專利名稱：用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物、套組、及包裝產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明有關(guān)一種醫(yī)藥組合物，詳言之，系一種用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其包括合砷、銻、鉍之化合物做為活性成分。
背景技術(shù)：
黃病毒科(Flaviviridae)為一大類有包膜的正鏈單鏈RNA病毒。其包括丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus；HCV)、GB病毒(GB virus)、登革熱病毒(Denguevirus)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus)、圣路易腦炎病毒(St.Louisencephalitis virus)、西奈病毒(West Nile virus)、及黃熱病病毒(Yellow fevervirus)。黃病毒科病毒感染為全球廣泛之健康問(wèn)題。
估計(jì)有1億七千萬(wàn)人受到慢性HCV感染(WHO(公元1997年)WklyEpidemiol Rec.72第341至344頁(yè))。患者因HCV感染導(dǎo)致肝損害，可發(fā)展成如肝硬化及肝細(xì)胞癌等慢性肝病(Bartenschlager & Lohmann(公元2000年)之J Gen Virol.81第1631至1648頁(yè))。已有使用干擾素α(interferon α)與利巴偉林(ribavirin)(1-β-D-核呋喃糖基-1，2，4-三唑-3-羧酰胺(1-β-D-ribofuranosyl-1，2，4-triazole-3-carboxamide))之組合以治療HCV感染。參閱例如Foster & Thomas(公元2000年)之Baillieres Best Pract Res ClinGastroenterol.14第255至264頁(yè)。最新之治療系使用改良之干擾素α，即，PEG化干擾素α-2b(peginterferon α-2b)，其具有優(yōu)異之藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。參閱Glue等人(公元2000年)之 The Hepatitis C Intervention Therapy Group.Hepatology 32第647至653頁(yè)；及Lindsay等人(公元2001年)之Hepatology34第395至403頁(yè)。然而，在組合干擾素α及利巴偉林之藥物治療病人后，僅有部分之病人治愈(參閱McHutchison等人(公元1998年)之N Engl J Med.339第1485至1492頁(yè))。而此組合之藥物具有缺點(diǎn)，包括(i)顯著之副作用；(ii)成本高；及(iii)對(duì)HCV 1b(美國(guó)最普遍之基因型)較無(wú)效果。
因此，需要發(fā)展一種更有效之用于治療HCV及其它黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括含砷、銻、鉍之化合物做為用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物之一部分。
在一方面，本發(fā)明有關(guān)一種用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，包括有效量之具有下列化學(xué)式之化合物做為活性成分AwBxCyDz，(I)其中，A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0。注意到本發(fā)明所述之變量之組合僅為彼等可形成穩(wěn)定化合物者。本文中所使用之「穩(wěn)定」一詞，指擁有足以允許制造具安定性及于一段充分之時(shí)間可維持化合物之完整以供本文中詳述之目的之使用(例如投藥給患者以治療或預(yù)防)。又注意到本文所描述之As、Sb、及Bi，包括二價(jià)、三價(jià)、及五價(jià)形式。
上述化學(xué)式所涵蓋之化合物之子集之特征為w與z均為0。在若干具體實(shí)施例中，x為2及y為3。可舉例之化合物包括As2O3、Sb2O3、及Bi2O3。在其它具體實(shí)施例中，x為2或4，及y為2、4、或5，或x為1及y為1。可舉例之化合物包括As2O5、AsS、As2S2、及As4S4。另一個(gè)化合物之子集特征為w為1、2、或3及z為0。在若干具體實(shí)施例中，w為1及y為2?？膳e例之化合物為NaAsO2?；衔镏谌蛹卣鳛閥為0。在此等化合物中，D可為單牙配位基、B可為As或Sb，及w可為0、1、或2?？膳e例之化合物包括AsI3及葡萄糖酸銻鈉(即，氧代(A)-葡萄糖酸根-2，3，4-氫氧二鈉銻(V)鈉鹽(oxo(A)-gluconato-2，3，4-hydroxodisodic antimony(V)sodium salt))。市售可得之葡萄糖酸銻鈉包括Pentostam(英國(guó)倫敦市之Glaxo Wellcome公司)。
可使用含砷、銻、或鉍之聚合化合物例如-O-As(O-)-O-As(O-)-O-As(O-)-以實(shí)施本發(fā)明。此等化合物，在投藥給患者時(shí)，水解成式(I)之化合物。
