專利名稱：包括至少一種鏈烷醇酰胺以抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及美容和藥物治療，特別是皮膚病學(xué)治療。更具體而言，本發(fā)明涉及包括如下物質(zhì)的組合物至少一種選自鏈烷醇酰胺的活性化合物，該活性化合物可能與如下的至少一種其它化合物結(jié)合如金屬蛋白酶抑制劑、PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑烷酮、氨基甲酸衍生物或噁唑啉。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是組合物，該組合物用作藥物，特別地抑制細(xì)胞遷移，如真皮樹突細(xì)胞(dermal dendrocyte)、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和特別地朗格漢斯細(xì)胞(langerhans cell)，例如是由于外界刺激或由化學(xué)、物理、生物和更特別地免疫系統(tǒng)源的“危險(xiǎn)信號(hào)”，具有足夠高的強(qiáng)度以誘導(dǎo)皮膚的紊亂。鏈烷醇酰胺和它們與金屬蛋白酶抑制劑、PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑烷酮、氨基甲酸衍生物或噁唑啉的結(jié)合物，以及包含這些產(chǎn)物的藥物組合物用于藥物的制備，該藥物用于變應(yīng)性和/或炎性和/或刺激性和/或皮膚不舒服源(敏感性、反應(yīng)性或不耐受皮膚)的皮膚病理學(xué)治療或預(yù)防。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種敏感性、刺激的、不耐受、易變應(yīng)性、老化皮膚和/或粘膜的美容治療方法，向該皮膚和/或粘膜施加危險(xiǎn)信號(hào)，顯示皮膚屏蔽障礙，具有皮疹或顯示非病理學(xué)免疫不平衡，該方法由如下操作組成向皮膚和/或粘膜施加這樣的組合物。
皮膚的一個(gè)主要功能是保護(hù)生物體免受外部環(huán)境的攻擊。大多數(shù)此保護(hù)由皮膚中存在的細(xì)胞協(xié)同提供，在有害劑的存在下，該細(xì)胞能夠產(chǎn)生定向抗有害劑的炎性和/或免疫響應(yīng)。這些細(xì)胞是樹狀細(xì)胞(dendritic cell)、表皮的朗格漢斯細(xì)胞(LC)、和真皮樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。
LC是衍生自骨髓的樹狀細(xì)胞和保留在非淋巴組織如皮膚和粘膜(口、肺、囊、直腸、鞘)中。在皮膚中，LC在基底上層位置中插入表皮角質(zhì)形成細(xì)胞之間。在超微結(jié)構(gòu)上，它們的特征為存在膜源(membrane origin)特異性細(xì)胞器，即伯貝克顆粒。在免疫組織化學(xué)上，LC特別表達(dá)CD1a分子和II類主要組織相容性絡(luò)合分子。
LC在免疫性中起決定性作用，作為呈現(xiàn)抗原的細(xì)胞。對(duì)鼠進(jìn)行的試驗(yàn)展示LC捕獲表皮中存在的抗原并遷移到引流皮膚的淋巴組織，其中它們對(duì)T細(xì)胞呈現(xiàn)抗原。免疫皮膚響應(yīng)的起始依賴于LC離開表皮遷移遠(yuǎn)到鄰近神經(jīng)節(jié)的能力。此遷移可以受不同的因素影響粘附分子的表達(dá)，來自細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白質(zhì)，半抗原，細(xì)胞因子等。然而，還沒有完全說明LC遷移涉及的機(jī)理。特別地，在達(dá)到淋巴神經(jīng)節(jié)之前，LC必須首先通過真皮表皮連接(dermoepidermal junction)(DEJ)，而且它們也需要產(chǎn)生通過皮膚細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的途徑。DEJ主要由層粘連蛋白5，IV和VII型膠原，巢蛋白和基底膜聚糖組成。在真皮中圍繞成纖維細(xì)胞的ECM基本包含I型和III型膠原。
LC遷移的成熟，起始和調(diào)節(jié)依賴于促炎細(xì)胞因子如IL-1β(白細(xì)胞介素-1-β)和TNF-α(腫瘤壞死因子-α)。結(jié)果在于如果這些LC與抗原相關(guān)，任何皮膚攻擊，特別是能夠誘導(dǎo)足夠數(shù)量這些細(xì)胞因子任一種或兩種的任何炎性和/或刺激性反應(yīng)，能夠刺激LC的遷移和因此促進(jìn)變應(yīng)性反應(yīng)。
由于在表面抗原的捕獲之后LC的遷移，可以觀察皮膚病學(xué)類型病理學(xué)。在特應(yīng)性濕疹中，LC能夠在表面上固定IgE和誘導(dǎo)病理學(xué)免疫響應(yīng)。由于它們?cè)趯⑺尸F(xiàn)給T淋巴細(xì)胞之前捕獲和處理抗原，LC在接觸性濕疹中起中心作用?？乖３炙挠洃浐驮诘诙谓佑|時(shí)激發(fā)免疫反應(yīng)。
考慮到以上情況，非常需要能夠改進(jìn)真皮樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞(LC)的遷移能力，以嘗試增加耐受性閾值或限制變應(yīng)性和/或炎性和/或刺激皮膚和特應(yīng)性和/或敏感性和/或反應(yīng)性和/或不舒服皮膚的反應(yīng)性。這是本發(fā)明計(jì)劃解決的問題。本發(fā)明人展示相當(dāng)令人驚奇和出乎意料地，化合物如鏈烷醇酰胺能夠顯著地抑制細(xì)胞如朗格漢斯細(xì)胞的遷移，該遷移特別由變應(yīng)原劑的存在誘導(dǎo)。然而，過去鏈烷醇酰胺從來沒有描述為能夠抑制特別由變應(yīng)原劑存在誘導(dǎo)的朗格漢斯細(xì)胞的遷移。
本發(fā)明因此涉及一種組合物，該組合物包括至少一種選自鏈烷醇酰胺的活性化合物以抑制朗格漢斯細(xì)胞的遷移。有利地根據(jù)本發(fā)明的組合物是包括至少一種美容用和藥用賦形劑的美容劑或藥物組合物，特別是皮膚病學(xué)組合物。
本發(fā)明的鏈烷醇酰胺滿足下列通式 其中，R1表示C1-C40烴基，其包括0到6個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)；R’和R”獨(dú)立地表示氫原子、甲基、羥基、C2-C20烴基，該基團(tuán)包括0到6個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)和C1-C6烷氧基(OC1-C6)，條件是如果R’表示為羥基時(shí)，R”表示氫或C1-C6烴基，該基團(tuán)含有0到3個(gè)不飽和鍵并可能含有至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)；R2表示氫原子、甲基、C2-C20烴基，該基團(tuán)包括0到6個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)。
根據(jù)本發(fā)明的目的，術(shù)語“C1-C6烷氧基(OC1-C6)”指其中烷基基團(tuán)含有1到6個(gè)碳原子的烷氧基。
