專利名稱：王棗子乙素作為免疫抑制劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中草藥中活性成分的新的適應(yīng)癥，具體地說是中草藥王棗子中活性成分王棗子乙素作為免疫抑制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
王棗子(Rabdosia amethytoides)系唇形科香茶菜屬植物中的一種，是民間常用草藥，用于抗菌消炎等。江蘇省1989年中藥材標(biāo)準(zhǔn)已收載。
在正常情況下，人體的免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)體有三個(gè)方面的作用，即抵抗外來因子入侵的防御作用，維持自身平衡和穩(wěn)定的作用，消除突變細(xì)胞的監(jiān)視作用。一旦免疫反應(yīng)異常，均能引起組織損害而致病，稱免疫性疾病。免疫性疾病有兩種，一種是免疫功能低下引起的，稱免疫缺陷病；另一種是免疫功能超常引起的，稱自身免疫性疾病(自身免疫病、超敏反應(yīng)等)。又分器官特異性和系統(tǒng)性自身免疫病兩種，前者病變限于某一特定器官，后者病變危及多種器官和組織，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、多肌炎等。(《病理學(xué)》、第三版、武忠弼主編，人民衛(wèi)生出版社1995年4月出版)。
關(guān)于香茶菜屬類植物調(diào)節(jié)免疫功能的作用，所公開的多是增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，也就是適應(yīng)免疫缺陷癥。如《大萼香茶菜總二萜對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用》一文指出總二萜對正常及免疫功能低下小鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫機(jī)能均有顯著促進(jìn)作用(《中藥材》1999.22(7)p348～350)?！段踩~香茶菜對荷瘤小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究》一文指出尾葉香茶菜的抗腫瘤機(jī)制與提高荷瘤機(jī)體的細(xì)胞免疫功能有關(guān)(《中國中醫(yī)藥科技》2000.7(2).p89～89)。
自身免疫病(Autoimmunity disease，AID)是嚴(yán)重危害人類健康的常見難治性疾病之一，目前尚無滿意的治療藥物。長期以來，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)施的標(biāo)準(zhǔn)治療是激素非特異性免疫抑制療法，但只能改善癥狀，卻無法消除病因，且副作用較大。
近年來，有關(guān)天然藥物治療自身免疫性疾病的相關(guān)研究是藥學(xué)界的研究熱點(diǎn)。從目前對天然藥物治療自身免疫病的相關(guān)藥理學(xué)研究來看，天然藥物比目前臨床使用的西藥有著明顯的優(yōu)勢，其主要是通過免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及影響神經(jīng)遞質(zhì)而發(fā)揮治療自身免疫疾病的作用。天然藥物的免疫藥理作用不是獨(dú)立于其他功能的單一作用，而是緊密與神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)(NIM)相聯(lián)系的統(tǒng)一的功能系統(tǒng)。因此，國內(nèi)外把從自然界中尋找治療自身免疫性疾病的藥物作為此類藥物研究的首選方法。
安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所王先榮等對王棗子中的活性成份進(jìn)行過系統(tǒng)的研究，從中分離出王棗子甲素、乙素和丙素，均有貝克杉烷型(ent-kaurane)二萜基本骨架。甲素經(jīng)Jone’s試劑氧化可轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜?，丙素?％草酸水溶液處理，C14-乙?；凰夂笠噢D(zhuǎn)化為乙素，從而確立王棗子乙素的結(jié)構(gòu)為
《王棗子的新二萜-王棗子甲素》(《中草藥》1982年第13卷第6期p.12～13。

發(fā)明內(nèi)容
申請人曾就王棗子水煎液和醇提液在免疫功能影響方面對小鼠作了體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，水煎液和醇提液的含藥血清均能抑制淋巴細(xì)胞增殖，具有免疫抑制作用，并于2003年2月21日申請了發(fā)明專利(申請?zhí)?3112870.X)。在此基礎(chǔ)上，申請人進(jìn)一步分離提取液，采用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)方法追蹤活性部位，最終尋找到王棗子乙素是王棗子免疫抑制作用的有效成分。
研究結(jié)果表明，王棗子乙素能顯著抑制ConA及LPS誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，可抑制細(xì)胞免疫及體液免疫，具有較強(qiáng)的免疫抑制作用，可作為免疫抑制劑使用。臨床上，可以對系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、慢性腎炎、自身免疫性溶血性貧血、結(jié)核病等自身免疫性疾病以及器官移植進(jìn)行運(yùn)用治療。
具體實(shí)施例方式
