H，s)，10.09(1H，s)；MS m/z 263(M-H+)；分析C17H12O3計(jì)算值C77.26 H4.58實(shí)測(cè)值C76.62 H4.42中間體33乙酸1-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯標(biāo)題化合物是通過(guò)使6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(1.5g，5.68mmol)、乙酸酐(25mL)、和吡啶(25mL)按照方法E反應(yīng)制備的，產(chǎn)生1.88g(95％)白色固體狀產(chǎn)物。mp 142-143℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.47(3H，s)，5.38(2H，s)，7.18(1H，d，J＝2.0 Hz)，7.22(1H，dd，J＝8.4Hz，2.3Hz)，7.33(1H，d，J＝7.1Hz)，7.55(1H，t，J＝8.0Hz)，7.60(1H，d，J＝8.9Hz)，7.95(1H，d，J＝8.4Hz)，8.06(2H，appt)；MS m/z 349(M+H+)；分析C21H16O5計(jì)算值C72.41 H4.63實(shí)測(cè)值C72.06 H4.72實(shí)施例1v12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸1-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(360mg，1.03mmol)與NCS(210mg，1.57mmol)和無(wú)水DMF(20mL)按照方法B在室溫下反應(yīng)2.0小時(shí)、隨后在1小時(shí)內(nèi)加熱到100℃制備的。反應(yīng)物在減壓下濃縮、將固體溶于MeOH(30mL)中。通入NH3鼓泡0.5小時(shí)，同時(shí)用LC-MS監(jiān)測(cè)乙酸根脫除。將反應(yīng)物濃縮成一種暗色污泥、溶解于EtOAc中、通過(guò)硅膠層過(guò)濾，產(chǎn)生200mg(65％)泡沫體。用硅膠柱色譜法(1∶1＝EtOAc∶己烷)產(chǎn)生一種分析樣品。mp～185℃分解；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.3Hz)，6.81(1H，dd，J＝8.6Hz，2.6Hz)，6.92(1H，dd，J＝7.5Hz，1.0Hz)，7.33(1H，appt)，7.62(1H，dd，J＝8.5Hz，1.0Hz)，7.69(1H，d，J＝8.6Hz)，7.79(1H，s)，9.78(1H，s)，10.11(1H，s)；MS m/z 297/399(Cl圖案)(M-H+)。
分析C17H11ClO3計(jì)算值C68.35 H3.71實(shí)測(cè)值C67.85 H3.61實(shí)施例1w12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇標(biāo)題化合物是通過(guò)使乙酸1-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(510mg，1.46mmol)、NBS(315mg，1.77mmol)、和無(wú)水DMF(30mL)在室溫下按照方法B反應(yīng)1.5小時(shí)制備的。反應(yīng)物在減壓下濃縮、溶解于MeOH(30mL)中、通入NH3鼓泡1.5小時(shí)，同時(shí)用LC-MS監(jiān)測(cè)乙酸根脫除。反應(yīng)物濃縮成一種暗色污泥、用硅膠柱色譜法(1∶1＝EtOAc∶己烷)精制，得到340mg(68％)褐色固體狀產(chǎn)物。mp130℃以上分解；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.72(1H，d，J＝1.9Hz)，6.81(1H，dd，J＝8.2Hz，2.5Hz)，6.92(1H，dd，J＝7.7Hz，1.1Hz)，7.33(1H，t，J＝8.0Hz)，7.64(1H，dd，J＝8.5Hz，1.1Hz)，7.68(1H，d，J＝8.5Hz)，8.01(1H，s)，9.78(1H，s)，10.15(1H，s)；MS m/z 341/343(Br圖案)(M-H+)。
分析C17H11BrO3計(jì)算值C59.50 H3.23實(shí)測(cè)值C59.23 H3.34實(shí)施例1x1，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12腈在一個(gè)10mL燒瓶中，添加溴化物(165mg，0.48mmol)、Pd(PPh3)(28mg，0.024mmol)、氰化鋅(68mg，0.58mmol)、和DMF(5mL)?；旌衔镌?20℃加熱12小時(shí)，此后就沒(méi)有任何反應(yīng)發(fā)生。然后添加氰化銅(43mg，0.48mmol)、用LC-MS監(jiān)測(cè)1小時(shí)后反應(yīng)完成。反應(yīng)物冷卻后，用EtOAc稀釋、通過(guò)硅膠層、濃縮、用制備型逆相HPLC(水/CH3CN 0.1％TFA)精制、減壓濃縮成一種白色固體。該固體用干燥噴槍(100℃)干燥過(guò)夜，產(chǎn)生30mg(21％)白色固體狀產(chǎn)物。mp260℃以上分解1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.06(2H，m)，2.60(2H，t，J＝6.5Hz)，2.99(2H，t，J＝5.9Hz)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz)，7.57(4H，m)，7.86(1H，d，J＝8.7Hz)，9.74(1H，s)；MS m/z 237(M-H+)。
分析C16H14O2計(jì)算值C80.65 H5.92實(shí)測(cè)值C79.04 H5.60實(shí)施例1y和實(shí)施例1z2-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(實(shí)施例1y)和4-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(實(shí)施例1z)標(biāo)題化合物是通過(guò)使6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(150mg，0.57mmol)、NCS(84mg，0.63mmol)、和THF(8ml)按照方法B在室溫反應(yīng)3小時(shí)和在60℃反應(yīng)5小時(shí)制備的。反應(yīng)物用制備型HPLC精制，得到35mg 2-氯化合物和10mg 4-氯化合物(總產(chǎn)率27％)。