優(yōu)選R1表示飽和線性烴基，該基團(tuán)含有2到40個(gè)碳原子(C2-C40)，優(yōu)選6到22個(gè)碳原子(C6-C22)，進(jìn)一步更優(yōu)選8到18個(gè)碳原子(C8-C18)，更進(jìn)一步優(yōu)選10到16個(gè)碳原子(C10-C16)。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，R1表示烴基，該基團(tuán)含有1到40個(gè)碳原子(C1-C40)，有利的是2到40個(gè)碳原子(C2-C40)，優(yōu)選6到22個(gè)碳原子(C6-C22)，進(jìn)一步更優(yōu)選8到18個(gè)碳原子(C8-C18)，含有1到6個(gè)不飽和鍵并可能含有至少一個(gè)如上所定義的羥基，烷氧基，或羰基烷氧基。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，R’和R”獨(dú)立地表示氫原子，甲基，C2-C20飽和線性烴基。
根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方案，R2表示氫原子，甲基或C2-C20飽和線性烴基。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選R1表示C2-C40飽和線性烴基，優(yōu)選C6-C22，進(jìn)一步更優(yōu)選C8-C18，更進(jìn)一步優(yōu)選C10-C16，并且R’和R”獨(dú)立地表示氫原子、甲基或C2-C20飽和線性烴基，且R2表示氫原子、甲基或C2-C20飽和線性烴基。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所述鏈烷醇酰胺是稱為AK100、以下列分子式表示的鏈烷醇酰胺 制備含有C4-C40羰基烷氧基基團(tuán)的鏈烷醇酰胺(alkanomide)的一個(gè)具體方法見歐洲專利申請(qǐng)EP 968 998所述。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，組合物也可包括至少一種選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑的朗格漢斯細(xì)胞遷移抑制劑。
對(duì)于本發(fā)明的目的，“基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑化合物”表示本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何化合物，該化合物具有抑制MMP降解細(xì)胞外基質(zhì)活性的能力。MMP形成具有非常防腐的結(jié)構(gòu)(preservedstructure)的鋅依賴性酶族(已經(jīng)識(shí)別和表征多于二十種)，它們具有降解細(xì)胞外基質(zhì)組分的能力。根據(jù)它們底物的本質(zhì)，它們分成膠原酶、明膠酶和溶基質(zhì)素。它們可以由皮膚中的不同細(xì)胞類型合成(成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞等)。MMP組因此包括四種亞類即(1)膠原酶，(2)明膠酶，(3)溶基質(zhì)素，和(4)膜類型MMP(MT-MMP)。可以由自然存在的蛋白酶抑制劑如金屬蛋白酶的組織抑制劑(TIMP，特別是TIMP-1和TIMP-2)調(diào)節(jié)MMP的活性。特別地，抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物是抑制至少一種選自如下的MMP的化合物MMP-1、MMP-2、MMP-3MMP-9、MMP-7、MMP-13和MMP-18。對(duì)于本發(fā)明的目的，“MMP抑制化合物”表示抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，特別是金屬蛋白酶的組織抑制劑(TIMP)、α-2-巨球蛋白、纖溶酶原激活物抑制劑、鋅螯合劑、苔蘚抑素-1(bryostatine-1)、抗生素(多西環(huán)素(doxycycline)、米諾環(huán)素(minocyline)等)、結(jié)構(gòu)相似于MMP底物結(jié)構(gòu)的合成或天然肽(巴馬司他(batimastat)、馬立馬司他(marimastat)等)、視黃醛衍生物(特別是非芳族視黃醛衍生物如視黃醛、維A酸和視黃酸9-順式、維生素A、單芳族視黃醛衍生物如阿維A酯(etretinate)、全反式艾維甲酸(all-trans acitretine)和莫維A胺(motrerinide)，多芳族視黃醛衍生物如阿達(dá)帕林(adapalene)、他扎羅汀(tazarotene)、他米巴羅汀(tamibarotene)和砜甲基芳維A酸(arotinoid))、和抗氧劑(單線態(tài)氧阱等)、抗癌劑(或“抗轉(zhuǎn)移”劑)、麥芽水解產(chǎn)物如由Coletica Company銷售的Colalift、海藻提取物如由Secma Company銷售的Kelpadelie、鯊魚軟骨提取物如由Atrium Company銷售的MDI配合物、米肽如由Pentapharm Company銷售的Colhibin、羽扇豆的肽提取物。更特別地，根據(jù)本發(fā)明的MMP抑制化合物選自如下物質(zhì)LaboratoiresPharmascience Company在1999年4月19日提交的專利申請(qǐng)F(tuán)R9904875中描述的羽扇豆的肽提取物或“羽扇豆肽”。特別地，我們會(huì)提及在申請(qǐng)F(tuán)R9904875中以名稱提取物B(LU105)描述的肽提取物。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，該MMP抑制劑選自視黃醛衍生物。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施方案，組合物也可包括至少一種選自如下的化合物PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑烷酮、氨基甲酸，特別是(1-羥甲基-十三烷基)-氨基甲酸和(1-羥甲基-十一烷基)-氨基甲酸的衍生物和鏈烷醇酰胺。選自PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑烷酮、氨基甲酸，特別地(1-羥甲基-十三烷基)-氨基甲酸和(1-羥甲基-十一烷基)-氨基甲酸的衍生物和鏈烷醇酰胺的化合物或這些化合物，使得可以改進(jìn)和/或限制刺激性或致敏反應(yīng)，并且它們中的一些甚至可抑制樹狀細(xì)胞，更特別地朗格漢斯細(xì)胞、真皮樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、肥大細(xì)胞和上皮細(xì)胞的遷移。
對(duì)于本發(fā)明的目的，“PKC”或“蛋白激酶C”表示催化在細(xì)胞底物上的磷酸化反應(yīng)的酶。
當(dāng)活化它們時(shí)，PKC在蛋白質(zhì)底物上磷酸化特異絲氨酸或蘇氨酸殘基，它依賴于細(xì)胞類型而變化。在許多細(xì)胞中，PKC的活化增加特異性基因的轉(zhuǎn)錄。
蛋白激酶C(PKC)表示由基因族編碼的蛋白質(zhì)(11種不同的同種型)。特別地，已知這些蛋白質(zhì)涉及由生長因子、細(xì)胞因子、和許多其它生物分子介導(dǎo)的細(xì)胞外信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。蛋白激酶β2(PKC-β2)特異地由表皮LC表達(dá)。
