專利名稱：一種用于深部真菌感染的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用配制品，具體地說是用于治療深部真菌感染的藥物組合物。
背景技術(shù)：
真菌感染可分為淺部感染和深部感染。淺部感染多發(fā)生在指(趾)甲、皮膚、陰道和口腔等部位，其易觀察，治療藥物品種多、療效也顯著。深部感染多發(fā)生在肺、腦、消化道等內(nèi)臟器官和深部組織。其致病菌以念珠菌(如白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌等)為主，其次是引起肺部感染的曲霉菌(如煙曲霉菌、黃曲霉、青霉等)。深部真菌感染多為繼發(fā)性感染，其治療藥物品種少、療效差、毒副作用大。近年來，隨著免疫制劑、廣譜抗生素、皮質(zhì)類固醇激素和抗腫瘤藥物的廣泛應(yīng)用和腹膜透析、血液透析、器官移植工作的開展以及免疫缺陷性疾病的出現(xiàn)，深部真菌感染的發(fā)病率在臨床各科都在逐年上升，且其已成為導(dǎo)致患者死亡的重要原因。目前，具有抗深部真菌感染作用的藥物主要有兩性霉素B、制霉菌素、咪康唑、氟康唑。但這些藥物均存在一些不足之處。例如，兩性霉素B腎毒性發(fā)生率高，對(duì)循環(huán)系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)也具有毒性作用。制霉菌素雖對(duì)深部真菌有明顯抑制作用，但吸收后毒性大，故臨床主要用于治療口腔、陰道和皮膚的白念珠菌感染。咪康唑口服吸收差，不易透過血腦屏障，故多通過靜脈給藥，而靜脈給藥又常可導(dǎo)致血栓性靜脈炎。氟康唑僅對(duì)部分念珠菌感染有效，對(duì)克柔氏念珠菌、光滑念珠菌天然耐藥，對(duì)曲霉菌感染療效不佳。因此，對(duì)于深部真菌感染，目前在國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界仍是一個(gè)棘手的問題。臨床迫切需要獲得新型、高效、安全的抗深部真菌感染的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種抗菌廣譜、效果顯著且毒副作用小的用于深部真菌感染的藥物。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的用于深部真菌感染的中藥組合物，它包括有以下重量配比的原料桂皮醛7-32份，藿香油8-32份。
本發(fā)明是經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，篩選出具有良好協(xié)同作用的中藥成份進(jìn)行配伍，使其不但具有良好的抗深部真菌的作用，同時(shí)還具有廣譜抗菌作用。
為了進(jìn)一步增強(qiáng)本發(fā)明的抗菌作用，最好是在所說的重量配比的原料中還有6-12份丁香油。
在本發(fā)明中丁香油與藿香油所起的作用基本相同，故藿香油亦可由丁香油替代，其配比量亦同藿香油的用量相同。桂皮醛和丁香油構(gòu)成的中藥組合物亦為本發(fā)明，其亦可達(dá)到本發(fā)明所述效果。
本發(fā)明藥物，可制成口服劑(如膠囊劑、軟膠囊劑)、注射劑、滴眼劑。
可用于治療系統(tǒng)性(各種臟器)的念珠菌感染、肺部曲霉素感染、角膜真菌感染等深部真菌感染。
本發(fā)明制備方法可采用蒸餾法，將桂皮和藿香粗粉加水進(jìn)行蒸餾，收集蒸餾液，制備得桂皮醛和藿香油。再按本發(fā)明所選擇的重量配比進(jìn)行稱取、混合，加入適宜的賦形劑，即可制備成膠囊劑或注射劑、滴眼劑等。
本發(fā)明成人口服用量以膠囊劑(0.5g/粒)為例，每日15-24粒(總藥量?jī)?nèi)含桂皮醛2.34-7.02g、藿香油2.34-7.02g)。
注射用量為每日100ml(內(nèi)含桂皮醛2.34-7.02g、藿香油2.34-7.02g)。
醫(yī)師也可根據(jù)臨床具體情況酌情增加或減少。
本發(fā)明藥物抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣、毒副作用小。它為臨床各種深部真菌感染提供了一種有效的新型藥物。
本發(fā)明有益效果通過以下的實(shí)驗(yàn)得到了證明。
本發(fā)明藥物與氟康唑?qū)δ钪榫?、曲霉菌抗菌活性?duì)比實(shí)驗(yàn)藥物來源本發(fā)明藥物即香桂膠囊(在以下所有實(shí)驗(yàn)中香桂膠囊即指本發(fā)明膠囊制劑)。
香桂膠囊(每粒內(nèi)含桂皮醛0.16g、藿香油0.16g)由河北醫(yī)科大學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)0101-03，氟康唑膠囊由上海三維制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)990601。
菌種來源臨床分離株來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科真菌室，均為致病性深部真菌(直接鏡檢可見大量菌絲，培養(yǎng)有念珠菌生長(zhǎng)，經(jīng)鑒定為白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌)。標(biāo)準(zhǔn)菌株從中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物所購(gòu)買。臨床株白念珠菌(30株)、熱帶念珠菌(20株)、克柔氏念珠菌(10株)。標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌(2株)、熱帶念珠菌(2株)、克柔氏念珠菌(2株)、煙曲霉(2株)、黃曲霉(2株)。
實(shí)驗(yàn)方法藥基配制采用試管內(nèi)藥基法，先將香桂膠囊內(nèi)含物用5倍生理鹽水在研缽內(nèi)研20分鐘，再與高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊脂基趁熱(液態(tài))充分混合，倍比稀釋成A(桂皮醛2.06mg/ml、藿香油1.03mg/ml)、B(桂皮醛1.03mg/ml、藿香油0.55mg/ml)、C(桂皮醛0.515mg/ml、藿香油0.257mg/ml)、D(桂皮醛0.257mg/ml、藿香油0.129mg/ml)、E(桂皮醛0.129mg/ml、藿香油0.064mg/ml)、F(桂皮醛0.064mg/ml、藿香油0.032mg/ml)、G(桂皮醛0.032mg/ml、藿香油0.016mg/ml)。氟康唑同上配制成A(2.06mg/ml)、B(1.03mg/ml)、C(0.515mg/ml)、D(0.257mg/ml)、E(0.129mg/ml)、F(0.064mg/ml)、G(0.032mg/ml)的濃度，分裝試管，置斜面。
菌種接種挑取適量菌株與生理鹽水混合，絲狀真菌置于研磨器中與生理鹽水混合研磨，使每毫升菌懸液含1×105-6菌細(xì)胞，每個(gè)試管內(nèi)接種50μl菌懸液，每個(gè)濃度接種2管，同時(shí)用葡萄糖蛋白胨瓊脂基作對(duì)照。置36℃恒溫箱內(nèi)，每日觀察生長(zhǎng)情況，分別1、2、3周做記錄，3周后最大稀釋度無菌落生長(zhǎng)為最小抑菌濃度(MIC)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2、表3表1香桂膠囊對(duì)臨床株念珠菌MIC(mg/ml)

