專利名稱：一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物，本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法。
背景技術(shù)：
出血性中風(fēng)屬于中醫(yī)疾病的概念，又稱“中風(fēng)”、“卒中”，西醫(yī)相應(yīng)的病名為腦出血。腦出血是腦血管病中的一種。在世界上，腦血管病病死率居所有疾病的第三位，而腦出血占腦血管病的10％～30％，是腦血管疾病中主要的致死原因。
出血性中風(fēng)乃一急危重癥，發(fā)病率、致殘率、死亡率均很高。據(jù)調(diào)查，出血性中風(fēng)急性期病死率在18％～75％，其病后生存者60％～65％遺有不同程度的癱瘓、失語、癡呆等后遺癥，且有40％左右的重殘者。隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人口老齡化的出現(xiàn)，人群中高血壓、肥胖、吸煙、飲酒、高血脂、糖尿病等危險(xiǎn)因素水平上升，引起出血性中風(fēng)的發(fā)病率及死亡率也與日劇增，上海市對(duì)91428人進(jìn)行長達(dá)4年的疾病監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，出血性中風(fēng)的死亡率為60.3％，男性發(fā)病率與死亡率均高于女性，且隨年齡的增長，其死亡率呈上升趨勢(shì)。隨著人們生活水平的提高和世界范圍的社會(huì)老齡化，其發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)。
出血性中風(fēng)急性期發(fā)病急驟，癥見多端，變化迅捷，及時(shí)救治對(duì)提高搶救成功率和病人的生存質(zhì)量，具有重要意義，醫(yī)學(xué)界一直將其列為重點(diǎn)研究的疾病之一。西醫(yī)學(xué)治療腦出血的方法分為手術(shù)治療和內(nèi)科綜合治療兩大類，手術(shù)治療主要用于出血量較大而有手術(shù)指征的患者，有一定的危險(xiǎn)性。內(nèi)科綜合治療除常規(guī)脫水劑減輕腦水腫、降壓藥物控制血壓、防治感染、糾正酸堿平衡和電介質(zhì)紊亂之外，加用神經(jīng)細(xì)胞功能改善劑和鈣通道阻滯劑，但療效尚不能令人滿意。近年來，中醫(yī)學(xué)對(duì)出血性中風(fēng)急性期的病因病機(jī)、治療方法進(jìn)行了多方面的研究，目前國內(nèi)專家公認(rèn)西醫(yī)綜合性治療合并中醫(yī)藥療法優(yōu)于單純的西醫(yī)綜合治療。因此，研制搶救出血性中風(fēng)急性期的新制劑，是當(dāng)前急需解決的難題。
出血性中風(fēng)病理機(jī)制主要在高血壓、動(dòng)脈硬化等基礎(chǔ)上發(fā)生的急性顱內(nèi)出血，出血后形成血腫壓迫局部。而致神經(jīng)功能受損同時(shí)，血腫在顱內(nèi)形成占位性病變，導(dǎo)致顱內(nèi)壓更驟然升高腦組織局部出血，血腫形成所引起的腦水腫，腦組織受壓、推移、軟化、壞死等。目前出血性中風(fēng)的西醫(yī)內(nèi)科治療手段是脫水，降低顱內(nèi)壓、止血、抗感染及神經(jīng)營養(yǎng)劑，但內(nèi)科保守治療病死率、致殘率均較高，西藥中尚無溶化血腫的特效藥物。外科手術(shù)清除血腫、抽吸引流等為降低病死率和致殘率起到了積極作用。但手術(shù)和麻醉本身可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生負(fù)面影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提出了采用涼血止血、活血化瘀、瀉下通腑之藥為主，輔以清熱瀉火、行血破瘀的一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物。
本發(fā)明另一個(gè)要解決的技術(shù)問題是提出了該治療出血性腦中風(fēng)的藥物的制備方法。
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的，一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物，其特點(diǎn)是它是由以下重量配比的原料制成的大黃160～200梔子160～200牡丹皮100～150本發(fā)明藥物的最佳重量(份)配比是大黃187.5 梔子187.5 牡丹皮125本發(fā)明所述的藥物劑型為藥劑學(xué)所述的任何劑型。其生產(chǎn)方法是取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，加入藥用輔料，制成臨床可接受的劑型。
本發(fā)明所述的藥物劑型為注射劑。其生產(chǎn)方法是取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，用100～200ml丙二醇溶解后，緩緩加入400～700ml水中，攪拌、加熱溶解，加0.8～1.2g亞硫酸鈉、0.3～0.8g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)節(jié)pH7.5～8，濾過，濾液通過活性炭脫色，再加水稀釋至1000ml，使每ml含生藥量0.5g，濾過，灌封，滅菌，檢查，包裝，即得注射液；或取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，用100～200ml丙二醇溶解后，緩緩加入400～700ml水中，攪拌、加熱溶解，加100～500g甘露醇，0.8～1.2g亞硫酸鈉、0.3～0.8g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)節(jié)pH7.5～8，濾過，濾液通過活性炭脫色，再加水稀釋至1000ml，使每ml含生藥量0.5g，濾過，灌裝，經(jīng)凍干工序制成凍干粉針劑。
藥學(xué)原理《內(nèi)經(jīng)素問·調(diào)經(jīng)論》曰“血之與氣，并走于上，則為大厥，厥則暴死，氣復(fù)反則生，不反則死”，揭示了出血性中風(fēng)血隨氣逆的病理基礎(chǔ)。本病的病機(jī)主要在于瘀血和火熱兩種致病因子的共同參與，以致瘀熱相搏，沖激上逆，損傷腦絡(luò)，絡(luò)破血溢，腦中蓄血，從而表明病證是“瘀熱阻竅”型。其特點(diǎn)為離經(jīng)之血瘀阻腦腑，使腦髓壅滯，閉阻竅絡(luò)，元神內(nèi)困，五臟失統(tǒng)，六腑氣閉，肢體失相。一旦發(fā)病，來勢(shì)兇險(xiǎn)，風(fēng)火相煽，氣血逆亂，升降失調(diào)，導(dǎo)致“血之與氣，并走于上”，沖腦損絡(luò)，絡(luò)破血溢即成“腦中蓄血”。發(fā)病過程中，風(fēng)痰上擾、熱迫血行是導(dǎo)致出血性中風(fēng)的始動(dòng)因素。離經(jīng)之血即為瘀血，有學(xué)者對(duì)“離經(jīng)之血——腦中蓄血為瘀血”的中醫(yī)理論進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)出血性中風(fēng)有明顯的血液流變學(xué)指標(biāo)變化，從而認(rèn)為其為出血性血瘀證或是血管性血瘀證，現(xiàn)代CT檢查更證實(shí)顱內(nèi)有高密度出血性改變?cè)睢?br> 張介賓曰“治風(fēng)先治血，血行風(fēng)自滅”，從中西醫(yī)理論或臨床研究均角度證實(shí)了這一觀點(diǎn)，故出血性中風(fēng)應(yīng)從血論治。此外，出血性中風(fēng)急性期常出現(xiàn)發(fā)熱，部分患者雖無體溫增高，但有明顯的熱證表現(xiàn)，如口苦、咽干、煩躁，甚至譫妄、夜不安、大便秘結(jié)等而呈陽明腑實(shí)之證象。“本發(fā)明注射液”之處方依據(jù)上述理論而立法，采用涼血止血、活血化瘀、瀉下通腑之藥為主，輔以清熱瀉火、行血破瘀之品，用于治療出血性中風(fēng)急性期的瘀熱阻竅證。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)通過主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明注射液與臨床功能主治有關(guān)的作用。
藥品及試劑本發(fā)明注射液(濃縮液)為棕紅色液體，藥液濃度2.0g/ml(按生藥量計(jì)算)，成人日用量為40g/60kg(按生藥量計(jì)算)，由江蘇中康新藥指紋圖譜開發(fā)有限公司提供，批號(hào)20010818。臨用前用無菌溶媒稀釋至所需濃度；無菌溶媒，江蘇中康新藥指紋圖譜開發(fā)有限公司提供，批號(hào)20010818；清開靈注射液，由山西太行藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)010606-10；氯化鈉注射液，由南京小營制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)010208；戊巴比妥鈉，使用前用滅菌注射用水配制成4％的水溶液；青霉素，由哈爾濱制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)980726；硫酸慶大霉素，由江蘇宜興前進(jìn)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)980109；2％碘酊，由江蘇省常熟市衛(wèi)生化工廠生產(chǎn)，批號(hào)990122；無水乙醇，AR，由南京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)970302；牛凝血酶(bovine thrombin)，2unit/μl，pH7.0，含50μmol的脆絲鹽酸緩沖體系，批號(hào)EC3.4.21.5；伊文斯蘭，由中國醫(yī)藥集團(tuán)(上海)化學(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)990501；生理鹽水，由南京小營制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)001209；70％乙醇，由南京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的乙醇(AR，批號(hào)990302)配制而成；鹽酸腎上腺素注射液(1mg/ml)，武漢諾佳藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)010601，臨用前用生理鹽水稀釋成0.1mg/ml；烏來糖(氨基甲酸乙酯)中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司，化學(xué)純，批號(hào)C，用蒸餾水配成25％的烏來糖溶液。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證蘇(動(dòng))質(zhì)98003。