因此，由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知為抑制PKC磷酸化活性的任何化合物可以用作本發(fā)明的PKC抑制化合物。例如，參考在申請(qǐng)WO9943805(Incyte Genomics Inc.)中描述的多肽實(shí)施例。
特別地，PKC抑制化合物選自非特異性PKC抑制劑、同種型PKC-β2的特異性抑制劑和這些化合物的締合物。
更特別地，PKC抑制化合物選自具有天然或合成來源的以下化合物酚類和多酚類化合物、矢車菊苷配質(zhì)(兒茶素(catechine)、表兒茶精(epicatechine)等)、α-香樹素(amyrine)、羽扇豆醇、亞油酸酯羽扇豆醇、甾醇、甾烷醇(stanol)、三萜醇和它們的氫化同系物、抗生素如星形孢菌素，由Calbiochem Company銷售的Ro-318425(或2-(8)-(氨基甲基)-6，7，8，9-四氫吡啶酚(1，2-a)吲哚-3-基)3-(1-甲基-吲哚-基馬來酰亞胺，HCl)、通過與PKC生理激活劑競爭起作用的化合物如二酰甘油和佛波酯、(溶)鞘脂的皮脂、溶血磷脂類型如神經(jīng)酰胺和擬神經(jīng)酰胺、鞘氨醇(sphingosine)和植物鞘氨醇、鞘氨醇(sphinganine)、和這些化合物的衍生物、前體、類似物和同系物。
對(duì)于本發(fā)明的目的，“酚類和多酚類化合物”表示簡單酚、苯醌、酚酸、苯乙酮、苯乙酸、羥基肉桂酸、香豆素和異香豆素、色酮、萘醌(naftoquinone)、呫噸酮、蒽醌、黃酮類化合物、木脂體(lignane)和新木脂體、木素(lignine)、查耳酮、雙氫查耳酮、橙酮、黃酮、黃酮醇、二氫黃酮醇、雙氫黃酮、黃烷醇、黃烷二醇或無色花色素、花色素、異黃酮類化合物、雙黃酮類化合物、原花色素和縮合鞣質(zhì)。
對(duì)于本發(fā)明的目的，“甾醇”具體地表示甾醇，換言之在位置3有羥基的全氫-1，2-環(huán)戊菲化合物，以及具有如下給出通式(I)的甾醇類似物。
因此，可以根據(jù)本發(fā)明使用的甾醇優(yōu)選滿足以下給出的通式 其中位置5中以虛線顯示的不飽和相應(yīng)于在甾醇情況下的不飽和，R表示線性或支化，不飽和或飽和，包括1-25個(gè)碳原子的烴化鏈。特別地，R選自C1-C12烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C2-C8鹵代烯基、C2-C8鹵代炔基。術(shù)語“鹵代”表示一個(gè)或幾個(gè)鹵素取代基，即一個(gè)或幾個(gè)氯、氟、溴或碘的原子。
可以有利地根據(jù)本發(fā)明使用的甾醇特別包括β-谷甾醇、α-谷甾醇、γ-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇或菜子甾醇和這些化合物的混合物。例如，可以采用由Kaukas Company銷售的名稱為“Ultra”的產(chǎn)品(主要包括β-谷甾醇)形式使用β-谷甾醇。甾醇混合物的例子包括由CognisCompany銷售的主要包括β-谷甾醇(約50wt％)，豆甾醇，菜子甾醇或菜油甾醇的稱為“Generol”的產(chǎn)品，和由Kaukas Company銷售的“Primal”產(chǎn)品。
可以有利地根據(jù)本發(fā)明使用的三萜醇特別包括β-香樹素、高根二醇、蒲公英甾醇、環(huán)阿屯醇、24-亞甲基環(huán)阿屯醇(cycloartanol)、羽扇豆醇、羊毛甾醇和這些化合物的混合物。
對(duì)于本發(fā)明的目的，三萜醇的“氫化同系物”表示相應(yīng)的三萜醇化合物，對(duì)于該化合物，已經(jīng)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法氫化存在的任何不飽和鍵(換言之轉(zhuǎn)變成飽和鍵)。
更特別地，PKC抑制化合物選自鞘脂和溶血磷脂如-陶瓷-鞘氨醇-半乳糖腦苷脂(galactocerbroside)-鞘氨醇半乳糖苷-硫苷脂-溶硫苷脂-鞘磷脂(sphyngomyelin)，和-溶鞘磷脂。
也注意到鞘脂和溶血磷脂類型的皮脂可以特別用作PKC抑制化合物。
可以使用的一些最基本鞘脂是鞘氨醇(D紅二羥基1，3氨基2十八碳烯4t)和它的異構(gòu)體、和植物鞘氨醇(D核糖三羥基1，3，4氨基2十八烷)和它的異構(gòu)體。但也可以使用溶鞘脂(包括溶硫苷脂和鞘氨醇半乳糖苷)、硫酸半乳糖基鞘氨醇(solfogalactosylsphingosine)、鞘氨醇(sphinganine)(2-氨基1，3十八烷二醇)和鞘磷脂。
可以使用磷脂?；被?醇和磷脂?；嘣甲逯械牧字Ａ字；被?醇組特別包括磷脂酰基乙醇胺(或磷脂?；懓?、磷脂酰基膽堿、磷脂酰絲氨酸、N-?；字；掖及贰Ａ字；嘣冀M包括磷脂?；憠A肌醇(phosphatidylcholinositol)、二磷酸肌醇磷脂、溶二磷酸肌醇磷脂、磷脂?；视秃托闹|(zhì)(cardiolipid)。
也更特別注意到使用的PKC抑制化合物可包括神經(jīng)酰胺，特別是表皮和神經(jīng)酰胺前體的角化細(xì)胞間接合的神經(jīng)酰胺，即鞘氨醇和植物鞘氨醇。
一般情況下，神經(jīng)酰胺可以采用化學(xué)方式合成(它們通常稱為擬神經(jīng)酰胺)，或它們可以為動(dòng)物來源(在哺乳動(dòng)物畸胎(encephalus)和脊髓中存在相對(duì)高濃度的鞘脂)或植物來源(即腦苷脂和另一種糖基化鞘脂(sphongolipids))或酵母衍生物(立體化學(xué)構(gòu)型相同于人皮膚中自然存在的神經(jīng)酰胺)。
表皮角化細(xì)胞間接合的神經(jīng)酰胺可以由常規(guī)方法(薄層色譜)分離成六個(gè)相應(yīng)于如下化合物的級(jí)分該化合物由涉及的脂肪酸本質(zhì)和堿本質(zhì)而不同(不飽和的鞘氨醇，或飽和的植物鞘氨醇)。下表1說明根據(jù)Werts和Downing分類，這些級(jí)分中的相應(yīng)結(jié)構(gòu)。級(jí)分6自身可以由更精細(xì)的方法細(xì)分成兩個(gè)實(shí)體，神經(jīng)酰胺6a和6b。
表1表皮中神經(jīng)酰胺的六個(gè)級(jí)分 因此，最小極性的神經(jīng)酰胺1包括在神經(jīng)酰胺6a中重復(fù)的非常特異結(jié)構(gòu)Ω-羥基酸其具有酰胺化堿的長鏈，在它的Ω端由酯鍵連接到另一個(gè)脂肪酸(0-?；窠?jīng)酰胺)。在級(jí)分1的情況下，鍵合到鞘氨醇的脂肪酸基本在C24、C26、C30、C32和C34中并且它們可以是飽和的，單烯屬(主要對(duì)于C30、C32和C34)或二烯屬(C32和特別是C34)的。脂肪酸連接到先前項(xiàng)的Ω端，它主要是用于神經(jīng)酰胺1的亞油酸，表皮混合屏蔽功能的必要作用是公知的。
具有更傳統(tǒng)結(jié)構(gòu)(由酰胺鍵鍵合到脂肪酸，主要C20-C28的鞘氨醇或二氫鞘氨醇)的級(jí)分2是最通常的。
級(jí)分3是相當(dāng)相似的，僅有的差異應(yīng)用于堿(base)的本質(zhì)，它在此情況下基本由飽和植物鞘氨醇表示。
級(jí)分4和5的特征基本為鍵合到鞘氨醇的α-羥基酸的存在。
級(jí)分6b相似于級(jí)分4和5，包括α羥基酸，但鍵合到飽和植物鞘氨醇上。
級(jí)分6a，如神經(jīng)酰胺1，包括僅位于表皮中神經(jīng)酰胺中的特性模式，換言之即在鍵合到鞘氨醇的脂肪酸Ω羥基，和在此情況下是α-羥基酸而不是亞油酸的端脂肪酸的羧基之間的酯鍵。
也注意到植物神經(jīng)酰胺(基于植物鞘氨醇(phytosphingosin)的神經(jīng)酰胺)，合成膽固醇-神經(jīng)酰胺，半乳糖腦苷脂或葡糖腦苷脂。
