專利名稱：胸腺素β15促進傷口愈合及血管生成的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種具有促進組織修復及血管生長作用的活性小分子多肽胸腺素β15，其藥物組合物可用于促進傷口的組織修復及愈合，改善缺血組織的血液供應。
背景技術：
皮膚是身體最暴露的部分，特別容易受到各種損傷，常見的原因有機械性損傷(破裂，切割，摩擦)、物理及化學性損傷(燒燙傷、凍傷及強酸強鹼損傷)、手術刀口、褥瘡、以及某些疾病導致的慢性皮膚潰瘍。由于皮膚重要的屏障和生理作用，皮膚的完整性對每個人的正常生存至關重要，任何裂口和撕裂都需要機體做出保護性反應。除了皮膚的損傷外，各種軟組織及粘膜也易受到損傷，如胃腸粘膜，眼角膜等。
重癥損傷和接受了激素或細胞毒藥物治療的患者，常出現(xiàn)免疫防御機能和修復機能低下，不僅使其傷口感染率增加和病情加重，而且還造成組織修復的延遲甚至難以愈合，修復質(zhì)量也較差，復發(fā)率較高，給患者帶來極大的不便和痛苦，嚴重的還會引發(fā)其它并發(fā)癥，如感染性休克、消化道穿孔、癌變等，可危及生命。另外，組織器官的衰竭或代謝障礙也是造成一些組織病理性損傷的重要原因，如消化道潰瘍、糖尿病性潰瘍、血液循環(huán)障礙性潰瘍等，治療的關鍵是增強修復機能，提高這些組織的新陳代謝水平，改善微循環(huán)，促進組織再生愈合。
正常情況下，傷口可以自然修復及愈合。傷口自然愈合的過程包括封閉傷口以限制血液流失并阻止感染；去除受損的組織及血凝塊；繼之周圍組織中各種類型的細胞侵入傷口部位并形成肉芽和瘢痕；最后重建瘢痕組織并改變細胞群體，以導致傷口的完全愈合。一般情況下，如傷口范圍較小或損傷較輕，自然愈合過程是有效的。但傷口往往因受病人身體素質(zhì)、創(chuàng)傷大小及嚴重程度和有無并發(fā)感染等因素的影響，多數(shù)情況下的傷口愈合需要醫(yī)療干預。而且，一些疾病所導致的慢性皮膚潰瘍，很難醫(yī)治，如糖尿病所致的頑固性皮膚潰瘍。糖尿病是一種常見的疾病，主要是由于胰島素絕對或相對缺乏所引起的糖代謝障礙，出現(xiàn)血糖增高和尿糖。目前糖尿病的發(fā)病率，在我國已經(jīng)高達2％。患糖尿病后，有30％-50％的病人有皮膚損害，發(fā)生部位多在血液供應較差的下肢。許多糖尿病患者因為小小的傷口不能愈合，最后導致截肢，甚至因感染而死亡。
傷口的愈合主要由肉芽組織及皮膚組織再生來完成。大約從第三天開始，傷口底部長出肉芽組織，并向傷口內(nèi)深入。肉芽組織在傷口愈合中有以下重要作用(1)抗感染及保護創(chuàng)面；(2)機化血凝快、壞死組織及其他異物；(3)填補傷口或其他缺損。因此，肉芽組織在組織損傷修復中具有重要意義。肉芽組織的主要成分是旺盛增生的新生毛細血管以及增生的纖維母細胞，其中還有多少不等的中性白細胞、巨噬細胞等炎性細胞。最初由血小板發(fā)生聚集反應而分泌許多生長因子和細胞因子，然后由巨噬細胞對低氧和乳酸中毒反應而分泌，這些因子能夠刺激血管生成。早在傷后2或3天，新的毛細血管即開始從業(yè)已存在的小靜脈抽芽并向受傷處生長，大約第4天在顯微鏡水平變得清晰可見，新生的毛細血管連接成網(wǎng)狀。血管生成是組織損傷修復的一個重要特征。
表皮及其組織的再生修復是通過上皮細胞遷移、細胞分裂和上皮分化三個過程來完成的。上皮受損后，缺損周圍上皮斷端的基底層細胞向創(chuàng)面移動，上皮細胞分裂活躍，逐漸覆蓋傷口表面，上皮進一步分化，重建失去的組織結構和功能，如皮膚可以出現(xiàn)上皮的角化等。