2-氯化合物mp 181-182℃分解；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.24(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.3Hz)，6.83(1H，dd，J＝8.4Hz，2.4Hz)，7.40(1H，d，J＝9.0Hz)，7.61(1H，d，J＝9.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.5Hz)，7.64(1H，d，J＝8.9)，7.91(1H，d，J＝9.0Hz)，9.77(1H，s)，10.01(1H，s)；HRMS準(zhǔn)確值297.03239(M-H+)實(shí)測(cè)值297.03240(0.02ppm)；分析C17H11ClO3計(jì)算值C68.35 H3.71實(shí)測(cè)值C67.66 H3.684-氯化合物mp；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.14(2H，s)，6.73(1H，d，J＝2.4Hz)，6.77(1H，d，J＝8.2Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5Hz，2.5Hz)，7.31(1H，d，J＝8.2Hz)，7.70(1H，d，J＝8.5Hz)，7.87(2H，appq)，9.78(1H，s)，9.77(1H，s)，10.40(1H，s)；HRMS準(zhǔn)確值297.03239(M-H+)實(shí)測(cè)值297.03236(-0.11ppm)分析C17H11ClO3計(jì)算值C68.35 H3.71實(shí)測(cè)值C66.12 H3.5權(quán)利要求
1.有如下結(jié)構(gòu)的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽 式中R1和R2各自獨(dú)立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C1-6烷氧基、或鹵素；其中，R1或R2的烷基或烯基片段可以任選地有羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；先決條件是R1或R2中至少一個(gè)是羥基；R3、R4、R5、R6、和R7各自獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、-CN、C2-7烯基、C2-7炔基、-CHO、苯基、或者一個(gè)有1～4個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5員或6員雜環(huán)式環(huán)；其中，R4、R5、R6、或R7中的烷基或烯基片段可以任選地有羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；其中，R4或R5的苯基片段可以任選地有選自下列的相同或不同取代基的一、二、或三取代C1-6烷基、C2-7烯基、鹵素、羥基、C1-6烷氧基、-CN、-NO2、氨基、C1-6烷基氨基、每個(gè)烷基1-6個(gè)碳原子的二烷基氨基、硫、C1-6烷硫基、C1-6烷亞磺?；1-6烷磺?；?、C2-7烷氧羰基、C2-7烷羰基、或苯甲?；?。
2.按照權(quán)利要求1的化合物，式中R6和R7各自獨(dú)立地是氫或鹵素。
3.按照權(quán)利要求1或2的化合物，式中R6是氫或氟。
4.按照權(quán)利要求1～3中任何一項(xiàng)的化合物，式中R4和R5各自獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、C2-7烯基、-CN、呋喃基、或噻吩基。
5.按照權(quán)利要求1～4中任何一項(xiàng)的化合物，式中R4不是氫。
6.按照權(quán)利要求5的化合物，式中R4選自氰基、氯、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙烯基、噻吩-2-基和噻吩-3-基。
7.按照權(quán)利要求1～6中任何一項(xiàng)的化合物，式中R5是氫或鹵素。
8.按照權(quán)利要求1～7中任何一項(xiàng)的化合物，式中R2和R3各自獨(dú)立地是氫、鹵素、或羥基。
9.按照權(quán)利要求1～8中任何一項(xiàng)的化合物，式中R2是羥基或鹵素。
10.按照權(quán)利要求1～8中任何一項(xiàng)的化合物，式中R2是羥基。
11.按照權(quán)利要求1～10中任何一項(xiàng)的化合物，式中R3是氫或鹵素。
12.按照權(quán)利要求1～11中任何一項(xiàng)的化合物，式中R1是氫、羥基或鹵素。
13.按照權(quán)利要求1的化合物，該化合物是下列之一a)6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；b)9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；c)2，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈；d)9-氟-2，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈；e)1-氯-2，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-1 2-腈；f)1-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；g)12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；h)12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；i)12-溴-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；j)12-氯-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；k)12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；l)11-氯-12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；m)12-甲基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；n)12-乙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；o)12-乙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；p)12-噻吩-3-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；q)12-噻吩-2-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；r)12-丁基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；s)12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；t)6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；u)12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；v)12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；w)1，8-二羥基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈；x)2-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；y)4-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；或其醫(yī)藥上可接受的鹽。
