專利名稱：黃花蒿離析苦艾素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦艾素離析的方法，尤指藉由黃花蒿植物藥草所離析出的一種抗瘧疾藥劑，其中包括用乙醇提取藥草，將水和己烷間的提取物分開，接著藉由蒸發(fā)結(jié)晶化使苦艾素從己烷相到產(chǎn)生實(shí)質(zhì)上純的苦艾素。
背景技術(shù)：
苦艾素是一種倍半帖內(nèi)酯的過氧化物，其具有抗瘧疾的效能(KlaymanDL，1985，Science 228，1049)。根據(jù)臨床研究，苦艾素及其半合成衍生物例如青蒿甲醚，青蒿琥酯和青蒿乙醚已經(jīng)被使用于瘧疾的治療方面，其包含嚴(yán)重復(fù)雜、復(fù)合抗藥、及侵腦性的瘧疾。苦艾素及其衍生物在結(jié)構(gòu)上與一般抗瘧疾劑不同，因此沒有抗藥性和抗藥力移轉(zhuǎn)的問題。最近，已有報(bào)告指出可藉由化學(xué)合成產(chǎn)生苦艾素但其費(fèi)用昂貴。
古老的方法(Klayman DL，Lin AJ，Acton N，Scovill JP，Hoch JM，MilhousWK&Theoharides AD，1984，Jour of Natural Products 47715-717 and Rucker G，Mayer R&Manns D，1986，Planta Medica，3245)其中包含用以石油醚提取植物原材然后借著色層分析法相對(duì)地將天然提取物層析于硅膠凝體上。最后將7.5％的乙酸乙酯混合入氯仿中用以洗提該層析柱而得到純的苦艾素。
Later Singh A，Vishwakarma RA，Husain A，1988，Planta Medica 64，475-476提出用n-己烷提取植物的一部份然后藉由色層層析法將提取物層析于硅膠凝體上。在此例子中將乙腈與己烷混合用以進(jìn)行洗提步驟。這些制備方法的主要缺點(diǎn)是在該程序中必須依賴色層分析法相對(duì)地將天然提取物層析于硅膠凝體上。因此在這程序中需要溶質(zhì)與吸附劑的比率1∶44，所以費(fèi)用是昂貴的。
另一種提取苦艾素的方法其中包含用己烷提取植物原材，然后分開己烷與乙腈之間的提取物，接著藉由色層層析法將乙腈相層析于硅膠凝體上(EIFerali FS，EISohli HN，1990，US Patent No.4,952,603)。對(duì)于較長(zhǎng)的持續(xù)期間在己烷中慢速度提取乙腈需要熱過濾器，而當(dāng)進(jìn)行分開步驟時(shí)，乙腈相對(duì)地成為昂貴的溶劑，增加生產(chǎn)苦艾素的費(fèi)用。另一個(gè)缺點(diǎn)是該方法需要色層分析法來獲得苦艾素。再一個(gè)缺點(diǎn)是青蒿酸會(huì)成為主要的，使之傾向用苦艾素進(jìn)行洗提，因此影響苦艾素的純度。
Jain DC，Tandon S，Bhakuni RS，Siddique MS，Kahol AP，Sharma RP，Kumar S，Bhattacharya AK，1999，US Patent No.5,955,084提議一個(gè)方法是藉由植物黃花蒿同時(shí)生產(chǎn)苦艾素與香精油。在該方法里提取苦艾素的基本方法論包含用以己烷提取植物原材，然后分開己烷與乙腈之間的提取物，接著藉由色層分析法將乙腈相層析于硅膠凝體上。此外該方法提議藉由水蒸餾從殘留的榨渣提取香精油同時(shí)也描述一個(gè)青蒿酸的離析及其轉(zhuǎn)換成苦艾素的方法。整個(gè)過程是由數(shù)個(gè)化學(xué)反應(yīng)所復(fù)合混合的方法。然而某些問題依舊是沒有解決，例如該方法消耗時(shí)間及費(fèi)用昂貴，因?yàn)槭褂眉和樽鳛樘崛∪軇⒔逵缮珜臃治龇ǚ珠_己烷與乙腈之間的提取物。
Zhang J，F(xiàn)an D and MaX(1994)Patent No.CN 1092073 A，提出一個(gè)藉由黃花蒿提取苦艾素的方法，包含以乙醇溶液(＜70％濃度)過濾黃花蒿的葉子，然后在一個(gè)連續(xù)的提取裝置中藉由包含30％苯或乙酸乙酯的汽油提取過濾液。接著以活性碳將其漂白，最后使用乙醇濃縮及結(jié)晶苦艾素。在該方法中乙醇溶液體積大需要藉由包含30％苯或乙酸乙酯的汽油使乙醇分餾達(dá)到潔凈以利回收。因此導(dǎo)致在乙醇中大部分提取化合物的轉(zhuǎn)換水的混合轉(zhuǎn)換到汽油與苯的混合。濃縮汽油混合物后使用乙醇將苦艾素結(jié)晶化。在該方法中使用商業(yè)苯是不合適的因?yàn)榭赡苡卸镜挠绊?。該方法在轉(zhuǎn)換期間使用混合的溶劑所以之后不能再進(jìn)一步使用。
