專利名稱：一種注射用藤黃酸制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一種注射用藤黃酸制劑及其制備方法涉及的是一種中藥制劑，特別是涉及藤黃酸、含有它的制劑及其制備方法。
用上述方法提取的藤黃酸具有抗腫瘤作用，用藤黃酸制成的注射劑應(yīng)用于抗腫瘤研究也有報(bào)道，目前報(bào)道的注射劑主要有直接溶解在水中的、用硼酸溶液配制的，這些注射劑需要加入大量助溶劑，穩(wěn)定性差，臨床使用不便。
一種注射用藤黃酸制劑及其制備方法是采以下方案實(shí)現(xiàn)一種注射用藤黃酸制劑，其特征是以藤黃酸為活性成分，其余成分為助溶劑，賦形劑、注射用水，其原料重量份配比范圍藤黃酸1～50份助溶劑1～50份賦形劑1～100份注射用水 0～4000份注射用藤黃酸制劑原料優(yōu)選重量份配比范圍藤黃酸10～50份助溶劑10～50份賦形劑1～60份注射用水 0～3800注射用藤黃酸制劑原料優(yōu)選重量份配比范圍藤黃酸20～30份助溶劑15～25份賦形劑30～50份注射用水 0～24000份注射用藤黃酸制劑可以是注射劑、凍干注射劑。
助溶劑選用L-精氨酸、葡甲胺、賴氨酸中的一種，經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)以L-精氨酸最佳。賦形劑選用甘露醇、右旋糖苷、氯化鈉中的一種，經(jīng)比較以甘露醇最佳。
注射用藤黃酸制劑制備方法，其特征在于按重量份配比稱取原料藤黃酸1～50份，加入注射用水0～4000份攪勻，加入助溶劑1～50份，超聲溶解至澄清，加入賦形劑1～100份，攪拌溶解，加入活性炭、攪拌、脫炭、過(guò)濾、灌裝，即制成藤黃酸注射劑，將藤黃酸注射劑冷凍干燥，即制成藤黃酸凍干注射劑。
上述注射用藤黃酸制劑制備方法中助溶劑選用L-精氨酸、葡甲胺、賴氨酸中的一種；賦形劑選用甘露醇、右旋糖苷、氯化鈉中的一種。
上述注射用藤黃酸制劑在制備一種抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所用原料藤黃酸具有抗腫瘤作用，本發(fā)明所用藤黃酸可使用背景技術(shù)中的方法制備，也可使用如下方法制備將藤黃樹(shù)脂剪成小粒，用粉碎機(jī)粉碎成粉(約10目)，將藤黃粉600g，置3000ml三角燒瓶中，加入1500ml吡啶，振搖、靜置30分鐘后，移入85℃水浴中熱浸2小時(shí)，并不斷振搖，趁熱過(guò)濾，濾瓶用熱吡啶洗滌3次，每次100ml，合并濾液及洗滌液加入60℃熱水150ml，放置于冰箱中過(guò)夜。于次日取出，減壓濾過(guò)，濾餅用70％吡啶洗滌兩次，每次80ml，再用蒸餾水洗滌三次，每次60ml，抽干后，于紅外燈下烘干，得干品75g，收率12.5％。
將上述干燥品放入1000ml圓底燒瓶中，加乙醚600ml，水浴上回流溶解，放冷，濾出不溶物，濾液濃縮至1/3體積，向燒瓶中加入同體積石油醚搖勻，放置2小時(shí)。濾出固體，用石油醚(60C～90℃)洗滌三次，每次50ml，抽干后，紅外光下烘干，得干品42g，收率56％。
將上述干品用乙醚溶解后，移置1000ml分液漏斗中，用1N鹽酸1200ml，分四次洗滌，每次300ml，再用蒸餾水洗滌至水層顯中性，分取乙醚層，用無(wú)水Na2SO4干燥，抽濾，于水浴上濃縮乙醚至干，得成品藤黃酸原料30g，收率70.0％，純度98.5％。TLC檢查一個(gè)主斑點(diǎn)，Rf0.硅膠G板，展開(kāi)劑∶苯-乙酸乙酯-甲酸(75.24∶1.5)。
本發(fā)明注射用藤黃酸制劑配方的篩選藤黃酸為橙黃色結(jié)晶性粉末，在乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑中溶解，水中不溶，在堿性溶液中如氫氧化鈉溶液中溶解，但不穩(wěn)定，易水解，故選擇助溶劑是關(guān)鍵。我們選擇了多種助溶劑如氫氧化鈉、碳酸氫鈉、吐溫80、泊拉沙姆、菸酰胺、葡甲胺、L-精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、賴氨酸等，在0.1mol/L氫氧化鈉中和碳酸氫鈉中溶解最快，溶液在數(shù)小時(shí)后顏色變深，可見(jiàn)有降解。