專利名稱：含多個降血糖活性成分的苦瓜制品及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種具有降低血糖的中藥，特別是以苦瓜為原料提取得到的治療糖尿病的中藥制劑。
背景技術：
糖尿病是當今危害人類健康的重要疾病，目前全世界約有5％-7％的人受糖尿病困擾，被認為是繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后，導致人類傷殘、死亡的第三大殺手。
糖尿病分為I型和II型，I型糖尿病是一種自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰島素。II型糖尿病占眾多糖尿病患者總數的95％左右。II型糖尿病的原因是胰島細胞代謝發(fā)生障礙，胰島素分泌不足，或者產生胰島素抵抗，是以胰島素抵抗為主伴胰島素分泌相對不足，或者以胰島素分泌相對不足為主伴胰島素抵抗導致的代謝性疾病。胰島素分泌不足，或者產生胰島素抵抗都可造成血液中葡萄糖過量，當血糖含量超過腎閾時，葡萄糖就轉移到尿中排出，從而產生葡萄糖尿。
目前臨床應用的幾種藥物均不能夠治愈糖尿病，主要是通過不同的作用機制，降低患者的血糖水平。糖尿病患者必須終生服藥，藥物本身對人體的毒副作用同樣威脅著糖尿病人的健康。在中國，目前使用藥物能夠控制血糖達到正常標準的，還不到糖尿病患者總數的20％(鄒大進，2型糖尿病的禍首---胰島素抵抗，大眾醫(yī)學，2002，(6)17)，直接導致了許多糖尿病患者的并發(fā)癥發(fā)生早，進展快。顯然，除了篩選更加安全有效的新型藥物之外，尋找其它的輔助治療手段有效控制血糖水平，對于提高糖尿病人的健康水平同樣是十分重要的。
苦瓜(Momordica charantia)是一種人類有長期安全食用歷史的蔬菜。近二十年來，人們在苦瓜的果實中發(fā)現了許多具有降血糖活性的成分，一些苦瓜果實的提取物，或者直接用苦瓜果實干燥后制成的茶飲料，已經推薦給糖尿病人使用，某些苦瓜成分已經被申請作為治療糖尿病藥物的專利。但是，從科技文獻中介紹以及已有的專利或產品，主要是基于對苦瓜諸多降血糖活性成分中對某個已知成分的認識，并沒有意識到，苦瓜中具有降血糖活性的成分已知的就有多種，并且化學性質各不相同，此外，苦瓜中還有某些具有降血糖的活性成分是未知的。所以，已有的文獻、專利或產品，其局限性也是明顯的。
美國專利(us 6391854B1)和中國專利(CN 98805001，苦瓜中的口服活性成分，其活性肽，及它們治療糖尿病的用途；<申請人>美國卡里克斯治療公司)提供了苦瓜的一種水溶性提取物稱為MC6，MC6的特征中它含有三種肽，它的制備方法的特征是離心澄清的苦瓜汁依次通過30kDal，10kDal及3kDal的超濾膜。MC6分子量小于10kDal，能夠通過10kDal超濾膜，而為3kDal濾膜截留。有活性的MC6的特征是在SDS-PAGE凝膠電泳上以單一條帶形式遷移，分子量小于10kDal，包含三種肽。同時提供的還有MC6的肽成分，稱為MC6.1，以及MC6.1的衍生物和模擬物。活性MC6、MC6.1、MC6.2、MC6.3有降血糖作用，尤其是糖尿病，其中優(yōu)選口服給予這些活性藥物。在這一專利中，所利用的苦瓜降血糖活口服給藥后也有這種活性。同時提供的還有利用這些活性藥物治療高血糖疾病的方法性成分僅僅是夠透過超濾膜的水溶性蛋白(多肽)。專利申請者描述，MC6沒有提高模型動物血漿中胰島素水平的活性。
