專利名稱：可溶的cd40l(cd154)作為動脈粥樣硬化的疾病的先兆標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明敘述了在沒有現(xiàn)在的疾病的信號或癥狀的個體和在非吸煙者中確定心血管紊亂如心肌梗死和中風(fēng)的危險的診斷檢測的新用途。另外，本發(fā)明敘述了輔助醫(yī)生確定哪個危險個體將優(yōu)先取益于設(shè)計(jì)防止或治療心血管紊亂的一些治療的診斷檢測的新用途。同時敘述了相關(guān)的治療方法。
背景技術(shù)：
盡管在治療中有明顯的進(jìn)步，心血管疾病保持了是發(fā)達(dá)世界中的發(fā)病率和死亡率的唯一最普遍的原因。所以，心血管紊亂如心肌梗死和中風(fēng)的預(yù)防是大部分公眾健康的重要性的部分。目前，未來心血管紊亂的幾個危險因素已經(jīng)被敘述，并且在檢測高危險的個體中有寬廣的臨床用途。這樣的篩選實(shí)驗(yàn)包括評估總的和HDL膽固醇水平。但是，大量的心血管紊亂發(fā)生在明顯低到中等危險方式的個體中，我們鑒定這樣的患者的能力是受限制的。另外，積累的數(shù)據(jù)表明，處于危險中或已知具有心血管紊亂的患者的一些預(yù)防和治療性治療的有益的效果在不同的患者組中有數(shù)量級的不同。但是，在這點(diǎn)上，缺少的是關(guān)于確定是否一些治療可以期望更多或較少有效的診斷實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。
一些心血管紊亂，如心肌梗死和缺血中風(fēng)是與動脈粥樣硬化相關(guān)的。動脈粥樣硬化的機(jī)制沒有被很好地理解。CD40配體(也稱作是CD40L，CD154，和/或gp39)是261氨基酸，II類型跨膜蛋白質(zhì)。分子的一個或多個生物活性可溶形式總稱為sCD40L是全長形式的蛋白質(zhì)溶解的裂解產(chǎn)生的，可以發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)或在細(xì)胞表面。
CD40L是多潛力的免疫調(diào)節(jié)物，與它的受體CD40一起在包括血管內(nèi)皮(EC)和光滑肌細(xì)胞(SMC)，單核巨嗜細(xì)胞(MΦ)，和血小板的各種細(xì)胞中表達(dá)。
在任意的前面的細(xì)胞類型上接觸CD40受體，已經(jīng)被報道引發(fā)了各種炎癥前的介導(dǎo)物如細(xì)胞因子IL-1，IL-6，IL-12，TNFα，或IFNγ，趨化因子IL-8，MCP-1，或RANTES，黏附分子ICAM-1，或VCAM-1，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1/-2/-3/-7/-8/-9/-10/-11/-12/-13以及凝固前的組織因子的表達(dá)。這些炎癥前的介導(dǎo)物的表達(dá)已經(jīng)被報道是與促進(jìn)體外預(yù)防動脈粥樣化的各種功能排列相聯(lián)系的。這些觀察已經(jīng)表明CD40L是牽涉在動脈粥樣化發(fā)生的各種時期中的。
在有不穩(wěn)定的心絞痛的患者中已經(jīng)敘述了有sCD40L的水平升高。另外，血清或其他體液的sCD40L的濃度已經(jīng)用于評估人患者的免疫，炎癥或惡性狀態(tài)。這樣的患者包括患系統(tǒng)自身免疫或炎癥，血管疾病，病毒疾病，或惡性腫瘤的患者，或進(jìn)行免疫抑制治療的患者。這些患者不是健康的個體。因?yàn)閟CD40L的水平在炎癥過程中提高，所以，無法確定的是，在研究急性疾病或高危險群體之前的這些中觀察到的統(tǒng)計(jì)學(xué)的關(guān)系到底是原因性的，或是由于短期的炎癥變化導(dǎo)致的，甚或是歸因于與其他危險因素特別是吸煙和高血脂之間的相互關(guān)系。
過去已經(jīng)顯示炎癥標(biāo)記的水平升高可以預(yù)測未來的不利的心血管紊亂。但是這在過去還沒有在sCD40L得到證明，sCD40L是炎癥的一些方面的介導(dǎo)物，盡管過去在傳統(tǒng)上沒有被認(rèn)為是炎癥的系統(tǒng)標(biāo)記物。
發(fā)明概述本發(fā)明在一個方面敘述了新的診斷檢測，它廣泛地包括(1)預(yù)測將來心血管疾病如心肌梗死和中風(fēng)和周邊動脈疾病的危險；和(2)確定一些個體將更大或更小程度取益于所設(shè)計(jì)的防止和/或治療心血管紊亂的治療。這些新的檢測部分基于下面的發(fā)現(xiàn)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，sCD40L的水平升高預(yù)測了未來的心血管紊亂。例如，在表面健康的非吸煙者中sCD40L的水平升高預(yù)示了心肌梗死的危險升高。正如另一個例子，sCD40L的水平升高預(yù)示了未來的中風(fēng)的可能性升高。
同樣已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些個體將更大或更小程度取益于一些降低未來的心血管紊亂的治療試劑的使用的可能性可以從個體中的基線水平sCD40L來確定。本發(fā)明部分是根據(jù)sCD40L具有獨(dú)立于其他未來的心血管紊亂的預(yù)示物的預(yù)測值的驚人發(fā)現(xiàn)。特別是，sCD40L預(yù)測了獨(dú)立于系統(tǒng)炎癥標(biāo)記C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)的未來的不利的心血管紊亂。所以，sCD40L可以單獨(dú)用作未來不利的心血管紊亂的預(yù)示物或結(jié)合過去本領(lǐng)域的預(yù)示物如膽固醇和CRP。所以，本發(fā)明不包括簡單地增倍過去可以用其他預(yù)示物制造的測量值。相反，sCD40L的水平是過去本領(lǐng)域中的預(yù)示物以外的。
如上提到，這些發(fā)現(xiàn)已經(jīng)導(dǎo)致了新的診斷檢測。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種方法，鑒定未來發(fā)展成心血管紊亂的個體的危險的輪廓。該方法包括在個體中得到sCD40L的水平。然后，將sCD40L的水平與預(yù)定的值比較，然后，根據(jù)與預(yù)定值的比較中的sCD40L的水平鑒定未來發(fā)展成心血管紊亂的個體的危險輪廓。
預(yù)定的值可以是單個的值，多個值，單個范圍或多個范圍。所以，在一個實(shí)施方案中，預(yù)定的值是多個預(yù)定的標(biāo)記的水平范圍，比較的步驟包括確定個體的水平落在哪個預(yù)定的標(biāo)記的水平范圍。在優(yōu)選地實(shí)施方案中，優(yōu)選的預(yù)定sCD40L值約是血液的2.9ng/mL或以上。其他優(yōu)選的預(yù)定的sCD40L值約是血液的3.2ng/mL或以上。其他優(yōu)選的預(yù)定的sCD40L的值約是血液的5.5ng/mL或以上。當(dāng)利用多個范圍時，優(yōu)選地，選用范圍是低于約血液的2.9ng/mL中的一個，另一個范圍選擇是約血液的2.9ng/mL以上中的一個。
在一些實(shí)施方案中，個體是表面健康的，非吸煙個體。在一些實(shí)施方案中，個體心肌梗死或中風(fēng)的危險并沒有因?yàn)榱硗獾脑蚨摺?br> 在本發(fā)明的這一方面的一些實(shí)施方案中，心血管紊亂是與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的。在一些實(shí)施方案中，心血管紊亂并不是致命的心肌梗死。在一些實(shí)施方案中，心血管紊亂是中風(fēng)。
仍然根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一個鑒定未來發(fā)展成與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的個體的危險輪廓的方法。獲取個體中的sCD40L的水平。將sCD40L的水平與預(yù)定的值比較。然后，根據(jù)與預(yù)定值比較中的sCD40L的水平，鑒定未來發(fā)展成與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的個體危險的輪廓。預(yù)定值可以如上所述。鑒定的個體可以是任何個體，但優(yōu)選地是表面健康的個體。表面健康的個體可以是吸煙者或非吸煙者。在一些實(shí)施方案中，受試者沒有其他的不利的心血管紊亂的危險升高。在一些實(shí)施方案中，與動脈粥樣硬化疾病有關(guān)的未來的心血管紊亂不包括致命的心肌梗死。優(yōu)選的標(biāo)記和預(yù)定值如上所述。在一個重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是中風(fēng)。在另一個重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是心肌梗死。在另一個重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是周邊動脈疾病。在另一個重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是非致命的心肌梗死。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一個鑒定未來發(fā)展成心肌梗死的表面健康的、非吸煙個體得到危險輪廓的方法。該方法包括在個體中獲得其sCD40L的水平。然后，將sCD40L的水平與預(yù)定值比較，再根據(jù)與預(yù)定的值的比較中的sCD40L的水平鑒定未來發(fā)展成心肌梗死的個體的危險輪廓。在一些實(shí)施方案中，個體沒有其他的不利的心血管事件的危險升高。
正如在本發(fā)明的前面的方面所述，預(yù)定的值可以是單個的值，多個的值，單個的范圍或多個的范圍。在一個實(shí)施方案中，預(yù)定的值是多個預(yù)定的標(biāo)記水平范圍，比較的步驟包括確定個體的水平落在哪個預(yù)定的標(biāo)記的水平范圍。SCD40L的優(yōu)選的預(yù)定值等如上所述。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了鑒定未來發(fā)展成與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的個體的危險輪廓的方法。在個體中得到其sCD40L的水平。將sCD40L的水平與預(yù)定的值比較。然后根據(jù)比較中的預(yù)定值的sCD40L的水平鑒定未來發(fā)展成與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的未來的心血管紊亂的個體的危險輪廓。正如在本發(fā)明的前面所述的那樣，預(yù)定值可以是單個值，多個值，單個范圍或多個范圍。在一個實(shí)施方案中，預(yù)定的值是多個預(yù)定的標(biāo)記水平范圍，比較的步驟包括確定個體的水平落在哪個預(yù)定的標(biāo)記的水平范圍。SCD40L的優(yōu)選的預(yù)定值等如上所述。
鑒定的個體可以是任何個體，但優(yōu)選地是表面健康的個體。表面健康的個體可以是吸煙者或非吸煙者。在一些實(shí)施方案中，受試者沒有其他方面的心血管事件的危險升高。在一些實(shí)施方案中，與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的未來的心血管紊亂不包括致命的心肌梗死。優(yōu)選的標(biāo)記和預(yù)定值如上所述。在一個重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是中風(fēng)。在另一個重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是周邊動脈疾病。在另外的重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是非致命的心肌梗死。
仍然根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了利用血液sCD40L水平和膽固醇梗死或C-反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)一起鑒定未來發(fā)展成與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的個體的危險輪廓的方法。獲取了個體中的sCD40L的水平。將sCD40L的水平與第一個預(yù)定的值比較確定第一個危險的值。也得到了個體中的膽固醇或CRP的水平。將個體中的膽固醇或CRP水平與二級預(yù)定值比較確定第二個危險值。然后，根據(jù)第一個危險值和第二個危險值的結(jié)合鑒定發(fā)展成心血管紊亂的個體得到危險的輪廓，其中第一個危險值和第二個危險值的結(jié)合確定了不同于第一個和第二個危險值的第三個危險值。在特別重要的實(shí)施方案中，第三個危險值是大于第一個和第二個危險值的。測試的優(yōu)選的個體，標(biāo)記和預(yù)定的值如上所述。心血管紊亂可以是與動脈硬化疾病相關(guān)的任何心血管紊亂，盡管在一些重要的實(shí)施方案中，心血管紊亂是非致命的心肌梗死或缺血中風(fēng)。
根據(jù)仍然是本發(fā)明的另一方面，提供了一種評估個體將取益于用降低心血管紊亂，特別是與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的危險的試劑的治療的可能性。可以從包括抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降脂試劑，直接的凝血酶抑制劑，糖蛋白IIb/IIIa受體抑制劑和結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子(例如，抗細(xì)胞黏附分子抗體)的能力的試劑的組選擇該試劑。為了實(shí)施本方法，獲取了個體中的sCD40L的水平。然后，將這一水平與預(yù)定的值比較，其中與預(yù)定的值比較中的sCD40L的水平預(yù)示了個體將取益于該試劑的治療的可能性。然后，該個體可以在有可能通過用該試劑治療得到的凈益處的關(guān)系中得到鑒定。
正如上面提到的，本發(fā)明特別適用于確定哪個個體將優(yōu)先取益于該試劑的治療，降低心血管紊亂的個體中的危險，如將來的中風(fēng)或?qū)淼男募」Ｋ?，包括非致命的心肌梗死。同時允許通過鑒定例如個體最可能取益于用不利的副作用的高危險方式的新治療或已知治療選擇臨床實(shí)驗(yàn)的候選群體和候選藥物的治療。所以，本發(fā)明提供了評估可能的候選患者的一些治療的凈效果的信息。
本發(fā)明也關(guān)注試劑盒，其包括對sCD40L的檢測包以及說明，并且可以還含有相關(guān)物質(zhì)，如數(shù)字和顏色的圖表，用于將檢測所確定的sCD40L的水平與未來心血管紊亂或如上所述的其他患者標(biāo)準(zhǔn)的危險相聯(lián)系。在重要的實(shí)施方案中，該試劑盒也包括膽固醇的檢驗(yàn)。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種治療受試者降低心血管紊亂的危險的方法。該方法包括對已知具有上面的正常水平的sCD40L的受試者選擇和給藥降低心血管紊亂的危險的試劑。該試劑可以是抗炎癥試劑(包括阿斯匹林，和非阿斯匹林抗炎癥試劑)，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降低脂的試劑，直接的溶血酶抑制劑，糖蛋白Iib/IIIa受體抑制劑，結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于如下的分子，鈣通道封閉劑，β-腎上腺素能受體封閉劑，環(huán)氧化酶-2抑制劑，血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑，和/或它們的結(jié)合。該試劑給藥的量是能有效降低未來發(fā)展成心血管紊亂的受試者的危險的量。優(yōu)選的受試者是表面健康的受試者，目前不需要立即用任何前面所述的試劑的一種或它們的結(jié)合的治療。在另外的重要的實(shí)施方案中，受試者中不利的心血管事件的危險沒有升高(即，沒有這樣的事件的家族歷史的受試者，非吸煙的受試者，非血脂過高的受試者，有正常水平的系統(tǒng)炎癥標(biāo)記的受試者)，而sCD40L的水平升高。
