專利名稱：竹提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物及其制備方法和應(yīng)用，具體地說，本發(fā)明涉及竹提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
竹葉為禾科植物淡竹Phyllostachys nigra(L-Odd.)Munro var henonis(Mitf)Stapfex Rendle的葉。主要分布在長江流域，西南地區(qū)竹資源極為豐富。竹葉在中醫(yī)藥中的應(yīng)用始載于“名醫(yī)別錄”，明代李時(shí)珍“本草綱目”卷三十七，“竹”有詳細(xì)描述，在“食療本草”、“本草求真”、“本草正義”等歷代醫(yī)著中均有記載。主要功效上清心火，下利小便，除煩熱，治熱病神昏；歸心、肺、胃經(jīng)。民間常用竹心(初出的卷狀嫩葉)煎水治心煩、發(fā)熱、消渴等。竹葉在近代中藥方劑中使用頻率很低，僅竹心間或被用做“藥引子”。竹被采伐后，竹葉(包括著葉的竹枝及頂端細(xì)小部份)都棄之不用，在竹林密集地區(qū)，竹葉如同地毯一樣覆蓋在地面上，漫山遍野都是。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們對(duì)竹資源的綜合開發(fā)已引起重視，有關(guān)竹葉的基礎(chǔ)研究逐漸增多。我們用核技術(shù)與生物技術(shù)相結(jié)合，研究了竹提取物對(duì)臟、腑器官細(xì)胞鈣通道的影響及機(jī)理，發(fā)現(xiàn)竹提取物具有新的藥用價(jià)值和保健功能。
細(xì)胞內(nèi)Ca2+對(duì)人體多種生理、生物過程起著重要的調(diào)節(jié)作用，細(xì)胞內(nèi)正常Ca2+濃度穩(wěn)定性的破壞是細(xì)胞受害的早期和關(guān)鍵條件。衰老細(xì)胞中一般都有大量的鈣和色素沉積；衰老性記憶障礙與腦細(xì)胞突觸內(nèi)Ca2+嚴(yán)重超載有關(guān)；機(jī)體發(fā)生炎癥或缺O(jiān)2均伴有所在部位細(xì)胞Ca2+濃度升高。細(xì)胞內(nèi)鈣離子失衡被認(rèn)為是各種原因引起的細(xì)胞損傷的“共同通路”。因而探索新藥物用以排除細(xì)胞內(nèi)多余鈣，能使細(xì)胞重新恢復(fù)正常功能，對(duì)衰老、癌癥等多種疾病的防治有意義。
近代病理研究證明，Ca2+大量進(jìn)入心血管細(xì)胞與冠心病的發(fā)病機(jī)理密切相關(guān)，1969年德國學(xué)者Fleckestein提出用藥物阻滯細(xì)胞膜鈣通道，減少鈣內(nèi)流，使冠心病的治療獲得長足進(jìn)步。這類藥物被稱為鈣通道阻滯劑(Calcium Channel Blocker簡(jiǎn)稱CCB)，目前CCB藥物在心、腦血管疾病臨床上已廣泛使用，但目前都是化學(xué)合成的，缺乏高活性的天然CCB藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種竹提取物，它是由以下方法制備的a.取竹枝或竹葉，干燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的堿水或堿醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時(shí)；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘?jiān)芍貜?fù)步驟a 1-2次；c.合并濾液，濃縮、干燥即可。
還提供上述竹提取物的制備方法，包括a.取竹枝或竹葉，干燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的堿水或堿醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時(shí)；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘?jiān)芍貜?fù)步驟a 1-2次；c.合并濾液，濃縮、干燥即可。
其中，步驟a中的堿水或堿醇是氫氧化鈣、碳酸氫氨、氫氧化鈉、氨水中一種或多種的水溶液或醇溶液。其中，堿醇的含醇量是10％～70％，堿醇中的醇優(yōu)選的是乙醇或甲醇。
本發(fā)明所述的竹提取物可用于制備鈣通道調(diào)節(jié)藥物。具體的說是在制備鈣通道阻滯劑藥物中的應(yīng)用，優(yōu)選的是在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，最優(yōu)選的是在制備治療冠心病、心率失常、腦血管痙攣、腦梗塞、運(yùn)動(dòng)病的藥物中的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式竹提取物的制備制備例1堿提法采下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘干，粉碎，稱500g加8000ml飽和石灰水浸泡1小時(shí)，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘?jiān)?000ml飽和石灰水再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封于樣品瓶中備用。得到堿提物樣品一80g。
