專利名稱：治療傷口的組合物和方法
導(dǎo)言本發(fā)明涉及傷口的治療。更特別地，本發(fā)明涉及促進傷口愈合的物質(zhì)、組合物、摻入了這些物質(zhì)的敷料以及使用這些物質(zhì)治療傷口的方法。
有效的傷口愈合是涉及許多機制的復(fù)雜的生理過程，這些機制包括細胞遷移、生長因子的分泌、血管發(fā)生、組織重建以及以協(xié)調(diào)方式和以明顯地階段性的方式有助于加速受控組織再生的傷口的內(nèi)在蛋白酶/抗蛋白酶的平衡。
在現(xiàn)代醫(yī)療實踐中，特別是對于有慢性創(chuàng)傷或燒傷疾病患者的治療，傷口護理產(chǎn)品是必不可少的。以前已經(jīng)建議了許多不同的具有有助于傷口愈合活性的物質(zhì)。這些以前建議的物質(zhì)包括鏈激酶、膠原酶和鏈道酶(所有都是從細菌來源中獲得)、菠蘿蛋白酶(從菠蘿中獲得)、纖溶酶和胰蛋白酶(從牛中獲得)和殺死酶(從甲殼動物中獲得)。臨床試驗數(shù)據(jù)表明這樣的物質(zhì)在促進傷口愈合中僅僅是部分有效的。
已知綠蠅，絲光綠蠅(Lucilia sericata)的幼蟲(蛆)作為活的生物體具有顯著的傷口愈合特性。使用絲光綠蠅(Luciliasericata)幼蟲的清創(chuàng)處理，已經(jīng)成為被廣泛接受的臨床實踐。然而，在文獻中還幾乎沒有關(guān)于這些幼蟲進行傷口清創(chuàng)，使常規(guī)不能治療的傷口達到愈合程度的方式的報道。
盡管是有效的，但是許多患者討厭活幼蟲，并且許多患者和許多開業(yè)醫(yī)生不能接受在傷口上使用活幼蟲以及當(dāng)使用幼蟲時不可避免地會發(fā)生將幼蟲的天然分泌物引入到傷口中。使用活的生物體也增加了患者感染或發(fā)生變態(tài)反應(yīng)的風(fēng)險。
發(fā)明陳述大體上說，本發(fā)明涉及治療人或非人哺乳動物傷口以促進其愈合的組合物，其包括活性量的toll受體配體，或其前體，和合適的載體。在本說明書中，術(shù)語“toll受體”應(yīng)當(dāng)被理解為包括果蠅屬(Drosophila)toll受體的人和非人的同源物，該同源物在現(xiàn)有技術(shù)中經(jīng)常被稱為toll樣受體(TLR’s)，代表先天免疫識別受體的保守家族，其與在哺乳動物、昆蟲和植物中保守的信號傳導(dǎo)通路偶聯(lián)，介導(dǎo)天然免疫防御基因活化。因此，為了避免疑問，這里使用的術(shù)語“toll受體”意思是toll受體和toll樣受體，這里使用的術(shù)語“toll受體配體”也作相應(yīng)地解釋。在本說明書中術(shù)語“配體”應(yīng)當(dāng)被理解為包括天然產(chǎn)生的配體本身和與天然配體具有相同功能的任何其合成類似物。根據(jù)本發(fā)明的特別實施方式，配體可以選自人toll受體的組成型或誘導(dǎo)型配體，配體可能被或不被蛋白酶，例如絲氨酸蛋白酶加工。
典型地，toll受體配體或配體前體是蛋白的半胱氨酸結(jié)超家族成員，或其活性類似物。這個家族的每個成員都包括在活性C-端結(jié)構(gòu)域群集的七個半胱氨酸殘基。盡管在每個實例中二聚化的方式不同，但是家族的每個成員能夠形成二聚體并且結(jié)合到特定的受體上。蛋白都采納獨特的三維折疊-半胱氨酸結(jié)，半胱氨酸結(jié)以延長的β-鏈和三個顯示獨特連接的二硫橋為特征。可以在發(fā)明的組合物中使用并且屬于蛋白半胱氨酸結(jié)超家族的特別適合配體的實例是來自果蠅屬(Drosophila)的鏈條蛋白，或其活性部分，例如在Cell 76，677-688中描述的C-端106個氨基酸的肽。在TIBS 1998，July 23(7)(239-242)中描述了來自這個家族的其它配體。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方式中，發(fā)明的toll受體配體是在具有幼蟲生命周期的昆蟲的幼蟲階段所表達的鏈條樣蛋白，或其合成類似物。這樣的昆蟲的實例是黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)和絲光綠蠅(Luciliasericata)。
