專利名稱：新魚(yú)腥草素鈉注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新魚(yú)腥草素鈉靜脈注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
用化學(xué)方法合成的新魚(yú)腥草素鈉(Neo-Houttuyninum)，化學(xué)名稱為十二酰乙醛亞硫酸氫鈉，與天然魚(yú)腥草素(Houttuyninum)中的有效成分魚(yú)腥草素鈉，化學(xué)名稱為癸酰乙醛同系列的亞硫酸氫鈉加成物，兩者的藥理作用和療效基本相似。目前用新魚(yú)腥草素鈉制成的制劑有新魚(yú)腥草素鈉注射液，現(xiàn)收載于《廣東省藥品標(biāo)準(zhǔn)》(1987版下冊(cè))第1177-1178頁(yè)，該品種為抗菌消炎藥。為三白草科植物蕺菜(Houttuynia sulfite)全草揮發(fā)油中一種醛類成分的化學(xué)合成物。對(duì)肺炎雙球菌，傷寒桿菌，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌及孢子絲菌等有明顯抑制作用。可提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬功能，提高血清備解素水平，提高機(jī)體非特異性免疫力。用于附件炎、盆腔炎、慢性宮頸炎等婦科各種炎癥。并用于上呼吸道感染、慢性支氣管炎、肺炎等，使用時(shí)肌內(nèi)注射。由于該藥在肌內(nèi)注射時(shí)出現(xiàn)疼痛，患者在使用時(shí)產(chǎn)生恐懼心理；同時(shí)原料由于純度不高(生產(chǎn)工藝及檢驗(yàn)方法缺陷造成)，該藥在貯存期易析出；且肌內(nèi)注射的療效不及靜脈滴注，影響了該藥的使用及療效。吐溫-80作為表面活性劑用于注射液中有提高藥物溶解性的作用，肌注中常用，靜脈中慎用或少用，因有降壓或輕微溶血。中國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)?2135030.2)描述了一種新魚(yú)腥草素鈉靜脈注射劑，其在配方中使用了吐溫-80，使用量為0.7％-3％。吐溫-80使用量大必將引起嚴(yán)重的副作用，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用一種安全的助溶劑，或通過(guò)使用環(huán)糊精或其衍生物對(duì)新魚(yú)腥草素鈉進(jìn)行包合，都可增加新魚(yú)腥草素鈉的溶解性，可使吐溫-80的使用量大大減少，甚至不使用吐溫-80，而且，還可使溶液的穩(wěn)定性得到提高，增加用藥安全。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種新的新魚(yú)腥草素鈉注射劑及其制備方法。
本發(fā)明還提供增加新魚(yú)腥草素鈉溶解度的方法，本發(fā)明的注射劑含有有效量的新魚(yú)腥草素鈉，助溶劑，可注射用溶劑或等滲溶液，必要時(shí)還可加入賦型劑和PH調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明的注射劑，所述的助溶劑包括至少一種表面活性劑，醇類助溶物質(zhì)，環(huán)糊精或其衍生物，蓖麻油類物質(zhì)，卵磷脂，泊洛沙母。這些助溶劑可單獨(dú)使用，也可結(jié)合使用。醇類助溶物質(zhì)也可作為注射用溶劑使用。
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，可采用不同的解決方案。
本發(fā)明第一種優(yōu)選的解決方案是使用環(huán)糊精或其衍生物對(duì)新魚(yú)腥草素鈉進(jìn)行包合，以使新魚(yú)腥草素鈉易溶。如使用β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精。優(yōu)選的是使用羥丙基-β-環(huán)糊精(Hydroxypropyl-beta-Cyclodextrin；簡(jiǎn)稱HP-β-CD或HPB)，它是β-環(huán)糊精(β-CD)中葡萄糖殘基的2-，3-和6-位羥基中的氫原子被羥丙基取代變成羥丙氧基。HP-β-CD對(duì)許多化合物具有優(yōu)良的包絡(luò)作用，提高被包絡(luò)物質(zhì)的溶解性和穩(wěn)定性，而且它還具有水溶性高和提高被包絡(luò)藥物在生物體內(nèi)的釋放速度及生物利用度。另外HP-β-CD又是一種收集到的安全性資料最廣泛，而沒(méi)有不利副作用的一種藥物輔料。
本發(fā)明的注射劑，新魚(yú)腥草素鈉和環(huán)糊精或其衍生物形成包合物，其中新魚(yú)腥草素鈉與環(huán)糊精或其衍生物的重量比為1∶1～1∶100。優(yōu)選的新魚(yú)腥草素鈉與環(huán)糊精或其衍生物的重量比為1∶5～1∶30。上述包合物可做為制成注射液、粉針或輸液的原料。所說(shuō)的注射劑可以是“1-20ml小容量注射液”、“凍干粉針”、“無(wú)菌粉針”、“新魚(yú)腥草素葡萄糖輸液、氯化鈉輸液、木糖醇輸液”、“靜脈乳劑”“注射液”，所說(shuō)的“凍干粉針”是在新魚(yú)腥草素鈉環(huán)糊精或其衍生物形成包合物的溶液中加入適當(dāng)支持劑(賦型劑)，如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化鈉、木糖醇等，通過(guò)冷凍干燥而得。所說(shuō)的“無(wú)菌粉針”是在新魚(yú)腥草素鈉環(huán)糊精或其衍生物形成包合物的溶液中加入適當(dāng)支持劑(賦型劑)，如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化鈉、木糖醇等，通過(guò)“冷凍干燥”或“噴霧干燥”得到的粉末進(jìn)行無(wú)菌分裝而得。
本發(fā)明還提供上述注射劑的制備方法，對(duì)于上述使用環(huán)糊精或其衍生物作為助溶劑進(jìn)行包合的本發(fā)明注射劑的制備，包括以下步驟a)將β-環(huán)糊精或其衍生物置于注射用水中，攪拌溶解后，再加入新魚(yú)腥草素鈉，
b)室溫?cái)嚢杌蜓心?，得新魚(yú)腥草素鈉環(huán)糊精或其衍生物包合物的溶液，c)所得溶液需要時(shí)可加入甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化鈉、木糖醇作為賦型劑并使之溶解，d)將步驟b或步驟c得到的溶液經(jīng)真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，得新魚(yú)腥草素鈉，糊精或其衍生物包合物注射粉，e)分裝。
本發(fā)明的第二種優(yōu)選的解決方案是使用復(fù)合助溶劑，所述復(fù)合助溶劑是兩種或兩種以上的助溶劑結(jié)合使用，這些助溶劑包括表面活性劑，醇類助溶物質(zhì)，環(huán)糊精或其衍生物，蓖麻油類物質(zhì)，卵磷脂，泊洛沙母，復(fù)合助溶劑優(yōu)選的結(jié)合是甘油和聚氧乙烯蓖麻油，吐溫-80和甘油等。
特別優(yōu)選的兩種或兩種以上的助溶劑是，其中一種為表面活性劑，另一種為醇類助溶物質(zhì)、蓖麻油類物質(zhì)、卵磷脂、泊洛沙母。所述表面活性劑可以是吐溫類物質(zhì)如吐溫-80，醇類助溶物質(zhì)為乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，蓖麻油類物質(zhì)為聚氧乙烯蓖麻油。
對(duì)于特別優(yōu)選的使用兩種或兩種以上助溶劑的本發(fā)明注射劑，每1000毫升注射液中含有新魚(yú)腥草素鈉20mg-2000mg，表面活性劑0.5mg-6g，助溶劑10mg-5000mg，余量為可注射用溶劑或等滲溶液。