目前臨床上用于傷口愈合的新藥主要是生長因子類蛋白，如表皮細胞生長因子，以及調(diào)節(jié)細胞增殖和分化的其它蛋白，例如蛋白轉(zhuǎn)化因子-B家族(TGF-B)?；蛑亟M牛鹼性成纖維細胞生長因子(Recombinant bovine bFGF)及基因重組人表皮細胞生長因子(Recombinant human EGF)已經(jīng)獲得批準用于臨床治療傷口愈合。目前正在進行臨床三期實驗的還有四種基因重組蛋白，包括人成纖維細胞生長因子等。在傷口愈合療法中使用的這類治療蛋白昂貴，儲存不穩(wěn)定并且使用麻煩，蛋白的不穩(wěn)定性(蛋白分解產(chǎn)物)可能導致意外的對宿主有毒的炎癥性反應。
胸腺素是正常情況下存在于人體及動物體內(nèi)的一組小分子多肽，可分成α型及β型蛋白家族。α家族的主要代表是胸腺素α1，具有增強免疫功能作用，已用于臨床治療肝炎。β型家族是一組呈酸性的氨基酸序列具有高度同源性的小分子多肽，由43到45個氨基酸組成，到目前已發(fā)現(xiàn)有15個成員，其中含量和組織分布最多的是胸腺素β4，其次是胸腺素β10，它們能與肌動蛋白單體結合，從而抑制肌動蛋白的聚合。胸腺素β15最初是從前列腺癌細胞中發(fā)現(xiàn)的，它也存在于正常的神經(jīng)組織、腮腺組織、睪丸組織及角化上皮細胞中。胸腺素β15能結合到肌動蛋白單體上，從而抑制肌動蛋白的聚合。
我們經(jīng)過系列研究發(fā)現(xiàn)胸腺素β15具有明顯的促進上皮細胞角化、促進新血管形成的功能。動物實驗研究顯示這種多肽小分子能使皮膚上皮細胞遷移到傷口，刺激傷口形成新生的毛細血管，刺激成纖維細胞及真皮細胞在傷口愈合過程中產(chǎn)生結構蛋白及其它連接組織成分，加強肉芽組織的形成，從而促進組織再生，促進傷口愈合，并縮短愈合時間。具有重要的臨床應用價值。
胸腺素β15不同于市場上應用的或正在開發(fā)中的治療傷口愈合的藥物。胸腺素β15不是生長因子，與各種生長因子相比在治療傷口愈合上有以下幾方面優(yōu)點1)特異性地刺激上皮細胞移動，促進上皮細胞角化；2)特異性地刺激內(nèi)皮細胞移動，促進血管形成；3)分子量很小，只有45個氨基酸(生長因子屬大分子蛋白)，易在組織內(nèi)擴散；4)無副作用，可局部反復應用；5)不易被蛋白水解酶所降解，作用持續(xù)時間長，可減少用藥次數(shù)；6)胸腺素β15能直接作用于細胞骨架系統(tǒng)，具有支持細胞結構穩(wěn)定性的作用。因此，胸腺素β15在細胞再生修復，傷口愈合中具有非常特殊的重要作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明起始于研究胸腺素β15對細胞分化及對細胞遷移的影響。離體試驗證明胸腺素β15作為一個細胞遷移促進因子可刺激人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞的定向遷移。用Boyden Chomber方法測試了多種不同類型的細胞，證明胸腺素β15能夠特異性地刺激人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞及表皮細胞的遷移。在體內(nèi)，胸腺素β15能促進細胞遷移，而且將胸腺素β15局部用于小鼠受傷模型的傷口時，觀察到有完整的表皮再生，傷口愈合加速。
本發(fā)明進一步確定了胸腺素β15能夠在體內(nèi)有效地促進血管內(nèi)皮細胞的移動，促進血管形成，以及促進傷口的愈合。小鼠眼角膜血管形成試驗結果顯示，胸腺素β15促進血管形成的效果與作為陽性對照的表皮細胞生長因子的效果相當、或更好，而且動物傷口試驗顯示胸腺素β15具有加速傷口愈合的效應。傷口局部用胸腺素β15處理后，觀察到有更多更廣泛的新血管的形成及明顯的組織再生。用胸腺素β15后，傷口處膠原合成也增加，說明胸腺素β15也能夠加速傷口攣縮。
