專利名稱：一種藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種藥物組合物及其用途，具體地說，是具有廣譜抗病毒、抗細菌以及提高人體免疫功能的作用的由黃藤素、黃芩苷組成的藥物組合物。
背影技術(shù)據(jù)國家衛(wèi)生部組織的“全國醫(yī)院感染監(jiān)測系統(tǒng)”提供的資料顯示，全國每年住院的病人約為5000萬人，其中約500萬人為感染類病人。其中呼吸道感染占首位，為30％，其次為泌尿系統(tǒng)感染，占19％。
呼吸道感染分為上呼吸道感染和下呼吸道感染。上呼吸道感染主要指的是喉以上的部位，包括鼻、咽、喉等，包括的疾病有感冒、咽炎、扁桃體炎、喉炎等，分為急性上呼吸道感染和慢性上呼吸道感染。急性上呼吸道感染，俗稱“感冒”，是由病毒或細菌引起的鼻、咽、喉部急性炎癥的總稱，是呼吸道最常見的一種傳染性較強的疾病，好發(fā)于冬春季。依病因不同，可分為病毒性和細菌性兩大類。病毒性感染約占急性上呼吸道感染的70-80％，主要由鼻病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、柯薩奇病毒、?？刹《?、冠狀病毒等引起，臨床表現(xiàn)多為普通感冒、流行性感冒、病毒性咽炎、病毒性喉炎、咽結(jié)膜熱、皰疹性咽炎等；細菌性感染主要由甲型溶血性鏈球菌、肺炎球菌、葡萄球菌、流感嗜血桿菌等引起，多繼發(fā)于病毒感染后，少數(shù)為直接由細菌引起，臨床表現(xiàn)多為細菌性咽一扁桃體炎等。據(jù)統(tǒng)計，每人每年患感冒2-5次，兒童可多達6次以上，全世界每年死于感冒的人達200萬以上。經(jīng)常患急性上呼吸道感染的人，機體抵抗力再度下降，形成慢性呼吸道感染，如慢性咽炎等，并可繼發(fā)多種疾病，如急性腎炎、心肌炎、風(fēng)濕病等，危害身體健康。下呼吸道感染主要是指喉以下的部位，包括氣管、支氣管、細支氣管和肺組織(包括肺泡和肺間質(zhì))等部位的炎癥，臨床表現(xiàn)為急慢性支氣管炎、大葉性肺炎、支氣管肺炎和慢性喉炎等，多是由細菌引起的，如革蘭氏陰性菌、肺炎鏈球菌等。泌尿道系統(tǒng)感染是一種常見病、多發(fā)病。在國外，泌尿道感染占醫(yī)院感染類病人的33％以上，國內(nèi)發(fā)病率也一直居高不下。引起泌尿道感染的主要致病菌有大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌等，近年來，由于高效廣譜抗生素的長期使用引起體內(nèi)有益菌群被強力抑制或殺死，造成菌群失調(diào)，真菌性泌尿道感染呈上升趨勢。針對呼吸道感染和泌尿道系統(tǒng)感染的藥物主要以廣譜抗菌素為主。
目前，對細菌性呼吸道感染一般選用合適的抗生素如青霉素、紅霉素等進行治療，但是近年來細菌耐藥性逐漸增加，尤其是肺炎鏈球菌，國外有報道對青霉素G的耐藥率已高達50％以上，大腸埃希菌和葡萄球菌對喹諾酮類藥物的耐藥性也高達50％以上；據(jù)網(wǎng)上搜索資料顯示，江蘇省無錫市人群對普通青霉素的耐藥性已高達82％，對先鋒一代頭孢唑啉的耐藥性已高達43％(飛華健康網(wǎng))。對病毒性上呼吸道感染，由于病毒只能寄生于宿主細胞中，要求抗病毒藥物即能傳入細胞，選擇性抑制病毒的增殖，同時又不損傷宿主細胞，再加上西藥的研究進展比較緩慢，特異性差，副作用大，故迄今為止尚無理想的抗病毒西藥。有文獻報道，大腸埃希菌引起的泌尿系感染，使用環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢唑啉、復(fù)方新諾明，其耐藥率高達75％(153例泌尿系大腸埃希菌感染分析，孫俊等，中國基層醫(yī)藥，2002，9(11))，還有文獻報道抗生素對于許多泌尿道感染缺乏療效，主要原因還是細菌對抗生素產(chǎn)生了一定的耐藥性，使得一些患者在首次治療后的28天內(nèi)會進行第二次治療(37℃醫(yī)學(xué)網(wǎng))。
大量研究表明，來自天然藥物的抗菌和抗病毒活性物質(zhì)，由于其本身的復(fù)雜性，不易引起細菌和病毒的耐藥性。從中藥中篩選廣譜抗菌素，成為藥物研究的重要手段。
目前研究，黃藤素是黃藤(Fibraurea recisa)的藤莖和根提取的總生物堿，其中含有掌葉防己堿(Palmatine)、藥根堿(Jatrorrhizine)、非洲防己堿(columbamine)、黃藤素甲(Fibranine)、黃藤素乙(fibraminine)、黃藤內(nèi)酯(Fibralactone)、甾醇(C27H45OH)等。掌葉防己堿又稱為巴馬汀(英文Palmatine)，是藥材黃藤中的主要成分，藥材中含量3％左右，在黃藤素中掌葉防己堿的含量可達97.25％以上，分子式[C21H22NO4]+；352.4，目前市場上掌葉防己堿多是從黃藤中提取，其他植物如黃柏、黃連、功勞木中也含有少量掌葉防己堿。掌葉防己堿(巴馬汀)屬于芐基異喹啉類季胺生物堿，在水中具有一定的溶解度，其硫酸鹽或醋酸鹽在水中的溶解度大，而氫鹵酸鹽溶解度較小，略溶于水，具有清熱解毒的作用，對多種革藍氏陰性菌和革藍氏陽性菌有抑制作用，并具有增強白細胞吞噬能力的作用，用于治療上呼吸道感染、扁桃體炎、腸炎、痢疾、泌尿道感染、眼結(jié)膜炎、外科和婦科細菌性感染性炎癥(羅連貴.巴馬汀提取工藝的改進.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1990，021(004)155-156)。