表2香桂膠囊對(duì)五種真菌標(biāo)準(zhǔn)株MIC(mg/ml)

表3氟康唑膠囊對(duì)念珠菌、曲霉臨床株、標(biāo)準(zhǔn)株MIC(mg/ml)

實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明對(duì)熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌臨床株和標(biāo)準(zhǔn)株均有很強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)煙曲霉也有顯著的作用。對(duì)照組氟康唑?qū)Π啄钪榫休^好的抗菌作用，但對(duì)克柔氏念珠菌、熱帶念珠菌、曲霉菌抗菌作用小。
本發(fā)明藥物掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)觀察實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)菌株白念珠菌和煙曲霉從臨床標(biāo)本(便、痰)中分離培養(yǎng)出具有致病性(直接鏡檢可見大量菌絲體)的菌株，并經(jīng)小培養(yǎng)后，生化鑒定菌種。
藥物本發(fā)明口服膠囊制劑(0.5g克/每粒，內(nèi)含桂皮醛0.16g，藿香油0.16g)，由河北醫(yī)科大學(xué)制藥廠提供，批號(hào)20000507。
實(shí)驗(yàn)方法藥基的制備先將本發(fā)明膠囊內(nèi)容物處理，用95％乙醇溶解，再加入到已滅菌的葡萄糖、蛋白胨液基(4％葡萄糖、1％蛋白胨)中，使每毫升藥基含桂皮醛0.515ul廣藿香油0.25ul，95％乙醇0.1ml。
葡萄糖蛋白胨液基(葡萄糖4％，蛋白胨1％)做空白對(duì)照。葡萄糖蛋白胨乙醇液基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，乙醇1％)做乙醇對(duì)照。將液基分裝在無菌試管內(nèi)，每管5ml。
抗菌實(shí)驗(yàn)將已鑒定的白念珠菌、煙曲霉取2mm3大小的菌塊，接種到藥基內(nèi)，于36℃恒溫箱培養(yǎng)。分別培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)，然后離心，上清液去掉，SEM用2.5％戊二醛固定菌塊，TEM用4％戊二醛固定菌塊。
電鏡樣品制備將已固定的標(biāo)本送電鏡室，常規(guī)制備SEM和TEM樣品分別用Hitachi(日立)S-520掃描電鏡和H-5000透射電鏡下觀察。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果SEM觀察結(jié)果(見表4、表5)白念珠菌SEM觀察(見表4)表4

