專(zhuān)利名稱(chēng)：含母乳型氨基酸與超氧化物歧化酶結(jié)合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及超氧自由基及活性氧的清除劑，更具體地指一種應(yīng)用復(fù)合氨基酸作載體，使超氧化物歧化酶(SOD)不易失活，起到SOD清除超氧自由基及活性氧的作用以及它的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
超氧化物歧化酶(SOD)是能清除超氧陰離子自由基而起保護(hù)細(xì)胞作用的重要抗氧化酶。由于生理性和病理性原因，人體內(nèi)不斷產(chǎn)生自由基，在體內(nèi)自由基中，氧自由基占了很大比例，它包括超氧陰離子自由基、羥自由基、過(guò)氧化氫、單線性氧，他們都是極為活潑的，破壞性很大的物質(zhì)。自由基清除劑可分為二大類(lèi)一類(lèi)是小分子的自由基清除劑，其中包括抗氧化劑類(lèi)如維生素E、維生素C；另一類(lèi)為大分子的自由基清除劑，有幾種酶是體內(nèi)天然的自由基及活性氧的清除劑。正常健康體內(nèi)的形成和清除處于一種動(dòng)態(tài)平衡，一旦這種動(dòng)態(tài)平衡被破壞，即自由基在機(jī)體內(nèi)積累過(guò)多或過(guò)少，則機(jī)體就會(huì)患病或衰老。SOD作為國(guó)際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的重要的自由基清除劑，早在七十年代就被發(fā)達(dá)國(guó)家列入重點(diǎn)系統(tǒng)研究的對(duì)象。SOD的作用與功效、SOD的制備工藝等大約在90年代被逐漸作為添加劑用于藥品、食品、化妝品的產(chǎn)品中。我國(guó)在上世紀(jì)九十年代中期也開(kāi)始進(jìn)入產(chǎn)品的使用，例如“大寶SOD化妝品”、“SOD啤酒”、“SOD口腔清潔劑”等。同時(shí)，作為清除超氧陰離子自由基清除劑，SOD在臨床上獲得了廣泛的應(yīng)用。
超氧陰離子自由基所引起的疾病，主要為以下這些A、高壓氧與氧中毒。氧中毒三種類(lèi)型即肺型氧中毒，表現(xiàn)為肺水腫；神經(jīng)性氧中毒，表現(xiàn)為腦電變化；眼型氧中毒，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜受損。
B、吞噬作用與急性炎癥和水腫。在機(jī)體發(fā)炎中活性氧自由基起著主要作用，過(guò)剩的自由基如不能被SOD及時(shí)分解則可深入細(xì)胞，破壞正常細(xì)胞。
C、自身免疫性疾病。各種不同類(lèi)型的自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制雖各有不同特點(diǎn)，但氧自由基、前列腺素來(lái)衍生產(chǎn)物以及有巨噬細(xì)胞單核白細(xì)胞產(chǎn)生的水解酶類(lèi)在引起病變上都起重要作用。
D、肺氣腫。肺組織中含有彈性蛋白酶及其抑制劑，它們的不平衡是肺氣腫成病的主要原因。抑制劑的活力可受超氧自由基的進(jìn)攻而失活，從而導(dǎo)致彈性蛋白酶增高，使肺氣腫可能性增大。
E、老年性白內(nèi)障。眼晶狀體受活氧自由基的氧化而損害，是各類(lèi)型白內(nèi)障發(fā)病的主要原因，人衰老時(shí)活性氧自由基在眼內(nèi)積累的增多，易引起眼內(nèi)酶及膜蛋白質(zhì)以及晶狀體的脂質(zhì)過(guò)氧化。脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛易與晶體蛋白交聯(lián)形成白內(nèi)障。
F、衰老時(shí)自由基對(duì)人體損傷作用。在人體不飽和脂肪酸比飽和脂肪酸要豐富得多。它們主要分布在生物膜上。不飽和脂肪酸的特點(diǎn)是當(dāng)有自由基引發(fā)劑和氧存在時(shí)發(fā)生過(guò)氧化作用。機(jī)體衰老時(shí)，由于自由基的不平衡導(dǎo)致體內(nèi)生物膜上不飽和脂肪酸的過(guò)氧化，使膜結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，機(jī)體趨老化，同時(shí)引起脂褐素產(chǎn)生。
G、氧自由基的致癌作用。從癌癥產(chǎn)生看，正常細(xì)胞變成癌細(xì)胞必須經(jīng)過(guò)二個(gè)階段，即誘發(fā)與促進(jìn)。在誘發(fā)階段活性氧可直接損傷DNA，也可通過(guò)脂類(lèi)過(guò)氧化酶間接損傷DNA。
作為清除超氧陰離子自由基清除劑SOD，不僅在上述疾病的臨床應(yīng)用上很廣泛。同時(shí)作為一種有效的抗衰老藥物也具有很好的預(yù)防功效。
