專利名稱：白藜蘆醇復(fù)方制劑及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種白藜蘆醇和黃連素組成的復(fù)方制劑及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白藜蘆醇(Resveratrol，簡稱Res)，化學(xué)名芪三酚，屬于多酚類化合物，此化合物最初是作為葡萄屬植物的抗逆物質(zhì)植物抗毒素，以后又相繼在葡萄科(山葡萄屬、爬山虎屬)、百合科(藜蘆屬)、蓼科(蓼屬、大黃屬)、豆科(花生屬、三葉草屬)等多種植物中發(fā)現(xiàn)。自從發(fā)現(xiàn)Res以來，人們陸續(xù)對其進(jìn)行藥理活性研究，發(fā)現(xiàn)它具有非常強(qiáng)的藥理活性，具體表現(xiàn)在以下方面1.抗癌活性從秘魯?shù)亩箍浦参镂褰菦Q明Cassia quinquangulata Rich.根的甲醇提取物中分得其活性成分白藜蘆醇，另外，運(yùn)用另一個抗癌指標(biāo)即抑制牛胸腺的蛋白-酪氨酸激酶(PTK)活性，從葡萄提取物中也分得了白藜蘆醇。
美國科學(xué)家Jang等首次揭示了白藜蘆醇對化學(xué)致癌過程的誘發(fā)、促進(jìn)和發(fā)展三個相關(guān)細(xì)胞活動均有較強(qiáng)的抑制作用，將其列為抑制和治療癌癥的最有前途的藥物之一。
2.抗炎免疫作用花生四烯酸的代謝產(chǎn)物前列腺素(PGs)、白三烯(LTs)等與機(jī)體免疫、炎癥形成有重要的關(guān)系。白藜蘆醇對催化此代謝過程的兩個重要的酶——環(huán)氧化酶和脂氧酶都有抑制作用。
3.對心血管系統(tǒng)作用3.1.對脂類代謝的影響
白藜蘆醇可以顯著抑制動物體內(nèi)肝臟中的甘油三酯和膽固醇的沉積，增加血液中HDL膽固醇的濃度，調(diào)節(jié)LDL膽固醇的比例、阻止LDL的氧化，對于調(diào)節(jié)血脂具有明顯的作用。
3.2.抗血小板聚集血小板花生四烯酸代謝主要產(chǎn)物血栓烷與血小板致密顆粒釋放的ADP在血小板聚集過程中起著重要的作用。白藜蘆醇可以抑制血栓烷的形成。同時還抑制ADP引起的血小板聚集，白藜蘆醇對引起血小板聚集的誘導(dǎo)劑凝血酶和膠原也有抑制作用。1989年，世界衛(wèi)生組織主持的世界心血管疾病控制系統(tǒng)的流行病調(diào)查證實，法國紅葡萄酒中含有的一種叫做白藜蘆醇的活性物質(zhì)，對心血管系統(tǒng)具有特殊的保護(hù)作用，能明顯減少血小板的凝集。
4.抗氧化、清除自由基作用近年來研究發(fā)現(xiàn)酚類物質(zhì)大多具有顯著的抗氧化、抗自由基的作用。Res可以明顯的抑制大鼠紅細(xì)胞的自氧化溶血和由H2O2引起的氧化溶血，對小鼠心、肝、腦、腎的體內(nèi)外過氧化脂質(zhì)的產(chǎn)生有明顯的抑制作用。
Pobushalova等也發(fā)現(xiàn)Res具有很強(qiáng)的抗氧化和抗自由基作用，作者也證明Res對Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的OH-和黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶自由基發(fā)生系統(tǒng)產(chǎn)生的O2有明顯的抑制作用。
5.抗愛滋病作用通過研究表明，白藜蘆醇可以有效的抑制愛滋病的病毒感染，因此作為一種抗愛滋病的前體藥物，在治療愛滋病領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用價值。
飲食與健康的關(guān)系逐漸為人們所認(rèn)識和重視，流行病調(diào)查也揭示了科學(xué)合理的飲食是健康的基礎(chǔ)，且有助于預(yù)防一些疾病的發(fā)生。對食物源性的生物活性物質(zhì)的研究正在廣泛的開展，白藜蘆醇便是目前發(fā)現(xiàn)具有明顯藥理活性的物質(zhì)之一，其作用涉及到抗腫瘤，抗炎免疫，心血管保護(hù)，并擴(kuò)展到神經(jīng)領(lǐng)域。大量的科學(xué)研究表明白藜蘆醇具有非常大的藥用價值，因此對白藜蘆醇的開發(fā)和臨床藥用產(chǎn)品的開發(fā)具有廣闊的市場前景。
