專利名稱：由淫羊霍與雌激素組成的治療絕經(jīng)期后婦女骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及絕經(jīng)期婦女治療骨質(zhì)疏松癥的由中藥淫羊藿和雌激素組成的復(fù)方制劑及其制法。
目前研究的資料表明，婦女在絕經(jīng)后99％均可出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥，這種絕經(jīng)后婦女發(fā)生的骨質(zhì)疏松癥也稱為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，該癥是一種以骨量減少、骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)退化為特征的，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的全身性的骨骼疾病。隨著世界人口趨于老齡化，骨質(zhì)疏松癥及骨質(zhì)疏松性骨折的發(fā)病率呈迅速上升的趨勢。根據(jù)我國2000年人口普查的結(jié)果，預(yù)測我國患原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的人數(shù)約為0.88億，約占全國總?cè)丝诘?.97％，預(yù)計(jì)到2010年將達(dá)到1.14億，占總?cè)丝诘陌俜謹(jǐn)?shù)將上升到8.2％，每年因骨質(zhì)疏松癥而發(fā)生骨折的人數(shù)將以兩位數(shù)的增長率而具高不下。骨質(zhì)疏松性骨折已成為老年人致殘、生活質(zhì)量下降甚至死亡的主要原因，嚴(yán)重危害老年人的健康。骨質(zhì)疏松癥和骨質(zhì)疏松性骨折，已使越來越多的人深受其害，并已成為世界性關(guān)注的嚴(yán)重社會問題，在我國也已將它列為三大重點(diǎn)攻關(guān)研究的老年性疾病之一。因此，抗骨質(zhì)疏松藥物研究就成為當(dāng)代醫(yī)藥學(xué)研究的一個(gè)重要領(lǐng)域。
目前治療骨質(zhì)疏松癥的藥物主要分為三種類型，一類為抑制骨吸收的藥物，如雌激素、降鈣素、孕激素、二膦酸鹽等；另一類是促進(jìn)骨形成的藥物，如氟化物、同化類固醇激素、依普拉芬等；第三類為作用骨礦化的藥物，如鈣劑、維生素D等。各類藥物對防治骨質(zhì)疏松癥有一定的療效，但仍帶來了長遠(yuǎn)的不良反應(yīng)。雌激素替代療法是目前臨床廣泛應(yīng)用于防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的主要手段，有效地防止老年或絕經(jīng)婦女骨量的快速丟失，保持骨量，減少骨折發(fā)生率。但是，雌激素有嚴(yán)重的不良反應(yīng)，其最嚴(yán)重不良反應(yīng)是刺激子宮內(nèi)膜增生，增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率，而且長期使用也會增加乳腺癌的發(fā)病率和引起子宮出血等。另外，雌激素屬于抑制骨吸收類藥物，其作用特點(diǎn)是同時(shí)抑制骨吸收和骨形成，長期抑制骨形成會造成骨的老化，骨質(zhì)量下降。骨質(zhì)疏松癥是一種慢性的老年性退行性疾病，要求必須長期用藥，如何改進(jìn)藥物和用藥方案，減輕雌激素的不良反應(yīng)，是一個(gè)有待于解決的問題。
在中醫(yī)藥研究中，發(fā)現(xiàn)一些中藥復(fù)方對預(yù)防骨質(zhì)疏松癥有一定的療效，但是許多中藥，不論復(fù)方還是單方，其預(yù)防去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的效果都不如雌激素。因此，本發(fā)明提出了中西藥聯(lián)合防治骨質(zhì)疏松癥的構(gòu)思。淫羊藿是我國傳統(tǒng)的補(bǔ)腎壯陽藥，我們近年來證明了淫羊藿和淫羊藿組成的復(fù)方具有顯著的防治骨質(zhì)疏松癥的作用，但是對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用不如雌激素。因?yàn)槿ヂ殉泊笫蠊琴|(zhì)疏松模型屬于高骨轉(zhuǎn)換的骨快速丟失型，在骨吸收增加的同時(shí)因偶聯(lián)作用骨形成也明顯增高，骨吸收增加超過了骨形成的速度，故出現(xiàn)骨快速丟失。淫羊藿抑制骨轉(zhuǎn)換較弱，并不抑制因骨吸收增加所致偶聯(lián)骨形成增加。淫羊藿能促進(jìn)骨髓細(xì)胞DNA合成，促進(jìn)骨組織蛋白質(zhì)合成及促進(jìn)成骨細(xì)胞功能，在體外實(shí)驗(yàn)可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化。