專利名稱：用于治療肝炎的口服藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種以天然原料提取物為有效藥物成分可用于治療肝炎的口服藥物。
背景技術(shù)：
“對照藥物肝蘇顆?！笔且环N已有報導(dǎo)和使用的用于治療肝炎的藥物，其有效藥物成分是以天然藥用植物虎耳草科的扯根菜(Penthorum chinense Pursh)的干燥地上部分為原料，采用水提醇沉方式得到的提取物。即以常規(guī)方法對扯根菜進(jìn)行煎煮后，合并煎煮液并過濾，濾液濃縮成清膏后，直接接入乙醇至含醇量達(dá)60％，過濾和醇洗后將乙醇溶液回收乙醇并濃縮成稠膏，與蔗糖、淀粉等輔料混合均勻后制成為顆粒。試驗結(jié)果顯示，含有以此種方式得到的成分作為有效藥物成分的藥物的生物利用度及療效都還未達(dá)到令人更為滿意的程度。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，本發(fā)明將提供一種同樣以虎耳草科植物扯根菜的乙醇提取物作為有效藥物成分的治療肝炎的藥物，并使該藥物的生物利用度及療效都能達(dá)到比上述目前方式的同類藥物更為令人滿意的程度。
本發(fā)明用于治療肝炎的口服藥物，是由虎耳草科植物扯根菜的乙醇純化提取物作為有效藥物成分，與常規(guī)口服藥物可以接受的輔助添加成分共同組成。這里所說的作為有效藥物成分的扯根菜乙醇純化提取物，是指能盡量減少目前存在于提取物中的水溶性高而乙醇溶解低或不溶性的成分和/或盡量增大扯根菜在乙醇提取液中有效成分的溶出含量。
根據(jù)這一原則，可以采用的具體方式之一是，在上述藥物中所說的作為有效藥物成分的扯根菜乙醇純化提取物，可以先以常規(guī)方式得到扯根菜的水煎提取物溶液，再使水煎提取物溶液通過大孔樹脂進(jìn)行吸附進(jìn)行純化處理，用水沖洗吸附樹脂后再用乙醇進(jìn)行解吸附洗脫，收集乙醇洗脫液并除去乙醇后，即得到純化的提取物成分。此種處理方式可以最大限度地除去在乙醇沉淀過程中，沉淀物對有效的醇溶性藥物成分的包裹，提高有效藥物成分在乙醇溶液中的含量，并能減少混入醇溶性有效成分中的水溶性成分對生物利用度和療效的干擾。此處所說的用于從吸附樹脂上洗脫有效藥物成分的乙醇，一般以使用體積含量為～70％的乙醇即可。
在采用上述的大孔樹脂處理方式時，所說的用于吸附純化處理的大孔樹脂的孔徑選擇一般可以在10-500納米的范圍內(nèi)。
在得到上述所說的作為有效藥物成分的扯根菜乙醇純化提取物時，可以采用的另一種具體方式，不是采用常規(guī)先用水煎煮得到水煎提取液，再進(jìn)行乙醇沉淀的方式，而是用乙醇直接對扯根菜進(jìn)行回流提取后，收集并除去乙醇回流液的乙醇后所得到的提取物成分，即可被使用。此種直接采用乙醇提取的方式，同樣也可以達(dá)到最大限度地減少扯根菜中的水溶性高而乙醇溶解度低或醇不溶性成分溶出而混入提取物，并還能盡量地增大扯根菜在乙醇提取液中有效成分的溶出含量。此處進(jìn)行直接提取時所用的乙醇，一般以也使用體積含量為～70％的乙醇即可。
在采用上述的乙醇直接提取方式時，還可以將所得到的除去乙醇后所得到的乙醇直接提取物成分用水稀釋一一例如，一般可以用水稀釋至相對密度為1.02-1.05后，第二次加入乙醇至乙醇的體積含量為～90％進(jìn)行再純化，將不含沉淀物的乙醇清液除去乙醇后，從而可以得到再純化的有效藥物成分。
得到的上述乙醇純化提取物作為有效藥物成分，與在目前各種常用制劑形式口服藥物中可以接受的相應(yīng)輔助添加成分混合，并作相應(yīng)的相應(yīng)處理后，即成為相應(yīng)制劑形式的本發(fā)明口服藥物。例如，可以制成為常用的片劑、丸劑、膠囊、各種緩釋劑型的固體制劑形式的口服藥物；也可以制成為如水劑、糖漿等液體制劑形式的口服藥物。這里所說的輔助添加成分，可以根據(jù)不同的制劑而有所不同，例如在片劑、丸劑、膠囊劑等固體制劑中常用的各種崩解劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、填充劑等；又如在水劑或糖漿等液體制劑中常用的增溶劑、乳化劑、潤濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、增稠劑等。
其中，在制備固體型制劑時特別建議的，是用水將乙醇純化提取物有效藥物成分稀釋至相對密度為1.10-1.12后，經(jīng)噴霧干燥或真空干燥并制成粒徑為～0.1毫米的(例如采用常規(guī)過140目～150目篩等方式)顆粒后，與常規(guī)口服藥物可以接受的輔助添加成分共同制成為固體劑型口服藥物。
