專利名稱：一種維甲酸控釋納米微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物控釋納米及其制備方法，特別是涉及一種維甲酸控釋納米微球及其制備方法。
背景技術(shù)：
維甲酸(RA-retinoicacid，)是維生素A的天然氧化代謝產(chǎn)物，長期以來作為一種皮膚科藥物，用于抗皮膚角化異常，近年來在臨床上用于實(shí)體癌，如肝癌、胃癌、乳腺癌等患者化療時(shí)作為協(xié)同用藥，均取得較好療效。1987年王振義等人采用RA在臨床上治療急性早幼粒細(xì)胞性白血病(APL-acutepromyelocytic leukemia，)獲得成功。現(xiàn)已證實(shí)RA對APL的誘導(dǎo)分化作用很強(qiáng)。此外RA尚有抑制白細(xì)胞株，阻止某些細(xì)胞惡變，促進(jìn)正常造血干細(xì)胞增殖分化，有免疫增強(qiáng)作用。然而，RA為共扼雙鍵弱有機(jī)酸，在空氣中遇光不穩(wěn)定，口服劑型易氧化。目前RA只有口服制劑，口服通過胃腸道吸收緩慢，藥物有效利用度低，對白血病和腫瘤患者的治療受到一定的限制。由于RA藥物半衰期短，需每日服三次，對按時(shí)按量服藥的患者會出現(xiàn)不同程度的消化道不適應(yīng)及頭暈嘔吐癥狀，不能口服的患者不能服用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題提供一種維甲酸控釋納米微球及其制備方法，使RA在體內(nèi)長效控釋釋放，以期增加藥物的穩(wěn)定性；提高生物利用度；降低藥物毒性。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用明膠-聚乳酸(PLA-poly lactic acid)將維甲酸制成納米微球。
用納米粒子直徑為10～500nm的納米級聚合物粒子作為RA藥物傳遞和控釋的載體，它能穿透組織間隙并被細(xì)胞吸收，可通過人體最小的毛細(xì)血管、可靶向和定位給藥、可粘膜吸收給藥、可注射給藥控釋治療。藥物活性組分通過溶解、包裹作用位于粒子內(nèi)部，或者通過吸附、附著作用位于粒子表面。納米控釋藥物的釋放機(jī)理可以是藥物通過囊壁瀝濾、滲透和擴(kuò)散出來，也可以是基質(zhì)本身溶蝕而使其中的藥物釋放出來。緩釋藥物可延長藥物作用時(shí)間；可達(dá)到靶向輸送的目的；可在保證藥物作用的前提下，減少給藥劑量，從而減輕或避免毒副反應(yīng)；可提高藥物的穩(wěn)定性，有利于儲存?？鼓[瘤藥和抗病毒藥納米控釋系統(tǒng)作為抗惡性腫瘤藥物的輸送系統(tǒng)是最有前途之一。由于惡性瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的吞噬能力，腫瘤組織血管的通透性也較大，所以，靜脈注射納米粒子藥劑可顯著提高療效，減少給藥劑量和減少毒性反應(yīng)。
本發(fā)明的組分及其重量百分?jǐn)?shù)配比(kg)聚乳酸(PLA)，5-25％，維甲酸(RA)， 20-35％，明膠水溶液， 50-60％；其制備方法為復(fù)合乳液-溶劑揮發(fā)法①配制氯甲烷與丙酮混合溶液，將上述PLA溶于其中，再加入1-3ml混合乳化劑土溫(tween)-80∶土溫(tween)-20＝5∶1；②將需包埋的維甲酸藥物以20％-35％的重量比溶于上述共溶劑中，將溶液均勻混合；③加上述明膠水溶液用輸入功率為50-55W的超聲探頭制備成水包油型乳液；④常壓下磁力攪拌16小時(shí)后從100mmHg減壓到30mmHg，攪拌蒸發(fā)6小時(shí)；⑤用冷凍離心機(jī)(12100轉(zhuǎn)×G)離心收集固化納米粒子，加蒸餾水40ml在混合器上打散混合振蕩5min-10min；⑥將打散混合后的維甲酸納米微球再次以12100轉(zhuǎn)×G離心，收集其固化的納米粒子，加蒸餾水40ml在混合器上打散沉淀物混合振蕩5min-10min；⑦將混合振蕩后的維甲酸納米微球經(jīng)冷凍離心機(jī)(12100轉(zhuǎn)×G)離心收集固化納米粒子，加蒸餾水10ml，打散混合均勻；⑧將混合均勻的維甲酸納米微球分裝入小瓶中冷凍；⑨在冷凍干燥器上冷凍干燥18-36小時(shí)；⑩將冷凍干燥后的維甲酸納米藥物消毒后備用。