本文中所使用之「單牙配位基」一詞，指可與原子B以一個(gè)接點(diǎn)相接之離子，其可具有一或二價(jià)。單牙一價(jià)配位基之實(shí)例包括氟、氯、溴、碘、氰基、羥基、巰基、烷氧基、硫代烷氧基、硝酸根、過(guò)氯酸根、羧酸根、醯胺、三烷基硅烷基、異氰酸根、異硫氰酸根、咪唑、磷酸根、及烷基或芳基磺酸根。單牙二價(jià)配位基之實(shí)例包括氧、硫、硒化物、碲化物、及硫酸根?！鸽p牙配位基」一詞，指可與原子B以二個(gè)接點(diǎn)相接之離子。雙牙配位基之實(shí)例包括酒石酸根及多醇型配位基(例如，葡甲胺(meglumine)或碳水化合物)。「三牙配位基」一詞，指可與原子B以三個(gè)接點(diǎn)相接之離子。三牙配位基之實(shí)例包括檸檬酸根及多醇型配位基(例如，葡甲胺或碳水化合物)。上述所稱之「烷基」一詞，指含有1至6個(gè)碳原子之直鏈或支鏈烷基。烷基之實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、第三丁基、及正戊基?！竿檠趸挂辉~指含有1至6個(gè)碳原子及一個(gè)氧自由基之直鏈或支鏈基?！阜蓟挂辉~指具有至少一個(gè)芳香環(huán)之烴環(huán)系統(tǒng)。芳基之實(shí)施例包括但不限于苯基、萘基、及芘基。
上述化合物系用于治療黃病毒科病毒感染，黃病毒科病毒可為丙型肝炎病毒、GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒感染?！钢委燑S病毒科病毒感染」之意思包括使用上述化合物防止或治療肝硬化、肝細(xì)胞癌、或黃病毒科病毒感染之其它繼發(fā)性疾病狀態(tài)。需要此種化合物治療之患者可依醫(yī)療保健專業(yè)人士基于任何診斷方法之結(jié)果而鑒別?；颊呖蔀橥瑫r(shí)接受有效量之利巴偉林投藥者。亦可為同時(shí)接受有效量之干擾素α投藥者。亦可為同時(shí)接受有效量之利巴偉林及干擾素α投藥者。
利巴偉林為1-β-D-核呋喃糖基-1，2，4-三唑-3-羧酰胺，可通過(guò)化學(xué)合成獲得。市售可得之利巴偉林包括VILONA3(加拿大的ICN Pharmaceuticals公司)。干擾素α可為未改良或經(jīng)改良之形式，實(shí)例包括干擾素α-2a、干擾素α-2b、及聚乙二醇化(pegylated)干擾素α(例如，聚乙烯化干擾素α-2b)。市售可得之干擾素包括ROFERON-A(美國(guó)紐澤西州Nutley市之羅素藥廠(RochePharmaceuticals))、INTRON A3(美國(guó)紐澤西州Kenilworth市之Schering公司)、INFERGEN(加拿大千橡市之Amgen公司)、及WELLFERON3(美國(guó)北卡羅萊那州Research Triangle Park之Glaxo Wellcome股份有限公司)。另者，干擾素可藉由合成方法(例如藉由勝肽合成器)產(chǎn)生，然后在活體中適當(dāng)折迭，或藉由大腸桿菌(E.coli)、酵母菌、昆蟲(chóng)細(xì)胞、植物細(xì)胞、或哺乳動(dòng)物細(xì)胞以重組方法制備。利巴偉林與干擾素α-2b之組合系Schering公司所販?zhǔn)?，品名為REBETRON3。
干擾素α及利巴偉林二者亦均可為醫(yī)藥上可接受之鹽類之形式。此種鹽，可為干擾素α或利巴偉林上帶負(fù)電之取代基(例如羧酸根)與陽(yáng)離子一起形成者。適合之陽(yáng)離子包括但不限于鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子、及銨陽(yáng)離子，例如，四鉀銨離子。同樣，帶正電荷之取代基(例如胺基)可與帶負(fù)電荷之相對(duì)離子形成鹽。適合之相對(duì)離子包括但不限于氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、或乙酸根。
本文中所述「同時(shí)接受投藥」或「并用」之說(shuō)法，指對(duì)需要之患者投予上述化學(xué)式之化合物及利巴偉林、投予該化合物及干擾素α、或投予該化合物、干擾素α、及利巴偉林，以混合物形式投予、或在治療期間之相同時(shí)間或不同時(shí)間各別投予。典型之利巴偉林之口服劑量為10mg/天至約50,000mg/天。干擾素α是以非口服(parenterally)投藥(例如，肌肉或皮內(nèi))，劑量為每周約0.1至約5千萬(wàn)國(guó)際單位(例如，每周三次)。另一方面，該化合物可為口服、非口服(例如，肌肉、皮內(nèi)、或鞘膜內(nèi))、吸入噴霧、或經(jīng)由植入式貯錠(implanted reservoir)之方式投藥。
在另一方面，本發(fā)明提供一種包括化合物AwBxCyDz(其中A、B、C、D、w、x、y及z如上述定義)及利巴偉林之醫(yī)藥組合物，其中該化合物及利巴偉林之量為治療黃病毒科病毒感染之有效量。本發(fā)明亦提供一種包括前述之化合物及干擾素α之醫(yī)藥組合物，其中該化合物及干擾素α為治療黃病毒科病毒感染之有效量。本發(fā)明亦提供一種包括前述之化合物、利巴偉林及干擾素α之醫(yī)藥組合物，其中該化合物、利巴偉林及干擾素α為治療黃病毒科病毒感染之有效量。在本發(fā)明之前并不知道該化合物擁有藥學(xué)活性，且不知道可用于治療黃病毒科病毒感染。
在又一方面，本發(fā)明提供一種用于治療黃病毒科病毒感染之套組(kit)，該套組包括一上述之化合物及利巴偉林，其中該化合物及利巴偉林為治療黃病毒科病毒感染之有效量。其中該套組可進(jìn)一步包括治療黃病毒科病毒感染有效量之干擾素α。本發(fā)明又提供一種用于治療黃病毒科病毒感染之套組，該套組包括一上述之化合物及干擾素α，其中該化合物及干擾素α為治療黃病毒科病毒感染之有效量。
本發(fā)明又提供一種包裝產(chǎn)品。該包裝產(chǎn)品包括一容器、一上述之化合物在容器中、及一與該容器組合且指示該化合物對(duì)于治療黃病毒科病毒感染之投藥之說(shuō)明(例如，標(biāo)簽或插入物)。
本發(fā)明之其它目的、特征、和優(yōu)點(diǎn)從下列敘述及圖式及申請(qǐng)專利范圍中能更明顯易懂。