淫羊藿如果合用小劑量雌激素，既可以發(fā)揮較強(qiáng)的抑制骨轉(zhuǎn)換作用，又可以促進(jìn)骨形成，對增加骨量可能有協(xié)同作用；同時(shí)淫羊藿復(fù)方可以對抗炔雌醇對子宮及其內(nèi)膜的刺激作用，而且淫羊藿具有雄激素樣作用，如果淫羊藿合用小劑量雌激素，可以減輕雌激素的不良反應(yīng)。淫羊藿總黃酮是淫羊藿的主要有效成分之一，能有效地預(yù)防維A酸誘導(dǎo)及低鈣飼料結(jié)合去卵巢誘發(fā)的大鼠骨質(zhì)疏松，而且可以促進(jìn)體外成骨細(xì)胞增殖及分化成熟。
因此，本發(fā)明的任務(wù)是研制一種適合絕經(jīng)期后婦女預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，該復(fù)方制劑是由淫羊藿或淫羊藿總黃酮與雌激素組成復(fù)方，該復(fù)方制劑中淫羊藿可以提高雌激素抗骨質(zhì)疏松作用而減少其不良反應(yīng)的，因此，雌激素的用量可以減少1/5～1/2，達(dá)到同樣的療效而不良反應(yīng)明顯減少或者消失。研究表明該制劑既能阻止去卵巢大鼠骨質(zhì)的進(jìn)一步丟失，又能促進(jìn)新骨的形成，對子宮沒有明顯的刺激作用。因此，可用于各種原因所致的骨質(zhì)疏松癥，特別適合于絕經(jīng)期后婦女預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥。
解決這一任務(wù)的途徑是這樣實(shí)現(xiàn)的，取淫羊藿或淫羊藿總黃酮與雌激素組合起來，組成復(fù)方，通過下述工藝制作成片劑、沖劑或膠囊劑，供臨床應(yīng)用，研究表明，本制劑對去卵巢，去睪丸所致的實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松癥，長期應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素所致的骨質(zhì)疏松癥，對化療藥羥基脲所致的腎陽虛性骨質(zhì)疏松癥等均有良好的防治作用。本制劑能夠阻止骨質(zhì)的進(jìn)一步丟失，促進(jìn)鈣磷代謝，促進(jìn)新骨形成，使疏松的骨組織變得致密，并能消除骨質(zhì)疏松癥所致的各種不良反應(yīng)。用本復(fù)方制劑治療骨質(zhì)疏松癥國內(nèi)外文獻(xiàn)均未見報(bào)道。
本復(fù)方制劑可通過下述幾個(gè)方法制備1、淫羊藿粉碎成粉末，加75～95％乙醇浸泡24小時(shí)，過濾，回收乙醇，得醇提物備用，藥渣再加水煎煮3次，合并三次濾液，濾過，濾液濃縮至適量，加入前述的醇提物，低溫干燥，粉碎，加適量輔料和雌激素，制成顆粒，壓片，包糖衣或裝膠囊，即得。
2、淫羊藿生藥材以數(shù)倍水浸泡后煎煮，重復(fù)3次，合并濾液濃縮，加3倍乙醇沉淀，回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得到淫羊藿總黃酮。(以淫羊藿甙作標(biāo)準(zhǔn)品，測得提取物中淫羊藿總黃酮含量為32％)。淫羊藿總黃酮加適量輔料和雌激素，制成顆粒，壓片，包糖衣或裝膠囊，即得。
3、本復(fù)方制劑所用的雌激素可用戊酸雌二醇，炔雌醇，雌三醇，尼爾雌醇，結(jié)合型雌激素，己烯雌酚，氯烯雌酚，他莫昔芬。這些雌激素與淫羊藿組成復(fù)方時(shí)，每片或每粒的含量分別為戊酸雌二醇0.2～0.5mg/片，炔雌醇2.5～5μg/片，雌三醇0.2～0.5mg/片，尼爾雌醇5～15μg/片，結(jié)合型雌激素0.075～0.125mg/片，己烯雌酚0.075～0.125mg/片，氯烯雌酚1～2mg/粒，他莫昔芬2～5mg/片。
采用以上1～2方法制得的制品，經(jīng)藥理學(xué)、毒理學(xué)研究證明，本品對去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥有明顯的預(yù)防和治療作用，急性毒性試驗(yàn)及長期毒性試驗(yàn)(包括3個(gè)月至6個(gè)月)均證實(shí)本品毒性低，長期服用對心、肝、腎、肺、胃、腸、脾、胸腺、淋巴結(jié)等各重要器官均無損害作用。臨床研究表明，本品對原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥如絕經(jīng)期婦女和老年性骨質(zhì)疏松癥有良好的防治作用。