但是，SOD是一種活性酶，半衰期極短僅為6分鐘，而且遇到高溫和酸性環(huán)境時(shí)易失活，吞服后進(jìn)入人體又易被胃酶、胰酶所分解，這就很難以達(dá)到人體吸收的理想效果。而同時(shí)易失活的特征也使得它難以在終極產(chǎn)品中長(zhǎng)期保持其活性。因此，如何能使SOD在常溫下較長(zhǎng)時(shí)間不失活？加工SOD產(chǎn)品時(shí)如何保證由單方到多方合成而不失活？其產(chǎn)品在進(jìn)入人體時(shí)又如何保證不被胰酶所排斥、分解，保持被人體吸收？是SOD發(fā)展研究與實(shí)施過(guò)程中三大難題。由于保存和使用的不方便，使21世紀(jì)初發(fā)達(dá)國(guó)家在系統(tǒng)研究SOD的功能制備和應(yīng)用的同時(shí)，正在著手研究半衰期長(zhǎng)的SOD修飾衍生物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是利用含母乳型的氨基酸作載體，使SOD與其結(jié)合成含母乳型氨基酸與SOD的結(jié)合物，該結(jié)合物克服SOD的不穩(wěn)定性，使其在生產(chǎn)、應(yīng)用時(shí)保持它的有效活性，在體內(nèi)達(dá)到清除超氧自由基和活性氧作用的目的。同時(shí)在單方氨基酸到多種氨基酸與SOD復(fù)合成結(jié)合物的產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中保證其SOD的活性，使SOD在人體中的功效真正得以發(fā)揮。
本發(fā)明的另一目的是提供制備含母乳型氨基酸與超氧化物歧化酶結(jié)合物的方法。
本發(fā)明是這樣實(shí)施的設(shè)計(jì)具有母乳結(jié)構(gòu)成份的復(fù)合氨基酸作為SOD的共存體。
含母乳型氨基酸成份結(jié)構(gòu)如下(*為人體必須氨基酸)

本發(fā)明復(fù)合氨基酸經(jīng)與一般單性氨基酸結(jié)構(gòu)作載體的SOD配伍作大量試驗(yàn)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)二者之間的共存性，即SOD的活性程度具有較明顯和較大的差異。母乳結(jié)構(gòu)狀的復(fù)合氨基酸與SOD的共溶性、共存性遠(yuǎn)優(yōu)于采用多種單性氨基酸配伍的結(jié)構(gòu)載體。采用不同種類(lèi)的單性氨基酸合成結(jié)構(gòu)與SOD配伍其活性保存都未能滿(mǎn)足一般制成產(chǎn)品保質(zhì)期(18個(gè)月～24個(gè)月)的產(chǎn)品保質(zhì)要求。本發(fā)明從不斷結(jié)構(gòu)配方對(duì)比試驗(yàn)中，本發(fā)明設(shè)計(jì)的人乳結(jié)構(gòu)載體是最為優(yōu)化的。
本發(fā)明含母乳型氨基酸與超氧化物歧化酶結(jié)合物的制備方法如下1、從豆類(lèi)蛋白水解液中提取復(fù)合氨基酸，測(cè)定10多種游離氨基酸成；2、按母乳型氨基酸結(jié)構(gòu)成份(見(jiàn)成份結(jié)構(gòu)配比表)的游離氨基酸中復(fù)配對(duì)應(yīng)單性氨基酸；
3、混合后把復(fù)配后氨基酸粉劑加以成份結(jié)構(gòu)測(cè)定；4、將購(gòu)買(mǎi)來(lái)的從動(dòng)植物中提取活性SOD溶液溶于水(30℃)；5、SOD倍散后加上適量淀粉攪拌混合；6、在0℃低溫下使SOD形成單性顆粒；7、在復(fù)合氨酸混合、去濕進(jìn)行造粒過(guò)程中把溫度調(diào)控制在25℃±5℃中，加入SOD顆粒。
8、經(jīng)滅菌壓片(溫度控制在50℃～60℃)，制成能保持SOD活性狀態(tài)的復(fù)合氨基酸片。
9、按上述流程制成產(chǎn)品在保質(zhì)期中(18～24個(gè)月)可使SOD失活率控制在5％以下。
本發(fā)明母乳型氨基酸對(duì)SOD進(jìn)入人體內(nèi)的作用與影響。我們用小白鼠作了這一項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)。每組10只小白鼠飼養(yǎng)30天，結(jié)果如表

需氧生物體內(nèi)存著自由基產(chǎn)生的內(nèi)源性機(jī)制，每天都有大量的自由基產(chǎn)生。同時(shí)生物體內(nèi)也存在著自由基的清除機(jī)制，由超氧化物歧化酶(SOD)過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPX)等的自由基清除系統(tǒng)負(fù)擔(dān)機(jī)體內(nèi)自由基的清除任務(wù)，使體內(nèi)自由基保持在很低水平，其中SOD對(duì)機(jī)體內(nèi)O2的清除起重要作用，由于自由基非?；顫?，因而對(duì)機(jī)體有強(qiáng)烈破壞作用。
A、自由基引起結(jié)締組織大分子的交聯(lián)，從而阻礙營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的擴(kuò)散并損傷組織活力。
B、自由基對(duì)DNA破壞，可導(dǎo)致引起細(xì)胞突變，導(dǎo)致體內(nèi)主要酶的表達(dá)產(chǎn)生缺陷，從而引起機(jī)體衰老、死亡。