對(duì)于特別優(yōu)選的使用兩種或兩種以上的助溶劑的本發(fā)明注射劑的制備，可以包括以下步驟a.取新魚(yú)腥草素鈉20mg-2000mg，表面活性劑0.5mg-6g，助溶劑10mg-5000mg，用注射用水或等滲溶液溶解；b.調(diào)節(jié)pH到5.0-6.2，c.過(guò)濾后加入注射用水或等滲溶液至1000毫升，d.再經(jīng)過(guò)精濾后灌裝，e.滅菌。
上述等滲溶液可以是氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、果糖、轉(zhuǎn)化糖、麥芽糖、木糖醇、山梨醇或右旋糖苷等滲溶液。
本發(fā)明的第三種優(yōu)選的解決方案是使用醇類物質(zhì)作為注射用溶劑，如使用乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600等，必要時(shí)可另行加入適量的其他類型的助溶劑，和一種酸性物質(zhì)，制成的注射劑含有新魚(yú)腥草素鈉，醇類物質(zhì)，其他助溶劑，酸性物質(zhì)。酸性物質(zhì)用于調(diào)節(jié)溶液的PH值，可以是有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸，優(yōu)選的是鹽酸、檸檬酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、磷酸、硝酸、硫酸、醇類物質(zhì)優(yōu)選的是乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇。該注射劑為一種濃縮劑，使用的醇類物質(zhì)起溶劑作用，可增加溶解性，醇類物質(zhì)可以是純的如100％的，也可以是95％或90％的，但不少于50％該注射劑使用時(shí)將其加入輸液中混勻輸給病人。該注射劑優(yōu)選的配方為每劑中含有新魚(yú)腥草素鈉1-2g，醇類物質(zhì)1-20g，其他助溶劑0.1-10g，酸性物質(zhì)0.0001-10g。優(yōu)選的配方為新魚(yú)腥草素鈉2g，醇類物質(zhì)10g，其他助溶劑1g，酸性物質(zhì)0.0001g。特別優(yōu)選的配方為新魚(yú)腥草素鈉2g，乙醇或丙二醇或甘油或甘露醇10g，其他助溶劑1g，酸性物質(zhì)0.0001g。
本發(fā)明的新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)卡他球菌、流感桿菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌等有明顯抑制作用。臨床實(shí)踐證明本品對(duì)于上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎、慢性氣管炎、慢性宮頸炎、百日咳等均有較好的療效，對(duì)急性結(jié)膜炎、尿路感染等也有一定療效。另外，上述方法制備的新魚(yú)腥草注射劑還能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，增加白細(xì)胞吞噬能力，具有鎮(zhèn)痛、止咳、止血，促進(jìn)組織再生，擴(kuò)張毛細(xì)血管、增加血流量等方面的作用。本品的最大優(yōu)點(diǎn)是增加了新魚(yú)腥草素的溶解度，減少使其在肌肉注射時(shí)的局部疼痛，消除了患者在使用時(shí)所產(chǎn)生的恐懼心理。使臨床大劑量用藥成為可能，也解決了該藥在貯存期析出問(wèn)題，提高了該藥的使用及療效，同時(shí)降低了毒性，提高了穩(wěn)定性。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明本發(fā)明的有益效果1、加入復(fù)合助溶劑的新魚(yú)腥草素鈉注射劑的試驗(yàn)數(shù)據(jù)注射劑的制備取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約400ml，煮沸，加入含有1000mg新魚(yú)腥草素鈉，100g甘油，100mg聚氧乙烯蓖麻油的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝。
一、毒性試驗(yàn)取體重為17～20g健康小鼠，雌雄各半，每組10只，共6組，于小鼠尾靜脈注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小時(shí)內(nèi)，未見(jiàn)任何中毒癥狀與死亡現(xiàn)象。
二、亞急性毒性試驗(yàn)給40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，連續(xù)給藥30天。結(jié)果對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響。肝功能、心電圖等未見(jiàn)明顯異常，心、肝、腎、肺、脾、腦及腸等臟器的病理組織學(xué)檢查亦未見(jiàn)明顯異常。
三、過(guò)敏性試驗(yàn)[摘要]《中華人民共和國(guó)藥典》(2000版，二部)規(guī)定方法進(jìn)行新魚(yú)腥草素鈉注射劑過(guò)敏試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)豚鼠無(wú)致敏作用。試驗(yàn)?zāi)康挠^察新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)豚鼠有無(wú)致敏作用，為臨床安全使用提供試驗(yàn)依據(jù)。
供試藥物新魚(yú)腥草素鈉注射劑陰性對(duì)照物0.9％氯化鈉注射液(生理鹽水)250ml/瓶陽(yáng)性對(duì)照物5％卵白蛋白生理鹽水溶液，取新鮮蛋清臨用時(shí)在無(wú)菌條件下用生理鹽水配成5％濃度動(dòng)物豚鼠，體重262～292g，雌雄兼用。
致敏用腹腔注射，0.5ml/只；激發(fā)用靜脈注射，1ml/只。
取豚鼠18只，分為陰性對(duì)照(生理鹽水)組，受試物組及陽(yáng)性對(duì)照(5％白蛋白生理鹽水)組，每組6只。各組動(dòng)物間日腹腔注射相應(yīng)藥液0.5ml/只，連續(xù)3次。分別在第一次注射后14日及21日每組各取3只豚鼠靜脈注射相應(yīng)藥液1ml/只(推進(jìn)速度為30秒)。
根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2000版二部規(guī)定觀察給藥后15分鐘內(nèi)豚鼠有無(wú)豎毛、噴嚏、干嘔、咳嗽、呼吸困難、抽搐、痙攣、虛脫、休克或死亡等過(guò)敏反應(yīng)。并按下表反應(yīng)癥狀進(jìn)行判定結(jié)果。豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)反應(yīng)級(jí)數(shù) 反應(yīng)癥狀
0 無(wú)明顯反應(yīng)1 只有輕微抓鼻、顫抖或豎毛2 有幾次咳嗽，有抓鼻、顫抖或豎毛3多次或連續(xù)咳嗽，伴有呼吸困難或痙攣、抽搐等4 痙攣、抽搐、大小便失禁、休克或死亡[結(jié)果]豚鼠于第一次給藥后14天及21天靜脈注射新魚(yú)腥草素鈉注射劑1ml/只，均未出現(xiàn)豎毛、呼吸困難、噴嚏、干嘔、咳嗽等現(xiàn)象，也未出現(xiàn)抽搐、虛脫或死亡等，反應(yīng)級(jí)數(shù)均為0。
陰性對(duì)照組動(dòng)物于第一次給藥后14天及21天靜脈注射生理鹽水也未出現(xiàn)過(guò)敏癥狀，反應(yīng)級(jí)數(shù)均為0。
陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物于第一次給藥后14天及21天靜脈注射5％卵白蛋白生理鹽水溶液后，均出現(xiàn)抽搐、呼吸困難、站立不穩(wěn)、跌倒等癥狀，6只豚鼠中5只分別在給藥后3分16秒～5分17秒內(nèi)死亡，反應(yīng)級(jí)數(shù)為3-4，結(jié)果見(jiàn)下表。
表1過(guò)敏性反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果
根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2000版二部規(guī)定，新魚(yú)腥草素鈉注射劑試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
四、溶血性試驗(yàn)[摘要]新魚(yú)腥草素鈉注射劑0.1～0.5ml在小時(shí)內(nèi)對(duì)家兔紅細(xì)胞未產(chǎn)生溶血和凝集作用。為臨床安全用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。
觀察新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)家兔紅細(xì)胞有無(wú)溶血和凝集作用。

供試藥物新魚(yú)腥草素鈉注射劑陽(yáng)性對(duì)照物0.9％氯化鈉注射液動(dòng)物新西蘭兔1只，雄性，體重2.8kg。
(1)取供試家兔1只，心臟穿刺采血10ml，放入盛有無(wú)菌玻璃珠的三角瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白，使成膠纖血液，置刻度離心管中加入適量的生理鹽水搖勻，以3000轉(zhuǎn)/分離心，每次10分鐘，棄去上清液，反復(fù)洗滌3～4次，至離心后上清液無(wú)色為止，將所得紅細(xì)胞用生理鹽水釀配成2％的紅細(xì)胞混懸液，供試驗(yàn)用。
(2)取試管7支，按表1配比加入供試藥量、2％的紅細(xì)胞混懸液、生理鹽水和蒸餾水，輕輕混勻后，于37℃水浴中放置0.5小時(shí)，然后分別加入不同量的供試品(第6管加生理鹽水，第7管加蒸餾水)，搖勻后，置37℃水浴，分別觀察各管在15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)有無(wú)溶血及紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。結(jié)果見(jiàn)2。
溶液呈透明紅后，即表示溶血，如溶液中出現(xiàn)振搖不散或鏡下檢查有不能用生理鹽水沖散的聚集紅細(xì)胞時(shí)，表示有紅細(xì)胞凝聚作用。一般以0.3ml供試藥(第3管)在3小時(shí)內(nèi)不產(chǎn)生溶血及凝聚作用者認(rèn)為可供注射用。
表1溶血試驗(yàn)加樣表

表2新魚(yú)腥草素鈉溶血試驗(yàn)結(jié)果


注溶血用“+”表示，不溶血用“-”表示[結(jié)論]試驗(yàn)結(jié)果表明，新魚(yú)腥草素鈉注射劑在觀察時(shí)間內(nèi)無(wú)溶血及紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象產(chǎn)生，說(shuō)明新魚(yú)腥草素鈉注射劑溶血試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
五、血管刺激性試驗(yàn)[摘要]新西蘭兔左耳緣靜脈滴注新魚(yú)腥草素鈉注射劑10ml/kg，每天1次，連續(xù)3天，滴注期間及給藥后，肉眼觀察未見(jiàn)耳緣靜脈紅、腫、熱等局部刺激反應(yīng)，病理組織學(xué)檢查與對(duì)照組比較，未見(jiàn)明顯的形態(tài)改變。
觀察新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)新西蘭兔靜脈血管刺激作用，為臨床安全用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。
供試藥物新魚(yú)腥草素鈉注射劑陰性對(duì)照物0.9％氯化鈉注射液(生理鹽水)250ml/瓶，動(dòng)物新西蘭兔6只，體重2.6-2.9kg，雌雄兼用[方法]新西蘭兔6只，按體重隨機(jī)分為新魚(yú)腥草素鈉注射劑給藥組及0.9％氯化鈉注射液對(duì)照組，每組3只。將動(dòng)物固定于兔箱內(nèi)，左側(cè)耳緣靜脈滴注相應(yīng)藥液，滴注量均為10ml/kg，推注速度1ml/分鐘，每日1次，連續(xù)3天。滴注期間及滴注后，注射觀察滴注部位有無(wú)紅腫、充血、出血和壞死等刺激作用。在未次給藥24小時(shí)后，將動(dòng)物處死，剪下左側(cè)耳自進(jìn)針部位近心端距進(jìn)針部位1cm入處取材，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
肉眼觀察本品制劑兔耳部位未出現(xiàn)明顯的紅腫、充血、壞死等刺激反應(yīng)，與滴注0.9％氯化鈉注射液組的兔耳無(wú)明顯差異。
病理學(xué)檢查0.9％氯化鈉注射液對(duì)照組送檢標(biāo)本為兔耳組織。皮膚組織結(jié)構(gòu)正常，表皮無(wú)增厚，皮下組織未見(jiàn)充血、水腫等形態(tài)學(xué)改變。耳緣靜脈未見(jiàn)擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞也未見(jiàn)增多及排列紊亂等改變，血管壁無(wú)增厚，管腔病理學(xué)改變。
本品給藥組鏡檢兔耳病理形態(tài)學(xué)同對(duì)照組，管壁未見(jiàn)附壁血栓，無(wú)組織變性或壞死等顯著性刺激，無(wú)明顯病理形態(tài)學(xué)改變。
新魚(yú)腥草素鈉注射劑靜脈滴注無(wú)明顯血管刺激作用。
2、加入吐溫-80和甘油助溶劑的新魚(yú)腥草素鈉試驗(yàn)數(shù)據(jù)處方1 新魚(yú)腥草素鈉2000mg吐溫-80 5g甘油50mg注射用水加至1000ml取注射用水(或葡萄糖等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有2000mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，50mg甘油的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝。
1、毒性試驗(yàn)取體重為17～21g健康小鼠，雌雄各半，每組10只，共6組，于小鼠尾靜脈注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小時(shí)內(nèi)，未見(jiàn)任何中毒癥狀與死亡現(xiàn)象。
2、亞急性毒性試驗(yàn)給40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，連續(xù)給藥30天。結(jié)果對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響。肝功能、心電圖等未見(jiàn)明顯異常，心、肝、腎、肺、脾、腦及腸等臟器的病理組織學(xué)檢查亦未見(jiàn)明顯異常。