實(shí)施例為觀察由淫羊霍與雌激素組成的治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑的藥效學(xué)作用，進(jìn)行了下述實(shí)驗(yàn)1材料與方法1.1材料1.1.1淫羊藿總黃酮的提取 淫羊藿生藥材以數(shù)倍水浸泡后煎煮，重復(fù)3次，合并濾液濃縮，加3倍乙醇沉淀，回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得到淫羊藿總黃酮。以淫羊藿甙作標(biāo)準(zhǔn)品，測得提取物中淫羊藿總黃酮含量為32％。淫羊藿總黃酮加適量輔料和雌激素己烯雌酚，制成顆粒，壓片，己烯雌酚的含量配成0.075mg/片。1.1.2藥品與試劑 己烯雌酚購自廣東彼迪藥業(yè)有限公司，批號20010601；鈣黃綠素(Calcein)、鹽酸四環(huán)素、Goldner’s染料試劑均購自美國Sigma公司；甲基丙烯酸甲酯購自北京化工廠；鄰苯二甲酸二丁酯購自天津市化學(xué)試劑一廠；過氧化苯甲酰購自廣州化學(xué)試劑廠；雌二醇放免試劑盒購自天津德普公司；血清鈣、磷、堿性磷酸酶、總膽固醇試劑盒由德國貝克曼公司提供。1.1.3儀器 低速鋸(Buehler LTD.USA)；硬組織切片機(jī)(德國Leica 2155)；碳化鎢剛刀(德國Leica公司產(chǎn)品)；自動(dòng)化圖像數(shù)字化分析儀包括光鏡和熒光顯微鏡(Nikon，日本)；骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測量軟件(KSS ScientificConsultants，UT USA)；全自動(dòng)生化分析儀(德國貝克曼公司)；γ計(jì)數(shù)器(芬蘭LKB)；AE240電子天平(Mettler-Toledo instr.shanghai Ltd)；ASD-3D愛華電子計(jì)重秤(深圳市愛華衡器有限公司產(chǎn)品)。1.2材料1.2.1動(dòng)物模型與分組 4月齡未交配的雌性SD大鼠(由中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號為中科動(dòng)管第003號)60只，清潔級，平均體重225±15g；適應(yīng)性飼養(yǎng)15天，開始實(shí)驗(yàn)時(shí)平均體重240±12g。分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)于室溫23℃~25℃，相對濕度50％~70％的清潔環(huán)境中，自由攝食和攝水；使用標(biāo)準(zhǔn)飼料，其中鈣含量1.33％，磷含量0.95％。隨機(jī)分成6組，每組為10只?；A(chǔ)對照組(Basal)，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，將其處死取材。除假手術(shù)組大鼠外，其余行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，然后接受不同藥物治療。(1)假手術(shù)組(Sham)和(2)去卵巢組(OVX)均用體積分?jǐn)?shù)為0.056的乙醇(溶劑對照)；其余分別為(3)己烯雌酚DES 22.5μg·kg-1·d-1；(4)淫羊藿總黃酮EF300mg·kg-1·d-1；(5)淫羊藿總黃酮EF300mg·kg-1·d-1+己烯雌酚DES22.5μg·kg-1·d-1；均灌胃給藥。所有動(dòng)物給藥時(shí)間為90天，每周稱體重1次，并按體重變化調(diào)整給藥量。在動(dòng)物處死前第14、13天和第4、3天分別皮下注射鹽酸四環(huán)素30mg·kg-1和鈣黃綠素(Calcein)5mg·kg-1。1.2.2骨標(biāo)本的制作 大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后心臟抽血處死，分離血清作生化指標(biāo)的測定；取出內(nèi)臟器官，分別稱器官濕重，器官濕重除以體重并乘以1000得器官指數(shù)；取出左側(cè)脛骨，用慢速鋸在近端作矢狀打開髓腔，于脛骨上段1/3處橫行鋸斷，取脛骨上段進(jìn)行固定、脫水、包埋和切片，用硬組織切片機(jī)分別切下5μm和8μm切片，5μm骨薄片采用Masson-Goldner Trichrome染色方法，染色后用以觀察骨小梁表面破骨細(xì)胞數(shù)目。8μm骨厚片直接封片采用半自動(dòng)圖象數(shù)字化分析儀測量骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)參數(shù)和動(dòng)態(tài)參數(shù)。