專利名稱：愈肝膠囊的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種愈肝膠囊口服藥，用于治療病毒性肝炎及肝病的口服藥背景技術(shù)目前國內(nèi)外病毒性疾病的發(fā)病率逐年增加，并出現(xiàn)艾滋病等新的免疫缺陷病。用于治療這類疾病的藥物品種大體分為兩類類1.抗病毒藥，2.免疫調(diào)節(jié)藥，但都有其自身的問題，并且達不到治愈目的。因此研制出抗病毒效果好、副作用小的治療藥物，使醫(yī)藥界一個迫切的需要。
病毒性肝炎是一種世界性的常見病，我國屬流行“重災(zāi)區(qū)”。據(jù)預(yù)測我國感染乙型肝炎者有1億人以上，由乙型肝炎引起的肝功能不止?；颊呒s3000萬人，此外絕大部分肝癌患者有慢性肝炎病史，各種病毒性肝炎正嚴(yán)重的威脅著國人的健康，故慢性肝炎的治療成為一個迫切需解決的重大問題。目前國內(nèi)外用于病毒性肝炎及肝病治療的藥物品種大體分為三類(1)抗病毒藥，主要有干擾素和幾種核苷類似物，此類藥物在停藥后約6個月至1年內(nèi)大部分病人會復(fù)發(fā)且藥費昂貴；(2)免疫調(diào)節(jié)藥，如轉(zhuǎn)移因子、白細胞介素—2、胸腺肽等，此類藥物治療慢性肝炎療效尚待肯定，藥費昂貴且有副作用。(3)改善肝功能藥，又稱保肝藥或抗肝細胞損傷藥，如甘草甜素、聯(lián)苯雙酯、水飛薊素等，復(fù)方甘草甜素制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，根據(jù)國內(nèi)外文獻資料和中醫(yī)、民族醫(yī)專家多年的臨床經(jīng)驗組成了以一枝蒿、貫葉金絲桃組成的治療病毒性肝炎及肝病的復(fù)方制劑愈肝膠囊。該藥采用分別對一枝蒿和貫葉金絲桃進行粉碎處理、提取、過濾、用噴霧干燥法制備浸膏，將一枝蒿浸膏進行脫色，洗脫濃縮后與貫葉金絲桃浸膏合并灌裝膠囊即可；該藥經(jīng)體內(nèi)外抗病毒試驗，其結(jié)果表明一枝蒿AR在5ug/ml對HBV DNA的平均抑制率為57.0±22.1％，其IC50為3.4±0.5ug/ml，陽性藥1μM的拉米夫定(3TC)對HBV DNA的抑制率為67.2±16.4％。同時貫葉金絲桃的活性成分在治療抑郁癥、病毒性肝炎及肝病和艾滋病以及抗癌等方面具重要的利用前景。
本發(fā)明所述的愈肝膠囊，以一枝蒿、貫葉金絲桃組成，其中原料配比為一枝蒿為6-18克、貫葉金絲桃3-12克；將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20～1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50-80％，備用；將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類和黃酮類，苯并二蒽酮類包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素；黃酮類包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁，含量為50-80％；浸膏真空干燥備用；將一枝蒿浸膏和貫葉金絲桃浸膏混合后即可灌裝膠囊即可。
一種愈肝膠囊口服藥的制備方法，按下列步驟進行a、一枝蒿6-18克，將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20～1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，溫度為30～60℃，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50-80％，備用；b、貫葉金絲桃有效部位的提取貫葉金絲桃3-12克，將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類和黃酮類，苯并二蒽酮類包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素；黃酮類包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁，含量為50-80％；浸膏真空干燥備用；c、將一枝蒿浸膏與貫葉金絲桃浸膏混合后灌裝膠囊即可。
一種愈肝膠囊口服藥作為制備治療病毒性肝炎及肝病的應(yīng)用，該膠囊是純中藥一枝蒿、貫葉金絲桃組成，其中原料配比為一枝蒿為6-18克、貫葉金絲桃3-12克；將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20～1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50-80％，備用；將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類和黃酮類，苯并二蒽酮類包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素；黃酮類包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁，含量為50-80％；浸膏真空干燥備用；將一枝蒿浸膏和貫葉金絲桃浸膏混合后即可灌裝膠囊即可；該藥用于治療病毒性肝炎及肝病的中藥。