純種日本大耳白家兔，雄性，體重1.7～2.3kg，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。蘇動(dòng)(質(zhì))98003。
儀器江灣I型C腦立體固定儀，上海第二軍醫(yī)大學(xué)器材處；754紫外可見分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；DKZ-2型電熱恒溫振蕩水槽，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DF110型電子分析天平，常熟衡器公司；YXQ-280電熱式壓力蒸汽消毒器；752紫外分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；SB2200超聲波清洗器，上海必能超聲有限公司；10μl微量進(jìn)樣器，上海醫(yī)用激光儀器廠；DHJ-9076A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；JA2003型電子秤，上海天平儀器廠；手術(shù)刀、止血鉗、眼科鑷、縫合針線、脫脂棉、紗布等。
實(shí)驗(yàn)條件給藥前后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均分籠飼養(yǎng)，喂全價(jià)顆粒飼料或青稞飼料(南京市江浦縣藥檢所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料加工廠提供)，自由飲水，室溫22～25℃，濕度50～70％。
統(tǒng)計(jì)方法本實(shí)驗(yàn)采用t檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)。
對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血模型的影響(1)造模方法大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始造模。眼眶取血0.5ml/只，肝素抗凝；大鼠4mg/kg戊巴比妥鈉按10ml/kg體重腹腔注射麻醉，剪去頂毛，固定于立體定位儀；常規(guī)局部消毒，切開頭皮，以前囟為0點(diǎn)，向右旁開4mm，向后2mm，牙科鉆鉆孔，用微量注射器將自體抗凝血100μl緩慢注入尾殼核區(qū)，拔針，縫合頭皮[1]。
(2)分組給藥將造模成功的大鼠隨機(jī)分為6組，即①模型組，給予生理鹽水10ml/kg體重；②高劑量組(本發(fā)明I組)，給予本發(fā)明注射液生藥8g/kg體重；③中劑量組(本發(fā)明II組)，給予本發(fā)明注射液4g/kg體重；④低劑量組(本發(fā)明III組)，給予本發(fā)明注射液2g生藥/kg體重；⑤陽性對(duì)照組，給予清開靈注射液3.5ml/kg；⑥假手術(shù)組(手術(shù)方法相同，但不注入自體抗凝血)，給予生理鹽水10ml/kg體重。各組均腹腔注射給藥，給藥體積均為10ml/kg體重連續(xù)給藥5d。
(3)觀測(cè)指標(biāo)及方法①動(dòng)物一般情況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)觀察動(dòng)物造模后精神狀態(tài)、毛色、活動(dòng)能力、體重和死亡數(shù)。按下式計(jì)算大鼠體重增長率大鼠體重增長率＝(造模后第4天體重-造模前體重)/造模前體重×100％②動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)方案參照Bederson[2]及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組[3]方案修訂0級(jí)正常；I級(jí)一側(cè)肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行進(jìn)或有偏行(行進(jìn)打偏半徑超過1m)；II級(jí)一測(cè)肢體明顯無力，頭部輕度向另側(cè)歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5～0.75m左右；III級(jí)一側(cè)偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以正臥位，有顯著的歪頭、口角歪斜；IV級(jí)一側(cè)偏癱，不能正臥，呈側(cè)臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯，或不能自主進(jìn)食，神志迷蒙，或抽搐頻繁(10min內(nèi)2次以上)；V級(jí)昏迷或死亡。
③腦組織含水量測(cè)定脫頸椎處死大鼠，斷頭，剪開頭皮，以止血鉗小心剝離顱骨和硬腦膜，取腦于濾紙上，吸干殘血，去除小腦和嗅球，以手術(shù)刀片從正中線分左右大腦，分別稱重，計(jì)算左右腦重量差。再將左右半腦分別置于事先已干燥至恒重的小玻璃瓶內(nèi)，于烤箱內(nèi)70□下烘干至恒重，分別稱左右半腦干重，計(jì)算左半腦含水量。
腦干重＝恒重后的帶瓶腦重-稱量瓶重左腦組織含水率＝(左腦濕重-左腦干重)/左腦濕重×100％④腦指數(shù)計(jì)算腦指數(shù)＝全腦濕重(左半腦濕重+右半腦濕重)/體重×100⑥腦組織病理形態(tài)學(xué)的光鏡觀察標(biāo)本福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色，光鏡觀察。
(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果①動(dòng)物一般狀況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)造模后，各組大鼠均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、行動(dòng)遲緩或障礙等表現(xiàn)。各組大鼠在造模后均有不同程度的死亡，各給藥組動(dòng)物死亡率低于模型組，但給藥組動(dòng)物死亡率與模型組相比，無顯著性差異(p＞0.05)。見表1。
表1本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠死亡率的影響大鼠死亡率(％)分組動(dòng)物數(shù) 劑量(g/kg)術(shù)后1d 術(shù)后2d 術(shù)后3d 術(shù)后4d假手術(shù)組20-0(0/20)0(0/20) (0/20) (0/20)模型組 25-20(5/25) 36(9/25) 36(9/25) 45.45(9/25)清開靈組253.5ml/kg 8(2/25)36(9/25) 36(9/25) 35(9/25)本發(fā)明I組 25812(3/25) 28.00(7/25) 32(8/25) 40(8/25)本發(fā)明II組 25412(3/25) 32(8/25) 32(8/25) 35(8/25)本發(fā)明III組 2528(2/25)32(8/25) 36(9/25) 35(9/25)②對(duì)大鼠體重的影響造模前各組動(dòng)物體重?zé)o顯著性差異，造模后第4d，模型組大鼠體重增長率低于正常組，兩者相比，有顯著性差異(p＜0.01)。各給藥組動(dòng)物體重增長率均大于模型組，其中本發(fā)明注射液中劑量組動(dòng)物體重增長率與模型組兩者相比，有顯著性差異(p＜0.05)。見表2。
表2本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠體重的影響(X+S)劑量 造模前體重 造模后的體重 體重增長率分組動(dòng)物數(shù)(g/kg) (g) (g) (％)假手術(shù)組20 - 299±22.3303±27.11 1.17±2.21模型組 16 - 302.33±23.15292.83±27.26-3.18±4.7□□清開靈組16 3.5ml/kg 287.75±26.57285.42±30.15-0.89±2.97本發(fā)明I組 17 8 290±13.64 284.67±14.38-1.83±2.24本發(fā)明II組 17 4 289.62±17.22290.69±21.760.24±2.9*本發(fā)明III組 16 2 300.83±27.85295.08±32.89-2.04±3.21注與假手術(shù)組比較，□□p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05。
③神經(jīng)功能缺損評(píng)分大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射自身抗凝血后，均出現(xiàn)較為明顯的行為體征異常。造模后第1d，模型組與4個(gè)給藥組比較，大鼠神經(jīng)功能缺損分級(jí)無顯著性差異(p＞0.05)，造模第2d后，各給藥組動(dòng)物行為體征評(píng)分均低于模型組，本發(fā)明注射液高、中劑量組行為體征評(píng)分與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。清開靈組在造模第3d后，行為體征評(píng)分與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。造模后第4d，模型組動(dòng)物行為體征評(píng)分與自身第1d比較，無顯著性差，表明動(dòng)物自身恢復(fù)不顯著；本發(fā)明注射液中劑量組動(dòng)物行為體征評(píng)分造模后第4d與第1d比較，有顯著性差異。提示本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠的行為體征異常有一定的改善作用。見表3。