1.2.3脛骨近端松質(zhì)骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測定用KSS Image圖象分析系統(tǒng)，按國際骨形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)測量的定義和計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)，測量脛骨近端的靜態(tài)參數(shù)和動(dòng)態(tài)參數(shù)。靜態(tài)參數(shù)包括骨組織總面積(T.Ar，mm2)、骨小梁面積(Tb.Ar，mm2)、骨小梁周長(Tb.Pm，mm)及其計(jì)算參數(shù)[骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb.Ar，％)、骨小梁厚度(Tb.Th，μm)和骨小梁分離度(Tb.Sp，μm)]、總破骨細(xì)胞數(shù)目(Oc.No)及其指數(shù)(Oc.N/mm，#/mm)。動(dòng)態(tài)參數(shù)包括單標(biāo)記周長(sL.Pm，mm)、雙標(biāo)記周長(dL.Pm，mm)和雙標(biāo)記間距(Ir.L.Wi，μm)及其計(jì)算參數(shù)[標(biāo)記周長百分?jǐn)?shù)(％L.Pm，％)、骨礦化沉積率(MAR，μm/d)、骨形成率BER/BS(表示骨表面形成率，％yr)、骨形成率BER/BV(表示骨轉(zhuǎn)換程度，％yr)、骨形成率BER/TV(表示骨組織形成率，％yr)]。1.2.4血清生化指標(biāo)及雌二醇的測定 血清鈣(Ca)、磷(P)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽固醇(Ch)、含量測定采用德國貝克曼全自動(dòng)生化分析儀，試劑盒由德國貝克曼公司提供，由廣東省農(nóng)墾醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。雌二醇(E2)含量測定采用包被-抗體-計(jì)數(shù)的放免方法，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，與本院同位素教研室老師共同完成。1.2.5子宮組織形態(tài)觀察和子宮內(nèi)膜厚度測定 取出子宮后，首先稱重觀察子宮大小，然后取三個(gè)部位切塊進(jìn)行石蠟包埋，并分別制成5μm切片，經(jīng)HE染色，于10×40倍鏡下觀察，并用自動(dòng)圖像數(shù)字化分析儀測量內(nèi)膜厚度。1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)用x±s表示，用SPSS 10.0軟件進(jìn)行方差分析，兩兩比較用q檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠體重、血清生化指標(biāo)和雌二醇的影響淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠體重、血清生化指標(biāo)和雌二醇的影響見表1表1淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠體重、血清生化指標(biāo)和雌二醇的影響(m＝10，x±s)組別 劑量體重開始 結(jié)束 血清Ca P ALP CHOL E2/(mg·kg-1) g g mmol·L-1mmol·L-1U·L-1mmol·L-1pg·mlSham Vehile240.1±6.6 265.3±6.9 2.49±0.06 2.35±0.4374.6±24.91.27±0.0934.5±12.6OVX Vehile236.8±11.1300.6±15.5#2.44±0.10 2.04±0.3384.3±16.21.75±0.45#12.3±2.1##DES 0.0225241.4±6.1 240.9±25.4**2.55±0.06 2.41±0.50130.1±38.9*0.98±0.35**15.4±6.3EF 300 23g.6±8.1 294.2±28.52.59±0.05*2.18±0.1598.7±38.41.88±0.2127.8±20.1E+D 300+0.0225244.4±10.6289.0±18.0*2.70±0.06*△2.16±0.33113.7±26.8 1.59±0.5026.0±11.9#P＜0.05；##P＜0.01 vs Sham；*P＜0.05；**P＜0.05vs OVX△P＜0.05；△△P＜0.05vs DF.S。