最后，可以根據(jù)本發(fā)明使用的PKC抑制化合物包括鞘氨醇，該鞘氨醇以自然狀態(tài)存在于皮膚中，并且也在角質(zhì)層的屏蔽功能中起重要作用，作為鞘脂的前體(神經(jīng)酰胺和鞘糖脂類)。它可以衍生自生物來源如牛腦提取物或由合成方法從絲氨酸開始衍生，例如在如下文章中所述Newman，J.Am.CHEM.，95(12)4098(1973)。更特別地，注意到鞘氨醇的異構(gòu)體形式，D-紅，L-蘇，L-紅和D-蘇。D-紅形式是自然界中最通常存在的形式。
根據(jù)本發(fā)明，可以使用的PKC抑制劑化合物包括上述PKC抑制化合物的異構(gòu)體、衍生物(鹽，配合物等)、類似物、同系物、前體和代謝產(chǎn)物。
可以與噁唑啉關(guān)聯(lián)在本發(fā)明中使用的抗炎劑是非類固醇抗炎藥(NSAID)。
可以與噁唑啉結(jié)合在本發(fā)明中使用的安撫劑有利地是甘草衍生物和α-沒藥醇的衍生物。
可以與噁唑啉關(guān)聯(lián)在本發(fā)明中使用的免疫抑制劑有利地是他克莫司(tacrolimus)、吡美莫司(pimecrolimus)、和環(huán)孢霉素A。
可以與噁唑啉關(guān)聯(lián)在本發(fā)明中使用的離子螯合劑有利地是有利地選自如下的化學(xué)螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)和鈉鹽、鉀鹽、鈣二鈉鹽、二銨鹽、三乙醇胺(TEA-EDTA)、羥乙基乙二胺四乙酸(HEDTA)和它的三鈉鹽、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)和它們的混合物。離子螯合劑也可以有利地是選自如下的生物螯合劑金屬硫蛋白、運(yùn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、鈣調(diào)蛋白(calmoduline)、脫乙酰殼多糖(chitosane)亞甲基膦酸酯和它們的混合物。
螯合的離子有利地是Na+、K+、Ca2+、Cl-、Ni2+、Co+、Co2+、Zr2+、Zr4+離子，還包括在氧化水平II和III下的鉻離子如Cr2+、Cr3+和Cr2O72-。
可以與鏈烷醇酰胺關(guān)聯(lián)在本發(fā)明中使用的噁唑啉有利地是滿足以下通式的噁唑啉 類型1 類型2 類型3其中R1表示線性或支化，飽和或不飽和的C1-C40烴基，并可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)選自羥基(OH)和C1-C6烷氧基(OC1-C6)的取代基，和R2，R3，R4，和R5獨(dú)立地表示氫原子、羥基、或線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)選自如下的取代基的C1-C30烴基羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語“C1-C6烷氧基(OC1-C6)”表示其中烷基包括1-6個(gè)碳原子的烷氧基。
有利地根據(jù)本發(fā)明，所述噁唑啉是選自如下的類型1噁唑啉2-十一烷基-4-羥甲基-4-甲基-1，3-噁唑啉、2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉、(E)-4，4-二甲基-2-十七碳-8-烯基-1，3-噁唑啉、4-羥甲基-4-甲基-2-十七烷基-1，3-噁唑啉、(E)-4-羥甲基-1-4-甲基-2-十七碳-8-烯基-1，3-噁唑啉、和2-十一烷基-4-乙基-4-羥甲基-1，3-噁唑啉。優(yōu)選，該噁唑啉是稱為OX-100的2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉，它的結(jié)構(gòu)式是 可以與鏈烷醇酰胺關(guān)聯(lián)在本發(fā)明中使用的氨基甲酸衍生物有利地是滿足如下通式的氨基甲酸衍生物 其中R1表示線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；R2和R’2獨(dú)立地表示氫原子或線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；R3和R’3獨(dú)立地表示氫原子或線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；R4和R5獨(dú)立地表示氫原子或RxCO類型的?；渲蠷x是線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，R1表示氫原子。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，R2表示C8-C22，有利地C9-C18，甚至更有利地C9-C13，和甚至更有利地C11-C13的飽和線性烴基和/或R’2表示氫原子。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，R3和R’3表示氫原子。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，R4和R5表示氫原子。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，R1表示氫原子，R2表示C8-C22，有利地C9-C18，甚至更有利地C9-C13，和甚至更有利地C11-C13的飽和線性烴基，和R’2，R3，R’3，R4和R5表示氫原子。
有利地，氨基甲酸的衍生物選自(1-羥甲基-十三烷基)-氨基甲酸和(1-羥甲基-十一烷基)-氨基甲酸。
(1-羥甲基-十三烷基)-氨基甲酸可以由如下結(jié)構(gòu)式表示 可以與鏈烷醇酰胺關(guān)聯(lián)在本發(fā)明中使用的噁唑烷酮有利地是滿足如下通式的噁唑烷酮 其中R1表示氫原子或線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；R2和R’2獨(dú)立地表示氫原子或線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；R3和R’3獨(dú)立地表示氫原子或線性或支化，飽和或不飽和，可能包括一個(gè)或幾個(gè)烯屬和/或炔屬不飽和，和一個(gè)或幾個(gè)羥基取代基(OH)的C1-C30烴基；根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，R1表示氫原子。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，R2表示C8-C22，有利地C9-C18，甚至更有利地C9-C12，和甚至更有利地C10-C11的飽和線性烴基和/或R’2表示氫原子。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，R3和R’3表示氫原子。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，R1表示氫原子，R2表示C8-C22，有利地C9-C18，甚至更有利地C9-C12，和甚至更有利地C10-C11的飽和線性烴基，和R’2，R3和R’3表示氫原子。
有利地，噁唑烷酮選自4-十二烷基-噁唑烷-2-酮、3，4-雙十二烷基-噁唑烷-2-酮和4，5-雙十二烷基-噁唑烷-2-酮。
4-十二烷基-噁唑烷-2-酮可以由如下結(jié)構(gòu)式表示 3，4-雙十二烷基-噁唑烷-2-酮可以由如下結(jié)構(gòu)式表示