黃芩苷，別名黃芩素，黃芩苷來源于藥材黃芩Scutellariabaicalensis Georgi的干燥根，分子式C21H18O11，幾乎不溶于水，難溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于熱乙酸。遇三氯化鐵顯綠色，遇乙酸鉛生成橙紅色沉淀，有清熱解毒、抑菌消炎、調(diào)節(jié)免疫、整合金屬離子、降壓、抗變態(tài)反應(yīng)等功效，常用于治療肝炎、高血壓、感染等。
根據(jù)中醫(yī)藥理論，由病毒、細菌產(chǎn)生的疾病如急性感染性疾病、急性傳染病多為中醫(yī)所說的溫病之熱入營血階段，溫邪外襲。其病機在于溫邪從口鼻而入，先犯肺經(jīng)，衛(wèi)分首當(dāng)其沖。機體正氣奮起抗邪，正邪相爭故發(fā)熱。邪郁肺衛(wèi)，肌膚失養(yǎng)則惡寒，而溫邪為陽邪故惡寒較輕且短暫。邪留肌表，衛(wèi)受邪郁，不得伸展，腠理開合失司，則少汗或無汗。溫邪襲表，陽熱上擾清空故頭痛。肺受邪郁，清肅之職失司則咳嗽。溫邪傷津則口渴。溫邪由衛(wèi)分傳入或溫邪直犯陽明或氣分伏熱外發(fā)或營熱外出氣分，總之氣分為溫病病機轉(zhuǎn)歸之樞扭。陽明為十二經(jīng)之海，為多氣多血之經(jīng)脈，抗邪力強。故邪入陽明，正邪交爭劇烈，里熱蒸迫故全身壯熱。溫邪在里不在表，故不惡寒而僅發(fā)熱。里熱熾盛，熱灼津液故口渴喜冷飲。熱迫津液外泄則多汗。針對上述病機，中醫(yī)采用的治法為清其熱，解其毒，阻斷溫邪入侵并將其驅(qū)出機體。
中藥黃藤、黃芩，此兩味中藥配伍，黃藤味苦性寒，功能清熱解毒，為君藥。黃芩苦寒，有清熱解毒、瀉火燥濕之效并善清上焦心肺之實熱，為臣藥，輔助黃藤清熱解毒。從歸經(jīng)而言，黃藤歸經(jīng)主在上焦心經(jīng)及下焦肝腎經(jīng)，而黃芩則在焦歸肺、中焦歸脾胃大腸經(jīng)，二者相合，上、中、下三焦均有涉及，可使各經(jīng)溫邪得清。
黃藤素、黃芩苷分別來自中藥黃藤、黃芩，中藥中有效成分復(fù)雜，單獨將黃藤素、黃芩苷配伍組合使用，目前尚無相關(guān)報道。從天然藥物原料中篩選出具有廣譜抗病毒、抗細菌的藥物，具有良好的臨床實用價值和市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供由黃藤素，黃芩苷組成的藥物組合物，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供這種藥物組合物的用途。
本發(fā)明提供一種藥物組合物，它是由黃藤素fibranine、黃芩苷baicalin與藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑。
其中黃藤素、黃芩苷的重量配比為黃藤素2.5-100份，黃芩苷5-100份，進一步地，黃藤素、黃芩苷的重量配比為黃藤素5份，黃芩苷5份。
上述的黃藤素Fibrauretin來源于防己科植物黃藤Fibraurea recisaPierre藤莖和根，黃芩苷baicalin來源于唇形科植物黃芩Scutellariabaicalensis Georgi的干燥根。
其中所述的制劑為固體制劑，液體制劑，進一步地，所述的制劑是注射劑、膠囊劑、片劑、微丸、滴眼劑、顆粒劑。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備廣譜抗病毒、抗菌的藥物中的用途，進一步地，提供了該藥物組合物在制備解熱、抗炎的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供該藥物組合物在制備提高免疫力的藥物中的用途。
本發(fā)明將黃藤素、黃芩苷配伍使用，在抗病毒、抗菌、解熱、抗炎、提高免疫方面，發(fā)揮了協(xié)同增效的作用；與單獨使用其中的任一物質(zhì)的藥效學(xué)試驗相比，本發(fā)明藥物對流感病毒的增殖及其所引起的小鼠肺炎有較顯著的抑制作用；對所試革藍氏陽性菌、革藍氏陰性菌均有不同程度的體外抑菌和殺菌作用；對傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗引起家兔的體溫升高有明顯的抑制效果，且持續(xù)時間長，用藥4小時后仍有解熱效果；對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹及大鼠松節(jié)油氣囊肉芽增生的均有顯著的抑制作用，說明本發(fā)明藥物對急性、亞急性炎癥均有治療作用；通過測定本發(fā)明藥物對小鼠的廓清指數(shù)、半數(shù)溶血素及T淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的影響，證明本發(fā)明藥物能顯著提高小鼠的非特異性免疫及特異性免疫功能。充分說明本發(fā)明藥物中兩類化合物配伍，達到協(xié)同增效，具有抗病毒、抗菌、解熱、抗炎、提高免疫作用，為臨床提供一種新的用藥選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
以下通過具體實施方式
證明本發(fā)明的有益效果。
實施例1黃藤素的提取取防己科植物黃藤Gaullis Fibraureae Recisae藤莖和根粗粉100g，加入10倍量2％H2SO4水溶液，煮沸30min，，傾出上清液，過濾，藥渣重復(fù)提取一次，合并濾液，用40％NaOH溶液調(diào)pH為10，同時加入10％精制NaCL，加溫80℃保溫30min，放置24小時，抽濾，干燥，即得黃藤素，其中巴馬汀的含量要求為≥95％。