3、靜脈注射血管刺激性試驗(yàn)取新西蘭兔12只，雌雄各半，體重2.1～2.5kg，分2組，每組6只，兔耳緣靜脈注射新魚(yú)腥草素鈉注射劑(1mg/ml)3ml/kg，注射速度為每分鐘2.0ml。另一組給以等量生理鹽水，每天一次，連續(xù)給藥5天，于末次給藥24小時(shí)后處死動(dòng)物，剪斷耳并放置于10％甲醛溶液中固定標(biāo)本，然后在兔耳緣靜脈的不同的部位的5個(gè)斷面(從注射部位開(kāi)始向心端每隔0.5cm作一切片)切片進(jìn)行組織學(xué)檢查。兔耳緣靜脈組織切片觀察結(jié)果表明用藥組兔耳緣靜脈的組織變化與對(duì)照組相似，各兔耳緣靜脈血管壁完整，未見(jiàn)內(nèi)皮損傷，未見(jiàn)內(nèi)皮損傷、周?chē)M織水腫等病理變化，靜脈血管結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)血管有明顯的變性，壞死等嚴(yán)重刺激反應(yīng)。
4、過(guò)敏反應(yīng)取豚鼠18只，體重280～350g，雌雄各半。分為三組，每組6只，新魚(yú)腥草素鈉相應(yīng)的溶液0.5ml，共3次，將上述各組動(dòng)物再平均分為兩組，一組于首次給藥后的第14天，分別耳緣靜脈注射新魚(yú)腥草素鈉注射劑和生理鹽水2ml/只，卵白蛋白液(1000mg/kg)進(jìn)行攻擊，并進(jìn)行觀察。如過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)分豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下過(guò)敏反應(yīng)癥狀與級(jí)別劃分對(duì)照表反應(yīng)級(jí)別 過(guò)敏反應(yīng)癥狀+++ 過(guò)敏性休克死亡++咳嗽并們有呼吸困難或痙亦抽搐等+ 連續(xù)咳嗽數(shù)次以上，并伴有抓鼻子或顫抖、豎毛等± 只有輕微抓鼻子、顫抖、豎毛等0無(wú)任何明顯反應(yīng)結(jié)果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，新魚(yú)腥草素鈉注射劑組和生理鹽水對(duì)照組，過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)在±以下，陽(yáng)性對(duì)照卵白蛋白的平均過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)均在+++，表明新魚(yú)腥草素鈉注射劑不會(huì)引起豚鼠過(guò)敏反應(yīng)。
5、溶血試驗(yàn)取健康家兔一只，從心臟取血10ml，至潔凈干燥的小燒杯中，用竹簽攪拌除去纖維蛋白原，加生理鹽水10ml，離心棄上清液，再加10ml生理鹽水，輕輕搖勻，離心，棄上清液，如此反復(fù)幾次至上清液不呈紅色為止；量取血球2ml加生理鹽水稀釋成2％的混懸液供測(cè)試用。
取試管14支，編號(hào)排列于試管架上，按下表加入各組溶液，第11、12管不如供試樣品溶液，作為空白對(duì)照第13、14管仍不加供試溶液，并用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血的陽(yáng)性對(duì)照，將各管輕輕搖勻，在37℃水浴中保溫3小時(shí)，取出后按以下標(biāo)準(zhǔn)記錄結(jié)果。結(jié)果如表1所示。
結(jié)果判斷 現(xiàn)象全溶血 溶液澄明紅色，管底無(wú)細(xì)胞殘留部分溶血 溶液澄明紅色或褐色，管底有少量紅細(xì)胞殘留無(wú)溶血 紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明聚集 雖不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞聚集，振搖后不能分散表1新魚(yú)腥草素鈉注射劑溶血試驗(yàn)考察結(jié)果

注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不發(fā)生凝集新魚(yú)腥草素鈉靜脈注射劑的濃度為1mg/ml從表中結(jié)果可見(jiàn)，新魚(yú)腥草素鈉注射劑在3小時(shí)內(nèi)未引起溶血，為生理等張溶液，提示靜脈給藥后不會(huì)導(dǎo)致溶血。
處方2取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有2g新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，400g聚乙二醇200的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝。
一、毒性試驗(yàn)取體重為17～20g健康小鼠，雌雄各半，每組10只，共6組，于小鼠尾靜脈注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小時(shí)內(nèi)，未見(jiàn)任何中毒癥狀與死亡現(xiàn)象。
二、亞急性毒性試驗(yàn)給40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，連續(xù)給藥30天。結(jié)果對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響。肝功能、心電圖等未見(jiàn)明顯異常，心、肝、腎、肺、脾、腦及腸等臟器的病理組織學(xué)檢查亦未見(jiàn)明顯異常。
三、過(guò)敏性試驗(yàn)[摘要]《中華人民共和國(guó)藥典》(2000版，二部)規(guī)定方法進(jìn)行新魚(yú)腥草素鈉注射劑過(guò)敏試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)豚鼠無(wú)致敏作用。
試驗(yàn)?zāi)康挠^察新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)豚鼠有無(wú)致敏作用，為臨床安全使用提供試驗(yàn)依據(jù)。
供試藥物新魚(yú)腥草素鈉注射劑陰性對(duì)照物0.9％氯化鈉注射液(生理鹽水)250ml/瓶陽(yáng)性對(duì)照物5％卵白蛋白生理鹽水溶液，取新鮮蛋清臨用時(shí)在無(wú)菌條件下用生理鹽水配成5％濃度動(dòng)物豚鼠，體重262～292g，雌雄兼用。
致敏用腹腔注射，0.5ml/只；激發(fā)用靜脈注射，1ml/只。
取豚鼠18只，分為陰性對(duì)照(生理鹽水)組，受試物組及陽(yáng)性對(duì)照(5％白蛋白生理鹽水)組，每組6只。各組動(dòng)物間日腹腔注射相應(yīng)藥液0.5ml/只，連續(xù)3次。分別在第一次注射后14日及21日每組各取3只豚鼠靜脈注射相應(yīng)藥液1ml/只(推進(jìn)速度為30秒)。
根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2000版二部規(guī)定觀察給藥后15分鐘內(nèi)豚鼠有無(wú)豎毛、噴嚏、干嘔、咳嗽、呼吸困難、抽搐、痙攣、虛脫、休克或死亡等過(guò)敏反應(yīng)。并按下表反應(yīng)癥狀進(jìn)行判定結(jié)果。
豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)反應(yīng)級(jí)數(shù) 反應(yīng)癥狀0無(wú)明顯反應(yīng)1只有輕微抓鼻、顫抖或豎毛2有幾次咳嗽，有抓鼻、顫抖或豎毛3 多次或連續(xù)咳嗽，伴有呼吸困難或痙攣、抽搐等4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克或死亡[結(jié)果]豚鼠于第一次給藥后14天及21天靜脈注射新魚(yú)腥草素鈉注射劑1ml/只，均未出現(xiàn)豎毛、呼吸困難、噴嚏、干嘔、咳嗽等現(xiàn)象，也未出現(xiàn)抽搐、虛脫或死亡等，反應(yīng)級(jí)數(shù)均為0。