根據(jù)本發(fā)明的包含toll受體配體前體的組合物可以進一步包括適合加工toll受體配體前體以形成活性toll受體配體的蛋白酶。典型地，蛋白酶將是絲氨酸蛋白酶，例如胰蛋白酶樣或胰凝乳蛋白酶樣酶。合適的胰蛋白酶樣蛋白酶的特征是(i)它是生物體絲光綠蠅(Lucilia sericta)分泌的；(ii)它在pH8.0-8.5下顯示對FITC酪蛋白的最適蛋白水解活性；(iii)它具有對Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC的水解能力但對Suc-Ala-Ala-Phe-AMC無蛋白水解能力；(iv)它對FITC-酪蛋白和Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC的蛋白水解活性被絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF和APMSF所抑制；和
(v)它被固定化的氨基芐脒結(jié)合。
在本發(fā)明組合物中有用的蛋白酶天然存在于絲光綠蠅(Luciliasericata)幼蟲所排泄/分泌(ES)的分泌物中。
當(dāng)水解熒光蛋白底物異硫氰酸熒光素-酪蛋白(FITC-酪蛋白)時，幼蟲ES分泌物表現(xiàn)出經(jīng)典的8.0-8.5的最適pH。在監(jiān)測FITC-酪蛋白的水解之前，用不可逆的低分子量抑制劑4-(脒基苯基)甲烷磺酰氟化物(APMSF；所有胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的抑制劑，但不是胰凝乳蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的抑制劑)或者用苯基甲烷磺酰氟化物(PMSF；所有絲氨酸蛋白酶的抑制劑)預(yù)先培養(yǎng)幼蟲的ES分泌物，顯示幼蟲的ES分泌物具有兩類絲氨酸蛋白酶活性；胰蛋白酶樣活性和胰凝乳蛋白酶樣活性。通過監(jiān)測熒光多肽底物Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC(對胰蛋白酶樣蛋白酶有選擇性)和Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC(對胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶有選擇性)證實了雙重活性，其中“AMC”代表7-氨基-4-甲基香豆素，“Suc”代表琥珀?；?br> 在絲光綠蠅(Lucilia sericata)的ES分泌物中除了檢測到占優(yōu)勢的絲氨酸蛋白酶活性外，也檢測到了其它不占優(yōu)勢的活性。盡管沒有顯示半胱氨?；钚裕且呀?jīng)檢測到存在天冬氨酰和金屬蛋白酶的活性。通過監(jiān)測FITC-酪蛋白的水解顯示在pH5.0時具有天冬氨酰的活性，并且被這類特異的抑制劑胃蛋白酶抑制劑A成功地抑制。通過ES分泌物水解亮氨酸氨基肽的能力證實存在金屬蛋白酶的活性，揭示存在外肽酶。外肽酶識別肽中游離NH2氨基酸。亮氨酸氨基肽被絲光綠蠅(Lucilia sericata)ES的水解僅僅被經(jīng)典的金屬蛋白酶抑制劑，Zn2+鰲合物鄰菲羅啉抑制。這種抑制反映存在具有金屬蛋白酶酶性質(zhì)的外肽酶。
ES分泌物具有經(jīng)計算大約是0.88單位/升的α-淀粉酶活性。另外，盡管當(dāng)與蛋白酶相比這種活性大約低50倍，但是在幼蟲的ES分泌物中存在磷酸酶活性(正磷酸單酯鍵的水解)。也鑒定了脂酶的活性(脂肪酸酯中酯鍵的水解)。當(dāng)用抑制劑PMSF預(yù)培養(yǎng)ES分泌物時沒有檢測到這種脂酶的活性，提示這種水解應(yīng)歸因于分泌物中的絲氨酸蛋白酶。
從我們的研究中能夠推斷在幼蟲的ES分泌物中占優(yōu)勢的活性是絲氨酸蛋白酶活性，并且存在兩類絲氨酸蛋白酶活性；一種來源于胰凝乳蛋白酶，另一種來源于胰蛋白酶。