按照上述內(nèi)容，根據(jù)本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想的前提下，對這些內(nèi)容還可以有多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1是本發(fā)明下述實(shí)例1的藥物與肝蘇顆粒的沒食子酸血藥濃度-時間曲線。
圖2是本發(fā)明下述實(shí)例2的藥物與肝蘇顆粒的沒食子酸血藥濃度-時間曲線。
具體實(shí)施例方式
實(shí)例1 采用大孔樹脂方式的扯根菜乙醇純化提取物有效藥物成分將扯根菜生藥原料粉碎成0.5-1.5cm的細(xì)段，加水煎煮3次，每次加8倍量水，每次2小時，合并煎液，離心，過市售的D101型大孔吸附樹脂柱(樹脂粒徑0.3-1.3毫米，樹脂孔徑10-500納米)，先用水沖洗，棄去水洗液，再用70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至藥液的相對密度為1.10-1.12，噴霧干燥或真空干燥，過140目篩，得乙醇純化乙醇提取物浸膏粉。加入適量淀粉，混勻，過篩，裝膠囊，得到膠囊制劑形式的藥物。將以此方法制備成的生藥含量為8.33g/粒的本發(fā)明藥物用于進(jìn)行下述的各項試驗。
實(shí)例2 采用乙醇直接提取方式的扯根菜乙醇純化提取物有效藥物成分取上述相同量的扯根菜，同樣粉碎成0.5-1.5cm的細(xì)段，在80℃用70％乙醇回流提取三次，第一次加入8倍量乙醇，第二、三次分別加入6倍量乙醇，每次提取1.5小時，合并醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至藥液的相對密度為1.02-1.05，離心，藥液濃縮至稠膏狀(相對密度1.20，60℃)，加入乙醇使含醇量達(dá)90％，靜置，濾過，減壓回收乙醇至盡，加水稀釋至藥液的相對密度為1.10-1.12，噴霧干燥或真空干燥，過140目篩，得浸膏粉，加入適量淀粉，混勻，過篩，裝膠囊，得到同樣形式的膠囊制劑形式藥物。將以此方法同樣制備成生藥含量為8.33g/粒的本發(fā)明藥物也用于進(jìn)行下述的各項試驗。
分別以上述實(shí)例1和實(shí)例2方法制備的本發(fā)明藥物進(jìn)行下列的主要藥效學(xué)試驗一、對照藥物肝蘇顆粒浸膏粉抗鴨乙型肝炎病毒的實(shí)驗研究(一)材料與方法試驗藥物本發(fā)明藥物，分別為上述實(shí)例1和實(shí)例2的膠囊藥物。對照藥物肝蘇顆粒(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010509，每袋9g[含原藥材16.7g])；陽性對照藥物拉米夫定[商品名賀普丁](葛蘭素威康公司出品，批號010807，壓碎成粉末，制成實(shí)驗所需劑量膠囊)；乙肝寧沖劑(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010306)。
動物模型采用健康成年的重慶麻鴨產(chǎn)的蛋孵化的1日齡雛鴨，經(jīng)腹腔接種0.1mDHBV DNA陽性病毒血清。接種1周后，分別頸外靜脈抽血，用地高辛標(biāo)記DHBV DNA探針(標(biāo)記藥盒購于德國Boehringer Mannheim公司)經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測篩選出感染陽性鴨飼養(yǎng)至3周齡作為實(shí)驗動物。
實(shí)驗分組及用藥將DHBV DNA陽性的3周齡鴨77只隨機(jī)分為7組，每組11只(1)病毒對照組用淀粉膠囊，每日口腔灌喂1次，劑量為200mg.kg-1.D-1。
(2)陽性藥物對照組用拉米夫定膠囊，每日口腔灌喂1次，劑量為50mg-1.D-1。
(3)乙肝寧對照組每日口腔灌喂1次，劑量為12.5g.Kg-1.D-1(為臨床人用劑量的20倍)。
(4)對照藥物肝蘇顆粒組每日口腔灌喂1次，劑量為16.67g.Kg-1.D-1(為臨床人用劑量的20倍)。
(5)本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)大劑量組每日口腔灌喂1次，劑量為16.67g.Kg-1.D-1(為臨床人用劑量的20倍)。
(6)本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)中劑量組每日口腔灌喂1次，劑量為8.33g.Kg-1.D-1(為臨床人用劑量的10倍)。