C、自由基引起的膜脂類(lèi)過(guò)氧化作用導(dǎo)致亞細(xì)胞器的完整性喪失和細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化脂蛋白碎屑的積累，而后者會(huì)損傷細(xì)胞的功能。
因此機(jī)體內(nèi)酶活力提高可充分表示進(jìn)入到人體內(nèi)活性SOD的作用功效發(fā)揮正常，作用明顯。從上述表中亦可看出實(shí)驗(yàn)組的SOD活力明顯比對(duì)照組要高。
本發(fā)明技術(shù)的實(shí)現(xiàn)技術(shù)是以母乳狀復(fù)合氨基酸與SOD配伍，實(shí)現(xiàn)SOD活性的長(zhǎng)期保存。同時(shí)證明這二者的配伍產(chǎn)生明顯的加和增效作用。
發(fā)明的效果在母乳狀復(fù)合氨基酸作為SOD載體情況下，SOD的存活期及活性保持率都得到了充分的保證。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明采用從豆類(lèi)蛋白水解液中提取復(fù)合氨酸，該水解液中提取氨基酸可以從復(fù)合氨基酸生產(chǎn)企業(yè)(湖南華容縣生化食品廠)購(gòu)得，測(cè)定其氨基酸成份及含量氨基酸分析(常規(guī)方法測(cè)定)，然后根據(jù)含母乳型氨基酸成份復(fù)配對(duì)應(yīng)氨基酸組成本發(fā)明氨基酸成份的重量百分比的氨基酸粉劑待用。再將從SOD生產(chǎn)企業(yè)(上海寶安生物制品有限公司)購(gòu)買(mǎi)來(lái)的動(dòng)植物中提取活性的SOD溶液溶于水(或蒸餾水中)溫度控制在室溫，邊攪拌將SOD倍散后加上適量淀粉攪拌均勻混合，在0℃低溫下使SOD形成單性的顆粒待用。
將上述待用的復(fù)合氨基酸去濕進(jìn)行造粒，此過(guò)程溫度通?？刂圃?5℃±5℃中，然后加入制得的SOD顆粒，攪拌均勻混和，再將混合物在50℃±60℃滅菌壓片，制得能保持SOD活性狀態(tài)的復(fù)合氨基酸片。
本發(fā)明所得的能保持SOD活性狀態(tài)的復(fù)合氨基酸片作SOD的活性共存時(shí)間試驗(yàn)(見(jiàn)下表)

本發(fā)明提要本發(fā)明提出用一種母乳型結(jié)構(gòu)的復(fù)合氨基酸作為載體以解決SOD半衰期短、易失活的弱點(diǎn)，從而達(dá)到SOD在常溫常態(tài)下長(zhǎng)期保存活性的目的。由于設(shè)計(jì)上述的結(jié)構(gòu)與SOD具有很強(qiáng)的共存性，互容性且還具有加和增效性，因此SOD的活性保持期達(dá)20個(gè)月以上。
權(quán)利要求
1.一種由單氨基酸與超氧化物歧酶(SOD)結(jié)合物，其特征在于由含母乳型復(fù)合氨基酸與超氧化物歧化物結(jié)合成含母乳型復(fù)合氨基酸超氧化物歧化酶結(jié)合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)合物，其特征在于含母乳型復(fù)合氨基酸的配方如下
3.如權(quán)利要求1所述結(jié)合物的制備方法，其特征在于包括(1)從天然豆類(lèi)蛋白水解液提取游離氨基酸；(2)按含母乳型復(fù)合氨基酸成份結(jié)構(gòu)復(fù)配對(duì)應(yīng)單性氨基酸成其滿(mǎn)足復(fù)合氨基酸的配比量；(3)將SOD溶于水中倍散后加適量淀粉攪混和，在適當(dāng)溫度下使SOD形成單性顆粒；(4)將混合復(fù)合氨基酸，去濕進(jìn)行選粒一定溫度下加入SOD顆粒，攪拌混和；(5)上述混和物滅菌壓片制成含母乳型復(fù)合氨基酸、SOD結(jié)合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述結(jié)合物的制備方法，其特征在于將復(fù)合氨基酸去濕造粒加入SOD顆粒溫度調(diào)控于20℃～30℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述結(jié)合物的制備方法，其特征在于滅菌壓片濕度控制在50℃～60℃。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含母乳型氨基酸與超氧化物歧化酶結(jié)合物及制備方法，該結(jié)合物利用復(fù)合氨基酸作載體，使SOD與其結(jié)合克服SOD的不穩(wěn)定性，使其在生產(chǎn)、應(yīng)用時(shí)保持它的有效活性，達(dá)到清除超氧自由基和活性氧作用的目的。
文檔編號(hào)A61K9/20GK1552444SQ0312894
公開(kāi)日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2003年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月30日
發(fā)明者翁清清, 葉林發(fā), 陳建領(lǐng) 申請(qǐng)人:上海力普生生物制品有限公司