實(shí)施方式本發(fā)明系有關(guān)一種以上述化學(xué)式之化合物做為活性成分以治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物。該化合物在一分子中包括一或多個(gè)砷、銻、或鉍原子。一例為三氧化二砷，其已知為抗癌用藥。例如，三氧化二砷已在公元2000年秋天被美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)認(rèn)可得以治療無(wú)其它醫(yī)療方法可醫(yī)治之急性前骨髓性白血病患者。在公元2001年，F(xiàn)DA亦認(rèn)可注射三氧化二砷以治療慢性骨髓性白血病及急性骨髓性白血病。三氧化二砷可在市面購(gòu)得，做為藥物。在另一實(shí)例，葡萄糖酸銻鈉(Pentostam)事實(shí)上在英語(yǔ)系東非國(guó)家被用來(lái)做為治療黑熱病(kala-azar)及黑熱病后皮膚性利什曼原蟲(chóng)病(post-kala-azardermal leishmaniasis)之唯一物質(zhì)。上述之此等含砷、銻、或鉍之化合物可自無(wú)機(jī)化學(xué)藥品合成。參閱例如Handbook of Preparative InorganicChemistry第一冊(cè)，G.Brauer編輯，第二版，(公元1963年)，Academic Press出版，紐約市，第600頁(yè)。
本發(fā)明之一方面，有關(guān)一種用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，包括有效量之上述之化合物(或其醫(yī)藥上可接受之衍生物，)做為活性成分。患者可為同時(shí)接受干擾素α、或利巴偉林、或干擾素α及利巴偉林之投藥者?！钢委煛挂辉~之定義為，以治愈、緩和、解除、治療、防止、或改善黃病毒科病毒感染、黃病毒科病毒感染之癥狀、黃病毒科病毒感染之繼發(fā)性疾病狀態(tài)、或?qū)S病毒科病毒感染之傾向之目的，將包括上述之化合物之醫(yī)藥組合物單獨(dú)或與干擾素α、或利巴偉林、或干擾素α及利巴偉林組合施用或投藥至患者，該患者具有黃病毒科病毒感染、黃病毒科病毒感染之癥狀、黃病毒科病毒感染之繼發(fā)性疾病狀態(tài)，或?qū)S病毒科病毒感染之傾向?！赣行Я俊篂樵趯⑸鲜鲋衔铩⒏蓴_素α、或利巴偉林(該化合物單獨(dú)或與干擾素α、或利巴偉林組合、或與干擾素α及利巴偉林二者組合)投藥給需要之患者時(shí)，對(duì)患者賦予療效所需之量。該化合物之有效量范圍在約0.001mg/Kg至約1000mg/Kg。干擾素α之有效量范圍在每周約0.1至約5千萬(wàn)國(guó)際單位(IU)1000mg/Kg。利巴偉林之有效量范圍在約10mg/天至約50,000mg/天。有效量如彼等熟習(xí)此技藝者所認(rèn)知者，依該患者年齡、性別、體重、投藥途徑、賦形劑之使用、及與其它治療黃病毒科病毒感染之藥劑(例如，熊脫氧膽酸)共同使用等等之可能性而異。
本發(fā)明之醫(yī)藥組合物可以口服、非口服、吸入噴霧、或經(jīng)由植入式貯錠之方式投藥；及干擾素α可以非口服之方式投藥。本文中所使用之「非口服」一詞包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉、關(guān)節(jié)內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘膜內(nèi)、損害部位內(nèi)、及顱內(nèi)、以及各種輸注技術(shù)(例如肝內(nèi)輸注)。
口服投藥用之醫(yī)藥組合物可為任何口服可接受之劑量形式，包括但不限于錠劑、膠囊、乳劑、及水性懸浮劑、分散劑、及溶液。通常錠劑使用之載劑包括乳糖及玉米淀粉。典型上亦將潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂添加至錠劑中。對(duì)于膠囊形式之口服投藥，可使用之稀釋劑包括乳糖及干燥玉米淀粉。當(dāng)口服投藥的是水性懸浮劑或乳劑時(shí)，活性成份可與乳化劑或懸浮劑一起組合而懸浮或溶解于油相中。若需要，可添加特定之甘味劑、風(fēng)味劑、或著色劑。
無(wú)菌可注射之組合物(例如，水性或油性懸浮劑)可依據(jù)習(xí)知技藝使用適合之分散劑或濕潤(rùn)劑(例如，Tween 80)及懸浮劑調(diào)配。無(wú)菌可注射之制劑亦可為在無(wú)毒之非口服可接受之稀釋劑或溶劑中之無(wú)菌可注射之溶液或懸浮劑，例如在1，3-丁二醇中之溶液?？墒褂弥x形劑及溶劑其中為甘露糖醇、水、林格氏溶液(Ringer′s solution)、及等張氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌、固定油類為習(xí)用做為溶劑或懸浮媒介者(例如，人造甘油一酸酯或甘油二酸酯)。脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物可用于可注射之制劑，天然醫(yī)藥上可接受之油類例如橄欖油或蓖麻油亦可，尤其是經(jīng)過(guò)聚氧乙基化者。此等油溶液或懸浮劑亦可含有長(zhǎng)鏈醇之稀釋劑或分散劑、或羧甲基纖維素或類似之分散劑。
吸入式醫(yī)藥組合物可依據(jù)制藥技藝中已知之技術(shù)制備，及可制成鹽水溶液，使用苯甲醇或其它適合之防腐劑、吸收促進(jìn)劑(以加強(qiáng)生物可利用性)、氟碳化物、及/或其它技藝中已知之溶解劑或分散劑。