(7)本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)小劑量組每日口腔灌喂1次，劑量為4.17g.Kg-1.D-1(為臨床人用劑量的5倍)。
實(shí)驗用藥時間4周。
(二)觀察指標(biāo)1.血清DHBV DNA改變情況于用藥前、用藥1周、用藥2周、用藥3周、周藥4周、停藥1周分別頸外靜脈抽血，分離血清于-20℃保存等檢。采用斑點(diǎn)雜交法，用地高辛探針將用藥前后的血清統(tǒng)一對比檢測，以與探針同源的質(zhì)粒DNA倍比稀釋后點(diǎn)樣于硝酸纖維薄膜上雜交顯示的斑點(diǎn)顏色深淺為標(biāo)準(zhǔn)，與待檢血清斑點(diǎn)雜交斑點(diǎn)顏色深淺比較來半定量。統(tǒng)計學(xué)采用配對t檢驗。
2.血清DHBsAg改變情況于用藥前、用藥1周、用藥2周1、用藥2周、用藥3周、用藥4周、停藥1周分別頸外靜脈抽血，分離血清于-20℃保存待檢。將用藥前后的血清統(tǒng)一對比檢測，采用ELISA快速法、酶標(biāo)閱讀儀(Bio-TEK公司)490nm讀取O.D值。統(tǒng)計學(xué)采用配對t檢驗。
3.停藥后1周將部分實(shí)驗動物剖殺，各取小塊肝組織固定于10％甲醛溶液，作常規(guī)HE染色病理檢查。
4.用藥1月、停藥1周分別取部分鴨血檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT及AST)的變化情況。檢測轉(zhuǎn)氨酶的試劑購自四川邁克科技有限責(zé)任公司，批號為2000301。統(tǒng)計學(xué)采用組間比較t檢驗。
(三)結(jié)果1.用藥前、中、后血清DHBV DNA滴度改變情況；除病毒對照組(淀粉膠囊)外，陽性藥物(拉米夫定)對照組用藥1-4周分別與同組用藥前比較，均有DHBV DNA滴度總體水平降低(P＜0.01)，但停藥1周有DHBV DNA回升現(xiàn)象。本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)大劑量組用藥1-4周血清DHBV DNA滴度比同組用藥前血清DHBV DNA滴度的差別在統(tǒng)計學(xué)上有極顯著意義(P＜0.01)且停藥1周后DHBV DNA滴度回升現(xiàn)象不明顯。此外，本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)中劑量組用藥1-4周DHBV DNA滴度亦明顯降低(P＜0.01)，但停藥1周后DHBV DNA滴度與同組用藥前比較無顯著性差異(P＜0.05)；本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)小劑量組用藥1-3周DHBV DNA滴度有明顯降低(P＜0.01)，但從用藥4周及停藥1周血清DHBV DNA滴度開始回升；各劑量組呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系相同劑量的本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)比對照藥物肝蘇顆粒和乙肝寧在給藥各階段具有較強(qiáng)降低滴度作用，且停藥后滴度反彈較小。結(jié)果如表1所示。
表1 用藥前后血清DHBV DNA滴度改變情況(X±S)

注“*”P＜0.05，“**”P＜0.01；上表所列為各組DNA滴度的對數(shù)平均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，統(tǒng)計學(xué)采用配對t檢驗(為用藥組不同時間DNA滴度與同組用藥前DNA滴度比較)2.用藥前、中、后血清DHBV DNA陰轉(zhuǎn)率情況除淀粉組外，各組均有部份鴨用藥后血清DHBV DNA滴度轉(zhuǎn)陰，用藥前DHBV DNA滴度較低者似乎更容易轉(zhuǎn)明。肝蘇各劑量組DHBV DNA陰轉(zhuǎn)率無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果如表2所示。
表2 用藥后血清DHBV DNA陰轉(zhuǎn)率(％)