實施例2黃芩苷的提取取唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根粗粉，分別加10倍量，8倍量水煎煮2次，每次1小時，過濾，將濾液加HCL調(diào)pH值1-2，80℃保溫30min，靜置，離心得沉淀，取沉淀加適量水?dāng)噭颍?0％NaOH調(diào)至pH值7，加入等量乙醇，過濾，濾液加HCL調(diào)pH值1-2，充分攪拌，加熱至80℃保溫30min，過濾，得沉淀，將沉淀水洗，50％乙醇洗滌，再用95％乙醇洗滌或重結(jié)晶，得黃芩苷。
實施例3本發(fā)明藥物膠囊劑的制備稱取黃芩苷30g，黃藤素20g，加適量硬脂酸鎂和二氧化硅，充分混勻，填充膠囊，1000粒，滅菌，即得。根據(jù)本發(fā)明藥物臨床需要，選用不同質(zhì)量的原料黃芩苷、黃藤素及不同的輔料，可制備不同規(guī)格的膠囊劑。
實施例4本發(fā)明藥物片劑的制備稱取黃芩苷40g，黃藤素25g，加適量羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素，壓片，制成1000片，滅菌，即得。根據(jù)本發(fā)明藥物臨床需要，選用不同質(zhì)量的原料黃芩苷、黃藤素及不同的輔料，可制備不同規(guī)格的片劑。
實施例5本發(fā)明藥物滴眼劑的制備稱取黃芩苷8g和黃藤素5g，分別用8％的氫氧化鈉溶液和蒸餾水溶解，再加入0.6g氯化鈉和適量防腐劑，加蒸餾水至100ml，調(diào)PH值為6.0，分裝成8ml/支，滅菌，即得。根據(jù)本發(fā)明藥物臨床需要，選用不同質(zhì)量的原料黃芩苷、黃藤素及不同的輔料，可制備不同規(guī)格的滴眼劑。
實施例6本發(fā)明藥物注射劑的制備稱取黃芩苷10g和黃藤素5g，分別用氫氧化鈉溶液和蒸餾水溶解，再加入適量的等滲調(diào)節(jié)劑和防腐劑，充分溶解，加蒸餾水至1000ml，調(diào)節(jié)PH值為5.5-7.5，滅菌，即得。根據(jù)本發(fā)明藥物臨床需要，選用不同質(zhì)量的原料黃芩苷、黃藤素及不同的輔料，可制備不同規(guī)格的注射劑。
實施例7本發(fā)明藥物滴丸的制備聚乙二醇6000/4000于水浴中加熱至全部熔融，加入黃芩苷和黃藤素，攪拌均勻，保溫在80℃，滴入5℃的液狀石蠟中成丸。根據(jù)本發(fā)明藥物臨床需要，選用不同質(zhì)量的原料黃芩苷、黃藤素及不同的輔料，可制備不同規(guī)格的滴丸劑。
以下通過具體的藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的有益效果。
實驗例1、本發(fā)明藥物注射劑體內(nèi)抗病毒試驗1.實驗材料1.1藥物a、本發(fā)明藥物注射液按實施例6的方法制備，黃棕色澄明液體，規(guī)格2ml/支(每ml含5mg黃芩苷和5mg黃藤素)。
b、黃芩苷注射液棕紅色澄明液體，自制，規(guī)格每ml含黃芩苷10mg。
制備方法精密稱取黃芩苷10g，用8％的氫氧化鈉溶液適量溶解，加水至980ml，用8％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，加活性炭適量，置水浴上加熱1小時，濾過，放冷，加入苯甲醇10ml，以注射用水調(diào)節(jié)至1000ml，濾過，灌封，滅菌，即得。
c、黃藤素注射液黃色的澄明液體；國藥準(zhǔn)字Z53020075；2ml/支；規(guī)格2ml∶20mg(每1ml相當(dāng)于黃藤素10mg)；批號030202；由云南杉榆制藥有限公司生產(chǎn)。
1.2動物及分組昆明種小鼠90只，體重14～15g，雌雄各半，成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。隨機分為感染對照組、黃芩苷組、黃藤素組、本發(fā)明藥物組各兩組，正常對照組一組，每組10只。
1.3病毒流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株FM1，病毒毒種購自四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心病毒研究所，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)病理實驗室傳代后使用，-70℃保存?zhèn)溆谩?br> 2實驗方法2.1對小鼠流感病毒性肺炎的作用除正常組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD50流感病毒液(FM1)滴鼻感染。從感染前一天開始腹腔注射給藥，0.1ml/10g，每天2次，連續(xù)5天，其中感染對照組與正常對照組給予同體積生理鹽水。第6天稱取小鼠體重后解剖，摘取全肺稱重，逐個計算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)抑制率。公式肺指數(shù)＝肺重(g)/體重(g)×100肺指數(shù)抑制率％＝(病毒對照組肺指數(shù)均值-試驗組肺指數(shù)均值)/病毒對照組肺指數(shù)均值×100％注肺指數(shù)大，表示肺重量大，肺病變程度嚴重。
2.2對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響除病毒感染量為1000LD50外，給藥方法同上。病毒感染后48小時外死小鼠，解剖取肺，摘取左側(cè)中葉肺固定，按病理切片常規(guī)脫水、包埋、制作石蠟切片。以間接免疫熒光法染色，以熒光素標(biāo)記的抗感染病毒血清作示蹤源，通過間接免疫熒光結(jié)合，觀察感染鼠肺內(nèi)特異性的病毒抗原，判斷藥物對病毒增殖的作用，熒光陽性數(shù)多，表明病毒顆粒增殖多。
3統(tǒng)計方法數(shù)據(jù)以x±s表示，采用t檢驗，比較組間差異性。