Wheatley GW and Chapman TB，2001，US Patent No.6,180,105揭露生產(chǎn)苦艾素的另一種方法其中包含使用液態(tài)二氧化碳提取黃花蒿的干藥草以及在結(jié)束后蒸發(fā)二氧化碳。該方法必須依靠液態(tài)二氧化碳裝置(非常昂貴的裝置)。
根據(jù)文獻(xiàn)US Patent No.5,995,084得知藉由植物黃花蒿同時(shí)生產(chǎn)苦艾素與香精油的方法。前述發(fā)明中，從苦艾素未被鹽基處理前青蒿酸是分開的。
根據(jù)文獻(xiàn)No.09/538,892其中描述一種農(nóng)業(yè)方法使植物黃花蒿的苦艾素達(dá)到最大產(chǎn)量。然而，該申請(qǐng)集中注意于植物栽種計(jì)劃表的農(nóng)業(yè)方法而不是苦艾素的提取。
以n-己烷石油醚為溶劑的提取方法會(huì)較花時(shí)間，而且還需要熱過濾。這些溶劑本身是危險(xiǎn)的。接著大部分的方法都使用色層分析法來獲得苦艾素，這是主要導(dǎo)致生產(chǎn)費(fèi)用提高的因素。
是以，由上可知，上述習(xí)知獲取苦艾素的方法，在實(shí)際使用上，顯然具有不便與缺失存在，而可待加以改善者。
因此，本發(fā)明人有感上述缺失之可改善，且依據(jù)多年來從事此方面的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，悉心觀察且研究，并配合學(xué)理之運(yùn)用，而提出一種設(shè)計(jì)合理且有效改善上述缺失的本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的，在于提供一種簡(jiǎn)單，迅速，經(jīng)濟(jì)效益及實(shí)用的方法于植物黃花蒿離析苦艾素而沒用色層分析計(jì)的方法，同時(shí)產(chǎn)生的苦艾素有實(shí)在的數(shù)量與純度消除習(xí)知技術(shù)的缺點(diǎn)。
為了達(dá)成上述之目的，本發(fā)明系對(duì)黃花蒿離析苦艾素提供一個(gè)方法，該方法包括(i)用非水極性溶劑提取黃花蒿的植物部份；(ii)濃縮步驟(i)的提取物恢復(fù)極性溶劑；(iii)加水至前述的濃縮提取物中；(iv)加碳?xì)浠衔锶軇┓珠_步驟(iii)的水提取物成為一個(gè)水溶液層與一個(gè)有機(jī)層；(v)從步驟(iv)溶液中分離有機(jī)層；(vi)濃縮步驟(v)的有機(jī)層使獲得多油液體；(vii)加乙酸乙酯至步驟(vi)的多油液體中；(viii)用以色彩吸收物質(zhì)使步驟(vii)的溶液移除微綠的色素；(ix)過濾該溶液移除色彩吸收物質(zhì)；及(x)蒸發(fā)該溶液之后接著藉由結(jié)晶化獲得純的苦艾素。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(i)中在提取時(shí)干葉子已被取得。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，在提取前葉子已成粉末的。
本發(fā)明還有另一個(gè)實(shí)施例，該非水的極性溶劑是由乙醇，甲醇，丙酮，異丁基甲烷及己烷所構(gòu)成的群組中所選出的。
本發(fā)明再有另一個(gè)實(shí)施例，非水溶劑是乙醇。
本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)實(shí)施例，植物部分與非水溶劑的比率范圍為1∶5到1∶10。
本發(fā)明更有一個(gè)實(shí)施例，用乙醇過濾藥草持續(xù)4～6小時(shí)對(duì)植物部分的提取是有效用的。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，溫度在20～50℃之間時(shí)將藥草過濾是有效用的。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(ii)中乙醇提取物的體積比原先的體積減少從1/20th到1/100th。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(ii)中于步驟(i)中溶劑的濃度重復(fù)使用后溶劑被恢復(fù)。
本發(fā)明還有另一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(iii)中加了四次數(shù)量的水至濃縮提取物中。