黃連素(小檗堿Berberine，ber)是從黃連等植物中提取出的一種異喹啉類生物堿，對多種革蘭氏陽性菌和陰性菌具有抑菌作用，臨床上主要用于清熱解毒和治療腸道感染等疾病。近年來對其藥理作用和臨床研究中，發(fā)現(xiàn)黃連素具有多種非抗菌作用，開發(fā)了許多新的臨床用途如治療心律失常、充血性心力衰竭、高血壓、高酯血癥、早博、預(yù)防癌癥等。
從黃連素幾十年的臨床應(yīng)用來看，可以說明它是一種療效確切、安全性高、副作用小的藥物。但是黃連素的效價低，口服生物利用度低，影響療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于應(yīng)用白藜蘆醇和黃連素具有部分相似的藥理作用及兩者的互補(bǔ)性，設(shè)計一種復(fù)方制劑，從而開拓醫(yī)療領(lǐng)域，克服使用單組分不能治療的癥狀缺陷。
將黃連素和白藜蘆醇兩者聯(lián)合起來，組成一個新的藥物處方。
療效明顯升高1.在調(diào)節(jié)血脂方面對于治療血脂過高癥，黃連素本身具有調(diào)節(jié)血脂的作用，有效的降低TC、TG，其治療效果明顯優(yōu)于多烯康和月見草油。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)在有高血脂高蛋白飲食習(xí)慣的盛產(chǎn)葡萄酒的地區(qū)，冠心病的死亡率卻很低，此即著名的French Paradox現(xiàn)象，這一研究發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇的活性作用。對于白藜蘆醇，大量的藥理實驗證明其具有非常好的調(diào)節(jié)血脂作用，白藜蘆醇是通過調(diào)節(jié)LDL膽固醇的比例，增加血液中HDL膽固醇的濃度，兩者在調(diào)節(jié)血脂方面具有很好的互補(bǔ)作用，將兩者組成一個復(fù)方，可以更有效的調(diào)節(jié)血脂，效果優(yōu)于單用白藜蘆醇和單用黃連素。
2.在抑制腫瘤方面通過有效的藥理研究表明，白藜蘆醇可以明顯的抑制腫瘤的誘發(fā)、促進(jìn)和發(fā)展三個相關(guān)細(xì)胞活動，作為抑制和治療腫瘤的最有前途的藥物之一。白藜蘆醇在體外能顯著抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖，通過特異性的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡而實現(xiàn)，對于正常細(xì)胞的影響較小。黃連素在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)也有抗癌作用，可以抑制癌細(xì)胞對羧胺的利用，從而抑制嘌呤及核酸的合成。將兩者聯(lián)合使用，可以更有效的抑制腫瘤疾病。
新的適應(yīng)癥1.治療愛滋病將白藜蘆醇和黃連素組成復(fù)方藥物，對于愛滋病具有非常明顯的抑制作用。研究表明，黃連素復(fù)方具有非常明顯的抑制愛滋病的病毒感染作用，可以作為治療愛滋病領(lǐng)域的有效藥物。
2.治療老年性癡呆癥目前研究證明酚類物質(zhì)的抗氧化活性是非常強(qiáng)的，白藜蘆醇是屬于多酚類的化合物。自由基與衰老、早老癥以及許多疾病的起因及變化過程密切相關(guān)，白藜蘆醇顯示了非常強(qiáng)的抗氧化活性，它可以有效的清除體內(nèi)多余的自由基，保護(hù)人體內(nèi)血管的硬化，尤其是對于心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用更為明顯。而引起老年性癡呆癥的基本病因之一就是人體內(nèi)的自由基堆積過多，機(jī)體的抗氧化能力降低，免疫力下降，血管硬化；而黃連素復(fù)方可以有效的針對這些癥狀，對于老年性癡呆癥的發(fā)生具有良好的預(yù)防和治療作用。
本發(fā)明提供了一種白藜蘆醇和黃連素的復(fù)方制劑，該制劑包括白藜蘆醇與黃連素作為活性成份，與藥用輔料組成的，其中以含活性成份為1-20％的比例組成，并且白藜蘆醇黃連素為0.1-0.5∶1-10，活性成份中白藜蘆醇與黃連素的重量為1-12％為最佳。