表3本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠神經(jīng)功能的影響(X+S)

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；同組第4d與第1d組比較，#p＜0.05。
④對(duì)腦指數(shù)和腦組織含水量的影響大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射自身抗凝血后，左右半腦重量差、腦指數(shù)和左腦組織含水率均增大，與假手術(shù)組相比，有顯著性差異(p＜0.01)，表明動(dòng)物腦內(nèi)注射自身抗凝血后已造成了腦水腫。各給藥組動(dòng)物左右半腦重量差和腦指數(shù)均小于模型組，與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)，本發(fā)明注射液中劑量組動(dòng)物的左腦組織含水率與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。提示本發(fā)明注射液有減輕實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠腦水腫作用。見表4。
表4本發(fā)明對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠左右半腦重量差、腦指數(shù)和腦組織含水量影響的比較(X+S)左右半腦重量動(dòng)物腦指數(shù)左腦組織含水量組別差數(shù) (g/100g體重) (％)(g)假手術(shù)組 11 0.015±0.004 0.429±0.024 77.62±1.87模型組 9 0.087±0.042□□0.471±0.039□□82.01±2.63□清開靈組 8 0.038±0.006**0.437±0.07*79.21±2.61本發(fā)明I組 8 0.036±0.013**0.435±0.028*78.74±2.47本發(fā)明II組 8 0.035±0**0.431±0.049*78.92±2.76*本發(fā)明III組9 0.037±0.015*0.435±0.075*81.35±3.73注與假手術(shù)組比較，□p＜0.05，□□p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
⑤對(duì)造模大鼠血清內(nèi)皮素的影響大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射自身抗凝血造成實(shí)驗(yàn)性出血性中風(fēng)模型后，模型組動(dòng)物血清內(nèi)皮素含量升高，但與假手術(shù)組相比，無顯著性差異(p＞0.05)。本發(fā)明注射液高、中劑量給藥組動(dòng)物血清內(nèi)皮素含量均低于模型組，但與模型組相比，無顯著性差異(p＞0.05)。提示本發(fā)明注射液對(duì)造模動(dòng)物血清內(nèi)皮素的升高有一定的抑制作用。見表5。
表5本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠血清內(nèi)皮素的影響(X+S)動(dòng)物數(shù)劑量組別 ET(只)(g/kg)假手術(shù)組 11 - 85.91±60.59模型組 9- 181.16±84清開靈組 83.5ml/kg 129.93±80.05本發(fā)明I組 88 109.88±95.09本發(fā)明II組 84 109.59±74.33本發(fā)明III組92 157.33±116.91⑥腦組織病理形態(tài)學(xué)的光鏡觀察各組大鼠光鏡觀察結(jié)果如下(表6)
表6本發(fā)明對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)的影響動(dòng)物數(shù) 腦白質(zhì)部分 腦組織膠質(zhì)細(xì)胞腫脹或見胞漿中性白細(xì) 無明顯組別 劑量(g/kg)(只)區(qū)域疏松壞死 呈泡沫狀的格子細(xì)胞 胞集聚病變假手術(shù)組 99模型組 7 -322清開靈組 8 3.5ml/kg 2 2 1 4本發(fā)明I組 9 84 5本發(fā)明II組 9 44 1 4本發(fā)明III組7 23 4 0由表6可見a.假手術(shù)組假手術(shù)組9例，神經(jīng)細(xì)胞未見胞體腫脹，胞核固縮、壞死等病理改變。未見軟化灶形成。膠質(zhì)細(xì)胞無增生，間質(zhì)血管無擴(kuò)張充血、出血、水腫、炎細(xì)胞浸潤等；b.模型組模型組7例。3例腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松，其間可見大小不等的空網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并見膠質(zhì)細(xì)胞增生、灶性中性白細(xì)胞浸浸潤。2例腦組織部分區(qū)域環(huán)死，膠質(zhì)細(xì)胞增生。胞漿噬有脂質(zhì)、呈空泡狀。其余2例無明顯病變；c.清開靈組8例，2例腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松、呈空泡狀，膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，血管周圍間隙增寬。1例除上述改變外尚見胞漿呈泡沫狀的格子細(xì)胞。1例局部有大量的中性白細(xì)胞集聚，形成小膿腫。其余4例無明顯病變；d.高劑量組高劑量組9例。3例腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松、呈空網(wǎng)狀，膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，并見胞漿呈泡沫狀的格子細(xì)胞，血管周圍間隙增寬，有省突膠質(zhì)細(xì)胞形成的血管袖套現(xiàn)象。1例除上述病變外局部區(qū)域有大量的中性白細(xì)胞集聚，形成小膿腫。其作5例無明顯病變；e.中劑量組中劑量組9例，4例腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松、呈空網(wǎng)狀，膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，增生。除上述改變外尚見胞漿呈泡沫狀的格子細(xì)胞。1例局部有大量的中性白細(xì)胞集聚，形成小膿腫。其余4例無明顯病變；f.低劑量組低劑量組7例。3例腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松呈空網(wǎng)狀，膠質(zhì)細(xì)胞腫脹增生，并見胞漿呈泡沫狀細(xì)胞。4例局部膠質(zhì)細(xì)胞增生、胞漿疏松淡染。
大鼠腦出血?jiǎng)游锬Ｐ湍X部病變表現(xiàn)為腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松淡染，其間可見大小不等的空網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，部分區(qū)域膠質(zhì)細(xì)胞增生，胞漿噬有脂體、呈空泡狀，個(gè)別動(dòng)物腦組織內(nèi)出現(xiàn)小膿腫?；屹|(zhì)部神經(jīng)細(xì)胞基本無見胞體腫脹、胞核固縮、壞死等病理改變。經(jīng)藥物治療后，各組病變程度如下模型組病變較重，中劑量組、陽性組病變較輕，假手術(shù)組未見明顯的組織病理學(xué)改變。
(5)小結(jié)①本實(shí)驗(yàn)采用向大鼠腦內(nèi)尾殼核區(qū)注入自體抗凝血的方法制造大鼠腦出血模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此方法能造成動(dòng)物明顯的行為體征異常和腦水腫。
②本發(fā)明注射液能改善實(shí)驗(yàn)性腦出血?jiǎng)游锏男袨轶w征異常，降低造模側(cè)半腦的含水率和全腦指數(shù)，降低造模后動(dòng)物的死率。提示本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠有一定的治療作用。
③病理組織學(xué)檢查結(jié)果表明大鼠腦出血?jiǎng)游锬Ｐ湍X部病變表現(xiàn)為腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松淡染，其間可見大小不等的空網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，部分區(qū)域膠質(zhì)細(xì)胞增生，胞漿噬有脂體、呈空泡狀，個(gè)別動(dòng)物腦組織內(nèi)出現(xiàn)小膿腫。灰質(zhì)部神經(jīng)細(xì)胞基本未見胞體腫脹、胞核固縮、壞死等病理改變。經(jīng)藥物治療后，各組病變程度如下模型組病變較重，中劑量組、陽性組病變較輕，假手術(shù)組未見明顯的組織病理學(xué)改變。
對(duì)凝血酶所致大鼠腦水腫的影響(1)造模方法手術(shù)前大鼠稱重并記錄。仿Xi Guohua[4]及Lee KR[5]方法略加改進(jìn)，復(fù)制大腦水腫模型大鼠戊巴比妥鈉30mg/kg體重腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于腦立體定位儀，常規(guī)消毒后，縱向切開頭背側(cè)中央皮膚約1.5cm，暴露前后囟，使前后囟處于同一水平，參閱大鼠腦立體定位譜，以前囟中點(diǎn)為原點(diǎn)，向后2mm，左側(cè)旁開4mm，左側(cè)尾核殼定位，以牙科鉆鉆直徑約1mm左右的小孔，用固定于立體定位儀上微量注射器，沿針孔垂直進(jìn)針5mm，模型組緩慢推注10□l凝血酶生理鹽水液(含凝血酶20U)，注射時(shí)間不少于3min，緩慢退針后縫合頭皮，用消毒棉球壓迫止血；假手術(shù)組造模過程同模型組，但針刺進(jìn)入尾核殼后注射10ml生理鹽水。手術(shù)后每只大鼠大腿內(nèi)側(cè)肌注青霉素2萬單位以預(yù)防感染。術(shù)后大鼠適當(dāng)保暖。