一則國際專利申請(PCT/IN99/00052 1999.9.28)的發(fā)明，提供了一種高效降血糖多肽-k，它提取自苦瓜。專利申請者介紹的多肽-k制備方法是用非極性溶劑處理苦瓜種子(或果實)，去除不需要的油脂、黃酮類和皂苷配基，然后用含水80％的丙酮提取殘留物中的蛋白質，最后選擇性地結晶分離出多肽-k。申請者描述，多肽-k不溶于水，其降血糖的作用機理是激活血液中無活性的胰島素。
很明顯，MC6與多肽-k都是苦瓜中具有降血糖活性的蛋白質，但是，MC6溶于水，而多肽-k不溶于水，按照MC6的制備方法，則損失了苦瓜中的多肽-k；而按照多肽-k的制備方法，同樣損失了苦瓜中的MC6。
還有一些中國專利公開了從苦瓜中提取降糖物質或制成中藥的內容1、<申請?zhí)?amp;gt;99115925<發(fā)明名稱>一種苦瓜降糖膠囊及其制備工藝，該發(fā)明是以新鮮苦瓜為原料，經清洗冷凍，低溫制漿，壓濾，將濾渣經烘干過100目篩，制成苦瓜渣粉；濾液澄清再過濾，經酸性(pH3.0)乙醇在15℃條件下攪拌3小時，靜置沉淀12小時，過濾后將沉淀物經低溫干燥，過100目篩，制成苦瓜蛋白；過濾液經60℃真空濃縮，加2倍水溶解，加2倍乙醚脫脂，50℃真空濃縮回收乙醚，60℃真空回收乙醇制成粗苦瓜總皂苷，再經無水丙酮在4℃條件下沉淀洗滌數次，30℃以下真空濃縮制成苦瓜總皂苷，最后將總皂苷，苦瓜蛋白粉和苦瓜渣按10∶2∶88重量比經混勻，裝入膠囊制成苦瓜降糖膠囊。具有原料來源廣泛，工藝簡單，服用方便，價格便宜，無毒副作用的優(yōu)點，可做為治療糖尿病的輔助制劑。
2、<申請?zhí)?amp;gt;98110802<授權公告日>2001年08月15日<發(fā)明名稱>天然苦瓜素降糖藥及其制備方法，發(fā)明公開了一種天然苦瓜素降糖藥的制作方法，包括下述步驟a.將成熟苦瓜切成片，并進行干燥處理；b.把干燥的苦瓜片浸泡于水中，并提取浸液；c.把苦瓜浸液濃縮成濃縮液；d.將濃縮液進行生物酶解，得高活性降解液；e.把降解液進行恒溫干燥噴粉制粒；f.將顆粒裝入膠囊成藥；該方法工藝設備簡單，符合大規(guī)模生產要求，產品得率高，治療效果好，無毒副作用。
3、<申請?zhí)?amp;gt;95103732<發(fā)明名稱>治療糖尿病的中藥及其生產方法，該發(fā)明是一種治療糖尿病的中藥，該中藥的主要成分是動物胰臟、苦瓜、南瓜、黃芪，山藥，生產方法是動物胰臟粉碎干燥，與用水提法或醇析法得到的苦瓜、南瓜、黃芪提取物混合再加入山藥粉得到，該藥物具有益氣生津，健脾潤燥，滋陰降火功率效，并有提高機體免疫功能，促進胰島素分泌，降低血糖作用。
4、<申請?zhí)?amp;gt;93119351.6<發(fā)明名稱>植物降血糖活性蛋白新組份PA及其制備，該發(fā)明涉及生物制藥領域。從植物材料苦瓜中提取降血糖活性蛋白新組分PA，制備工藝中材料凈化處理-低溫冰凍-破碎-酸醇浸漬-高速勻漿-酸醇提取-抽濾-離心凈化-沉淀-重新溶解-Sephadex凝膠過柱-紫外檢測分部收集-濃縮-干燥的苦瓜降血糖活性蛋白新組份PA的制備方法，其特點是采用了等電點沉淀和凝膠過柱、紫外檢測分部收集的方法。發(fā)明人認為該物質具有分離提取簡便、消耗有機溶劑少、得率高等優(yōu)點，經動物試驗證明降血糖效果明顯。