本發(fā)明還有另一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(iv)中該碳?xì)浠衔锶軇┦怯晌焱?，己烷與庚烷所構(gòu)成的群組中所選出的。
本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(iv)中碳?xì)浠衔锶軇┦羌和椤?br> 本發(fā)明更有一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(iv)中乙醇提取物水溶液與己烷比例為1∶1或2∶1。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(v)中有機(jī)層被濃縮后的體積比原先體積減少1/20th到1/100th。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(vii)中10～20％(v/v)乙酸乙酯加入濃縮的己烷溶液中導(dǎo)致苦艾素結(jié)晶化。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，該色彩吸收劑是由硅藻土，活性化木炭與木炭所構(gòu)成的群組中所選出的。
本發(fā)明還有另一個(gè)實(shí)施例，其中在步驟(x)中用以慢速的蒸餾并藉由結(jié)晶化得到苦艾素。
本發(fā)明的方法提供一種從黃花蒿植物族群離析苦艾素的改善方法。我們的方法包括以甲醇或乙醇來進(jìn)行低溫提取，一方面以快速與省能源來完成苦艾素的提取另一方面與慣常地使用己烷或石油醚進(jìn)行提取的方法形成對(duì)比。在己烷或乙醚中進(jìn)行提取是非常慢的而且需要熱過濾超過數(shù)個(gè)小時(shí)。分開水和己烷之間的提取物是經(jīng)濟(jì)的并且此方法能增多苦艾素的提取物符合進(jìn)步性，60～70％提取物的雜質(zhì)離開水層并將苦艾素完全轉(zhuǎn)換至己烷層。己烷餾分所得到的能于去除色彩步驟后直接結(jié)晶化而獲得苦艾素，在此程序中不需使用色層分析法。因此本發(fā)明提供一種從黃花蒿植物族群離析苦艾素卻不使用色層分析法的新方法。在溫和情況進(jìn)行提取方法會(huì)產(chǎn)生干凈植物提取物以及避免苦艾素質(zhì)量的降低。結(jié)果本發(fā)明該方法中每單位生物量回收的苦艾素比先前技術(shù)所需的費(fèi)用大概只有一半而且也適合于小規(guī)模工業(yè)。
為了使貴審查委員能更進(jìn)一步了解本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定目的所采取的技術(shù)、手段及功效，請(qǐng)參閱以下有關(guān)本發(fā)明的詳細(xì)說明與附圖
，相信本發(fā)明的目的、特征與特點(diǎn)，當(dāng)可由此得一深入且具體的了解，然而所附圖式僅提供參考與說明，并非用來對(duì)本發(fā)明加以限制者。
具體實(shí)施例方式
一種黃花蒿離析苦艾素的方法，該方法包括黃花蒿干的粉末葉子，能借著使用5到10倍體積的乙醇或甲醇非水的溶劑連續(xù)過濾4到6小時(shí)而被提取。該方法是從藥草提取苦艾素可能需要使用同樣溶劑比率到最大值重復(fù)3到4次。產(chǎn)生的提取物在真空下藉由蒸餾能濃縮到原來體積的1到5％。在提取方法中回收的溶劑能再次使用。將過量的水加入該濃縮物中使其有80％的水接下來分開水與己烷間的容量。分開水容量與己烷可以使用于比率為1∶1或2∶1v/v。用非極性溶劑分開水容量使用同樣溶劑比率可重復(fù)3到5次為了確保最大量苦艾素轉(zhuǎn)換到己烷餾分。在真空環(huán)境下被蒸餾之前結(jié)合己烷餾分可使其聯(lián)合一起以獲得原先體積的1～5％。濃縮液可為由亮到暗綠的多油液體。乙酸乙酯(10～20％v/v)加入該濃縮液中。用1～3％w/v色彩吸收物質(zhì)活性木炭移除該液體中綠色素。獲得微黃液體后移除活性化木炭并經(jīng)由蒸發(fā)結(jié)晶化生產(chǎn)相當(dāng)多地純苦艾素而不需使用色層分析法。