可以通過層析方法從天然ES分泌物中獲得基本上純化形態(tài)的加工蛋白酶。從絲光綠蠅(Lucilia sericata)幼蟲中收集ES分泌物并且使用固定化的氨基芐脒進行親和層析。氨基芐脒是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的可逆的抑制劑。從層析方法中收集“流通”的物質(zhì)，即沒有被固定劑結(jié)合的物質(zhì)之后，通過添加游離的氨基芐脒可以洗脫被固定劑結(jié)合的酶并且分別收集。
如上面描述的，本發(fā)明的配體能夠根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中已知的肽合成和純化的常規(guī)途徑進行合成制備和純化?？梢员Ｗo配體抗氨基肽酶活性以提高活性和/或延長配體在傷口區(qū)保持有活性的時間。例如，可以通過使用非編碼的異常氨基酸在配體中的COOH的取代位置發(fā)生酰胺化和/或通過電子等排物取代CO-NH酰胺鍵，獲得抗氨基肽酶活性的保護。
可以將發(fā)明的配體應(yīng)用到傷口中以誘導(dǎo)有助于愈合的生長因子的輪廓。例如，以純的形式存在或在無菌載體中的一種或更多配體，能夠被灑在傷口區(qū)域或者被摻入載體中應(yīng)用到傷口上。例如，配體能夠被摻入或者被用膠囊包到能將配體以緩慢釋放或可控釋放方式釋放到傷口中的合適的材料中。這樣合適載體的實例是可以配制用于以可控釋放方式釋放肽的聚(丙交酯共乙交酯)或PLGA顆粒。
可選擇地，可以將一種或多種配體摻入應(yīng)用到傷口的敷料中。這些敷料的實例包括摻入了含有傷口愈合材料的緩慢釋放的水膠體顆粒的階段性的或分層的敷料，或者任選地被常規(guī)敷料覆蓋的含有傷口愈合材料的海綿?？梢詫?dāng)前正在使用的水膠體類敷料，例如那些可以在“Granuflex”商標下買到的，進行修飾用以將配體釋放到傷口中的。
本發(fā)明也涉及包含將根據(jù)發(fā)明的組合物應(yīng)用到傷口上的處理人或非人的傷口以促進其愈合的方法。在進一步方面中，本發(fā)明提供用于傷口的敷料，其中包含帶有根據(jù)本發(fā)明組合物的支架。
發(fā)明詳述1.本發(fā)明的加工蛋白酶的分離和分析通過絲光綠蠅(Lucilia sericata)ES在氨基芐脒瓊脂糖上的親和層析純化胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶。用20ml含有0.5M氯化鈉的pH8.0的0.025M Tris-鹽酸緩沖液平衡柱基質(zhì)(1ml)。在上柱前用等體積的緩沖液稀釋天然ES(0.5ml，70μg/ml蛋白)。收集通過層析的餾分(0.5ml)。在用6.5倍柱體積的緩沖液洗滌以除去未結(jié)合的蛋白后，使用游離的氨基芐脒配體(2ml 400μM)以得到結(jié)合物質(zhì)的洗脫液。使用餾分在280nm的吸光度讀數(shù)以確定未結(jié)合(流通)和結(jié)合峰的位置和接著收集結(jié)合峰用于分析。在

圖1中顯示洗脫輪廓圖。
氨基芐脒瓊脂糖結(jié)合胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶。在將幼蟲酶分泌物上柱后，未結(jié)合的物質(zhì)直接通過并且作為“流通”物(峰I)被收集。向柱緩沖液中添加游離氨基芐脒得到結(jié)合的蛋白酶(峰II)的洗脫液。未結(jié)合(流通)物質(zhì)含有不受APMSF(可能包括胰凝乳蛋白酶樣酶)影響的蛋白酶活性，而在氨基芐脒洗脫峰中的活性基本上被APMSF消除(80％)，提示胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶活性的純化。在圖2中顯示柱餾分的殘余活性。
將柱餾分在非還原性SDS樣品緩沖液(含有4％SDS pH6.8的0.5MTris-鹽酸、20％甘油和0.02％溴酚藍)中在含有0.1％人血紅蛋白的12％SDS聚丙烯酰胺凝膠上通過電泳進行檢查。通過在2.5％Triton X-100(1小時)和蒸餾水(15分鐘)中洗滌以除去SDS。通過在37℃、pH8.0的0.1M Tris-鹽酸緩沖液中孵育過夜，凝膠中血紅蛋白底物的蛋白酶解在相應(yīng)于蛋白酶的位置上產(chǎn)生了考馬斯亮藍蛋白染色所顯示的清晰條帶(圖3)。起始餾分和流出的餾分每個都顯示了幾種蛋白酶的活性，然而用氨基芐脒洗脫的餾分顯示了單一條帶。因此先前在用氨基芐脒洗脫的餾分中鑒定的胰蛋白酶樣酶(圖2)顯示具有～25Kda的分子量(圖3)。