促進組織再生、傷口愈合本發(fā)明提供了一種通過將含有效劑量的胸腺素β15多肽的藥物組合物用于局部傷口來加速傷口愈合的方法。胸腺素β15對加快傷口自然愈合的速度以及促進難以治愈的傷口愈合提供了一種有特殊價值的治療方法。
動物實驗結果證明單獨使用具有生物活性的胸腺素β15可加速傷口愈合。此外，胸腺素β15還可以藥物組合物的形式給藥，包括胸腺素β15及其衍生物或其鹽與一種或多種可藥用載體和任選的其它治療成分在一起。載體指的是可藥用的藥物輸送系統(tǒng)，它能與藥物成分相容并且對受治療者沒有損害作用。
因此，本發(fā)明進一步提供含有胸腺素β15或其可藥用鹽或其生理功能衍生物與可藥用的載體在一起的藥物組合物。
胸腺素β15是正常機體內(nèi)固有的一種多肽成分。因此，使用高度純化的胸腺素β15，或者使用合成或表達的胸腺素β15是安全可靠的，任何具有能夠誘發(fā)或刺激機體產(chǎn)生胸腺素β15的生物活性物質(zhì)也可以加進組合物中。
本發(fā)明可局部用于表層傷口組織治療皮膚的擦傷、創(chuàng)傷、燒傷、燙傷、凍傷，眼角膜損傷，感染性潰瘍，營養(yǎng)障礙性潰瘍，堵塞性潰瘍，眼角膜潰瘍，及其它形式的表面損傷，也可用于某些疾病造成的粘膜損傷，如由胃酸和胃蛋白酶引起的胃或十二指腸的粘膜潰瘍等。另外，胸腺素β15可直接用于外科手術造成的傷口，或者選用本發(fā)明的組合物處理以加快愈合，例如在手術皮膚傷口上涂布活性藥劑。
本發(fā)明可以用來刺激器官組織的再生和修復。例如手術切除部分結腸或其它組織后，在手術的器官組織部位涂上本發(fā)明藥物組合物以促進器官組織的新生血管形成和組織再生，加快器官的愈合過程。
另一方面，本發(fā)明能減少疤痕組織的形成并促進由各種原因?qū)е碌陌毯劢M織的改建及吸收。導致疤痕組織的各種因素包括手術過程，輻射，破傷，化學毒素，病毒及細菌感染或創(chuàng)傷。本文使用的“疤痕組織”是指傷愈過程中和其它病理過程中形成纖維和膠原組織。例如，將胸腺素β15制成混合劑并投放在損傷組織附近，進而促進組織再生，血管增生及微循環(huán)系統(tǒng)形成，加速組織的改建，減少疤痕組織的形成。
本發(fā)明還可作為有效成分用于化妝品組合物，可增強肌膚的新陳代謝和防護機能，使肌膚柔嫩、豐滿、光澤和健美，具有保健應用價值。
在本發(fā)明的藥物組合物中，可以加入其它具有促進傷口愈合的活性成分，這些成分包括各種生長因子，如類胰島素生長因子(IGF-1)，血小板生長因子(PDGF)，表皮生長因子(EGF)，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-Beta)和basic成纖維細胞生長因子(bFGF)等等。
本發(fā)明的藥物組合物中還可以入進具有抗感染作用的各種抗菌素，具有抗感染作用的中藥配方，以及具有抗感染作用的其它天然物質(zhì)。
在本文中，“有效量”是指含有胸腺素β15成分的需要量。在組織修復過程中這種成分使用到治療劑量時就會促進組織再生效應。胸腺素β15能夠促進及調(diào)理組織修復過程。組織修復過程常常發(fā)生在損傷性疾病之后。組織修復過程出現(xiàn)障礙往往是由于在傷口處的各種細胞如成纖維細胞、干細胞、血管內(nèi)皮細胞、組織細胞對生長的反映不足而造成的。因此，加入能誘導或刺激細胞生長的活性劑會有利于組織的修復。本文使用的“促進”一詞是指對細胞生長機制或過程具有激活作用，刺激作用，增強作用，起始作用及維持作用。這些細胞生長機制或發(fā)生過程是組織形成，修復或發(fā)育所必須的。
含有活性胸腺素β15的基質(zhì)或輔料可以充當藥物輸送系統(tǒng)。在本發(fā)明中，“藥物輸送系統(tǒng)”指當藥物組合物(藥物配制品或劑型)被使用時，可以將活性胸腺素β15呈遞給人或動物的機體。因此術語“藥物輸送系統(tǒng)”包括普通的藥物組合物所能使用的所有形式的基質(zhì)或輔料，如固體、半固體、和流體組合物。特殊相關的組合物是，例如，軟膏、親水軟膏、乳膏、糊劑、霜、凝膠、水凝膠、溶液、乳液、懸浮液、洗液、擦劑、洗發(fā)劑、皂劑、粘貼物、噴霧劑、粉末、薄膜、墊料、敷劑、繃帶、膏藥等。