習(xí)慣上將醫(yī)藥上可接受之載劑與上述之化合物或干擾素α一起使用。此種載劑與調(diào)配劑之活性成份相容且對(duì)于接受治療之患者無(wú)毒性。例如，可使用助溶劑做為醫(yī)藥賦形劑以遞送該化合物，其中例如環(huán)糊精，其與該化合物形成特定且溶解性更高的錯(cuò)合物。包覆該化合物(例如三氧化二砷)之膠囊亦為載劑。其它載劑之實(shí)例包括膠態(tài)二氧化硅、硬脂酸鎂、纖維素、月桂基硫酸鈉、及D&C黃色#10。
可使用試管試驗(yàn)以評(píng)估上述化合物(或與各種不同形式之干擾素α一起)在抑制丙型肝炎病毒RNA復(fù)制之效力?？蛇M(jìn)而使用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，以技藝中熟知之步驟，評(píng)估該效力與劑量。提供效力評(píng)估方法之實(shí)例于下述。
相信上述以詳述本發(fā)明。因此，本文中所描述之任何具體實(shí)施例應(yīng)僅解釋為說(shuō)明而非限制。本文中所引述之出版物均全文并入本文以供參考。
實(shí)施例HCV RNA復(fù)制之抑制提供含有HCV亞基因組復(fù)制子(HCV sub-genomic replicons)(Ava.5)之Huh-7細(xì)胞，美國(guó)密蘇里州圣路易市之Apath，LLC公司制。參閱例如，Blight等人(公元2000年)之Science 290第1972至1974頁(yè)。在含有5％之CO2之濕氣中，將細(xì)胞維持于含有10％加熱去活之胎牛血清(FCS)之Dulbecco′s改良的Eagle′s培養(yǎng)基(DMEM)。培養(yǎng)基亦含有1mg/mL G418(自美國(guó)威斯康星州Promega市獲得之胺基配糖體類抗生素)做為維持HCV復(fù)制子RNA復(fù)制之選擇性壓力。參閱例如Lohmann等人(公元2001年)之J.Virol.75第1437至1449頁(yè)。人類干擾素α(IFN-I)、三氧化二砷(As2O3)、及三氧化二銻(Sb2O3)系自美國(guó)密蘇里州圣路易市之Sigma市獲得。亞砷酸鈉(NaAsO2)、碘化砷、酒石酸銻鉀(PAT)、及三氧化二鉍(Bi2O3)亦自Sigma公司獲得。將IFN-α分成數(shù)小份貯存于-20℃下。將As2O3粉末溶解于1N NaOH溶液以制備As2O3(10mM)儲(chǔ)存溶液。將Sb2O3或Bi2O3粉末溶解于HCl/H2O(1∶1)溶液以制備Sb2O3(10mM)或Bi2O3(10mM)儲(chǔ)存溶液。將PAT或NaAsO2粉末溶解于H2O以制備PAT(50mM)或NaAsO2(10mM)儲(chǔ)存溶液。
以各種不同濃度之As2O3(0至1μM)、Sb2O3(0至5μM)、或As2O3(0至100nM)與IFN-α(0至1IU/mL)之組合處理細(xì)胞。然后，在24及/或72小時(shí)之處理后收取細(xì)胞。然后，如下述萃取細(xì)胞之RNA及定量總數(shù)。
使用RNeasy Mini Kit(QIAGEN)萃取全部細(xì)胞之RNA。以260nm波長(zhǎng)之吸收度測(cè)量總RNA之濃度。然后將全部RNA(1μg)與50微微莫耳(picomoles)之HCV特定反向引物(reverse primer)A9412，5′-GATGGCCTATTG GCCTGG AGGGG-3′(SEQ ID NO9)(Lohmann等人(公元2001年)之J. Virol.75第1437至1449頁(yè))混合。在RNA中添加不含RNase之ddH2O至10.5μL之最終體積，并在65℃反應(yīng)10分鐘使其變性。使用總體積20μL之含有先前變性引物-RNA混合物、1mM各脫氧核糖核苷酸三磷酸(dNTPs)、50單位反轉(zhuǎn)錄酶、及20單位RNase抑制劑(美國(guó)威斯康星州Madison市之Promega公司)之Expand-RT(德國(guó)Mannheim之Roche Biochemicals公司)，在42℃下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄(RT)反應(yīng)達(dá)1小時(shí)。
以LightCycler-DNA Master使用SYBR Green 1做為雙鏈DNA(dsDNA)(德國(guó)Mannheim之Roche Diagnostics GmbH)之實(shí)時(shí)偵測(cè)，以進(jìn)行定量PCR(Q-PCR)。記錄對(duì)于PCR循環(huán)數(shù)之熒光強(qiáng)度，及對(duì)應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算HCVRNA之相對(duì)量。標(biāo)準(zhǔn)曲線系在供應(yīng)廠商推薦之準(zhǔn)則下自DNA參考品之五個(gè)系列稀釋及HCV RNA之對(duì)應(yīng)cDNA導(dǎo)出。
使用下列引物組以Q-PCR測(cè)定HCV RNA及持家基因(house-keepinggene)、3-磷酸甘油醛脫氫酶(GADPH)、或肌動(dòng)蛋白之相對(duì)復(fù)制數(shù)HCV引物(正鏈)正向5′-ACCAGAATACGACTTGGAGTTGATAA-3′(SEQ ID NO1)反向5′-CACCCTTTTGCCAGATGCAT-3′(SEQ ID NO2)HCV引物(負(fù)鏈)正向5′-CTCGACGTTGTCACTGA-3′(SEQ ID NO3)反向5′-CCATCCGAGTACGTGC-3′(SEQ ID NO4)GADPH引物正向引物5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′(SEQ ID NO5)反向引物5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3′(SEQ ID NO6)肌動(dòng)蛋白引物正向引物5′-ATCCGCAAAGACCTGT-3′(SEQ ID NO7)反向引物5′-GTCCGCCTAGAAGCAT-3′(SEQ ID NO8)如下述反應(yīng)條件進(jìn)行PCR(i)變性條件95℃，60秒；(ii)擴(kuò)增條件升溫至95℃，0秒；64℃，10秒；72℃，10秒。以65℃至95℃之溫度范圍進(jìn)行解鏈曲線(melting curve)分析以測(cè)定擴(kuò)增反應(yīng)之專一性。