2.用FITC-酪蛋白研究幼蟲酶(ES)的蛋白水解行為使用下面ES的不同呈現(xiàn)方式(0.25μg)研究pH8時在FITC-酪蛋白水解中絲光綠蠅(Lucilia sericata)的ES的活性。
A、 ES+水B、 ES+乙醇C、 用0.2mM PMSF預(yù)培養(yǎng)的ESD、 用0.6mM PMSF預(yù)培養(yǎng)的ESE、 用1mM PMSF預(yù)培養(yǎng)的ESF、 用0.04mM APMSF預(yù)培養(yǎng)的ESG、 用0.12mM APMSF預(yù)培養(yǎng)的ESH、 用0.2mM APMSF預(yù)培養(yǎng)的ES
在用不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF預(yù)培養(yǎng)后絲光綠蠅(Lucilia sericata)ES的蛋白水解活性被抑制。在用1mM PMSF預(yù)培養(yǎng)ES的實例中蛋白水解活性被完全抑制。PMSF溶于乙醇，溶劑對ES活性的影響可以忽略。相反，在用不可逆的“胰蛋白酶樣”特異性抑制劑APMSF預(yù)培養(yǎng)ES的實例中檢測到ES的大約50％殘余絲氨酸蛋白酶活性。在APMSF存在下的殘余活性表明存在胰凝乳蛋白酶樣酶。得到的活性值(％)如下A、100％B、85.5％C、13.8％D、18％E、0％F、43.5％G、47％H、54％這些結(jié)果以圖示方式顯示在圖4中。
3.幼蟲酶(ES)對特定底物的蛋白水解活性的研究使用下面不同呈現(xiàn)方式的ES研究存在APMSF和PMSF時絲光綠蠅(Lucilia sericata)ES(0.25μg)對Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC(a)和對Suc-Ala-Ala-Phe-AMC(b)的活性。
(a)A、 ESB、 用0.025mM APMSF預(yù)培養(yǎng)的ESC、 用0.05mM APMSF預(yù)培養(yǎng)的ESD、 用1mM PMSF預(yù)培養(yǎng)的ES(b)E、 ESF、 用0.2mM APMSF預(yù)培養(yǎng)的ESG、 用1mM PMSF預(yù)培養(yǎng)的ES得到的殘余活性值(％)如下(a)
A、100％B、14.3％C、3.6％D、0％(b)E、100％F、86.8％G、1.3％這些結(jié)果以圖示方式顯示在圖5中。
(a)的結(jié)果揭示在絲光綠蠅(Lucilia sericata)ES中存在“胰蛋白酶樣”絲氨酸蛋白酶活性。Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC的水解(對絲氨酸蛋白酶凝血酶和纖溶酶有選擇性)被1mM PMSF和0.05mMAPMSF抑制。然而，絲光綠蠅(Lucilia sericata)ES對胰凝乳蛋白酶底物Suc-Ala-Ala-Phe-AMC的水解作用僅僅被PMSF(1mM)抑制而不被過量的APMSF(其不抑制胰凝乳蛋白酶)抑制。該結(jié)果提供了進一步的證據(jù)表明在ES中存在兩種不同絲氨酸蛋白酶亞類。
4.toll和toll樣受體的配體如上面提到的，根據(jù)特別的實施方式，可以在本發(fā)明組合物中使用的配體可以選自人toll受體的組成型和誘導(dǎo)型配體，可以被或不被蛋白酶，如絲氨酸蛋白酶加工。特定的實例是未被加工和已加工形式的鏈條蛋白，一種從黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)獲得的toll受體配體。在Cell(1994)，76，677-688中描述和刻畫了該鏈條蛋白的特性。