陰性對(duì)照組動(dòng)物于第一次給藥后14天及21天靜脈注射生理鹽水也未出現(xiàn)過(guò)敏癥狀，反應(yīng)級(jí)數(shù)均為0。
陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物于第一次給藥后14天及21天靜脈注射5％卵白蛋白生理鹽水溶液后，均出現(xiàn)抽搐、呼吸困難、站立不穩(wěn)、跌倒等癥狀，6只豚鼠在給藥后2分16秒～5分17秒內(nèi)死亡，反應(yīng)級(jí)數(shù)為4，結(jié)果見(jiàn)下表。
表1新魚(yú)腥草素鈉注射劑過(guò)敏性反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果
根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2000版二部規(guī)定，新魚(yú)腥草素鈉注射劑試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
四、溶血性試驗(yàn)[摘要]新魚(yú)腥草素鈉注射劑0.1～0.5ml在小時(shí)內(nèi)對(duì)家兔紅細(xì)胞未產(chǎn)生溶血和凝集作用。為臨床安全用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。
觀察新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)家兔紅細(xì)胞有無(wú)溶血和凝集作用。
供試藥物新魚(yú)腥草素鈉注射劑陽(yáng)性對(duì)照物0.9％氯化鈉注射液動(dòng)物新西蘭兔1只，雄性，體重2.5kg。
(1)取供試家兔1只，心臟穿刺采血10ml，放入盛有無(wú)菌玻璃珠的三角瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白，使成膠纖血液，置刻度離心管中加入適量的生理鹽水搖勻，以3000轉(zhuǎn)/分離心，每次10分鐘，棄去上清液，反復(fù)洗滌3～4次，至離心后上清液無(wú)色為止，將所得紅細(xì)胞用生理鹽水釀配成2％的紅細(xì)胞混懸液，供試驗(yàn)用。
(2)取試管7支，按表1配比加入供試藥量、2％的紅細(xì)胞混懸液、生理鹽水和蒸餾水，輕輕混勻后，于37℃水浴中放置0.5小時(shí)，然后分別加入不同量的供試品(第6管加生理鹽水，第7管加蒸餾水)，搖勻后，置37℃水浴，分別觀察各管在15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)有無(wú)溶血及紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。結(jié)果見(jiàn)2。
溶液呈透明紅后，即表示溶血，如溶液中出現(xiàn)振搖不散或鏡下檢查有不能用生理鹽水沖散的聚集紅細(xì)胞時(shí)，表示有紅細(xì)胞凝聚作用。一般以0.3ml供試藥(第3管)在3小時(shí)內(nèi)不產(chǎn)生溶血及凝聚作用者認(rèn)為可供注射用。
表1新魚(yú)腥草素鈉溶血試驗(yàn)加樣表

表2新魚(yú)腥草素鈉溶血試驗(yàn)結(jié)果

注溶血用“+”表示，不溶血用“-”表示[結(jié)論]試驗(yàn)結(jié)果表明，新魚(yú)腥草素鈉注射劑在觀察時(shí)間內(nèi)無(wú)溶血及紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象產(chǎn)生，說(shuō)明新魚(yú)腥草素鈉注射劑溶血試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
五、血管刺激性試驗(yàn)[摘要]新西蘭兔左耳緣靜脈滴注新魚(yú)腥草素鈉注射劑10ml/kg，每天1次，連續(xù)3天，滴注期間及給藥后，肉眼觀察未見(jiàn)耳緣靜脈紅、腫、熱等局部刺激反應(yīng)，病理組織學(xué)檢查與對(duì)照組比較，未見(jiàn)明顯的形態(tài)改變。
觀察新魚(yú)腥草素鈉注射劑對(duì)新西蘭兔靜脈血管刺激作用，為臨床安全用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。
供試藥物新魚(yú)腥草素鈉注射劑陰性對(duì)照物0.9％氯化鈉注射液(生理鹽水)250ml/瓶，動(dòng)物新西蘭兔6只，體重2.5-2.9kg，雌雄兼用[方法]新西蘭兔6只，按體重隨機(jī)分為新魚(yú)腥草素鈉注射劑給藥組及0.9％氯化鈉注射液對(duì)照組，每組3只。將動(dòng)物固定于兔箱內(nèi)，左側(cè)耳緣靜脈滴注相應(yīng)藥液，滴注量均為10ml/kg，推注速度1ml/分鐘，每日1次，連續(xù)3天。滴注期間及滴注后，注射觀察滴注部位有無(wú)紅腫、充血、出血和壞死等刺激作用。在未次給藥24小時(shí)后，將動(dòng)物處死，剪下左側(cè)耳自進(jìn)針部位近心端距進(jìn)針部位1cm入處取材，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
肉眼觀察本品制劑兔耳部位未出現(xiàn)明顯的紅腫、充血、壞死等刺激反應(yīng)，與滴注0.9％氯化鈉注射液組的兔耳無(wú)明顯差異。
病理學(xué)檢查0.9％氯化鈉注射液對(duì)照組送檢標(biāo)本為兔耳組織。皮膚組織結(jié)構(gòu)正常，表皮無(wú)增厚，皮下組織未見(jiàn)充血、水腫等形態(tài)學(xué)改變。耳緣靜脈未見(jiàn)擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞也未見(jiàn)增多及排列紊亂等改變，血管壁無(wú)增厚，管腔病理學(xué)改變。
本品給藥組鏡檢兔耳病理形態(tài)學(xué)同對(duì)照組，管壁未見(jiàn)附壁血栓，無(wú)組織變性或壞死等顯著性刺激，無(wú)明顯病理形態(tài)學(xué)改變。
新魚(yú)腥草素鈉注射劑靜脈滴注無(wú)明顯血管刺激作用。
3、制成新魚(yú)腥草素鈉和β-環(huán)糊精包合物注射劑的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處方 羥丙基β-環(huán)糊精 15g新魚(yú)腥草素鈉 1g甘露醇 5g稱取羥丙基β-環(huán)糊精15g，置于100ml注射用水中，攪拌溶解。另取1g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入5g甘露醇，攪拌溶解后，加注射用水至250ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液分裝于西林瓶中，每支1ml，進(jìn)行冷凍干燥，得新魚(yú)腥草素鈉凍干粉針(每支4mg)。(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶15)。
上述制備的新魚(yú)腥草素注射劑進(jìn)行如下安全試驗(yàn)1、毒性試驗(yàn)取體重為17～20g健康小鼠，雌雄各半，每組10只，共6組，于小鼠尾靜脈注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小時(shí)內(nèi)，未見(jiàn)任何中毒癥狀與死亡現(xiàn)象。