制備例2堿提法采下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘干，粉碎，稱500g加8000ml PH為13的氫氧化鈉乙醇(乙醇濃度為50％)溶液浸泡1小時(shí)，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘?jiān)?000ml氫氧化鈉乙醇溶液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封于樣品瓶中備用。得到堿提物樣品二80g。
制備例3醇提法采下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘干，粉碎，稱500g加8000ml 50％乙醇溶液浸泡1小時(shí)，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘?jiān)?000ml 50％乙醇溶液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封于樣品瓶中備用。得到醇提物樣品一75g。
制備例4醇提法采下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘干，粉碎，稱500g加8000ml 30％甲醇溶液，浸泡1小時(shí)，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘?jiān)?000ml 30％甲醇溶液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封于樣品瓶中備用。得到醇提物樣品二77g。
用上述樣品進(jìn)行藥理試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法45Ca跨膜測(cè)量方法材料Wistar大鼠，體重200+20g，雌雄兼用。45CaCl2溶液為英國AmerSham公司產(chǎn)品，放射性比活度1570MBq/gCa，其它藥品為市售分析純。
實(shí)驗(yàn)用液PSS液(m mol/L)NaCl 137、CaCl21.5、MgCl21.0、KCl 3.0、HEPES20、C6H12O6·H2O10、pH＝7.4；高鉀PSS液(m mol/L)KCl 100，NaCl 40其余同PSS液，pH＝7.4；EGTA液(m mol/L)EGTA 10不含CaCl2，其余同PSS；甲苯閃爍液PPO 5.0g、POPOP 0.4g、乙二醇乙醚300ml、萘60g，用甲苯定容至1000ml。
45Ca跨膜內(nèi)流測(cè)量步驟按文獻(xiàn)Williams GT.Cell，1991，651097及張廷杰心血管病學(xué)進(jìn)展，1995，16(1)43的方法并加以改進(jìn)。擊暈大鼠取出胸主動(dòng)脈、心、肝、肺、腎……等，置于PSS溶液中輕輕去除結(jié)締組織，切成小塊，置于PSS液中37℃保溫1h，移入含45CaPSS溶液平衡10min。動(dòng)脈條或繼續(xù)留在此溶液中，或移入去甲腎上腺素(NE)溶液中或移入含45Ca高鉀液處理10min。以上步驟都是在37℃和通O2條件下進(jìn)行。再將組織取出，置于0-2℃無鈣EGTA溶液洗滌1h，然后用濾紙吸干動(dòng)脈環(huán)稱重后分別放入測(cè)量瓶中加入20％HClO425μL和30％ H2O250μL，于80℃水浴中消化20min，冷卻后加入甲苯閃爍液4ml黑暗放置3h后，在液閃儀中測(cè)量放射性活度dpm。Ca2+內(nèi)流量由以下公式計(jì)算 測(cè)量數(shù)據(jù)以x±S.D表不，并進(jìn)行檢驗(yàn)。
45Ca跨膜外溢測(cè)量方法取大鼠組織細(xì)胞→37℃PSS液孵育→含45Ca通過PDC鈣通道大量進(jìn)入細(xì)胞→4℃EGTA洗去細(xì)胞外45Ca→37℃PSS中使45Ca外溢→定時(shí)測(cè)PSS中45Ca的cpm即為外溢速率→測(cè)細(xì)胞內(nèi)剩余45Ca→45Ca內(nèi)流量減殘存量即得外溢量。
在外溢過程中選用PSS液、PSS+腎上腺素、PSS高鉀，即分別表示靜流鈣通道(Leak)、受體鈣通道(ROC)和電壓依賴鈣通道(PDC)的外溢。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果制備工藝不同，藥理作用有差異竹葉或竹枝的乙醇提取物和堿法提取物，對(duì)大鼠主動(dòng)脈電壓依賴鈣通道(PDC)45Ca內(nèi)流的影響見表I、表II。
表I 竹葉醇提物對(duì)PDC45Ca內(nèi)流的影響(n＝8)類別 濃度(mg/ml) 醇提樣品一醇提樣品二對(duì)照 0 193.18±10.48193.18±10.48醇提物0.02 185.22±24.34188.92±9.14對(duì)照 0.10 187.92±5.67 158.52±8.01醇提物0.50 182.86±6.47 143.56±11.41表II 竹葉堿提物對(duì)PDC45Ca內(nèi)流的影響(n＝8)類別 濃度(mg/ml) 堿提樣品一 堿提樣品二對(duì)照 0 185.87±17.13185.87±17.13堿提物0.02 147.37±15.72160.37±16.06對(duì)照 0.10 157.37±14.24154.76±13.36堿提物0.50 128.91±15.92106.20±9.76