來自絲光綠蠅(Lucilia sericata)不同發(fā)育階段的鏈條樣蛋白(鏈條蛋白同源物或類似物)，在本發(fā)明中也可以被用作toll受體配體?？梢允褂眯纬傻目构墝?Drosophila)鏈條蛋白的抗體鑒定這些蛋白。這些來自絲光綠蠅(Lucilia sericata)不同發(fā)育階段的富含鏈條樣蛋白的物質(zhì)可以通過在生理鹽水中提取，獲得提取物，接著將提取物應(yīng)用到抗體親和層析柱中以獲得提純的方法而被純化?？梢詸z驗這樣鑒定的鏈條樣蛋白結(jié)合人白細胞上toll受體的能力?？梢杂脕碜越z光綠蠅(Lucilia sericata)的鏈條樣蛋白與人外周血單核(HPBM)細胞共培養(yǎng)，接著用胸苷摻入的方法測定HPBM細胞的增殖。一前一后地，與已知的Toll配體(LPS-細菌脂多糖)一起監(jiān)測綠蠅屬(Lucilia)的鏈條蛋白同源物或類似物誘導(dǎo)細胞因子(TNF-α)分泌的能力。
Cytokine and Growth Factor Reviews 11(2000)219-232中描述了toll樣受體的配體。
實驗方面進行了在誘導(dǎo)的蛆血淋巴(使用絲光綠蠅(Lucilia sericata)的幼蟲)中鑒定LPS樣活性的研究。
使絲光綠蠅(L.sericata)幼蟲在存在(誘導(dǎo)的)或缺乏(非誘導(dǎo)的)銅綠假單胞菌(Pseudomoma aeruginosa)的無菌肝/瓊脂溶液中生長。
從外科材料測試實驗室SMTL(Princess of Wales Hospital，Bridgend CF31 1RQ)獲得絲光綠蠅(L.sericata)的無菌幼蟲。幼蟲在Sherman(1995)描述的，包含分解的豬肝和細菌培養(yǎng)用瓊脂的培養(yǎng)基上生長，在允許容器內(nèi)外之間氣體和潮氣交換但是防止細菌進入的密閉容器中通過高壓滅菌消毒。在容器的底部為幼蟲提供薄薄的一層營養(yǎng)培養(yǎng)基。
在200μl無菌磷酸緩沖鹽溶液中懸浮無菌的第一齡期幼蟲(200)，并且轉(zhuǎn)移到容器中。允許幼蟲在28℃潮濕室內(nèi)無菌環(huán)境下生長約48小時，以便讓幼蟲定居。將銅綠假單胞菌(Pseudomoma aeruginosa)突變株P(guān)AO P47接種到10ml Luria Bertani(LB)培養(yǎng)基中，在37℃振蕩生長過夜。將1ml培養(yǎng)物(～108活細胞計數(shù))接種到容器中，讓幼蟲在存在細菌的條件下生長。
重復(fù)上面描述的過程，但例外的是不使用銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)培養(yǎng)物接種。
培養(yǎng)48小時后，將從上面描述的過程中得到的新的第二齡期幼蟲分別進行如下加工。
在無菌條件下將幼蟲從肝-瓊脂溶液中移出并且轉(zhuǎn)移到無菌普通試管內(nèi)。用冷的無菌PBS沖洗蛆，接著在70％乙醇中洗滌，最后在濾紙上干燥。接著使用無菌外科刀片將幼蟲鉤狀物的底部切開。接著用帶有無菌黃色Eppendorf槍頭的20μl移液器收集血淋巴，并且轉(zhuǎn)移到含有20μg/ml抑酶肽(蛋白酶抑制劑)和40μM苯硫脲(melinisation抑制劑)的預(yù)冷的Eppendorf試管中。在4℃，15000g離心10分鐘后，將上清液收集到預(yù)冷的試管中，在-80℃保藏直到需要為止。通過在LB溶液或平板中的過夜培養(yǎng)物判斷，當(dāng)使用這種方法時腸內(nèi)容物沒有污染血淋巴，并且血淋巴也沒有被銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)污染。
使用“三明治”ELISA方法在人外周血單核細胞(PBMCs)上檢測誘導(dǎo)的和非誘導(dǎo)的血淋巴上清液(根據(jù)上面描述的方法制備的)對TNF-α釋放的影響，與LPS進行比較。
血樣本是從三名征得同意的健康志愿者(供血者1，2和3)中獲得的。通過浮力密度離心法用Histopaque 1077(Sigma，Poole，UK)以600g離心20分鐘從三名供血者的每份肝素化的全血中分離人外周血單核細胞(PBMC)。用RPMI 1640培養(yǎng)基把從中間層收獲的PBMC沖洗兩次，重懸浮在AIM-V培養(yǎng)基中。