表面活性劑對(duì)本品助溶效果不明顯，L-半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸助溶差，L-精氨酸及賴氨酸助溶較好，水溶液放置數(shù)天顏色基本不變，含量變化較小，葡甲胺次之。所以選擇L-精氨酸為本品的最佳助溶劑，結(jié)果見(jiàn)下表。表1藤黃酸選用助溶劑的試驗(yàn)結(jié)果(藤黃酸125mg10ml)助溶劑 用量 定容后量(ml)溶解情況 溶液顏色變化情況氫氧化鈉0.1mol/L8ml 10 澄清4h顏色逐漸加深碳酸氫鈉0.1mol/L8ml 10 澄清4h顏色逐漸加深吐溫80 0.2g 10 混濁橙黃色乳光泊拉沙姆0.2g 10 混濁橙黃色混懸菸酰胺 0.2g 10 溶解，較澄清橙黃色不變葡甲胺 0.2g 10 部分溶解 橙黃色混濁L-半胱氨酸 0.2g 10不溶液 混懸L-精氨酸0.1g 10 澄清3d橙黃色不變谷氨酸 0.1g 10 不溶 混懸甘氨酸 0.10g10 不溶 混懸賴氨酸 0.10g10 澄清3d橙黃色不變先澄清，加水后析無(wú)水乙醇 2ml 10 橙黃色混濁出本制劑主藥每瓶?jī)H為25mg，加不加賦形劑，凍干后呈網(wǎng)狀，松散，易碎，所以我們進(jìn)行了賦形劑的篩選，選擇的賦形劑有甘露醇、乳糖、右旋糖苷、氯化鈉，葡萄糖，結(jié)果見(jiàn)表2。表2賦形劑的篩選結(jié)果賦形劑 用量(mg) 外觀 澄清度甘露醇 40 塊狀 澄清氯化鈉 40 塊狀起皮 澄清葡萄糖 40塊狀 混濁乳糖40塊狀 乳光右旋糖苷40塊狀 略帶乳光無(wú) -網(wǎng)狀、松散、易碎澄清本發(fā)明的注射用藤黃酸配方的組合物經(jīng)過(guò)穩(wěn)定性對(duì)比實(shí)驗(yàn)，證明具有更加優(yōu)良的穩(wěn)定性。不加L-精氨酸的溶液，在經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后溶液變得渾濁，同樣時(shí)間內(nèi)，加入了L-精氨酸的溶液不變，另外，在高濕高熱情況下，上述組合物也表現(xiàn)出非常的穩(wěn)定性。加入了L-精氨酸大大增加了溶解度，也使穩(wěn)定性提高。
本發(fā)明的藤黃酸制劑具有良好的抗腫瘤作用，以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。實(shí)驗(yàn)例1注射用藤黃酸體外抑瘤實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物注射用藤黃酸，規(guī)格25mg/支。(2)瘤株a.人乳腺癌MCF-7，b.人肝癌貝爾-7402，c.人宮頸癌Hela2.實(shí)驗(yàn)方法參照腫瘤細(xì)胞體外篩選法中相關(guān)方法，將指數(shù)生長(zhǎng)期的人乳腺癌MCF-7、人肝癌BEL-7402、人宮頸癌Hela三種細(xì)胞以3000～5000個(gè)/180ul/孔，接種于96孔板內(nèi)，次日用培養(yǎng)液稀釋藥物，每孔20ul加入孔內(nèi)，使其終濃度為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10、20、50ug/ml，每稀釋度設(shè)3孔，并設(shè)不加藥對(duì)照組和不接種細(xì)胞空白本底組。加藥后2天(藥物作用48小時(shí))傾去培養(yǎng)液，加入MTT(SIGMA)液150ul(0.5ug/ml)，4小時(shí)后用DMSO溶解細(xì)胞，用EL-312型酶標(biāo)儀上以波長(zhǎng)540nm測(cè)光密度吸收值OD，并計(jì)算抑制率。公式為1-{(用藥組OD-空白本底OD)/(對(duì)照組OD-空白對(duì)照OD)}×100％3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)、綜合四次試驗(yàn)結(jié)果，按公式計(jì)算生長(zhǎng)抑制率，結(jié)果如下表3注射用藤黃酸對(duì)人癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用劑量(ug/ml) 抑制率(％X±S)MCF-7 BEL-7402 Hela0.2 00 00.5 09.35±9.3517.41.0 32.58±11.9882.65±16.35 42.63±12.912.0 98.45±1.55100±0 74.4.