本發(fā)明里的一個(gè)實(shí)施例干燥提取，以非水乙醇提取粉末葉子較先前使用己烷或二乙基乙醚溶劑有數(shù)個(gè)優(yōu)點(diǎn)。其中提取速度快，提取物有較少數(shù)量的油膩物質(zhì)，因?yàn)樵诰珶捙c結(jié)晶化步驟中油膩物質(zhì)是個(gè)障礙物。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例是分開水和己烷間的提取物為了得到更多提取物有關(guān)于苦艾素以及從濃縮促進(jìn)苦艾素的結(jié)晶化中移除許多雜質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，使用水和己烷其比率為(1∶1或2∶1)，和己烷來進(jìn)行乙醇提取物的分開，分開的程序可重復(fù)3～5次為了確保最大量的苦艾素轉(zhuǎn)換至己烷層。該分開步驟結(jié)果為全部苦艾素轉(zhuǎn)換至己烷層并伴隨還原作用，也就是說只有原先提取物的30～35％重量是轉(zhuǎn)換至己烷層。
根據(jù)本發(fā)明再有另一個(gè)實(shí)施例為己烷餾分可直接被使用于濃縮并與10～20％(v/v)的乙酸乙酯混合后藉由緩慢蒸發(fā)達(dá)到結(jié)晶化。
在習(xí)知技術(shù)里苦艾素的獲得是憑借在己烷，石油醚中進(jìn)行熱提取，然而會(huì)花較多的時(shí)間。植物葉子的熱提取需要用以更多的溶劑是危險(xiǎn)的并且其提取物有更多染色物質(zhì)與油膩物質(zhì)，這些都是于精煉過程中的障礙物。反之，于室溫下用乙醇來提取是快速的而且也可消除染色物質(zhì)與油膩物質(zhì)。分開己烷與20％乙腈水溶液之間的提取物導(dǎo)致苦艾素轉(zhuǎn)換至乙腈水溶液層。藉由加入氯化鈉在色層分析之前使其飽和而將水從乙腈水溶液層中分離出。在這乙腈的分離步驟費(fèi)用是貴的。水與己烷結(jié)合，被使用于液體。液體的分離容易產(chǎn)生兩個(gè)區(qū)分的層因?yàn)槠涿芏炔煌??？喟氐姆蛛x從經(jīng)濟(jì)觀點(diǎn)比較其水與己烷結(jié)合會(huì)比習(xí)知技術(shù)的乙腈與己烷為一個(gè)更好的溶劑。分離的結(jié)果只有30～35％提取物的餾分余留在己烷里。所以苦艾素藉由蒸發(fā)結(jié)晶化可直接被結(jié)晶而不用色層分析法。
實(shí)施例1苦艾素提取溶劑的選擇針對(duì)苦艾素的提取有不同的溶劑來測(cè)試為要選擇一個(gè)最有效率的溶劑。在分離的管中分別地以甲醇，20％甲醇水溶液，乙醇，20％乙醇水溶液或己烷為溶劑提取黃花蒿10g干的粉末葉子。分別在2，4和6小時(shí)提取時(shí)間內(nèi)要除去管中10ml的溶劑。在一個(gè)水浴上餾分被蒸發(fā)至干燥，提取物可溶于2ml溶劑與污漬(5μl)中并負(fù)載于薄層色層分析板上且與純苦艾素溶解于個(gè)別溶劑1mg/ml中在一起。用以移動(dòng)相己烷使薄層色層分析完成飽和于一個(gè)玻璃薄層色層分析槽中∶二乙醚(1∶1)，板子高15cm。之后藉由將板子浸入展開劑中(冰醋酸∶硫酸∶茴香醛，50∶1∶0.5)板子的干燥與污漬就顯而易見，接著將板子加熱至110℃持續(xù)15分鐘直到苦艾素的污漬呈粉紅色。對(duì)于定量，薄層色層分析雙重波長(zhǎng)型掃描機(jī)掃描結(jié)果薄層色層分析的污漬符合苦艾素其波長(zhǎng)為540與610nm。結(jié)果得到在不同溶劑中提取出苦艾素的百分比并將其整理于表1。從表1中可以清楚看到純的乙醇與甲醇提取苦艾素較己烷快速，然而，再過一段時(shí)間之后于甲醇與乙醇中的提取物苦艾素的濃度開始減少和己烷形成對(duì)比可能因?yàn)榭喟胤纸饣蜣D(zhuǎn)化到另一個(gè)未知化合物。將水混合入甲醇中會(huì)導(dǎo)致提取苦艾素嚴(yán)重的衰退。乙醇與甲醇及己烷兩者相比較下乙醇是可以在短時(shí)間下有效率提取更多的苦艾素?；诔杀据^低與高效率兩個(gè)基礎(chǔ)下乙醇將是一個(gè)合適的溶劑。
表1在不同時(shí)間下用不同溶劑提取黃花蒿葉子。被提取的苦艾素?cái)?shù)量表示為占整個(gè)干藥草重量的百分比。

實(shí)施例2苦艾素的分離純的苦艾素(0.2g)被溶解于不同管中其中包含1∶1(v/v)兩個(gè)不相溶的溶劑相混合，己烷與乙醇水溶液，乙醇濃度的變化從20到80％。在苦艾素完全溶于混合液之后，用以分離漏斗分離己烷與乙醇為兩層。從不同測(cè)試管中藉由例1薄層色層分析測(cè)試在個(gè)別層中苦艾素含量百分比并將此結(jié)果整理于表2。
表2數(shù)據(jù)顯示在己烷與乙醇水溶液之間苦艾素的分離傾向。

本例子提出藉由維持高的比率苦艾素能選擇性地從黃花蒿的乙醇提取物轉(zhuǎn)換到己烷。從己烷餾分，苦艾素經(jīng)由已知的蒸發(fā)結(jié)晶化方法可直接結(jié)晶化。