本發(fā)明所述的愈肝膠囊，大量臨床資料表明，一枝蒿具有解毒、抗過敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效。維吾爾醫(yī)學(xué)臨床用于肝炎、感冒、咽炎、扁桃體炎、眼炎的治療。其中對肝炎和感冒的療效更為顯著。文獻報道一枝蒿全草含有黃酮類、酮酸類、氨基酸類、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽、生物堿等化合物，其中黃酮類含量為1.33％，其次是酮酸類。
貫葉金絲桃(HERBA HYPERICI PERFORAFI)為藤黃科植物貫葉金絲桃Hypericum peHoratum L.干燥的全草。夏季花盛開時，割取地上部分，晾干，切段，除去雜質(zhì)。本品三級干熱。功能與主治1軟化寒濕，通經(jīng)利尿。用于寒性腫痛，小便不通，肺不利，腰腿疼痛，外敷可治燒傷及關(guān)節(jié)炎等。
該藥材分布于中國新疆、中亞、歐洲等地，而我區(qū)是主要產(chǎn)區(qū)，而且新疆干燥少雨，日照充足、氣溫波動大，處于日照長、輻射強烈、紫外線豐富、水氣量低，加之日溫差大，夜間溫度低，植物呼吸作用低微，所耗能量極少，因而光合作用有效積累高，相應(yīng)活性成份也高。
本發(fā)明所述的愈肝膠囊，該膠囊體內(nèi)外抗病毒試驗為摘要愈肝膠囊是新疆維維吾爾醫(yī)研究所研制的，為研究其抗乙型肝炎病毒的作用，本實驗在乙型肝炎病毒基因轉(zhuǎn)染的人肝癌細胞系2.2.15細胞中，研究其對細胞的毒性和對HBV DNA分泌的抑制效果。兩次試驗表明愈肝膠囊320ug/ml開適2倍稀釋，加入細胞培養(yǎng)8天，對細胞半數(shù)中毒濃度TC50為14.1ug/ml，最大無毒濃度TC0為5ug/ml。最大無毒濃度5ug/ml對HBV DNA的抑制率為54.1±9.7％，其半數(shù)抑制濃度IC50為3.57±0.53ug/ml。
目的為研究愈肝膠囊抗乙型肝炎病毒的作用，本實驗用愈肝膠囊在乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)染的人肝癌細胞2.2.15細胞系培養(yǎng)中，檢測其對乙型肝炎病毒HBV DNA的影響。材料和方法一.藥物愈肝膠囊為棕褐色粉末。實驗時用DMSO配成20mg母液4℃保存，使用時用2.2.15細胞培養(yǎng)液配成所需濃度。
二.2.2.15細胞乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細胞(Hep G2)的2.2.15細胞系，美國Mount Sinal醫(yī)學(xué)中心構(gòu)建，我室引進后自行傳代培養(yǎng)。細胞用含胎牛血清10％，3％谷氨酚胺1％，G418 380μg/ml，卡那霉素50U/ml的Eagle′s MEM培養(yǎng)液，在37℃5％CO2溫箱中培養(yǎng)，大約一周傳代一次。
三.試劑及儀器放射性同位素α32P dCTP為亞輝生物醫(yī)學(xué)工程公司，比活度111TBq/nmol；探針標(biāo)記用的缺日標(biāo)記試劑盒購自Promerga公司。酶標(biāo)儀BIO-RAO 3550型；γ-計數(shù)儀為美國DPC公司產(chǎn)品。
四.實驗方法1.藥物對細胞毒性試驗藥物愈肝膠囊為棕盒色粉末，用DMSO配成20mg/ml母液，使用時用2.2.15細胞培養(yǎng)液配成所需濃度，然后用培養(yǎng)液對倍稀釋從320ug/ml加至2.5ug/ml加入96孔細胞培養(yǎng)板，每濃度3孔，每4天換同濃度藥液，設(shè)無藥物細胞對照組。以觀察細胞病變?yōu)橹笜?biāo)，8天顯微鏡下觀察細胞病變，完全破壞為4；75％為3；50％為2；25％為1；無病變?yōu)?。計算每濃度藥液平均細胞病變程度和抑制％。按Reed&Muench法計算半數(shù)有毒濃度(TC50) 最大無毒濃度(TC0)2.藥物對HBV DNA的抑制試驗各濃度組藥液的及細胞對照組的2.2.15細胞上清液按分子克隆實驗技術(shù)方法提取其HBV DNA、各樣品斑點雜交、放射自顯影、測量各雜交點的A值后，計算抑制率。 3、選擇指數(shù)(SI)SI＝TC50/IC50結(jié)果
1.愈肝膠囊在2.2.15細胞培養(yǎng)中的細胞毒性為觀察愈肝膠囊對乙型肝炎病毒基因轉(zhuǎn)染的人肝癌2.2.15細胞的毒性，在接種2.2.15細胞后24小時，加對倍稀釋藥液，實驗自320ug/ml開始320；160；80；40；20；10；5；2.5ug/ml，同時設(shè)正常細胞對照。4天換一次藥液，維持8天，用顯微鏡觀察細胞病變，按公式計算半數(shù)有毒濃度(TC50)和最大無毒濃度(TC0)見表1。TC50兩批實驗分另為14.1ug/ml，14.1ug/ml，平均半數(shù)有毒濃度(TC50)為14.1ug/ml，最大無毒濃度(TC0)為5ug/ml。