5、<申請?zhí)?amp;gt;02102754<發(fā)明名稱>一種快速高效提取植物類胰島素的方法，苦瓜種子含有較豐富的植物類胰島素，是目前治療糖尿病的一種有效成分。發(fā)明技術特征是苦瓜種子脫殼，種仁粉碎過60或100目篩，然后采用酸性乙醇進行萃取，離心取上清液，加入NaCl占體積3％～5％，用1～5Mol/LNaOH調節(jié)溶液至pH值7.0±7.5溶液變渾濁、離心、去上液，用丙酮洗滌沉淀部分三次，真空干燥，得到植物類胰島素粗品。用0.1MTris.cl溶液(pH7.5)溶解進行凝膠親和層析，收集洗脫峰溶液，用丙酮或乙醇濃縮真空干燥得到植物類胰島素精品。該方法可以提取制備高純度的植物類胰島素成分，可用于糖尿病的治療。
6、<申請?zhí)?amp;gt;98102198.0<發(fā)明名稱>一種苦瓜含片及其制備方法，該發(fā)明為一種苦瓜含片及其制備方法。本苦瓜含片主要含有苦瓜粉、糊精、檸檬酸和甘露醇等，制備時，先將鮮苦瓜經榨汁、過濾、冷凍干燥制得苦瓜凍干粉，再與其它成分進行混合，并壓制成片。采用本發(fā)明的制備方法科學合理，充分保留了苦瓜中的多種營養(yǎng)成分，所制含片常溫下不失苦瓜的活性，具有清熱解毒、寬胸利氣、生津止渴、降低血糖、提高免疫力、抑制癌細胞等功效，是日常生活，特別是在災區(qū)救援、軍事行動、以及旅游、探險活動中，可迅速補充體力，提高免疫力的方便必需品。主權項(A61K35/78)要求是一種苦瓜含片，其特征是含有苦瓜粉、糊精、甘露醇、香料、色素及硬脂酸鎂。
已有的研究表明，苦瓜中除蛋白質之外，皂苷也是一種極為有效的降血糖活性的成分。
一些科技文獻報道，苦瓜皂苷為四環(huán)三萜類化合物，有多個不同成分，均難溶于水，可用乙醇從干燥的苦瓜果實中提取出(常鳳崗苦瓜化學成分研究，中草藥，1995，26(10)507-510)?？喙显碥詹⒉挥绊懯茉噭游锬Ｐ脱獫{中胰島素含量，主要是促進增加肌糖原和肝糖原的合成(王先遠，金宏，許志勤等苦瓜皂苷降血糖作用及機制初探，氨基酸和生物資源，2001，23(3)42-45)，因而具有顯著的降血糖作用(孫淑卿，苦瓜的藥理和臨床研究概況，中藥材，1997，(8)428--429)，動物試驗證明，其血糖降低幅度甚至優(yōu)于“優(yōu)降糖”(孫寶瑩等，苦瓜皂苷的藥效學實驗研究，河南中醫(yī)藥學刊，1994，9(6)19--21)。
水溶多肽MC6、水不溶的多肽-k及苦瓜皂苷，由于它們化學性質的差異，因而屬于彼此不同的物質。
并且，苦瓜降血糖活性成分并不僅僅是已知的皂苷和蛋白質。
從新鮮苦瓜的水煮液中分離出了可溶于乙醚和不溶于乙醚的兩個未知的成分，已經鑒定不為皂苷、黃酮和生物堿，這兩種成分都表現出明顯的降血糖活性(王勇慶苦瓜降血糖作用研究，湖南中醫(yī)藥雜志，1998，(6)51-52)。由此證明，苦瓜中降血糖成分除皂苷和植物蛋白之外，還有其它的降糖活性化合物。
將苦瓜的幾種不同方法提取物對四氧嘧啶誘導的化學性糖尿病模型小鼠的降糖效果進行比較，結果表明，苦瓜的未被加熱的直接壓榨的果汁較其它方法提取的有效部位的降血糖效果更好，并推斷其降血糖活性物可能為水溶性的受熱易被破壞的成分(范玉玲；崔福德，苦瓜有效部位降糖活性的比較研究，沈陽藥科大學學報2001 18(1)50-52)。