實(shí)施例3在溫度30℃下使用600ml的乙醇連續(xù)過濾超過四小時(shí)提取黃花蒿(100g)的干粉末葉子。使用相同溶劑比率重復(fù)四次提取的程序。結(jié)合的提取物于真空下濃縮至體積為50ml，然后再加水至濃縮的提取物中使體積增為250ml。之后用以250ml己烷分離四次。結(jié)合的己烷層于真空下減少成原先體積的5％并形成為暗綠色多油的液體。將20％v/v乙酸乙酯混合入該液體接著用以1％w/v活性木炭處理。該液體通過一張3mm華特曼濾紙過濾除去活性木炭。在過濾之后暗黃色液體需經(jīng)過蒸發(fā)結(jié)晶化。蒸發(fā)結(jié)晶化后液體為白色，藉由真空過濾裝置將針狀物結(jié)晶體分離出并稱重。最后整個(gè)結(jié)晶體產(chǎn)量為603mg。
實(shí)施例4在溫度30℃下使用1.0L的乙醇連續(xù)過濾超過四小時(shí)提取黃花蒿(100g)的干粉末葉子。使用相同溶劑比率重復(fù)四次提取的程序。結(jié)合的提取物于真空下濃縮至體積為80ml，然后再加水至濃縮的提取物中使體積增為400ml。之后用以250ml己烷分離四次。結(jié)合的己烷層于真空下減少成50ml并形成為暗綠色多油的液體。將20％v/v乙酸乙酯混合入該液體接著用1％w/v活性木炭處理。該液體被過濾如例3所述之后需經(jīng)過蒸發(fā)結(jié)晶化。最后整個(gè)結(jié)晶體產(chǎn)量為605mg。
實(shí)施例5在溫度30℃下使用600ml的乙醇連續(xù)過濾超過四小時(shí)提取黃花蒿(100g)的干粉末葉子。使用相同溶劑比率重復(fù)四次提取的程序。結(jié)合的提取物于真空下濃縮至體積為50ml，然后再加水至濃縮的提取物中使體積增為250ml。之后用以125ml己烷分離五次。結(jié)合的己烷層于真空下減少成50ml并形成為暗綠色多油的液體。將20％v/v乙酸乙酯混合入該液體接著用1％w/v活性木炭處理。該液體通過一張華特曼濾紙過濾除去活性木炭。在過濾之后暗黃色液體需經(jīng)過蒸發(fā)結(jié)晶化。蒸發(fā)結(jié)晶化后液體為白色，將針狀物結(jié)晶體分離出并稱重。最后整個(gè)結(jié)晶體產(chǎn)量為601mg。
實(shí)施例6黃花蒿葉子提取過程如例3所述但在不同的溫度20，30，40和50℃并于分開的玻璃瓶?jī)?nèi)下進(jìn)行。每一個(gè)結(jié)合的提取物于真空下濃縮至體積為50ml，然后再加水至濃縮的每一個(gè)提取物中使體積增為250ml。之后用以250ml己烷個(gè)別地分離三次。結(jié)合的己烷層于真空下減少成它們?cè)润w積的5％并形成為暗綠色多油的液體。將20％v/v乙酸乙酯混合入每一個(gè)液體接著用1％w/v活性木炭處理。該液體過濾及結(jié)果為暗黃色液體需于分開的玻璃瓶?jī)?nèi)個(gè)別地經(jīng)過蒸發(fā)結(jié)晶化。最后將結(jié)晶分離出及稱重。在溫度為20，30，40和50℃結(jié)晶產(chǎn)量分別為410，603，600和550mg。
實(shí)施例7在溫度30℃下使用6.0L的乙醇連續(xù)過濾超過四小時(shí)提取黃花蒿(1.0Kg)的干粉末葉子。使用相同溶劑比率重復(fù)四次提取的程序。結(jié)合的提取物于真空下濃縮至體積為400ml，然后再加水至濃縮的提取物中使體積增為2.0L。之后用以2.0L己烷分離三次。結(jié)合的己烷層于真空下減少成300ml并形成為暗綠色多油的液體。將60ml乙酸乙酯混合入該液體接著用1％w/v活性木炭處理。該液體過濾及結(jié)果為暗黃色液體需經(jīng)過蒸發(fā)結(jié)晶化。最后將結(jié)晶分離出及稱重。整個(gè)苦艾素結(jié)晶體產(chǎn)量為5.95g。
實(shí)施例8在溫度30℃下使用600ml的甲醇連續(xù)過濾超過四小時(shí)提取黃花蒿(100g)的干粉末葉子。使用相同溶劑比率重復(fù)四次提取的程序。結(jié)合的提取物于真空下濃縮至體積為50ml，然后再加水至濃縮的提取物中使體積增為250ml。之后用以250ml己烷分離三次。結(jié)合的己烷層于真空下減少成原先體積的5％并形成為暗綠色多油的液體。將20％v/v乙酸乙酯混合入該液體接著用1％w/v活性木炭處理。該液體通過一張華特曼濾紙過濾除去活性木炭。在過濾之后暗黃色液體需經(jīng)過蒸發(fā)結(jié)晶化。蒸發(fā)結(jié)晶化后液體為白色，藉由真空過濾裝置將針狀物結(jié)晶體分離出并稱重。最后整個(gè)結(jié)晶體產(chǎn)量為320mg。
本發(fā)明方法的優(yōu)點(diǎn)改善生產(chǎn)苦艾素的方法，本發(fā)明主要提供數(shù)個(gè)優(yōu)點(diǎn)例如1.用以乙醇進(jìn)行提取是快速的并且節(jié)省時(shí)間。