從Tab 1的結(jié)果可見.去卵巢組(OVX)大鼠體重明顯增加，血清總膽固醇增加和雌二醇濃度明顯降低(P＜0.05)。己烯雌酚能明顯減輕去卵巢大鼠體重和血清總膽固醇(P＜0.05)，增加血清堿性磷酸酶(P＜0.05)；單用EF使血鈣濃度增加，其余指標(biāo)無明顯改變；聯(lián)合用藥組比單用己烯雌酚組體重和血鈣濃度增加(P＜0.05)。2.2淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠內(nèi)臟器官指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度的影響淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠內(nèi)臟器官指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度的影響見表2表2 淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠內(nèi)臟器官指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度的影響(n＝10，x±s)組別腳腺(g)肝(g) 脾(g) 腎(g) 腎上腺(g) 子富(g) 子宮內(nèi)膜厚度(μm)Sham0.6±0.2 25.0±1.0 2.2±0.27.1±0.40.23±0.04 2.2±0.6 23.67±4.20OVX 0.9±0.2#25.4±2.4#2.3±0.16.4±0.5#0.19±0.04 0.4±0.2#9.51±1.06#DES 0.8±0.3 36.6±5.2*2.7±0.3*8.1±1.2*0.27±0.08*2.0±0.6**41.58±8.41**EF 1.0±0.2 24.5±2.7 2.4±0.26.5±0.80.22±0.04 0.64±0.3 12.26±2.73EF+DES 0.6±0.2 32.0±2.2*△2.8±0.3*7.1±0.40.25±0.03 1.6±0.2**△20.28±2.07**△△#P＜0.05；##P＜0.01 vs Sham*P＜0.05；**P＜0.05vs OVX△P＜0.05；△△P＜0.05 vs DES。
從Tab 2的結(jié)果可見，去卵巢后大鼠的子宮和腎指數(shù)明顯減輕，子宮內(nèi)膜厚度減少，而胸腺指數(shù)增加。己烯雌酚組的子宮、肝、脾、腎及腎上腺指數(shù)、子宮內(nèi)膜厚度明顯增加，而且高于Sham組(P＜0.05)；單用EF無影響；聯(lián)合用藥組使去卵巢大鼠的子宮和肝指數(shù)、子宮內(nèi)膜厚度增加，但低于己烯雌酚組，與Sham組無差別。2.3 淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠脛骨近端松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的影響表3 淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠脛骨近端松質(zhì)骨靜態(tài)參數(shù)的影晌(n＝10，x±s)GroupTb.Ar(％) Tb.Th(μm) Tb.N(#·mm-1) Tb.Sp(μm) Oc.N(n·mm-2)Basal23.4±5.2 57.0±5.84.1±0.6194.3±43.8 4.3±1.5Sham 22.9±6.4 57.3+13.14.0±0.2195.7±25.9 4.1±1.1OVX 4.5±1.6##46.5±6.61.0±0.3##1111.4±439.7##18.8±7.4##DES 11.4+5.4**44.7±6.62.5±0.9**426.1+208.3*9.2±5.7*EF 7.2+4.4 48.2±9.31.4±0.8908.5±669.2 15.7+12.8EF+DES 19.0±3.9**△△54.2±7.0*△3.5±0.4**△235.4±35.4**△3.3±1.0**△△
*P＜0.05；##P＜0.01 vs Sham*P＜0.05**P＜0.05 vs OVX△P＜0.05△△P＜0.05 vs DES。
從Tab 3的結(jié)果可見，去卵巢大鼠與對照大鼠相比，90天后骨量丟失80％(P＜0.01)、骨小梁數(shù)目降低75％(P＜0.01)、骨小梁分離度增加468％(P＜0.01)、破骨細(xì)胞數(shù)目增加358％(P＜0.01)。己烯雌酚使去卵巢大鼠的骨量及骨小梁數(shù)目分別增加153％和150％(P＜0.01)、骨小梁分離度及破骨細(xì)胞數(shù)目分別減少62％和51％(P＜0.05)。單用淫羊藿總黃酮使去卵巢大鼠的骨量有增加60％，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。