3.各組用藥前、中、后血清DHBsAg O.D值改變情況除病毒對照組(淀粉膠囊)外，陽性藥物(拉米夫定)對照組用藥1-4周分別與同組用藥前比較，均有DHBsAg O.D值總體水平降低(P＜0.05或P＜0.01)，但停藥1周有DHBsAg O.D值回升現(xiàn)象。乙肝寧組各時間點(diǎn)未見明顯降低作用(P＞0.05)。本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)大劑量組用藥3、4周血清DHBsAg O.D值比同組用藥前血清DHBsAg O.D值的差別在統(tǒng)計學(xué)上有顯著意義(P＜0.05)且停藥1周后DHBsAg O.D值回升現(xiàn)象不明顯。相比等劑量的對照藥物肝蘇顆粒具有較強(qiáng)的作用。此外，本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)中劑量組用藥1-4周DHBsAgO.D值亦明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，停藥1周后DHBsAg O.D值回升不明顯；本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)小劑量組用藥2.4周DHBsAg O.D值有明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，但停藥1周后血清DHBsAg O.D值開始回升。試驗結(jié)果如表3所示。
表3 用藥前后血清DHBsAg O.D值改變情況(X±S)

注*P＜0.05**P＜0.01上表所列為各組DHBsAg O.D值平均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，統(tǒng)計學(xué)采用配對t檢驗(為用藥組不同時間DHBsAg O.D值與同組用藥前DHBsAg O.D值比較)。
4.肝臟HE染色病理檢查各組均有較輕程度肝細(xì)胞濁腫或空泡變性，少數(shù)可見匯管區(qū)、小葉間隔炎癥細(xì)胞浸潤及肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死現(xiàn)象，這些病理表現(xiàn)用藥組無明顯差異。
5.用藥4周、停藥1周血清轉(zhuǎn)氨酶改變情況各實(shí)驗組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)值結(jié)果如表4所示。各組間同一時相內(nèi)ALT及AST比較統(tǒng)計學(xué)上無顯著性差異。
表4 用藥1月、停藥1周血清ALT、AST改變情況(U/L，X±S)

由于以DHBV感染鴨作為乙型肝炎動物模型來研究人類乙型肝炎發(fā)病機(jī)理、病毒復(fù)制過程及篩選有效的治療藥物，已為國內(nèi)外學(xué)者所公認(rèn)。1-3日齡雛鴨感染DHBV可維持長期病毒血癥而無明顯的自然轉(zhuǎn)陰現(xiàn)象，因此，采用1日齡雛鴨經(jīng)腹腔感染DHBV的方法來建立鴨乙型肝炎動物模型進(jìn)行肝蘇抗病毒作用的考核，作為治療肝炎病人提供臨床前研究資料。
上述的試驗結(jié)果表明，本發(fā)明藥物各劑量組(包括實(shí)例1和實(shí)例2不同方法制備的藥物，以下均同)用藥后能使血清中DHBV DNA滴度總體水平顯著降低或極顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)，停藥1周后、小劑量組血清DHBV DNA有明顯回升現(xiàn)象，而大劑量組停藥1周病毒DNA無明顯“反跳”；用藥前后血清DHBsAg的O.D值(490nm)的變化與DNA滴度改變相似。說明該藥物在體內(nèi)有抗病毒作用，且抗病毒效果與藥物劑量大小有一定的關(guān)系。各實(shí)驗中，本發(fā)明藥物比同樣以扯根菜提取物為有效藥物成分的對照藥物肝蘇顆粒表現(xiàn)出更強(qiáng)的作用，且病毒DNA反彈較小，均優(yōu)于乙肝寧組。
由于鴨乙肝動物模型自身的特點(diǎn)，即3日齡內(nèi)雛鴨由于免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，在感染DHBV后，僅出現(xiàn)單純的病毒攜帶狀態(tài)，而肝臟組織病變輕微，肝功能無明顯異常。實(shí)驗結(jié)果未發(fā)現(xiàn)各實(shí)驗組ALT、AST及肝臟HE染色病理統(tǒng)計學(xué)上的差異，可以說明該藥在這三種劑量下連續(xù)用藥4周對肝組織無明顯的毒性損害。
二、對CCl4造成大鼠急性肝損傷的影響試驗藥物本發(fā)明的藥物同上述試驗；對照藥物肝蘇顆粒(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010509)；乙肝寧沖劑(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010306)；聯(lián)苯雙酯滴丸(上海信誼制藥公司出品，批號010205)。