在一些實(shí)施方案中，該試劑是選自包括如下的試劑的組，阿氯酚酸(Alclofenac)，阿氯米松(Alclometasone Dipropionate)，Algestone Acetonide，α淀粉酶，Amcinafal，氨酚酸鈉(AmfenacSodium)，Amiprilose Hydrochloride，Anakinra，Anirolac，Anitrazafen，Apazone，巴沙拉二鈉(Balsalazide Disodium)，芐吲酸(Bendazac)，苯惡洛芬(Benoxaprofen)，鹽酸芐卡明(Benzydamine Hydrochloride)，菠蘿蛋白酶(Bromelains)，溴四唑哌啶(Broperamole)，布地縮松(Budesonide)，卡布洛芬(Carprofen)，Cicloprofen，曾戊唑酮(Cintazone)，氯噻托酸(Cliprofen)，丙酸倍氯他索(Clobetaso Propionate)，丁氯倍氟松(Clobetasone Butyrate)，氯苯吡咯酸(Clopirac)，CloticasonePropionate，醋酸三氟米松(Cormethasone Acetate)，去氧可的松(Cortodoxone)，去氟可的松(Deflazacort)，丙縮羥強(qiáng)龍(Desonide)，去羥米松(Desoximetasone)，二丙酸地塞米松(Dexamethasone Dipropionate)，雙氯酚酸鉀(DiclofenacPotassium)，雙氯酚酸鈉(Diclofenac Sodium)，雙醋二氟松(Diflorasone Diacetate)，二氟米銅鈉(Diflumidone Sodium)，雙氟尼酸(Diflunisal)，醋丁二氟龍(Difluprednate)，雙酞嗪酮(Diftalone)，二甲亞砜(Dimethyl Sulfoxide)，丙縮氫炎松(Drocinonide)，甲地松(Endrysone)，Enlimomab，塞庚苯胺鈉(Enolicam Sodium)，嘧吡唑(Epirizole)，依托度酸(Etodolac)，Etofenamate，聯(lián)苯乙酸(Felbinac)，苯四唑胺(Fenamole)，芬布芬(Fenbufen)，二氯苯氧苯乙酸(Fenclofenac)，氯環(huán)苯乙酸(Fenclorac)，苯吲柳酸(Fendosal)，苯吡惡二酮(Fenpipalone)，雙苯噻酸(Fentiazac)，氟苯哌酮(Flazalone)，氟惡米松(Fluazacort)，氟芬那酸(Flufenamic Acid)，氟咪唑(Flumizole)，醋酸-9-去氟膚輕松(Flunisolide Acetate)，氟胺煙酸(Flunixin)，氟胺煙酸葡胺(Flunixin Meglumine)，氟考丁酯(FluocortinButyl)，氟甲孕松醋酸酯(Fluorometholone Acetate)，苯氟奎酮(Fluqazone)，氟比洛芬(Flurbiprofen)，炔氟聯(lián)苯(Fluretofen)，丙酸氟地松(Fluticasone Propionate)，苯呋丙酸(Furaprofen)，氧芴丁酮酸(Furobufen)，氯氟舒松(Halcinonide)，HalobetasolPropionate，雙醋溴氟龍(Halopredone Acetate)，異丁苯乙酸(Ibufenac)，布洛芬(Ibuprofen)，Ibuprofen Aluminum，皮考布洛芬(Ibuprofen Piconol)，Ilonidap，吲哚美辛(Indomethacin)，吲哚美辛鈉(Indomethacin Sodium)，吲哚布洛芬(Indoprofen)，雙甲氧苯吲哚(Indoxole)，吲四唑(Intrazole)，醋異氟龍(Isoflupredone Acetate)，氧卓乙酸(Isoxepac)，異惡塞酰胺(Isoxicam)，銅基布洛芬(Ketoprofen)，鹽酸氯苯甲咪唑(Lofemizole Hydrochloride)，Lornoxicam，LotepredoneEtabonate，甲氧胺苯酸鈉(Meclofenameta Sodium)，甲氯滅酸(Meclofenamic Acid)，甲二氯松二丁酯(MeclorisoneDibutyrate)，甲滅酸(Mefenamic Acid)，Mesalamine，甲氯惡唑酮(Mesaclazone)，甲基氫化潑尼松(MethylprednisoloneSuleptanate)，氟煙嗎酯(Morniflumate)，那布米酮(Nabumetone)，萘普生(Naproxen)，萘普生鈉(Naproxen Sodium)，甲基萘丙醇(Naproxol)，腈胺唑酮(Nimazone)，偶氮水楊酸鈉(OlsalazineSodium)，超氧化物歧化酶(Orgotein)，苯呋丙酸(Orpanoxin)，惡丙嗪(Oxaprozin)，羥基保泰松(Oxyphenbutazone)，鹽酸胍苯叉芴(Paranyline Hydrochloride)，戊聚糖多硫酸鈉(PentosanPolysulfate Sodium)，Phenbutazone Sodium Glycerate，甲苯吡啶酮(Pirfenidone)，炎痛喜康(Piroxicam)，炎痛喜康肉桂酯(Piroxicam Cinnamate)，炎痛喜康乙醇胺(Piroxicam Olamine)，吡洛布洛芬(Pirprofen)，強(qiáng)地松龍-奮乃靜(Prednazate)，Prefelone，丙哚乙酸(Prodolic Acid)，Proquazone，胺丙惡二唑(Proxazole)，胺丙惡二唑檸檬酸酯(Proxazole Citrate)，雙甲丙酰龍(Rimexolone)，Romazarit，水楊酸膽堿硫酸鎂(Salcolex)，Salnacedine，雙水楊酸酯(Salsalate)，Sanguinarium Chloride，氯惡唑酮(Seclazone)，絲炎痛(Sermetacin)，噻氧噻嗪(Sudoxicam)，舒林酸(Sulindac)，噻吩甲酰布洛芬(Suprofen)，Talmetacin，氟煙酞酯(Talniflumate)，醋柳酞酯(Talosalate)，替布費(fèi)龍(Tebufelone)，替尼達(dá)普(Tenidap)，替尼達(dá)普鈉(TenidapSodium)，替諾西康(Tenoxicam)，氧喹苯胺(Tesicam)，芐叉異喹酮(Tesimide)，四氫甲吲胺(Tetrydamine)，噻庚乙酸(Tiopinac)，特戊酸巰氫可的松(Tixocortol Pivalate)，托耳米丁(Tolmetin)，甲苯酰吡酸鈉(Tolmetin Sodium)，三氯氟松(Triclonide)，三氟氨酯(Triflumidate)，疊氮吲酸(Zidometacin)，糖皮質(zhì)激素或苯酰吡酸鈉。
本發(fā)明也包括用脂降低試劑治療受試者的方法，防止心血管紊亂。在具有上面的正常的sCD40L水平的原理上對選擇的受試者給藥這樣的試劑。給藥的試劑的量是能有效地降低未來發(fā)展成心血管紊亂的受試者的危險的量。在一個實(shí)施方案中，受試者已經(jīng)具有心血管事件，如心臟病或血管成形術(shù)。在這一實(shí)施方案中，結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的能力的試劑可能限制了進(jìn)一步的損傷或幫助防止再狹窄，心肌后梗死或血管成形術(shù)后的損傷。在另一個重要的實(shí)施方案中，受試者是沒有立即需要結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的能力的試劑的治療的表面健康的受試者。在重要的實(shí)施方案中，受試者中除了sCD40L的水平升高之外，沒有其他的不利的心血管事件的危險升高。在另外的重要的實(shí)施方案中，治療的受試者是非血脂過高的受試者。
本發(fā)明也包括一種用鈣通道封閉劑治療受試者以便防止心血管紊亂的方法。在具有上面的正常水平的sCD40L的原理上對選擇的受試者給藥這樣的試劑。該試劑給藥的量是能有效地降低未來發(fā)展成心血管紊亂的受試者的危險的量。在一個實(shí)施方案中，受試者已經(jīng)有心血管事件，如心臟病或血管成形術(shù)。在另一個重要的實(shí)施方案中，受試者是沒有立即需要鈣通道封閉劑治療的表面健康的受試者。在重要的實(shí)施方案中，受試者除了Scd40L的水平升高之外，沒有其他的不利的心血管事件的危險升高。在另一個重要的實(shí)施方案中，治療的受試者是非血脂過高的受試者。在任何前面所述的實(shí)施方案中，鈣通道封閉劑可以是但不限于，二羥吡啶，苯烷基胺，和/或芐硫噻平(benzothiazepines)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的鈣離子通道封閉劑包括但不限于，氨吡酮(amrinone)，氨氯地平(amlodipine)，苯環(huán)庚烷(bencyclane)，地爾硫卓(diltiazem)，費(fèi)樂地平(feldipine)，芬地林(fendiline)，氟桂嗪(flunarizine)，伊拉地平(isradipine)，硝苯乙吡啶(nicardipine)，硝苯地平(nifedipine)，尼莫地平(nimodipine)，環(huán)己哌啶(perhexilene)，加羅帕米(gallopamil)，噻烷丙胺(tiapamil)和噻烷丙胺類似物(如1993RO-11-2933)，維拉帕米(verapamil)，苯妥英(phenytoin)，巴比妥類(barbiturates)，和多肽(peptides dynorphin)，omega-conotoxin，和omega-agatoxind等等，和/或其藥物可接受鹽。
本發(fā)明也包括用β-腎上腺素能受體封閉劑治療受試者，防止心血管紊亂。在具有上面的正常水平的sCD40L的水平的原理上對選擇的受試者給藥這樣的試劑。給藥該試劑的量是能有效地降低受試者未來發(fā)展成心血管紊亂的危險的量。在一個實(shí)施方案中，受試者已經(jīng)具有心血管事件，如心臟病或血管成形術(shù)。在另一個重要的實(shí)施方案中，受試者是沒有立即的β-腎上腺素能受體封閉劑治療需要的表面健康的受試者。在重要的實(shí)施方案中，受試者除了sCD40L的水平升高之外，沒有其他不利的心血管事件的危險升高。在另外的重要的實(shí)施方案中，治療的受試者是非血脂過高的受試者。在任意的前面所述的實(shí)施方案中，β-腎上腺素能受體封閉劑可以是，但不限于阿替洛爾，醋丁洛爾，阿普洛爾，苯呋洛爾，倍他洛爾，布尼洛爾，卡特洛爾，塞里普洛爾，海羥洛爾，茚諾洛爾，拉貝洛爾，左旋布諾洛爾，甲吲洛爾，甲基普拉洛爾，美丁多爾，美托洛爾，甲泛影洛爾，氧烯洛爾，吲哚洛爾，普萘洛爾，普拉洛爾，索他洛爾，納多洛爾，替普洛爾，托馬洛爾，替莫洛爾，布拉洛爾，噴布洛爾，三甲洛爾，2-(3-(1，1-二甲基乙基)-氨基-2-羥基丙氧基)-3-吡啶碳基鹽酸，1-丁基氨基-3-(2，5-二氯苯氧基)-2-丙醇，1-異丙基氨基-3-(4-(2-環(huán)丙基甲氧基乙基)酚氧基)-2-丙醇，3-異丙基氨基-1-(7-甲基林丹-4-yl氧基)-2-丁醇，2-(3-t-丁基氨基-2-羥基-丙基硫)-4-(5-碳氧基-2-噻吩基)噻唑，7-(2-羥基-3-t-丁基氨基丙氧基)四氯苯肽。
本發(fā)明也包括用環(huán)氧化酶-2-抑制劑治療受試者防止心血管紊亂的一種方法。這樣的一種試劑是在具有上面的正常水平的sCD40L的原理上對選擇的受試者給藥的。該試劑給藥的量是能有效降低受試者未來發(fā)展成心血管紊亂的危險的量。在一個實(shí)施方案中，受試者已經(jīng)具有心血管事件，如心臟病或血管成形術(shù)。在另一個重要的實(shí)施方案中，受試者是表面健康的受試者，不是立即需要環(huán)氧化酶-2抑制劑治療。在重要的實(shí)施方案中，受試者除了sCD40L的水平升高之外，沒有其他的不利心血管事件的危險升高。在另一個重要的實(shí)施方案中，治療的受試者是非血脂過高的受試者。在任何的前面所述的實(shí)施方案中，環(huán)氧化酶-2-抑制劑可以是但不限于苯基雜環(huán)，二芳基二環(huán)雜環(huán)，芳基取代的5，5融合芳香基氮化合物，N苯基吲哚-3-丙酸和/或它的衍生物，5-甲烷亞磺酰氨基-1-二氫茚酮，N苯基吲哚-3-丁酸和/或它的衍生物，二苯基-1，2，3-噻二唑，二芳基-5-氧酸基-2-(5H)-呋喃，3，4-二芳基-2-羥基-2，5-二氫呋喃，均二苯代乙烯和/或它的衍生物，二苯基均二苯代乙烯，烷基化苯乙烯，雙芳基環(huán)丁烯和/或它的衍生物，取代吡啶，吡啶基-2-環(huán)戊烯-1-one，和/或取代磺酸苯基雜環(huán)。
本發(fā)明也包括了用血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑治療受試者防止心血管紊亂的一種方法。這樣的試劑是在具有上面的正常水平的sCD40L的水平的原理上對選擇的受試者給藥的。該試劑給藥的量是能有效受試者未來發(fā)展成心血管紊亂的危險的量。在一個實(shí)施方案中，受試者已經(jīng)具有了心血管事件，如心臟病或血管成形術(shù)。在另一個重要的實(shí)施方案中，受試者是表面健康的受試者，沒有立即的需要血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑的治療。在重要的實(shí)施方案中，受試者除了sCD40L的水平升高之外，沒有其他的不利心血管事件的危險升高。在另一個重要的實(shí)施方案中，治療的受試者是非血脂過高的受試者。在任意的前面所述的實(shí)施方案中，血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑可以是，但不限于血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制劑，血管緊張肽II拮抗劑，血管緊張肽II受體拮抗劑，激活血管緊張肽II的代謝的試劑，和/或防止血管緊張肽I的合成的試劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了評估個體將取益于降低與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的危險的試劑的治療的可能性。試劑可以從包括抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維溶解試劑，降脂試劑，直接的凝血酶抑制劑，糖蛋白IIb/IIIa受體抑制劑，結(jié)合細(xì)胞黏連分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的試劑(即，抗細(xì)胞黏附分子抗體)，鈣通道封閉劑，β-腎上腺素能受體封閉劑，環(huán)氧化酶-2-抑制劑，血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑，和/或前面的試劑的結(jié)合的組中選擇。為了實(shí)施本方法，得到了個體中的sCD40L的水平。然后，將該水平與預(yù)定的值比較，其中與預(yù)定的值的比較中的sCD40L的水平是個體將取益于該試劑的治療的可能性的證據(jù)。然后，可以在似乎可以通過用該試劑的治療得到的靜益處的關(guān)系中鑒定個體。
預(yù)定的值可以如上所述。
正如上面提到的，本發(fā)明特別適用于確定在心血管紊亂如未來的中風(fēng)或未來的心肌梗死，包括非致命的心肌梗死的個體中優(yōu)先取益于用降低危險的試劑的治療的個體。也允許通過鑒定例如最有可能取益于新治療或取益于不利的副作用的高危方式已知治療選擇臨床實(shí)驗(yàn)和用候選藥物治療的候選群體。所以，本發(fā)明提供了評估一些候選患者的治療的可能的凈益處的信息。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了在受試者中降低sCD40L的水平以便降低不利的心血管紊亂的危險的方法。該方法包括對sCD40L的水平升高的受試者給藥降低sCD40L水平的試劑，給藥的量是能有效地降低受試者中sCD40L的水平。在一個實(shí)施方案中，該試劑是降低脂的試劑。優(yōu)選的受試者是表面健康的受試者。在一些實(shí)施方案中，受試者沒有其他的不利的心血管事件的危險升高。在一些實(shí)施方案中，受試者的C-反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)水平升高。在本發(fā)明的這一方面的一些實(shí)施方案中，受試者沒有立即的需要降低脂的試劑的治療的適應(yīng)癥。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了在有發(fā)展成心血管紊亂危險的個體中評估血管斑內(nèi)脂積累的可能性的方法。該方法包括在個體中得到sCD40L水平，將sCD40L水平與預(yù)定的值比較，根據(jù)與預(yù)定的水平的比較中的sCD40L的水平鑒定血管斑內(nèi)脂積累的個體的危險方式。預(yù)定的值可以是多數(shù)預(yù)定的sCD40L的水平范圍，所述的比較步驟包括確定所述的sCD40L水平落在哪個所述的預(yù)定sCD40L的水平范圍。在一些實(shí)施方案中，預(yù)定的值約是血液的2.5ng/ml或更高。在一些實(shí)施方案中，預(yù)定的值約是血液的3.0ng/ml或更高。在重要的實(shí)施方案中，預(yù)定的值是多數(shù)的預(yù)定的sCD40L水平范圍，一個所述的多數(shù)是低于約2.5ng/ml血液，另一個所述的范圍是低于約2.5ng/mL的血液，所述的比較步驟包括確定所述的個體的sCD40L水平范圍落在哪個所述的多數(shù)的預(yù)定sCD40L水平范圍。在另一個重要的實(shí)施方案中，血管斑內(nèi)脂積累發(fā)生在頸動脈中。其他優(yōu)選的范圍和重要的實(shí)施方案如上所述和如下所述。
根據(jù)本發(fā)明的其他方面，提供了制備用于治療心血管癥狀的藥劑的方法。
本發(fā)明的這些和其他方面將結(jié)合本發(fā)明的詳細(xì)說明，在下面更詳細(xì)地?cái)⑹觥?br> 附圖的簡要說明

圖1是根據(jù)sCD40L血液水平，在研究群體中證明心血管事件的相對危險的圖。點(diǎn)線表示了對照分布的99個百分位數(shù)的切入點(diǎn)。
本發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明最初的原理是來自在婦女健康研究(WHS)的參與者中的一個預(yù)期中的逐選的情況對照分析的證據(jù)，這是一個評估28,263個沒有心血管疾病或癌癥歷史的中年美國婦女中維生素E和低劑量的阿斯匹林的效果的正在進(jìn)行的初級預(yù)防實(shí)驗(yàn)。在這一實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)了sCD40L，炎癥的介導(dǎo)物的基線水平，可以確定不依賴一大系列的脂和非脂危險的因素，和不依賴其他預(yù)示物包括系統(tǒng)炎癥的標(biāo)記的心肌梗死和中風(fēng)的未來的危險(參見例如，美國專利6,040,147)。特異地說，我們發(fā)現(xiàn)最高基線水平的sCD40L的個體未來發(fā)展成心血管事件的危險至少有3倍的增高(圖1)。
另外，在來自婦女健康研究的數(shù)據(jù)中，與sCD40L相關(guān)的未來發(fā)展成心肌梗死和中風(fēng)的危險似乎是附加到可以通過常用的總膽固醇和HDL膽固醇的評估來確定的哪個個體。在這一實(shí)驗(yàn)中，sCD40L的預(yù)測值是非致命的以及致命的事件，在一個長時期中是穩(wěn)定的，并且存在于非吸煙者以及吸煙者中。另外，這一實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)表明，表面健康的個體的益處的數(shù)量級可以期望來自用于動脈粥樣硬化紊亂的防止和治療中的治療性試劑。
