專利名稱：毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途及藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及毛形屬(Trichinella)線蟲的醫(yī)用用途，尤其是公開了一種毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途，同時提供了相應(yīng)的藥物制劑，屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
多年來，人們一直認為寄生蟲是一種寄生在人或動物體內(nèi)的害蟲，但從辯證唯物主義觀點看，寄生蟲也應(yīng)有其有益可利用的一面。在長期生物進化過程中，旋毛形線蟲(Trichinella spiralis，Owen 1835)簡稱旋毛蟲在人或動物體內(nèi)生存，產(chǎn)生了許多有益的天然抗原物質(zhì)，這些復(fù)雜的物質(zhì)雖然迄今尚未搞清其結(jié)構(gòu)和功能，但它確實有非特異性增強人或動物的免疫功能的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途，同時提供了相應(yīng)的藥物制劑。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下旋毛形線蟲細胞苗制備無菌收集旋毛形線蟲500-1,000條后，放入改良的RPMI1640或MEM培養(yǎng)基(培養(yǎng)基中含動物肌肉蛋白酶消化液)中，將蟲體研碎后，離心取上清進行原代培養(yǎng)，待細胞基本長成單層后，倒掉上懸液加入新的培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)，待細胞傳至30代，測定其生長率曲線、細胞集落形成率及傳代細胞染色體數(shù)。后用于人或動物。
旋毛形線蟲致弱苗制備其制備方法之一將旋毛形線蟲通過大白鼠、兔或馬屬動物等，連續(xù)傳代10-15代，其間每隔1個月用旋毛形線蟲(500-10000條蟲體)接種免疫，共3-5次。收集其蟲體用于人或動物。
制備方法之二直接收集感染旋毛形線蟲動物肌肉中的蟲體，放入PBS中，用10-20千倫琴(Kγ)劑量的鈷-60(Co60)照射(或采用其它物理方法致弱)，用于人或動物。
旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)制備將體外培養(yǎng)的旋毛形線蟲排泄分泌物或收集的旋毛形線蟲蟲體破碎后加入不同濃度的有機溶劑如乙醇、石油醚和乙酸乙酯等進行萃取或進行生化分離提取，獲得不同的生物活性物質(zhì)， 經(jīng)濃縮、滅菌處理后分裝，用于人或動物。
通過肌肉接種旋毛形線蟲細胞苗、經(jīng)口接種旋毛形線蟲致弱苗于人或動物體內(nèi)，通過注射或經(jīng)口給旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)于人或動物體內(nèi)，使其產(chǎn)生復(fù)雜的天然抗原物質(zhì)，來增強人和動物免疫力，進而達到防治人和動物免疫功能低下或缺陷引起疾病之目的，同時也可作防治人和動物旋毛形線蟲病的蟲苗。
〖適應(yīng)癥〗主要用于腫瘤病、早期癌癥、性功能低下以及艾滋病等免疫功能低下或缺陷引起疾病的預(yù)防和治療，同時也可作防治人和動物旋毛形線蟲病的蟲苗。
〖使用方法〗；旋毛形線蟲細胞苗以1×103-1×1010個細胞給動物和人一次肌肉注射，間隔3個月重復(fù)一次，其劑量和次數(shù)視人和動物的病情、年齡、性別、體質(zhì)和防治目的等而定。
旋毛形線蟲致弱苗以50-10,000個蟲體給人或動物一次口服，間隔3個月重復(fù)一次，其劑量和次數(shù)視人和動物的病情、年齡、性別、體質(zhì)和防治目的等而定。
旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)根據(jù)模型動物實驗結(jié)果，確定給人用藥的途徑和用量。
下述的藥理實驗證實了本發(fā)明藥物制劑在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途案例1將健康純系的BALB/C鼠(雌雄各半，體得18-20g)，隨機分為7組，每組10只，除第1組注射Hanks氏液100μL外，2-4組小鼠，分別給予50、100、200個致弱的旋毛形線蟲蟲體，3周后，分別以100μL含1×106個SP2/0骨髓瘤細胞于鼠的左后肢皮下注射。5-7組小鼠分別以100μL含1×106個SP2/0骨髓瘤細胞于鼠的左后肢皮下注射，3周后分別經(jīng)口給予50、100、200個致弱的旋毛形線蟲蟲體，結(jié)果在小鼠荷瘤前和荷瘤后應(yīng)用旋毛形線蟲免疫的小鼠體內(nèi)腫瘤體積明顯小于不用旋毛形線蟲免疫的對照組小鼠腫瘤體積，且個別小鼠未見腫瘤發(fā)生，說明旋毛形線蟲具有很強的抗腫瘤作用(見表1)。