(2)動(dòng)物分組給藥將造模成功的大鼠隨機(jī)分為6組，即①模型組，給予生理鹽水10ml/kg體重；②本發(fā)明注射液低劑量組，給予本發(fā)明注射液2g生藥/kg體重；③本發(fā)明注射液中劑量組，給予本發(fā)明注射液4g生藥/kg體重；④本發(fā)明注射液高劑量組，給予本發(fā)明注射液8g生藥/kg體重；⑤陽性對(duì)照組，給予清開靈注射液3.5ml/kg⑥假手術(shù)組，給予生理鹽水10ml/kg體重。各組均腹腔注射給藥，給藥體積均為10ml/kg體重。
(3)觀察指標(biāo)①動(dòng)物一般情況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)觀察動(dòng)物造模后精神狀態(tài)、毛色、活動(dòng)能力、體重和死亡數(shù)。按下式計(jì)算大鼠體重增長率大鼠體重增長率＝(造模后第4天體重-造模前體重)/造模前體重×100％②腦組織含水量測(cè)定脫頸椎處死大鼠，斷頭，剪開頭皮，以止血鉗小心剝離顱骨和硬腦膜，取腦于濾紙上，吸干殘血，去除小腦和嗅球，以手術(shù)刀片從正中線分左右大腦，分別稱重，計(jì)算左右腦重量差。再將左右半腦分別置于事先已干燥至恒重的小玻璃內(nèi)，于烤箱內(nèi)70℃下烘干至恒重，分別稱左右半腦干重，計(jì)算左右半腦含水量。
腦干重＝恒重后的帶瓶腦重-稱量瓶重腦組織含水率＝(腦濕重-腦干重)/腦濕重×100％③腦指數(shù)計(jì)算腦指數(shù)＝全腦濕重(左半腦濕重+右半腦濕重)/體重×100④動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)方案參照Bederson[2]及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組[3]方案修訂0級(jí)正常；I級(jí)一側(cè)肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行進(jìn)或有偏行(行進(jìn)打偏半徑超過1m)；II級(jí)一測(cè)肢體明顯無力，頭部輕度向另側(cè)歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5～0.75m左右；III級(jí)一側(cè)偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以正臥位，有顯著的歪頭、口角歪斜；IV級(jí)一側(cè)偏癱，不能正臥，呈側(cè)臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯，或不能自主進(jìn)食，神志迷蒙，或抽搐頻繁(10min內(nèi)2次以上)；V級(jí)昏迷或死亡。
(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果①動(dòng)物一般狀況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)造模后，各組大鼠均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、行動(dòng)遲緩或障礙等表現(xiàn)，4d內(nèi)，大鼠無一死亡。
②對(duì)造模大鼠體重的影響模型組大鼠體重增長率明顯低于假手術(shù)組，兩者相比，有顯著性差異(p＜0.01)。本發(fā)明注射液高、中、低劑量組和清開靈注射液組的大鼠體重增長率高于模型組，其中本發(fā)明注射液中劑量組體重增長率與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。見表7。
表7本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所腦水腫大鼠體重的影響(X+S)劑量 造模前體重造模后的體重 體重增長率分組 動(dòng)物數(shù)(g/kg) (g) (g)(％)假手術(shù)組 15 - 299.00±22.30 303.00±27.101.17±2.21模型組 15 - 290.43±14.43 283.64±12.34-2.30±1.62□□清開靈組 15 3.5ml/kg 292.46±10.89 287.46±10.97-1.69±2.32本發(fā)明I組 15 8 290.71±12.39 287.93±11.33-0.89±2.59本發(fā)明II組 15 4 287.0±13.28 284.57±10.65-0.72±2.49*本發(fā)明III組15 2 289.69±12.39 286.15±12.64-1.20±2.32注與假手術(shù)組比較，□□p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05。
③行為體征評(píng)分動(dòng)物經(jīng)腦內(nèi)注射凝血酶造成腦水腫，出現(xiàn)明為的行為體征異常。造模第2d后，各給藥組動(dòng)物行為體征評(píng)分均低于模型組，造模后第3、4d，本發(fā)明注射液高、中、低劑量組和清開靈組行為體征評(píng)分，與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)。模型組大鼠行為體征評(píng)分逐日增高，造模后第4d與第1d比較，有顯著性差異(p＜0.01)。本發(fā)明注射液低劑量組和清開靈組行為體征評(píng)分，造模后第4d與第1d相比，無顯著性差異(p＞0.05)。提示本發(fā)明注射液對(duì)腦內(nèi)注射凝血酶所造的動(dòng)物行為體征異常有一定的保護(hù)作用。見表8。
表8本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所腦水腫大鼠大鼠神經(jīng)功能的影響(X+S)劑量 行為體征評(píng)分分組 動(dòng)物數(shù)(g/kg) 術(shù)后1d 術(shù)后2d術(shù)后3d術(shù)后4d假手術(shù)組 15 - - - - -模型組 15 - 1.14±0.772.21±1.123.43±0.76##3.54±0.96##清開靈組 15 3.5ml/kg1.23±0.691.84±0.692.00±0.91**2.11±0.93**本發(fā)明I組 15 8 1.07±0.621.93±0.621.93±0.83**1.67±0.92**本發(fā)明II組 15 4 0.86±0.661.93±0.921.79±0.58**1.85±0.73**本發(fā)明III組15 2 1.23±0.602.15±0.892.92±0.76 2.45±0.78*注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；同組第4d與第1d組比較，##p＜0.01。
④對(duì)腦指數(shù)和腦組織含水量的影響大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射凝血酶后，動(dòng)物左右半腦重量差、腦指數(shù)和左腦組織含水率顯著增高，與假手術(shù)組相比，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)，表明向腦內(nèi)注射凝血酶可成功造成腦水腫模型。各給藥組大鼠左右重量差、腦指數(shù)和左腦組織含水率均低于模型組，其中本發(fā)明注射液高劑量組和清開靈組動(dòng)物左右半腦重量差、腦指數(shù)和腦組織含水量，與模型組比較，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)。提示本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所致大鼠腦水腫有一定的改善作用。見表9。
表9本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所腦水腫大鼠左右半腦重量差、腦指數(shù)和腦組織含水量的影響(X+S)動(dòng)物 左右半腦重量差 腦指數(shù)腦組織含水率組別數(shù)(g) (g/100g體重) (％)假手術(shù)組 150.0051±0.0160.430±0.016 77.48±2.13模型組 150.0479±0.017□□0.458±0.009□□79.53±2.61□清開靈組 150.0353±0.013*0.446±0.015*77.27±2.81*本發(fā)明I組 150.0308±0.012*0.445±0.008**77.03±3.09*本發(fā)明II組 150.0261±0.014**0.447±0.010**78.82±1.87本發(fā)明III組150.0429±0.0110.449±0.010*78.55±0.87注與假手術(shù)組比較，□p＜0.05，□□p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
(5)小結(jié)①大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射凝血酶后，行為體征出現(xiàn)明顯地異常，動(dòng)物左右半腦重量差、全腦指數(shù)和造模側(cè)半腦組織含水率明顯增高，表明向腦內(nèi)注射凝血酶可成功造成動(dòng)物腦水腫模型。
②本發(fā)明注射液能改善造模后大鼠行為體征的異常，降低左左半腦重量差、全腦指數(shù)和造模側(cè)半腦組織含水率，表明本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所致大鼠腦水腫有一定的治療作用。
3.對(duì)出血性大鼠腦血管通透性的影響試驗(yàn)(1)造模方法大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始造模。眼眶取血0.5ml/只，肝素抗凝；大鼠4％戊巴比妥鈉按1ml/kg體重腹腔注射麻醉，剪去頂毛，固定于腦立體定位儀；常規(guī)局部消毒，切開頭皮，以前囟為0點(diǎn)，向右旁開4mrn，向后2mm，牙科鉆鉆孔，用微量注射器將自體抗凝血100ml緩慢注入尾殼核區(qū)，留針3min后拔針，縫合頭皮[1]。