14.一種化合物，是6H-二苯并[c，h]色烯-8-醇或其醫(yī)藥上可接受的鹽。
15.治療或抑制哺乳動(dòng)物前列腺炎或間質(zhì)性膀胱炎的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
16.治療或抑制哺乳動(dòng)物炎性腸道疾病、Crohn′s病、潰瘍性直腸炎或結(jié)腸炎的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
17.治療或抑制哺乳動(dòng)物前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、多囊性卵巢綜合癥、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳腺疾病、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤或astioblastomia的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
18.降低哺乳動(dòng)物的膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥；高脂血癥；心血管疾??；動(dòng)脈粥樣硬化；高血壓；外周血管疾病；再狹窄或血管痙攣；或抑制由導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的血管損傷的細(xì)胞因素引起的血管壁損傷的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
19.給有下述需要的哺乳動(dòng)物提供認(rèn)知增強(qiáng)或神經(jīng)保護(hù)；或治療或抑制老年性癡呆、阿爾茨海默氏疾病、認(rèn)知衰退、中風(fēng)、焦慮或神經(jīng)退行性變的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
20.治療或抑制哺乳動(dòng)物中自由基誘導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
21.治療或抑制哺乳動(dòng)物陰道或陰門(mén)萎縮，萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、性交疼痛、排尿困難、尿頻、尿失禁及尿道感染的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
22.治療或抑制哺乳動(dòng)物血管舒縮癥狀的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
23.抑制哺乳動(dòng)物受孕的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
24.治療或抑制哺乳動(dòng)物關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
25.按照權(quán)利要求24的方法，其中所述的關(guān)節(jié)炎是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或脊椎關(guān)節(jié)病。
26.治療或抑制哺乳動(dòng)物關(guān)節(jié)腫脹或糜爛以及繼發(fā)于關(guān)節(jié)鏡或外科手術(shù)的關(guān)節(jié)損傷的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
27.治療或抑制哺乳動(dòng)物牛皮癬或皮炎的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
28.治療或抑制哺乳動(dòng)物缺血、再灌注損傷、哮喘、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、膿毒、出血性休克、黃斑退行性變或II型糖尿病的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
29.治療或抑制哺乳動(dòng)物子宮內(nèi)膜異位癥的方法，該方法包括給所述哺乳動(dòng)物提供有效劑量的如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的化學(xué)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
30.一種醫(yī)藥組合物，包含權(quán)利要求1～14中任何一項(xiàng)所要求保護(hù)的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽，以及一種醫(yī)藥載體。
31.權(quán)利要求1所定義的式(I)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽的制備方法，包含下列之一a)使式II化合物脫烷基化 式中R是C1-6烷基，且R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7同權(quán)利要求1中的定義，給出式I化合物；或b)使式III化合物脫酰基化 式中R′是一個(gè)?；鏑2-7鏈烷?；缫阴；?，R11是R1或一個(gè)酰氧基例如C2-7鏈烷酰基如乙?；?，R12是R2或一個(gè)酰氧基例如C2-7鏈烷酰基如乙?；?，且R3、R4、R5、R6、R7同權(quán)利要求1中的定義，給出式I化合物；或c)使必要時(shí)有保護(hù)的式IV的12-溴化合物 式中R1、R2、R3、R5、R6和R7同權(quán)利要求1中的定義，與下式的反應(yīng)性衍生物反應(yīng)R4-L式中L是一種硼酸或丁基錫衍生物，且R4是C1-6烷基、C2-7烯基、或一種有1～4個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5員或6員雜環(huán)式環(huán)；并脫除任何保護(hù)基，給出對(duì)應(yīng)的式(I)化合物；或d)用一種鹵化劑將權(quán)利要求1定義的、必要時(shí)有保護(hù)的式I化合物鹵化 式中R1、R2、R3、R4和R5中至少一個(gè)是氫，隨后必要時(shí)脫保護(hù)，給出一種式中R1、R2、R3和R4中至少一個(gè)是鹵素的式I化合物；或e)用一種腈化劑例如氰化鋅將權(quán)利要求1定義的、必要時(shí)有保護(hù)的式I化合物腈化 式中R4是溴，隨后必要時(shí)脫保護(hù)，給出一種式中R4是氰基的式I化合物；或f)使一種堿性的式I化合物轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接受的鹽，或反之亦然。
全文摘要
本發(fā)明提供有如下結(jié)構(gòu)的式(I)的雌激素受體調(diào)整劑，式中R
文檔編號(hào)A61K31/35GK1602307SQ02824879
公開(kāi)日2005年3月30日 申請(qǐng)日期2002年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月13日
發(fā)明者R·E·穆肖, R·J·埃德薩爾, S·T·科恩, H·A·哈里斯, J·C·小凱斯, L·M·阿爾伯特 申請(qǐng)人:惠氏公司