4，5-雙十二烷基-噁唑烷-2-酮可以由如下結(jié)構(gòu)式表示 噁唑啉，噁唑烷酮和氨基甲酸衍生物是抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的化合物。
根據(jù)本發(fā)明的組合物的特征在于與組合物的總重量相比，鏈烷醇酰胺的濃度有利地在約0.001wt％-約10wt％之間，和更特別在約0.01wt％-約3wt％之間。
根據(jù)本發(fā)明的組合物有利地是美容品或藥物組合物，和特別地皮膚病學(xué)組合物?？梢圆捎眠m于局部給藥、口服給藥或直腸給藥、或適于胃腸外給藥的不同制劑配制根據(jù)本發(fā)明的組合物。優(yōu)選，不同的制劑適于局部給藥并包括乳膏、香膏劑(pomades)、洗劑、油、藥膏(patches)、噴霧劑和用于外部施涂的任何產(chǎn)品?？梢愿鶕?jù)適于患者，通常用于美容品或藥物治療，優(yōu)選皮膚病學(xué)制劑的標(biāo)準(zhǔn)，例如，患者的年齡或體重，他一般病況的嚴(yán)重性，他對(duì)治療的耐受性，觀察到的副作用，皮膚類型，確定本發(fā)明化合物和組合物的給藥模式，劑量學(xué)和最優(yōu)蓋倫形式。根據(jù)要求的給藥類型，根據(jù)本發(fā)明的組合物和/或活性化合物也可包括至少一種美容品用或藥用賦形劑，特別是皮膚病學(xué)用賦形劑。優(yōu)選選擇適于由外部局部方法給藥的賦形劑。根據(jù)本發(fā)明的組合物也可包括至少一種本領(lǐng)域技術(shù)人員在美容上或制藥上已知的添加劑，該添加劑選自增稠劑、防腐劑、香料、著色劑、化學(xué)或礦物質(zhì)過濾劑、增潤劑、礦質(zhì)水等。
本發(fā)明也涉及上述組合物作為藥物的用途。
本發(fā)明也涉及至少一種選自以上定義的鏈烷醇酰胺的活性化合物或根據(jù)本發(fā)明的組合物用于藥物制備的用途，該藥物設(shè)計(jì)用于抑制樹狀細(xì)胞、真皮樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、肥大細(xì)胞和上皮細(xì)胞的遷移。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施方案，藥物可用于抑制朗格漢斯細(xì)胞的遷移。
有利地，該藥物計(jì)劃用于皮膚和/或粘膜，特別是口、肺、囊、直腸和鞘變應(yīng)性和/或炎性和/或刺激性反應(yīng)或病理學(xué)的治療或預(yù)防。
有利地根據(jù)本發(fā)明，藥物計(jì)劃用于在由危險(xiǎn)信號(hào)誘導(dǎo)的細(xì)胞如朗格漢斯細(xì)胞遷移之后，皮膚和/或粘膜的反應(yīng)或病理學(xué)的治療和/或預(yù)防。對(duì)于本發(fā)明的目的，“危險(xiǎn)信號(hào)”表示特別導(dǎo)致產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的任何信號(hào)或任何真實(shí)免疫信號(hào)如變應(yīng)原的滲透。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，藥物計(jì)劃用于由化學(xué)或金屬半抗原誘導(dǎo)的反應(yīng)或病理學(xué)的治療和/或預(yù)防。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，藥物計(jì)劃用于敏感性和/或反應(yīng)性和/或不舒服和/或不耐受皮膚和/或粘膜，和/或顯示屏蔽障礙和/或顯示與內(nèi)在老化、外在老化(太陽，污染)或激素老化有關(guān)的免疫不平衡的皮膚和/或粘膜的治療或預(yù)防。
已經(jīng)顯示皮膚的老化引起皮膚免疫性狀態(tài)的改變和由于不受控的遷移可以改變免疫細(xì)胞的起始位置。
根據(jù)本發(fā)明的組合物，和根據(jù)本發(fā)明的活性化合物，可降低由LC遷移誘導(dǎo)的免疫響應(yīng)，該LC在表面上固定IgE。這是為什么本發(fā)明也涉及根據(jù)本發(fā)明的組合物和計(jì)劃用于抑制朗格漢斯細(xì)胞的遷移的組合物，或至少一種選自上述噁唑啉組的活性化合物用于特應(yīng)性濕疹治療或預(yù)防的用途。根據(jù)本發(fā)明的組合物，和根據(jù)本發(fā)明的活性化合物，也計(jì)劃用于復(fù)合濕疹的治療或預(yù)防，條件是它們可降低特別由抗原捕獲誘導(dǎo)的免疫響應(yīng)，由LC對(duì)T淋巴細(xì)胞的此抗原的治療和呈遞。
根據(jù)本發(fā)明的組合物，和根據(jù)本發(fā)明的活性化合物，也用于炎性病理學(xué)，特別是炎性皮炎如牛皮癬、刺激性皮炎、自身免疫疾病的治療和/或預(yù)防，光免疫抑制或移植排異的預(yù)防?！肮饷庖咭种啤睂?duì)于本發(fā)明的目的表示由太陽光紫外線和特別由B紫外線誘導(dǎo)的免疫響應(yīng)的減少。
本發(fā)明的組合物以及本發(fā)明的活性化合物也用于降低組合物的致敏和/或刺激性本質(zhì)，該組合物可以是藥物制劑或美容制劑或香料。術(shù)語“變應(yīng)原本質(zhì)”表示包含在該制劑中的一些化合物表現(xiàn)象變應(yīng)原的能力，換言之這些化合物能夠誘導(dǎo)直接和/或炎性過度敏感性反應(yīng)。
在選自以上定義的鏈烷醇酰胺組的活性化合物的上述各種用途中，活性化合物可以與至少一種選自如下的朗格漢斯細(xì)胞遷移抑制劑關(guān)聯(lián)使用以上定義的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑、PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑烷酮、氨基甲酸衍生物和噁唑啉。
根據(jù)本發(fā)明的組合物和活性化合物有利地計(jì)劃用于美容術(shù)。本發(fā)明也涉及一種選自如下的皮膚和/或粘膜的美容治療方法敏感性、刺激的，不耐受皮膚和/或粘膜或易變應(yīng)性皮膚和/或粘膜，或老化皮膚和/或粘膜，或向其施加危險(xiǎn)信號(hào)，顯示皮膚屏蔽障礙，具有皮疹或顯示與內(nèi)在老化、外在老化或激素老化有關(guān)的非病理學(xué)免疫不平衡，其特征在于它由如下操作組成向皮膚和/或粘膜上施加根據(jù)本發(fā)明的組合物或至少一種選自以上定義的鏈烷醇酰胺組的活性化合物。在上述定義的鏈烷醇酰胺組中選擇的活性化合物也可以與至少一種選自如下的其它化合物關(guān)聯(lián)施加先前定義的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑、PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑烷酮、氨基甲酸衍生物和噁唑啉。在根據(jù)本發(fā)明的美容治療方法中，非病理學(xué)免疫不平衡是皮膚免疫性功能的暫時(shí)或永久不平衡而不是嚴(yán)重的。
采用以下給出的實(shí)施例在公開內(nèi)容的剩余部分給出本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)。這些實(shí)施例參考以下給出的附圖。這些附圖和實(shí)施例計(jì)劃用于說明本發(fā)明和決不可以解釋為能夠限制它的范圍。


圖1剛從人體皮膚分離并由DNSB活化的朗格漢斯細(xì)胞的遷移指數(shù)。鏈烷醇酰胺分子AK100在遷移現(xiàn)象中的效果。(1)對(duì)照細(xì)胞，(2)由DNSB半抗原致敏的細(xì)胞，(3)由DNSB半抗原+AK100(1μM)致敏的細(xì)胞。