表1.不同組小鼠接種致弱的旋毛形線蟲蟲體后荷瘤情況組別腫瘤大小(cm)無腫瘤鼠數(shù)(只)1 2.00-2.50×3.00-3.3002 1.20-1.50×1.10-1.2013 1.10-1.30×1.10-1.2014 1.10-1.30×1.00-1.1525 1.00-1.20×1.00-1.1026 0.98-1.10×0.90-1.1027 0.90-1.10×1.00-1.152案例2某男，71歲，長期體質(zhì)虛弱，2001年12月15日服用旋毛形線蟲致弱苗4000個蟲體，20天后有輕微發(fā)熱反應(yīng)，采用藥物校正，轉(zhuǎn)為正常，三個月后體質(zhì)恢復(fù)，至今精力充沛，頭發(fā)變黑，未發(fā)生感冒。
本發(fā)明的積極效果在于旋毛形線蟲細胞苗可達到旋毛形線蟲致弱苗免疫的效果，易大量制備，成本低，安全、療效高，作用范圍廣。旋毛形線蟲致弱苗制備容易，使用方便，成本低，效果好，作用范圍廣。旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)成份單一，作用目標明確。
具體實施例方式實施例1旋毛形線蟲細胞苗制備
無菌收集旋毛形線蟲5000條，放入研缽中將蟲體研碎，用0.25％胰酶消化30min制成細胞懸液，用PH7.2PBS離心洗滌三次，再用改良的RPMI1640培養(yǎng)液將細胞沉淀物制成懸液，分裝于3個容量為30ML且預(yù)先用膠原包被的細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，塞上膠塞，37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，待細胞基本長成單層時，倒掉上懸液，用GNH(即Hanks氏液配方中去掉鈣鹽、鎂鹽和磷酸鹽)洗滌一次，用預(yù)溫的0.25％胰酶液浸泡20min使細胞脫鹽，然后離心，倒掉上清液，加入6ml新培養(yǎng)液，混勻，分裝兩瓶，繼續(xù)培養(yǎng)，連續(xù)傳代培養(yǎng)30代，觀察其生長率曲線，細胞集落形成率。
實施例2旋毛形線蟲致弱苗制備將人工感染旋毛形線蟲的大白鼠處死，取肌肉用攪肉機將肌肉攪碎，放入消化液(胃蛋白酶0.5g，鹽酸0.7ml，水100ml)中，消化后收集蟲體，將蟲體放入PBS中以12千倫琴劑量進行Co60照射后保存。
實施例3旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)化學提取法將100,000條蟲體破碎后稱重，放入圓底燒瓶中加適量70％乙醇浸泡過夜，后加熱回流2-3h，過濾，濃縮乙醇提取液，剩余殘渣繼續(xù)使用70％乙醇加熱回流4-5次，合并乙醇濃縮液，剩余殘渣再用水煮沸2次，濃縮水煮液，合并至乙醇濃縮液中，殘渣曬干稱重備用。取部分乙醇濃縮液加適量石油醚萃取多次，剩余殘渣繼續(xù)用乙酸乙酯萃取多次。最后獲得乙醇總提取物、乙醇總提取物殘渣、石油醚提取物、乙酸乙醚提取物和殘渣5個部分備用。
權(quán)利要求
1.毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途。
2.一種旋毛形線蟲細胞苗制備方法，包括以下步驟無菌收集旋毛形線蟲500-1,000條后，放入改良的RPMI1640或MEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中含動物肌肉蛋白酶消化液，將蟲體研碎后，離心取上清進行原代培養(yǎng)，待細胞基本長成單層后，倒掉上懸液加入新的培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)，待細胞傳至30代后，測定其生長率曲線、細胞集落形成率及傳代細胞染色體數(shù)。
3.一種旋毛形線蟲致弱苗制備方法，包括以下步驟將旋毛形線蟲通過大白鼠、兔或馬屬動物等，連續(xù)傳代10-15代，其間每隔1個月用旋毛形線蟲接種免疫，共3-5次，收集其蟲體用于人及動物。
4.一種旋毛形線蟲致弱苗制備方法，包括以下步驟直接收集感染旋毛形線蟲動物肌肉中的蟲體，放入PBS中，用10～20千倫琴劑量的鈷-60照射致弱，后用于人及動物。
5.一種旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)制備方法，包括以下步驟將體外培養(yǎng)的旋毛形線蟲排泄分泌物或收集的旋毛形線蟲蟲體破碎后加入不同濃度的有機溶劑如乙醇、石油醚和乙酸乙酯等進行萃取或進行生化分離提取，獲得不同的生物活性物質(zhì)， 經(jīng)濃縮、滅菌處理后分裝。
全文摘要
發(fā)明公開了一種毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途，同時提供了相應(yīng)的藥物制劑旋毛形線蟲細胞苗、旋毛形線蟲致弱苗、旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)。通過肌肉接種旋毛形線蟲細胞苗、經(jīng)口接種旋毛形線蟲致弱苗于人或動物體內(nèi)，通過注射或經(jīng)口給旋毛形線蟲生物活性物質(zhì)于人或動物體內(nèi)，使其產(chǎn)生復(fù)雜的天然抗原物質(zhì)，來增強人和動物免疫力，進而達到防治人和動物免疫功能低下或缺陷引起疾病之目的，同時也可作防治人和動物旋毛形線蟲病的蟲苗。
文檔編號A61K39/00GK1439428SQ03111080
公開日2003年9月3日 申請日期2003年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月25日
發(fā)明者張西臣, 李建華, 尹繼剛 申請人:中國人民解放軍軍需大學