本發(fā)明的白藜蘆醇和黃連素的復(fù)方制劑藥理實驗結(jié)果如下1.Res復(fù)方抗HIV活性研究愛滋病，又稱獲得性免疫缺陷癥，是一種由愛滋病病毒(humanimmunodeficiency virus，HIV)引起的嚴(yán)重傳染病，國內(nèi)外開展了大量的抗愛滋病藥物的開發(fā)與研究，至今預(yù)防和治療的藥物還很少。
本實驗采用LP-BMS MuLV小鼠艾滋病為模型，首先以脾指數(shù)，研究Res復(fù)方在體內(nèi)對于小鼠艾滋病(MAIDS)的治療作用，其次以谷胱甘肽(GSH)，超氧化物歧化酶(SOD)，脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)物(TBARS)為重要參數(shù)，研究小鼠在感染及治療后抗氧化水平的變化。
材料試驗動物C57BL/6J小鼠，♀，18-20g，北京醫(yī)科大學(xué)試驗動物科學(xué)部提供。
病毒株采用小鼠LP-BM5白血病病毒，以G6細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)上清作感染病毒，保存于-70℃。
藥物白藜蘆醇(Resveratrol)，西安納貝生物工程技術(shù)有限公司，批號961023；黃連素(Berberine)，東北制藥總廠，批號001003號；白藜蘆醇復(fù)方(白藜蘆醇∶黃連素＝0.1∶1)配比。
方法病毒ID50滴定取C57BL/6敏感小鼠40只，♀♂各半，隨機(jī)分組。病毒培養(yǎng)上清用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋1∶1，1∶10，1∶100，1∶1000，1；10000，1∶100000，1∶1000000，同時設(shè)對照組，病毒組每只接種0.5ml不同濃度的病毒，對照組接種培養(yǎng)液0.5ml。1月后觀察淋巴結(jié)，脾臟，測定抗原IgG，并觀察腫瘤發(fā)生，死亡情況。以脾指數(shù)增大2-3倍時的病毒稀釋度為ID50(1×10-4)，并作為小鼠艾滋病的試驗濃度。
小鼠艾滋病模型的建立及藥物治療取C57BL/6小鼠160只，♀，隨機(jī)分組，每組8只，共20個組。設(shè)正常對照組，病毒對照組，藥物對照組，藥物治療組。病毒對照組與藥物治療組小鼠在d1腹腔接種病毒0.5ml，其余接種等量培養(yǎng)液。采用灌胃(ig)的給藥方式，每天一次，每次0.5ml，連續(xù)28天，正常對照組與病毒對照組給生理鹽水。28天后，觀察毛發(fā)光澤，淋巴結(jié)是否腫大，稱體重，眼眶取血，無菌取脾，稱重。硫代巴比妥酸法測定勻漿脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(TBARS)；鄰苯三酚法測勻漿SOD活力；Ellman法測定脾勻漿谷胱甘肽(GSH)含量，如表1所示。
表1

#P＜0.05vs正常組結(jié)果顯示，小鼠感染LP-BM5 MuLV病毒28天后，脾組織GSH含量降低，由4.96±5.2ug/kg降低到4.10±2.3#ug/kg。當(dāng)使用了白藜蘆醇復(fù)方治療后，GSH的含量基本上與正常組接近。在獼猴感染猴免疫缺陷病毒1周內(nèi)，也發(fā)現(xiàn)很快發(fā)生巰基缺乏，血清半胱氨酸和谷氨酸鹽濃度也發(fā)生改變，且類似人類HIV的感染，這表明動物病毒感染和HIV感染都可以發(fā)生巰基缺乏。GSH是細(xì)胞內(nèi)主要的抗氧化劑，具有保護(hù)蛋白質(zhì)巰基的還原狀態(tài)，體外證實可抑制TNF-α以及活性氧類激活處于潛伏期的HIV進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。