在一個方面，目前的發(fā)明敘述了sCD40L預(yù)測目前沒有疾病證據(jù)的個體中與動脈粥樣硬化相關(guān)的心血管紊亂如心肌梗死和中風(fēng)的危險中的用途。所以，這些數(shù)據(jù)大大地?cái)U(kuò)展了過去關(guān)于sCD40L在已經(jīng)鑒定的高危人群和癥狀局部缺血的患者如有不穩(wěn)定的心絞痛的那些中預(yù)測危險的用途的觀察。確實(shí)，sCD40L的水平在急性局部缺血后升高，所以一直無法確定在急性病或高危人群中過去的研究中觀察到的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系是致病性的原因、或是由于短期的炎癥而改變，或歸因于其他危險因子，特別是吸煙和血脂過高。
相反，來自婦女健康研究的數(shù)據(jù)表明，第一次，sCD40L在目前健康和低危險的個體中預(yù)測危險，預(yù)測非致命已經(jīng)致命的事件，在非吸煙者中預(yù)測危險，在預(yù)測與篩選總和HDL膽固醇相關(guān)的危險中有用途。來自婦女健康研究的數(shù)據(jù)同時第一次表明，設(shè)計(jì)降低與sCD40L血漿/血液水平的方法的基礎(chǔ)上有數(shù)量級不同的動脈粥樣硬化事件如心肌梗死和中風(fēng)的危險降低的干擾的效果的可能性。參考下面的術(shù)語的簡要的解釋可以更好地理解本發(fā)明。
“心血管心肌局部缺血，紊亂”包括心肌梗死，中風(fēng)，心肌局部缺血，心絞痛和周邊動脈血管疾病。心肌紊亂不包括靜脈凝血。
“表面健康”，如本文所用，指過去沒有急性不利的心肌事件如心肌梗死的個體(即，沒有由于初級不利的心血管事件的二級不利心血管事件的危險升高的個體。表面健康的個體同樣不具備疾病的癥狀。用另一句話來說，這樣的個體，如果通過醫(yī)學(xué)專業(yè)檢測，可以鑒定為健康和無疾病癥狀。
在重要的實(shí)施方案中，受試者中不利的心血管事件的危險沒有升高。危險升高的受試者包括有心血管疾病家族歷史，脂升高，吸煙者，過去有急性心血管事件等等(參見例如，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的Hrrison原則，第15版，McGraw-Hill公司，紐約，下文中稱為“Harrison”)。根據(jù)本發(fā)明的一個重要的方面，提供了治療受試者降低心血管紊亂的危險的方法。該方法包括對已知具有上面的正常水平的sCD40L的受試者選擇和給藥降低心血管紊亂的危險的試劑。該試劑可以是抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降低脂的試劑，直接的凝血酶抑制劑，糖蛋白Iib/IIIa受體抑制劑，結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的試劑，鈣通道封閉劑，β-腎上腺素能受體封閉劑，環(huán)氧化酶-2抑制劑，血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑，和/或它們的結(jié)合。該試劑的給藥的量是能有效降低受試者未來發(fā)展成心血管紊亂危險的量。
優(yōu)選的受試者是在其他的情況下并不需要立即采用本發(fā)明的試劑治療的表面健康的受試者。例如，如果根據(jù)sCD40L水平升高而需要特殊試劑的治療，那么，該患者優(yōu)選地是除了sCD40L的水平升高這個癥狀之外，沒有其他的需要用該試劑(或該試劑所屬類別的其他試劑)治療的癥狀。在一些實(shí)施方案中，受試者沒有需要用所有前面的試劑的類別的任意一個或任何結(jié)合的治療的癥狀。如關(guān)于抗炎癥試劑，沒有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，慢性背痛，自身免疫疾病，血管疾病，病毒疾病，惡性腫瘤等等的癥狀。在另一個實(shí)施方案中，受試者除了sCD40L的水平升高之外，沒有其他的不利的心血管事件的危險升高(即，沒有這樣的事件的家族歷史的受試者，非吸煙的受試者，沒有血脂過高的受試者，系統(tǒng)的炎癥標(biāo)記物的水平?jīng)]有升高的受試者)。在一些實(shí)施方案中，受試者沒有需要用所有前面的試劑的類別的任意一個，任意的結(jié)合或所有進(jìn)行治療的的癥狀。
在一些實(shí)施方案中，受試者沒有需要用前面的試劑的任意一個，任何結(jié)合或全部來來治療的癥狀。在進(jìn)一步重要的實(shí)施方案中，治療的受試者是非血脂過高的受試者?！胺茄^高”是非血膽固醇過高和/或非血甘油三酯過高的受試者?！胺茄懝檀歼^高”的受試者是不符合已確定的血膽固醇過高的標(biāo)準(zhǔn)的受試者受試者。非甘油三酯過高的受試者是不符合目前的甘油三酯過高的標(biāo)準(zhǔn)的受試者(參見例如，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的Harrison原理，第15版，McGraw-Hill公司，紐約，下文中稱為“Harrison”)。血膽固醇過高的受試者和甘油三酯過高的受試者是與早期的冠狀動脈心臟病的適應(yīng)癥增加有關(guān)。血膽固醇過高的受試者具有的LDL水平大于160mg/dL，或大于130mg/dL，并且至少具有選自包括雄性性別，早期的冠狀動脈心臟疾病家族歷史，吸煙者(每天大于10支)，高血壓，低HDL(＜35mg/dL)，糖尿病，血胰島素過高，腹部肥胖，高血脂蛋白質(zhì)，和個人歷史的腦血管疾病或閉塞周邊血管疾病的組中的兩個危險因素。血甘油三酯過高受試者具有的甘油三酯(TG)水平大于250mg/dL。所以，非血脂過高的受試者定義為膽固醇和甘油三酯水平低于如上所述為血膽固醇過高和血甘油三酯過高的受試者設(shè)定的極限的受試者。
在一些實(shí)施方案中，受試者具有正常水平的系統(tǒng)炎癥標(biāo)記物。為了本申請書的目的，正常的這些水平指與水平?jīng)]有升高相似的水平。正常水平將依賴特殊的系統(tǒng)炎癥標(biāo)記物(參見美國專利號，6,040,147，該文獻(xiàn)的內(nèi)容通過在此引述而全部合并于本文)。
“非吸煙“，如本文所用，指個體在評估時間不是個吸煙者。這包括從沒有吸煙的個體以及過吸過煙但現(xiàn)在不再吸煙的個體。
降低心血管紊亂的危險的試劑包括，但不限于從包括抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降低脂的試劑，直接額凝血酶抑制劑，糖蛋白IIb/IIIa受體抑制劑，結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的能力的試劑，鈣通道封閉劑，β腎上腺素能受體封閉劑，環(huán)氧化酶-2-抑制劑，血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑，和/或其任何結(jié)合的組的那些。
“抗炎癥“試劑包括但不限于，阿氯酚酸(Alclofenac)，阿氯米松(Alclometasone Dipropionate)，Algestone Acetonide，α淀粉酶，Amcinafal，氨酚酸鈉(Amfenac Sodium)，AmipriloseHydrochloride，Anakinra，Anirolac，Anitrazafen，Apazone，巴沙拉二鈉(Balsalazide Disodium)，芐吲酸(Bendazac)，苯惡洛芬(Benoxaprofen)，鹽酸芐卡明(Benzydamine Hydrochloride)，菠蘿蛋白酶(Bromelains)，溴四唑哌啶(Broperamole)，布地縮松(Budesonide)，卡布洛芬(Carprofen)，Cicloprofen，曾戊唑酮(Cintazone)，氯噻托酸(Cliprofen)，丙酸倍氯他索(ClobetasoPropionate)，丁氯倍氟松(Clobetasone Butyrate)，氯苯吡咯酸(Clopirac)，Cloticasone Propionate，醋酸三氟米松(CormethasoneAcetate)，去氧可的松(Cortodoxone)，去氟可的松(Deflazacort)，丙縮羥強(qiáng)龍(Desonide)，去羥米松(Desoximetasone)，二丙酸地塞米松(Dexamethasone Dipropionate)，雙氯酚酸鉀(DiclofenacPotassium)，雙氯酚酸鈉(Diclofenac Sodium)，雙醋二氟松(Diflorasone Diacetate)，二氟米銅鈉(Diflumidone Sodium)，雙氟尼酸(Diflunisal)，醋丁二氟龍(Difluprednate)，雙酞嗪酮(Diftalone)，二甲亞砜(Dimethyl Sulfoxide)，丙縮氫炎松(Drocinonide)，甲地松(Endrysone)，Enlimomab，塞庚苯胺鈉(Enolicam Sodium)，嘧吡唑(Epirizole)，依托度酸(Etodolac)，Etofenamate，聯(lián)苯乙酸(Felbinac)，苯四唑胺(Fenamole)，芬布芬(Fenbufen)，二氯苯氧苯乙酸(Fenclofenac)，氯環(huán)苯乙酸(Fenclorac)，苯吲柳酸(Fendosal)，苯吡惡二酮(Fenpipalone)，雙苯噻酸(Fentiazac)，氟苯哌酮(Flazalone)，氟惡米松(Fluazacort)，氟芬那酸(Flufenamic Acid)，氟咪唑(Flumizole)，醋酸-9-去氟膚輕松(Flunisolide Acetate)，氟胺煙酸(Flunixin)，氟胺煙酸葡胺(Flunixin Meglumine)，氟考丁酯(FluocortinButyl)，氟甲孕松醋酸酯(Fluorometholone Acetate)，苯氟奎酮(Fluqazone)，氟比洛芬(Flurbiprofen)，炔氟聯(lián)苯(Fluretofen)，丙酸氟地松(Fluticasone Propionate)，苯呋丙酸(Furaprofen)，氧芴丁酮酸(Furobufen)，氯氟舒松(Halcinonide)，HalobetasolPropionate，雙醋溴氟龍(Halopredone Acetate)，異丁苯乙酸(Ibufenac)，布洛芬(Ibuprofen)，Ibuprofen Aluminum，皮考布洛芬(Ibuprofen Piconol)，Ilonidap，吲哚美辛(Indomethacin)，吲哚美辛鈉(Indomethacin Sodium)，吲哚布洛芬(Indoprofen)，雙甲氧苯吲哚(Indoxole)，吲四唑(Intrazole)，醋異氟龍(Isoflupredone Acetate)，氧卓乙酸(Isoxepac)，異惡塞酰胺(Isoxicam)，銅基布洛芬(Ketoprofen)，鹽酸氯苯甲咪唑(Lofemizole Hydrochloride)，Lornoxicam，LotepredoneEtabonate，甲氧胺苯酸鈉(Meclofenameta Sodium)，甲氯滅酸(Meclofenamic Acid)，甲二氯松二丁酯(MeclorisoneDibutyrate)，甲滅酸(Mefenamic Acid)，Mesalamine，甲氯惡唑酮(Mesaclazone)，甲基氫化潑尼松(MethylprednisoloneSuleptanate)，氟煙嗎酯(Morniflumate)，那布米酮(Nabumetone)，萘普生(Naproxen)，萘普生鈉(Naproxen Sodium)，甲基萘丙醇(Naproxol)，腈胺唑酮(Nimazone)，偶氮水楊酸鈉(OlsalazineSodium)，超氧化物歧化酶(Orgotein)，苯呋丙酸(Orpanoxin)，惡丙嗪(Oxaprozin)，羥基保泰松(Oxyphenbutazone)，鹽酸胍苯叉芴(Paranyline Hydrochloride)，戊聚糖多硫酸鈉(PentosanPolysulfate Sodium)，Phenbutazone Sodium Glycerate，甲苯吡啶酮(Pirfenidone)，炎痛喜康(Piroxicam)，炎痛喜康肉桂酯(Piroxicam Cinnamate)，炎痛喜康乙醇胺(Piroxicam Olamine)，吡洛布洛芬(Pirprofen)，強(qiáng)地松龍-奮乃靜(Prednazate)，Prefelone，丙哚乙酸(Prodolic Acid)，Proquazone，胺丙惡二唑(Proxazole)，胺丙惡二唑檸檬酸酯(Proxazole Citrate)，雙甲丙酰龍(Rimexolone)，Romazarit，水楊酸膽堿硫酸鎂(Salcolex)，Salnacedine，雙水楊酸酯(Salsalate)，Sanguinarium Chloride，氯惡唑酮(Seclazone)，絲炎痛(Sermetacin)，噻氧噻嗪(Sudoxicam)，舒林酸(Sulindac)，噻吩甲酰布洛芬(Suprofen)，Talmetacin，氟煙酞酯(Talniflumate)，醋柳酞酯(Talosalate)，替布費(fèi)龍(Tebufelone)，替尼達(dá)普(Tenidap)，替尼達(dá)普鈉(TenidapSodium)，替諾西康(Tenoxicam)，氧喹苯胺(Tesicam)，芐叉異喹酮(Tesimide)，四氫甲吲胺(Tetrydamine)，噻庚乙酸(Tiopinac)，特戊酸巰氫可的松(Tixocortol Pivalate)，托耳米丁(Tolmetin)，甲苯酰吡酸鈉(Tolmetin Sodium)，三氯氟松(Triclonide)，三氟氨酯(Triflumidate)，疊氮吲酸(Zidometacin)，糖皮質(zhì)激素或苯酰吡酸鈉。
“抗凝血”和/或“纖維蛋白溶解”試劑包括但不限于，纖溶酶原(通過前激肽釋放酶的相互作用的纖溶酶，激肽酶，XII因子，XIIIa，纖溶酶原前激活劑，和組織纖溶酶源激活劑[TPA])，鏈激酶；尿激酶，茴香酰纖溶酶原-鏈激酶激活劑復(fù)合物；前尿激酶(Pro-UK)；rTPA(alteplase和激活酶；r表示重組)；rPro-UK；abbokinase；隆突酶；Sreptase Anagrelide Hydrochloride；bivalirudin；Dalteparin Sodium；Danaparoid Sodium；鹽酸咪唑乙氧基甲酸(Dazoxiben)，Efegatran Sulfate；伊諾肝素鈉(EnoxaparinSodium)，Ifetroban Sodium；Tinzaparin Sodium；Retaplase；Trifenagrel；芐丙酮香豆素(Warfarin)，葡聚糖。
“抗血小板”試劑包括但不限于，Clopridogrel；Sulfinpyrazone；阿斯匹林；潘生?。宦蓉愄?；吡醇氨酯；PGE；胰高血糖素；抗血清素藥物；卡非因；茶堿；己酮可可堿；噻氯匹定；阿那格雷(anagrelide)。
“降低脂”的試劑包括但不限于，吉莫非齊，cholystyramine，colestipol，尼克酸，丙丁芬(probucol lovastatin)，氟伐地丁(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐他丁(pravastatin)，cerivastatin，和其他HMG-CoA還原酶抑制劑。
HMG-CoA(3-羥基-3-甲基戊二基-輔酶A)還原酶是在膽固醇生物合成(HMG-CoA6Mevalonate)中的速度限制的反應(yīng)的微體酶。HMG-CoA還原酶抑制劑抑制HMG-CoA還原酶，并且作為結(jié)果抑制了膽固醇的合成。許多HMG-CoA還原酶抑制劑已經(jīng)可以用血膽固醇過高治療個體。更新的發(fā)現(xiàn)，HMG-CoA還原酶抑制劑已經(jīng)顯示是在中風(fēng)的治療中受益的(Endres M，et al.，《美國國家科學(xué)院院刊》1998，958880-5)。
本發(fā)明中有用的HMG-CoA還原酶抑制劑包括，但不限于simvastatin(美國專利號，4,444,784)，lovastatin(美國專利號，4,231,938)，Pravastatin sodium(美國專利號4,346,227)，氟伐地丁(fluvastatin，美國專利號4,739,073)，atorvastatin(美國專利號，5,273,995)，cerivastatin和許多其他的抑制劑，描述于如下給出的各項(xiàng)美國專利中，美國專利5,622,985，美國專利5,135,935，美國專利5,356896，美國專利4,920109，美國專利5,286,895，美國專利5,262,435，美國專利5,260,332，美國專利5,317,031，美國專利5,283,256，美國專利5,256,689，美國專利5,182,298，美國專利5,369,125，美國專利5,302,604，美國專利5,166,171，美國專利5,202,327，美國專利5,276,021，美國專利5,196,440，美國專利5,091,386，美國專利5,091,378，美國專利4,904,646，美國專利5,385,932，美國專利5,250,435，美國專利5,132,312，美國專利5,130,306，美國專利5,116,870，美國專利5,112,857，美國專利5,102,911，美國專利5,098,931，美國專利5,081,136，美國專利5,025,000，美國專利5,021,453，美國專利5,017,716，美國專利5,011,144，美國專利5,001,128，美國專利4,997,837，美國專利4,996,234，美國專利4,994,494，美國專利4,992,429，美國專利4,970,231，美國專利4,968,693，美國專利4,963,538，美國專利4,957,940，美國專利4,950,675，美國專利4,946,864，美國專利4,946,860，美國專利4,940,800，美國專利4,940,727，美國專利4,939,143，美國專利4,929,620，美國專利4,923,861，美國專利4,906,657，美國專利4,906,624，美國專利4,897,402，這些專利都通過在此引述而合并于本文。
“直接的凝血酶抑制劑”包括但不限于，蛭素，hirugen，hirulog，agatroban，PPACK，凝血酶aptamers。