動物實驗表明，鮮苦瓜汁能使能使四氧嘧啶誘導糖尿病小鼠已經受損傷的胰島β細胞得到修復，并再生出新的β細胞，提高了血漿中的胰島素含量(Ahmed，I.，Adeghate，E.，Sharma，A.K.，Pallot，D.J.et al.Effects of Momordica charantia fruit juice on isletmorphology in the pancreas of the streptozotocin-diabetic rat.Diabetes researchand clinical practice.1998，40，145-151)。體內和離體的進一步研究表明，鮮苦瓜汁的這種作用機理是減輕了糖尿病小鼠的胰腺，RIN細胞及胰島的脂質過氧化，并降低了RIN細胞中四氧嘧啶誘導的apoptosis，從而對RIN細胞，胰島及胰腺β細胞的起保護作用(Sitasawad，S.L.，Shewade.Y。，Bhonde，R。，Role of bittergourd fruit juice instz-induced diabetic state in vivo and in vitro.Journal of Ethno-pharmacology，2000，73(1)71-79)。而在苦瓜的已知降糖活性化合物中，尚未能確定具有這種修復或再生胰島細胞，提高胰島素水平的生物活性。
由上述事實可知，苦瓜的降血糖功能活性物，有已知的，也還有屬于未知的，苦瓜的降血糖功能，實際是其中所含的多種具有降血糖活性的成分協(xié)同作用的結果。就已知的活性成分而言，因其化學性質不同，很難用一種溶劑將它們同時提取出來。此外，在苦瓜的降血糖活性物中，包含有不耐熱的成分，其提取的過程不應當受熱。
用磨漿的辦法將新鮮的苦瓜果肉組織細胞充分破碎，細胞的所有內含物，包括溶于水與難溶于水的降血糖活性成分，都將被釋放到果漿中。將果漿中的粗纖維(來自于果肉細胞壁)濾去，然后冷凍干燥，這種苦瓜汁的凍干制品無疑包含了比較全面的降血糖活性成分。但是，苦瓜汁中降血糖活性物的含量其實很低，直接凍干成本昂貴，另一方面，苦瓜汁中存在的糖類物質極易潮解，使這種凍干制品根本無法在正常條件下分裝、貯藏和使用。加入大量的干燥助劑或防潮劑雖然可以解決苦瓜汁的凍干制品的潮解問題，但將無法制得高含量的苦瓜降血糖制品。
綜上所述，文獻和專利公開的苦瓜有效成分的制備，基本上是采用物理法和化學法提取某個或若干個明確的化學成分為主，或者是苦瓜在加熱條件下的某種溶媒(如水，乙醇或其混合物)的總提取物，它們或者未提及如何利用苦瓜中那些化學性質未知的降血糖活性成分，或者未明確苦瓜中某些熱敏性降血糖活性物的受熱破壞問題。
99115925號中國發(fā)明專利，一種苦瓜降糖膠囊及其制備工藝提出了苦瓜蛋白與苦瓜皂苷的利用，但在制備過程使用了乙醇，丙酮，乙醚等有機溶劑。98110802號專利，天然苦瓜素降糖藥及其制備方法中提到將苦瓜濃縮液進行生物酶解，得高活性降解液，但未提及生物酶解中采用的是什么酶。98102198.0號專利，一種苦瓜含片及其制備方法中使用的是冷凍干燥苦瓜汁工藝，但它沒有考慮去除苦瓜中已知的不具有降血糖活性的成分的問題。
基于上述原因，開發(fā)一套能全面利用苦瓜中理化性質不同的各類降血糖活性物，并且活性成分含量高，理化性質穩(wěn)定的苦瓜降血糖制品的制備方法，不僅是開發(fā)高活性的苦瓜降血糖制品的必由之路，而且對于充分而合理地利用苦瓜資源，也是十分必要的。
技術內容本發(fā)明主要針對苦瓜中含有多種降血糖活性成分，其化學性質各不相同有水溶的，也有難溶于水而易溶于極性有機溶劑的，某些成分則不溶于水和極性有機溶劑，而只能溶于非極性有機溶劑，因而以任何一種溶媒(包括水)都不能全面提取出全部活性成分，同時某些未知的活性成分不耐熱這一問題而提出的。所提供的一套苦瓜降血糖活性物制備工藝，不僅全面地利用了苦瓜中的各種降血糖活性成分，而且最大限度地去除已知的非活性物，同時避免了熱敏性活性物的受熱損失問題。因而采用本發(fā)明苦瓜制品，降血糖活性物含量高，使用劑量小而降血糖作用突出，并且加工性能穩(wěn)定。
