專利名稱：一種含柘木提取物的固體制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制劑及制備方法。具體涉及一種含柘木提取物的固體制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
柘木為?？畦蠈僦参顲udrania tricuspidata(Carr.)Bun.落葉灌木或小喬木，其功能為清熱涼血，近代民間用于消化道腫瘤。主要化學成分為黃酮類、氧雜蒽酮類及多糖生物堿類，70年代至90年代，國內(nèi)外學者(中日韓)對柘木抗癌作用進行研究，基本確認黃酮類化合物是柘木抗癌、抑癌有效成分，多糖參與了免疫調(diào)節(jié)，對抗癌具有協(xié)同作用。
在國內(nèi)，有關(guān)柘木的藥品開發(fā)始于60年代，研發(fā)成功的制劑為糖漿劑，并收載于部頒藥品標準。經(jīng)臨床使用，證實柘木糖漿對消化道腫瘤患者化療或放療有輔助治療作用，并能改善病人的生活質(zhì)量。然而作為糖漿劑，柘木糖漿無定量標準，存在著諸多質(zhì)量不穩(wěn)定因素，如產(chǎn)氣、沉淀嚴重等，并有較多防腐劑加入，產(chǎn)品攜帶、運輸也不便，因此提高該產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，解決現(xiàn)有糖漿劑存在的問題，以適應(yīng)現(xiàn)代用藥的需求已顯得更為迫切。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是在現(xiàn)有柘木糖漿劑的基礎(chǔ)上，提高柘木提取物的活性成份純度，提供一種質(zhì)量指標可控、穩(wěn)定，療效確切的新型含柘木提取物的固體制劑。
本發(fā)明公開的含柘木提取物的固體制劑是由重量比為柘木活性成份提取浸膏∶藥用輔料＝4-8∶6-2組成的顆粒劑、片劑、膠囊劑或干糖漿劑等，其中柘木活性成份提取浸膏黃酮含量為3-40％，采用UV法測定；7-葡萄糖-山奈酚(populnin)含量為0.3-4％，采用HPLC法測定。
本發(fā)明所述藥用輔料為制備固體制劑常用之輔料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、低取代羥丙纖維素、蔗糖、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、滑石粉、可溶性淀粉、麥芽糊精、微粉硅膠和矯味劑等。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是公開上述柘木固體制劑的制備方法。
本發(fā)明所述含柘木提取物的固體制劑制備包括下列步驟(一)柘木總提取物制備柘木小塊以0％-60％醇水溶液每次5-10倍回流提取2次，每次1-5小時，合并提取液減壓濃縮至相對密度1.06-1.07(80℃±10)，黃酮含量3-10％，populnin含量0.3-10％；(二)柘木提取物純化浸膏的制備將步驟(一)得到的濃縮液通過填有吸附介質(zhì)的柱，然后用0-95％醇水溶液梯度洗脫，收集50-90％醇之間洗脫液，濃縮、干燥、得到富含黃酮有效部位的浸膏粉；黃酮含量10-40％，populnin含量1-4％。
(三)固體制劑的制備將上述步驟(二)獲得的純化浸膏按配比與藥用輔料，以常規(guī)方法制成顆粒劑、片劑、膠囊劑或干糖漿劑等。
本發(fā)明制備方法中所使用的醇選自低級脂肪醇；所使用的吸附介質(zhì)選自中低極性的大孔樹脂、聚酰氨、硅膠或纖維素等。
本發(fā)明柘木活性成份提取物主要含黃酮、多糖類物質(zhì)、黃酮中又可分甙與甙元二部分。Populnin是柘木中黃酮甙類化合物之一，結(jié)構(gòu)為7-葡萄糖-山奈酚，可從柘木提取物中經(jīng)硅膠、C18、凝膠等柱分離得到，其結(jié)構(gòu)經(jīng)UV、EI-MS、ESI-MS、及H-NMR光譜確認。
本發(fā)明對柘木提取物重點控制總黃酮和popunin的含量，可采用TLC法定性測定，再采用UV法和HPLC法定量測定，具體方法如下
1.TLC法定性取柘木提取物或制劑，經(jīng)常規(guī)處理后與populnin對照品溶液一起，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶3∶1)為展開劑，展開取出，噴灑AlCl3乙醇液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜的位置上，顯相同黃綠熒光斑點。
2.UV法定量取一定量的提取物或制劑，經(jīng)常規(guī)處理后，制成樣品溶液，另配制一定濃度的populnin對照品溶液。各加一定量AlCl3及醋酸鉀溶液后，照分光光度法(中國藥典2000版，附錄VB)，在420nm的波長處測定吸收度，計算總黃酮含量。本定量法對照品亦可用蘆丁替代。