圖2在由半抗原的活化之后，從臍帶血衍生的樹狀細(xì)胞的遷移百分比(％)。鏈烷醇酰胺分子AK100在遷移現(xiàn)象中的效果。(1)由半抗原BB致敏的細(xì)胞，(2)由BB半抗原+AK100(1μM)致敏的細(xì)胞。
實(shí)施例實(shí)施例1根據(jù)本發(fā)明的組合物實(shí)例wt％水 QSP100氫化聚癸烯 5～8甘油4～17碳酸二辛酯 4～9十二烷基葡糖苷 1～4.5聚甘油基-2二聚羥基硬脂酸酯(dipolyhydroystereate)2～5羽扇豆的肽提取物(水解的蛋白質(zhì)) 0.1～3丙烯酸酯/共聚物丙烯酸C10-30烷基酯 0.4羥甲基甘氨酸鈉 0.4黃原膠(xanthane gum)0.3鏈烷醇酰胺AK100 0.01～0.8氫氧化鈉0.07檸檬酸 0.03實(shí)施例2AK100活性對(duì)剛從人體皮膚碎片分離的LC遷移抑制的研究設(shè)備和方法獲得朗格漢斯細(xì)胞由從整形外科取得的正常人體皮膚碎片的酶處理(在+4℃下0.05％胰蛋白酶(trypsine)處理18h)獲得表皮細(xì)胞懸浮液。獲得的懸浮液包含平均2-4％的LC。獲得包含平均70％LC的懸浮液是基于密度梯度的離心原理(LymphoprepTM)和角質(zhì)形成細(xì)胞的消除。
培養(yǎng)基的制備用于整個(gè)研究的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是PRMI1640(Gibco BRL，法國)。將由Pharmascience提供的，在DMSO(二甲亞砜)溶液中濃度為10-2M的AK100分子在RPMI-1640中稀釋并在1μM下測試。
LC的致敏致敏劑是DNSB(Sigma Aldrich)，在RPMI-BSA中增溶并在50μM濃度下使用的DNCB(二硝基-氯-苯)的溶解形式。
LC的遷移使用具有兩個(gè)隔室的培養(yǎng)腔系統(tǒng)(Falcon，Becton Dickinson，法國)。上隔室由具有8μm孔隙率的隔膜與下隔室分離，在該隔膜上沉積50μg/cm2基質(zhì)膠(matrigel)。然后由形成等同于基底膜(昆布氨酸、IV膠原、巢蛋白、觸覺蛋白、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)的膜的蛋白質(zhì)覆蓋隔膜。在上隔室中沉積單獨(dú)的或在不同產(chǎn)物存在下的包括在RPMI-BSA培養(yǎng)基中的細(xì)胞。在下隔室中加入正常人體成纖維細(xì)胞的上清液培養(yǎng)物。在37℃下孵育18h之后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)通過基質(zhì)膠和位于下隔室中的活細(xì)胞數(shù)目(容易由它們的樹狀形式識(shí)別LC)。每個(gè)測試進(jìn)行三次。
結(jié)果下表2顯示由圖1中的矩形圖說明的結(jié)果。
表2LC遷移指數(shù)

表2和圖1中矩形圖的圖例1對(duì)照細(xì)胞2由DNSB半抗原致敏的細(xì)胞3DNSB+AK100(1μM)LC的遷移結(jié)果表示在DNSB+/-AK100存在下遷移的細(xì)胞數(shù)目和在正常條件下(未致敏的和未處理的對(duì)照細(xì)胞)遷移的細(xì)胞數(shù)目的比例。剛從表皮分離的LC不具有高遷移能力。在結(jié)果的表達(dá)中，對(duì)照LC(未處理和未致敏的)的遷移能力任意設(shè)定等于1。
與正常未刺激的細(xì)胞(對(duì)照細(xì)胞)相比，采用DNSB半抗原的細(xì)胞處理顯著刺激LC的遷移(+155％)。
在1μM濃度下的AK100顯著抑制由DNSB誘導(dǎo)的LC遷移。這樣處理的細(xì)胞具有可比于未致敏對(duì)照細(xì)胞遷移指數(shù)的遷移指數(shù)。
發(fā)明人已經(jīng)闡述，相當(dāng)令人驚奇的是，當(dāng)在具有兩個(gè)隔室的培養(yǎng)腔系統(tǒng)中使用剛分離的LC時(shí)，AK100顯著抑制LC的遷移(使得能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞遷移)。在由本發(fā)明使用的試驗(yàn)條件下，由AK100處理的細(xì)胞具有可比于未致敏對(duì)照細(xì)胞的遷移指數(shù)。
實(shí)施例3AK100活性對(duì)從衍生自臍帶血的CD34+前體體外產(chǎn)生的樹狀細(xì)胞遷移抑制的研究設(shè)備和方法體外朗格漢斯類產(chǎn)生從健康供給者的臍帶血由在Ficoll上的離心獲得單核細(xì)胞。然后由免疫選擇使用特異性抗體和磁球(Miltenyi Biotech，德國)精制CD34+細(xì)胞。在GM-CSF(100ng/ml)，TNF-α(2.5ng/ml)存在下，在向其中加入10％牛胎血清的RPMI中培養(yǎng)CD34+細(xì)胞5天。在培養(yǎng)的第5天加入TGF-β1，促使細(xì)胞對(duì)朗格漢斯細(xì)胞方法的區(qū)分的因素。
培養(yǎng)基的制備同以上的實(shí)施例2LC的致敏將細(xì)胞由半抗原BB在第7天處理(Brandowski堿(Brandowskibase)，1.17μg/ml)處理24h，然后進(jìn)行遷移測試。
LC的遷移同以上的實(shí)施例2結(jié)果兩個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果在下表3中給出并由圖2中的矩形圖說明。
表3遷移的體外產(chǎn)生的樹狀細(xì)胞的百分比

表3和圖2中矩形圖的圖例1由半抗原BB致敏的細(xì)胞2BB+AK100(1μM)LC的遷移結(jié)果表示在不同測試產(chǎn)物存在下遷移的細(xì)胞百分比。通過取在遷移腔下隔室中回收的細(xì)胞數(shù)目，對(duì)進(jìn)行遷移的細(xì)胞數(shù)目的比例計(jì)算百分比。AK100分別在實(shí)驗(yàn)1和2中抑制樹狀細(xì)胞的遷移51和25％。
在1μM的濃度下，AK100顯著抑制體外產(chǎn)生和由半抗原BB活化的樹狀細(xì)胞的遷移。
實(shí)施例4單獨(dú)或與LU105關(guān)聯(lián)，鏈烷醇酰胺AK100活性對(duì)鼠中樹狀細(xì)胞遷移抑制的研究設(shè)備和方法試劑在丙酮混合物(鄰苯二甲酸二丁酯(1∶1))中即時(shí)稀釋FITC(異硫氰酸熒光素(fluoresciene)，Sigma，St Louis，MO)。
抑制劑鏈烷醇酰胺AK100和LU105(LU105是MMP抑制劑，相應(yīng)于由Expanscience Company以商品名Actimp(193)銷售的白羽扇豆的肽提取物)由“Laboratoires Expanscience”提供并且在與局部施用相容的惰性載體(鏈烷醇酰胺AK100(0.1％)±LU105(2％))中單獨(dú)或與彼此關(guān)聯(lián)配制。在鼠的耳朵上施加不同的配制劑每天兩次連續(xù)4天。在最后的施加之后三小時(shí)，在兩個(gè)耳朵(一個(gè)處理的和另一個(gè)未處理的(對(duì)照))上施加1.5％的FITC。