本發(fā)明的技術方案如下本發(fā)明的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，它包括制品中存在的鮮苦瓜中的酶活性，鮮苦瓜中的多種蛋白質、鮮苦瓜中的主要的皂苷成分以及最大限度地去除已知的非活性物，具體的是新鮮的、經酶解處理的苦瓜漿，經過濾、離心分離之后所得苦瓜汁的微濾截留物及納濾截留物。
以上所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品的酶活性，是指以多酚氧化酶活力為標誌的酶活性。
以上所述的多種蛋白質為制品中存在的、其蛋白質非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳譜與鮮苦瓜中的蛋白質譜基本一致的物質。
以上所述的皂苷為制品中存在的、其薄層層析圖譜具有與鮮苦瓜原料皂苷色譜一致的特征斑點的物質。
以上所述的已知的非活性物葡萄糖含量(對樣品可溶性固形物)低于鮮苦瓜汁的葡萄糖糖含量(對鮮苦瓜汁可溶性固形物)。
以上所述的新鮮苦瓜漿是將新鮮的苦瓜去籽后用打(磨)漿機打(磨)制成的漿汁；酶解處理是指在苦瓜漿中加入纖維素酶，半纖維素酶，果膠酶中的一種，或它們的混合物，酶解苦瓜細胞壁的纖維素、半纖維素及果漿中的果膠。
以上所述的微濾截留物是將酶解處理后的苦瓜漿經過濾或離心除去果肉殘渣，所得苦瓜汁采用微濾裝置收集的不能透過孔徑為0.2μm-0.45μm微孔濾膜的灰白色不溶物。
以上所述的納濾截留物是指能透過0.2μm-0.45μm微孔濾膜，但可為截留分子量為0.2--1Kdal的納濾膜所截留的物質。
本發(fā)明的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品的制備方法包括以下幾個步驟1、首先將新鮮苦瓜去除種子，采用食品工業(yè)中現有的磨(打)漿機械將苦瓜肉組織充分破碎，使苦瓜果肉細胞內含物能充分析出，得帶有磨碎果肉的苦瓜漿汁。
2、在上述苦瓜漿汁中加入約0.02％-0.08％果膠酶、纖維素酶或半纖維素酶，在30-40℃條件下保溫1-4小時時間，然后經過濾除去果肉纖維殘渣，沉降離心除去殘余在果汁中的細碎果肉顆粒，得出一種含有灰白色粉末狀懸浮物的混濁苦瓜汁。經檢驗，這種灰白色懸浮物的主要成分是苦瓜皂苷。
3、采用微濾裝置(過濾孔徑0.2μm-0.45μm)過濾上述含有灰白色懸浮物的苦瓜汁，收集不能透過濾器的灰白色不溶物，得組分A。
4、上述透過微濾裝置的澄清苦瓜汁用納濾分離裝置進一步分離，保留不能透過截留分子量0.2--1Kdal納濾膜的溶質，除去能透過濾膜的糖類、有機酸。納濾后期，在截留液中反復加入純水，繼續(xù)納濾操作，以較為充分地除去截留液中的糖、有機酸。收集納濾截留液，得組分B。
5、將上述步驟3、所得的組分A與步驟4、所得的組分B合并，冷凍干燥收藏。得到含多個苦瓜降血糖活性成分的制品。
本發(fā)明的這種含多個苦瓜降血糖活性成分的制品，具有明顯的降血糖活性，可直接，或根據需要加入適量輔料，灌裝成膠囊，或沖壓成片劑、制成顆粒劑、制成含片、制成丸劑，供糖尿病人服用。所述的輔料為上述制備方法步驟2、離心沉淀所獲得的細碎果肉之干燥物以及采用現行國家標準、國際標準通用的食品或藥物輔料。