1、王棗子粗粉用乙醇或丙酮回流提取得到提取液，用活性炭或石油醚脫色(葉綠素)，減壓脫溶得到浸膏，用乙酸乙酯再萃取，萃取物通過硅膠柱層析，用氯仿-丙酮遞增洗脫，其中氯仿-丙酮(10∶1)洗脫液中得到目標(biāo)產(chǎn)物王棗子乙素，脫去溶劑便得到無色針晶狀王棗子乙素。
2、用王棗子乙素和雷公藤多甙進(jìn)行免疫抑制作用的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)見下表1、表2。
表1王棗子乙素及雷公藤多甙對伴刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響組別濃度(mg/L)0.001 0.01 0.1 1 10 100SI 0.237±0.046**Δ 0.258±0.022**ΔΔ 0.303±0.027**0.214±0.033**Δ0.199±0.019**Δ0.204±0.025**ΔΔL 0.300±0.040**0.297±0.027*Δ 0.302±0.024**0.236±0.023**0.224±0.022**0.229±0.039**D 0.408±0.092 0.371±0.027*0.300±0.042**0.273±0.037**0.286±0.057**0.279±0.030**ConA單純刺激 0.534±0.131同上，分解組別 濃度(mg/L)0.001 0.01 0.1王棗子乙素(SI) 0.237±0.046**Δ 0.258±0.022**ΔΔ 0.303±0.027**雷公藤多甙(L)0.300±0.040**0.297±0.027*Δ 0.302±0.024**助溶劑(DMS0) 0.408±0.092 0.371±0.027*0.300±0.042**ConA單純刺激 0.534±0.131組別 濃度(mg/L)1 10 100王棗子乙素(SI) 0.214±0.033**Δ 0.199±0.019**Δ 0.204±0.025**ΔΔ雷公藤多甙(L)0.236±0.023**0.224±0.022**0.229±0.039**助溶劑(DMS0) 0.273±0.037**0.286±0.057**0.279±0.030**ConA單純刺激 0.534±0.131*表示與ConA單純刺激組比較，P＜0.05，**表示與ConA單純刺激組比較，P＜0.01；Δ表示與相同濃度的DMS0比較，P＜0.05，ΔΔ表示與相同濃度的DMS0比較，P＜0.01。
結(jié)果表明，王棗子乙素(0.001mg/L、0.01mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)及雷公藤多甙(0.01mg/L)能顯著抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，具有細(xì)胞免疫抑制作用。
表2王棗子乙素及雷公藤多甙對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響組別 濃度(mg/L)0.001 0.010.1 1 10 100SI 0.211±0.041**0.194±0.025**0.208±0.011**0.185±0.035**0.218±0.022**0.163±0.014**L 0.325±0.0390.225±0.061**0.231±0.042**0.247±0.016**0.185±0.020**0.181±0.019**LPS單純刺激0.321±0.010同上，分解組別 濃度(mg/L)0.0010.010.1 1王棗子乙素(SI) 0.211±0.041**0.194±0.025**0.208±0.011**0.185±0.035**雷公藤多甙(L)0.325±0.0390.225±0.061**0.231±0.042**0.247±0.016**LPS單純刺激 0.321±0.010組別 濃度(mg/L)110100王棗子乙素(SI) 0.185±0.035**0.218±0.022**0.163±0.014**雷公藤多甙(L)0.247±0.016**0.185±0.020**0.181±0.019**LPS單純刺激 0.321±0.010
*表示與LPS單純刺激組比較，P＜0.05，**表示與ConA單純刺激組比較，P＜0.01。
結(jié)果表明，王棗子乙素(0.001mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)及雷公藤多甙(0.01mg/L)能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，具有體液免疫抑制作用。
權(quán)利要求
1.王棗子乙素作為免疫抑制劑的應(yīng)用，其特征在于王棗子乙素作為制備治療自身免疫疾病藥物的應(yīng)用。
全文摘要
王棗子乙素作為免疫抑制劑的應(yīng)用，就是王棗子乙素作為制備治療自身免疫疾病藥物的應(yīng)用。王棗子乙素是中草藥王棗子中的一種活性成分。經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)表明，其能顯著抑制ConA誘導(dǎo)的和LPS誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，具有細(xì)胞免疫抑制和體液免疫抑制作用。在臨床上可望治療各種自身免疫性疾病。
文檔編號A61P37/06GK1541643SQ0311336
公開日2004年11月3日 申請日期2003年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月29日
發(fā)明者李云森, 韓正賓, 許偉國, 陳子珺, 邱曉林, 王樹新 申請人:宿州綠源中醫(yī)藥科技有限公司