另外，我們從脾組織SOD數(shù)據(jù)上可以明顯的看到，Res組+感染組的數(shù)據(jù)4.45±1.60umol/g是四組中最高的，可以明顯的改善SOD的數(shù)值，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化作用。以Res組+感染組對照感染組數(shù)據(jù)，從1.121±0.103umol/g來看，相對于感染組來說，降低了體內(nèi)的勻漿脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(TBARS)數(shù)值，所以證明了Res復(fù)方在治療HIV方面還是有明顯作用的。
2.Res復(fù)方治療老年性癡呆的實驗資料藥品及儀器白藜蘆醇(Resveratrol)，西安納貝生物工程技術(shù)有限公司，批號961023；黃連素(Berberine)，東北制藥總廠，批號001003號；白藜蘆醇復(fù)方(白藜蘆醇∶黃連素＝0.1∶1)配比。D-半乳糖由上海生化試劑廠提供?？捡R斯亮藍(lán)G250(華美生物工程公司進(jìn)口分裝)，其余為國產(chǎn)分析純。丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱肝肽(GSH)，單胺氧化酶(MAO)和脂褐質(zhì)測定試劑盒均由南京建成生物所提供。主要儀器有721分光光度計(上海第三分析儀器廠)，全自動SpectronicGenesysz紫外可見光光度計，Model-960熒光分光光度計(上海第三分析儀器廠)，Sartoriuz Basic電子天平，低溫冰箱(-70℃)，Himac CR21F高速冷凍離心機(jī)(Hitachi)動物及分組昆明種小鼠雌雄各半90只，18-20g，第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供。隨機(jī)分為9組正常組(NS)、模型組(D-galactase)、白藜蘆醇復(fù)方10mg/kg，白藜蘆醇復(fù)方50mg/kg，白藜蘆醇復(fù)方100mg/kg。我們采用單籠飼養(yǎng)，自由攝食與飲水，室溫18-20℃，日光燈輔助照明，維持每日光照12小時。
實施方法各組小鼠除正常生理鹽水組之外，每天腹腔注射80mg/kgD-galactase生理鹽水溶液，同時，各組小鼠每天灌胃上述藥物1次，連續(xù)給藥42d，每7天稱一次體重。
對于D-galactase所致的衰老小鼠稱體重摘眼球取血，1％肝素抗凝；處死小鼠，在冰浴上迅速剝離胸腺、脾臟、肝、腦、腎等組織，分別稱重，按“臟器重(mg)/體重(g)”計算臟器系數(shù)。將標(biāo)本置于-80℃冰箱冷凍保存，之后加入預(yù)冷的PBS溶液，冰浴制成10％組織勻漿，低溫離心，按照試劑盒說明書測定MDA、SOD、GSH、MAO、脂褐質(zhì)的含量，蛋白定量以考馬斯亮藍(lán)比色法進(jìn)行。
統(tǒng)計方法測定結(jié)果均經(jīng)過SPSS10.0軟件One-way ANOVA(單因素方差分析)統(tǒng)計處理，如表2、表3所示。
表2


表3

#p＜0.05vs正常組， *p＜0.05vs模型組結(jié)果從進(jìn)行的結(jié)果來看，Res復(fù)方可以顯著的降低血清丙二醛(MDA)含量，從白藜蘆醇復(fù)方的不同劑量來看，三個數(shù)值都明顯的低于模型組的47.2±21.8nmol/ml。
從提高血清超氧化物歧化酶(SOD)水平數(shù)據(jù)來看，三個數(shù)值也是明顯高于模型組的數(shù)量，顯示該制劑具有提高體內(nèi)SOD的水平。
從谷胱肝肽(GSH)含量數(shù)據(jù)來看，不同劑量的白藜蘆醇復(fù)方可以明顯的提高GSH水平，具有良好的抗氧化作用。
另外，白藜蘆醇復(fù)方可以降低腦組織的單胺氧化酶(MAO)活性和脂褐質(zhì)水平，表現(xiàn)出良好的抗衰老的作用，有效的治療老年性癡呆癥，提高老年人的生活質(zhì)量。
社會效益根據(jù)目前市場資料調(diào)查，在抗腫瘤藥物市場上，目前全世界每年死于惡性腫瘤者為690萬，新發(fā)病例為870萬。在中國國內(nèi)自70年代至90年代，年死亡人數(shù)也由90萬人增至130萬人以上，1999年中國抗腫瘤藥物市場銷售額達(dá)到6.03億美元，估計到2006年此類藥品的銷售額可以達(dá)到17億美元。在維護(hù)心血管系統(tǒng)藥物上，2000年心血管藥物以428億美元和9％的增長位居首位，在全球范圍內(nèi)，銷售最好的產(chǎn)品是抗高血脂藥物HMG還原酶抑制，銷售額為150億美元。心血管疾病在中老年人群中最為常見。