傷口局部應用本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選是含有活性成分的軟膏或霜。當制成軟膏時，活性成分可以使用石蠟基或水混溶性軟膏基，或者，制成活性成分含水相油霜基的霜劑。制備涂液、軟膏等外用型組合物的例子，包括將有效劑量的和所需量的添加劑混合而成。這些添加劑通常選自外用藥物或化妝品的常用基質(zhì)或輔料，例如凡士林、液體石蠟、羊毛脂、硬脂酸單甘油脂、聚乙二醇、十六醇、甘油、乙醇和水等。
如果需要，霜的水相可以包括，例如，至少30％W/W的多元醇，即含有兩個或多個基的醇，如丙二醇、丁-1，3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇以及它們的混合物。局部用制劑可以根據(jù)需要而增加或減少所含活性成分。
本發(fā)明的藥物組合物還可以是口服液組合物。制備口服液組合物的例子包括將有效劑量的胸腺素β15或其衍生物和所需量的液體基質(zhì)混合制作而成，該基質(zhì)的例子包括水或生理鹽水，其中還可添加其它有益成分或輔料。
本發(fā)明的藥物組合物還可以是口服膠囊、片劑、粉劑等固體劑型組合物的例子，包括將有效劑量的胸腺素β15或其衍生物干粉和所需量的藥用輔料混合制作而成。
本發(fā)明還可以用可控制釋放混合劑的方式使用。本文中的“可控制釋放混合劑”是指任何一種復合物。這種復合物可以用來緩慢釋放包含其中的有效胸腺素β15成分。這種復合物含有生物有效成分可以是固狀的，滲透性的，半固狀的，膠性的或液狀的。
調(diào)節(jié)血管增生過程血管增生過程是一種新血管尤其是毛細血管生長的生物過程，包括內(nèi)皮細胞增生，轉(zhuǎn)移及遷移，內(nèi)皮細胞深入組織及內(nèi)皮細胞的成熟。所述過程可從三條途徑中的任意一條發(fā)展而成1)新生血管從原已存在的脈管中以發(fā)芽的形式出現(xiàn)；2)由前體細胞發(fā)生、分化、發(fā)展成新血管；3)現(xiàn)存的小血管直徑增大。血管增生過程在一系列生物現(xiàn)象中起關鍵作用。這些生物現(xiàn)象包括生理性的和病理性的，如胚胎發(fā)育，女性的生理繁殖周期，傷口愈合，視網(wǎng)膜病變，類風濕性關節(jié)炎，血管瘤及實體腫瘤等。
在傷口部位，有膠原、基質(zhì)和含豐富血管的肉芽組織沉積，在組織修復期間提供傷口強度。已知各種各樣的細胞生長因子調(diào)節(jié)新血管的形成，包括血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和侵潤。已經(jīng)鑒定出具有促進內(nèi)皮細胞生長活性的幾種生長因子包括酸性和鹼性成纖維細胞生長因子(FGF)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)和胎盤衍生生長因子(PDGF)等。
本發(fā)明確定了胸腺素β15在體外能夠有效地促進血管內(nèi)皮細胞的移動，在體內(nèi)能夠誘導小鼠眼角膜血管形成。胸腺素β15促進血管形成的效果與作為陽性對照的表皮細胞生長刺激因子的效果相當、或更好。而且動物傷口試驗顯示胸腺素β15具有加速傷口愈合的功能。動物傷口局部用胸腺素β15處理后，與對照組相比較，有更多更廣泛的新血管形成，傷口處膠原合成也增加，說明胸腺素β15能夠加速傷口攣縮和促進傷口愈合。