3.HPLC法定量取一定量的供試品溶液與對照品溶液，照高效液相色譜法(中國藥典2000版，附錄VID)注入液相色譜儀，測定populnin含量。檢測波長265nm，流動相水-甲醇(60∶40)。
對本發(fā)明含柘木提取物固體制劑進行穩(wěn)定性對照試驗對包裝的柘木顆粒進行了加速穩(wěn)定性試驗，試驗條件為溫度37℃，相對濕度75％，放置三個月，在0月、1月、2月、3月分別檢查顆粒水分、顆粒粒度、溶化性、衛(wèi)生學指標，實施了TLC鑒別，測定了顆粒的黃酮的含量。在試驗期間，檢查項目均符合現(xiàn)行版中國藥典的要求，鑒別試驗和含量測定值無顯著性變化。
對本發(fā)明柘木提取物進行有關(guān)毒理和藥效試驗一、毒理學研究柘木提取物最大給藥量測定柘木提取物灌胃給小鼠7、14、28g/kg，其最高劑量相當生藥510g/kg，為臨床使用劑量的101倍，結(jié)果動物無一死亡，亦未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副反應(yīng)。結(jié)論柘木提取物灌胃對小鼠的最大給藥量為28g/kg。
二、藥效試驗1.柘木提取物體外抗腫瘤活性試驗(1)對人HCT-116腸癌細胞生長活性的影響柘木水提取物和柘木醇提物對人HCT-116腸癌細胞的生長活性具有明顯的抑制作用。其中，柘木提取物最小抑瘤濃度為2.5×10-4g/ml；柘木醇提物最小抑瘤濃度為6.3×10-5g/ml。見表1。
表1 對人HCT-116腫瘤細胞生長的抑制率(％)

(2)對人SGC-7901胃癌細胞生長活性的影響柘木水提取物和柘木醇提物對人SGC-7901胃癌細胞的生長活性具有明顯的抑制作用，其最小抑瘤濃度均為2.5×10-4g/ml。見表2。
表2 對人HCT-116腫瘤細胞生長的抑制率(％)

柘木水提取物和柘木醇提物體外給藥，對人HCT-116腸癌細胞或人SGC-7901胃癌細胞均有不同程度的直接抑制作用。
2.柘木提取物抗胃癌作用試驗灌胃給柘木提取物2.6、5.2g/kg，皮下注射氟尿嘧啶注射液100mg/kg，對裸小鼠所荷SGC-7901癌細胞的生長活性均有顯著的抑制作用(P＜0.01或P＜0.05)，其抑瘤率分別為47.9％、32.2％、75.6％。見表3。
表3 柘木提取物對SGC-7901癌細胞株的抑制作用(X±SD)劑量動物數(shù) 腺瘤重量 抑瘤率組別g/kg×d只 g％柘木提取物 20×28 6 0.590±0.236**-47.9柘木提取物 10×28 6 0.768±0.296*-32.2柘木提取物 5×28 6 0.936±0.155-17.4氟尿嘧啶 0.1×4 6 0.276±0.139**-75.6模型對照 6 1.133±0.198
*P＜0.05，**P＜0.05，與模型對照比柘木提取物口服給藥，對人SGC-7901胃癌有抑制作用。
3.柘木提取物對5-TH3受體結(jié)合的抑制試驗表4柘木提取物對5-HT3受體[3H]GR65630結(jié)合的抑制率(％)柘木提取物(mg/ml)藥物0.01 0.11.0柘木提取物 5.15±3.9 11.5±1.7 34.0±4.0柘木提取物在濃度為1mg/ml時特異性結(jié)合的抑制率為34.0±4.0(％)，因此對5-HT3受體[3H]GR65630結(jié)合有一定的抑制作用。顯示其有一定的對抗腫瘤化療時嘔吐的作用。
4.柘木提取物免疫活性試驗(1)對碳粒廓清能力的影響灌胃給柘木提取物0.83g/kg、人參提取物0.16g/kg，每日1次，連續(xù)7日，小鼠吞噬指數(shù)K值和校正吞噬活性α值均有升高，與空白對照比差異顯著(P＜0.05))。見表5。
表5 柘木提取物對小鼠碳粒廓清能力的影響

*P＜0.05，與空白對照比(2)對巨噬細胞吞噬能力的影響灌胃給柘木提取物0.28、0.83g/kg、人參提取物0.16g/kg，每日1次，連續(xù)7日，小鼠對雞紅細胞的吞噬百分率或吞噬指數(shù)均有明顯的提高，與空白對照比，差異顯著或非常顯著(P＜0.05或P＜0.01)。見表6。
表6 柘木提取物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響

*P＜0.05，**P＜0.01，與空白對照比灌胃給柘木提取物0.83/kg，每日1次，連續(xù)7日，能顯著提高小鼠對碳痢廓清的能力；灌胃給柘木提取物0.28、0.83g/kg，每日1次，連續(xù)7日，能明顯提高小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能。