(2)分組給藥及測(cè)定方法將造模成功的大鼠隨機(jī)分為6組，即①模型組，給予生理鹽水10ml/kg體重；②高劑量組(本發(fā)明I組)，給予本發(fā)明注射液生藥8g/kg體重；③中劑量組(本發(fā)明II組)，給予本發(fā)明注射液4g/kg體重；④低劑量組(本發(fā)明III組)，給予本發(fā)明注射液2g生藥/kg體重；⑤陽性對(duì)照組，給予清開靈注射液3.5ml/kg；⑥假手術(shù)組(手術(shù)方法相同，但不注入自體抗凝血)，給予生理鹽水10ml/kg體重。各組均腹腔注射給藥，給藥體積均為10ml/kg體重，連續(xù)給藥5d。造模后1d、2d、3d、4d，分別觀察大鼠行為體征的變化并進(jìn)行評(píng)分。于造模后第4d、末次給藥后1 h將大鼠麻醉，舌下靜脈注射伊文斯蘭50mg/kg，3h后處死，取腦，分開左右腦，分別稱重。剪碎左腦，于70％丙酮溶液中浸泡24h，3000rpm離心15min，取上清液于625nm處比色，讀取OD值。
(3)觀察指標(biāo)①動(dòng)物一般情況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)觀察動(dòng)物造模后精神狀態(tài)、毛色、活動(dòng)能力、體重和死亡數(shù)。按下式計(jì)算大鼠體重增長率大鼠體重增長率＝(造模后第4天體重-造模前體重)/造模前體重×100％②動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)方案參照Bederson[2]及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組[3]方案修訂0級(jí)正常；I級(jí)一側(cè)肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行進(jìn)或有偏行(行進(jìn)打偏半徑超過1m)；II級(jí)一測(cè)肢體明顯無力，頭部輕度向另側(cè)歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5～0.75m左右；III級(jí)一側(cè)偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以正臥位，有顯著的歪頭、口角歪斜；IV級(jí)一側(cè)偏癱，不能正臥，呈側(cè)臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯，或不能自主進(jìn)食，神志迷蒙，或抽搐頻繁(10min內(nèi)2次以上)；V級(jí)昏迷或死亡。
③腦組織含水量測(cè)定脫頸椎處死大鼠，斷頭，剪開頭皮，以止血鉗小心剝離顱骨和硬腦膜，取腦于濾紙上，吸干殘血，去除小腦和嗅球，以手術(shù)刀片從正中線分左右大腦，分別稱重，計(jì)算左右腦重量差。再將左右半腦分別置于事先已干燥至恒重的小玻璃瓶內(nèi)，于烤箱內(nèi)70℃下烘干至恒重，分別稱左右半腦干重，計(jì)算左右半腦含水量。
腦干重＝恒重后的帶瓶腦重-稱量瓶重左腦組織含水率＝(左腦濕重-左腦干重)/左腦濕重×100％④腦指數(shù)計(jì)算腦指數(shù)＝全腦濕重(左半腦濕重+右半腦濕重)/體重×100⑤對(duì)腦組織浸出液伊文斯蘭濃度的影響剪碎左腦，于70％丙酮溶液中浸泡24h，3000rpm離心15min，取上清液于625nm處比色，讀取OD值，以O(shè)D值代表浸出液伊文斯蘭的濃度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果①動(dòng)物一般狀況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)造模后，各組大鼠均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、行動(dòng)遲緩或障礙等表現(xiàn)。大鼠在造模后均有不同程度的死亡，造模后3d內(nèi)，各給藥組動(dòng)物死亡率低于模型組，造模后第4d，本發(fā)明高劑量組組動(dòng)物死亡率高于模型組，但與模型組比較無顯著差異(p＞0.05)。見表10。
表10本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠死亡率的影響劑量 大鼠死亡率(％)分組(g/kg) 術(shù)后1d 術(shù)后2d 術(shù)后3d 術(shù)后4d假手術(shù)組 - 0(0/18) 0(0/18) 0(0/18) 0(0/18)模型組 - 5.56(1/18) 22.22(4/18) 44.44(8/18) 44.44(8/18)清開靈組 3.5ml/kg 5.56(1/18) 33.33(6/18) 44.44(8/18) 44.44(8/18)本發(fā)明I組 8 5.56(1/18) 22.22(4/18) 38.89(7/18) 50(9/18)本發(fā)明II組 4 11.11(2/18) 22.22(4/18) 33.33(6/18) 44.44(8/18)本發(fā)明III組2 5.56(1/18) 38.89(7/18) 38.89(7/18) 44.44(8/18)②對(duì)造模大鼠體重的影響模型組大鼠體重增長率明顯低于正常組，兩者相比，有顯著性差異。本發(fā)明注射液高、中、低劑量組和清開靈注射液組的大鼠體重增長率高于模型組，與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。見表9。
表9本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠體重的影響(X+S)劑量 造模前體重 造模后的體重 體重增長率分組 動(dòng)物數(shù)(g/kg) (g) (g)(％)假手術(shù)組 18 - 306.40±26.15 315.5±29.582.92±2.3模型組 10 - 300.22±24.94 292.89±27.09 -2.45±2.24□□清開靈組 10 3.5ml/kg 280.22±19.94 279.56±18.6-0.18±2.67*本發(fā)明I組 9 8 292.67±30.4 292.67±30.24 -0.5±2.45本發(fā)明II組 10 4 311.33±8.53 309.9±37.070.42±2.11*本發(fā)明III組10 2 305.4±25.24 306.3±27.340.28±3.16*注與假手術(shù)組比較，□□p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05。
③行為體征評(píng)分動(dòng)物經(jīng)腦內(nèi)自身抗凝血造成實(shí)驗(yàn)性腦出血，出現(xiàn)明為的行為體征異常。造模第1d后，各給藥組動(dòng)物行為體征評(píng)分均低于模型組，造模后第3、4d，本發(fā)明注射液中、低劑量組和清開靈組行為體征評(píng)分，與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)。模型組大鼠行為體征評(píng)分造模后第4d與第1d比較，無顯著性差異(p＞0.05)，表明造模動(dòng)物行為體征自身改善不顯著。本發(fā)明注射液低劑量組和清開靈組行為體征評(píng)分，造模后第4d與第1d相比，有顯著性差異(p＜0.05)。提示本發(fā)明注射液對(duì)腦內(nèi)注射凝血酶所造的動(dòng)物行為體征異常有一定的改善作用。見表12。
表12本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出大鼠神經(jīng)功能的影響(X+S)

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；同組第4d與第1d組比較，#p＜0.05。
④對(duì)腦指數(shù)和腦組織含水量的影響大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射凝血酶后，動(dòng)物左右半腦重量差、腦指數(shù)和左腦組織含水率顯著增高，與假手術(shù)組相比，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)，表明向腦內(nèi)注射凝血酶可成功造成腦水腫模型。各給藥組大鼠左右重量差、腦指數(shù)和左腦組織含水率均低于模型組，其中本發(fā)明注射液中劑量組動(dòng)物左右半腦重量差、腦指數(shù)和腦組織含水量，與模型組比較，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)。各給藥組動(dòng)物左右半腦重量差，與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05或p＜0.01)。提示本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所致大鼠腦水腫有一定的改善作用。見表13。
表13本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠左右半腦重量差、腦指數(shù)和腦組織含水量影響(X+S)動(dòng)物 左右半腦重量差 腦指數(shù) 腦組織含水率組別數(shù) (g) (g/100g體重) (％)假手術(shù)組 180.0111±0.0163 0.416±0.05 78.62±1.6模型組 100.0544±0.0204□□0.452±0.041□81.07±2.8□清開靈組 100.0305±0.0288*0.447±0.03680.06±2.27本發(fā)明I組 9 0.015±0.0081**0.442±0.03979.7±2.96本發(fā)明II組 100.0193±0.0162**0.416±0.143*78.96±3.16*本發(fā)明III組100.0277±0.021*0.438±0.14680.86±5.62注與假手術(shù)組比較，□p＜0.05，□□p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05。
⑤對(duì)腦組織浸出液伊文斯蘭濃度的影響經(jīng)比色法測(cè)定，模型組OD值與假手術(shù)組比較無顯著性差異(p＞0.05)，表明大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射自身抗凝血造成實(shí)驗(yàn)性腦出血后，動(dòng)物腦血管通性無明顯改變。本發(fā)明注射液高、中劑量腦組織浸出液OD值小于模型組，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05)提示本發(fā)明注射液能減少腦血管的通透性。見表14。