鼠中朗格漢斯細(xì)胞(LC)和樹狀細(xì)胞(DC)的遷移在鼠中在體內(nèi)評(píng)價(jià)兩種分子的效果。在兩個(gè)耳朵的皮膚上施加1.5％的FITC(2×5μl)。24h以后，處死鼠和從耳神經(jīng)節(jié)和頸神經(jīng)節(jié)(排液(draining)神經(jīng)節(jié)，以下稱為GL)或從腘(poplital)神經(jīng)節(jié)(非排液神經(jīng)節(jié)，負(fù)面對(duì)照)制備細(xì)胞懸浮液。切割組織并將細(xì)胞由過濾(100μm過濾器，F(xiàn)alcon，Becton Dickinson)分離和然后洗滌。然后將細(xì)胞在600×g(m×s-2)下在三碘苯甲酰氨基葡萄糖梯度(在RPMI1640中的14.5％，7.5％SVF)上離心10分鐘。將界面細(xì)胞收回，清洗和然后采用抗-CDS86 PE-共軛的，biot-MHC CLII mAbs AC加鏈霉抗生物素蛋白-Cya(PharMingen)標(biāo)記并由通量細(xì)胞計(jì)量術(shù)分析。僅計(jì)數(shù)FITC+，PE+和Cya+，這是由于它們表示在半抗原施加之后從皮膚遷移到GL的細(xì)胞種群。
結(jié)果載體單獨(dú)的局部施加并不引起LG中FITC+DC數(shù)目的任何改變。因此載體對(duì)DC的遷移能力不具有任何影響。
下表4顯示DC遷移的結(jié)果。
表4

以鏈烷醇酰胺AK100的0.1％含量和LU105的2％含量抑制相似比例的在施加FITC半抗原之后在LG的DC遷移，沒有顯著的差異。
當(dāng)關(guān)聯(lián)兩種類型分子時(shí)，此抑制幾乎是完全的。結(jié)果，相當(dāng)令人驚奇地展示如果使用由FITC半抗原致敏的鼠模型，鏈烷醇酰胺AK100顯著抑制DC到LG的遷移。此外，鏈烷醇酰胺AK100和LU105協(xié)同作用以抑制致敏鼠中DC的遷移。
實(shí)施例5單獨(dú)或與OK100關(guān)聯(lián)，噁唑啉OX100活性對(duì)鼠中樹狀細(xì)胞遷移抑制的研究設(shè)備和方法試劑在丙酮和鄰苯二甲酸二丁酯(1∶1)的混合物中即時(shí)稀釋FITC(異硫氰酸熒光素，Sigma，St Louis，MO)。
抑制劑鏈烷醇酰胺AK100和OX100(如上所述)由“LaboratoiresExpanscience”提供并單獨(dú)配制或在與局部施用相容的惰性載體中彼此關(guān)聯(lián)配制[AK100(0.05％)±OX100(0.05％)]。在鼠的耳朵上施加不同的配制劑每天兩次連續(xù)4天。在最后的施加之后三小時(shí)，在兩個(gè)耳朵(一個(gè)處理的和另一個(gè)未處理的(對(duì)照))上施加1.5％的FITC。
鼠中朗格漢斯細(xì)胞(LC)和樹狀細(xì)胞(DC)的遷移在鼠中在體內(nèi)評(píng)價(jià)兩種分子的效果。在兩個(gè)耳朵的皮膚上施加1.5％的FITC(2×5μl)。24h以后，處死鼠和從耳神經(jīng)節(jié)和頸神經(jīng)節(jié)(排液神經(jīng)節(jié)，以下稱為GL)或從腘神經(jīng)節(jié)(非排液神經(jīng)節(jié)，負(fù)面對(duì)照)制備細(xì)胞懸浮液。切割組織并將細(xì)胞由過濾(100μm過濾器，F(xiàn)alcon，BectonDickinson)分離和然后洗滌。然后將細(xì)胞在600×g(m×s-2)下在三碘苯甲酰氨基葡萄糖梯度(在RPMI1640中的14.5％，7.5％SVF)上離心10分鐘。將界面細(xì)胞收回，清洗和然后采用抗-CDS86 PE-共軛的，biot-MHCCLII mAbs AC加鏈霉抗生物素蛋白-Cya(PharMingen)標(biāo)記并由通量細(xì)胞計(jì)量術(shù)分析。僅計(jì)數(shù)FITC+，PE+和Cya+，這是由于它們表示在半抗原施加之后從皮膚遷移到GL的細(xì)胞種群。
結(jié)果載體單獨(dú)的局部施加并不引起LG中FITC+DC數(shù)目的任何改變。因此載體對(duì)DC的遷移能力不具有任何效果。
下表5顯示DC遷移的結(jié)果。
表5

用噁唑啉AK100的0.05％含量和OX100的0.05％含量抑制相似比例的在施加FITC半抗原之后在LG的DC遷移，沒有顯著的差異。
當(dāng)關(guān)聯(lián)兩種類型分子時(shí)，此抑制更顯著。結(jié)果是，相當(dāng)令人驚奇地展示如果使用由FITC半抗原致敏的鼠模型，鏈烷醇酰胺AK100顯著抑制DC到LG的遷移。此外，鏈烷醇酰胺AK100和OX100協(xié)同作用以抑制致敏鼠中DC的遷移。
實(shí)施例6包括鏈烷醇酰胺AK100的美容品日用乳膏對(duì)于高度過敏、刺激的皮膚或變應(yīng)性皮膚的效果評(píng)價(jià)與皮膚病學(xué)家合作，在人志愿者上測試包括如下物質(zhì)的美容品日用乳膏0.1wt％的AK100和2wt％白羽扇豆肽提取物，LU105，作為乳膏總重量的函數(shù)。
主要目的是在產(chǎn)品正常使用中評(píng)價(jià)該日用乳膏的臨床效力和美容可接受性。
將測試產(chǎn)品提供給具有必須公共信息的開業(yè)醫(yī)生，皮膚病學(xué)家向他的患者提供產(chǎn)品，規(guī)定足夠的每日施加方法，即每天至少施加2次。早晚在清潔和干燥皮膚上將產(chǎn)品施加到臉上。
對(duì)每個(gè)志愿者的研究總持續(xù)時(shí)間是4周，及在此4周施加時(shí)間之前和之后記錄兩次觀察結(jié)果。
在最后的訪問期間非指導(dǎo)性地詢問志愿者不希望的局部效果的可能發(fā)生。
根據(jù)對(duì)37位婦女描述的方案進(jìn)行測試。
在從0到9變化的等級(jí)上評(píng)價(jià)結(jié)果。0的標(biāo)記相應(yīng)于在治療之前和之后皮膚的零變化，從1到3變化的標(biāo)記相應(yīng)于在治療之前和之后皮膚的輕微變化，從4到6變化的標(biāo)記相應(yīng)于在治療之前和之后皮膚的中等變化，和從7到9變化的標(biāo)記相應(yīng)于在治療之前和之后皮膚的大變化。
下表6-8包含結(jié)果。
表6具有敏感性和/或刺激性皮膚的女性的皮膚病學(xué)臨床評(píng)價(jià)

表7敏感性皮膚女性的皮膚臨床評(píng)價(jià)

表8刺激性皮膚女性的皮膚臨床評(píng)價(jià)

這些各種結(jié)果顯示該日用乳膏顯著改進(jìn)高度敏感，刺激皮膚和易變應(yīng)性皮膚的狀況。通過志愿者，這些數(shù)據(jù)得以確認(rèn)，95％的志愿者對(duì)乳膏感到滿意，認(rèn)為該乳膏能夠即可給出舒適感(100％)、減弱了污染和氣候侵襲帶來的反應(yīng)(62％)、減輕了刺激(88％)、保護(hù)和使皮膚光滑(80％)、提高了耐受力閾值(76％)。
因此沒有香料和著色劑配制的該乳膏，有效增潤表皮的上層和提供對(duì)高度敏感，刺激皮膚和易變應(yīng)性皮膚的適當(dāng)響應(yīng)。
最后，因此相當(dāng)令人驚奇地展示與LU105關(guān)聯(lián)的AK100抑制幾乎所有的DC向LG的遷移。此外，AK100和LU100協(xié)同作用以抑制致敏鼠中DC的遷移。
因此相當(dāng)令人驚奇地展示引入美容品乳膏的相同比例AK100和LU105使得能夠?qū)崿F(xiàn)表皮上層的有效增潤和提供對(duì)高度敏感，刺激皮膚或易變應(yīng)性皮膚的適當(dāng)解決方案。
權(quán)利要求