實(shí)驗動物健康雄性大鼠(由四川華西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供，實(shí)驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心進(jìn)行)。
實(shí)驗試劑谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT/SGPT)試劑盒(北京中生公司出品)；四氯化碳(CCl4)(成都化學(xué)試劑廠出品)。
實(shí)驗儀器BeckMan全自動生化儀6000型。
試驗方法及結(jié)果用150克左右的健康雄性大鼠，隨機(jī)分為組，每組10只。正常對照組給予同體積的蒸餾水，選型對照與藥物組于實(shí)驗第1、5天皮下注射50％CCl4菜油懸液5ml/kg，分別灌服水和被試藥連續(xù)7天，停藥24小時眼眶取血，靜置1小時后2500rpm離心，取血清，用賴氏法測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶。結(jié)果如表5所示。
表5 對CCl4致大鼠肝損傷血清ALT的影響(X±SD)

注與模型對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
表5結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物的16.67和8.33g/kg兩劑量組對大鼠CCl4肝損傷有降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用。等劑量的本發(fā)明藥物與對照藥物肝蘇顆粒間的比較雖無統(tǒng)計學(xué)意義，但可以看出本發(fā)明藥物的作用優(yōu)于對照藥物肝蘇顆粒。
三、對CCl4致小鼠慢性肝損傷的影響試驗藥物本發(fā)明藥物同上；對照藥物肝蘇顆粒(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010509)；乙肝寧沖劑(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010306)；聯(lián)苯雙酯滴丸(上海信誼制藥公司出品，批號010205)。
實(shí)驗動物健康小鼠(由四川華西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供，實(shí)驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心進(jìn)行)。
實(shí)驗試劑谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT/SGPT)試劑盒(北京中生公司出品)；四氯化碳(CCl4)(成都化學(xué)試劑廠出品)。
實(shí)驗儀器BeckMan全自動生化儀6000型。
試驗方法及結(jié)果將小鼠隨機(jī)分組。除正常對照組，于實(shí)驗第1、4天腹腔注射0.1％CCl410ml/kg，然后每周注射CCl4劑量同前，同時給藥，連續(xù)25天。于末次給藥后16h眼眶取血，2500rpm離心，分離血清，檢測血清谷丙胺酸。結(jié)果如表6所示。
由表6結(jié)果可見，本發(fā)明藥物的16.67和8.33g/kg兩劑量組對大鼠CCl4肝損傷有降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用。等劑量的本發(fā)明藥物與對照藥物肝蘇顆粒間的比較雖無統(tǒng)計學(xué)意義，但可以看出本發(fā)明藥物的作用優(yōu)于對照藥物肝蘇顆粒。
表6 對CCl4致小鼠慢性肝損傷的作用(X±SD)

注與模型對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
四、對D-半乳糖胺(D-GalN)致小鼠慢性肝損傷的影響試驗藥物本發(fā)明藥物同上；對照藥物肝蘇顆粒(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010509)；乙肝寧沖劑(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010306)；聯(lián)苯雙酯滴丸(上海信誼制藥公司出品，批號010205)。