2.在該提取制備方法中不需要加熱所以能節(jié)省能源。
3.分離水與己烷之間的提取物以得到苦艾素是比乙腈與己烷為更好的選擇因?yàn)槭禽^經(jīng)濟(jì)的4.在分離后己烷層不需使用色層分析法就可得到苦艾素的結(jié)晶化。
5.整個(gè)方法中比習(xí)知技術(shù)生產(chǎn)苦艾素的費(fèi)用減少30～40％。
6.可避免于提取過程中因?yàn)槭褂蒙虡I(yè)等級(jí)己烷而使有毒化學(xué)污染物殘留于苦艾素中。
7.不需用到液化二氧化碳昂貴的裝置。
8.此法不需要非常大的基礎(chǔ)設(shè)備，苦艾素的提取可在農(nóng)業(yè)區(qū)域容易的有計(jì)劃的實(shí)行。
9.在過程中溶劑可被恢復(fù)并重新使用所以整個(gè)方法是有效率及經(jīng)濟(jì)的。
以上所述，僅為本發(fā)明最佳之一的具體實(shí)施例的詳細(xì)說明與圖式，本發(fā)明的特征并不局限于此，并非用以限制本發(fā)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)以下述申請(qǐng)專利的范圍為準(zhǔn)，凡附合本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍的精神與其類似變化的實(shí)施例，皆應(yīng)包含于本發(fā)明范疇中，任何熟悉該項(xiàng)技藝者在本發(fā)明領(lǐng)域內(nèi)，可輕易思及之變化或修飾皆可涵蓋在以下本案的專利范圍內(nèi)。
權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)對(duì)于植物黃花蒿離析苦艾素的方法請(qǐng)求項(xiàng)1已經(jīng)修正過包括用以非水的極性溶劑于低溫下提取黃花蒿的植物部份。申請(qǐng)人修改的請(qǐng)求項(xiàng)指出于步驟(iii)，加水至濃縮提取物中得到大約80％水的提取物與步驟(iv)已被修改指出加碳?xì)浠衔锶軇┓珠_80％水的提取物成為一個(gè)水溶液層與一個(gè)有機(jī)層。
申請(qǐng)人恭敬地認(rèn)為文件D1(Ronald J.Roth et al.從黃花蒿離析青蒿酸)提供一個(gè)方法于高溫情況下進(jìn)行植物部分提取。相反的，本發(fā)明是在低溫情況下進(jìn)行植物部分提取，現(xiàn)在可看出修正請(qǐng)求項(xiàng)1的必須性。本發(fā)明的新穎性是在于低溫下可進(jìn)行提取的步驟。在溫和情況進(jìn)行提取方法會(huì)產(chǎn)生干凈植物提取物以及避免苦艾素質(zhì)量的降低。因此，申請(qǐng)人可以得到純度較高的苦艾素，假如是D1方法是不可能的。并且，文件D1并沒有加碳?xì)浠衔锶軇┓珠_提取物成為一個(gè)水溶液層與一個(gè)有機(jī)層的方法。
文件D2(EPO 908 460 A1)提供一個(gè)方法是藉由植物黃花蒿同時(shí)生產(chǎn)苦艾素與香精油。因此，可清楚看到本發(fā)明的目的完全與檔D2不一樣。此檔沒有提供加水至濃縮提取物中得到大約80％水的提取物與加碳?xì)浠衔锶軇┓珠_80％水的提取物成為一個(gè)水溶液層與一個(gè)有機(jī)層的方法。還有要注意的是在分離水與碳?xì)浠衔锶軇┲g的濃縮提取物步驟時(shí)，雜質(zhì)會(huì)留于水中而苦艾素會(huì)轉(zhuǎn)移到有機(jī)層。因此，使有機(jī)層有濃度高的苦艾素。另外，申請(qǐng)人認(rèn)為水提取物的濃度在苦艾素轉(zhuǎn)移到有機(jī)層中扮演一個(gè)重要的角色。申請(qǐng)人意外的發(fā)現(xiàn)80％苦艾素的濃度轉(zhuǎn)移到有機(jī)層。這方面已清楚說明于表2。
由以上修正的觀點(diǎn)，申請(qǐng)人恭敬地認(rèn)為本發(fā)明與文件D1及D2是不一樣的。
最后，申請(qǐng)人認(rèn)為該請(qǐng)求項(xiàng)的修正是在原先說明書的范圍內(nèi)并沒有多加材料或事物于該修正請(qǐng)求項(xiàng)內(nèi)。事實(shí)上，請(qǐng)求項(xiàng)修正的部分是屬于限制的性質(zhì)。