將HCV RNA復(fù)制數(shù)除以相同樣品中其對(duì)應(yīng)之GADPH復(fù)制數(shù)以正規(guī)化。以「相對(duì)之復(fù)制數(shù)」表示藥物處理對(duì)HCV RNA復(fù)制之效應(yīng)。相對(duì)之復(fù)制數(shù)系將有藥物處理之HCV RNA復(fù)制數(shù)對(duì)無(wú)藥物處理之HCV RNA復(fù)制數(shù)比較所得。將后者記為100％。全部測(cè)量均重復(fù)二或三次以達(dá)統(tǒng)計(jì)上之意義。
As2O3對(duì)HCV RNA之正鏈(第1A圖)及負(fù)鏈(第1B圖)二者復(fù)制之抑制與劑量有關(guān)。當(dāng)復(fù)制子細(xì)胞暴露至1μM As2O3達(dá)24小時(shí)時(shí)，僅偵測(cè)到HCVRNA之15.6％之正鏈與14.1％之負(fù)鏈。當(dāng)復(fù)制子細(xì)胞暴露至1μM As2O3達(dá)72小時(shí)時(shí)，僅偵測(cè)到HCV RNA之6.1％之正鏈與2.6％之負(fù)鏈。進(jìn)一步，當(dāng)復(fù)制子細(xì)胞暴露至2μM Sb2O3達(dá)24小時(shí)時(shí)，僅偵測(cè)到HCV RNA之20％(第2圖)。
此外當(dāng)As2O3與IFN-α組合時(shí)，可獲得額外之抑制效果(表1及2)。在此等實(shí)驗(yàn)中，將復(fù)制子細(xì)胞以As2O3單獨(dú)或與IFN-α組合處理達(dá)72小時(shí)。在As2O3及IFN-α不存在下，將相對(duì)之HCV RNA量記為100％。
表1 As2O3與IFN-α對(duì)HCV RNA復(fù)制(正鏈)之效應(yīng) 表2 As2O3與IFN-α對(duì)HCV RNA復(fù)制(負(fù)鏈)之效應(yīng) 細(xì)胞生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)將含有HCV亞基因組復(fù)制子(Ava.5)之Huh-7細(xì)胞維持在含有5％之CO2之濕氣環(huán)境中之含有10％FCS之DMEM中。如Malich等人(公元1997年)之Toxicology 124第179至192頁(yè)所述，使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧苯基)-2-(4-磺酸苯基)-2H-四唑正離子(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)之惰性鹽(MTS)測(cè)定細(xì)胞活性。在啡啉甲基硫酸酯(PMS)之存在下，MTS產(chǎn)生水溶性甲臜(formazan)產(chǎn)物，其于磷酸鹽緩沖液(PBS)中在490至500nm波長(zhǎng)下有最大吸收度。參閱Cory等人(公元1991年)之Cancer Commun.3第207至212頁(yè)。
MTS與PMS均為粉末形式，自Sigma或Promega公司購(gòu)得。將MTS溶解于PBS(2mg/mL)及將PMS(0.38mg/mL)溶解于ddH2O中做為儲(chǔ)存溶液。以各種濃度之As2O3處理96-孔微量滴定盤(pán)中培養(yǎng)之細(xì)胞。在試驗(yàn)之前，將2mL含有MTS及PMS(20∶1)之MTS/PMS溶液添加至具有8mL不含酚紅之DMEM之細(xì)胞中。將細(xì)胞培養(yǎng)液抽除，以PBS洗滌，及在各孔中添加100μL之MTS/PMS混合物。在室溫培養(yǎng)2小時(shí)后，以96孔微量滴定盤(pán)判讀器測(cè)量樣品在OD490之光密度。對(duì)于各藥物處理均重復(fù)六次以獲得數(shù)據(jù)。
以上述之MTS試驗(yàn)法測(cè)定As2O3對(duì)HCV亞基因組復(fù)制子細(xì)胞株之細(xì)胞毒性。分別測(cè)得以As2O3處理24小時(shí)及72小時(shí)之IC50值(即，在將細(xì)胞以As2O3處理后導(dǎo)致50％細(xì)胞死亡之As2O3濃度)，為8.5μM及4.8μM。在不同時(shí)間區(qū)間之As2O3之EC50(即，如上述Q-PCR測(cè)定的抑制50％HCV RNA復(fù)制的As2O3有效濃度)及治療指數(shù)(therapeutic index)(TI＝IC50/EC50)示于表3。
表3 As2O3干細(xì)胞生長(zhǎng)之效應(yīng)

使用如Yeh等人(公元2001年)之J.of Virology 75第11017至11024頁(yè)所述之Epstein-Barr以病毒為準(zhǔn)之細(xì)胞體外復(fù)制系統(tǒng)進(jìn)行另一個(gè)HCV復(fù)制抑制測(cè)試。結(jié)果顯示300nm As2O3能夠完全抑制復(fù)制。
藉由相同方法，亦可使用Ava5細(xì)胞測(cè)得亞砷酸鈉、碘化砷、三氧化二銻、酒石酸銻鉀、及三氧化二鉍處理24小時(shí)之EC50及IC50值(表4)。
表4抗HCV效應(yīng)