2、亞急性毒性試驗(yàn)給40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，連續(xù)給藥30天。結(jié)果對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響。肝功能、心電圖等未見(jiàn)明顯異常，心、肝、腎、肺、脾、腦及腸等臟器的病理組織學(xué)檢查亦未見(jiàn)明顯異常。
3、靜脈注射血管刺激性試驗(yàn)取新西蘭兔12只，雌雄各半，體重2.0～2.5kg，分2組，每組6只，兔耳緣靜脈注射新魚(yú)腥草素鈉注射劑(1mg/ml)3ml/kg，注射速度為每分鐘2.0ml。另一組給以等量生理鹽水，每天一次，連續(xù)給藥5天，于末次給藥24小時(shí)后處死動(dòng)物，剪斷耳并放置于10％甲醛溶液中固定標(biāo)本，然后在兔耳緣靜脈的不同的部位的5個(gè)斷面(從注射部位開(kāi)始向心端每隔0.5cm作一切片)切片進(jìn)行組織學(xué)檢查。兔耳緣靜脈組織切片觀察結(jié)果表明用藥組兔耳緣靜脈的組織變化與對(duì)照組相似，各兔耳緣靜脈血管壁完整，未見(jiàn)內(nèi)皮損傷，未見(jiàn)內(nèi)皮損傷、周?chē)M織水腫等病理變化，靜脈血管結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)血管有明顯的變性，壞死等嚴(yán)重刺激反應(yīng)。
4、過(guò)敏反應(yīng)取豚鼠18只，體重280～350g，雌雄各半。分為三組，每組6只，新魚(yú)腥草素鈉相應(yīng)的溶液0.5ml，共3次，將上述各組動(dòng)物再平均分為兩組，一組于首次給藥后的第14天，分別耳緣靜脈注射新魚(yú)腥草素鈉注射劑和生理鹽水2ml/只，卵白蛋白液(1000mg/kg)進(jìn)行攻擊，并進(jìn)行觀察。如過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)分豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下過(guò)敏反應(yīng)癥狀與級(jí)別劃分對(duì)照表反應(yīng)級(jí)別 過(guò)敏反應(yīng)癥狀+++ 過(guò)敏性休克死亡++ 咳嗽并們有呼吸困難或痙亦抽搐等+連續(xù)咳嗽數(shù)次以上，并伴有抓鼻子或顫抖、豎毛等± 只有輕微抓鼻子、顫抖、豎毛等
0 無(wú)任何明顯反應(yīng)結(jié)果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，新魚(yú)腥草素鈉注射劑組和生理鹽水對(duì)照組，過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)在±以下，陽(yáng)性對(duì)照卵白蛋白的平均過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)均在+++，表明新魚(yú)腥草素鈉注射劑不會(huì)引起豚鼠過(guò)敏反應(yīng)。
5、溶血試驗(yàn)取健康家兔一只，從心臟取血10ml，至潔凈干燥的小燒杯中，用竹簽攪拌除去纖維蛋白原，加生理鹽水10ml，離心棄上清液，再加10ml生理鹽水，輕輕搖勻，離心，棄上清液，如此反復(fù)幾次至上清液不呈紅色為止；量取血球2ml加生理鹽水稀釋成2％的混懸液供測(cè)試用。
取試管14支，編號(hào)排列于試管架上，按下表加入各組溶液，第11、12管不如供試樣品溶液，作為空白對(duì)照第13、14管仍不加供試溶液，并用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血的陽(yáng)性對(duì)照，將各管輕輕搖勻，在37℃水浴中保溫3小時(shí)，取出后按以下標(biāo)準(zhǔn)記錄結(jié)果。結(jié)果如表1所示。
結(jié)果判斷現(xiàn)象全溶血溶液澄明紅色，管底無(wú)細(xì)胞殘留部分溶血 溶液澄明紅色或褐色，管底有少量紅細(xì)胞殘留無(wú)溶血 紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明聚集 雖不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞聚集，振搖后不能分散表1新魚(yú)腥草素鈉注射劑溶血試驗(yàn)考察結(jié)果

注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不發(fā)生凝集新魚(yú)腥草素鈉靜脈注射劑的濃度為1mg/ml
從表中結(jié)果可見(jiàn)，新魚(yú)腥草素鈉注射劑在3小時(shí)內(nèi)未引起溶血，為生理等張溶液，提示靜脈給藥后不會(huì)導(dǎo)致溶血。
以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1處方新魚(yú)腥草素鈉2000mg吐溫-80 5g甘油50mg注射用水加至1000ml取注射用水(或葡萄糖等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有2000mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，50mg甘油的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例2處方新魚(yú)腥草素鈉 80mg吐溫-80 0.1g甘油 50mg注射用水加至 1000ml取注射用水(或葡萄糖等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有80mg新魚(yú)腥草素鈉，0.1g吐溫-80，50mg甘油的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例3
稱取羥丙基β-環(huán)糊精6g，置于6ml蒸餾水中，攪拌溶解。另取0.3g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，室溫?cái)嚢杌蜓心?0分鐘，得新魚(yú)腥草素鈉溶液。(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶20)。將此溶液進(jìn)行濃縮至5ml，得60mg/ml的新魚(yú)腥草素鈉溶液。
實(shí)施例4稱取羥丙基β-環(huán)糊精10g，置于100ml注射用水中，攪拌溶解。另取1g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，室溫?cái)嚢?0分鐘，過(guò)濾，所得溶液，經(jīng)真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥后，得白色粉末，即新魚(yú)腥草素鈉羥丙基β-環(huán)糊精包合物。該包合物的紅外光譜既不同于新魚(yú)腥草素鈉、羥丙基β-環(huán)糊精，也不同于新魚(yú)腥草素鈉與羥丙基β-環(huán)糊精混合物。(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精重量比為1∶10)。此包合物易溶于水中，用此作原料，可制成注射液，粉針或輸液。
實(shí)施例5處方羥丙基β-環(huán)糊精3g新魚(yú)腥草素鈉 1g稱取羥丙基β-環(huán)糊精3g，置于20ml注射用水中，攪拌溶解，另取1g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，室溫?cái)嚢?0分鐘，得一澄清溶液(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶30)。