己烯雌酚與淫羊藿總黃酮合用使去卵巢大鼠的骨量及骨小梁數(shù)目分別增加322％和250％(P＜0.01)、骨小梁分離度及破骨細(xì)胞數(shù)目分別減少79％和82％(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組增加骨量和抑制破骨細(xì)胞的效應(yīng)超過己烯雌酚組(P＜0.01)，與Sham組無差別。2.4 淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠脛骨近端松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)動(dòng)態(tài)參數(shù)的影響淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠脛骨近端松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)動(dòng)態(tài)參數(shù)的影響見表4表4 淫羊藿總黃酮和己烯雌酚對大鼠脛骨近端松質(zhì)動(dòng)態(tài)參數(shù)的影響(n＝10，x±s)Group L.Pm(％) MAR(μm·d)BFR/TV(％/year) BFR/BV(％/year)BFR/BS(％/year)Basal 39.2±9.7 0.82±0.18 79.8±29.4 363.0±170.4 12.2±5.2Sham31.3±4.9 0.76±0.12 58.5±15.5 264.6±81.38.8±2.2OVX 35.5±9.5 1.10±0.21#21.9±8.3##548.3±188.9#14.5±5.7#DES 27.5±8.4 0.80±0.22 32.9±16.1 312.1±150.3*8.2±3.7bEF 28.7±8.5 0.95±0.26 20.8±9.2 370.0±205.8 10.1±4.1E+D 16.8±5.1**0.58±0.24*21.0±11.0 123.9±91.5**△3.8±2.3**△△#P＜0.05；##P＜0.01 vs Sham；*P＜0.05；**P＜0.05 vs OVX；△P＜0.05；△△P＜0.05 vs DES。
從Tab 4的結(jié)果可見，去卵巢組大鼠骨形成指標(biāo)明顯增加礦化沉積率增加45％(P＜0.05)、骨形成率BFR/BV增加107％(P＜0.05)。己烯雌酚能抑制去卵巢大鼠的骨形成率(BFR/BV降低43％，P＜0.05)。單用淫羊藿總黃酮對去卵巢大鼠骨形成指標(biāo)無明顯影響。己烯雌酚與淫羊藿總黃酮合用明顯抑制去卵巢大鼠的骨形成礦化沉積率及骨形成率BFR/BV分別降低47％和77％(P＜0.01)，效應(yīng)強(qiáng)于單用己烯雌酚(P＜0.05)。
3 討論結(jié)果表明，Sham組與Basal組的各項(xiàng)動(dòng)靜態(tài)參數(shù)均無差別，提示大鼠在4.5~7.5月齡期間，隨月齡增加，骨形成和骨吸收較穩(wěn)定，骨形成和骨吸收變化不明顯，骨量增加不明顯。
去卵巢大鼠體重明顯增加、血清總膽固醇降低、骨量減少、子宮指數(shù)明顯減輕和內(nèi)膜萎縮、腎指數(shù)減輕、而胸腺指數(shù)增加，可能與雌激素缺乏有關(guān)。提示4.5月齡的大鼠去卵巢90天后引起體內(nèi)雌激素迅速降低而導(dǎo)致骨骼及其他器官的改變，與絕經(jīng)期后婦女的改變相似，進(jìn)一步說明本實(shí)驗(yàn)用去卵巢大鼠建立骨質(zhì)疏松的動(dòng)物模型是成功的。
己烯雌酚是合成雌激素，能抑制去卵巢大鼠的骨形成和骨吸收，由于未能完全抑制去卵巢后的骨高轉(zhuǎn)換，故不能使去卵巢大鼠的骨量恢復(fù)到年齡組水平，說明己烯雌酚僅部分預(yù)防去卵巢大鼠骨小梁的丟失，同時(shí)明顯抑制大鼠體重增長，刺激肝、脾、腎上腺增重和子宮增生。
淫羊藿是我國傳統(tǒng)的補(bǔ)腎壯骨中藥，大量研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿具有雄激素樣作用，能促進(jìn)骨髓細(xì)胞DNA合成，促進(jìn)骨組織蛋白質(zhì)合成及促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，直接抑制破骨細(xì)胞，能對抗各種骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。但是目前對淫羊藿總黃酮防治骨質(zhì)疏松癥的研究較少，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，淫羊藿總黃酮使去卵巢大鼠的骨量有增加的趨勢，但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與淫羊藿總黃酮的劑量有關(guān)。體外研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿總黃酮對成骨細(xì)胞有顯著的促進(jìn)增殖作用，而且與濃度有關(guān)，低濃度時(shí)促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，濃度過大時(shí)反而抑制成骨細(xì)胞增殖。淫羊藿總黃酮防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松作用的量效關(guān)系如何，有待于進(jìn)一步的研究。