aEC50Ava5細(xì)胞系在24小時(shí)藥物處理后收取。然后，將全部細(xì)胞RNA萃取及定量。HCV RNA(正鏈)及持家基因、GADPH、或肌動(dòng)蛋白之對(duì)照用mRNA之量以Q-PCR測(cè)量。將各實(shí)驗(yàn)之HCV RNA量除以個(gè)別(respective)之GADPH及肌動(dòng)蛋白mRNA量以獲得正規(guī)化(normalized)之HCV RNA量。
bIC50在24小時(shí)之處理后，以MTS試驗(yàn)法測(cè)定化合物對(duì)Ava.5細(xì)胞之細(xì)胞毒性。
cN.A.未測(cè)定。
其它具體實(shí)施例本發(fā)明之專利說(shuō)明書(shū)中所揭示之全部特征可以任何組合予以組合。本發(fā)明之專利說(shuō)明書(shū)中所揭示之各特征可有另一個(gè)具有相同、均等、或類似之目的之特征所取代。因此，除非另有述明，否則所揭示之各特征僅為具有均等或類似特征之一般系列之實(shí)例。
熟習(xí)此技藝者由上述能夠輕易確認(rèn)本發(fā)明之基本特征，且能夠?qū)⒈景l(fā)明賦予各種變化及修飾以適用于各種用途及條件，不會(huì)背離本發(fā)明之精神與范疇。例如，亦可制造及使用與上述化合物類似之化合物以實(shí)施本發(fā)明。因此，其它具體實(shí)施例亦在申請(qǐng)專利范圍內(nèi)。
圖式簡(jiǎn)單說(shuō)明第1A圖顯示三氧化二砷抑制正鏈丙型肝炎病毒RNA之復(fù)制。
第1B圖顯示三氧化二砷抑制負(fù)鏈丙型肝炎病毒RNA之復(fù)制。
第2圖顯示三氧化二銻(2μM)抑制丙型肝炎病毒RNA之復(fù)制。
序列表<110>財(cái)團(tuán)法人衛(wèi)生研究院<120>用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物、套組、及包裝產(chǎn)品<140><141><150>US 60/385,031<151>2002-06-03<160>8<210>1<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>1accagaatac gacttggagt tgataa 26<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>2cacccttttg ccagatgcat 20<210>3<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>3ctcgacgttg tcactga 17<210>4<211>16<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>4ccatccgagt acgtgc 16<210>5<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>5gaaggtgaag gtcggagtc 19<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>6gaagatggtg atgggatttc 20<210>7<211>16<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>7atccgcaaag acctgt 16<210>8<211>16<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>8gtccgcctag aagcat 16<210>9<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>9gatggcctat tggcctggag ggg 2權(quán)利要求
1.一種用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，包括有效量之具有下列化學(xué)式之化合物做為活性成分AwBxCyDz，其中A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0。
2.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中w及z均為0。
3.如權(quán)利要求2所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中x為2及y為3。
4.如權(quán)利要求3所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中B為As。
5.如權(quán)利要求4所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
6.如權(quán)利要求4所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
7.如權(quán)利要求4所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林并用。
8.如權(quán)利要求4所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之干擾素α并用。
9.如權(quán)利要求4所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林及干擾素α并用。
10.如權(quán)利要求3所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中B為Sb。
11.如權(quán)利要求10所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
12.如權(quán)利要求10所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