±16.195.0 100±0 100±0 100±0(2)、肝癌BEL-7402細(xì)胞對(duì)注射用藤黃酸最敏感，IC50約為0.78ug/ml，乳腺癌MCF-7和宮頸癌HeLa細(xì)胞次之，其IC50分別為1.25ug/ml和1.35ug/ml。實(shí)驗(yàn)2注射用藤黃酸對(duì)小鼠移植肉瘤S180、小鼠肝癌H-22以及小鼠艾氏癌實(shí)體瘤的抑制作用藥物配制定量稱取注射用藤黃酸，加入0.9％NaCl溶液配成所需濃度。給藥途徑靜脈給藥給藥周期于接種后次日，隔日連續(xù)給藥二天，每天一次，共6次。停藥后第一天處死解剖。
劑量設(shè)置共設(shè)五組A組注射用藤黃酸組(8、4、2mg/kg)B組羥基喜樹(shù)堿組1mg/kgC組空白對(duì)照組(生理鹽水0.1ml/20g)小鼠類型昆明種小鼠，體重18-22g，雄性給藥體積0.1ml/20g實(shí)驗(yàn)方法取上述規(guī)格小鼠50只，按移植性腫瘤研究法接種，接種后24小時(shí)稱鼠重，并隨機(jī)分為5組，每組10只，注射用藤黃酸組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組、并設(shè)陽(yáng)性對(duì)組羥基喜樹(shù)堿組和陰性對(duì)照組生理鹽水組。于停藥后第一天稱重，處死并分離瘤體，稱瘤重并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))表4注射用藤黃酸iv對(duì)小鼠移植S180的抑制作用劑量 體重(g)組別鼠數(shù)(只) 瘤重(g) 抑瘤率(％)(mg/kg)給藥前給藥后10 820.3 22.40.95±0.29**63.8A組 10 420.3 21.71.09±0.43**58.610 220.2 22.41.40±0.43**47.1B組 10 120.0 21.40.97±0.31**63.1C組 1020.2 21.92.64±0.55**P＜0.01與生理鹽水對(duì)照組比較表5注射用藤黃酸iv對(duì)小鼠肝癌H-22的抑制作用劑量體重(g)組別鼠數(shù)(只) 瘤重(g) 抑瘤率(％)(mg/kg) 給藥前給藥后10 8 21.2 22.6 1.26±0.36**57.3A組 10 4 21.2 23.4 1.81±0.37**39.110 2 21.3 24.0 1.95±0.46**33.3B組 10 1 21.0 23.1 1.27±0.25**62.8C組 1021.2 23.2 2.95±0.39**P＜0.01與生理鹽水對(duì)照組比較表6注射用藤黃酸iv對(duì)小鼠艾氏癌實(shí)體瘤的抑制作用劑量體重(g) 抑瘤率組別鼠數(shù)(只) 瘤重(g)(mg/kg) 給藥前給藥后 (％)10 8 20.2 23.6 1.20±0.39**51.3A組 10 4 20.9 24.6 1.35±0.38**45.610 2 20.8 24.2 1.75±0.43**29.4B組 10 1 20.8 24.1 1.18±0.27**52.3C組 10 21.2 23.2 2.46±0.37**P＜0.01與生理鹽水對(duì)照組比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明與生理鹽水對(duì)照組比較，注射用藤黃酸對(duì)小鼠移植S180，小鼠肝癌H-22及小鼠艾氏癌實(shí)體瘤的生長(zhǎng)均有明顯地抑制作用，對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)無(wú)明顯影響。其對(duì)瘤體的抑制作用與羥基喜樹(shù)堿注射液相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)3注射用藤黃酸對(duì)裸鼠人肝癌7721的實(shí)驗(yàn)治療作用藥物配制定量稱取注射用藤黃酸內(nèi)容物適量加入0.9％NaCl溶液配成所需濃度。
給藥途徑靜脈給藥。
劑量設(shè)置共五個(gè)組A組注射用藤黃酸組(6、3、1.5mg/kg)B組羥基喜樹(shù)堿組(1mg/kg)C組生理鹽水對(duì)照組(0.1ml/20g)小鼠類型裸鼠，體重16～18g，6～8周齡。