上述試驗表明本發(fā)明含柘木提取物的固體制劑質(zhì)量穩(wěn)定，活性成分含量可控，抗腫瘤效果顯著，無論從劑型還是質(zhì)量均較原糖漿劑有很大的提高，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。
具體實施例方式
實施例1100kg柘木小塊，加水7倍，提取4小時，放出藥液，進行第二次提取，加水5倍，提取時間3小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.07(80℃)，噴霧干燥，得干浸膏粉5kg，黃酮含量3％，populnin含量0.3％。
實施例2100kg柘木小塊，加60％乙醇500kg，提取3小時，放出藥液，進行第二次提取，加醇400kg，提取時間2小時，合并提取液，減壓濃縮至藥液無醇味，過一填有中性大孔樹脂柱，然后用純凈水、20％、40％、60％、80乙醇，收集60-80％乙醇洗脫液并濃縮干燥，得部位提取干浸膏粉1.5kg，黃酮含量40％，populnin含量4％。
實施例3
取實施例1制得的浸膏粉與乳糖按2∶1比例混合，制粒，得到黃棕色顆粒，總黃酮含量2％，populnin含量0.2％。
實施例4100kg柘木小塊，加30％乙醇6倍，提取3小時，放出藥液，進行第二次提取，加同濃度的乙醇5倍，提取時間3小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.07(80℃)，噴霧干燥，得干浸膏粉4.5kg，黃酮含量3％，populnin含量0.3％。取上述稀醇總提取的浸膏粉與輔料按1∶1比例充分混合，制成干糖漿劑。輔料由糖粉、乳糖、可溶性淀粉和CMC(4∶3∶2∶1)組成，總黃酮含量2.0％，populnin含量0.2％。
實施例5取實施例2制得的干浸膏粉(黃酮含量40％)45％，加微晶纖維素35％，低取代羥丙纖維素8％，淀粉8％，混合制粒，內(nèi)加微粉硅膠、硬脂酸鎂各0.5％，壓片，薄膜包衣3％，片重0.5g，每片含黃酮80mg，其中populnin 8mg。
實施例6取實施例2制得的浸膏粉60％，糊精20％、淀粉10％，混合，另取10％量淀粉制漿，用于濕法制粒，干燥后裝填膠囊，粒重0.4，每粒含黃酮70mg，其中populnin 7mg。
權(quán)利要求
1.一種含柘木提取物的固體制劑，其特征在于該制劑是由重量比為柘木活性成份提取浸膏∶藥用輔料＝4-8∶6-2組成的顆粒劑、片劑、膠囊劑或干糖漿劑，其中柘木活性成份提取浸膏黃酮含量為3-40％，7-葡萄糖-山奈酚含量為0.3-4％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固體制劑，其特征在于其中所述的黃酮含量采用UV法測定；7-葡萄糖-山奈酚含量采用HPLC法測定。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固體制劑的制備方法，其特征在于該固體制劑制備包括下列步驟(一)柘木總提取物制備柘木小塊以0％-60％醇水溶液每次5-10倍回流提取2次，每次1-5小時，合并提取液減壓濃縮至相對密度1.06-1.07(80℃±10)，黃酮含量3-10％，populnin含量0.3-10％；(二)柘木提取物純化浸膏的制備將步驟(一)得到的濃縮液通過填有吸附介質(zhì)的柱，然后用0-95％醇水溶液梯度洗脫，收集50-90％醇之間洗脫液，濃縮、干燥、得到富含黃酮有效部位的浸膏粉；黃酮含量10-40％，populnin含量1-4％。(三)固體制劑的制備將上述步驟(二)獲得的純化浸膏按配比與藥用輔料，以常規(guī)方法制成顆粒劑、片劑、膠囊劑或干糖漿劑等。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固體制劑的制備方法，其特征在于其中所述的醇選自低級脂肪醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固體制劑的制備方法，其特征在于其中所述的吸附介質(zhì)選自中低極性的大孔樹脂、聚酰氨、硅膠或纖維素。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含柘木提取物的固體制劑及制備方法。該制劑是由重量比為柘木活性成分提取浸膏藥用輔料＝4－8∶6－2組成的顆粒劑、片劑、膠囊劑或干糖漿劑等，其中柘木活性成分提取浸膏黃酮含量為3－40％，；7－葡萄糖－山奈酚(populnin)含量為0.3－4％。本發(fā)明制劑質(zhì)量穩(wěn)定，活性成分含量可控，抗腫瘤效果顯著，無論從劑型還是質(zhì)量均較原糖漿劑有很大的提高。
文檔編號A61K9/16GK1515294SQ0311476
公開日2004年7月28日 申請日期2003年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月7日
發(fā)明者張國明, 謝家駿 申請人:上海市中藥研究所