本發(fā)明的有益效果，可使TR通過溶解、包裹作用位于粒子內(nèi)部，或者通過吸附、附著作用位于粒子表面。納米控釋藥物的釋放機(jī)理可以是藥物通過囊壁瀝濾、滲透和擴(kuò)散出來；也可以是基質(zhì)本身的溶蝕而使其中的藥物釋放出來。緩釋藥物可延長藥物作用時(shí)間；可達(dá)到靶向輸送的目的；可在保證藥物作用的前提下，減少給藥劑量，從而減輕或避免毒副反應(yīng)；可提高藥物的穩(wěn)定性，有利于儲存。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1聚乳酸(PLA)，13％，維甲酸(RA)， 35％，明膠水溶液， 52％。
實(shí)施例2聚乳酸(PLA)，15％，維甲酸(RA)，35％，明膠水溶液，50％。
體外釋藥試驗(yàn)稱取納米微球樣品，裝入透析釋藥袋中，置于100ml磨口瓶中，加入50ml溶媒(含適量甲醇的PBS)。以恒溫水浴振蕩器在37℃下振蕩(120次/min)，隔一定時(shí)間取樣1ml，并補(bǔ)充1ml新鮮溶媒。樣品適當(dāng)稀釋后以高效液相色譜法定量，另一實(shí)驗(yàn)組則采用每次更換新鮮溶媒的方式進(jìn)行，以測定每日的釋藥速率。高效液相色譜測定條件同上。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.最佳制備條件在正交設(shè)計(jì)的條件范圍內(nèi)，載藥納米微球的大小，形態(tài)等有一定的差異，最大的達(dá)500nm左右，最小的在75nm左右，平均收率70％-90％。
根據(jù)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果，主要依據(jù)球體直徑及其標(biāo)準(zhǔn)差，結(jié)合收率、包封率及體外釋藥試驗(yàn)，確定最佳制備條件如下連續(xù)相為220ml的明膠水溶液，分散相為PLA和ATRA共溶于8ml二氯甲烷和丙酮溶液中，RA理論含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))ρ1＝25.0％，ρ2＝33.3％的納米微球，用于體外釋藥及藥物動力學(xué)研究。
2.納米微球的形狀與大小納米微球樣品干燥后呈黃色粉末狀在掃描電鏡下觀察絕大多數(shù)微球呈完整的球型，球體表面光滑。
3.納米微球中RA的含量，按照優(yōu)選條件制備的ρ1(RA)＝25.00％ρ2(TA)＝33.33％的納米微球，平均收率分別為83.85±1.09％和86.32％±2.10％ρ1(RA)實(shí)驗(yàn)值為23.64％±0.93％平均包封率為94.68％±2.57％(n＝30)
4.體外釋藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在最佳條件下制備的納米微球，以含適量甲醇的1/15mol/LPBS為溶媒，進(jìn)行體外釋放試驗(yàn)表1納米微球收率、含藥量和粒徑分布批號 投料比 收率含藥量 粒經(jīng)分布/nmPLA/藥物 ％ ％ ＜50 50-100 100-30011/0.2 88.718.1 2.1 82.7 17.721/0.2 89.317.7 0.0 79.6 17.731/0.2 90.518.3 0.4 74.9 21.941/0.2 87.517.5 3.0 69.1 24.551/0.2 92.616.8 1.9 75.7 19.261/0.2 91.117.3 1.8 75.9 19.6表2維甲酸PLA納米微球體外藥物釋放曲線維甲酸納米微球藥物釋放時(shí)間(h)累積釋放量(％)1.015.62.016.13.019.84.023.65.026.810.0 47.620.0 63.540.0 78.460.0 80.180.0 81.3100.0 82.6120.0 84.9140.0 84.8160.0 85.1
表3維甲酸裸藥藥物體外釋放曲線釋放時(shí)間(h) 累積釋放量％1.0 19.82.0 21.53.0 32.14.0 38.75.0 48.810.0 98.420.0 ---40.0 ---60.0 ---80.0 ---100.0 ---120.0 ---140.0 ---160.0 ——用于本發(fā)明藥物緩釋基質(zhì)的聚乳酸是一種可生物降解材料，而且在人和動物體內(nèi)可非酶水解，與血液完全相溶，在體內(nèi)緩慢地水解為對人體無害的乳酸，最終分解為二氧化碳和水。采用超聲乳化溶劑揮發(fā)的方法制備的維甲酸藥物納米微球是將維甲酸包裹于控釋載體粒子內(nèi)部，使藥物能夠通過囊壁瀝濾和為基質(zhì)的溶蝕使藥物滲透和擴(kuò)散出來?？蒯屩苿┌匆患壏磻?yīng)方程釋放?；疽云椒€(wěn)恒定的血藥濃度釋放，不受生物和食物因素的影響，避免藥物在體內(nèi)的突釋所造成的副作用，由以上可見維甲酸裸藥在10h溶出已達(dá)98.4％，而其維甲酸納米微球溶出85.1％需160h，表現(xiàn)出明顯的藥物緩釋作用，微球在開始階段釋放較快，是因?yàn)橛捎诓糠志S甲酸粘附在納米微球表面所致。