淫羊藿總黃酮與己烯雌酚聯(lián)合用藥能明顯增加去卵巢大鼠的骨量和骨小梁數(shù)目，減少骨小梁分離度，其效應(yīng)強(qiáng)于單獨(dú)應(yīng)用己烯雌酚；聯(lián)合用藥還明顯抑制破骨細(xì)胞的活性，降低骨形成率和骨轉(zhuǎn)換率，效應(yīng)也強(qiáng)于單獨(dú)應(yīng)用己烯雌酚。此外，聯(lián)合用藥不抑制大鼠體重增長，對肝和子宮的刺激作用較小。本實(shí)驗(yàn)提示，淫羊藿總黃酮與己烯雌酚聯(lián)合用藥，可提高己烯雌酚抗骨質(zhì)疏松作用并降低了其的毒副作用。
權(quán)利要求
1.一種治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，其特征是該復(fù)方制劑是由中藥淫羊藿提取物和雌激素組成。
2.如權(quán)利要求1所述的一種治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，該復(fù)方制劑中的中藥淫羊藿淫羊藿提取物是指淫羊藿總黃酮。
3.如權(quán)利要求1所述的一種治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，該復(fù)方制劑中的雌激素是指戊酸雌二醇，炔雌醇，雌三醇，尼爾雌醇，結(jié)合型雌激素，已烯雌酚，氯烯雌酚，他莫昔芬。
4.如權(quán)利要求1所述的一種治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，該復(fù)方制劑中的中藥淫羊藿淫羊藿提取物是指按下述工藝制備的提取物A、淫羊藿粉碎成粉末，加75～95％乙醇浸泡24小時(shí)，過濾，回收乙醇，得醇提物備用，藥渣再加水煎煮3次，合并三次濾液，濾過，濾液濃縮至適量，加入前述的醇提物，低溫干燥，粉碎，加適量輔料和雌激素，制成顆粒，壓片，包糖衣或裝膠囊，即得。B、淫羊藿生藥材以數(shù)倍水浸泡后煎煮，重復(fù)3次，合并濾液濃縮，加3倍乙醇沉淀，回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得到淫羊藿總黃酮。淫羊藿總黃酮加適量輔料和雌激素，制成顆粒，壓片，包糖衣或裝膠囊，即得。
5.如權(quán)利要求3所述的一種含有雌激素的治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，這些雌激素與淫羊藿組成復(fù)方時(shí)，每片或每粒的含量分別為戊酸雌二醇0.2～0.5mg/片，炔雌醇2.5～5μg/片，雌三醇0.2～0.5mg/片，尼爾雌醇5～15μg/片，結(jié)合型雌激素0.075～0.125mg/片，己烯雌酚0.075～0.125mg/片，氯烯雌酚1～2mg/粒，他莫昔芬2～5mg/片。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療絕經(jīng)期后婦女骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，該制劑由淫羊藿與雌激素所組成，該復(fù)方制劑中淫羊藿可以提高雌激素抗骨質(zhì)疏松作用而減少其不良反應(yīng)的，因此，雌激素的用量可以減少1/5～1/2，達(dá)到同樣的療效而不良反應(yīng)明顯減少或者消失。研究表明該制劑既能阻止去卵巢大鼠骨質(zhì)的進(jìn)一步丟失，又能促進(jìn)新骨的形成，對子宮沒有明顯的刺激作用。因此，可用于各種原因所致的骨質(zhì)疏松癥，特別適合于絕經(jīng)期后婦女預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥。
文檔編號A61P19/10GK1480142SQ0314516
公開日2004年3月10日 申請日期2003年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月30日
發(fā)明者吳鐵, 許碧蓮, 崔燎, 劉鈺瑜, 鄒麗宜, 吳 鐵 申請人:廣東醫(yī)學(xué)院