比較表I、表II的結(jié)果看出，醇提物中樣品一與對(duì)照無差異，樣品二45Ca內(nèi)流作用比樣品一好。在堿提物中二者都是顯示了良好的效果。比較堿提物和醇提物作用的效果，堿提物阻滯PDC鈣通道，減少45Ca內(nèi)流的作用優(yōu)于醇提物。在0.02mg/ml濃度下就出現(xiàn)阻滯作用，而且有濃度梯度效應(yīng)。
竹提取物、銀杏葉黃酮、Verapamil對(duì)鈣通道具有相似的作用規(guī)律竹、銀杏葉、Verapamil等對(duì)大鼠心、肝、肺、腎PDC鈣通道的作用特性見表III。
表III 竹提取物對(duì)臟腑器官PDC鈣通道的影響(n＝8)

從上表可看出，竹提取物對(duì)大鼠主動(dòng)脈心、肝、肺、腎都有調(diào)控作用。當(dāng)濃度為0.5mg/ml時(shí)，對(duì)動(dòng)脈、心、肺作用效果與銀杏葉、維拉帕米有相同的規(guī)律，因維拉帕米是化學(xué)藥，純度較高，藥效作用在很低濃度下就很明顯。
竹提取物對(duì)臟腑器官45Ca外溢的影響見表IV表IV 竹葉提取物對(duì)45Ca外溢的影響(n＝87)

從表4看出，竹葉、竹技、銀杏葉、堿提物在0.4mg/ml濃度下能促使心、肝、肺、腎、動(dòng)脈細(xì)胞內(nèi)的Ca2+向外溢，以減少細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載對(duì)細(xì)胞造成的傷害。其中對(duì)動(dòng)脈、心臟作用規(guī)律比較一致，對(duì)肺、肝、腎不很明顯。
從上述實(shí)驗(yàn)可以看出，竹提取物既可促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)多余的Ca2+外溢，又可阻止細(xì)胞外Ca2+的內(nèi)流，它對(duì)多種器官細(xì)胞膜鈣通道調(diào)節(jié)作用，有益于維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的穩(wěn)定性，因而對(duì)心腦血管疾病有治療和保健的功能，藥效作用和銀杏葉有可比性，除能夠作為制備CCB(鈣通道阻滯劑)藥物的原料外，還能對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)正常Ca2+濃度起調(diào)節(jié)作用。細(xì)胞內(nèi)正常Ca2+濃度穩(wěn)定性的破壞是細(xì)胞受害的早期和關(guān)鍵條件。衰老細(xì)胞中一般都有大量的鈣和色素沉積；衰老性記憶障礙與腦細(xì)胞突觸內(nèi)Ca2+嚴(yán)重超載有關(guān)；機(jī)體發(fā)生炎癥或缺O(jiān)2均伴有所在部位細(xì)胞Ca2+濃度升高。細(xì)胞內(nèi)鈣離子失衡被認(rèn)為是各種原因引起的細(xì)胞損傷的“共同通路”。因而本發(fā)明的提取物為排除細(xì)胞內(nèi)多余鈣，使細(xì)胞重新恢復(fù)正常功能，為防治衰老、癌癥等多種疾病提供了新途徑。
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但并非對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例一竹提取物的制備采下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘干，粉碎，稱500g加8000ml飽和石灰水(pH14)浸泡1小時(shí)，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘?jiān)?000ml飽和石灰水再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封于樣品瓶中備用。得到提取物80g。
實(shí)施例二竹提取物的制備將竹葉或竹枝用鍘刀切成1-3cm小段，曬干或以鮮品直接提取，按固液比1∶16加10％的碳酸氫鈉(含1％硼砂)，浸泡2h沒，加熱煮沸1h，趁熱過濾，殘?jiān)?∶8加碳酸氫鈉(含1％硼砂)，再煮沸1小時(shí)，過濾，兩次濾液合并，濃縮，烘干，粉碎，裝瓶備用。得到提取物為原料(干品)的18％。
用前面的藥理實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定其對(duì)阻滯細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流和促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+外溢的影響，結(jié)果一致。
實(shí)施例三竹提取物的制備采下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘干，切碎，稱500g加8000ml含氫氧化鈉的乙醇溶液(pH10含醇30％，)浸泡半小時(shí)，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘?jiān)?000ml上述堿醇液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封于樣品瓶中備用。得到提取物74g。