煙曲霉SEM觀察結(jié)果(見表5)表5

TEM觀察結(jié)果(見表6、表7)白念珠菌TEM觀察結(jié)果(見表6)表6

煙曲霉TEM觀察結(jié)果(見表7)表7

上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明口服膠囊制劑經(jīng)SEM下觀察，24小時(shí)真菌的孢子和菌絲形態(tài)出現(xiàn)明顯改變，48小時(shí)～72小時(shí)真菌的孢子出現(xiàn)大小不等的凹陷，胞質(zhì)流失，殘留不規(guī)則的片狀胞壁、細(xì)胞變性死亡。真菌的菌絲呈粗細(xì)不一，有的腫脹，有的菌絲呈碎片狀，壞死。在TEM下觀察。24小時(shí)念珠菌的孢子明顯水腫，變形，部分細(xì)胞器萎縮，呈空泡化，48～72小時(shí)，大部分細(xì)胞器消失，胞漿呈空泡化，被電子薄區(qū)占據(jù)，部分胞壁破裂。煙曲霉菌絲24小時(shí)菌絲形態(tài)不規(guī)則，胞漿內(nèi)水腫，胞漿大部分被電子薄區(qū)占據(jù)，呈空胞化；大部分細(xì)胞器消失。72小時(shí)細(xì)胞器完全消失，部分胞壁破壞，細(xì)胞壞死、死亡。上述實(shí)驗(yàn)說明，本發(fā)明藥物中有效成份桂皮、藿香揮發(fā)油在每毫升含0.515μl和0.275μl的濃度下，可在24～72小時(shí)快速殺死真菌的孢子和菌絲，故其具有快速殺菌作用。而且，其抗菌的途徑首先是穿透真菌的細(xì)胞壁，破壞細(xì)胞器，干擾核酸合成，使細(xì)胞變性死亡。
本發(fā)明藥物口服制劑用于治療消化道念珠菌感染的臨床觀察。
香桂膠囊治療消化道念珠菌感染60例資料和方法一般資料60例患者均來自河北省第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科門診，男32例，女28例，其中21～30歲6例，31～40歲6例，41～50歲18例，51～60歲24例，60歲以上6例。病程最短一個(gè)月，最長(zhǎng)15年，平均4.5月；患者大部分服用過多種抗生素治療，癥狀無明顯好轉(zhuǎn)。
60例患者真菌鏡檢均為陽性，其中真菌培養(yǎng)白念珠菌30例，熱帶念珠菌18例，克柔氏念珠菌6例，光滑念珠菌6例。
藥物來源香桂膠囊(每粒內(nèi)含桂皮醛0.16g、藿香油0.16g)由河北醫(yī)科大學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)0101-03。
真菌鏡檢用10％氫氧化鉀涂片法。
真菌培養(yǎng)用科瑪嘉定位顯色培養(yǎng)。
真菌鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲和芽生孢子，真菌培養(yǎng)有念珠菌生長(zhǎng)。
服用方法每日三次，每次6粒，飯前服，連服七天，停藥后做真菌鏡檢和培養(yǎng)，為一療程。
診斷標(biāo)準(zhǔn)1、患者有慢性腹瀉、大便次數(shù)增多，每日2～3次，大便不成形，有粘液性便，伴腹痛、腹脹，體重減輕，療程在1個(gè)月以上。
2、內(nèi)科檢查消化道造影、細(xì)菌培養(yǎng)、大便常規(guī)均為正常。
3、抗菌素治療無效或加重。
4、排除其他腸道疾病。
5、真菌鏡檢可見真菌菌絲體和芽生孢子(表示致病狀態(tài))真菌培養(yǎng)有念珠菌生長(zhǎng)。
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)痊愈臨床癥狀完全消失，真菌鏡檢和真菌培養(yǎng)均為陰性，停藥后連續(xù)三次鏡檢和培養(yǎng)均為陰性。
有效臨床癥狀完全或基本消失，真菌鏡和真菌培養(yǎng)均為陽性(可能為死菌)，真菌培養(yǎng)陰性。