“鈣通道封閉劑”“是在控制各種疾病中，包括幾種心血管紊亂，如血壓過高，心絞痛，和心律失常時，具有重要治療價值的化學(xué)上不同的類別的化合物[Fleckenstein，Cir.Res.v.52，(supp1.1)，p.13-16(1983)；Fleckenstein，實(shí)驗(yàn)事實(shí)和治療前景，John Wiley，New York(1983)；McCall，D.，Curr Pract Cardiol，v.10，p1-11(1985)]。鈣通道封閉劑是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞鈣通道防止或放慢鈣進(jìn)入的藥物的異源的組[Remington，《藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐》，第19版，Mack出版公司，Eaton，PA，p963(1995)]。大多數(shù)目前可得的鈣通道封閉劑，是本發(fā)明可利用的，屬于三個主要的藥物的化學(xué)物組之一，二氫吡啶，如硝苯地平，苯基烷基胺，如維拉帕米，和benzothiazepines，如diltiazem。用于本發(fā)明的其他鈣離子通道封閉劑包括但不限于，氨力農(nóng)，氨氯地平(amlodipine)，芐環(huán)庚烷(bencyclane)，費(fèi)樂地平(felodipine)，芬地林(fendiline)，氟桂嗪(flunarizine)，伊拉地平(isradipine)，硝苯乙吡啶(nicardipine)，尼莫地平(nimodipine)，環(huán)己哌啶(perhexilene)，加羅帕米(gallopamil)，噻烷丙胺(tiapamil)和噻烷丙胺1類似物(如1993RO-11-2933)，苯妥英(penytion)，巴比妥類(barbiturates)，和多肽(peptides dynorphin)，omega-conotoxin和omega-agatixin等等和/或其藥物可接受鹽。
“β-腎上腺素能受體封閉劑”是在心絞痛，高血壓，和心律失常中類似具有兒茶酚胺的心血管效果的一類藥物。β-腎上腺素能受體封閉劑包括，但不限于阿替洛爾，醋丁洛爾，阿普洛爾，苯呋洛爾，倍他洛爾，布尼洛爾，卡特洛爾，塞里普洛爾，海羥洛爾，茚諾洛爾，拉貝洛爾，左旋布諾洛爾，甲吲洛爾，甲基普拉洛爾，美丁多爾，美托洛爾，甲泛影洛爾，氧烯洛爾，吲哚洛爾，普萘洛爾，普拉洛爾，索他洛爾，納多洛爾，替普洛爾，托馬洛爾，替莫洛爾，布拉洛爾，噴布洛爾，三甲洛爾，2-(3-(1，1-二甲基乙基)-氨基-2-羥基丙氧基)-3-吡啶碳基鹽酸，1-丁基氨基-3-(2，5-二氯苯氧基)-2-丙醇，1-異丙基氨基-3-(4-(2-環(huán)丙基甲氧基乙基)酚氧基)-2-丙醇，3-異丙基氨基-1-(7-甲基林丹-4-yl氧基)-2-丁醇，2-(3-t-丁基氨基-2-羥基-丙基硫)-4-(5-碳氧基-2-噻吩基)噻唑，7-(2-羥基-3-t-丁基氨基丙氧基)四氯苯肽。上面鑒定的化合物可以用作等體混合物，或分別是他們的左旋或右旋形式。
環(huán)氧酶-2(COX-2)是最新鑒定的環(huán)氧酶形式?！碍h(huán)氧酶”是在大多數(shù)組織中存在的酶復(fù)合物，從花生四烯酸產(chǎn)生各種前列腺素和血栓烷。非甾類化合物，抗炎癥藥物發(fā)揮大部分他們的抗炎癥，麻醉，解熱鎮(zhèn)痛活性，抑制激素誘導(dǎo)的子宮收縮，和一些類型的通過抑制環(huán)氧化酶(也已知作為前列腺素G/H合成酶和/或前列腺素-內(nèi)過氧化合成酶)的癌癥生長。最初，已知只有一個形式的環(huán)氧化酶，“構(gòu)成性酶”或環(huán)氧化酶-1(COX-1)。它最初是在小牛原始的液泡中鑒定的。
最初已經(jīng)從雞，小鼠，和人來源克隆、測序和鑒定環(huán)氧化酶-2(COX-2)(參見例如，美國專利號，5,543,297，1996年8月授予Cromlish等，指定給Merck Frosst Canada公司，Kirkland，CA，題目是“評估環(huán)氧化酶-2活性的人環(huán)氧化酶-2 cDNA和實(shí)驗(yàn)”)。這一酶是與COX-1不同的。COX-2是許多試劑，包括促細(xì)胞分裂劑，內(nèi)毒素，激素，細(xì)胞因子和生長因子能快速和容易地誘導(dǎo)的。正如前列腺素具有生理和病理作用，可以確信，構(gòu)成性酶COX-1是在大部分中是對前列腺素的內(nèi)源基本釋放是可應(yīng)答的，所以在它們的生理功能如維持胃腸完整性和腎血液流中是重要的。相反，可以確信，可以誘導(dǎo)形式的COX-2主要是應(yīng)答前列腺素的生理效果的，其中快速的酶的誘導(dǎo)將發(fā)生在這樣的試劑，如炎癥試劑，激素，生長因子，和細(xì)胞因子的應(yīng)答中。所以，可以確信，選擇性抑制劑COX-2具有常規(guī)的非甾類抗炎癥藥物的相似的抗炎癥，鎮(zhèn)痛和麻醉特性，和另外抑制激素誘導(dǎo)的子宮收縮和同時具有潛在的抗癌癥效果，但副作用降低。特別是，確信，這樣的COX-2抑制劑具有的腸胃毒性的潛力降低，腎副作用的潛力降低，對出血時間的作用降低，和可能在阿斯匹林敏感的氣喘受試者中誘導(dǎo)氣喘病的潛力降低，所以可以用于本發(fā)明。
許多選擇性的“COX-2抑制劑”是本領(lǐng)域已知的。這些包括，但不限于，美國專利號5,474,995“作為cox-2抑制劑的苯基雜環(huán)”，美國專利5,521,213“作為環(huán)氧化酶-2的抑制劑的二芳基雙環(huán)雜環(huán)”；美國專利5,536,752“作為COX-2抑制劑的苯基雜環(huán)”；美國專利5,550,142“作為COX-2抑制劑的苯基雜環(huán)”；美國專利5,552,422“作為抗炎癥試劑的芳基取代5，5融合芳基氮化合物”；美國專利5,604,253“作為環(huán)氧化酶抑制劑的N苯基磷酸司甲苯酯-3-yl丙酸衍生物”，美國專利5,604,260“5-甲烷亞磺酰氨基-1-二氫茚酮”；美國專利5,639,780“作為環(huán)氧化酶抑制劑的N苯基吲哚-3-y1-正丁酸”；美國專利5,677,318“作為抗炎癥試劑的二苯基-1，2，3-噻二唑”；美國專利5,691,374“作為COX-2抑制劑的二芳基-5-氧酸化-2-(5H)-呋喃”；美國專利5,698,584“作為COX-2抑制劑的前藥物的3，4-二芳基-2-羥基-2，5-二氫呋喃”；美國專利5,710,140“作為COX-2抑制劑的苯基雜環(huán)”；美國專利5,733,909“作為COX-2抑制劑的前藥物的二苯基均二苯代乙烯”；美國專利5,789,413“作為COX-2抑制劑前藥物烷基化苯乙烯”；美國專利5,817,700“作為環(huán)氧化酶抑制劑的順式芳基環(huán)丁烯”；美國專利5,849,943“作為環(huán)氧化酶抑制劑的均二苯代乙烯衍生物”；美國專利5,922,742“作為選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑的吡啶-2-環(huán)戊基-1-ones”；美國專利5,925,631“作為COX-2抑制劑的前藥物的烷基化苯乙烯”中所述的COX-2抑制劑；所有這些專利都是指定給Merck Frosst Canada公司(Kirkland，CA)。其他的COX-2抑制劑也在指定給G.D.Searle&公司(Skokie，IL)，題目為作為環(huán)氧化酶-2和5-脂氧化酶抑制劑的取代磺基苯基雜環(huán)“的美國專利5,643,933中敘述了。
許多上面鑒定的COX-2抑制劑是選擇的COX-2抑制劑的前藥物，通過體內(nèi)轉(zhuǎn)換成活性的和選擇性的COX-2抑制劑發(fā)揮它們的作用。從上面已鑒定的COX-2抑制劑前藥物形成的活性的和選擇性的COX-2抑制劑在1995年1月公開的WO95/00501，1995年7月13日公開的WO95/18799和1995年12月12日公開的美國專利5,474,995，題目“評估環(huán)氧化酶-2活性的人環(huán)氧化酶-2 cDNA和實(shí)驗(yàn)”中已詳細(xì)敘述，本領(lǐng)域的一個普通技術(shù)人員能夠確定是否一種試劑是選擇性的COX-2抑制劑或COX-2抑制劑的前體，所以是本發(fā)明的一部分。
“血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑”是干擾血管緊張肽II的合成和代謝功能的試劑。這些試劑包括，但不限于，血管緊張肽-轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制劑，血管緊張肽II拮抗物，血管緊張肽II受體拮抗物，激活血管緊張肽II的試劑，和防止血管緊張肽II最終從中派生的血管緊張肽I的合成的試劑。腎素-血管緊張肽系統(tǒng)參與了血動力學(xué)和水和電平衡的調(diào)節(jié)。在血漿中降低血液體積，腎擴(kuò)散壓，或Na+的濃度的因子趨向于激活該系統(tǒng)，而提高這些參數(shù)的因子趨向于抑制它的功能。
血管緊張肽I和血管緊張肽II是通過酶的腎素-血管緊張肽途徑合成的。當(dāng)酶腎素作用于血管緊張肽原，血漿中的一種假球蛋白時，啟動了該合成過程，產(chǎn)生了十肽菌素血管緊張肽I。將血管緊張肽I通過血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶(ACE)轉(zhuǎn)換成血管緊張肽II(血管緊張肽-[1-8]十肽菌素)。后者是已經(jīng)包含作為各種哺乳動物種類如人中的幾種形式的高血壓的成因劑的活性加壓物質(zhì)。
血管緊張肽(腎素-血管緊張肽)系統(tǒng)抑制劑是作用為干擾從血管緊張肽原或血管緊張肽I產(chǎn)生血管緊張肽II，或干擾血管緊張肽II的活性額化合物。這樣的抑制劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的，包括作用為抑制參與血管緊張肽II，包括腎素和ACE的最終生產(chǎn)的酶的化合物。一旦生產(chǎn)，他們也包括干擾血管緊張肽II的活性的化合物。這樣的化合物的實(shí)施例類別包括抗體(例如，腎素)，氨基酸和其類似物(包括與更大的分子結(jié)合的那些)，肽(包括血管緊張肽的肽類似物和血管緊張肽I)，前腎素的相關(guān)類似物等。在大多數(shù)有潛力的和有用的腎素-血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑是腎素抑制劑，ACE抑制劑，和血管緊張肽II拮抗物。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中，腎素血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑是腎素抑制劑，ACE抑制劑，和血管緊張肽II拮抗物。
“血管緊張肽II拮抗物”是通過結(jié)合血管緊張肽II受體和干擾它的活性干擾血管緊張肽II的活性的化合物。血管緊張肽II拮抗物是已知的，包括肽化合物和非肽化合物。大多數(shù)血管緊張肽II拮抗物是輕微修飾的同類，其中的拮抗劑活性是通過在位置8用其他的氨基酸取代苯丙氨酸來減弱的；穩(wěn)定性可以通過放慢體內(nèi)的間并的其他取代來增強(qiáng)。血管緊張肽II拮抗物的例子包括肽化合物(例如，saralasin，[(San1)(Val5)(Ala8)]血管緊張肽-(1-8)十肽菌素和相關(guān)的類似物)；N取代咪唑-2-one(美國專利號5,087,634)；咪唑乙酸衍生物，包括2-N-丁基-4-氯-1-(2-鄰二氯苯)咪唑-5-乙酸(參見Long et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther.247(1)，1-7(1988))；4，5，6，7-四羥基-1H-咪唑[4，5-c]吡啶-6-羧酸和類似衍生物(美國專利號，4,816,463)；N2-四唑β-葡糖苷類似物(美國專利號5,085,992)；取代的吡咯，吡唑和tryazoles(美國專利號5,081,127)；酚和雜環(huán)衍生物如1，3-咪唑(美國專利號，5,073,566)；咪唑融合的7-元環(huán)雜環(huán)(美國專利號5,064,825)；肽(例如，美國專利號4,772,684)；對血管緊張肽II的抗體(例如，美國專利號，4,302,386)和芳烷基咪唑化合物如雙酚基-甲基取代咪唑(例如，EP號253,310,1988年1月20日)；ES8891(N-嗎啉乙基-(1-萘基)-L-丙氨酰-(4-噻唑基)-L-丙氨酰(35，45)-4-氨基-3-羥基-5-環(huán)己戊基-N-己基酰胺，Sankyo公司，東京，日本)；SKF108566(E-α-2-[2-丁基-1-(羧基苯基)甲基]1H-咪唑-5-基[亞甲基]-2-硫代酚丙酸，Smith Kline Beecham藥學(xué)，PA)；Losartan(DUP 753/MK954，杜邦邁克藥學(xué)公司)；Remikirin(RO42-5 892，F(xiàn).Hoffman LaRocheAG)；A2拮抗劑(Marion Merrill Dow)和一些非肽雜環(huán)(G.D.Searle公司)。
“血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶(ACE)”是催化血管緊張肽轉(zhuǎn)換成血管緊張肽II的酶。ACE抑制劑包括氨基酸和其衍生物，肽，包括二和三肽，和ACE的抗體，通過抑制ACE的活性干預(yù)腎素-血管緊張肽系統(tǒng)，從而減少或去除了加壓物質(zhì)血管緊張肽II的形成。ACE抑制劑已經(jīng)在醫(yī)學(xué)上用于治療高血壓，先天性心臟衰竭，心肌梗死和腎疾病。已知可用作ACE抑制劑的化合物的類別包括酰巰基和巰基阿爾卡諾脯氨酸如甲巰丙脯酸(美國專利號4,105,776)和佐諾普利(zofennopril，美國專利號，4,316,906)，羧基烷基二肽如伊那普利(enalapril，美國專利號4,374,829)，賴諾普利(lisinopril，美國專利號4,374,829)，喹那普利(quinapril，美國專利號4,344,949)，雷米普利(ramipril，美國專利號4,587,258)，和哌道普利(perindopril，美國專利號4,508,729)，羧烷基二肽模擬物如西拉普利(cilazapril，美國專利號4,512,924)和苯并普利(benazapril，美國專利號4,410,520)，磷酸烷氧基脯氨酸如福森普利(fosinopril，美國專利號4,337,201)和群多普利(trandolopril)。
“腎素抑制劑”是干預(yù)腎素活性的化合物。腎素抑制劑包括氨基酸和其衍生物，肽和其衍生物，和腎素的抗體。腎素抑制劑的實(shí)施例是美國專利的受試者，如下肽的尿衍生物(美國專利號，5,116,835)；通過非肽鍵結(jié)合的氨基酸(美國專利號5,114,937)；二和三肽衍生物(美國專利號，5,106,835)；氨基酸和其衍生物(美國專利號5,104,869和5,095,119)；二氧磺酰胺和亞磺酰(美國專利號5,098,924)；修飾的肽(美國專利號5,095,006)；肽基-β-氨基乙酰氨基二氨基甲酸酯(美國專利號5,089,471)；吡唑咪唑啉酮(美國專利號5,075,451)；氟和氯抑胃酶氨酸或含statone的肽(美國專利號5,066,643)；肽基氨基diols(美國專利號5,063,208和4,845,079)；N-嗎啉衍生物(美國專利號5,055,466)；抑胃酶素衍生物(美國專利號4,980,283)；N-雜環(huán)乙醇(美國專利號4,885,292)；腎素單克隆抗體(美國專利號4,780,401)；和各種其他的肽和其類似物(美國專利號5,071,837，5,064,965，5,063,207，5,036,054，5,036,053，5,034,512，和4,894,437)。
結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的試劑包括多肽試劑。這樣的多肽包括根據(jù)常規(guī)方法制備的多克隆和單克隆抗體。這樣的抗體是本領(lǐng)域已知的，包括抗ICAM1抗體以及其他這樣的抗體。很明顯，正如本領(lǐng)域已知的，只有一小部分抗體分子，paratrope，參與了抗體與它的表位的結(jié)合(參見，Clark，W.R.(1986)現(xiàn)代免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)功能，Wiley&Sons公司，紐約；Roitt，I.(1991)，基本免疫學(xué)，第7版，Blackwell科學(xué)出版社，牛津)。PFc’和Fc區(qū)域例如是補(bǔ)充級聯(lián)的效應(yīng)物，但不參與抗原結(jié)合。PFc’區(qū)域已經(jīng)酶裂解的抗體，或已經(jīng)沒有pFc’區(qū)域產(chǎn)生，命名為F(ab’)2片段，保留了完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。同樣，F(xiàn)c區(qū)域已經(jīng)酶裂解，或產(chǎn)生時已經(jīng)沒有Fc區(qū)域的抗體，命名為Fab片段，保留了完整抗體分子的一個抗原結(jié)合位點(diǎn)。進(jìn)一步，F(xiàn)ab片段包括了共價結(jié)合的抗體輕鏈，和貢獻(xiàn)給Fd的抗體重鏈的一部分。Fd片段是抗體特異性的主要決定簇(一個可以結(jié)合多達(dá)10個不同的輕鏈而不改變抗體特異性的Fd片段)，并且Fd片段在分離中保留了表位結(jié)合能力。
在抗體的抗原結(jié)合部分內(nèi)，正如本領(lǐng)域已知的，有互補(bǔ)的決定區(qū)域(CDR)，可以直接與抗原的表位和框架區(qū)域(Frs)相互作用，保留了paratope的四級結(jié)構(gòu)(參見，Clar，1986；Roitt，1991)。在兩個重鏈Fd片段和輕鏈IgG免疫球蛋白中，由三個互補(bǔ)決定區(qū)域(CDR1到CDR3)分開的四個框架區(qū)域。CDR，特別是CDR3區(qū)域，更特別地重鏈CDR3是大大應(yīng)答抗體特異性的。
現(xiàn)在本領(lǐng)域已經(jīng)很好地確定，哺乳動物抗體的非CDR區(qū)域可以用非特異或雜特異的抗體的相似區(qū)域來取代，而保留了原始抗體的表位特異性。這在“人化”抗體的發(fā)展和用途中是最明顯的證據(jù)，其中非人的CDR是共價地結(jié)合人FR和/或Fc/pFc區(qū)域產(chǎn)生功能性抗體的。所以，例如，PCT國際出版號WO 92/04381涉及人化小鼠RSV抗體的生產(chǎn)和用途，其中至少一部分小鼠FR區(qū)域已經(jīng)用人起源的FR區(qū)域取代。這樣的抗體，包括具有抗原結(jié)合能力的完整抗體的片段經(jīng)常稱為“嵌合”抗體。