1、一種黃花蒿離析苦艾素的方法，該方法包括(i)用非水極性溶劑于低溫下提取黃花蒿的植物部份；(ii)濃縮步驟(i)的提取物恢復(fù)極性溶劑；(iii)加水至前述的濃縮提取物中得到大約80％水的提取物；(iv)加碳?xì)浠衔锶軇┓珠_步驟(iii)80％水的提取物成為一個(gè)水溶液層與一個(gè)有機(jī)層；(v)從步驟(iv)溶液中分離有機(jī)層；(vi)濃縮步驟(v)的有機(jī)層使獲得多油液體；(vii)加乙酸乙酯至步驟(vi)的多油液體中；(viii)用以色彩吸收物質(zhì)使步驟(vii)的溶液移除微綠的色素；(ix)過濾該溶液移除色彩吸收物質(zhì)；及(xi)蒸發(fā)該溶液之后接著藉由結(jié)晶化獲得純的苦艾素。
2、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(i)中在提取時(shí)干葉子已取得。
3、如權(quán)利要求2所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在提取前葉子已成粉末的。
4、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中該非水的極性溶劑是由乙醇，甲醇，丙酮，異丁基甲烷及己烷所構(gòu)成的群組中所選出的。
5、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中非水溶劑是乙醇。
6、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中植物部分與非水溶劑的比率范圍為1∶5到1∶10。
7、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中用乙醇過濾藥草持續(xù)4～6小時(shí)對(duì)植物部分的提取是有效用的。
8、如權(quán)利要求5所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中溫度在20～50℃之間將藥草過濾是有效用的。
9、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(ii)中極性提取物的體積比原先的體積減少1/20th到1/100th。
10、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(ii)中于步驟(i)中濃度重復(fù)使用后溶劑被恢復(fù)。
11、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iii)中加了四次數(shù)量的水至濃縮乙醇提取物中。
12、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iv)中該碳?xì)浠衔锶軇┦怯晌焱?，己烷與庚烷所構(gòu)成的群組中所選出的。
13、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iv)中碳?xì)浠衔锶軇┦羌和椤?br> 14、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iv)中乙醇提取物水溶液與己烷比例為1∶1或2∶1。
15、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(v)中該有機(jī)層被濃縮后的體積比原先體積減少1/20th到1/100th。
16、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(vii)中10～20％(v/v)乙酸乙酯加入濃縮的己烷溶液中導(dǎo)致苦艾素結(jié)晶化。
17、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中該色彩吸收劑是由硅藻土，活性化木炭與木炭所構(gòu)成的群組中所選出的。
18、如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(x)中用以慢速的蒸餾并藉由結(jié)晶化得到苦艾素。
權(quán)利要求
1.一種黃花蒿離析苦艾素的方法，該方法包括(i)用非水極性溶劑提取黃花蒿的植物部份；(ii)濃縮步驟(i)的提取物恢復(fù)極性溶劑；(iii)加水至前述的濃縮提取物中；(iv)加碳?xì)浠衔锶軇┓珠_步驟(iii)的水提取物成為一個(gè)水溶液層與一個(gè)有機(jī)層；(v)從步驟(iv)溶液中分離有機(jī)層；(vi)濃縮步驟(v)的有機(jī)層使獲得多油液體；(vii)加乙酸乙酯至步驟(vi)的多油液體中；(viii)用以色彩吸收物質(zhì)使步驟(vii)的溶液移除微綠的色素；(ix)過濾該溶液移除色彩吸收物質(zhì)；及(xi)蒸發(fā)該溶液之后接著藉由結(jié)晶化獲得純的苦艾素。