13.如權(quán)利要求10所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林并用。
14.如權(quán)利要求10所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之干擾素α并用。
15.如權(quán)利要求10所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林及干擾素α并用。
16.如權(quán)利要求3所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中B為Bi。
17.如權(quán)利要求16所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
18.如權(quán)利要求16所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
19.如權(quán)利要求16所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林并用。
20.如權(quán)利要求16所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之干擾素α并用。
21.如權(quán)利要求16所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林及干擾素α并用。
22.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中y為0。
23.如權(quán)利要求22所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中D為單牙配位基。
24.如權(quán)利要求23所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中B為As或Sb，及w為0、1、或2。
25.如權(quán)利要求24所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
26.如權(quán)利要求24所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
27.如權(quán)利要求24所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林并用。
28.如權(quán)利要求24所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之干擾素α并用。
29.如權(quán)利要求28所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林及干擾素α并用。
30.如權(quán)利要求2所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中x與y均為1。
31.如權(quán)利要求30所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒、GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
32.如權(quán)利要求2所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中x為2或4，及y為2、4、或5。
33.如申請(qǐng)專利范圍第32項(xiàng)所述之用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒、GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
34.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中w為1、2、或3及z為0。
35.如權(quán)利要求34所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中w為1及y為2。
36.如權(quán)利要求35所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中B為As。
37.如權(quán)利要求36所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中A為Na及C為氧原子。
38.如權(quán)利要求37所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
39.如權(quán)利要求37所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
40.如權(quán)利要求37所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林并用。
41.如權(quán)利要求37所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之干擾素α并用。
42.如權(quán)利要求37所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林及干擾素α并用。
43.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
44.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
45.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林并用。