本發(fā)明可以用來治療由糖尿病引起的皮膚潰瘍。血管的循環(huán)障礙是長期患糖尿病患者中常見的病理變化。糖尿病患者由于血糖持續(xù)偏高而導致血脂升高，小動脈出現(xiàn)動脈粥樣硬化及血管阻塞，使得流至下肢的血液量減少。血液的功能是把營養(yǎng)物質(zhì)運送到身體的各部組織，同時也把各組織中產(chǎn)生的廢物運送出體外，血液循環(huán)功能降低之后，首先受到影響的便是腳部，因為腳部距離心臟最遠，血液最不容易到達。因此，下肢的皮膚及軟組織容易缺血壞死，形成難以愈合的皮膚潰瘍。胸腺素β15可用于下肢皮膚潰瘍處，促進損傷局部血管形成，改善血液供應，促進傷口愈合。
本發(fā)明可以刺激內(nèi)皮細胞的遷移及生長，刺激血管的增殖，增加組織的血流量，從而治療心血管疾病。心血管疾病的特征是心臟或其它靶器官的血液供應受到損害。此處所用“心血管疾病”是指心臟及血管由于供血不足而導致的疾病，包括但不局限于，冠狀動脈疾病，充血性心力衰竭和外周性血管病。心臟病是指由于冠狀動脈的狹窄或阻塞而引起的心臟病變，特點是心臟所需的營養(yǎng)成分和氧不足而導致心肌梗死。有效劑量的胸腺素β15可以通過促進血管增生，誘導出額外的毛細血管，建立側(cè)枝循環(huán)，從而增加心肌組織的血流量，提供心臟所需的營養(yǎng)成分，改善氧不足，使心肌組織的氧和作用增加，起到預防和治療由于冠狀動脈的部分或完全栓塞而引起的心肌缺血造成的組織損傷。
本發(fā)明為血液供應不足的某些組織提供了一種促進新血管增生的方法。例如，因各種原因?qū)е碌拿已汗獪p少、毛囊營養(yǎng)不良(但無毛囊結構破壞)而引起的脫發(fā)。有效劑量的胸腺素β15可以通過促進毛囊組織的血管增生，誘導出額外的毛細血管，從而增加毛囊組織的血流量，改善血液供應，為缺血的毛囊組織提供營養(yǎng)，毛囊組織的營養(yǎng)改善可促進毛發(fā)再生。
另外，本發(fā)明闡述的方法也可以應用于誘導性組織再生工程。目前，醫(yī)療技術人員在進行創(chuàng)傷性手術時采用誘導性組織再生工程技術來促進和加快傷口愈合。方法是將具有促進組織細胞遷移、分化的生物活性物質(zhì)殖入傷口處，使形成組織結構的細胞在傷口處大量聚集。本發(fā)明可以用于幫助人或動物肉芽組織的再生。方法是將含有生物可吸收性的多聚體，可溶性的溶劑和胸腺素β15的復合物放置于人或動物肉牙組織再生處。該復合物通過釋放有效劑量的胸腺素β15促進人或其它哺乳動物的肉芽組織再生。
實體瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴血管生成。新生血管為腫瘤細胞提供充分的氧氣和營養(yǎng)，新生血管的內(nèi)皮細胞表達多種生長因子，刺激腫瘤細胞增殖。腫瘤血管缺乏周細胞，基底膜不完整，因此，腫瘤細胞易于進入血液循環(huán)。由于新血管形成在腫瘤生長中起重要作用，所以抑制腫瘤組織的血管生成是優(yōu)選的腫瘤治療實施方案之一。如果腫瘤組織中沒有新血管形成，腫瘤組織就不會得到所需的營養(yǎng)，腫瘤生長緩慢或停止生長，退化并最終壞死。本發(fā)明中胸腺素β15具有促進血管生成作用。因此，胸腺素β15的抑制劑可用于抑制腫瘤組織的血管生成，從而達到治療腫瘤的目的。


圖1小鼠皮膚傷口愈合實驗。胸腺素β15處理組的傷口面積比對照組明顯縮小。胸腺素β15具明顯的促進上皮細胞遷移，加速傷口愈和的作用。
圖2小鼠皮膚傷口愈合實驗。將小鼠分成胸腺素β15治療組和生理鹽水對照組，每組各8只小鼠。第7天測量傷口面積。胸腺素β15治療組的面積明顯小于對照組，統(tǒng)計學具有極其顯著性差異(P＜0.001)。
具體實施例方式