實(shí)施例6處方羥丙基β-環(huán)糊精15g新魚(yú)腥草素鈉 1g甘露醇 5g稱取羥丙基β-環(huán)糊精15g，置于100ml注射用水中，攪拌溶解。另取1g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入5g甘露醇，攪拌溶解后，加注射用水至250ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液分裝于西林瓶中，每支1ml，進(jìn)行冷凍干燥，得新魚(yú)腥草素鈉凍干粉針(每支4mg)。(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶15)。
實(shí)施例7處方羥丙基β-環(huán)糊精30g新魚(yú)腥草素鈉 1g乳糖 10g稱取羥丙基β-環(huán)糊精30g，置于100ml注射用水中，攪拌溶解。另取1g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入10g乳糖，攪拌溶解后，加注射用水至250ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液分裝于西林瓶中，每支5ml，進(jìn)行冷凍干燥，得新魚(yú)腥草素鈉凍干粉針(5每支20mg).
實(shí)施例8處方羥丙基β-環(huán)糊精 50g新魚(yú)腥草素鈉3g低分子右旋糖苷 15g稱取羥丙基β-環(huán)糊精50g，置于200ml注射用水中，攪拌溶解后，加入15g低分子右旋糖苷加熱溶解后，加入0.5g活性炭攪拌15分鐘，過(guò)濾除炭，所得溶液中加入3g新魚(yú)腥草素鈉，攪拌溶解后，加注射用水至300ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液分裝于西林瓶中，每支1ml，進(jìn)行冷凍干燥，得新魚(yú)腥草素鈉凍干粉針(每支10mg)。此粉針加入滅菌注射用水溶解后，進(jìn)行無(wú)菌、熱原、溶血等項(xiàng)檢查均合格。
實(shí)施例9處方羥丙基β-環(huán)糊精 20g新魚(yú)腥草素鈉0.4g甘露醇 4.6g稱取羥丙基β-環(huán)糊精20g，置于200ml注射用水中，攪拌溶解，另取0.4g新魚(yú)腥草素鈉，加入上述羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，50℃水浴中攪拌15分鐘后，加入4.6g甘露醇(或乳糖、或旋糖苷)，攪拌溶解后，加注射用水至300ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液進(jìn)行噴霧干燥，得新魚(yú)腥草素鈉粉，每克噴霧干燥粉中含新魚(yú)腥草素鈉16mg(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶50)。此粉末加水后，能立即溶解成為澄清透明溶液。
實(shí)施例10處方羥丙基β-環(huán)糊精100g新魚(yú)腥草素鈉 4g稱取羥丙基β-環(huán)糊精100g與新魚(yú)腥草素鈉4g，同置于800ml80℃注射用水中，攪拌溶解，加注射用水至1000ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液分裝于安瓿中，每支1ml，110℃滅菌30分鐘，得新魚(yú)腥草素鈉注射液。此注射液進(jìn)行無(wú)菌、熱原、溶血等項(xiàng)檢查均合格。(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶25)。
實(shí)施例11處方羥丙基β-環(huán)糊精 8g注射用葡萄糖 500g新魚(yú)腥草素鈉 0.4g稱取羥丙基β-環(huán)糊精8g與注射用葡萄糖500g，置于1000ml80℃注射用水中，溶解后加入2g活性炭，攪拌20分鐘后過(guò)濾除炭，所得溶液中加入新魚(yú)腥草素鈉0.4g，攪拌溶解，加注射用水至10000ml，混勻，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得溶液分裝于250ml輸液瓶中，115℃滅菌30分鐘，得新魚(yú)腥草素鈉葡萄糖注射液(即輸液，每支含新魚(yú)腥草素鈉10mg)。此注射液進(jìn)行無(wú)菌、熱原、溶血等項(xiàng)檢查均合格。(藥物與羥丙基β-環(huán)糊精的重量比為1∶20)。
實(shí)施例12取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有2000mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，100ml乙醇的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例13取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約200ml，煮沸，加入含有80mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，100ml丙二醇的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例14取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有1000mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，100ml三甘醇的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例15取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有500mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，1，3丁二醇的混合液100mg，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例16取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有1500mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，80ml特戊醇的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例17取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有80mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，10ml苯甲醇的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例18取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有80mg新魚(yú)腥草素鈉，1g吐溫-80，10mg聚乙二醇200的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例19取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有2000mg新魚(yú)腥草素鈉，2g吐溫-80，200mg聚乙二醇300的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例20取