表14本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠腦組織浸出液伊文斯蘭濃度的影響(X+S)劑量組別 動(dòng)物數(shù) OD值(g/kg)假手術(shù)組 18 3.5ml/kg 0.527±0.246模型組 10 - 0.576±0.214清開靈組 10 2 0.445±0.263本發(fā)明I組 9- 0.326±0.147*本發(fā)明II組 10 8 0.339±0.251*本發(fā)明III組10 4 0.504±0.308注與模型組比較，*p＜0.05。
對(duì)實(shí)驗(yàn)性家兔腦水腫急性期的研究(1)造模方法家兔適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始造模。眼眶取血0.5ml/只，肝素抗凝；大鼠4％戊巴比妥鈉按1ml/kg體重耳緣靜脈麻醉，剪去頂毛，固定于立體定位儀；常規(guī)局部消毒，切開頭皮，以前囟為0點(diǎn)，向右旁開4mm，向后1mm，牙科鉆鉆孔，用微量注射器將自體抗凝血100μl緩慢注入尾殼核區(qū)，拔針，縫合頭皮[6]。
(2)分組給藥將造模成功的家兔隨機(jī)分為6組，即①模型組，給予生理鹽水1.5ml/kg體重；②高劑量組(本發(fā)明I組)，給予本發(fā)明注射液3.0g生藥/kg體重；③中劑量組(本發(fā)明II組)，給予本發(fā)明注射液1.5g/kg體重；④低劑量組(本發(fā)明III組)，給予本發(fā)明注射液0.75g生藥/kg體重；⑤陽性對(duì)照組，給予清開靈注射液2.0ml/kg⑥溶媒組給予本發(fā)明溶媒1.5ml/kg體重。另設(shè)假手術(shù)組(手術(shù)操作同模型組，但不注入血凝塊)，給予生理鹽水1.5ml/kg體重，共7組。各組均耳緣靜脈注射給藥，除⑤組外，其余各組給藥體積均為1.5ml/kg體重。
(3)觀測(cè)指標(biāo)及方法①動(dòng)物一般情況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)觀察動(dòng)物造模后精神狀態(tài)、毛色、活動(dòng)能力、體重和死亡數(shù)。
②動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)動(dòng)物神經(jīng)功能缺損分級(jí)方案參照Bederson[2]及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組[3]方案修訂0級(jí)正常；I級(jí)一側(cè)肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行進(jìn)或有偏行(行進(jìn)打偏半徑超過1m)；II級(jí)一測(cè)肢體明顯無力，頭部輕度向另側(cè)歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5～0.75m左右；III級(jí)一側(cè)偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以正臥位，有顯著的歪頭、口角歪斜；IV級(jí)一側(cè)偏癱，不能正臥，呈側(cè)臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯，或不能自主進(jìn)食，神志迷蒙，或抽搐頻繁(10min內(nèi)2次以上)；V級(jí)昏迷或死亡。
③腦組織含水量測(cè)定處死家兔，斷頭，剪開頭皮，以止血鉗小心剝離顱骨和硬腦膜，取腦于濾紙上，吸干殘血，去除小腦和嗅球，以手術(shù)刀片從正中線分左右大腦，分別稱重，計(jì)算左右腦重量差。再將左右半腦分別置于事先已干燥至恒重的小玻璃內(nèi)，于烤箱內(nèi)70□下烘干至恒重，分別稱左右半腦干重，計(jì)算左半腦含水量。
腦干重＝恒重后的帶瓶腦重-稱量瓶重左腦組織含水率＝(左腦濕重-左腦干重)/左腦濕重×100％④腦指數(shù)計(jì)算腦指數(shù)＝全腦濕重(左半腦濕重+右半腦濕重)/體重×1000⑤凝血時(shí)間的測(cè)定以4號(hào)注射針頭家兔耳緣動(dòng)脈放血，滴于載玻片上，以針尖輕挑血滴，每隔15s1次，直至出現(xiàn)絲狀物為止，記錄出現(xiàn)絲狀物時(shí)間。
⑤對(duì)血液流變學(xué)的影響家兔頸動(dòng)脈放血于抗凝管內(nèi)，每支5ml。于自清洗施轉(zhuǎn)式粘度計(jì)上測(cè)定全血粘度和血漿粘度。
(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果①動(dòng)物一般狀況及死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)造模后，各組家兔均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、行動(dòng)遲緩或障礙等表現(xiàn)。各組家兔在造模后均有不同程度的死亡，各給藥組動(dòng)物死亡率低于模型組，但給藥組動(dòng)物死亡率與模型組相比，無顯著性差異(p＞0.05)。見表15。
表15本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦水腫家兔死亡率的影響劑量家兔死亡率(％)分組(g/kg)術(shù)后1d術(shù)后2d 術(shù)后3d 術(shù)后4d 術(shù)后5d假手術(shù)組 - 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12模型組- 2/12(16.67)5/12(41.67) 5/12(41.67)5/12(41.67)5/12(41.67)清開靈組 2ml/kg1/12(8.33) 3/12(25) 3/12(25) 3/12(25) 3/12(25)本發(fā)明I組 3 2/12(16.67)3/12(25) 3/12(25) 3/12(25) 3/12(25)本發(fā)明II組1.5 2/12(16.67)2/12(16.67) 2/12(16.67)2/12(16.67)2/12(16.67)本發(fā)明III組 0.75 3/12(25) 4/12(33.33) 4/12(33.33)4/12(33.33)4/12(33.33)②神經(jīng)功能缺損評(píng)分家兔經(jīng)腦內(nèi)注射自身血凝后，均出現(xiàn)較為明顯的行為體征異常。造模后第1d，模型組與4個(gè)給藥組比較，家兔神經(jīng)功能缺損分級(jí)無顯著性差異(p＞0.05)，造模第2d后，各給藥組動(dòng)物行為體征評(píng)分均低于模型組，本發(fā)明注射液高、中劑量組行為體征評(píng)分與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。清開靈組在造模第3d后，行為體征評(píng)分與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。造模后第4d，模型組動(dòng)物行為體征評(píng)分與自身第1d比較，無顯著性差異(p＞0.05)，表明動(dòng)物自身恢復(fù)不顯著；本發(fā)明注射液中劑量組動(dòng)物行為體征評(píng)分造模后第4d與第1d比較，有顯著性差異。提示本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血家兔的行為體征異常有一定的改善作用。見表16。
表16本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦水腫家兔神經(jīng)功能的影響(X+S)

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；同組第4d與第1d組比較，#p＜0.05。
③對(duì)腦指數(shù)和腦組織含水量的影響家兔經(jīng)腦內(nèi)注射自身血凝塊后，腦指數(shù)和左腦組織含水率均增大，與假手術(shù)組相比，有顯著性差異(p＜0.05)，表明動(dòng)物腦內(nèi)注射自身血凝塊后已造成了腦水腫。各給藥組動(dòng)物左右腦重量差均小于模型組，與組相比，有顯著性差異(p＜0.05)，本發(fā)明注射液中、低劑量組和清開靈組動(dòng)物的腦指數(shù)與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。提示本發(fā)明注射液有減輕實(shí)驗(yàn)性腦出血家兔腦水腫作用。見表17。
表17本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦水腫家兔腦指數(shù)和腦組織含水量影響(X+S)劑量 全腦指數(shù)左腦-右腦 左腦含水率組別 動(dòng)物數(shù)(g/kg)(g/1000g)(g)(％)假手術(shù)組 12 - 2.76±0.23□0.13±0.12□75.37±2.37□模型組 7 - 3.05±0.260.85±0.29 80.65±3.37清開靈組 9 0.752.90±0.11*0.54±0.26*77.77±2.88本發(fā)明I組 9 - 2.93±0.230.76±0.33*77.39±2.75本發(fā)明II組 10 3 2.92±0.21*0.45±0.21*76.36±2.13本發(fā)明III組9 1.5 2.93±0.19*0.76±0.39*77.40±2.39注與假手術(shù)組比較，□p＜0.05；與模型組比較，*p＜0.05。
④對(duì)家兔凝血時(shí)間的影響模型組凝血時(shí)間與假手術(shù)組相比，無顯著性差異(p＞0.05)，表明造模對(duì)家兔凝血時(shí)間無顯著性影響。本發(fā)明注射液各劑量組家兔凝血時(shí)間均短于模型組，與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.01)。見表18。
表18本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦水腫家兔對(duì)家兔凝血時(shí)間的影響(X+S)劑量 凝血時(shí)間組別 動(dòng)物數(shù)(g/kg) (s)假手術(shù)組 12- 118.1±36.
