專利名稱：含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及保健制品及其制備領域，具體地講是涉及一種能夠增強機體免疫力的保健品及制備方法，尤其涉及一種含有粘細菌子實體或粘細菌子實體的浸提物的增強機體免疫力的保健品及制備方法。
粘細菌是一類具有特殊社會學行為特征和復雜發(fā)育生活史的可滑動的單細胞細菌。粘細菌通過滑動運動，可以在固體培養(yǎng)基上，特別是貧瘠的培養(yǎng)基上發(fā)育形成薄的膜狀擴展菌落。在一定條件下，粘細菌的細胞可以聚集并發(fā)育形成子實體結構——由堅硬度不同的分化的細胞和粘孢子組成的簡單或復雜的休眠體。作為最高等的原核生物，粘細菌特殊的社會行為現(xiàn)象和多細胞形態(tài)發(fā)生在進化上不僅高于一般原核生物，而且與真核生物有著極大的相似性，被認為是原核生物和真核生物間界面上的微生物類群。粘細菌豐富的次級代謝產物使粘細菌在保健品開發(fā)中成為極有潛力的資源。
以粘細菌的子實體或子實體的浸提物為主要原料制成的保健品，經體內試驗證明無毒，并具有提高機體免疫力的效果，經過文獻和專利的檢索，由粘細菌子實體或其浸提物制備的增強免疫力的保健品在國內外技術文獻或專利中未見報道。
本發(fā)明是通過如下的技術方案實現(xiàn)的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其成分中粘細菌子實體或其浸提物的重量百分含量為60％-90％。
上述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其成分中還可以包括如下重量百分含量的輔料靈芝孢子粉或蟲草粉 4-30％蔗糖3-5％焦糖1-5％蜂蜜2-4％西洋參香精或果味香精0-0.5％上述的粘細菌子實體可以是新鮮子實體，或干燥保存的粘細菌子實體粉，或粘細菌子實體的孢子，或粘細菌子實體的浸提物。
上述粘細菌子實體的浸提物是粘細菌子實體水浸提物或粘細菌子實體有機溶劑浸提物。
上述粘細菌子實體水浸提物是用80℃熱水洗提，由洗提液經減壓蒸發(fā)濃縮，80℃烘干制成。
上述粘細菌子實體有機溶劑浸提物是指由極性有機溶劑浸提制成的粘細菌子實體極性有機溶劑浸提物和/或由非極性有機溶劑浸提制成的粘細菌子實體非極性有機溶劑浸提物。
上述粘細菌子實體極性有機溶劑浸提物是由甲醇或乙醇對粘細菌子實體進行浸提，浸提液經過60℃的減壓蒸發(fā)，除盡有機溶劑制成。
上述粘細菌子實體非極性有機溶劑浸提物是由二氯甲烷或石油醚對極性有機溶劑浸提過的樣品再次浸提，浸提液經過40℃的減壓蒸發(fā)，除盡有機溶劑制成。
上述含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品的制備方法，是利用藥劑學的常規(guī)方法，將粘細菌的子實體或子實體粉及輔料以重量百分比混合，制成口服沖劑或片劑或膠囊。
上述含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品的制備方法，是利用藥劑學的常規(guī)方法，將粘細菌的子實體的浸提物及輔料以重量百分比混合，制成口服沖劑或片劑或膠囊。
本項發(fā)明的創(chuàng)造性在于1)、開創(chuàng)了以粘細菌的子實體為材料進行藥物開發(fā)的新思路，2)、以粘細菌的子實體或子實體的浸提物為主要原料制備藥物，能夠起到明顯增強機體免疫力的效果。3)、通過體內試驗證明了粘細菌子實體是在醫(yī)療保健方面具有很高價值的應用材料。4)、通過粘細菌子實體或子實體的浸提物與靈芝孢子粉等輔料的合理配比，增強機體免疫力的效果更顯著。