所以，正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能了解的，本發(fā)明也提供了F(ab’)2，F(xiàn)ab，F(xiàn)v和Fb片段；嵌合抗體，其中Fc和/或Fr和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區(qū)域已經(jīng)用同源的人或非人序列取代；嵌合F(ab’)2片段抗體，其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區(qū)域已經(jīng)用同源的人或非人序列取代；嵌合Fd片段抗體，其中FR和/或CDR1和/或CDR2區(qū)域已經(jīng)用同源的人或非人序列取代。本發(fā)明也包括這樣稱謂的單鏈抗體。
所以，本發(fā)明包括特異地結(jié)合細(xì)胞黏附分子的許多大小和類型的多肽。這些多肽也可以是從抗體技術(shù)以外的來源派生的。例如，這樣的多肽結(jié)合劑可以提供間并的肽文庫來提供，可以容易地在溶液中制備成固定形式或噬菌體展示文庫。結(jié)合文庫也可以合成肽，含有一個或多個氨基酸。文庫進(jìn)一步可以合成peptoid和非肽合成成分。
噬菌體展示文庫在鑒定用于本發(fā)明的結(jié)合肽時可能特別有效。簡要地說，利用傳統(tǒng)的方法，制備了噬菌體文庫(利用例如，m13，fd，或λ噬菌體)，展示了4到約80個氨基酸殘基的插入。這些插入片段可以代表例如完全間并或非線性排列。然后，可以選擇結(jié)合細(xì)胞黏附分子的含噬菌體的插入片段。這一過程可以結(jié)合細(xì)胞黏附分子的噬菌體的幾個再選擇循環(huán)來重復(fù)。重復(fù)循環(huán)導(dǎo)致富積含有噬菌體的特別序列?？梢赃M(jìn)行DNA序列分析鑒定表達(dá)的多肽的序列?？梢源_定結(jié)合細(xì)胞黏附分子的序列的最小的線性部分。利用含有插入片段的非線性排列可以重復(fù)該過程，插入片段中含有所有最小線性部分中的一部分和它上游或下游的一個或多個其他的間并殘基。也可以利用酵母二雜合體篩選方法鑒定結(jié)合細(xì)胞黏附分子的多肽。所以，細(xì)胞黏附分子或其片段可以用于篩選肽文庫，包括噬菌體展示文庫，鑒定和選擇細(xì)胞黏附分子的肽結(jié)合伙伴。
在實(shí)施本發(fā)明的方法中，需要得到個體的sCD40L水平?？扇艿膕CD40L是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的。通過任何技術(shù)已認(rèn)識的方法可以得到個體的sCD40L的水平。通常，通過在體液，例如，血液，淋巴，唾液，尿等等中測量標(biāo)記物的水平可以確定水平。該水平可以通過ELISA或免疫測試或確定標(biāo)記物的存在的其他傳統(tǒng)技術(shù)來確定。傳統(tǒng)的方法包括將患者的體液的樣品送到檢測的商業(yè)實(shí)驗(yàn)室。
本發(fā)明也包括將個體的sCD40L的水平與預(yù)定的值比較。預(yù)定的值可以采取各種形式?？梢允菃我坏慕刂怪担缙骄??？梢愿鶕?jù)比較組來確定，如在一個確定的組中的危險是另一個確定的組的兩倍?？梢允且粋€范圍，例如測試的群體同等地分成組，如低危險組，中等危險組，和高危險組，或四等分，最低的四分之一是危險最低的個體，最高的四分之一是危險最高的個體。
預(yù)定值可以依賴于選擇的特殊的群體。例如，沒有可檢測疾病和過去沒有心血管紊亂歷史的表面健康的非吸煙群體將有與吸煙群體或過去有心血管紊亂歷史的群體不同的‘正?！秶膕CD40L。因此，選擇的預(yù)定值可以考慮個體所落在的類別范圍。通過本領(lǐng)域普通技術(shù)溶液，可以用常規(guī)實(shí)驗(yàn)選擇適當(dāng)?shù)姆秶皖悇e。
優(yōu)選的體液是血液。對于sCD40L，對于表面健康的非吸煙者的群體的一個重要的截止值是2.9ng/mL或更低。SCD40L的另一個重要的截止值是3.0，3.1，3.2，3.3，3.4，3.5，36.，3.7，.3.8，3.9，4.0，4.1，4.2，4.3，4.4，4.5，4.6，4.7，4.8，4.9，5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，10.0，10.5或11.0ng/mL。在鑒定危險時，可以確定許多預(yù)定的值。
現(xiàn)在已經(jīng)有生產(chǎn)sCD40L的測試的試劑的商業(yè)來源。這些包括，但不限于BenderMedSystems(維也納，奧地利)，和阿伯特醫(yī)藥(阿伯特園，伊利諾斯州)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了特異于和對根據(jù)本發(fā)明選擇的預(yù)定值具有適當(dāng)?shù)拿舾行缘牡男略噭┖谢驕y試方法。所以，優(yōu)選的試劑盒將是與目前市場上可得的那些不同的，其中包括截止值不同，對特別的截止值有不同的敏感性，以及根據(jù)測試的結(jié)果鑒定危險的說明書或其他印刷材料。
如上所述，本發(fā)明提供了評估個體將取益于用降低未來發(fā)展成心血管紊亂危險的試劑的治療的可能性的方法。這一方法對患者的治療和對新治療的臨床發(fā)展具有重要的意義。醫(yī)生根據(jù)對患者的期望的凈益處選擇治療患者的治療方案。凈益處是從危險對益處的比例中來的。本發(fā)明允許選擇最有可能通過干擾受益的個體，從而輔助醫(yī)生選擇治療方案。這可能包括利用更大危險方式的藥物，其中期望的益處的可能性增加。同樣，臨床研究者需要為臨床實(shí)驗(yàn)選擇一個有高度可能性得到凈益處的群體。本發(fā)明可以幫助臨床研究者選擇這樣的個體?？梢云谕R床研究者現(xiàn)在利用本發(fā)明確定臨床實(shí)驗(yàn)的進(jìn)入規(guī)則。
本發(fā)明的另一個驚人的方面是發(fā)現(xiàn)了，在發(fā)展成心血管紊亂的危險升高的個體中存在血管的斑內(nèi)脂積累時，sCD40L具有預(yù)測性價值。如本文所用，“有發(fā)展成心血管紊亂危險”的個體是根據(jù)傳統(tǒng)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐可以確定的一個類別的受試者(參見例如，Harrison的實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)原理，第15版，McGraw-Hill公司，紐約)。通常，有發(fā)展成心血管紊亂危險的個體具有與心血管疾病相關(guān)的一個或多個危險因素。這樣的危險因素包括心血管紊亂家族歷史，高血壓，血膽固醇過高，糖尿病，吸煙，動脈粥樣硬化等等。另外，心室纖維化，或最近有中風(fēng)和/或心肌梗死是重要的危險因素。過去，在有發(fā)展成心血管紊亂危險的個體中血管斑內(nèi)的脂積累的測定只能利用昂貴的，一些情況中是有限的技術(shù)(例如，MRI)來完成。
本領(lǐng)域已知，引起冠狀凝血的主要因素是動脈粥樣硬化斑的裂解。正如本文另外解釋的，在發(fā)展成心血管紊亂的個體中測定斑內(nèi)脂積累是測定斑額易損性(即，有裂解危險的斑)的重要步驟，因此評估了未來出現(xiàn)凝血事故的危險。完整的和裂解的斑的比較研究已經(jīng)用于確定易損的斑的特征。這些特征是脂核心占據(jù)了50％的全部斑體積，薄的斑帽，很大的絕對數(shù)目和密度的巨嗜細(xì)胞，光滑肌含量的斑的降低。所以，在確定有發(fā)展成本發(fā)明的方法中所述的心血管紊亂危險的個體中有斑內(nèi)脂的積累，本領(lǐng)域一個技術(shù)人員可以評估是否斑是易損的，并且可以設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)闹委?干擾方案防止個體中隨后的凝血事件的出現(xiàn)。
本發(fā)明也包括用治療方案來治療受試者防止心血管紊亂的方法。選擇包括抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降脂試劑，直接的凝血抑制劑，糖蛋白IIb/IIIa受體抑制劑，或結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子和/或其任意的結(jié)合的能力的試劑的組的試劑是對具有上面的正常水平的系統(tǒng)炎癥的標(biāo)記物的受試者給藥的。試劑的給藥的量是能優(yōu)選地降低受試者未來發(fā)展成心血管紊亂的危險的量。在一些實(shí)施方案中，試劑是非阿斯匹林抗炎癥試劑。試劑如本文中其余部分所述。
有效的量是足以提供醫(yī)學(xué)上需要的結(jié)果如危險的降低的試劑的劑量。有效的量將隨著待處理的條件，待治療的受試者的年齡和物理癥狀，癥狀的嚴(yán)重性，治療的持續(xù)時間，目前的治療的特性(如果有)，給藥的特異途徑等在健康的實(shí)踐者的知識和實(shí)驗(yàn)內(nèi)的因素而改變。例如，有效量可以依賴于個體具有正常的sCD40L的水平升高的程度。應(yīng)該理解，本發(fā)明利用的試劑打算降低心血管紊亂的危險，即他們可以用于預(yù)防。所以，有效量是可以降低慢的，或許一起防止心血管紊亂的發(fā)展的危險的量。
通常，活性化合物的劑量將是來自約0.01mg/kg每天到1000mg/kg每天。可以期望，劑量范圍50-500mg/kg將是適當(dāng)?shù)模瑑?yōu)選地是口服，并且是每天一次或幾次給藥。降低劑量將來自其他形式的給藥，如靜脈內(nèi)給藥。在該事件中，受試者中的一次應(yīng)答在最初應(yīng)用的劑量時是不足的，更高的劑量(或不同的，更定位的遞送途徑的有效的更高的劑量)可以用于患者耐受力允許的程度。應(yīng)該關(guān)注每天幾次劑量，得到適當(dāng)?shù)幕衔锏南到y(tǒng)水平。
當(dāng)給藥時，將本發(fā)明的藥學(xué)制劑以藥物可接受的量和以藥物可接受的組合物施加。這樣的制劑可以常規(guī)含有鹽，緩沖試劑，防腐劑，兼容載體和可選擇的其他治療試劑。當(dāng)在醫(yī)藥中使用時，該鹽應(yīng)該是藥物可接受的，但非藥物可接受的鹽傳統(tǒng)上可以用于制備藥物可接受的鹽，并且不排除在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這樣的藥學(xué)可接受鹽包括，但不限于那些從下面的酸；鹽酸，溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，馬來酸，乙酸，唾液酸，檸檬酸，富馬酸，丙二酸，琥珀酸等。同樣，藥物可接受鹽可以制備成堿性金屬或堿土鹽，如鈉，鉀或鈣鹽。
或者，抗炎癥試劑可以結(jié)合藥物可接受載體。如本文所用，“藥物可接受載體”指一個或多個兼容的固體或液體填充劑，稀釋劑或適于對人給藥的包囊物質(zhì)。術(shù)語“載體”指天然的或合成的有機(jī)或無機(jī)成分，它們與活性成分結(jié)合簡化了應(yīng)用。藥物組合物的成分也能與本發(fā)明的分子共混合，和相互混合，混合的方式是使沒有基本上損害需要的藥學(xué)效率的相互作用。
藥物組合物可以含有適當(dāng)?shù)木彌_試劑，包括鹽中的乙酸，鹽中的檸檬酸，鹽中的硼酸和鹽中的磷酸。
藥物組合物或者也可以含有適當(dāng)?shù)姆栏瘎?，如苯扎氯胺，氯代丁醇；paraben和硫柳汞鈉。
適于腸胃外給藥的組合物通常包括無菌的抗炎癥試劑的水溶液制劑，優(yōu)選地是與受體的血液等滲的。水溶液制劑可以利用適當(dāng)?shù)姆稚⒒蚣訚駝┖蛻腋≡噭┑囊阎椒▉砼渲?。無菌可注射制劑也可以是非毒性的腸胃外可接受的稀釋液或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如作為1，3丁烷的溶液。在可以應(yīng)用的可接受的載體和溶劑中的是水，Ringer溶液，和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌的，固定的油傳統(tǒng)上可以用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了這一目的，可以利用任意的帶固定的油包括合成的單或二甘油。另外，可以在可注射的制劑中使用脂肪酸如油酸。適于口服，皮下，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)等給藥的載體配方可以在Remington藥物科學(xué)，Mack Publishing公司，Easton，PA。
各種給藥途徑是可行的。選擇的特殊方式當(dāng)然將依賴于選擇的特殊藥物，待治療的癥狀的嚴(yán)重性，和治療效果要求的劑量。通常說，本發(fā)明的方法可以用任意的給藥方式來實(shí)施，這些給藥方式是藥物可接受的，指產(chǎn)生有效的活性化合物水平，而不引起臨床不可接受的不利的影響的任何方式。這樣的給藥方式包括口服，直腸，局部的，鼻的，腹內(nèi)的，和腸胃外的途徑。術(shù)語“腸胃外”包括皮下，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)或灌注。靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)的途徑不是特別適用于長期治療和預(yù)防額。但是，它們在緊急情況中可以是優(yōu)選的。由于對患者方便，口服給藥是優(yōu)選的預(yù)防治療以及劑量方案。
藥物組合物可以方便地以單位劑量的形式存在，可以通過本藥物領(lǐng)域已知的任意方法來制備。所有的方法包括將抗炎癥試劑結(jié)合載體的步驟，構(gòu)成一個或多個輔助成分。通常，通過均一地和最初地將抗炎癥試劑結(jié)合液體載體，一種細(xì)微分開的固體載體，或兩者，并且然后如果需要將產(chǎn)物成形來制備組合物。
適于口服給藥的組合物可以作為分散的單位如膠囊，片劑，錠劑存在，各含有預(yù)定量的抗炎癥試劑。其他組合物包括水溶液液體或非水溶液液體如糖漿，賦形劑或乳液的懸浮液。
其他遞送系統(tǒng)可以包括按時間釋放，推測釋放或持續(xù)釋放的遞送系統(tǒng)。這樣的系統(tǒng)可以避免本發(fā)明的試劑的重復(fù)給藥，提高對受試者和醫(yī)生的方便。許多類型的釋放遞送系統(tǒng)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可得和已知的。它們包括多聚物堿基系統(tǒng)，如聚(交酯-glycolide)，共聚草酸，聚carprolactone，聚酯酰胺，聚原酸酯，聚羥丁酸和聚酸酐。含有藥物的前面所述多聚物的微膠囊如美國專利5,075,109中所述。遞送系統(tǒng)也包括非多聚物系統(tǒng)包括甾醇如膽固醇，膽固醇酯，和脂肪酸或中性脂肪酸如單，二，和三甘油；水凝膠釋放系統(tǒng)sylastic系統(tǒng)；基于肽的系統(tǒng)；蠟包衣；利用傳統(tǒng)的結(jié)合物和賦形劑的壓縮的片劑；部分融合的植入體；等等。特定的例子包括，但不限于(a)腐蝕系統(tǒng)，其中本發(fā)明的試劑包含的形式在基質(zhì)中，如美國專利號4,452,775，4,675,189，和5,736,152中所述，和(b)擴(kuò)散系統(tǒng)，其中活性成分以一個受控制的速度從多聚物如中滲透，如美國專利號3,854,480，5,133,974和5,407,686中所述。另外，基于泵的硬件遞送系統(tǒng)也可以利用，其中的一些適于植入。
長期維持釋放的植入體的使用特別適于慢性疾病的治療。長期釋放如本文所用，指構(gòu)建植入體，和排列成活性成分的遞送治療水平，至少30天，優(yōu)選地60天。長期持續(xù)釋放的植入體是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括如上所述的一些釋放系統(tǒng)。
參考下面的實(shí)施例，本發(fā)明將能更完全地理解。但是，這一實(shí)施例僅僅打算用于解釋本發(fā)明的實(shí)施方案，并且不構(gòu)成對本發(fā)明的范圍的限制。
實(shí)施例實(shí)施例1高血漿濃度的sCD40L是與表面健康的婦女中心血管危險增高有關(guān)我們在婦女健康研究(WHS)的參與者中進(jìn)行了一個有前景的，逐選情況下的對照分析，這是一個評估28,263名沒有心血管疾病或癌癥11的美國婦女中維生素E和低劑量的阿斯匹林的效果的初級預(yù)防實(shí)驗(yàn)。在EDTA中收集血液樣品，并且儲藏在液氮中直到進(jìn)行分析。在這一研究中，我們選擇130個隨后發(fā)展成非致命的心肌梗死或中風(fēng)，或在開始的四年追蹤期死于急性心血管事件的婦女作為“情況”受試者。由一個醫(yī)生的委員會利用標(biāo)準(zhǔn)方法確定終點(diǎn)。對于每一種已證實(shí)的情況，選擇一個“對照”參與者，她的年齡相仿(±2歲)，相似的吸煙狀態(tài)(過去有，現(xiàn)在有，從沒有)，并且還沒有心血管疾病的報告。
基準(zhǔn)的血漿sCD40L濃度的測定利用了ELISA(BenderMedSystems；Vienna，Austria)。簡要地說，將稀釋(1∶5)的血漿樣品成三份加到用小鼠抗人CD40L抗體預(yù)包衣和混合(1∶2)了辣根-過氧化物酶標(biāo)記的第二小鼠抗人CD40L抗體(2h)的96孔平板中。隨后，洗滌平板，利用TMB底物，通過色度計(jì)確定抗體的結(jié)合。在650nm讀出吸光值，通過比較重組人CD40L的系列稀釋確定sCD40L的血漿濃度以盲式進(jìn)行分析。對所有樣品，三份之間的內(nèi)部測試的變化小于15％。在疾病控制標(biāo)準(zhǔn)化中心的一個實(shí)驗(yàn)室測定脂水平。
計(jì)算該研究的參與者的基準(zhǔn)臨床特征的平均和比例，利用學(xué)生的Tenant檢驗(yàn)或chi平方統(tǒng)計(jì)進(jìn)行比較。然后，在一系列的邏輯回歸分析中計(jì)算與基準(zhǔn)的sCD40L的水平增高有關(guān)的發(fā)展成將來的心血管事件的相對危險，這些分析中的研究樣品是根據(jù)sCD40L的對照分布的50，75，90，95，和99個百分位數(shù)切入點(diǎn)來分的。所有的p值是雙尾的，所有的置信區(qū)間的計(jì)算水平是95％。