模型組 7 - 125.5±44.4清開靈組 9 2ml/kg27.3±20.6**本發(fā)明I組 9 3 32.4±22.6**本發(fā)明II組 101.5 17.5±12.2**本發(fā)明III組9 0.75 36.5±19.5**注與模型組比較，**p＜0.01。
⑤對(duì)家兔血液流變學(xué)的影響模型組血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)與假手術(shù)組相比，均無顯著性差異(p＞0.05)，表明造模對(duì)動(dòng)物血液流變學(xué)無顯著性影響。本發(fā)明注射液I組和II組全血粘度高切和低切均低于模型組，其中中切粘度與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.05)；本發(fā)明注射液各給藥組血漿粘度均低于模型組，但與模型組相比，無顯著性差異(p＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明注射液對(duì)造模動(dòng)物的血液流變學(xué)有一定的改善作用。見表19。
表19本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦水腫家兔血液流變學(xué)的影響(X+S)

注與模型組比較，**p＜0.05。
(5)小結(jié)①通過向家兔腦內(nèi)植入自身血凝塊可造成家免較為明顯的行為體征異常，腦指數(shù)和造模側(cè)腦組織含水量顯著性增高，表明動(dòng)物腦內(nèi)植入自身血凝塊可成功復(fù)制動(dòng)物腦水腫模型。
②本發(fā)明注射液可改善造模家兔行為體征異常，減輕腦指數(shù)和造模側(cè)腦組織含水量，表明本發(fā)明注射液對(duì)自身血凝塊所致家兔腦水腫有一定的治療作用。
對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響(1)方法及分組給藥取ICR小鼠60只，雌雄各半，體重20-22g，隨機(jī)分為5組。即①空白對(duì)照組溶媒10ml/kg；②清開靈組原液7ml/kg；③本發(fā)明低劑量組3.5g/kg；④本發(fā)明中劑量組7g/kg；⑤本發(fā)明高劑量組14g/kg。小鼠腹腔注射25％烏來糖2.5g/kg麻醉。
動(dòng)物觀測(cè)指標(biāo)及方法待小鼠麻醉后按10ml/kg靜脈注射各組藥物，并立即按方法[7]和文獻(xiàn)[8]將小鼠固定在觀察臺(tái)上(耳托上和耳廓表面滴加少許香柏油)(整個(gè)操作過程在2min內(nèi)完成)，用顯微系統(tǒng)觀察小鼠耳廓微循環(huán)，同時(shí)腹腔注射鹽酸腎上腺素注射液1mg/kg，記錄注射腎上腺素前和注射后5、10、20、30min小鼠微循環(huán)細(xì)靜脈、細(xì)動(dòng)脈的管徑和血流速度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明注射液低、中、高三個(gè)劑量組對(duì)血流速度無明顯影響，但均能對(duì)抗腎上腺素引起的微血管收縮，擴(kuò)張小鼠微血管細(xì)靜脈和細(xì)動(dòng)脈，與空白對(duì)照組比較差異顯著(p＜0.05或p＜0.01)，且呈劑量依賴性。表明本發(fā)明具有改善微循環(huán)的作用。結(jié)果見表20、21、22。
表20本發(fā)明注射液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)血流速度的影響(X+S)(n＝12)劑量正常值注射腎上腺素后增加百分率(％)組別(g/kg) (μm/s)5min10min20min30min空白對(duì)照組- 103.8±9.51.4±7.1 0.7±5.71.1±10.80.1±6.9清開靈組 7ml/kg104.4±10.6 0.6±7.8 2.3±7.9-1.0±8.5-0.4±10.2本發(fā)明I組 3.5 102.0±9.3-1.1±4.32.5±9.21.1±9.2 -1.6±8.1本發(fā)明II組7 101.3±7.61.2±4.3 1.0±5.6-0.2±7.34.5±8.0本發(fā)明III組 14102.9±4.62.5±8.1 3.6±8.31.0±3.6 -0.8±6.1
表21本發(fā)明注射液對(duì)小鼠耳廓微靜脈管徑的影響(X+S)(n＝12)劑量正常值注射腎上腺素后增加百分率(％)組別(g/kg)(μm) 5min 10min 20min 30min空白對(duì)照組- 11.4±1.2-27.7±10.3-33.6±9.2 -19.0±7.4 -1.5±7.2清開靈組 7ml/kg11.6±1.3-30.9±14.9-19.3±14.4**-4.8±12.1**11.2±8.3**本發(fā)明I組 3.5 11.6±0.9-23.4±7.9 -20.3±6.6**-9.4±9**8.3±11.1*本發(fā)明II組7 11.3±1.2-23.1±15.7-13.2±23.5*2.5±19.2**15.6±21*本發(fā)明III組 1411.4±1.2-27.2±13.3-21.6±14.7*-1.8±19.6**3.6±21.6注與空白對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
表22本發(fā)明注射液對(duì)小鼠耳廓微動(dòng)脈管徑的影響(X+S)(n＝12)劑量正常 注射腎上腺素后增加百分率(％)組別(g/kg) (μm/s)5min10min20min 30min空白對(duì)照組- 9.2±1 -21.4±7.6 -24.8±8.6 -18.3±12.1 -5.3±7.8清開靈組 7ml/kg9.5±1.1-17.4±10.7 -11.2±11.9**2.9±13.1**12.6±15.8**本發(fā)明I組 3.5 9.7±1.1-19.9±11.3 -15.5±14.4 -3.6±13.4**3.4±11.7*本發(fā)明II組7 8.8±1.4-14±14.4 -9.4±14.8**4.5±18.5**18.1±30*本發(fā)明III組 149.8±1 -11.5±7.2**-2.4±18.9**16.2±15.3**22.7±17.6**注與空白對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
結(jié)論1.采用向大鼠腦內(nèi)尾殼核區(qū)注入自體抗凝血的方法制造大鼠腦出血模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此方法能造成動(dòng)物明顯的行為體征異常和腦水腫。本發(fā)明注射液能改善實(shí)驗(yàn)性腦出血?jiǎng)游锏男袨轶w征異常，降低造模側(cè)半腦的含水率和全腦指數(shù)，降低造模后動(dòng)物的死亡率。病理組織學(xué)檢查結(jié)果表明大鼠腦出血?jiǎng)游锬Ｐ湍X部病變表現(xiàn)為腦白質(zhì)部分區(qū)域疏松淡染，其間可見大小不等的空網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，部分區(qū)域膠質(zhì)細(xì)胞增生，胞漿噬有脂體、呈空泡狀，個(gè)別動(dòng)物腦組織內(nèi)出現(xiàn)小膿腫?；屹|(zhì)部神經(jīng)細(xì)胞基本未見胞體腫脹、胞核固縮、壞死等病理改變。經(jīng)藥物治療后，各組病變程度如下模型組病變較重，中劑量組、陽性組病變較輕，假手術(shù)組未見明顯的組織病理學(xué)改變。提示本發(fā)明注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠有一定的治療作用。
2.采用向大鼠腦內(nèi)尾殼核區(qū)注入凝血酶的方法制造大鼠腦水腫模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射凝血酶后，行為體征出現(xiàn)明顯地異常，動(dòng)物左右半腦重量差、全腦指數(shù)和造模側(cè)半腦組織含水率明顯增高，表明向腦內(nèi)注射凝血酶可成功造成動(dòng)物腦水腫模型。本發(fā)明注射液能改善造模后大鼠行為體征的異常，降低左半腦重量差、全腦指數(shù)和造模側(cè)半腦組織含水率，表明本發(fā)明注射液對(duì)凝血酶所致大鼠腦水腫有一定的治療作用。