4結(jié)果及分析4.1對小鼠流感病毒性肺炎的作用如表1所示，感染后小鼠肺指數(shù)值明顯增大。本發(fā)明藥物注射液對流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用(P＜0.01)，肺指數(shù)值明顯降低，肺組織病變程度明顯減輕。
表1本發(fā)明藥物對流感病毒感染小鼠肺部炎癥的影響(x±s；n＝10)組別 肺指數(shù)值 抑制率(％)感染對照組 1.54±0.18 ---正常對照組 1.03±0.12▲▲---黃芩苷組 1.36±0.15▲13.83黃藤素組 1.45±0.15 8.9本發(fā)明藥物 1.30±0.10▲▲17.26注與感染對照組相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.014.2對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響表2本發(fā)明藥物對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響(x±s；n＝10)組別 陽性率(％) 抑制率感染對照組 45.01±6.82 ---黃芩苷組 37.27±5.21 16.56黃藤素組 38.13±4.72 13.58本發(fā)明藥物 34.81±3.28▲23.74注與感染對照組相比▲P＜0.05表2結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量明顯有抑制作用。黃芩苷組、黃藤素組與感染對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異。但本明藥物組與黃芩苷組、黃藤素組相比，有顯著差異。
上述實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物對流感病毒的增殖及所引起的肺炎有較顯著的抑制作用，且該作用是由黃芩苷和黃藤素的協(xié)同增效所產(chǎn)生的。
試驗例2、本發(fā)明藥物注射液的體外抑菌試驗1實驗材料1.1菌種試驗所用菌株均為2001-2003年從四川地區(qū)收集的臨床分離致病菌，所有菌種在收集分離的單位(成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科細菌室)均經(jīng)鑒定后，再采用API法重新鑒定后使用。
1.2受試藥本發(fā)明藥物注射液按實施例6的方法制備，黃棕色澄明液體，規(guī)格2ml/支(每ml含5mg黃芩苷和5mg黃藤素)。
試驗時吸取20ml，加入20ml融化的50℃M-H瓊脂培養(yǎng)基混勻后，從40ml中吸出20ml含藥培養(yǎng)基傾倒平皿，余下的20ml含藥培養(yǎng)基中再添加20ml無藥瓊脂培養(yǎng)基稀釋，混勻后再吸出20ml傾倒平皿，依此類推，即以此二倍稀釋法制備出黃芩苷、黃藤素含量為5、2.5、1.25、……0.0098mg/ml的系列含藥平皿待用。
黃藤素注射液黃色的澄明液體；國藥準(zhǔn)字Z53020075；2ml/支；規(guī)格2ml∶20mg(每1ml相當(dāng)于黃藤素10mg)；批號030202；由云南杉榆制藥有限公司生產(chǎn)。
試驗時吸取20ml，加入20ml融化的50℃M-H瓊脂培養(yǎng)基混勻后，從40ml中吸出20ml含藥培養(yǎng)基傾倒平皿，余下的20ml含藥培養(yǎng)基中再添加20ml無藥瓊脂培養(yǎng)基稀釋，混勻后再吸出20ml傾倒平皿，依此類推，即以此二倍稀釋法制備出黃藤素含量為5、2.5、1.25、……0.0098mg/ml的系列含藥平皿待用。
黃芩苷注射液棕紅色澄明液體，自制，規(guī)格每ml含黃芩苷10mg。
試驗時吸取20ml，加入20ml融化的50℃M-H瓊脂培養(yǎng)基混勻后，從40ml中吸出20ml含藥培養(yǎng)基傾倒平皿，余下的20ml含藥培養(yǎng)基中再添加20ml無藥瓊脂培養(yǎng)基稀釋，混勻后再吸出20ml傾倒平皿，依此類推，即以此二倍稀釋法制備出黃芩苷含量為5、2.5、1.25、……0.0098mg/ml的系列含藥平皿待用。
1.3培養(yǎng)基M-H培養(yǎng)基均由北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司出品。
M-H肉湯培養(yǎng)基稱取25g，加1000ml蒸餾水，混勻分裝，調(diào)整PH值至7.2-7.4，121℃高壓滅菌20分鐘，用于革藍陽性、陰性需氧菌的藥敏試驗。
M-H固體培養(yǎng)基稱取36.5g，加1000ml蒸餾水，混勻分裝，調(diào)整PH值至7.2-7.4，121℃高壓滅菌20分鐘，用于革藍陽性、陰性需氧菌的藥敏試驗。
2試驗方法2.1最小抑菌濃度的測定采用瓊脂二倍稀釋法測定本發(fā)明藥物注射液、黃藤素注射液、黃芩苷注射液的最低抑菌濃度(MIC)。將細菌接種于含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點含菌量約為105CFU/ml，37℃孵育18-24小時觀察結(jié)果，以無細菌生長平皿培養(yǎng)基中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。
2.2最低殺菌濃度(MBC)的測定采用液體稀釋法測定本發(fā)明藥物注射液、黃藤素注射液、黃芩苷注射液的最小殺菌濃度(MBC)。用M-H肉湯將受試藥液進行二倍稀釋后，分別于2ml含藥培養(yǎng)液中接種100ul受試菌液(使終濃度為約105CFU/ml)，置于37℃孵育18-20小時，肉眼觀察，以無細菌生長試管中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。