本發(fā)明的含粘細菌子實體的增強免疫力的保健品和及其制備方法，為有效利用粘細菌子實體制備增強免疫力的保健品開創(chuàng)了一條新的途徑，所涉及的粘細菌子實體或其浸提物為新型藥物開發(fā)提供了良好的材料，并且本發(fā)明制備的藥物生產方法簡單，成本低，具有很好的經濟效益和市場前景。
下面結合動物實驗，對本發(fā)明的含粘細菌子實體的增強免疫力的保健品在藥理學和毒理學以及增強機體的非特異性免疫能力方面的功能效果作進一步說明1.毒性試驗實驗動物成年健康KM小鼠，合格證號2000 01 004，共50只，雌雄各半，體重22-26克，由山東省衛(wèi)生防疫站提供。
實驗方法動物稱重，編號，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。其中的4組為實驗組，1組為對照組。
采用灌喂口服給藥，具體操作見表一表一組別樣品名稱給藥濃度(mg/m1) 給藥量(m1)第1組子實體懸浮液 5 1.0第2組子實體水浸提物 3 1.0第3組子實體極性有機溶劑浸提物 1 1.0第4組子實體非極性有機溶劑浸提物 1 1.0對照組 蒸餾水 1.0
連續(xù)給藥7天，觀察其毒作用表現(xiàn)，包括小鼠外部特征變化及死亡情況，停藥后連續(xù)觀察3天，第11天稱重后脫椎處死。實驗結果見表二表二組 樣品名稱 實驗前平均體重實驗后平均體重 死亡率別 (X±SD) (X±SD) (％)第1組 子實體懸浮液 25.2±0.3532.5±1.68 0第2組 子實體水浸提物25.3±0.4530.2±1.81 0第3組 子實體極性有機溶劑浸提物 24.6±1.3631.1±1.45 0第4組 子實體非極性有機溶劑浸提物24.9±0.4630.6±1.54 0對照組 蒸餾水23.6±0.5028.8±2.22 0結論經口給小鼠試驗樣品7天，毒作用觀察結果為小鼠均生長發(fā)育正常，被毛濃密而光澤，運動活潑，鼻腔、空腔、耳道、眼、肛門及生殖器官均未見異常，LD50計算結果也說明該樣品無毒。
2.非特異性免疫試驗——小鼠碳廓清試驗實驗動物普通級KM小鼠20只，體重20±2克，雌性。魯抗醫(yī)藥集團提供，合格證號魯動200008001。
實驗樣品粘細菌子實體水浸提物和有機溶劑浸提物的混合物，用水配成5mg/ml濃度。
主要試劑印度墨汁(進口) 濟南豪普醫(yī)療器械有限公司。Na2CO3天津市天達凈化材料精細化工廠生產。
實驗方法KM小鼠稱重、編號、分組。其中樣品組、對照組各10只，分籠飼養(yǎng)。灌胃28天(灌胃前禁食4小時以上)。
灌喂劑量樣品組1.0ml/只.日對照組正常飲水飼養(yǎng)正常飼喂，保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度25±2℃，溫度60±5％操作步驟灌胃結束后第一天，每只小鼠按0.01ml/g量，尾靜脈注射20％印度墨汁。注射后分別于3分鐘及15分鐘眼眶靜脈叢取血20ul溶于2ml 0.1％Na2CO3溶液中，搖勻。上述溶液于600nm波長，0.1％ Na2CO3溶液為對照。測吸光度(A)。小鼠脫椎處死，解剖剝離肝臟及脾臟，分別稱重。
實驗結果按公式K＝(logA1-logA2)/(t2-t1)，計算未校正碳廓清指數(shù)。按公式
計算校正碳廓清指數(shù)。結果見表三。
表三樣品對小鼠巨噬細胞功能的影響
從計算結果可知樣品可明顯增強機體的非特異性免疫能力。3.特異性免疫試驗——50％溶血試驗測定血清中總補體活性實驗動物普通級KM小鼠20只，體重20±2克，雌性，魯抗醫(yī)藥集團提供。合格證號魯動200008001。
實驗樣品粘細菌子實體水浸提物和有機溶劑浸提物的混合物，用水配成5mg/ml濃度。
主要試劑溶血素(兔抗羊紅細胞抗體)衛(wèi)生部上海生物制品研究所生產。綿羊血 濟南市醫(yī)學科學研究所提供。巴比妥緩沖液(PH7.4) 實驗室配制。