老年性癡呆癥也嚴(yán)重的威脅著老年人的生活健康，如何減少老年性癡呆、腦中風(fēng)及腦缺血等疾病的發(fā)生，是醫(yī)藥研究者的艱巨任務(wù)之一。從天然藥物中尋找活性成分是治療老年性疾病有效途徑之一，減少老年性疾病的發(fā)生，可以產(chǎn)生巨大的醫(yī)用價值。
此外，愛滋病的發(fā)病率有逐年增高的趨勢。愛滋病的產(chǎn)生，無論是對于個人、家庭還是社會，都是一個非常嚴(yán)峻的問題，它嚴(yán)重的困擾著人們的正常生活，同時也是一個很嚴(yán)峻的社會問題。藥物治療和預(yù)防愛滋病具有極其廣大的應(yīng)用空間。
因此將白藜蘆醇和黃連素組成一個新的復(fù)方藥物，不但可以提高治療腫瘤、調(diào)節(jié)血脂的療效，而且可以有效的治療愛滋病和治療老年性癡呆疾病，改善老年人的生活質(zhì)量，提高生命健康。
具體實施例方式
實施例1白藜蘆醇∶黃連素＝0.1∶1取5g白藜蘆醇原料，其中加入50g的黃連素粉末，混勻得到混合物，加入藥理允許的溶解劑，投入煮沸的注射用水內(nèi)，使成50-60％的濃溶液，加鹽酸適量，同時加入濃溶液0.1％(g/ml)的活性炭，混勻，加熱煮沸約15分鐘，趁熱濾過活性炭，濾液加注射用水稀釋至5500ml，測定PH值及含量合格后，反復(fù)過濾至澄明即可灌裝封口，115℃，30分鐘內(nèi)熱壓滅菌，制成規(guī)格為10mg/ml的注射液。
實施例2白藜蘆醇∶黃連素＝0.2∶5取10g白藜蘆醇原料粉末和250g的黃連素粉末混合，加入適量的淀粉攪拌均勻，再加入淀粉漿繼續(xù)攪拌使成軟材，用12目篩制粒，80-90℃通風(fēng)干燥，干粒加入硬脂酸鎂和干淀粉，整粒，混勻，壓片(φ9mm)，包腸溶衣，即得規(guī)格為400mg/粒的片粒，其中有效成分含量40mg/粒。
實施例3白藜蘆醇∶黃連素＝0.5∶10取5g的98％白藜蘆醇粉末和100g黃連素粉末混合拌勻，另取2900g的淀粉先干燥，過120目篩，后與主藥混合均勻，過兩次120目篩，充分混勻，送檢合格后，分別裝入空膠囊中，制得10000粒膠囊，每粒重量為300mg，其中有效成分為10.5mg。
權(quán)利要求
1.一種白藜蘆醇和黃連素的復(fù)方制劑，其特征在于該復(fù)方制劑包括以白藜蘆醇和黃連素作為活性成份與藥用輔料組成的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白藜蘆醇和黃連素復(fù)方制劑，其特征在于其中所述的制劑以活性成分1-20％與藥用輔料99-80％的比例組成；活性成份中白藜蘆醇和黃連素的重量1-12％為最佳。
3.一種如權(quán)利要求1所述的白藜蘆醇和黃連素復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于該方法為按配方要求稱取白藜蘆醇和黃連素，與藥用輔料混合后按常規(guī)制劑方法制成口服膠囊、片劑或注射劑。
4.一種如權(quán)利要求1所述的白藜蘆醇和黃連素的復(fù)方在制備調(diào)節(jié)血脂、抑制腫瘤、預(yù)防和治療老年性癡呆及抑制愛滋病病毒感染藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種白藜蘆醇和黃連素的復(fù)方制劑。本發(fā)明的復(fù)方制劑應(yīng)用了兩者相似的藥理作用和互補(bǔ)性，開拓了醫(yī)療領(lǐng)域，克服使用單組份不能治療的癥狀缺陷。能有效的調(diào)節(jié)血脂、抑制腫瘤、預(yù)防和治療老年性癡呆，并有非常明顯的抑制愛滋病病毒感染作用。
文檔編號A61K31/4353GK1539419SQ03116639
公開日2004年10月27日 申請日期2003年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月25日
發(fā)明者尉亞輝, 欒龍, 張少勇, 董紅元, 姜濤 申請人:上海納貝生物技術(shù)有限責(zé)任公司