結(jié)果表1顯示了研究的參與者的基準(zhǔn)臨床特征。如預(yù)期的，在追蹤期發(fā)展成心血管疾病的婦女與保持沒有疾病的婦女相比，在進(jìn)入研究時更似乎是肥胖，高血壓，糖尿病，或有早期動脈粥樣硬化的家族歷史。在所有情況中，基準(zhǔn)的LDL膽固醇和甘油三酯的水平較高，而HDL膽固醇水平較低(所有p≤0.01)。利用激素替代治療在兩個組之間沒有明顯的差異。
從整體上說，在所有情況中，基準(zhǔn)的sCD40L的血漿水平超過對照中的(2.86±0.35和2.09±0.19ng/ml；p≤0.02)。這一差異差不多完全是有情況的受試者之間很多值特別高的結(jié)果。大部分有情況的和對照的受試者在進(jìn)入研究時有相似水平的sCD40L(圖1)。但是，11個情況個體中sCD40L的基準(zhǔn)水平與對照組中的唯一的1個研究受試者比較，在控制分布中超過了99個百分位數(shù)切入點(diǎn)(p≤0.01)。
根據(jù)該研究對照的分布確定的特異切入點(diǎn)，在未來發(fā)展成心血管事件的相對危險隨著sCD40L的濃度的提高而上升，并且sCD40L的水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上變得明顯，超過了95和99個百分位數(shù)切入點(diǎn)(RR3.29(p≤0.02)和11.83(p≤0.01))(表II)。
在sCD40L水平超過99個百分位數(shù)切入點(diǎn)的12個參與者與較低水平的248個參與者之間比較臨床特征，進(jìn)行另外的hoc后分析。在這兩個研究組中，年齡，吸煙情況，體重指標(biāo)，LDL，和HDL膽固醇水平和激素替代治療是相似的。隨著sCD40L的水平特別地提高，研究的參與者高血壓和家族歷史性的早期冠狀動脈疾病的速度似乎更快，但這些差異中沒有一個在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是明顯的。12個sCD40L基準(zhǔn)水平明顯升高的婦女中沒有一個有糖尿病。另外，11個極端的sCD40L水平的情況個體和較低的sCD40L水平的其余情況個體之間的隨機(jī)化時間到心血管事件的時間沒有明顯差異(15.9到19.5個月，p＝0.3)。分配阿斯匹林和安慰劑可以假定是不影響我們的觀察的，因?yàn)轱@示最高的sCD40L濃度的12個受試者的組中，6個任意指定為阿斯匹林組，其余6個是安慰劑組。另外，測試sCD40L的血液是在隨機(jī)化之前取的。
在這一部分的過去的報告中，在C反應(yīng)蛋白質(zhì)，IL-6，血清淀粉樣A和ICAM-1的血漿水平與心血管疾病的危險的升高之間有報道的關(guān)系12。但是，我們觀察到，在這些參數(shù)和sCD40L之間沒有明顯的關(guān)系。
討論在這一對表面健康的中年婦女的前景，逐選的有情況的對照研究中，基準(zhǔn)(≥5.5ng/ml)的sCD40L的血漿濃度明顯升高預(yù)示了將來的心血管事件的危險明顯升高。前面的研究證明，有不穩(wěn)定的咽痛的患者當(dāng)與有穩(wěn)定的咽痛的患者和對照比較時，sCD40L的血清水平明顯升高10。在這一情況中，激活的血小板和/或T淋巴細(xì)胞可以第二次釋放sCD40L。但是，本研究證明，在可能是急性血栓導(dǎo)致的事件之前，一些婦女中sCD40L濃度升高。
關(guān)于可溶形式的CD40L的釋放機(jī)制知之甚少。在血漿中的sCD40L的潛在的源包括血小板和T淋巴細(xì)胞以及單核吞噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。1-5與sCD40L血漿水平的增高相關(guān)的心血管疾病的家族歷史的趨勢表明，遺傳因素可能影響我們觀察到的現(xiàn)象。我們發(fā)現(xiàn)，在sCD40L和C反應(yīng)蛋白質(zhì)，IL-6和ICAM-1水平?jīng)]有關(guān)系。因此，延伸的意義是，CD40/CD40L獨(dú)立機(jī)制可能與有些婦女盡管sCD40L水平是低的，但仍發(fā)展成心血管綜合癥有很大關(guān)系。我們的發(fā)現(xiàn)表明，sCD40L的血漿濃度高反映了與其他炎癥標(biāo)記標(biāo)志的那些不同的存在危險的方面。
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附圖的詳細(xì)說明圖1.在保持沒有(對照，n＝130)或已發(fā)展成心血管事件(有情況，n＝130)的中年健康婦女中的基本的sCD40L的血清濃度。以一式三份分析樣品，表示出了平均值。成點(diǎn)的線表示了控制分布的99個百分位數(shù)的切入點(diǎn)。
表I.研究的參與者的基本特征對照(n＝130) 有情況(n＝130)p-值年齡 60.3 60.3 符合要求吸煙狀態(tài)(％) 符合要求現(xiàn)在26.9 26.9過去31.6 31.6沒有41.5 41.5體重指標(biāo)(kg/m2) 25.7 27.6 0.004高血壓(％) 34.9 56.9 0.001CAD的家族歷10.8 22.7 0.01史(％)*糖尿病(％) 3.110.8 0.02現(xiàn)在HRT**(％) 40.0 44.60.1LDL(mg/dL) 118.4 128.5 0.02HDL(mg/dL) 48.4 42.6 0.01甘油三酯 136.5 161.0 0.01(mg/dL)sCD40L(ng/mL) 2.09 2.86 0.02*60歲以前；**HRT，激素替代治療表II.研究的參與者的基本特征切入點(diǎn) sCD40L 對照 情況RR 95％ClP-值(百分位數(shù)) (ng/mL)％(N) ％(N)50th＞1.7650.4(65) 50.8(66) 1.02 0.62-1.65 0.9575th＞2.1524.9(32) 30.8(40) 1.35 0.78-2.33 0.2990th＞2.9210.1(13) 17.7(23) 1.92 0.93-3.98 0.0895th＞3.715.0(6)13.9(18) 3.29 1.26-6.59 0.0299th＞5.540.8(1)8.5(11) 11.83 1.50-93.0 0.01表III.SCD40L濃度在控制分布的99個百分位數(shù)以上(≥5.54ng/mLsCD40L)的研究的參與者的臨床特征sCD40L， sCD40L，P-值＞99(N＝12)≤99(N＝248)年齡63.1 60.2 0.3吸煙狀態(tài)(％) 0.7現(xiàn)在 25.0 27.1過去 33.3 47.7沒有 41.7 31.2體重指標(biāo)(kg/m2) 27.3 26.7 0.7高血壓(％)58.3 45.1 0.4CAD的家族歷史(％)*30.0 16.0 0.2糖尿病(％)0 7.3 0.9目前HRT**(％)50.0 41.7 0.8LDL(mg/dL)126.9 127.70.9HDL(mg/dL)49.8 48.4 0.7甘油三酯(mg/dL) 165.5 174.30.8*在60歲以前；**HRT，激素替代治療實(shí)施例2在人血管細(xì)胞中HMG-CoA還原酶抑制劑限制CD40和CD40L的表達(dá)這一研究檢驗(yàn)了HMG-CoA還原酶抑制劑(菌株)可以減少體外這些細(xì)胞上受體/配體二分體以及體內(nèi)sCD40L血漿水平的表達(dá)，和氧化修飾的LDL誘導(dǎo)了與動脈粥樣硬化有關(guān)的CD40/CD40L在細(xì)胞上的表達(dá)，稱為人血管EC和SMC，以及MΦ的假說。
材料和方法材料從生物醫(yī)藥技術(shù)公司(Stoughton，MA)得到天然的和氧化的(5uM CuSO4，37℃，24h)LDL(TBARS0.4和8.3nM MDA/mg蛋白質(zhì))。從Endogen得到人重組IL-1β，TNFα，和IFNγ(Woburn，MA)。
細(xì)胞分離和培養(yǎng)從隱靜脈分離人血管EC和SMC，如上所述培養(yǎng)。4，26通過密度梯度離心，利用淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)基，從白細(xì)胞濃縮物分離單核吞噬細(xì)胞(MΦ)(Organon-Teknika，Durham，NC)，并且在含有2％的人血清(Sigma；St.Louis，MO)的RPMI 1640(BioWhittaker，Walkersville，MD)中培養(yǎng)(10天)。26在沒有血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前和過程中，將所有的細(xì)胞類型培養(yǎng)24小時。通過錐蟲藍(lán)(Sigma，St.Louis，MO)排除計(jì)數(shù)以及寡核體形成實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞死亡檢測ELISA，Boehringer Mannheim，德國)確定培養(yǎng)物的成活力。
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)通過分光光譜評估從RNAzol培養(yǎng)的EC，SMC，或MΦ(Tel-實(shí)驗(yàn)；Friendswood，TX)分離的總RNA的純度和產(chǎn)量(2100生物分析儀，Agilent技術(shù)公司，Wilmington，DE)并且利用SuperscriptII逆轉(zhuǎn)錄酶(生命技術(shù)公司，Carlsbad，CA)逆轉(zhuǎn)錄(2ug總RNA；50分鐘，42℃)。在熱開始后，利用前面所述的CD40或CD40L的引物，將PCR在95℃(120秒)，62℃(120秒)和72℃(180秒，每個循環(huán)延長2秒)進(jìn)行35個循環(huán)。420，25，30，35和40個循環(huán)的半定量PCR研究證明，在擴(kuò)增的指數(shù)范圍內(nèi)利用的條件產(chǎn)生了PCR產(chǎn)物，并且對信號背景的比例進(jìn)行了最佳化。在含有溴化乙錠的1.3％的瓊脂糖凝膠上分析PCR產(chǎn)物，并通過UV透射觀察。通過GAPDH的RT-PCR證明加載的模板量相等。沒有逆轉(zhuǎn)錄酶或利用H2O作為模板的模擬RT反應(yīng)證明了得到的信號的特異性。
Western印跡通過SDS-PAGE分離培養(yǎng)溶解物(50ug總蛋白質(zhì)/道)和上清液，利用半干的印跡儀器(3mA/cm2，30分鐘；Bio-Rad，Hercules，CA)印跡到聚乙烯利啶二氟膜(Bio-Rad，Hercules，CA)。封閉印跡，加入5％脫脂肪干牛奶/PBS/0.1％吐溫20中的初級(小鼠-抗-人CD40或CD40L；兩者都是1∶1,000；PharMingen，圣地亞哥，CA)抗體。1小時后，洗滌印跡3次(PBS/0.1％吐溫20)，加入二級的，結(jié)合過氧化物酶的，山羊抗小鼠抗體(Jackson免疫研究，WestGrove，PA)(1小時)。最后，洗滌印跡，利用Western印跡化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)觀察免疫反應(yīng)蛋白質(zhì)(NENTM，波士頓，MA)。利用來自Santa Cruz(Santa Cruz，CA)的抗-CD40/-CD40L抗體證明數(shù)據(jù)。
流動細(xì)胞計(jì)用冰冷的PBS洗滌人血管EC，SMC，或MΦ，通過胰蛋白酶化收獲，并且固定(PBS/4％低聚甲醛，15分鐘)。隨后，用PBS/2％BSA洗滌細(xì)胞一次，然后與單獨(dú)的緩沖液，或結(jié)合FITC的對照IgG，小鼠-抗-人CD40，或小鼠抗人CD40L抗體(1ug/ml；PharMingen，圣地亞哥，CA)一起溫育(1小時，4℃)。最后，用PBS/2％BSA洗滌細(xì)胞，利用CELLQUEST軟件(BecktonDickinson；San Jose，CA)在Beckton Dickinson FACSCAN流動細(xì)胞計(jì)中分析。每種條件下至少分析20,000個存活的細(xì)胞。
患者研究從用于冠狀動脈搏描記法的27個患者將全部(10mL)的血液收集在EDTA中，這些患者至少在一個冠狀動脈中有一個30％的狹窄。將該組分成在導(dǎo)管插入術(shù)時用任意的抑制素處理或不處理的患者。在基線時(0個月)和最后的追蹤訪問(6個月)取血液，將血漿儲存在-70℃。以快速的狀態(tài)研究所有的受試者。從所有的受試者得到簽字的同意書，經(jīng)Brigham的人健康研究委員會和婦女醫(yī)院批準(zhǔn)該研究。通過ELISA(Sigma，St.Louis，MO；Endogen，Woburn，MA；BenderMedSystems，Vienna，Austria)檢測血漿液體以及IL-1β，IL-6，TNFα，IFNγ，sVCAM，C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)，和sCD40L。這兩組在年齡，性別，糖尿病mellitus，吸煙，甘油三酯，或HDL(表I)中沒有明顯區(qū)別。抑制素處理的組的總膽固醇和LDL，如期望的明顯較低。
來自體內(nèi)的纖維素凝血塊形成用非包衣的毛細(xì)管通過眶后取血從小鼠收集血液到0.1個體積的0.13M檸檬酸三鈉中。通過離心(500xg，5分鐘，20℃)制備富血小板的血漿(PRP)，利用如上所述的微滴平板凝血溶解實(shí)驗(yàn)的修改方法檢測纖維凝血塊的形成。血塊是用2.94uM的纖維原，0.24uM的纖溶酶原，36pM t-RA，3.8nM的凝血酶，和5.3mMCaCl2(都是最后濃度)制備的。PRP(最后濃度10％(v/v))摻入到凝血塊中。在405nM檢測凝血塊的形成，時間長達(dá)15分鐘。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)表示為平均±SD，利用學(xué)生t-test比較各組。p≤0.05的值被認(rèn)為是明顯。
結(jié)果HMG-CoA還原酶抑制劑減少了人血管內(nèi)皮和光滑肌細(xì)胞以及體外巨嗜細(xì)胞上CD40和CD40L的表達(dá)與HMG-CoA還原酶抑制劑接觸可以依賴濃度地少人血管EC，SMC，和MΦ中CD40和CD40L的表達(dá)。濃度≥2nM的cerivastatin減少了EC中受體的構(gòu)成性的以及IL-1β/TNFα/IFNγ-誘導(dǎo)的表達(dá)。在10-50nM的cerivastatin達(dá)到最大的抑制。甲羥戊酸逆轉(zhuǎn)了抑制素減少CD40和CD40L的表達(dá)。利用oxLDL作為刺激物或SMC或MΦ作為細(xì)胞類型的平行研究產(chǎn)生了相似的結(jié)果。為了決定是否CD40/CD40L的表達(dá)的調(diào)節(jié)擴(kuò)展到其他菌株，平行實(shí)驗(yàn)中利用了人vastatin或猿vastatin。這些HMG-CoA還原酶抑制劑同樣降低CD40/CD40L的表達(dá)，但要求濃度更高(100nM)。用小鼠抗人GAPDH抗體再發(fā)展Western印跡提供了穿過凝血塊的相似的帶強(qiáng)度，證明在道之間有同等的加載量，同樣表明抑制素處理不影響Western印跡分析。記住，抑制素影響的細(xì)胞數(shù)或分析濃度(達(dá)到250nM)的存活力都如錐蟲藍(lán)排除細(xì)胞計(jì)數(shù)以及單/寡核體形成所確定的。
HMG-CoA還原酶抑制劑另外也減少了用炎癥前細(xì)胞因子(IL-1β/TNFα/IFNγ)或oxLDL刺激的人血管EC和MΦ中CD40和CD40L mRNA的表達(dá)。人vastatin或猿vastatin產(chǎn)生了相似的結(jié)果。甲羥戊酸逆轉(zhuǎn)了CD40和CD40L轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)的減少。分析GAPDH轉(zhuǎn)錄物的平行研究證明，對每個反應(yīng)應(yīng)用等量的反轉(zhuǎn)錄mRNA，另外證明了用抑制素處理不影響RT-PCR。
根據(jù)整個細(xì)胞溶解物的發(fā)現(xiàn)，cerivastatin依賴濃度地減少CD40和CD40L在人血管EC以及MΦ上的細(xì)胞表面的表達(dá)。值得注意的是，CD40和CD40L表面表達(dá)中最小和最大的降低要求的cerivastatin的濃度和Western印跡以及RT-PCR研究中整個細(xì)胞溶解物觀察到的相似。所有這三種抑制素作用相似，但要求的濃度不同，以便達(dá)到同等地降低CD40/CD40L的表達(dá)(cerivastatin＞simvastatin＝atorvastatin)。
因?yàn)镃D40L也可以同樣以一個生物活性可溶形式sCD40L釋放，我們應(yīng)該檢驗(yàn)一下是否用HMG-CoA還原酶抑制劑處理EC，SMC和MΦ會影響sCD40L的分泌。確實(shí)，cerivastatin處理明顯降低了培養(yǎng)物中sCD40L的濃度。
結(jié)合RT-PCR，Western印跡和FACS研究表明，oxLDL誘導(dǎo)了抑制素通過調(diào)節(jié)基因活性而不是細(xì)胞內(nèi)的易位減少CD40或CD40L的細(xì)胞表面的表達(dá)和/或釋放。
HMG-CoA還原酶抑制劑降低了人中sCD40L血漿水平為了評估這些體外發(fā)現(xiàn)的潛在的臨床相關(guān)性，我們進(jìn)行了飛行研究，確定是否用HMG-CoA還原酶抑制劑治療患者降低sCD40L的血漿水平。抑制素處理動脈硬化的受試者的血漿與未處理的患者相比明顯降低了sCD40L的水平(8.3±3.1ng/ml(n＝11)vs 13.1±2.5ng/ml(n＝16)；p＜0.05)。如果基線時的患者的處理狀態(tài)和6個月的追蹤期不變，那么個體的sCD40L的水平?jīng)]有明顯改變。但是，6個月的追蹤期的sCD40L血漿水平在改變成抑制素處理(13.1±5.74ng/ml和5.21±2.36ng/ml(n＝4)；p＜0.05)的患者中明顯降低。用抑制素處理沒有改變IL-1β，IL-6，TNFα，IFNγ和sVCAM-1的血漿水平。C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)的血漿濃度在抑制素處理的組中是低的，雖然差異沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯的程度。