本發(fā)明制品包含了鮮苦瓜除去果肉纖維殘渣之后，除葉綠素之外果汁中的全部水不溶性成分，以及除去糖類、有機酸后的水溶性成分和因疏水性較強而不能透過納濾膜的小分子成分。由于本發(fā)明制品是在常溫或冷凍條件下完成操作，因而保存新鮮果實中的某些酶活性特征。
本發(fā)明制品所含成分的化學特性，所保持的酶活性，可以通過下述方法分別檢測證實1.多酚氧化酶活性檢測本發(fā)明制品1g，溶于10ml蒸餾水，離心，取上清液1ml，加入0.3％焦性沒食子酸水溶液3ml，滴加4滴低濃度過氧化氫，即可見溶液發(fā)生棕色反應，證實制品中存在多酚氧化酶活性。2.蛋白質電泳檢測本發(fā)明制品1g，溶于蒸餾水10ml，離心，取上清液進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，并用苦瓜果肉原汁作為對照。電泳后的凝膠經考馬斯亮藍染色，本發(fā)明制品的蛋白質譜與苦瓜果肉原汁蛋白質譜基本一致，見圖2.。表明本發(fā)明制品包含了鮮苦瓜中的多種蛋白質。3.苦瓜皂苷薄層層析檢測本發(fā)明制品1g溶于甲醇2ml，取甲醇液點樣于硅膠G高效薄板上，以氯仿-甲醇(7∶2.5)水飽合后作展開劑，展開，取出，晾干，10％硫酸液噴霧后加熱顯色。另取苦瓜原料的甲醇提取物點樣于同一薄板上。本發(fā)明制品具有1、2兩個與苦瓜原料色譜一致的特征斑點，見圖3.。證實本發(fā)明制品保留了苦瓜中主要的皂苷成分。4.糖類色譜檢測本發(fā)明制品溶于蒸餾水，離心除去沉淀物，加蒸餾水調節(jié)至可溶性固形物含量2.5％(折光儀測定)。另榨取鮮苦瓜汁，也用蒸餾水將可溶性固形物含量調節(jié)至2.5％。經Benson碳水化合物柱(BC-100，Ca+2)進行高效液相色譜(HPLC)柱層析，本發(fā)明制品與鮮苦瓜汁均洗脫為兩個峰，第一峰在9.7分鐘時流出，第二峰(葡萄糖)在15.0分鐘時流出，糖色譜峰保留時間完全重合，可知兩者所含糖類一致。以相同可溶性固形物含量為基準，用葡萄糖吸收峰面積表征相對含糖量，本發(fā)明制品相對含糖量低于鮮苦瓜汁，證實本發(fā)明制品經過了脫糖工藝處理。


圖1.是本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2.是本發(fā)明制品的蛋白質聚丙烯凝膠電泳檢測結果圖。
圖3.是本發(fā)明制品的苦瓜皂苷薄層層析檢測結果圖。
圖4.-圖9.是本發(fā)明制品的降血糖效果圖。
從圖1了解到本發(fā)明制品的生產工藝是將新鮮苦瓜去籽，磨漿，果漿加入酶制劑并保溫1-4小時，過濾棄去果肉殘渣，收集的苦瓜汁(1)再經沉降式離心去除沉淀物，得到的苦瓜汁(2)。苦瓜汁(2)經微濾，得微濾截流液(A)和澄清的苦瓜汁(3)，將苦瓜汁(3)用納濾裝置分離，棄去納濾透過液，回收納濾截流液(B)并與微濾截流液(A)合并，凍干后得到降血糖制品物。這種降血糖制品可直接、或加入上述離心沉淀所獲得的細碎的果肉、也可加入其它符合國家和國際標準的輔料做成各類中藥制劑，如灌裝成膠囊，沖壓成片劑，或制成顆粒劑，供糖尿病人服用。
圖2.顯示了本發(fā)明制品與新鮮苦瓜汁的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳蛋白質譜，兩者的蛋白質色帶位置基本一致，以此檢測證實本發(fā)明制品中包含了鮮苦瓜中的多種蛋白質。
圖3.顯示了本發(fā)明制品與苦瓜原料中苦瓜皂苷在薄層層析中相一致的特征斑點，以此檢測證實本發(fā)明制品保留了苦瓜中主要的皂苷成分。