給藥體積0.05ml/10g實(shí)驗(yàn)方法取裸鼠40只，同一性別，16-18g，正常飼養(yǎng)觀察3天無(wú)異常后，在無(wú)菌條件下腑下小塊(2mm3/塊，1塊/只)接種裸鼠人肝癌7721后隨機(jī)分組，8只/組，共5組。注射用藤黃酸以生理鹽水溶解，配制1.2mg/ml，0.6mg/ml和0.3mg/ml三種濃度，分別用于6mg/kg、3mg/kg和1.5mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組。靜脈給藥，給藥體積為0.05mg/10g體重，接種后第5日開(kāi)始給藥，1次/3天，共10次。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性藥對(duì)照(羥基喜樹(shù)堿1mg/kg)及單純對(duì)照組(生理鹽水0.1ml/只)。末次給藥后次日處死動(dòng)物稱體重，剝?nèi)∧[瘤稱瘤重，按公式[(對(duì)照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重]×100％，計(jì)算腫瘤抑制率，并用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。表7注射用藤黃酸iv對(duì)裸鼠人肝癌7721的實(shí)驗(yàn)結(jié)果劑量 體重(g)組別 鼠數(shù)(只) 瘤重(g) 抑瘤率(％)(mg/kg) 給藥前 給藥后8 6 16.518.9 0.84±0.12**53.7A組 8 3 16.619.7 1.32±0.28**26.88 1.5 16.421.2 1.58±0.23**13.0B組 8 1 16.619.8 0.53±0.14**69.8C組 8 16.519.5 1.79±0.29**P＜0.01與生理鹽水組比較取處方量藤黃酸置適宜容器中，加適量注射用水(總體積的80％)，攪勻，加入L-精氨酸酸超聲溶解至澄清，加入甘露醇，攪拌溶解，加入1％針用炭，攪拌30分鐘，脫炭，加注射用水至足量，測(cè)定中間體含量合格后，在無(wú)菌條件下，0.22微孔濾膜過(guò)濾，濾液灌裝于10ml西林瓶中，每瓶2ml，半加塞，裝盤(pán)，送入凍干箱中，插入溫度傳感器，關(guān)閉箱門(mén)開(kāi)機(jī)并至干燥，密塞，出箱，扎蓋，檢查，包裝即可。
取處方量藤黃酸置適宜容器中，加適量注射用水(總體積的280％)，攪勻，加入L-精氨酸超聲溶解至澄清，加入甘露醇，攪拌溶解，加入1％針用炭，攪拌30分鐘，脫炭，加注射用水至足量，測(cè)定中間體含量合格后，在無(wú)菌條件下，0.22微孔濾膜過(guò)濾，濾液灌裝于10ml西林瓶中，每瓶2ml。實(shí)施例3配方1000瓶?jī)龈勺⑸鋭冱S酸50g(50重量份)，葡甲胺或賴氨酸50g(50重量份)，右旋糖苷或氯化鈉100g(100重量份)，注射用水4000ml(4000重量份)。
取處方量藤黃酸置適宜容器中，加適量注射用水(總體積的80％)，攪勻，加入葡甲胺或賴氨酸超聲溶解至澄清，加入右旋糖苷或氯化鈉，攪拌溶解，加入1％針用炭，攪拌30分鐘，脫炭，加注射用水至足量，測(cè)定中間體含量合格后，在無(wú)菌條件下，0.22微孔濾膜過(guò)濾，濾液灌裝于10ml西林瓶中，每瓶4ml，半加塞，裝盤(pán)，送入凍干箱中，插入溫度傳感器，關(guān)閉箱門(mén)開(kāi)機(jī)并至干燥，密塞，出箱，扎蓋，檢查，包裝即可。
取處方量藤黃酸置適宜容器中，加適量注射用水(總體積的280％)，攪勻，加入葡甲胺或賴氨酸超聲溶解至澄清，加入右旋糖苷或氯化鈉，攪拌溶解，加入1％針用炭，攪拌30分鐘，脫炭，加注射用水至足量，測(cè)定中間體含量合格后，在無(wú)菌條件下，0.22微孔濾膜過(guò)濾，濾液灌裝于10ml西林瓶中，每瓶4ml。
將上述干燥品放入1000ml圓底燒瓶中，加乙醚600ml，水浴上回流溶解，放冷，濾出不溶物，濾液濃縮至1/3體積，向燒瓶中加入同體積石油醚搖勻，放置2小時(shí)。濾出固體，用石油醚(60℃-90℃)洗滌三次，每次50ml，抽干后，紅外光下烘干，得干品42g，收率56％。