實施例1細胞培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECS)，用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)基內(nèi)含有5％牛血清，100單位/毫升青/鏈酶素，50微克/毫升慶大酶素，2-7微克/毫升兩性酶素B，5單位/毫升肝素及200單位/毫升血管內(nèi)皮細胞生長因子等補充劑。人表皮角化細胞及前額纖維母細胞用DMEM及10％小牛血清培養(yǎng)，人體乳腺癌細胞株MDA-MB435細胞，用RPMI1640及10％小牛血清培養(yǎng)。中性粒細胞從新鮮的人外周血中分離而來。人體血管平滑肌細胞用平滑肌細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。
實施例2細胞遷移實驗為了測試胸腺素β15刺激以后是否能引起特異性的細胞游走，我們使用Boyden Chomber方法對多種細胞株進行了測試。先將Boyden Chamber兩室間隔的硝膜(孔徑0.8mm)兩側(cè)均覆蓋Fibronection，濃度為15微克/毫升，37℃下放置60分鐘。上室加入細胞懸液，下室為完全培養(yǎng)液，5％CO2孵箱內(nèi)靜置4小時，取出濾膜，將上室面細胞刮除，經(jīng)固定染色后，在顯微鏡下細胞計數(shù)。每組3張膜。統(tǒng)計變量以均數(shù)標準差表示。結果表明胸腺素β15能特異性的引起人臍靜脈內(nèi)皮細胞及人表皮角化細胞的游走，游走細胞的數(shù)量明顯增多(結果見表1)。實驗證明胸腺素β15在10到1000毫微克/毫升的濃度范圍內(nèi)均明顯加速人臍靜脈內(nèi)皮細胞的游走，并呈量-效關系。相反，胸腺素β15未引起中性粒細胞，MDA-MB435人體乳腺癌細胞株和人體血管平滑肌細胞等細胞的明顯游走，實施例3“擦破”傷口關閉實驗用一毫升吸管尖頭將貼壁生長的單層人臍靜脈內(nèi)皮細胞劃開一道擦痕，用PBS緩沖液洗凈脫落的細胞。加不同濃度的胸腺素β15后繼續(xù)培養(yǎng)，觀察破痕關閉情況。1000毫微克/毫升的胸腺素β15處理4小時以后，人臍靜脈內(nèi)皮細胞向擦痕處移動的數(shù)量明顯多于只加胚養(yǎng)基的對照組，擦痕關閉的時間也明顯加快。
實施例4促進血管增生實驗胸腺素β15對血管生成的促進作用采用雞胚絨毛尿囊膜(CAM)實驗檢測，在孵育7天的受精雞胚蛋殼上開一1cm2左右窗口，將不同濃度的化學合成胸腺素β15蛋白加樣于滅菌濾紙片上，并放置于CAM，然后在恒溫恒濕培養(yǎng)箱37℃下繼續(xù)培養(yǎng)48小時，觀察血管生長情況。本實驗以生理鹽水為測試對照，phorbol myristate acetate(PMA)0.5微克/10微升為陽性對照。實驗測定結果表明胸腺素β15蛋白加樣組雞胚絨毛尿囊膜血管生長明顯旺盛，管徑粗且分支多，呈葉狀分布。以生理鹽水組血管生長程度作為對照，胸腺素β155微克/10微升的血管增生程度比生理鹽水組顯著增多，10微克/1(微升的血管增生程度與PMA陽性對照組血管增生程度相當或略多。這一實驗結果表明胸腺素β15具有明顯促進血管增生作用。
實施例5傷口愈合實驗小鼠麻醉后，用4毫米的組織取樣器除去小鼠背部的皮膚，造成直徑約為4毫米大小的傷口，隨后隨機將動物分成胸腺素β15治療組和對照組(每組8只動物)。50微升(含有5微克胸腺素β15)的藥液滴于傷口上，對照組使用生理鹽水。動物每隔一天接收一次治療，連續(xù)觀察7天后處死小鼠。傷口面積用于評估胸腺素β15的療效。傷口皮膚固定于10％福爾馬林溶液內(nèi)。H&E和膠原染色法用于觀察皮膚的病理學變化。重復實驗結果相同。結果顯示，胸腺素β15處理組的傷口面積比對照組縮小一倍，傷口局部有完整的表皮再生，廣泛的新血管形成，膠原合成也明顯增加。傷口愈合時間比對照組明顯縮短，統(tǒng)計學具有極其顯著性差異(P＜0.001)。這些結果表明胸腺素β15具有明顯的促進傷口愈合作用(見附圖1和圖2)。