表1.愈肝膠囊，2，3在2.2.15細胞培養(yǎng)內(nèi)的毒性實驗 實驗不同藥物濃度mg/ml細胞病變 TC50TC0批次 方法320 160 80 40 20 10 5 2.5(ug/ml)1 CPE 444 4 1 1 0 0 14.1 5444 4 1 1 0 0444 4 1 1 0 0破壞％ 100 100 100 100 25 25 0 02 CPE 444 4 1 1 0 0 14.1 5444 4 1 1 0 0444 4 1 1 0 0破壞％ 100 100 100 100 25 25 0 0兩批平均14.1 52.愈肝膠囊在2.2.15細胞培養(yǎng)中對HBN DNA的抑制作用愈肝膠囊5 ug/ml；2.5ug/ml；1.25ug/ml，加入2.2.15細胞中培養(yǎng)，第8天對HBV DNA的抑制率愈肝膠囊最大濃度5ug/ml對HBV DNA的抑制率為54.1±9.7％，其半數(shù)抑制濃度IC50為3.57±0.53ug/ml。選擇指數(shù)SI為3.9。表2.愈肝膠囊在2.2.15細胞中第8天對HBV DNA的抑制作用實驗批次 藥物濃度 A值(X±SD) HBV DNA(ug/ml) 抑制％IC50(ug/ml)I 5 0.324±0.005**44.44.102.5 0.462±0.036 20.81.25 0.464±0.073 20.43TC 1μM 0.200±0.019* 65.7細胞對 0.583±0.061II 5 0.273±0.068 63.83.042.50.451±0.023 40.31.25 0.594±0.099 21.33TC 1μM 0.191±0.007 74.7細胞對照5 0.755±0.136結(jié)果 3.55注試驗組與照組比較 **P＜0.01，*P＜0.05結(jié)論1、愈肝膠囊對2.2.15細胞培養(yǎng)的毒性愈肝膠囊加入2.2.15細胞中培養(yǎng)8天，以細胞病變?yōu)橹笜?biāo)，兩批實驗平均半數(shù)中毒濃度TC50為14.1ug/ml，最大無毒濃度TC0為5ug/ml。
2、愈肝膠囊在2.2.15細胞培養(yǎng)內(nèi)對HBV DNA的抑制作用愈肝膠囊在2.2.15細胞中培養(yǎng)8天，最大無毒濃度5ug/ml對HBV DNA的抑制率為54.1±9.7％，陽性藥1μM的拉米夫定(3TC)對HBV DNA的抑制率為70.2±4.5％。表3.愈肝膠囊對HBV DNA的抑制作用總結(jié)表細胞霉性(ug/ml) HBV DNA HBV DNATC50 TC0 IC5.0ug/mlSI14.1 5 3.57 3.9
具體實施例方式
實施例1a、一枝蒿6克，將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，溫度為30℃，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50％，備用；b、貫葉金絲桃有效部位的提取貫葉金絲桃3克，將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類(包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素等)和黃酮類(包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁等)含量為50％；浸膏真空干燥備用；c、將一枝蒿浸膏與貫葉金絲桃浸膏混合后灌裝膠囊即可。
實施例2a、一枝蒿10克，將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，溫度為45℃，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為65％，備用；b、貫葉金絲桃有效部位的提取貫葉金絲桃8克，將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類(包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素等)和黃酮類(包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁等)含量為65％，浸膏真空干燥備用。
c、將一枝蒿浸膏與貫葉金絲桃浸膏混合后灌裝膠囊即可。