用前面的藥理實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定其對(duì)阻滯細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流和促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+外溢的影響，結(jié)果一致。
實(shí)施例四取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入淀粉、糊精各10g，混勻，制粒，干燥，整粒，裝入袋泡劑專用袋中，為袋泡茶。
實(shí)施例五取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入淀粉、糊精各10g，混勻，制粒，干燥，整粒，裝入硬膠囊中，為膠囊劑。
實(shí)施例六取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入淀粉、糊精各10g，混勻，制粒，干燥，整粒，加入硬酯酸鎂2g，壓片，為普通片劑。
實(shí)施例七取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入微精纖維素40g、交聯(lián)PVP40g、乳糖10g，混勻，制粒，干燥，整粒，加入硬酯酸鎂2g，壓片，為分散片。
實(shí)施例八取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入淀粉、糊精各10g或不加，泛制微丸，干燥，包緩釋衣，為緩釋丸劑。此丸裝入膠囊，為緩釋膠囊劑。
實(shí)施例九取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入羥丙甲基纖維素20g、乙基纖維素40g等，混勻，制粒，為緩釋顆粒劑。此顆粒裝入膠囊，為緩釋膠囊。此顆粒壓片，為緩釋片劑。
實(shí)施例十取實(shí)施例一或二或三的方法制備的竹提取物100g，加入山楂浸膏30g或山楂微粉50g、蛋白糖0.3g，溶于或混懸于水溶液中，為保健飲料。
權(quán)利要求
1.一種竹提取物，其特征是它由以下方法制備a.取竹枝或竹葉，干燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的堿水或堿醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時(shí)；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘?jiān)芍貜?fù)步驟a 1-2次；c.合并濾液，濃縮、干燥即可。
2.權(quán)利要求1所述的竹提取物的制備方法，其特征是包括a.取竹枝或竹葉，干燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的堿水或堿醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時(shí)；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘?jiān)芍貜?fù)步驟a 1-2次；c.合并濾液，濃縮、干燥即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是步驟a中的堿水或堿醇是氫氧化鈣、碳酸氫氨、氫氧化鈉、氨水中一種或多種的水溶液或醇溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的制備方法，其特征是步驟a中的堿醇的含醇量是10％～70％，
5.根據(jù)權(quán)利要求2、3或4所述的制備方法，其特征是堿醇中的醇是乙醇或甲醇。
6.權(quán)利要求1所述的竹提取物在制備鈣通道調(diào)節(jié)藥物中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求6所述的竹提取物在制備鈣通道阻滯劑藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的竹提取物在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物是預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的應(yīng)用，所述的心腦血管疾病是冠心病、心率失常、腦血管痙攣、腦梗塞、運(yùn)動(dòng)病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種竹提取物及其制備方法和應(yīng)用，它由以下方法制備a.取竹枝或竹葉，干燥，粉碎或切制，每50g加pH＞8的堿水或堿醇100ml～800ml浸泡0.5－24小時(shí)；40－100℃加熱0.5－24h，過濾；b.殘?jiān)芍貜?fù)步驟a1－2次；c.合并濾液，濃縮、干燥即可。該竹提取物可用于制備純天然的鈣通道調(diào)節(jié)藥物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1517118SQ0311715
公開日2004年8月4日 申請(qǐng)日期2003年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月14日
發(fā)明者莫尚武, 謝秀瓊, 劉寧, 楊遠(yuǎn)友, 羅海燕 申請(qǐng)人:莫尚武, 謝秀瓊, 劉寧, 楊遠(yuǎn)友, 羅海燕