實(shí)驗動物健康雄性大鼠(由四川華西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供，實(shí)驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心進(jìn)行)。
實(shí)驗試劑谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT/SGPT)試劑盒(北京中生公司出品)；四氯化碳(CCl4)(成都化學(xué)試劑廠出品)。
實(shí)驗儀器BeckMan全自動生化儀6000型。
試驗方法及結(jié)果將小鼠隨機(jī)均勻組，每組10只。除正常對照組，于實(shí)驗第1、6天腹腔注射D-GalN650mg/kg，同時給藥，連續(xù)7天。于末飲給藥后16h眼眶取血，2500rpm離心，分離血清，檢測血清谷丙胺酸。結(jié)果如表7所示。
表7 對D-GalN致小鼠慢性肝損傷的作用(X±SD)

注與模型對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
表7結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物的16.67和8.33g/kg兩劑量組對大鼠CCl4肝損傷有降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用。等劑量的本發(fā)明藥物與對照藥物肝蘇顆粒間的比較雖無統(tǒng)計學(xué)意義，但可以看出本發(fā)明藥物的作用優(yōu)于對照藥物肝蘇顆粒。
五、對動物保肝解毒作用的觀察和對四氯化碳中毒小鼠BSP清除的影響試驗藥物本發(fā)明藥物同上；對照藥物肝蘇顆粒(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010509)；乙肝寧沖劑(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010306)；聯(lián)苯雙酯滴丸(上海信誼制藥公司出品，批號010205)。
實(shí)驗動物健康小鼠(由四川華西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供，實(shí)驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心進(jìn)行)。
實(shí)驗試劑磺溴酞鈉(上?；瘜W(xué)試劑廠出品)；四氯化碳(CCl4)(成都化學(xué)試劑廠出品)。
實(shí)驗儀器BeckMan全自動生化儀6000型。
試驗方法及結(jié)果將小鼠隨機(jī)分組。1組正常對照均不給CCl4和實(shí)驗藥物，每日灌服同等體積的蒸餾水；2組CCl4肝損傷組于實(shí)驗開始第6天和第9天灌服0.2％CCl4菜油混懸液10ml/kg；3、4組于實(shí)驗開始每日分別灌服被試藥物，連續(xù)9天。用CCl4肝損傷組同樣劑量、時間，染毒。于實(shí)驗第10天即末次染毒后24小時眼眶取血，取血前20分鐘從尾靜脈注射磺溴酞鈉(BSP)100mg/kg，所取血液作BSP測定。結(jié)果如表8所示。
表8 對CCl4中毒小鼠BSP清除影響(X±SD)

注與模型對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；與對照藥物肝蘇顆粒組比較，∧∧P＜0.01
由表8可見，本發(fā)明藥物的各劑量組均能降低CCl4中毒小鼠血清BSP20分鐘滯留量，提示本發(fā)明藥物對CCl4肝損傷有一定的保護(hù)作用。其中等劑量的本發(fā)明藥物作用顯著強(qiáng)于對照藥物肝蘇顆粒浸膏組(P＜0.01)。
六、對大白鼠的利膽作用試驗藥物本發(fā)明藥物同上；對照藥物肝蘇顆粒(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010509)；乙肝寧沖劑(購于成都市中藥材公司成藥部，批號010306)；去氧膽酸鈉(四川制藥廠出品，批號010613)。
實(shí)驗動物健康雄性大鼠(由四川華西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供，實(shí)驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心進(jìn)行)。
實(shí)驗試劑苯巴比妥(中國醫(yī)藥進(jìn)出口公司進(jìn)口分裝)。