1.組合物，其包括至少一種選自鏈烷醇酰胺的活性化合物以抑制朗格漢斯細(xì)胞的遷移。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述鏈烷醇酰胺滿足下列通式 其中，R1表示C1-C40烴基，其包括0到6個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)；R’和R”獨(dú)立地表示氫原子、甲基、羥基、C2-C20烴基，其包括0到6個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)和C1-C6烷氧基(OC1-C6)，條件是如果R’為羥基，則R”表示氫或C1-C6烴基，其包括0到3個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)；R2表示氫原子、甲基、C2-C20烴基，其包括0到6個(gè)不飽和鍵并可能包括至少一個(gè)取代基，該取代基選自羥基(OH)、C1-C6烷氧基(OC1-C6)和C1-C6羰基烷氧基(COOC1-C6)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于R1表示C2-C40的飽和線性烴基，優(yōu)選C6-C22，進(jìn)一步更優(yōu)選C8-C18，更進(jìn)一步優(yōu)選C10-C16；和/或R’和R”獨(dú)立地表示氫原子、甲基或C2-C20的飽和線性烴基；和/或R2表示氫原子、甲基或C2-C20飽和線性烴基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于所述鏈烷醇酰胺稱為AK100，其具有以下分子式
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一項(xiàng)的組合物，其特征在于它也包括至少一種有利地選自如下的金屬蛋白酶抑制劑金屬蛋白酶的組織抑制劑、α-2-巨球蛋白、纖溶酶原激活物抑制劑、鋅螯合劑、苔蘚抑素-1、抗生素、結(jié)構(gòu)相似于MMP底物結(jié)構(gòu)的合成或天然肽、視黃醛衍生物、抗氧劑、抗癌劑、麥芽水解產(chǎn)物、海藻提取物、鯊魚軟骨提取物和羽扇豆的肽提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其特征在于該MMP抑制劑選自羽扇豆的肽提取物，優(yōu)選提取物B(LU105)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其特征在于該MMP抑制劑選自視黃醛衍生物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)的組合物，其特征在于它也包括至少一種選自如下的化合物PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、鏈烷醇酰胺、噁唑烷酮和氨基甲酸衍生物。
9.根據(jù)以上權(quán)利要求任意一項(xiàng)的組合物，其特征在于與所述組合物的總重量相比較，鏈烷醇酰胺的濃度在大約0.001wt％-大約10wt％之間。
10.根據(jù)以上權(quán)利要求任意一項(xiàng)的組合物作為藥物的用途。
11.至少一種權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)中定義的鏈烷醇酰胺或根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)的組合物用于制備藥物的用途，該藥物可用于抑制如下細(xì)胞的遷移樹狀細(xì)胞、真皮樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、肥大細(xì)胞和上皮細(xì)胞。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于所述藥物可用于抑制朗格漢斯細(xì)胞的遷移。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于所述藥物可用于皮膚和/或粘膜的變應(yīng)性反應(yīng)和/或炎性反應(yīng)和/或刺激性反應(yīng)的治療或預(yù)防。
14.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于在由危險(xiǎn)信號(hào)誘導(dǎo)的朗格漢斯細(xì)胞遷移之后，所述藥物可用于皮膚和/或粘膜的反應(yīng)或病理學(xué)的治療或預(yù)防。
15.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于所述藥物可用于由化學(xué)或金屬半抗原誘導(dǎo)的反應(yīng)或病理學(xué)的治療或預(yù)防。
16.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于所述藥物可用于敏感性和/或反應(yīng)性和/或不舒服和/或不耐受性皮膚和/或粘膜、顯示屏蔽故障和/或顯示與內(nèi)在老化、外在老化或激素老化有關(guān)的免疫不平衡的皮膚和/或粘膜的治療或預(yù)防。
17.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于所述藥物可用于特應(yīng)性濕疹和/或接觸性濕疹、炎性皮炎如牛皮癬、刺激性皮炎、自身免疫疾病、光免疫抑制或移植排異的治療或預(yù)防。
18.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其特征在于所述藥物可用于降低組合物或香料的致敏和/或刺激本質(zhì)。
19.一種治療敏感性、刺激的，不耐受或易變應(yīng)性皮膚和/或粘膜，或老化皮膚和/或粘膜的美容方法，向該皮膚和/或粘膜施加危險(xiǎn)信號(hào)，其顯示皮膚屏蔽障礙，具有皮疹或顯示與內(nèi)在老化、外在老化或激素老化有關(guān)的非病理學(xué)免疫不平衡，其特征在于該方法由如下操作組成向皮膚和/或粘膜施加根據(jù)權(quán)利要求1-9的組合物或至少一種選自權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)中定義的鏈烷醇酰胺的活性化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及至少含有鏈烷醇酰胺的組合物，其任選結(jié)合有至少一種化合物如金屬蛋白酶抑制劑、PKC抑制劑、抗炎劑、安撫劑、免疫抑制劑、離子螯合劑、噁唑啉、噁唑烷酮和氨基甲酸衍生物。本發(fā)明還涉及這類組合物作為藥物的用途，具體而言用于預(yù)防或治療變應(yīng)性和/或炎性和/或刺激性源或由于危險(xiǎn)信號(hào)的皮膚病理學(xué)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種敏感性、刺激的、不耐受、易變應(yīng)性、老化皮膚和/或粘膜的美容治療方法，該皮膚和/或粘膜顯示皮膚屏蔽障礙，或顯示非病理學(xué)免疫不平衡，該方法由如下操作組成向皮膚和/或粘膜施加這樣的組合物。
文檔編號(hào)A61P37/06GK1617703SQ02827683
公開日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2002年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月27日
發(fā)明者P·姆西卡, N·皮卡爾迪, A·皮奇里利 申請(qǐng)人:科學(xué)發(fā)展實(shí)驗(yàn)室