好轉(zhuǎn)臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，真菌鏡檢陰性或陽性，真菌培養(yǎng)陽性。
無效臨床癥狀無明顯好轉(zhuǎn)，或加重，真菌鏡檢陽性，真菌鏡檢陽性。
治療結(jié)果60例患者中，43例治愈(71.67％)，有效15例(25％)，好轉(zhuǎn)2例(3.33％)，治療有效率為58例(96.67％)，治療好轉(zhuǎn)率為100％。
副作用60例在治療期間未見明顯副作用，3例有輕度惡心，但不影響治療，停藥后消失。
臨床實(shí)驗(yàn)表明香桂膠囊治療消化道念珠菌感染有很好的療效，對(duì)于病程較短的患者，服藥1-2個(gè)療程即可治愈；病程較長(zhǎng)者或病程在3個(gè)月以者，需服藥3-4個(gè)療程。該藥對(duì)氟康唑天然耐藥的菌株如克柔氏念珠菌、光滑念珠菌的感染，也有很好的治療作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1制備本發(fā)明藥物的膠囊制劑將桂皮粗粉1000g、藿香1000g，加水10倍量，加熱回流6小時(shí)，后蒸餾，收集桂皮醛500g，藿香油500g，稱取桂皮醛300g，藿香油240g混均，加入糊精600g，混均，按0.5g/粒裝入膠囊，測(cè)定含量，每粒膠囊內(nèi)含0.25g桂皮醛、0.20g藿香油。
用法用量口服每日三次，每次4-6粒。
實(shí)施例2制備本發(fā)明藥物的注射劑按實(shí)施例1的方法制備桂皮醛300g、藿香油300g。稱取桂皮醛150g，藿香油80g，加入適量氯化鈉調(diào)節(jié)滲透壓，加入適量吐溫-80使其全部溶解，測(cè)定含量，使每毫升注射液內(nèi)含桂皮醛0.046g，藿香油0.024g過濾、灌封，100ml/瓶，在100℃滅菌30分鐘。
用法用量靜滴，每日一次，每次100ml。
本發(fā)明注射劑，在體外實(shí)驗(yàn)和臨床觀察中獲得了與口服制劑基本相同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
實(shí)施例3-6制備桂皮醛、藿香油的方法同實(shí)施例1，丁香油采用蒸餾法制備。其原料的用量配比與實(shí)施例1、2有所不同，但均能達(dá)到本發(fā)明所述效果。

權(quán)利要求
1.一種用于深部真菌感染的中藥組合物，其特征在于它包括有以下重量配比的原料桂皮醛7-32份，藿香油8-32份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于在所說的重量配比的原料中還有6-12份丁香油。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于在所說的藿香油由丁香油替代。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于深部真菌感染的中藥組合物。它包括有以下重量配比的原料桂皮醛7－32份，藿香油8－32份。本發(fā)明藥物抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣、毒副作用小。它為臨床各種深部真菌感染提供了一種有效的新型藥物。本發(fā)明藥物可制成口服劑(如膠囊劑、軟膠囊劑)、注射劑、滴眼劑?？捎糜谥委熛到y(tǒng)性(各種臟器)的念珠菌感染、肺部曲霉素感染、角膜真菌感染等深部真菌感染。
文檔編號(hào)A61K31/10GK1530115SQ0310698
公開日2004年9月22日 申請(qǐng)日期2003年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月12日
發(fā)明者王剛生 申請(qǐng)人:王剛生