實驗方法KM小鼠稱重，編號，分組。其中樣品組、對照組各10只，分籠飼養(yǎng)。灌胃28天(灌胃前禁食4小時以上)。
灌喂劑量樣品組1.0ml/只.日對照組正常飲水飼養(yǎng)正常飼喂，保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度25±2℃，溫度60±5％操作步驟灌胃結束后第一天，上述小鼠腹腔注射5％綿羊紅細胞懸液0.5ml/只。免疫后第5天，稱體重，摘取眼球取血，分離血清后，立即進行補體活性測定。制備2％的綿羊紅細胞懸液，同時對該懸液進行標準化試驗。進行溶血素效價滴定，制備2單位溶血素溶液。比色用標準管配制。1ml 2％羊紅細胞懸液加入4ml蒸餾水。50％溶血取2ml上述稀釋的血液液體加入2ml巴比妥緩沖液。稀釋待檢血清樣品組做1∶2稀釋，對照做1∶2稀釋。將各試驗管依次加入1∶2稀釋血清、巴比妥緩沖液、2單位溶血素、2％羊血紅細胞，搖勻。
上述所有試管2500轉/分，離心5分鐘。
上述試管與50％溶血標準管均以巴比妥緩沖液為空白對照，波長542nm測吸光度。實驗結果見表四。
表四
50％溶血管吸光度為0.269結果處理分析選擇與50％溶血管吸光度值最接近的測試管吸光度值為計算標準，由表四可知，最接近的是8號動物的3號測試管，其吸光度值為0.232。
血清總補體活性(U/ml)＝1/血清用量×稀釋倍數(shù)＝1/0.32×2＝6.66(U/ml)通過與對照組結果比較，說明纖維堆囊菌子實體提取物可以提高小鼠血清中補體的活性。
4.免疫器官變化試驗——小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)測定實驗動物普通級KM小鼠20只，體重20±2克，雌性，魯抗醫(yī)藥集團提供.合格證號魯動200008001。
實驗樣品粘細菌子實體水浸提物和有機溶劑浸提物的混合物，用水配成5mg/ml濃度。
主要試劑綿羊血 濟南市醫(yī)學科學研究所提供。實驗方法KM小鼠稱重，編號，分組。其中樣品組、對照組各10只，分籠飼養(yǎng)。灌胃28天(灌胃前禁食4小時以上)灌喂劑量樣品組1.0ml/只.日對照組正常飲水飼養(yǎng)正常飼喂，保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度25±2℃，溫度60±5％操作步驟灌胃結束后第一天，上述小鼠腹腔注射5％綿羊紅細胞懸液0.5ml/只。免疫后第5天，稱體重，眼框放血后脫椎處死，解剖，剝取脾臟、胸腺。電子天平稱取脾臟、胸腺的重量。
實驗結果見表五和表六。
表五樣品對小鼠體重的影響
表六樣品對小鼠臟器/體重比值的影響
結論由試驗可知，子實體提取物可使小鼠主要免疫器官胸腺增重，從而起到增強機體免疫功能的作用。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明實施例1一種含有粘細菌子實體水浸提物的增強免疫力的口服液保健品及其制備方法。
具體步驟如下(1)粘細菌子實體的準備及處理取培養(yǎng)制備的粘細菌子實體直接新鮮使用，或將粘細菌的子實體干燥后制粉備用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料與輔料粘細菌子實體70％，靈芝孢子粉30％。
(3)水浸提物的制備將(2)配制的原料用80℃熱水洗提，提洗液經減壓蒸發(fā)濃縮，80℃烘干制成水浸提物。
(4)口服液的制備將(3)的水浸提物稱重，加入其重量百分比的蔗糖3.5％，焦糖2％，蜂蜜4％，西洋參香精(或其他果味香精)0.5％，用20倍純凈水溶解，調pH至6.5，分裝至10ml/支玻璃小瓶中，然后高壓順時滅菌，即得含有粘細菌子實體水浸提物的增強免疫力的口服液保健品。