實(shí)驗儀器BeckMan全自動生化儀6000型。
試驗方法及結(jié)果選體重300g以上的健康雄性大鼠隨機(jī)分組，實(shí)驗前禁食一夜。對照組給蒸餾水；藥物組給試驗藥物，均十二指腸給藥；陰性對照組靜脈注射去氧膽酸鈉。實(shí)驗前均腹腔注射30mg/kg苯巴比妥進(jìn)行麻醉，剖開腹腔找出總膽管，在十二指腸端結(jié)扎，結(jié)扎的上方剪一切口，插入導(dǎo)管收集膽液，每半小時記錄一次膽液的分泌量，給藥前收集一次，給藥后收集三次。自身對照經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果如表9所示。
表9 對大白鼠膽液分泌的影響

注與給藥前比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
由表9結(jié)果可見，本發(fā)明藥物的4.17g/kg組在十二指腸給藥后30分鐘均能非常明顯增加膽汁的分泌量(P＜0.01)，乙肝寧陽性對照組給藥后半小時作用不明顯，而60分鐘，90分鐘均有明顯的膽汁分泌增加，本發(fā)明藥物(實(shí)例1和實(shí)例2)的作用強(qiáng)度大于陽性對照組。
七、與對照藥物肝蘇顆粒生物利用度的比較研究以沒食子酸為檢測指標(biāo)，實(shí)驗比較和研究本發(fā)明藥物(包括如上述本發(fā)明的實(shí)例1和實(shí)例2兩種方法得到藥物)和對照藥物肝蘇顆粒兩種口服制劑的生物利用度。
藥品與試劑本發(fā)明藥物同上；對照藥物肝蘇顆粒(購自成都市中藥材公司，批號010514)；沒食子酸酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號0831-9901，供含量測定用)；乙腈，磷酸均為分析純。
試驗動物SD大鼠，體重250280g，雌雄各半(四川省實(shí)驗動物養(yǎng)殖中心提供)。
試驗方法試驗動物隔夜禁食不禁水，次日灌胃給藥，劑量為16.67g(生藥)/Kg體重。分別于給藥前及給藥后15、30、60、90、120、180、240、360、480和600分鐘時由股動脈取血，每個血樣點(diǎn)6只大鼠。
色譜條件HP 1100高效液相色譜系統(tǒng)(HPLC)，固定相Inertsil ODS-3(5um)色譜柱(4.6×250mm)，流動相乙腈∶0.05％磷酸(4∶97)；流速1ml/min；檢測波長275nm。
血漿樣品預(yù)處理取0.5ml大鼠血漿，置一干凈的5ml玻璃具塞錐形離心試管中，加入2ml無水乙醇，渦旋混勻30s，置低速離心機(jī)中離心5min，3500rpm/min，吸取上清液，60℃水浴下氮?dú)獯蹈桑儆?00ul甲醇復(fù)溶，置臺式高速離心機(jī)中離心5min，吸取上清夜，20ul進(jìn)樣。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密吸取0.5ml空白大鼠血漿于5個玻璃離心試管中，分別加入濃度為0.1，0.5，1.0，2.0，4.0mg/ml的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液10ul，按照樣品預(yù)處理方法處理測定，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，濃度X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程得Y＝-10.6729+22.2187X，r＝0.9999。
藥物動力學(xué)參數(shù)求算采用3P97藥動學(xué)軟件計算。
試驗結(jié)果大鼠灌服本發(fā)明藥物(分別為實(shí)例1和實(shí)例2藥物)和對照藥物肝蘇顆粒后，血漿中沒食子酸的含量如表10所示。
本發(fā)明藥物和對照藥物肝蘇顆粒兩種藥物的生物利用度參數(shù)如表11所示。實(shí)例1的本發(fā)明藥物與對照藥物肝蘇顆粒的沒食子酸血藥濃度-時間曲線如圖1所示；實(shí)例2的本發(fā)明藥物與對照藥物肝蘇顆粒的沒食子酸血藥濃度-時間曲線如圖2所示。
表10 大鼠血漿沒食子酸濃度變化

表11 不同藥物沒食子酸的生物利用度參數(shù)

表10和表11的結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物中的沒食子酸的生物利用度均明顯大于對照藥物肝蘇顆粒；灌服本發(fā)明藥物后，沒食子酸體內(nèi)達(dá)到的最高濃度(Cmax)明顯高于對照藥物肝蘇顆粒，而達(dá)到最高濃度所需時間(Tmax)也明顯小于對照藥物肝蘇顆粒；圖1和圖2也清楚顯示，對本發(fā)明藥物的吸收程度也明顯增加，表現(xiàn)為圖中的本發(fā)明藥物24小時內(nèi)的血藥濃度-時間曲線下的面積(AUC)可遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對照藥物肝蘇顆粒。