采用溶劑揮發(fā)法制備納米微球，如何提高收率、獲得粒徑合適均勻的微球是研究者們所關(guān)注的問題。分析正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，超聲探頭的振幅越高，乳滴越小，形成的納米微球就小，但振幅不能過高以免影響微球的質(zhì)量，外水相粘度增大則有利于形成較小而均一的乳滴。PLA投量增加，粒徑增大，RA增加，平均粒徑減小。本試驗(yàn)按優(yōu)選條件制備的納米微球，平均收率可達(dá)90％以上，粒徑分布77％在90-150nm.。
體外釋藥試驗(yàn)可部分反應(yīng)納米微球在體內(nèi)的釋藥特征、本試驗(yàn)結(jié)果顯示，含藥量越高，粒徑越小，體外釋藥速率越快，而且主要表現(xiàn)在最初階段。本方法制備的PLA-RA納米微球的粒徑大小適合注射及靜脈給藥。具有包封完全、收率高、緩釋等特性，使RA通過靜脈給藥成為可能。這樣是解決RT口服利用率低和耐藥性的有效手段之一。
權(quán)利要求
1.一種維甲酸控釋納米微球及其制備方法，其特征在于其組分及其重量百分配比(kg)聚乳酸(PLA)，5-25％，維甲酸(RA)，20-35％，明膠水溶液，50-60％；其制備方法為復(fù)合乳液-溶劑揮發(fā)法①配制氯甲烷與丙酮混合溶液，將上述PLA溶于其中，再加入1-3ml混合乳化劑土溫(tween)-80土溫(tween)-20＝5∶1；②將需包埋的維甲酸藥物以20％-35％的重量比溶于上述共溶劑中，將溶液均勻混合；③加上述明膠水溶液用輸入功率為50-55W的超聲探頭制備成水包油型乳液，④常壓下磁力攪拌16小時(shí)后從100mmHg減壓到30mmHg，攪拌蒸發(fā)6小時(shí)；⑤用冷凍離心機(jī)(12100轉(zhuǎn)×G)離心收集固化納米粒子，加蒸餾水40ml在混合器上打散混合振蕩5min-10min；⑥將打散混合后的維甲酸納米微球再次以12100轉(zhuǎn)×G離心，收集其固化的納米粒子，加蒸餾水40ml在混合器上打散沉淀物混合振蕩5min-10min；⑦將混合振蕩后的維甲酸納米微球經(jīng)冷凍離心機(jī)(12100轉(zhuǎn)×G)離心收集固化納米粒子，加蒸餾水10ml，打散混合均勻；⑧將混合均勻的維甲酸納米微球分裝入小瓶中冷凍；⑨在冷凍干燥器上冷凍干燥18-36小時(shí)；⑩將冷凍干燥后的維甲酸納米藥物消毒后備用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維甲酸控釋納米微球及其制備方法，其特征在于其組分及重量百分?jǐn)?shù)配比(kg)聚乳酸(PLA)，13％，維甲酸(RA)， 35％，明膠水溶液， 52％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維甲酸控釋納米微球及其制備方法，其特征在于組分及重量百分?jǐn)?shù)配比(kg)聚乳酸(PLA)，15％，維甲酸(RA)， 35％，明膠水溶液， 50％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維甲酸控釋納米微球及其制備方法，其特征在于其納米維球中RA的含量平均包封率為94.68％±2.57％(n＝30)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物控釋納米及其制備方法，特別是涉及一種維甲酸控釋納米微球及其制備方法，其特征在于其組分及其重量百分配比(kg)聚乳酸(PLA)5－15％，維甲酸(RA)20－35％，明膠水溶液50－60％；其制備方法為復(fù)合乳液－溶劑揮發(fā)法，可使TR通過溶解、包裹作用位于粒子內(nèi)部，或者通過吸附、附著作用位于粒子表面。納米控釋藥物的釋放機(jī)理可以是藥物通過囊壁瀝濾、滲透和擴(kuò)散出來；也可以是基質(zhì)本身的溶蝕而使其中的藥物釋放出來。緩釋藥物可延長藥物作用時(shí)間；可達(dá)到靶向輸送的目的；可在保證藥物作用的前提下，減少給藥劑量，從而減輕或避免毒副反應(yīng)；可提高藥物的穩(wěn)定性，有利于儲存。
文檔編號A61P17/00GK1565436SQ0313035
公開日2005年1月19日 申請日期2003年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月30日
發(fā)明者于美麗, 方淑昌 申請人:于美麗, 方淑昌