將肉眼觀察無細菌生長的試管的0.01ml培養(yǎng)液涂于不含藥物的瓊脂平皿表面，繼續(xù)37℃孵育18-20小時后，以瓊脂平皿上未見細菌生長的對應(yīng)試管中的藥物最低濃度作為藥物對該菌的最低殺菌濃度(MBC)。
3結(jié)果試驗結(jié)果見表3及表4，由表可知，本發(fā)明藥物注射液對所試革藍氏陽性菌、革藍氏陰性菌均有不同程度的體外抑菌和殺菌作用，且其抗菌活性較黃藤素注射液、黃芩苷注射液強。
表3各受試藥的最低抑菌濃度(MIC)

本發(fā)明藥物注射液的最低抑菌濃度為0.059mg黃芩苷、黃藤素/ml。
表4各受試藥的最低殺菌濃度(MBC)

以上體外抑菌實驗說明，本發(fā)明藥物將黃芩苷、黃藤素組合，發(fā)揮了協(xié)同增效的作用，抗菌活性較比單獨使用黃藤素或黃芩苷強。
通過上述試驗說明，本發(fā)明藥物在廣譜抗菌、抗病毒試驗中發(fā)揮了協(xié)同增效的作用，比任意單獨使用黃藤素或黃芩苷的療效顯著。
試驗例3本發(fā)明藥物注射液的解熱實驗1實驗材料1.1藥物本發(fā)明藥物注射液，按實施例6的方法制備，規(guī)格2ml/支(每ml含5mg黃芩苷和5mg黃藤素)。
黃藤素注射液黃色的澄明液體；國藥準(zhǔn)字Z53020075；2ml/支；規(guī)格2ml∶20mg(每1ml相當(dāng)于黃藤素10mg)；批號030202；由云南杉榆制藥有限公司生產(chǎn)。
黃芩苷注射液棕紅色澄明液體，自制，規(guī)格每ml含黃芩苷10mg。
1.2動物健康大耳白家兔，于實驗前兩天，每天測正常肛門溫度4次。選肛溫每天波動不超過0.2℃的動物32只，隨機分為4組，對照組、黃藤素組、黃芩苷組及本發(fā)明藥物，每組8只。
1.3致熱源傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗，衛(wèi)生部生物制品研究所生產(chǎn)，批號99131-4。
2實驗方法試驗當(dāng)日晨先測動物的基礎(chǔ)體溫，以0.5ml/kg的傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗給家兔耳靜脈注射致熱，半小時后分別測肛溫，并靜脈注射相應(yīng)的藥物或同體積的水，0.1ml/kg。藥后每1小時各測肛溫一次，共4次，以不同時間所測肛溫與基礎(chǔ)肛溫之差值，為體溫變化的指標(biāo)。
3結(jié)果表5本發(fā)明藥物注射液對菌苗致熱家兔的解熱作用(x±s；n＝8)組別 致熱后體溫 藥后不同時間體溫變化值(℃)升高(℃) 1h2h3h 4h對照組1.07±0.211.36±0.14 1.46±0.12 1.06±0.23 0.55±0.13黃芩苷組 1.07±0.181.11±0.17▲▲0.88±0.16▲▲0.60±0.34▲0.36±0.14黃藤素組 1.06±0.121.14±0.15▲▲0.96±0.21▲0.63±0.45 0.40±0.18本發(fā)明藥物1.07±0.161.12±0.12▲▲0.89±0.13▲▲0.60±0.14▲0.32±0.16▲注與對照組相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01如上表所示，本發(fā)明藥物對菌苗引起家兔的體溫升高有明顯的抑制效果，且較單獨使用黃芩苷或黃藤素持續(xù)時間長，用藥4小時后仍有解熱效果。
試驗例4本發(fā)明藥物注射液的抗炎試驗1實驗材料1.1藥物本發(fā)明藥物注射液(受試藥)按實施例6的方法制備，黃棕色澄明液體，規(guī)格2ml/支(每ml含5mg黃芩苷和5mg黃藤素)。
黃藤素注射液(對照藥)黃色的澄明液體；國藥準(zhǔn)字Z53020075；2ml/支；規(guī)格2ml∶20mg(每1ml相當(dāng)于黃藤素10mg)；批號030202；由云南杉榆制藥有限公司生產(chǎn)。
黃芩苷注射液棕紅色澄明液體，自制，規(guī)格每ml含黃芩苷10mg。
清開靈注射液棕黃色或棕紅色澄明液體，國藥準(zhǔn)字Z11020268，規(guī)格2ml/支(每ml含黃芩苷5mg、總氨2.5mg)，批號020801；北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠生產(chǎn)。
其它藥物松節(jié)油為江西資溪制藥廠產(chǎn)品，批號020902。
1.2動物與分組昆明種健康小鼠50只，雄性，體重20g±2g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。隨機分為5組，分別為本發(fā)明藥物、黃藤素組、黃芩苷組、清開靈組及空白對照組，每組10只。
SD大鼠50只，雄性，體重200g±20g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。隨機分為了組，分別為本發(fā)明藥物、黃藤素組、黃芩苷組、清開靈組及空白對照組，每組10只。
2方法2.1小鼠耳片腫脹法五組均采用腹腔注射給藥，其中空白對照組給予同體積的蒸餾水。0.1ml/10g，1次/日，連續(xù)7日。于第末次給藥后1小時，在小鼠左耳兩面涂以100％二甲苯，右耳為對照，4小時后處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用6mm直徑打孔器制備小鼠耳片，用電子秤稱濕重，以兩耳重量之差作為腫脹度(炎癥指標(biāo))。