將上述干品用乙醚溶解后，移置1000ml分液漏斗中，用1N鹽酸1200ml，分四次洗滌，每次300ml，再用蒸餾水洗滌至水層顯中性，分取乙醚層，用無(wú)水Na2SO4干燥，抽濾，于水浴上濃縮乙醚至干，得成品藤黃原料30g，收率70.0％純度98.5％。TLC檢查一個(gè)主斑點(diǎn)，Rf0.65[硅膠G板，展開(kāi)劑苯-乙酸乙酯-甲酸(75∶24∶1.5)]。
本發(fā)明一種注射用藤黃酸制劑及其制備方法，該制劑配方改進(jìn)了目前藤黃酸注射劑的缺陷，具有良好的溶解性和穩(wěn)定性，并且經(jīng)濟(jì)實(shí)用，具有良好的抗腫瘤作用，通過(guò)實(shí)驗(yàn)例說(shuō)明本發(fā)明治療效果優(yōu)良。
權(quán)利要求
1.一種注射用藤黃酸制劑，其特征是以藤黃酸為活性成分，其余成分為助溶劑，賦形劑、注射用水，其原料重量份配比范圍藤黃酸1～50份助溶劑1～50份賦形劑1～100份注射用水 0～4000份
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑，其特征在于其原料優(yōu)選重量份配比范圍藤黃酸10～50份助溶劑10～50份賦形劑1～60份注射用水 0～3800份
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑，其特征在于其原料優(yōu)選重量份配比范圍藤黃酸20～30份助溶劑15～25份賦形劑30～50份注射用水 0～2400份
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑，其特征在于制劑是注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑，其特征在于制劑是凍干注射劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑，其特征在于助溶劑選用L-精氨酸、葡甲胺、賴氨酸中的一種，經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)以L-精氨酸最佳。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑，其特征在于賦形劑選用甘露醇、右旋糖苷、氯化鈉中的一種，經(jīng)比較以甘露醇最佳。
8.權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑制備方法，其特征在于按重量份配比稱取原料藤黃酸1～50份，加入注射用水0～4000份攪勻，加入助溶劑1～50份，超聲溶解至澄清，加入賦形劑1～100份，攪拌溶解，加入活性炭、攪拌、脫炭、過(guò)濾、灌裝，即制成藤黃酸注射劑，將藤黃酸注射劑冷凍干燥，即制成藤黃酸凍干注射劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的注射用藤黃酸制劑制備方法，其特征在于助溶劑選用L-精氨酸、葡甲胺、賴氨酸中的一種；賦形劑選用甘露醇、右旋糖苷、氯化鈉中的一種。
10.權(quán)利要求1所述的注射用藤黃酸制劑在制備一種抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明一種注射用藤黃酸制劑及其制備方法涉及的是一種含有藤黃酸中藥制劑。注射用藤黃酸制劑，其特征是以藤黃酸為活性成分，其余成分為助溶劑，賦形劑、注射用水，其原料重量份配比范圍藤黃酸1～50份，助溶劑1～50份，賦形劑1～100份，注射用水0～4000份。注射用藤黃酸制劑制備方法按重量份配比稱取原料藤黃酸1～50份，加入注射用水0～4000份攪勻，加入助溶劑1～50份，超聲溶解至澄清，加入賦形劑1～100份，攪拌溶解，加入活性炭、攪拌、脫炭、過(guò)濾、灌裝，即制成注射劑，將注射劑冷凍干燥，即制成凍干注射劑。助溶劑選用L－精氨酸、葡甲胺、賴氨酸中的一種。賦形劑選用甘露醇、右旋糖苷、氯化鈉中的一種。
文檔編號(hào)A61K31/352GK1452960SQ0313151
公開(kāi)日2003年11月5日 申請(qǐng)日期2003年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月21日
發(fā)明者戴建國(guó) 申請(qǐng)人:戴建國(guó)