氧化的LDL誘導(dǎo)了在人血管細(xì)胞中CD40和CD40L的表達(dá)氧化修飾的LDL(oxLDL)依賴濃度地增強(qiáng)人血管EC和MΦ中微弱的CD40和CD40L蛋白質(zhì)的構(gòu)成性表達(dá)。在每種細(xì)胞類型上基本的CD40/CD40L的表達(dá)的增強(qiáng)要求1-3ug的oxLDL/ml。用10-30ug ox LDL/ml得到了CD40(5.1±1.1倍以上的非刺激對照；n＝4)和CD40L(4.2±2.1倍；n＝3)的最大表達(dá)。天然的LDL也誘導(dǎo)受體(2.8±1.1倍；n＝2)和配體(2.2±0.8倍；n＝2)的表達(dá)，盡管程度較低。另外，oxLDL依賴濃度地增強(qiáng)人血管EC或MΦ中CD40和CD40L mRNA的表達(dá)。分析GAPDH轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)的平行研究證明了在每個反應(yīng)中應(yīng)用了等量的逆轉(zhuǎn)錄mRNA，另外表明了oxLDL刺激不影響RT-PCR。
CD40L的效率延長了小鼠血液來自體內(nèi)的凝聚時間根據(jù)如上所述的表明凝血中的CD40L和抑制素介導(dǎo)的血漿sCD40L水平的降低的最新數(shù)據(jù)，我們進(jìn)一步檢驗(yàn)了CD40L的表達(dá)的降低影響血液凝固的假說。確實(shí)，當(dāng)與野生型小鼠制劑比較，在纖維素凝血塊形成實(shí)驗(yàn)中，來自CD40L缺陷的小鼠的富血小板血漿顯示凝固延遲，支持了血液凝固中CD40L有作用。對CD40L在血液可凝固性的作用上的這些觀察提供了CD40通過HMG-CoA還原酶抑制劑發(fā)信號減少可能降低動脈粥樣硬化可能降低凝血綜合癥。
討論具有平均或低于平均LDL水平的患者的臨床優(yōu)勢和在一系列前面的臨床實(shí)驗(yàn)中心血管疾病的危險的降低與LDL的降低的程度無關(guān)非常強(qiáng)調(diào)了推斷的抑制素的“多效”效果的相關(guān)性。21- 24，28這一藥物類別(cerivastatin，atorvastatin或simvastatin)的三個成員明顯降低了動脈粥樣硬化中暗含的細(xì)胞類型，稱為人血管EC，SMC，和MΦ中的CD40和CD40L蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄物的構(gòu)成性的以及細(xì)胞因子誘導(dǎo)的表達(dá)，加強(qiáng)了抑制素的降低脂的獨(dú)立功能。但是，在這些細(xì)胞類型中鑒定oxLDL作為CD40和CD40L的誘導(dǎo)物進(jìn)一步證明，抑制素可能至少部分地由他們的降低脂的特性影響CD40/CD40L的表達(dá)。記住，前面的研究在早期的人動脈粥樣硬化病灶中將oxLDL與CD40和CD40L共定位，31這是根據(jù)我們的假說，oxLDL在動脈粥樣硬化斑中CD40受體/配體二分體的表達(dá)的初始信號。
用抑制素除了患者的飛行觀察已經(jīng)減少了sCD40L的水平支持了體外觀察中存在的臨床相關(guān)性。幾個細(xì)胞類型可能產(chǎn)生sCD40L。血小板在體外和體內(nèi)形成凝血的基礎(chǔ)上連接凝血受體釋放sCD40L。32，33但是，如我們自己和其他前面的研究觀察到的，我們的細(xì)胞類型，包括EC，MΦ，和T淋巴細(xì)胞可能也產(chǎn)生sCD40L。11，12，17，18本觀察，富CD40L缺陷血小板血漿比來自野生型小鼠的制劑凝血更慢，表明膜結(jié)合和/或可溶形式的CD40L調(diào)節(jié)凝血作用，心血管疾病危險的關(guān)鍵決定因素。CD40L可以通過作為αIIbβ3配體起作用激活血小板進(jìn)一步支持了這一假說。35
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實(shí)施例3可溶的CD40配體水平表明在頸動脈粥樣化中積累脂引起冠狀動脈凝血的主要因子是動脈粥樣硬化斑的破壞。比較完整的和破壞的斑的研究已經(jīng)用于確定易損的斑的特征，即在破壞危險中的那些。特征是占據(jù)了50％的全部斑體積的脂核心，一個薄的斑帽，一個大的絕對數(shù)目和密度的巨嗜細(xì)胞，和斑中的光滑肌含量的降低。這樣的易損的斑組成了大多數(shù)個體中存在所有斑中的一小部分。但是，血管造影術(shù)的狹窄沒有預(yù)測易損性，因?yàn)樵诤诵拇笮』虬叩拇笮∨c狹窄之間沒有關(guān)系。大比例的破壞事件在臨床上不引起注意地發(fā)生，因?yàn)槟]有完全占據(jù)腔以致引起局部缺血。但是，這些亞臨床事件將引起斑的生長。斑破壞后發(fā)生了類似于成血管細(xì)胞術(shù)后發(fā)生的光滑肌增殖修復(fù)應(yīng)答。在兩種情況中，高度增長的修復(fù)導(dǎo)致了事件后的狹窄。在尸體解剖時冠狀病灶的再構(gòu)建顯示，70％的高級狹窄(血管造影＞50％的直徑)具有一個愈合的裂解的事件。這樣的數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了不管是否發(fā)生急性的臨床事件，在產(chǎn)生高級狹窄病灶中斑的裂解的作用。
簡要地說，動脈粥樣化的結(jié)構(gòu)和動力生物學(xué)，而不是狹窄的嚴(yán)重性大大地決定了心血管的事件。大的脂庫和薄的纖維帽鑒定了易損的斑，并且炎癥機(jī)制在決定斑的穩(wěn)定性中起了優(yōu)勢的作用。1.2我們的不穩(wěn)定的動脈粥樣化的知識的大部分來自mortem后的檢測，并且已知更少的是關(guān)于體內(nèi)炎癥機(jī)制和病灶結(jié)構(gòu)的關(guān)系。
動物研究的證據(jù)證明，CD40配體在動脈硬化趨向的小鼠中抑制CD40發(fā)信號的重要性降低了動脈病灶的大小和脂含量，并且在光滑肌含量和纖維膠原中產(chǎn)生了一個相對的增加。9另外，如本文其余討論的(參見實(shí)施例1)，基線上的可溶CD40配體的血漿水平升高有前景地預(yù)測了表面健康的婦女中的心血管事件。
在磁共振成象(MRI)中的最新的進(jìn)展已經(jīng)允許非侵入性地評估頸動脈斑的組成。11-13特異地說，利用定做的相排列頸動脈線圈已經(jīng)證明，在頸動脈MRI發(fā)現(xiàn)和進(jìn)行頸動脈內(nèi)膜炎手術(shù)的22個患者的組織學(xué)結(jié)構(gòu)之間有高水平的一致性(89％一致性；Kappa＝0.83；95％置信區(qū)間0.67-1.0)。14另外，高分辨的頸動脈MRI準(zhǔn)確地檢測了斑內(nèi)富脂的核心。12，13，15，16這一研究檢驗(yàn)了，可溶CD40配體的血漿水平升高與在高分辨的頸動脈MRI上的富脂核心的建設(shè)性特征有關(guān)。
方法我們邀請超聲波掃描術(shù)下，狹窄大于或等于內(nèi)部或普通的頸動脈的30％的男人和女人參加2001年1月到2002年1月的研究。用起搏器或可植入的心血管除纖顫器的任意患者以及在過去兩個月中接受了外科手術(shù)條或冠狀stent的患者都排除在外。需要系統(tǒng)的皮質(zhì)類固醇治療系統(tǒng)的炎癥癥狀的患者也排除在外。該研究群體包括49個患者，他們有書面同意參加該研究。該研究是經(jīng)Brigham的人研究委員會和婦女醫(yī)院的同意的。
對每個參與者，由進(jìn)行研究的醫(yī)生記錄包括心血管疾病歷史，危險因素，醫(yī)藥的使用的詳細(xì)的醫(yī)學(xué)歷史。通過非創(chuàng)傷靜脈穿刺取血液樣品，離心，并且將血漿在-80℃儲存在EDTA中。
MRI方案利用推薦的相排列頸動脈線圈(IGC，Inc.)，在1.5TSigma CV/I MRI掃描儀(GE醫(yī)學(xué)系統(tǒng)，Milwaukee，WI)上患者進(jìn)行頸動脈的高分辨MRI。得到了3D次的飛行成象，中度的質(zhì)子密度稱重成象，和脂肪抑制中度T2稱重成象。對于3D時間飛行序列，參數(shù)如下回聲時間(TE)3.5ms，重復(fù)時間(TR)33-40ms，滾翻角度25度，帶寬15.63kHz，觀察空間12-14cm，片厚度2mm，插入到1mm，32片，獲得的基質(zhì)256×256，再構(gòu)建基質(zhì)512×512，一次激發(fā)。對于中度的質(zhì)子密度稱重序列，利用了21-22ms的TE，對于中度的T2稱重獲得物，利用了53-58的TE，有化學(xué)選擇脂肪抑制。這些掃描的參數(shù)是TR 2R-R區(qū)間，回聲實(shí)驗(yàn)長度16，帶寬度62.5kHz，觀察空間14cm，片厚度3mm，獲得性基質(zhì)256×256，再構(gòu)建基質(zhì)512×512，一次激發(fā)。在每個患者中，片水平的中心是頸動脈雙功能。兩個對所有其他信息一無所知的委員會確定的放射學(xué)家根據(jù)質(zhì)子密度稱重成象，和脂肪抑制中等-T2稱重快速旋轉(zhuǎn)回聲成象之間的信號損失，和3D時間的飛行成象上的等強(qiáng)度信號確定存在或沒有斑內(nèi)脂。15如參考直徑分開的，在3D時間飛行軸成象上的參考和狹窄直徑之間的差異計(jì)算狹窄的直徑百分?jǐn)?shù)，乘于100。下線獨(dú)立地讀成象。內(nèi)部觀察者的變化率＜10％。
如上所述，通過ELISA測量基線血漿可溶CD40配體濃度。10簡要地說，在用小鼠抗人CD40配體抗體預(yù)包衣和用辣根-過氧化物酶-標(biāo)記的二級小鼠抗人CD40配體抗體混合(1∶2)2小時的96孔平板中一式三份加入1∶5稀釋的血漿樣品。然后，洗滌平板，并且利用3，3’-5，5’-四甲基聯(lián)苯胺底物的色度計(jì)確定結(jié)合的抗體。在650nm讀出吸光值，通過與重組人CD40配體的系列稀釋液比較確定可溶的CD40配體的血漿濃度。在所有樣品中的三份中實(shí)驗(yàn)內(nèi)的變化率小于10％，實(shí)驗(yàn)間的可變化率是7.4％。
我們將研究的參與者分成兩組，頸動脈MRI上有斑內(nèi)脂的證據(jù)的那些，和沒有斑內(nèi)脂證據(jù)的那些。計(jì)算可溶CD40配體的平均水平，利用Wilcoxon的等級總量實(shí)驗(yàn)，在兩組之間比較。利用邏輯回歸模型，計(jì)算與可溶的CD40配體水平升高有關(guān)的斑內(nèi)脂的相對危險，根據(jù)沒有斑內(nèi)脂的證據(jù)的那些中的可溶CD40配體的平均水平分實(shí)驗(yàn)樣品。
結(jié)果在登記的49個患者中，有3個患者由于幽閉恐怖(claustrophobia)不能得到頸動脈MRI成象。我們利用了分析其余的46個患者的觀察結(jié)果。這些患者的基線臨床特征(表IV)發(fā)現(xiàn)，在整個研究的組中普遍有高血壓，糖尿病和高血膽固醇的歷史。46個患者中有13個(28.3％)過去有短暫的缺血發(fā)病(TIA)(n＝8)或中風(fēng)(n＝6)的歷史；一個患者同時有TIA和中風(fēng)歷史。其余33個患者(71.7％)是無癥狀。
14個患者有斑內(nèi)脂的證據(jù)，32個沒有。有斑內(nèi)脂證據(jù)的患者比沒有斑內(nèi)脂證據(jù)的患者更似乎是有糖尿病(p＝0.02)。在有斑內(nèi)脂的組中，有高血壓歷史(p＝0.16)，和現(xiàn)在的吸煙者(p＝0.13)的婦女(p＝0.13)的患者的比例有一個增加的趨勢。在有和沒有斑內(nèi)脂證據(jù)的那些人之間頸動脈直徑狹窄(58％±20和56％±24)的平均百分?jǐn)?shù)沒有區(qū)別。
有斑內(nèi)脂的受試者具有的可溶CD40配體的基線水平比沒有脂積累的那些更高(平均2.54ng/ml(四分位間范圍(IQR)1.85-3.52)和平均1.58ng/ml(IQR1.21-2.39)；p＝0.02)。相反，可溶的CD40配體水平與狹窄直徑百分?jǐn)?shù)(r＝-0.19；p＝0.21)不相關(guān)。斑內(nèi)脂與平均以上的可溶CD40配體水平相關(guān)的相對危險是6.0(95％的置信區(qū)間1.15-31.23；p＝0.03)。當(dāng)用控制性別，糖尿病，高血壓和現(xiàn)在吸煙，狹窄百分?jǐn)?shù)和總膽固醇與高密度脂蛋白膽固醇的比例的多變模型分析時，這一預(yù)測效果的數(shù)量級基本沒有改變(相對危險5.12，95％置信區(qū)間0.78-33.73；p＝0.09)。
表IV.研究群體的基線臨床特征組的總數(shù) 非斑內(nèi)脂組斑內(nèi)脂組 P-值(組1(n＝46)1(n＝32) 2(n＝14) 比組2)年齡 70.5±8.1 71.0±7.9 69.4±8.8 0.5平均±SD雄性性別 31/46 24/32(75％) 7/14(50％)0.10(67.4％)糖尿病歷史15/46 7/32 8/14 0.02(32.6％) (21.9％) (57.1％)高血壓歷史37/46 24/32 13/14 0.16(80.4％) (75％)(92.9％)現(xiàn)在吸煙 5/46 2/32 3/14(21.4 0.13(10.9％) (6.3％) ％)高膽固醇?xì)v34/46 23/32 (71.9 11/14(78.60.6史(73.9％) ％) ％)過去有TIA 13/46(28.3％) 8/32(25％)5/14(35.7％) 0.46或中風(fēng)抑制素使用31/46 20/32 11/14(78.60.28(67.4％) (62.5％) ％)狹窄直徑百57％±23 56％±24 58％±20 0.6分?jǐn)?shù)可溶CD40 1.89 1.58 2.54 0.02配體(ng/ml)平均[內(nèi)部四 [1.35-2.64][1.21-2.39] [1.85-3.52]分位范圍]TIA＝暫時缺血發(fā)病討論如本文其余部分所述(實(shí)施例1)，可溶CD40配體的基線血漿水平在表面健康的婦女中有前景地預(yù)測了心血管事件。現(xiàn)在的數(shù)據(jù)提供了對該機(jī)制的新研究，通過該機(jī)制可溶的CD40配體的水平升高可以反映人中的將來的心血管疾病的危險。我們發(fā)現(xiàn)，在可溶的CD40配體的血漿水平升高和頸動脈斑之間的相關(guān)性，特征是大的危險與狹窄的嚴(yán)重性無關(guān)。這些數(shù)據(jù)與研究的證據(jù)一致，表明中斷CD40發(fā)信號減少了動脈粥樣硬化趨向的小鼠中的動脈病灶中的大小和脂含量。
前面的工作已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了利用相似的相排列頸動脈圈的高分辨頸動脈MRI可以準(zhǔn)確地預(yù)測在頸動脈內(nèi)膜炎手術(shù)后在組織學(xué)上發(fā)現(xiàn)脂庫15；我們的MRI方案更多地依賴T2稱重的方案，其他研究已經(jīng)顯示，可以準(zhǔn)確地去除脂庫。12，13，16可溶的CD40配體的預(yù)測效果在調(diào)整了傳統(tǒng)的心血管危險因素后沒有改變，盡管在調(diào)整分析中置信區(qū)間確實(shí)增寬了，正如可以期望給出，CD40連接似乎是代表了脂庫形成中的一般成因途徑。
結(jié)論是，我們相信，該研究確定了CD40配體的血漿水平和斑內(nèi)脂之間有一個關(guān)聯(lián)，代表了斑易損性的一個潛在的重要標(biāo)記。
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同等內(nèi)容利用不超過常規(guī)實(shí)驗(yàn)的范圍的實(shí)驗(yàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，或可以確定與本文所述的發(fā)明的具體實(shí)施方案的許多等同物。這樣的等同物打算包括在下面的權(quán)利要求中。
所有本文公開的文獻(xiàn)都通過在此引述而合并于本文。
權(quán)利要求
1.一種鑒定未來發(fā)展成心血管紊亂的個體的危險方式的方法，包括在個體中得到CD40L的水平，比較sCD40L的水平和預(yù)定的值，和根據(jù)sCD40L的水平與預(yù)定的水平的比較，鑒定未來發(fā)展成心血管紊亂的個體的危險輪廓。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中預(yù)定值是多個預(yù)定的sCD40L的水平范圍，所述的比較步驟包括確定所述的個體的sCD40L水平落在哪個所述的預(yù)定的sCD40L的水平范圍。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中個體是表面健康的，非吸煙個體。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中個體沒有其他的心肌梗死或中風(fēng)的危險升高。
5.權(quán)利要求1所述的方法，其中心肌紊亂是與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中心肌紊亂不是致命的心肌梗死。
7.權(quán)利要求1所述的方法，其中預(yù)定的值是約血液的2.9ng/mL或更高。
8.權(quán)利要求1所述的方法，其中預(yù)定的值是約血液的3.2ng/mL或更高。
9.權(quán)利要求1所述的方法，其中預(yù)定的值是約血液的5.5ng/mL或更高。
10.權(quán)利要求1所述的方法，其中預(yù)定的值是多個預(yù)定的sCD40L水平范圍，一個所述的多數(shù)水平范圍低于2.9ng/mL的血液，另一個所述的范圍是約2.9ng/mL血液，其中所述的比較步驟包括確定所述的個體的sCD40L水平落在那個所述的預(yù)定的sCD40L水平范圍。
11.權(quán)利要求1-10中任何一項(xiàng)所述的方法，其中心血管紊亂是中風(fēng)。