2.2大鼠松節(jié)油氣囊肉芽增生法五組大鼠均采用腹腔注射給藥，其中空白對照組給予同體積的蒸餾水。0.3ml/100g，1次/日，連續(xù)10日。給藥的同時制備模型，即在乙醚淺麻下，于每鼠的背肩胛區(qū)皮下注射20ml空氣以形成氣囊，然后向氣囊內(nèi)注入純松節(jié)油1ml。24小時后抽出囊內(nèi)氣體。第10日于末次給藥后1小時處死大鼠，并剝離壁內(nèi)肉芽腫，生理鹽水漂洗后，置80℃烤箱烘烤6小時后稱干重。
3數(shù)據(jù)處理實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比采用t檢驗。
4結(jié)果及分析在小鼠耳片腫脹法中，受試四藥對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳片腫脹均有抑制作用，以本發(fā)明藥物及清開靈組作用明顯，二者比較無顯著性差異。在大鼠松節(jié)油氣囊肉芽增生法中，本發(fā)明藥物及清開靈組對肉芽增生有抑制作用，而黃芩苷組、黃藤素組對其的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。見表6表6本發(fā)明藥物對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹及大鼠松節(jié)油氣囊肉芽增生的影響分組 耳腫脹度(mg)肉芽腫干重(mg)空白對照組10±1.8 1.02±0.33本發(fā)明藥物4.3±1.5▲▲0.52±0.30▲黃藤素組 7.8±1.6▲0.91±0.25黃芩苷組 7.5±1.2▲0.87±0.24清開靈組 5.1±1.3▲▲0.48±0.27▲注與空白對照組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01抗炎實驗的結(jié)果說明，黃藤素注射液僅對急性炎癥有一定的抑制作用；本發(fā)明藥物對急性、亞急性炎癥均有較好的抑制作用，與清開靈組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。(據(jù)報道，通過對非典時期所用藥物的篩選研究表明清開靈注射液對肺部急慢性炎癥，對肺指數(shù)、炎性因子、炎性滲出有明顯改善作用的藥物(張東風(fēng).抗非典新藥研究路有多長.中國中藥報，2003-6-11))，說明本發(fā)明藥物具有同清開靈注射液相同的藥效，對肺部急慢性炎癥，對肺指數(shù)、炎性因子、炎性滲出有明顯改善作用。
試驗例5本發(fā)明藥物對大鼠免疫功能的影響1材料1.1藥物本發(fā)明藥物注射液(受試藥)按實施例6的方法制備，黃棕色澄明液體，規(guī)格2ml/支(每ml含5mg黃芩苷和5mg黃藤素)。
黃藤素注射液(對照藥)黃色的澄明液體；國藥準(zhǔn)字Z53020075；2ml/支；規(guī)格2ml∶20mg(每1ml相當(dāng)于黃藤素10mg)；批號030202；由云南杉榆制藥有限公司生產(chǎn)。
黃芩苷注射液棕紅色澄明液體，自制，規(guī)格每ml含黃芩苷10mg。
其它藥物四甲基偶氮唑藍(MTT)、二甲基亞楓為Fluka公司產(chǎn)品；1640培養(yǎng)液為GIBCO公司產(chǎn)品；植物血凝素(PHA)購自Sigma公司。
1.2動物瑞士種小鼠120只，雌雄兼有，4周齡，體重18g～20g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。
1.3實驗分組40只小鼠隨機分為4組，空白對照組、本發(fā)明藥物、黃芩苷組及黃藤素組，每組10只。
2檢測指標(biāo)及方法2.1碳粒廓清法測單核-巨噬細胞吞噬功能給小鼠腹腔內(nèi)注射相應(yīng)藥物，0.1ml/10g體重，1次/日。空白對照組同法給予等容量滅菌生理鹽水，連續(xù)7日。末次給藥后動物尾靜脈注射碳素墨水稀釋液0.1ml·10g-1注射后2min、10min，分別從眼眶后靜脈從取血20ul，溶于4ml0.1％Na2CO3溶液中搖勻，用分光光度計在680nm下測定吸光度，計算廓清指數(shù)K值，公式為K＝(lgOD2-lgOD10)/(t10-t2)[K為廓清指數(shù)；OD2、OD10為2min及10min時的OD值]2.2血清半數(shù)溶血素的測定給小鼠腹腔內(nèi)注射相應(yīng)藥物，0.1ml/10g體重，1次/日。空白對照組同法給予等容量滅菌生理鹽水，連續(xù)7日。在第3天動物腹腔注射綿羊紅細胞0.5ml/只(2.5％)進行免疫，末次給藥1小時后摘除小鼠眼球取血1ml，分離血清進行溶血素測定并計算半數(shù)溶血值(HC50)。公式為HC50＝(樣品吸光值/對照管半數(shù)吸光值)×稀釋倍數(shù)值2.3小鼠T淋巴細胞的增殖反應(yīng)給小鼠腹腔內(nèi)注射相應(yīng)藥物，0.1ml/10g體重，1次/日?？瞻讓φ战M同法給予等容量滅菌生理鹽水，連續(xù)7日。末次給藥2小時后處死小鼠，無菌取脾臟，用1640培養(yǎng)液重懸細胞，制備成5×106·ml-1脾細胞懸液，以每孔100ul接種于96孔培養(yǎng)板，加入PHA(終濃度為30ug·ml-1)，置于37℃ 5％ CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時，并于培養(yǎng)結(jié)束前4小時每孔加入5mg·ml-1MTT20ul，4小時后將待測的脾細胞收集到測量管中，以2200r·min-1離心5min，棄去上清液，每管加入二甲亞楓250ul裂解細胞，細胞充分溶解后，取100ul在酶標(biāo)儀上檢測570nm的吸光度。
3統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比采用t檢驗。