實施例2一種含有粘細菌子實體有機溶劑浸提物的增強免疫力的口服沖劑保健品及其制備方法。具體步驟如下(1)粘細菌子實體的準備及處理取培養(yǎng)制備的粘細菌子實體直接新鮮使用，或將粘細菌的子實體干燥后制粉備用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料與輔料粘細菌子實體90％，靈芝孢子粉10％。
(3)甲醇浸提物的制備將(2)制備的原料用極性有機溶劑甲醇浸提，浸提液經60℃減壓蒸發(fā)濃縮，除盡有機溶劑，制成甲醇浸提物。
(4)二氯甲烷浸提物的制備將(3)甲醇浸提后的樣品用非極性有機溶劑二氯甲烷浸提，浸提液經40℃減壓蒸發(fā)濃縮，除盡有機溶劑，制成二氯甲烷浸提物。
(5)口服沖劑藥物的制備將(3)和(4)的浸提物稱重后，等比混合。按本技術領域人員公知的方法將上述混合浸提物制備成規(guī)格為10克/包的沖劑；或以上述混合浸提物為主料，以蔗糖、淀粉為輔料，以重量比為70-95∶30-5的比例，再加入極少量的檸檬酸、甘露糖添加劑，混合，制粒，烘干，整粒，制成規(guī)格為10克/包沖劑。
實施例3一種含有粘細菌子實體有機溶劑浸提物的增強免疫力的口服沖劑保健品及其制備方法。具體步驟如下(1)粘細菌子實體的準備及處理取培養(yǎng)制備的粘細菌子實體直接新鮮使用，或將粘細菌的子實體干燥后制粉備用。
(2)以重量百分比100％的比例選取、制備粘細菌子實體。
(3)乙醇浸提物的制備將(2)制備的原料用極性有機溶劑乙醇浸提，浸提液經60℃減壓蒸發(fā)濃縮，除盡有機溶劑，制成乙醇浸提物。
(4)石油醚浸提物的制備將(3)乙醇浸提后的樣品用非極性有機溶劑石油醚浸提，浸提液經40℃減壓蒸發(fā)濃縮，除盡有機溶劑，制成石油醚浸提物。
(5)口服沖劑藥物的制備將(3)和(4)的浸提物稱重后，等比混合。按本技術領域人員公知的方法將上述混合浸提物制備成規(guī)格為10克/包的沖劑；或以上述混合浸提物為主料，以蔗糖、淀粉為輔料，以重量比為70-90∶30-10的比例，再加入極少量的檸檬酸、甘露糖添加劑，混合，制粒，烘干，整粒，制成規(guī)格為10克/包沖劑。
實施例4
一種含有粘細菌子實體有機溶劑浸提物的增強免疫力的口服囊保健品及其制備方法。具體步驟如下(1)粘細菌子實體的準備及處理取培養(yǎng)制備的粘細菌子實體直接新鮮使用，或將粘細菌的子實體干燥后制粉備用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料與輔料粘細菌子實體80％，蟲草粉20％。
(3)甲醇浸提物的制備將(2)制備的原料用極性有機溶劑甲醇浸提，浸提液經60℃減壓蒸發(fā)濃縮，除盡有機溶劑，制成甲醇浸提物。
(4)二氯甲烷浸提物的制備將(3)甲醇浸提后的樣品用非極性有機溶劑二氯甲烷浸提，浸提液經40℃減壓蒸發(fā)濃縮，除盡有機溶劑，制成二氯甲烷浸提物。
(5)口服膠囊藥物的制備將(3)和(4)的浸提物稱重后，等比混合。按本技術領域人員公知的方法將上述混合浸提物制備成規(guī)格為100mg/囊的口服膠囊?；驅⑸鲜龌旌辖嵛镆灾亓堪俜直扔?，加入2％的蔗糖，8％的淀粉，粉碎、磨細、混勻，以淀粉漿為黏合劑，制成細小顆粒，裝入膠囊中制成規(guī)格為100mg/囊的口服膠囊。
實施例5一種含有粘細菌子實體的增強免疫力的口服片劑保健品及其制備方法。
具體步驟如下(1)粘細菌子實體的準備及處理取培養(yǎng)制備的粘細菌子實體直接新鮮使用，或將粘細菌的子實體干燥后制粉備用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料與輔料粘細菌子實體85％，靈芝孢子粉15％。
(3)口服片劑藥物的制備將(2)中的原料混合后，按本技術領域人員公知的方法，以重量百分比計，加入2％的蔗糖，8％的糊精為輔料，制粒，干燥，壓片，制成片劑。片劑的規(guī)格為100mg/片。