12.一種鑒定未來發(fā)展成與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心血管紊亂的個體的危險輪廓的方法，包括在個體中得到sCD40L的水平，比較sCD40L與第一個預(yù)定值，確定第一個危險值，在個體中得到膽固醇或C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)的水平，比較膽固醇或C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)的水平與第二個值確定第二個危險值，和根據(jù)第一個危險值和第二個危險值的結(jié)合，鑒定發(fā)展成心血管紊亂的個體的危險方式，其中第一個危險值和第二個危險值的結(jié)合確定了第三個危險值與所述的第一個和第二個危險值不同。
13.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述的個體是表面健康的，非吸煙個體。
14.權(quán)利要求12所述的方法，其中第一個預(yù)定的值是約血液的2.9ng/mL。
15.權(quán)利要求12所述的方法，其中第一個預(yù)定的值是約血液的3.2ng/mL。
16.權(quán)利要求12所述的方法，其中第一個預(yù)定值是約血液的5.5ng/mL。
17.權(quán)利要求12的方法，其中第一個預(yù)定值是多個預(yù)定sCD40L水平的范圍，一個所述的多個水平范圍低于血液的2.9ng/mL，另一個所述的多個水平范圍是約2.9ng/mL的血液，其中所述的比較步驟包括確定所述的個體的sCD40L水平落在那個所述的多數(shù)預(yù)定的sCD40L水平范圍。
18.權(quán)利要求12-17中任何一項(xiàng)所述的方法，其中心血管紊亂是中風(fēng)。
19.權(quán)利要求12-17中任何一項(xiàng)所述的方法，其中心血管紊亂是非致命的心肌梗死。
20.權(quán)利要求12-17中任何一項(xiàng)所述的方法，其中第三個危險值是大于第一個和第二個的危險值。
21.一種評估個體將取益于用一種試劑處理降低與動脈粥樣硬化疾病相關(guān)的心肌紊亂的危險的方法，所述的試劑選自包括抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降脂試劑，直接的凝血抑制劑，和糖蛋白Iib/IIIa受體抑制劑，所述的方法包括得到個體的sCD40L的水平，和比較sCD40L的水平與預(yù)定的值，其中sCD40L的水平在與預(yù)定值的比較中指示了是否個體將取益于所述的試劑的治療，和鑒定是否個體似乎是取益于根據(jù)所述的比較的所述的治療。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中預(yù)定值是多個預(yù)定sCD40L水平范圍，所述的比較步驟包括確定所述的個體的水平落在哪個所述的預(yù)定的sCD40L水平范圍。
23.權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的個體是明顯健康的，非吸煙的個體。
24.權(quán)利要求21所述的方法，其中預(yù)定的值是血液的2.9ng/mL或更高。
25.權(quán)利要求21所述的方法，其中預(yù)定的值約是血液的3.2ng/mL或更高。
26.權(quán)利要求21所述的方法，其中預(yù)定的值約是血液的5.5ng/mL或更高。
27.權(quán)利要求21所述的方法，其中預(yù)定的值是多個預(yù)定的sCD40L水平范圍，所述的多個水平范圍中的一個低于血液的約2.9ng/mL，所述的多個水平范圍中的另一個約是血液的2.9ng/mL，其中所述的比較步驟包括確定所述的個體的sCD40L水平落在哪個所述的多數(shù)預(yù)定的sCD40L水平范圍。
28.權(quán)利要求21-27中任何一項(xiàng)的方法，其中心血管紊亂是中風(fēng)。
29.權(quán)利要求21-27中任何一項(xiàng)的方法，其中心血管紊亂是心肌梗死。
30.一種治療受試者以降低心血管紊亂的危險的方法，包括對已知具有正常水平的上面的受試者選擇和給藥一種降低心肌血管紊亂的危險的試劑，其量是有效地降低受試者將來發(fā)展成心肌紊亂的危險的量，其中該試劑是抗炎癥試劑，抗凝血試劑，抗血小板試劑，纖維蛋白溶解試劑，降低脂的試劑，直接的凝血酶抑制劑，糖蛋白Iib/IIIa受體抑制劑，結(jié)合細(xì)胞黏連分子和抑制白血細(xì)胞附著于如下的分子，鈣通道封閉劑，β-腎上腺素能受體封閉劑，環(huán)氧化酶-2-抑制劑，或血管緊張肽抑制劑。
31.權(quán)利要求30所述的方法，其中受試者沒有其他的用試劑治療的癥狀。
32.權(quán)利要求30所述的方法，其中受試者明顯健康，受試者中不利的心血管事件的危險沒有升高。
33.權(quán)利要求30所述的方法，其中受試者是非血脂過高的。
34.權(quán)利要求30所述的方法，其中試劑是非阿斯匹林的，抗炎癥試劑。
35.權(quán)利要求30所述的方法，其中試劑是抗炎癥試劑，抗炎癥試劑選自包括阿氯酚酸(Alclofenac)，阿氯米松(Alclometasone Dipropionate)，Algestone Acetonide，α淀粉酶，Amcinafal，氨酚酸鈉(Amfenac Sodium)，AmipriloseHydrochloride，Anakinra，Anirolac，Anitrazafen，Apazone，巴沙拉二鈉(Balsalazide Disodium)，芐吲酸(Bendazac)，苯惡洛芬(Benoxaprofen)，鹽酸芐卡明(BenzydamineHydrochloride)，菠蘿蛋白酶(Bromelains)，溴四唑哌啶(Broperamole)，布地縮松(Budesonide)，卡布洛芬(Carprofen)，Cicloprofen，曾戊唑酮(Cintazone)，氯噻托酸(Cliprofen)，丙酸倍氯他索(Clobetaso Propionate)，丁氯倍氟松(Clobetasone Butyrate)，氯苯吡咯酸(Clopirac)，Cloticasone Propionate，醋酸三氟米松(CormethasoneAcetate)，去氧可的松(Cortodoxone)，去氟可的松(Deflazacort)，丙縮羥強(qiáng)龍(Desonide)，去羥米松(Desoximetasone)，二丙酸地塞米松(DexamethasoneDipropionate)，雙氯酚酸鉀(Diclofenac Potassium)，雙氯酚酸鈉(Diclofenac Sodium)，雙醋二氟松(DiflorasoneDiacetate)，二氟米銅鈉(Diflumidone Sodium)，雙氟尼酸(Diflunisal)，醋丁二氟龍(Difluprednate)，雙酞嗪酮(Diftalone)，二甲亞砜(Dimethyl Sulfoxide)，丙縮氫炎松(Drocinonide)，甲地松(Endrysone)，Enlimomab，塞庚苯胺鈉(Enolicam Sodium)，嘧吡唑(Epirizole)，依托度酸(Etodolac)，Etofenamate，聯(lián)苯乙酸(Felbinac)，苯四唑胺(Fenamole)，芬布芬(Fenbufen)，二氯苯氧苯乙酸(Fenclofenac)，氯環(huán)苯乙酸(Fenclorac)，苯吲柳酸(Fendosal)，苯吡惡二酮(Fenpipalone)，雙苯噻酸(Fentiazac)，氟苯哌酮(Flazalone)，氟惡米松(Fluazacort)，氟芬那酸(Flufenamic Acid)，氟咪唑(Flumizole)，醋酸-9-去氟膚輕松(Flunisolide Acetate)，氟胺煙酸(Flunixin)，氟胺煙酸葡胺(Flunixin Meglumine)，氟考丁酯(FluocortinButyl)，氟甲孕松醋酸酯(Fluorometholone Acetate)，苯氟奎酮(Fluqazone)，氟比洛芬(Flurbiprofen)，炔氟聯(lián)苯(Fluretofen)，丙酸氟地松(Fluticasone Propionate)，苯呋丙酸(Furaprofen)，氧芴丁酮酸(Furobufen)，氯氟舒松(Halcinonide)，Halobetasol Propionate，雙醋溴氟龍(Halopredone Acetate)，異丁苯乙酸(Ibufenac)，布洛芬(Ibuprofen)，Ibuprofen Aluminum，皮考布洛芬(IbuprofenPiconol)，Ilonidap，吲哚美辛(Indomethacin)，吲哚美辛鈉(Indomethacin Sodium)，吲哚布洛芬(Indoprofen)，雙甲氧苯吲哚(Indoxole)，吲四唑(Intrazole)，醋異氟龍(Isoflupredone Acetate)，氧卓乙酸(Isoxepac)，異惡塞酰胺(Isoxicam)，銅基布洛芬(Ketoprofen)，鹽酸氯苯甲咪唑(Lofemizole Hydrochloride)，Lornoxicam，LotepredoneEtabonate，甲氧胺苯酸鈉(Meclofenameta Sodium)，甲氯滅酸(Meclofenamic Acid)，甲二氯松二丁酯(MeclorisoneDibutyrate)，甲滅酸(Mefenamic Acid)，Mesalamine，甲氯惡唑酮(Mesaclazone)，甲基氫化潑尼松(MethylprednisoloneSuleptanate)，氟煙嗎酯(Morniflumate)，那布米酮(Nabumetone)，萘普生(Naproxen)，萘普生鈉(NaproxenSodium)，甲基萘丙醇(Naproxol)，腈胺唑酮(Nimazone)，偶氮水楊酸鈉(Olsalazine Sodium)，超氧化物歧化酶(Orgotein)，苯呋丙酸(Orpanoxin)，惡丙嗪(Oxaprozin)，羥基保泰松(Oxyphenbutazone)，鹽酸胍苯叉芴(ParanylineHydrochloride)，戊聚糖多硫酸鈉(Pentosan PolysulfateSodium)，Phenbutazone Sodium Glycerate，甲苯吡啶酮(Pirfenidone)，炎痛喜康(Piroxicam)，炎痛喜康肉桂酯(Piroxicam Cinnamate)，炎痛喜康乙醇胺(PiroxicamOlamine)，吡洛布洛芬(Pirprofen)，強(qiáng)地松龍-奮乃靜(Prednazate)，Prefelone，丙哚乙酸(Prodolic Acid)，Proquazone，胺丙惡二唑(Proxazole)，胺丙惡二唑檸檬酸酯(Proxazole Citrate)，雙甲丙酰龍(Rimexolone)，Romazarit，水楊酸膽堿硫酸鎂(Salcolex)，Salnacedine，雙水楊酸酯(Salsalate)，Sanguinarium Chloride，氯惡唑酮(Seclazone)，絲炎痛(Sermetacin)，噻氧噻嗪(Sudoxicam)，舒林酸(Sulindac)，噻吩甲酰布洛芬(Suprofen)，Talmetacin，氟煙酞酯(Talniflumate)，醋柳酞酯(Talosalate)，替布費(fèi)龍(Tebufelone)，替尼達(dá)普(Tenidap)，替尼達(dá)普鈉(TenidapSodium)，替諾西康(Tenoxicam)，氧喹苯胺(Tesicam)，芐叉異喹酮(Tesimide)，四氫甲吲胺(Tetrydamine)，噻庚乙酸(Tiopinac)，特戊酸巰氫可的松(Tixocortol Pivalate)，托耳米丁(Tolmetin)，甲苯酰吡酸鈉(Tolmetin Sodium)，三氯氟松(Triclonide)，三氟氨酯(Triflumidate)，疊氮吲酸(Zidometacin)，糖皮質(zhì)激素或苯酰吡酸鈉。
36.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述的試劑是非阿斯匹林，抗炎癥試劑。
37.權(quán)利要求32所述的方法，其中該試劑是非阿斯匹林的，抗炎癥試劑。
38.權(quán)利要求33所述的方法，其中該試劑是非阿斯匹林的，抗炎癥試劑。
39.權(quán)利要求30所述的方法，其中該試劑是降脂試劑。
40.權(quán)利要求39所述的方法，其中降脂試劑是吉非貝齊(gemfibrozil)，消膽胺(colestyramine)，降膽寧(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucol lovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。
41.權(quán)利要求40所述的方法，其中降脂的試劑是帕伐地汀(pravastatin)。
42.權(quán)利要求31所述的方法，其中試劑是降脂的試劑。
43.權(quán)利要求42所述的方法，其中所述的降脂的試劑是吉非貝齊(gemfibrozil)，消膽胺(colestyramine)，降膽寧(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucol lovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。
44.權(quán)利要求43所述的方法，其中所述的降低脂的試劑是帕伐地汀(pravastatin)。
45.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的試劑是降低脂的試劑。
46.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述的降低脂的試劑是吉非貝齊(gemfibrozil)，消膽胺(colestyramine)，降膽寧(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucollovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。
47.權(quán)利要求46所述的方法，其中降低脂的試劑是帕伐地汀(pravastatin)。
48.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述的試劑是降低脂的試劑。
49.權(quán)利要求48所述的方法，其中所述的降低脂的試劑是吉非貝齊(gemfibrozil)，消膽胺(colestyramine)，降膽寧(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucollovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。
50.權(quán)利要求49所述的方法，其中降低脂的試劑是帕伐地汀(pravastatin)。
51.權(quán)利要求30所述的方法，其中該試劑是結(jié)合細(xì)胞黏附分子和抑制白血細(xì)胞附著于這樣的分子的能力的試劑。
52.權(quán)利要求51所述的方法，其中受試者是表面健康的。
53.權(quán)利要求51所述的方法，其中受試者是非血脂過高的。
54.權(quán)利要求51所述的方法，其中受試者沒有其他的需要該試劑的治療的癥狀。
55.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的試劑是鈣通道封閉劑。
56.權(quán)利要求55所述的方法，其中受試者是表面健康的。
57.權(quán)利要求55所述的方法，其中受試者是非血脂過高的。
58.權(quán)利要求55所述的方法，其中受試者沒有其他的需要該試劑的治療的癥狀。
59.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的試劑是β-腎上腺素能受體封閉劑。
60.權(quán)利要求59所述的方法，其中受試者是表面健康的，不利的心血管事件的危險沒有升高。
61.權(quán)利要求59所述的方法，其中受試者是非血脂過高的。
62.權(quán)利要求59所述的方法，其中受試者沒有其他的需要該試劑的治療的癥狀。
63.權(quán)利要求30所述的方法，其中該試劑是環(huán)氧化酶-2抑制劑。
64.權(quán)利要求63所述的方法，其中受試者是表面健康的。
65.權(quán)利要求63所述的方法，其中受試者是非血脂過高的。
66.權(quán)利要求63所述的方法，其中受試者沒有其他的需要該試劑的治療的癥狀。
67.權(quán)利要求30所述的方法，其中該試劑是血管緊張肽系統(tǒng)抑制劑。
68.權(quán)利要求67所述的方法，其中受試者是表面健康的，不利的心血管事件的危險沒有升高。
69.權(quán)利要求67所述的方法，其中受試者是非血脂過高的。
70.權(quán)利要求67所述的方法，其中受試者沒有其他的需要該試劑治療的癥狀。
71.一種在受試者中降低sCD40L的水平以便降低不利的心血管紊亂的危險的方法，包括對受試者sCD40L水平升高的受試者選擇和給藥降低sCD40L水平的試劑，所述的量能有效地降低受試者中sCD40L的水平。
72.權(quán)利要求71所述的方法，其中該試劑是降低脂的試劑。
73.權(quán)利要求71所述的方法，其中受試者是表面健康的。
74.權(quán)利要求71所述的方法，其中受試者沒有其他的不利的心血管事件的危險升高。
75.權(quán)利要求71所述的方法，其中受試者中C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)水平升高。
76.權(quán)利要求71所述的方法，其中受試者沒有其他的需要降低脂的試劑的治療的適應(yīng)癥。
全文摘要
本發(fā)明包括特別是在現(xiàn)在沒有疾病的信號和癥狀的個體和在非吸煙者中確定動脈粥樣硬化疾病如心肌梗死和中風(fēng)危險的實(shí)驗(yàn)的新用途。本發(fā)明包括輔助醫(yī)生確定哪個危險的個體將優(yōu)先取益于設(shè)計(jì)防止第一個或復(fù)發(fā)心肌梗死和中風(fēng)或治療急性和慢性心肌紊亂的一些治療的實(shí)驗(yàn)的新用途。同時敘述了相關(guān)的治療方法。
文檔編號A61K31/22GK1613012SQ02826711
公開日2005年5月4日 申請日期2002年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月5日
發(fā)明者尤韋·施羅恩貝克, 保羅·M·芮德克, 彼得·利比 申請人:布賴漢姆婦女醫(yī)院