4結(jié)果4.1對小鼠非特異性免疫功能的影響表7本發(fā)明藥物對小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的影響分組 廓清指數(shù)(×103)空白對照組 4.82±0.73黃藤素組 10.21±2.26▲黃芩苷組 12.24±1.96▲本發(fā)明藥物 16.56±2.71▲▲注與空白對照組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.001對于各組用藥對碳粒廓清指數(shù)的影響，本發(fā)明藥物與空白對照組、黃藤素組、黃芩苷組比較均有顯著性差異(P＜0.001，P＜0.01)；黃藤素組與空白對照組比較有差異(P＜0.05)。黃芩苷組與空白對照組比較有差異(P＜0.05)。即本發(fā)明藥物能顯著提高小鼠單核巨噬細胞的吞噬功能，且發(fā)揮了協(xié)同增效的作用，藥效與黃芩苷、黃藤素單獨使用相比，效果更佳。
4.2對小鼠體液免疫功能的影響結(jié)果表明本發(fā)明藥物能顯著提高小鼠血清半數(shù)溶血素，且較黃芩苷組效好，與空白對照組、黃藤素組比較均有顯著性差異(P＜0.01)；黃藤素組與空白對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。見表8表8對小鼠體液免疫功能的影響分組 半數(shù)溶血素HC50空白對照組 32.24±10.89黃藤素組 40.01±12.35黃芩苷組 43.28±14.35▲本發(fā)明藥物 74.32±12.57▲▲△注與空白對照組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，與黃藤素組比較△P＜0.014.3對小鼠細胞免疫功能的影響對于小鼠T淋巴細胞吸光度的影響，本發(fā)明藥物與空白對照組、黃藤素組比較有顯著性差異(P＜0.01)；黃藤素組及黃芩苷組與空白對照組比較有差異(P＜0.05)。如表9所示表9對小鼠細胞免疫功能的影響分組 T淋巴細胞吸光度空白對照組 0.81±0.11黃藤素組 1.24±0.08▲黃芩苷組 1.62±0.13▲本發(fā)明藥物 3.57±0.05▲▲△注與空白對照組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，與黃藤素組比較△P＜0.015小結(jié)上述實驗通過測定本發(fā)明藥物注射液對小鼠的廓清指數(shù)、半數(shù)溶血素及T淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的影響，研究本發(fā)明藥物注射液的免疫調(diào)節(jié)作用。與空白對照組比較，本發(fā)明藥物注射液可以顯著增強巨噬細胞的吞噬功能、提高機體抗體水平及促進淋巴細胞轉(zhuǎn)化率。說明本發(fā)明藥物注射液能顯著提高機體的非特異性免疫及特異性免疫功能。與黃藤素注射液、黃芩苷注射液比較，本發(fā)明藥物注射液對細胞免疫及非特異性免疫的促進作用更為顯著，且本發(fā)明藥物注射液對體液免疫有明顯促進作用，而黃藤素注射液沒有發(fā)現(xiàn)這方面的作用。
試驗例6本發(fā)明藥物滴眼劑的刺激性實驗1、實驗材料1.1動物成年健康家兔5只；1.2藥品本研究樣品及樣品的空白對照品。
2、實驗方法2.1將受試物直接滴入眼睛，每只眼睛滴入2滴；2.2給藥及觀察試驗時將本研究樣品滴入家兔一只眼睛結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)滴入生理鹽水。給藥后使眼睛被動閉合5～10秒。記錄給藥后6、24、48、72小時至7天眼的局部反應(yīng)情況。
3、結(jié)果判斷與評價按《眼刺激反映評分》標(biāo)準(zhǔn)，將每只家兔眼角膜合結(jié)膜的刺激反映的分值相加，為一只家兔的刺激反映總積分。把每個家兔的積分和除以動物數(shù)，就是該家兔對該藥的眼刺激最后分值，按《眼刺激性評價標(biāo)準(zhǔn)》，判定動物眼刺激程度。
表10本發(fā)明藥物組合物滴眼劑和生理鹽水眼刺激反應(yīng)評分結(jié)果組別6小時 24小時 48小時 72小時 7天生理鹽水0 0 0 0 0黃藤素黃芩苷滴眼劑 0.20 0.100 0 0試驗結(jié)果本發(fā)明藥物對眼部基本無刺激。證明本發(fā)明藥物的滴眼制劑的安全性。
試驗例7本發(fā)明藥物片劑的解熱實驗1實驗材料1.1藥物本發(fā)明藥物片劑由實施例4方法制備，規(guī)格0.25g(每片含25mg黃芩苷和25mg黃藤素)。
黃藤素片滇衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1995)第002304號，規(guī)格0.3g(每片相當(dāng)于黃藤素100mg)；批號030202；由云南植物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
黃芩苷片國藥準(zhǔn)字H31022295規(guī)格0.25g(每片含黃芩苷100mg)。上海和黃藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
以上藥品各兩片用5％NAOH溶液20ml配成溶液。
1.2動物健康大耳白家兔，于實驗前兩天，每天測正常肛門溫度4次。選肛溫每天波動不超過0.2℃的動物32只，隨機分為4組，對照組、黃藤素組、黃芩苷組及本發(fā)明藥物，每組8只。
1.3致熱源傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗，衛(wèi)生部生物制品研究所生產(chǎn)，批號99131-4。