上述的各項試驗結(jié)果都已充分顯示，本發(fā)明藥物與目前使用的肝蘇顆粒中的有效藥物成分雖然同為扯根菜的提取物，但無論是采用大孔吸附樹脂技術(shù)(實(shí)例1)，還是采用乙醇直接提取方式(實(shí)例2)，均可以使所得到的扯根菜的有效藥物成分含量得到富集，并可以使藥物與體液的有效接觸面積增加。因而，通過其有效藥物成分所共同具有的保肝、降酶、退黃、健脾的功能作用，在臨床上用于治療慢性活動性肝炎、乙型肝炎、急性病毒性肝炎方面，本發(fā)明藥物可比肝蘇顆粒具有顯著的優(yōu)越性和更好的應(yīng)用價值。
權(quán)利要求
1.用于治療肝炎的口服藥物，其特征是由虎耳草科植物扯根菜的乙醇純化提取物作為有效藥物成分，與常規(guī)口服藥物可以接受的輔助添加成分共同組成。
2.如權(quán)利要求1所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是所說的作為有效藥物成分的扯根菜乙醇純化提取物，為先以常規(guī)方式得到扯根菜的水煎提取物溶液，再使水煎提取物溶液通過大孔樹脂進(jìn)行吸附進(jìn)行純化處理，用水沖洗吸附樹脂后再用乙醇進(jìn)行解吸附洗脫，收集乙醇洗脫液并除去乙醇后得到的純化提取物成分。
3.如權(quán)利要求2所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是所說的用于吸附純化處理的大孔樹脂的孔徑為10-500納米。
4.如權(quán)利要求1所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是所說的作為有效藥物成分的扯根菜乙醇純化提取物，為用乙醇直接對扯根菜進(jìn)行回流提取后，收集并除去回流液的乙醇后所得到的提取物成分。
5.如權(quán)利要求4所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是將所說的除去乙醇后所得到的提取物成分用水稀釋，第二次加入乙醇至乙醇的體積含量為～90％進(jìn)行再純化，將不含沉淀物的乙醇清液除去乙醇后，得到再純化的有效藥物成分。
6.如權(quán)利要求5所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是將所說的除去乙醇后的直接提取物成分用水稀釋至相對密度為1.02-1.05后，作第二次乙醇的再純化處理。
7.如權(quán)利要求2或4所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是提取用的乙醇為體積含量為～70％的乙醇。
8.如權(quán)利要求2至6之一所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是將所說的乙醇純化提取物有效藥物成分與常規(guī)口服藥物可以接受的輔助添加成分共同混合制成為固體劑型口服藥物。
9.如權(quán)利要求8所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是用水將乙醇純化提取物有效藥物成分稀釋至相對密度為1.10-1.12后，經(jīng)噴霧干燥或真空干燥并制成粒徑為～0.1毫米的顆粒后，與常規(guī)口服藥物可以接受的輔助添加成分共同制成為固體劑型口服藥物。
10.如權(quán)利要求8所述的用于治療肝炎的口服藥物，其特征是將所說的固體劑型口服藥物為膠囊制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是一種用于治療肝炎的口服藥物，由虎耳草科植物扯根菜的乙醇純化提取物作為有效藥物成分，與常規(guī)口服藥物可以接受的輔助添加成分共同組成。試驗別名，該藥物可以比目前以水提醇沉成分作為有效藥物成分的藥物具有更高的生物利用度和更為理想的療效。
文檔編號A61P31/12GK1431011SQ03117198
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月20日
發(fā)明者周厚成 申請人:四川綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司