綜上所述，胸腺素β15具明顯的促進上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞遷移，促進新生血管形成，刺激肉芽組成生長和加速傷口愈和的作用。
表1胸腺素β15對細胞游走的影響細胞種類 胸腺素β15濃度(毫微克/毫升)1000 100 10 1 0陽性對照人表皮角化細胞 77±2.1 63±1.2 52±1.4 18±1.0 8±0.3 51±1.3人臍靜脈內(nèi)皮細胞71±2.4 58±1.4 46±1.5 14±1.3 11±0.6 54±1.6人中性粒細胞5.2±0.5 4.8±0.75.0±0.45.0±0.45.0±0.3 32.3±0.9血管平滑肌細胞 1.0±0.4 0.5±0.51.0±0.41.0±0.30.9±0.3 36±3.5人體乳腺癌細胞 0.9±0.4 1.3±0.71.8±0.42.4±0.82.0±0.5 66±3.7注表中例出的數(shù)據(jù)是三次實驗中細胞游走數(shù)的平均值
權利要求
1.胸腺素β15為一組小分子多肽，胸腺素β15最初是從前列腺癌細胞中發(fā)現(xiàn)的，它也存在于正常的神經(jīng)組織、腮腺組織、睪丸組織及角化上皮細胞中。其藥物組合物可用于促進傷口的組織修復及愈合，改善缺血組織的血液供應。
2.本發(fā)明提供了一種通過將含有效劑量的胸腺素β15多肽的藥物組合物用于局部傷口來加速傷口愈合的方法；對加快傷口自然愈合的速度以及促進難以治愈的傷口愈合提供了一種有特殊價值的治療方法。
3.胸腺素β15還可以藥物組合物的形式給藥，包括胸腺素β15及其衍生物或其鹽與一種或多種可藥用載體和任選的其它治療成分在一起。含有胸腺素β15或其可藥用鹽或其生理功能衍生物與可藥用的載體在一起的藥物組合物。
4.本發(fā)明可局部用于表層傷口組織治療皮膚的擦傷、創(chuàng)傷、燒傷、燙傷、凍傷，眼角膜損傷，感染性潰瘍，營養(yǎng)障礙性潰瘍，堵塞性潰瘍，眼角膜潰瘍，及其它形式的表面損傷，也可用于某些疾病造成的粘膜損傷，如由胃酸和胃蛋白酶引起的胃或十二指腸的粘膜潰瘍等。另外，胸腺素β15可直接用于外科手術造成的傷口，或者選用本發(fā)明的組合物處理以加快愈合，例如在手術皮膚傷口上涂布活性藥劑。
5.本發(fā)明還可作為有效成分用于化妝品組合物，可增強肌膚的新陳代謝和防護機能，使肌膚柔嫩、豐滿、光澤和健美，具有保健應用價值。
6.本發(fā)明的藥物組合物中還可以入進具有抗感染作用的各種抗菌素，具有抗感染作用的中藥配方，以及具有抗感染作用的其它天然物質(zhì)。
7.含有活性胸腺素β15的基質(zhì)或輔料可以充當藥物輸送系統(tǒng)。在本發(fā)明中，“藥物輸送系統(tǒng)”指當藥物組合物(藥物配制品或劑型)被使用時，可以將活性胸腺素15呈遞給人或動物的機體
8.本發(fā)明可以用來治療由糖尿病引起的皮膚潰瘍
9.本發(fā)明為血液供應不足的某些組織提供了一種促進新血管增生的方法。
10.本發(fā)明闡述的方法也可以應用于誘導性組織再生工程。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有生物活性的胸腺素β15用于組織修復及傷口愈合的方法。胸腺素β15具有促進血管增生及組織再生修復的作用。因此，含有效劑量的胸腺素β15、其生物活性變體或鹽的藥物組合物可用于治療各種原因?qū)е碌膫?，促進其愈合，還可用于治療供血不足而導致的心血管疾病及其它缺血性疾病。
文檔編號A61P9/00GK1579539SQ03146158
公開日2005年2月16日 申請日期2003年7月25日 優(yōu)先權日2003年7月25日
發(fā)明者干春玉 申請人:干春玉