3.采用向大鼠腦內(nèi)尾殼核區(qū)注入自體抗凝血的方法制造大鼠腦出血模型，舌下靜脈注射伊文斯蘭，再通過比色測(cè)定造模大鼠腦組織浸出液中伊文斯蘭的含量，觀察本發(fā)明注射液對(duì)造模動(dòng)物腦血管通透性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組腦組織浸出液OD值與假手術(shù)組無顯著性差異，表明大鼠經(jīng)腦內(nèi)注射自身抗凝血造成實(shí)驗(yàn)性腦出血后，動(dòng)物腦血管通性無明顯改變。本發(fā)明注射液高、中劑量腦組織浸出液OD值小于模型組，提示本發(fā)明注射液能減少腦血管的通透性。
4.通過向家兔腦內(nèi)植入自身血凝塊方法造成家兔腦出血模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示此方法可造成家免較為明顯的行為體征異常，腦指數(shù)和造模側(cè)腦組織含水量顯著性增高，表明動(dòng)物腦內(nèi)植入自身血凝塊可成功復(fù)制動(dòng)物腦水腫模型。本發(fā)明注射液可改善造模家兔行為體征異常，降低腦指數(shù)和造模側(cè)腦組織含水量，表明本發(fā)明注射液對(duì)自身血凝塊所致家兔腦水腫有一定的治療作用。
5.對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明注射液低、中、高三個(gè)劑量組對(duì)血流速度無明顯影響，但均能對(duì)抗腎上腺素引起的微血管收縮，擴(kuò)張小鼠微血管細(xì)靜脈和細(xì)動(dòng)脈，與空白對(duì)照組比較差異顯著(p＜0.05或p＜0.01)，且呈劑量依賴性。表明本發(fā)明具有改善微循環(huán)的作用。
綜上所述，本發(fā)明注射液能降低急性出血性中風(fēng)動(dòng)物死亡率，改善行為體征，減輕腦水腫，降低腦組織含水率，改善微循環(huán)，提示本發(fā)明注射液對(duì)出血性中風(fēng)有一定的治療作用。根據(jù)中醫(yī)理論研制的本發(fā)明注射液具有高效、速效的特點(diǎn)，能滿足搶救病人的需要，對(duì)提高中醫(yī)藥救治急難重癥的能力、降低病死率和致殘率有重要的應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1，一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物，它是由以下重量配比的原料制成的大黃160梔子200牡丹皮100其生產(chǎn)方法是取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，加入藥用輔料，制成顆粒劑。
實(shí)施例2，上述的實(shí)施例中，其原料重量配比也可為大黃200梔子160牡丹皮150其生產(chǎn)方法是取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，用100～200ml丙二醇溶解后，緩緩加入400～700ml水中，攪拌、加熱溶解，加0.8～1.2g亞硫酸鈉、0.3～0.8g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)節(jié)pH 7.5～8，濾過，濾液通過活性炭脫色，再加水稀釋至1000ml，使每ml含生藥量0.5g，濾過，灌封，滅菌，檢查，包裝，即得注射液；實(shí)施例3，本發(fā)明藥物的最佳重量(份)配比是大黃187.5梔子187.5牡丹皮125其生產(chǎn)方法是取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，用100～200ml丙二醇溶解后，緩緩加入400～700ml水中，攪拌、加熱溶解，加100～500g甘露醇，0.8～1.2g亞硫酸鈉、0.3～0.8g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)節(jié)pH 7.5～8，濾過，濾液通過活性炭脫色，再加水稀釋至1000ml，使每ml含生藥量0.5g，濾過，灌裝，經(jīng)凍干工序制成凍干粉針劑。
用法與用量靜脈滴注。每日2次，每次4支，臨用前，用10％葡萄糖注射液(糖尿病患者改用生理鹽水)500ml稀釋。用法與用量靜脈滴注。每日2次，每次4支，臨用前，用10％葡萄糖注射液(糖尿病患者改用生理鹽水)500ml稀釋。
規(guī)格10ml/支，每支含生藥5g。
權(quán)利要求
1.一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物，其特征在于它是由以下重量配比的原料制成的大黃 160～200梔子 160～200牡丹皮 100～150
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療出血性腦中風(fēng)的藥物，其特征在于它是由以下重量配比的原料制成的大黃 187.5梔子 187.5牡丹皮 125
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療出血性腦中風(fēng)的藥物，其特征在于所述的藥物劑型為藥劑學(xué)所述的任何劑型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療出血性腦中風(fēng)的藥物，其特征在于所述的藥物劑型的制備方法為取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，加入藥用輔料，制成臨床可接受的劑型。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療出血性腦中風(fēng)的藥物，其特征在于所述的藥物劑型為注射劑。
6.權(quán)利要求5所述的治療出血性腦中風(fēng)的藥物的制備方法為取牡丹皮，通5％氯化鈉溶液水蒸氣蒸餾，重蒸餾，初蒸餾液與重蒸餾液合并，放置析出結(jié)晶，重結(jié)晶得到丹皮酚針晶，加濃硫酸和發(fā)煙硫酸(5∶4)至磺化完全，制成丹皮酚磺酸鈉。剩余的牡丹皮藥渣及殘留液，與大黃、梔子一起，加水煎煮3次，濾過，水煎液濃縮，加乙醇使沉淀，濾取上清液，回收溶媒至無醇味，加1～5倍水稀釋，調(diào)pH值為7.5～8，濾過，濾液調(diào)pH值為3，用水飽和的正丁醇逆流萃取，收集正丁醇液，回收溶媒至無醇味，干燥得到干浸膏，取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，用100～200ml丙二醇溶解后，緩緩加入400～700ml水中，攪拌、加熱溶解，加0.8～1.2g亞硫酸鈉、0.3～0.8g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)節(jié)pH 7.5～8，濾過，濾液通過活性炭脫色，再加水稀釋至1000ml，使每ml含生藥量0.5g，濾過，灌封，滅菌，檢查，包裝，即得注射液；或取丹皮酚磺酸鈉和干浸膏，用100～200ml丙二醇溶解后，緩緩加入400～700ml水中，攪拌、加熱溶解，加100～500g甘露醇，0.8～1.2g亞硫酸鈉、0.3～0.8g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)節(jié)pH 7.5～8，濾過，濾液通過活性炭脫色，再加水稀釋至1000ml，使每ml含生藥量0.5g，濾過，灌裝，經(jīng)凍干工序制成凍干粉針劑。
全文摘要
一種治療出血性腦中風(fēng)的藥物，它是由大黃、梔子、牡丹皮等原料制成的。本發(fā)明從中西醫(yī)理論或臨床研究均角度證實(shí)，出血性中風(fēng)應(yīng)從血論治，此外，出血性中風(fēng)急性期常出現(xiàn)發(fā)熱，部分患者雖無體溫增高，但有明顯的熱證表現(xiàn)，如口苦、咽干、煩躁，甚至譫妄、夜不安、大便秘結(jié)等而呈陽明腑實(shí)之證象。本發(fā)明之處方依據(jù)上述理論而立法，采用涼血止血、活血化淤、瀉下通腑之藥為主，輔以清熱瀉火、行血破瘀之品，用于治療出血性中風(fēng)急性期的瘀熱阻竅證。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1565531SQ03132119
公開日2005年1月19日 申請(qǐng)日期2003年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月25日
發(fā)明者蔡寶昌, 肖偉, 戴翔翎, 金妙文, 凌婭, 潘揚(yáng), 王天山, 楊光明, 燕珂 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司