46.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之干擾素α并用。
47.如權(quán)利要求1所述的用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，其系與有效量之利巴偉林及干擾素α并用。
48.一種醫(yī)藥組合物，包括對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之具有下列化學(xué)式之化合物AwBxCyDz，其中A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0；及對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之利巴偉林。
49.如權(quán)利要求48所述的醫(yī)藥組合物，其中該化合物為As2O3、NaAsO2、或Sb2O3。
50.一種醫(yī)藥組合物，包括對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之具有下列化學(xué)式之化合物AwBxCyDz，其中A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0；及對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之干擾素α。
51.如權(quán)利要求50所述的醫(yī)藥組合物，其中該化合物為As2O3、NaAsO2、或Sb2O3。
52.如權(quán)利要求51所述的醫(yī)藥組合物，進(jìn)一步包括利巴偉林。
53.一種用于治療黃病毒病毒感染之套組，包括對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之具有下列化學(xué)式之化合物AwBxCyDz，其中A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0；及對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之利巴偉林。
54.如權(quán)利要求53所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，其中該化合物為As2O3、NaAsO2、或Sb2O3。
55.如權(quán)利要求53所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
56.如權(quán)利要求53所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
57.一種用于治療黃病毒科病毒感染之套組，包括對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之具有下列化學(xué)式之化合物AwBxCyDz，其中A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0；及對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之干擾素α。
58.如權(quán)利要求57所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，其中該化合物為As2O3、NaAsO2、或Sb2O3。
59.如權(quán)利要求57所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
60.如權(quán)利要求57所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
61.如權(quán)利要求57所述的用于治療黃病毒科病毒感染之套組，進(jìn)一步包括對(duì)于治療黃病毒科病毒感染為有效量之利巴偉林。
62.一種包裝產(chǎn)品，包括一容器；一具有下列化學(xué)式之化合物于該容器中AwBxCyDz，其中A為L(zhǎng)i、Na、K、Rb、或Cs；B為As、Sb、或Bi；C為氧或硫原子；D為單牙配位基、雙牙配位基、或三牙配位基；w為0、1、2、或3；x為1、2、3、或4；y為0、1、2、3、4、或5；及z為0、1、2、3、4、或5；但是y與z之至少一者不為0；及一與該容器組合且指示該化合物對(duì)于治療黃病毒科病毒感染之投藥說(shuō)明。
63.如權(quán)利要求62所述的包裝產(chǎn)品，其中該化合物為As2O3、NaAsO2、或Sb2O3。
64.如權(quán)利要求62所述的包裝產(chǎn)品，其中該黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
65.如權(quán)利要求62所述的包裝產(chǎn)品，其中該黃病毒科病毒為GB病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易腦炎病毒、西奈病毒、或黃熱病病毒。
全文摘要
本發(fā)明有關(guān)一種用于治療黃病毒科病毒感染之醫(yī)藥組合物，包括有效量之具有下列化學(xué)式之化合物做為活性成分A
文檔編號(hào)A61P1/16GK1483413SQ0313869
公開(kāi)日2004年3月24日 申請(qǐng)日期2003年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月3日
發(fā)明者徐祖安, 蔡淵欽, 黃德仁 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人衛(wèi)生研究院