權利要求
1.一種含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其成分中粘細菌子實體或其浸提物的重量百分含量為60％-90％。
2.如權利要求1所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其成分中還可以包括如下重量百分含量的輔料靈芝粉孢子或蟲草粉 4-30％蔗糖 3-5％焦糖 1-5％蜂蜜 2-4％西洋參香精或果味香精 0-0.5％
3.如權利要求1或2所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其特征在于所述的粘細菌子實體可以是新鮮子實體，或干燥保存的粘細菌子實體粉，或粘細菌子實體的孢子，或粘細菌子實體的浸提物。
4.如權利要求3所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其特征在于所述粘細菌子實體的浸提物是粘細菌子實體水浸提物或粘細菌子實體有機溶劑浸提物。
5.如權利要求4所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其特征在于所述粘細菌子實體水浸提物是用80℃熱水洗提，由洗提液經減壓蒸發(fā)濃縮，80℃烘干制成。
6.如權利要求4所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其特征在于所述粘細菌子實體有機溶劑浸提物是指由極性有機溶劑浸提制成的粘細菌子實體極性有機溶劑浸提物和/或由非極性有機溶劑浸提制成的粘細菌子實體非極性有機溶劑浸提物。
7.如權利要求6所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其特征在于所述粘細菌子實體極性有機溶劑浸提物是由甲醇或乙醇對粘細菌子實體進行浸提，浸提液經過60℃的減壓蒸發(fā)，除盡有機溶劑制成。
8.如權利要求6所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品，其特征在于所述粘細菌子實體非極性有機溶劑浸提物是由二氯甲烷或石油醚對極性有機溶劑浸提過的樣品再次浸提，浸提液經過40℃的減壓蒸發(fā)，除盡有機溶劑制成。
9.如權利要求1或2所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品的制備方法，其特征在于利用藥劑學的常規(guī)方法，將粘細菌的子實體或子實體粉及輔料以重量百分比混合，制成口服沖劑或片劑或膠囊。
10.如權利要求1或2所述的含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品的制備方法，其特征在于利用藥劑學的常規(guī)方法，將粘細菌的子實體的浸提物及輔料以重量百分比混合，制成口服沖劑或片劑或膠囊。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有粘細菌子實體的增強免疫力的保健品及制備方法，該藥物是以粘細菌的子實體或其浸提物為主要原料，配以常規(guī)輔料組成；經粘細菌的子實體或其浸提物及輔料以重量百分比混合后，采用藥劑學的常規(guī)方法，制成口服藥物。動物實驗證明，由粘細菌子實體及其浸提物制備的該類口服制劑無毒，無副作用，可以較顯著地增強機體免疫力。
文檔編號A61P37/00GK1435253SQ0311189
公開日2003年8月13日 申請日期2003年2月27日 優(yōu)先權日2003年2月27日
發(fā)明者李越中, 劉新利, 扈錫濤, 胡瑋, 韓冠君, 夏志潔 申請人:山東大學