2.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(i)中在提取時(shí)干葉子已取得。
3.如權(quán)利要求2所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在提取前葉子已成粉末的。
4.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中該非水的極性溶劑是由乙醇，甲醇，丙酮，異丁基甲烷及己烷所構(gòu)成的群組中所選出的。
5.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中非水溶劑是乙醇。
6.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中植物部分與非水溶劑的比率范圍為1∶5到1∶10。
7.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中用乙醇過濾藥草持續(xù)4～6小時(shí)對(duì)植物部分的提取是有效用的。
8.如權(quán)利要求5所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中溫度在20～50℃之間將藥草過濾是有效用的。
9.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(ii)中乙醇提取物的體積比原先的體積減少1/20th到1/100th。
10.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(ii)中于步驟(i)中濃度重復(fù)使用后溶劑被恢復(fù)。
11.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iii)中加了四次數(shù)量的水至濃縮乙醇提取物中。
12.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iv)中該碳?xì)浠衔锶軇┦怯晌焱?，己烷與庚烷所構(gòu)成的群組中所選出的。
13.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iv)中碳?xì)浠衔锶軇┦羌和椤?br> 14.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(iv)中乙醇提取物水溶液與己烷比例為1∶1或2∶1。
15.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(v)中該有機(jī)層被濃縮后的體積比原先體積減少1/20th到1/100th。
16.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(vii)中10～20％(v/v)乙酸乙酯加入濃縮的己烷溶液中導(dǎo)致苦艾素結(jié)晶化。
17.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中該色彩吸收劑是由硅藻土，活性化木炭與木炭所構(gòu)成的群組中所選出的。
18.如權(quán)利要求1所述的黃花蒿離析苦艾素的方法，其中在步驟(x)中用以慢速的蒸餾并藉由結(jié)晶化得到苦艾素。
全文摘要
一種黃花蒿離析苦艾素的方法，尤指藉由黃花蒿植物藥草所離析出的一種抗瘧疾藥劑，其中包括用乙醇提取藥草，將水和己烷間的提取物分開，接著藉由蒸發(fā)結(jié)晶化得到苦艾素。所以本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)單，迅速，經(jīng)濟(jì)效益及實(shí)用的方法于植物黃花蒿離析苦艾素的方法，同時(shí)產(chǎn)生的苦艾素有實(shí)質(zhì)的數(shù)量與純度消除習(xí)知技術(shù)的缺點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P33/06GK1627942SQ02829000
公開日2005年6月15日 申請(qǐng)日期2002年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月25日
發(fā)明者撒戌耳·庫馬, 夕夫·庫馬·格柏塔, 迪格維札·辛, 瑪誕·莫旱·格柏塔, 哈蘭·常得·展, 阿度·巴拉喀戌·喀侯, 蘇曼·皮特·辛·旱奴賈, 枸文德·朗 申請(qǐng)人:科學(xué)與工業(yè)研究委員會(huì)