圖4.給出了患者服用本發(fā)明制品前四周血糖下降情況，服用本發(fā)明制品一周后，血糖即有明顯下降，直至第四周；在隨后的八個月中，患者減服了西藥，繼續(xù)服用本發(fā)明制品，血糖水平保持正常平穩(wěn)，如圖5.。
圖6.圖示了患者服用本發(fā)明制品四周前后血糖變化，患者同時停服一切降糖藥物，至一周后，血糖下降過多，逐減少服用量一半，血糖隨即稍有升高，繼續(xù)服用，血糖又開始下降，效果顯著。
圖7.圖示了患者服用本發(fā)明制品四周前后血糖變化，配合西藥服用，一周后血糖即明顯下降，四周后，血糖已降至較低水平。
圖8.圖示了患者服用本發(fā)明制品四周前后血糖變化，配合西藥服用，一周后血糖即明顯下降，從第三周始減少西藥服用量，血糖仍維持較低的正常水平。
圖9.圖示了患者服用本發(fā)明制品四周前后血糖變化，配合西藥服用，本發(fā)明制品服用量大于前幾例患者，血糖下降明顯。
具體實施例方式
用孔徑為0.45μm的微濾裝置對混濁苦瓜汁進行精濾，至微濾截留液只剩下小體積時，加入適量純水置換。收集經置換微濾后的混濁截留液。
透過微濾裝置的澄清苦瓜汁加入到納濾裝置中進行納濾處理，保留不能透過截留分子量0.2--1Kdal納濾膜的溶質，收集納濾截留液，棄去納濾透過液。納濾截留液剩下小體積時，加適量純水置換納濾。
微濾截留液與納濾截留液合并冷凍干燥，得凍干制品520g，加入適量淀粉后灌裝成膠囊。實施例2新鮮苦瓜150Kg，剖開除去種子，磨成果漿，加入纖維素酶(含半纖維素酶活性)50克，果膠酶30g，40℃保溫1h，過濾式離心除去纖維殘渣，得淺綠色苦瓜汁120Kg，經沉降式離心得沉淀物和外觀為淺黃色至灰白色的混濁苦瓜汁。
用孔徑為0.45μm的微濾裝置對混濁苦瓜汁進行精濾，當微濾截留液只剩下小體積時，加入適量純水置換。收集經置換微濾后的混濁截留液。
微濾裝置透過的澄清苦瓜汁，加入到納濾裝置，保留不能透過截留分子量0.2--1Kdal納濾膜的溶質，納濾截留液剩下小體積時，加適量純水置換納濾。收集納濾截留液，棄去納濾透過液。
沉降離心沉淀物經滅菌處理，然后與微濾截留液、納濾截留液混合并冷凍干燥，得制品1300克。沖壓成片劑。應用實施1.
患者張先生，65歲，患慢性糖尿病十余年，服用多種降糖西藥其空腹血糖仍高居不下，并發(fā)生了手腳麻木、皮膚騷癢、眼底出血等并發(fā)癥。加服本發(fā)明制品后，血糖很快降至正常水平。一個月后，減服西藥，直至西藥服用量為原來的三分之一，患者服用本發(fā)明制品八個月來，血糖水平保持正常，并發(fā)癥狀消失，身體健康。服用本發(fā)明制品前后的血糖變化見圖4.、圖5.。應用實施2.
患者梁女士，60歲，慢性糖尿病，自服用本發(fā)明制品后，停服一切降糖藥物，結果血糖水平保持正常。服用本發(fā)明制品前后的血糖變化見圖6.。應用實施3.
患者韋女士，72歲，糖尿病史4年，空腹血糖水平為8.5mmol/L。常期服用西藥，服用本發(fā)明制品后，血糖水平平穩(wěn)下降，經減少西藥及調節(jié)本發(fā)明制品服用量，其血糖水平保持正常。服用本發(fā)明制品前后的血糖變化見圖7.。應用實施4.
患者梁女士，66歲，患慢性糖尿病5年，并發(fā)患有高血壓、視力模糊。加服本發(fā)明制品后，血糖水平平穩(wěn)下降，減少西藥后，血糖水平仍保持正常，并使血壓得到控制，身體健康。服用本發(fā)明制品前后血糖變化見圖8.應用實施5.