2實驗方法試驗前禁食1日，試驗當(dāng)日晨先測動物的基礎(chǔ)體溫，以0.5ml/kg的傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗給家兔耳靜脈注射致熱，半小時后分別測肛溫，給予灌胃相應(yīng)的藥物或同體積的水，5ml/kg。藥后每1小時各測肛溫一次，共4次，以不同時間所測肛溫與基礎(chǔ)肛溫之差值，為體溫變化的指標(biāo)。
3結(jié)果表11本發(fā)明藥物片劑對菌苗致熱家兔的解熱作用(x±s；n＝8)組別 致熱后體溫約后不同時間體溫變化值(℃)升高(℃) 1h 2h 3h 4h對照組1.08±0.131.35±0.17 1.49±0.14 1.08±0.20 0.55±0.13黃芩苷組 1.07±0.161.29±0.14 1.23±0.16▲0.60±0.24▲0.43±0.12黃藤素組 1.07±0.151.29±0.09 1.25±0.12▲0.73±0.14 0.45±0.13本發(fā)明藥物1.07±0.111.18±0.12▲▲1.14±0.13▲▲0.42±0.14▲▲0.32±0.16▲注與對照組相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01如上表所示，本發(fā)明藥物組合物的片劑對菌苗引起家兔的體溫升高抑制作用明顯。與黃芩苷片、黃藤素片灌胃比較，有起效快、持續(xù)時間長的優(yōu)點。通過本實驗說明本發(fā)明藥物口服使用同樣能發(fā)揮黃芩苷、黃藤素合用的協(xié)同增效作用。
綜上所述，本發(fā)明藥物對流感病毒的增殖及其所引起的小鼠肺炎有較顯著的抑制作用，對所試革藍氏陽性菌、革藍氏陰性菌均有不同程度的體外抑菌和殺菌作用，對傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗引起家兔的體溫升高有明顯的抑制效果，且持續(xù)時間長，用藥4小時后仍有解熱效果，對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹及大鼠松節(jié)油氣囊肉芽增生的均有顯著的抑制作用，說明本發(fā)明藥物對急性、亞急性炎癥均有治療作用，通過測定本發(fā)明藥物注射液對小鼠的廓清指數(shù)、半數(shù)溶血素及T淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的影響，證明本發(fā)明藥物能顯著提高小鼠的非特異性免疫及特異性免疫功能。
并且，通過以上藥效學(xué)試驗，充分證明本發(fā)明藥物組合物中的黃芩苷和黃藤素，雖然都是已知的化學(xué)物質(zhì)，但是將兩者配伍使用，并非兩者作用的簡單疊加，而是具有明顯的協(xié)同增效作用，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，不是顯而易見的。
本發(fā)明的藥物組合物具有良好的廣譜抗菌、抗病毒以及提高人體免疫功能的作用，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于它是由黃藤素Fibrauretin、黃芩苷baicalin與藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于黃藤素、黃芩苷的重量配比為黃藤素2.5～100份，黃芩苷5～100份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于黃藤素、黃芩苷的重量配比為黃藤素5份，黃芩苷5份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所述的藥物組合物，其特征在于黃藤素Fibrauretin來源于防己科植物黃藤Fibraurea recisa Pierre藤莖和根，黃芩苷baicalin來源于唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為固體制劑，液體制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑是注射劑、膠囊劑、片劑、微丸、滴眼劑、顆粒劑。
7.權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備廣譜抗病毒、抗菌的藥物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物在制備解熱、抗炎的藥物中的用途。
9.權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備提高人體免疫功能的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其用途，它是由黃藤素Fibrauretin、黃芩苷baicalin與藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑，通過藥效學(xué)試驗證明，本發(fā)明藥物中黃藤素、黃芩苷配伍，達到協(xié)同增效，具有抗病毒、抗菌、解熱、抗炎、提高人體免疫功能的作用，為臨床提供一種新的用藥選擇。
文檔編號A61P31/00GK1602886SQ0313594
公開日2005年4月6日 申請日期2003年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月29日
發(fā)明者陽向波, 李慧琴, 謝煒 申請人:成都三明藥物研究所