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有1000mg新魚(yú)腥草素鈉，3g吐溫-80，200mg聚乙二醇400的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例21取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有500mg新魚(yú)腥草素鈉，4g吐溫-80，400mg聚乙二醇600的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例22取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約400ml，煮沸，加入含有800mg新魚(yú)腥草素鈉，100g甘油，100mg聚氧乙烯氫化蓖麻油的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例23取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約400ml，煮沸，加入含有2000mg新魚(yú)腥草素鈉，440g甘油，250mg聚氧乙烯蓖麻油的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例24取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有2000mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，500mg卵磷脂的混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例25取注射用水(或葡萄糖、氯化鈉等其他專利要求等滲溶液)約600ml，煮沸，加入含有80mg新魚(yú)腥草素鈉，5g吐溫-80，5ml泊洛沙母的溶液混合液，攪拌溶解，加注射用水(或等滲溶液)至900ml，調(diào)節(jié)pH5.0-6.2，，攪拌溶解，過(guò)濾，自容器上添加注射用水(或等滲溶液)至總量，精濾，檢驗(yàn)中間產(chǎn)品，灌裝(可以為小容量注射液或大容量注射液，規(guī)格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100攝氏度，30分鐘滅菌，澄明度檢查，包裝，即得。
實(shí)施例26取6g吐溫-80、1g甘油，加入到注射用水300ml中攪拌，加入甘露醇40g、新魚(yú)腥草素鈉1g加熱攪拌使溶解，調(diào)節(jié)pH為4.5～6.5，加0.1％的針用活性炭，混勻，加熱至60℃保溫20min，趁熱濾過(guò)脫碳，。濾液加注射用水稀釋至所需量，測(cè)定pH及含量合格后，再用0.22um的濾膜精濾，灌裝于西林瓶中，每瓶約4.0ml，冷凍干燥即可。
實(shí)施例27取6g吐溫-80、1g甘油，加入到注射用水300ml中攪拌，加入乳糖50g、新魚(yú)腥草素鈉1g加熱攪拌使溶解，調(diào)節(jié)pH為4.5～6.5，加0.1％的針用活性炭，混勻，加熱至60℃保溫20min，趁熱濾過(guò)脫碳，。濾液加注射用水稀釋至400ml，測(cè)定pH及含量合格后，再用0.22um的濾膜精濾，灌裝于西林瓶中，每瓶約4.0ml，冷凍干燥即可。
權(quán)利要求
1.一種新魚(yú)腥草素鈉注射劑，其特征在于，含有有效量的新魚(yú)腥草素鈉，助溶劑，可注射用溶劑或等滲溶液，必要時(shí)還可加入賦型劑和PH調(diào)節(jié)劑。
2.權(quán)利要求1的注射劑，其特征在于，助溶劑包括至少一種表面活性劑，醇類助溶物質(zhì)，環(huán)糊精或其衍生物，蓖麻油類物質(zhì)，卵磷脂，泊洛沙母。
3.權(quán)利要求2的注射劑，其特征在于，新魚(yú)腥草素鈉和環(huán)糊精或其衍生物形成包合物，其中新魚(yú)腥草素鈉與環(huán)糊精或其衍生物的重量比為1∶1～1∶100。
4.權(quán)利要求3的注射劑，其特征在于，新魚(yú)腥草素鈉與環(huán)糊精或其衍生物的重量比為1∶5～1∶30。
5.權(quán)利要求2的注射劑，其特征在于，所述助溶劑為兩種或兩種以上的物質(zhì)，其中一種為表面活性劑，另一種為醇類助溶物質(zhì)、蓖麻油類物質(zhì)、卵磷脂、泊洛沙母。
6.權(quán)利要求5的注射劑，其特征在于，所述表面活性劑為吐溫-80，醇類助溶物質(zhì)選自乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，蓖麻油類物質(zhì)為聚氧乙烯蓖麻油。
7.權(quán)利要求6的注射劑，其特征在于，每1000毫升注射液中含有新魚(yú)腥草素鈉20mg-2000mg，吐溫-80 0.5mg-6g，醇類助溶物質(zhì)、蓖麻油類物質(zhì)、卵磷脂、泊洛沙母10mg-5000mg，余量為可注射用溶劑或等滲溶液。
8.權(quán)利要求1的注射劑，其特征在于，使用醇類物質(zhì)作為注射用溶劑，醇類物質(zhì)選自乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，必要時(shí)可另行加入適量的其他類型的助溶劑，和適量的酸性PH調(diào)節(jié)劑。
9.權(quán)利要求7的注射劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟a.取新魚(yú)腥草素鈉20mg-2000mg，吐溫-80 0.1g-6g，醇類助溶物質(zhì)、蓖麻油類物質(zhì)、卵磷脂、泊洛沙母10mg-5000mg，用注射用水或等滲溶液溶解，b.用有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH到5.0-6.2，c.過(guò)濾后加入注射用水或等滲溶液至1000毫升，d.再經(jīng)過(guò)精濾后灌裝，e.滅菌。
10.權(quán)利要求4的注射劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟a.將環(huán)糊精衍生物羥丙基-β-環(huán)糊精置于注射用水中，攪拌溶解后，再加入新魚(yú)腥草素鈉，b.室溫?cái)嚢杌蜓心?，得新魚(yú)腥草素鈉溶液，c.所得溶液需要時(shí)可加入甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化鈉、木糖醇作為賦型劑并使之溶解，d.將步驟b或步驟c得到的溶液經(jīng)真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，得新魚(yú)腥草素鈉羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，，e.分裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及新魚(yú)腥草素鈉靜脈注射劑及其制備方法，該注射劑含有有效量的新魚(yú)腥草素鈉，助溶劑，可注射用溶劑或等滲溶液，必要時(shí)還可加入賦型劑和pH調(diào)節(jié)劑。
文檔編號(hào)A61P11/00GK1602852SQ0313494
公開(kāi)日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2003年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月30日
發(fā)明者楊青波, 趙晟, 郭恒豐, 李廣軍, 付仁芳, 姚勇敢, 霍志強(qiáng), 李麗娟, 張曉波, 聶紅梅, 朱麗華 申請(qǐng)人:北京阜康仁生物制藥科技有限公司