患者張女士，60歲，患糖尿病一年，空腹血糖水平達18mmol/L，服用多種降糖藥物效果不佳，患者視力模糊，腿疼無力，手腳麻木。服用本發(fā)明制品后，血糖明顯下降，病人感覺精神。服用本發(fā)明制品前后血糖變化見圖9.。
權利要求
1.一種含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于它包括制品中存在的鮮苦瓜中的酶活性、鮮苦瓜中的多種蛋白質、鮮苦瓜中的主要的皂苷成分以及最大限度地去除已知的非活性物，具體的是新鮮的、經酶解處理的苦瓜漿，經過濾、離心分離之后所得苦瓜汁的微濾截留物及納濾截留物。
2.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于所述鮮苦瓜中的酶活性是指以多酚氧化酶活力為標誌的酶活性；
3.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于所述多種蛋白質為制品中存在的、其蛋白質非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳譜與鮮苦瓜中的蛋白質譜基本一致的物質。
4.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于所述皂苷為制品中存在的、其薄層層析圖譜具有與鮮苦瓜原料皂苷色譜一致的特征斑點的物質。
5.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于已知的非活性物葡萄糖含量(對樣品可溶性固形物)低于鮮苦瓜汁的葡萄糖含量(對鮮苦瓜汁可溶性固形物)。
6.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于新鮮苦瓜漿是將新鮮的苦瓜去籽后用打(磨)漿機打(磨)制成的漿汁；酶解處理是指在苦瓜漿中加入纖維素酶，半纖維素酶，果膠酶中的一種，或它們的混合物，酶解苦瓜細胞壁的纖維素、半纖維素及果漿中的果膠。
7.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于所述的微濾截留物是將酶解處理后的苦瓜漿經過濾或離心除去果肉殘渣，所得苦瓜汁采用微濾裝置收集的不能透過孔徑為0.2μm-0.45μm微孔濾膜的灰白色不溶物。
8.根據權利要求1所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于所述的納濾截留物是指能透過0.2μm-0.45μm微孔濾膜，但可為截留分子量為0.2-1Kdal的納濾膜所截留的物質。
9.一種含多個降血糖活性成分的苦瓜制品的制備方法，其特征在于制備方法包括以下幾個步驟(1)新鮮苦瓜去除種子，將苦瓜肉磨制成漿，使苦瓜肉細胞內含物能充分析出，得帶有磨碎果肉的苦瓜漿汁；(2)在上述苦瓜漿汁中加入約0.02％-0.08％果膠酶、纖維素酶或半纖維素酶，在30-40℃條件下保溫1-4小時時間，然后經過濾除去果肉纖維殘渣，沉降離心除去殘余在果汁中的細碎果肉顆粒，得出一種含有灰白色粉末狀懸浮物的混濁苦瓜汁；(3)采用微濾裝置(過濾孔徑0.2μm-0.45μm)過濾上述含有灰白色懸浮物的苦瓜汁，收集不能透過濾器的灰白色不溶物，得組分A；(4)將上述透過微濾裝置的澄清苦瓜汁，放入納濾分離裝置，保留不能透過1Kdal濾膜的溶質，納濾除去糖類，有機酸，納濾后期，在截留液中反復加入純水，繼續(xù)納濾操作，收集納濾裝置中截留液，得組分B；(5)將本發(fā)明第3步所得的組分A與本發(fā)明第4步所得的組分B合并，冷凍干燥得到含多個苦瓜降血糖活性成分的制品。
10.根據權利要求9所述的含多個降血糖活性成分的苦瓜制品的制備方法，其特征在于將含多個苦瓜降血糖活性成分的制品直接、或加入適量輔料后灌裝成膠囊，或沖壓成片劑、制成顆粒劑、制成含片、制成丸劑，所述的輔料包括離心沉淀所獲得的細碎果肉之干燥物，或者是符合國家、國際標準的，生理上可接受的藥物輔料。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種含多個降血糖活性成分的苦瓜制品及其制備方法，是以鮮苦瓜為原料制成苦瓜汁后的微濾截留物以及納濾截留物的凍干制品，其中保存了鮮苦瓜的酶活性，鮮苦瓜中的多種蛋白質、鮮苦瓜中的皂苷。其制備方法是將新鮮苦瓜去籽，磨漿，酶處理，過濾棄去粗纖維，再經沉降離心分離，得到的苦瓜汁采用微濾—納濾分離，收集微濾截流液并與納濾截流液合并，冷凍干燥后得到降血糖物質，加入適量輔料，灌裝成膠囊，或沖壓成片劑、制成顆粒劑、制成含片、制成丸劑，供糖尿病人服用。
文檔編號A61P3/10GK1456337SQ03128089
公開日2003年11月19日 申請日期2003年5月30日 優(yōu)先權日2003年5月30日
發(fā)明者張厚瑞, 梁小燕, 阮俊, 陳海珊, 李典鵬, 曾健智 申請人:廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所