實施例3a、一枝蒿18克，將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，溫度為60℃，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為80％，備用；b、貫葉金絲桃有效部位的提取貫葉金絲桃12克，將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類(包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素等)和黃酮類(包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁等)含量為80％，浸膏真空干燥備用；c、將一枝蒿浸膏與貫葉金絲桃浸膏混合后灌裝膠囊即可。
組方中各味藥材及其成分均有抗病毒的研究報道，制劑組方符合維醫(yī)理論。前期基礎(chǔ)研究已經(jīng)證明愈肝膠囊在臨床上用于治療病毒性肝炎及肝病等疾病效果明顯。
權(quán)利要求
1.一種愈肝膠囊，其特征在于以一枝蒿、貫葉金絲桃組成，其中原料配比為一枝蒿為6-18克、貫葉金絲桃3-12克；將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20～1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50-80％，備用；將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類和黃酮類，苯并二蒽酮類包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素；黃酮類包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁，含量為50-80％；浸膏真空干燥備用；將一枝蒿浸膏和貫葉金絲桃浸膏混合后即可灌裝膠囊即可。
2.一種愈肝膠囊口服藥的制備方法，其特征在于按下列步驟進行a、一枝蒿6-18克，將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20～1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，溫度為30～60℃，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50-80％，備用；b、貫葉金絲桃有效部位的提取貫葉金絲桃3-12克，將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類和黃酮類，苯并二蒽酮類包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素；黃酮類包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁，含量為50-80％；浸膏真空干燥備用；c、將一枝蒿浸膏與貫葉金絲桃浸膏混合后灌裝膠囊即可。
3.一種愈肝膠囊口服藥作為制備治療病毒性肝炎及肝病的應(yīng)用，其特征在于該膠囊是純中藥一枝蒿、貫葉金絲桃組成，其中原料配比為一枝蒿為6-18克、貫葉金絲桃3-12克；將一枝蒿全草粉碎，用乙醇回流提取，濾液減壓回收乙醇至相對密度為1.20～1.25的清膏，噴霧干燥法制備浸膏粉，置索氏提取器中，加石油醚，脫脂至無色，棄取醚液，殘渣加醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯得油狀物，加到硅膠柱中，用石油醚∶乙酸乙脂3∶1為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，其中一枝蒿有效部位總黃酮和酮酸類含量為50-80％，備用；將貫葉金絲桃全草粉碎，用乙醇回流提取，得貫葉金絲桃浸膏，其中貫葉金絲桃有效部位苯并二蒽酮類和黃酮類，苯并二蒽酮類包括金絲桃素、偽金絲桃素，異金絲桃素和它們的前體原金絲桃素；黃酮類包括槲皮素、金絲桃甙、阿曼托黃素、蘆丁，含量為50-80％；浸膏真空干燥備用；將一枝蒿浸膏和貫葉金絲桃浸膏混合后即可灌裝膠囊即可；該藥用于治療病毒性肝炎及肝病的中藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種愈肝膠囊口服藥，是根據(jù)中醫(yī)、民族醫(yī)專家多年的臨床經(jīng)驗組成了一枝蒿、貫葉金絲桃組成的治療病毒性肝炎及肝病的口服藥。該膠囊采用分別對一枝蒿和貫葉金絲桃進行粉碎處理、提取、過濾、用噴霧干燥法制備浸膏，將一枝蒿浸膏進行脫色，洗脫、濃縮后與貫葉金絲桃浸膏合并灌裝膠囊即可；該藥經(jīng)體內(nèi)外抗病毒試驗，其結(jié)果表明在治療病毒性肝炎及肝病和艾滋病等方面具重要的利用前景。愈肝膠囊在臨床上用于治療病毒性肝炎及肝病效果明顯。
文檔編號A61P31/12GK1454664SQ0313790
公開日2003年11月12日 申請日期2003年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月29日
發(fā)明者斯拉甫·艾白, 哈木拉提·吾甫爾 申請人:斯拉甫·艾白, 哈木拉提·吾甫爾