接著將105PBMCs鋪到96孔平板上，用100μl濃度逐漸增加的非誘導(dǎo)的/誘導(dǎo)的血淋巴培養(yǎng)，來自大腸桿菌血清型055B5的LPS作為陽性對照。培養(yǎng)24小時后，收集細胞上清液，加到用小鼠抗人TNF-α抗體預(yù)先覆蓋的96孔平板上。包括從20ng/ml開始的標準人TNF-α的系列稀釋液作為平行對照。留下預(yù)期的TNF-α過夜用以捕捉，用0.05％(V/V)PBS/Tween 20三次沖洗后，添加生物素化的小鼠抗人TNF-α抗體來檢測捕捉抗體。用0.05％(V/V)PBS/Tween 20沖洗最后一次后，向孔中加入鏈霉抗生物素蛋白-辣根過氧化物酶，用四甲基聯(lián)苯胺作為底物顯色10分鐘，在Dynex平板讀數(shù)器中在450nm處讀取顯色讀數(shù)。所有的分析都進行兩次。
結(jié)果以圖示方式顯示在圖6中。在圖6中(A)欄顯示獲得的，表示檢測到的TNF-α(ng/ml)與用于對來自三名供血者中每一個的PBMCs進行LPS處理的LPS(μg/ml)之間關(guān)系的圖。(B)欄顯示所生產(chǎn)的TNF-α占最大LPS反應(yīng)的％(用LPS％表示)與每個血淋巴處理的PBMC樣品的血淋巴濃度的變化關(guān)系。(B)欄中的圖顯示針對誘導(dǎo)的和非誘導(dǎo)的血淋巴的結(jié)果。研究表明誘導(dǎo)的血淋巴刺激從人PBMCs中分泌TNF-α。很重要地提及的是，根據(jù)在LB溶液或平板中的過夜培養(yǎng)物所做的判斷，血淋巴不存在任何銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)的污染。
權(quán)利要求
1.用于治療人或非人哺乳動物傷口促進其愈合的組合物，其包含活性量的toll受體配體或其前體和合適的載體。
2.如權(quán)利要求1中所述的組合物，其中所述的toll受體配體或配體前體是蛋白的半胱氨酸結(jié)超家族成員或其活性類似物。
3.如權(quán)利要求1或2中所述的組合物，其中toll受體配體或配體前體是來源于昆蟲的蛋白質(zhì)、其活性部分或兩者之一的活性類似物。
4.如權(quán)利要求3中所述的組合物，其中所述的蛋白質(zhì)來源于黑腹果蠅或絲光綠蠅。
5.如權(quán)利要求3或4中所述的組合物，其中所述蛋白質(zhì)的所述活性部分包括C-端的106個氨基酸的多肽。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項的組合物，它進一步包括適合加工toll受體配體前體以形成活性toll受體配體的蛋白酶。
7.如權(quán)利要求6中所述的組合物，其中所述蛋白酶的特性在于(i)它是由生物體絲光綠蠅分泌的；(ii)它在pH8.0-8.5下具有FITC酪蛋白的最適蛋白水解活性；(iii)它對Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC具有水解能力，但對Suc-Ala-Ala-Phe-AMC無蛋白水解能力；(iv)它對FITC-酪蛋白和Tosyl-Gly-Pro-Arg-AMC的蛋白水解活性被絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF和APMSF所抑制；和(v)它能被固定化的氨基芐脒結(jié)合。
8.治療人或非人哺乳動物傷口促進其愈合的方法，其包括將根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的組合物應(yīng)用到傷口上。
9.用于傷口的敷料，其包括帶有根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的組合物的支架。
全文摘要
治療人或非人哺乳動物傷口促進其愈合的組合物，其包括活性量的toll受體(或toll樣受體)配體或其前體，和合適的載體。配體可以是來源于昆蟲，例如黑腹果蠅(
文檔編號A61L15/44GK1612756SQ02826812
公開日2005年5月4日 申請日期2002年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月17日
發(fā)明者D·I·普里特查德 申請人:英國國防部